反芻動物用飼料
【課題】合成品によらず天然物によって反芻動物の低カルシウム血症を予防すること。
【解決手段】リュウキュウヤナギ、シロバナコウボクからなる群から選ばれた少なくとも１種類の葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を含有することを特徴とする反芻動物用飼料。
【解決手段】リュウキュウヤナギ、シロバナコウボクからなる群から選ばれた少なくとも１種類の葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を含有することを特徴とする反芻動物用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、反芻動物用飼料に関する。さらに詳述すれば、リュウキュウヤナギもしくはシロバナコウボクの葉乾燥粉末を配合した反芻動物用配合飼料及びその飼料を給与して、低カルシウム血症を抑制もしくは緩和する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
低カルシウム血症は、牛やめん羊等の反芻動物で発症する疾病であり、産歴の進んだ高泌乳牛の分娩前後に症例が多い。
低カルシウム血症は分娩に合わせて合成される乳汁への急激なカルシウム流出に対し、消化管からのカルシウム吸収や骨からのカルシウム動員（骨吸収）が著しく停滞することが原因で発症すると考えられている。実際、乳房を実験的に切除した乳牛においては分娩前後に血清カルシウム濃度の低下は認められない。
分娩時の低カルシウム血症のうち起立不能、体温低下、食欲不振などの症状を示すものを乳熱と呼び、重篤な場合には昏睡を経て死亡ないしは廃用に至る。乳熱による起立不能による圧挫は二次的に筋肉や神経の損傷を引き起こしてその後カルシウム剤の治療によっても起立不能が治癒しないダウナー症候群を引き起こすケースも多い。また、カルシウムは筋肉の運動に必要であることから、低カルシウム血症は第四胃の運動性を低下させて第四胃変位を引き起こす場合も多い。このように低カルシウム血症は周産期病と呼ばれる分娩前後の疾病の多くに深く関わっており、今日の遺伝的改良が進んだ高泌乳牛において生産性を低下させる重要な問題となっている。
【０００３】
従来、乳熱の予防には乾乳期における低カルシウム飼料の給与、分娩直前（２〜８日）のビタミンＤ製剤の投与、飼料中のカチオン−アニオンバランスの制御及び分娩前後の液状カルシウム剤の投与などの方法が実践されてきた。
【０００４】
しかしながら、低カルシウム飼料は飼料原料由来のカルシウムの影響が大きいために含量のコントロールが難しく、分娩後も継続された場合には逆に乳熱の発症リスクが高まってしまうことから、分娩前後でカルシウム濃度の異なる飼料に切り替えることや液状カルシウム剤の投与が推奨されるため高度な個体管理が要求される。ビタミンＤ製剤についても、分娩の４８時間以上前に投与しなければ効果が望めないと言われており、予定よりも分娩が早まってしまった牛には対応できない。飼料中のカチオン−アニオンバランスは粗飼料の品質によって大きく左右されるためコントロールが難しいことに加え、陰イオン塩を添加するなどした場合には嗜好性の低下を招く恐れがある。このような理由から、乳熱の予防方法は完全に確立されているとは言い難いのが現状であり、乳熱を予防する効果の高い配合飼料又は混合飼料の開発が望まれている。
【０００５】
ビタミンＤ３は、カルシウム結合蛋白質等を介した小腸からのカルシウムの能動的吸収や、骨から血中へのカルシウム放出（骨吸収）を促進する作用を有し、生体内のカルシウム代謝及び血中カルシウム濃度の維持に重要な役割を果たす。生体内で産生もしくは腸管から吸収されたビタミンＤ３は、肝臓で２５位が水酸化され２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ−ビタミンＤ３）となり、次いで腎臓で１α位が水酸化されて活性型ビタミンＤ３（１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３）へ代謝される。ビタミンＤ３及び２５−ヒドロキシビタミンＤ３はビタミンＤ受容体との親和性が低くビタミンＤ３としてほとんど機能しないが、活性型ビタミンＤ３に代謝されることによってビタミンＤ受容体と高い親和性を示すようになり、生体内で機能する。
ビタミンＤ３から活性型ビタミンＤ３への代謝は、腎臓や上皮小体の機能及びカルシウム・リンの血中レベルに依存して、１α位の水酸化の段階で厳密に制御されているため、ビタミンＤ３の投与は活性型ビタミンＤ３濃度の上昇に必ずしも直結するわけではない。そこで、１α位が水酸化されていることから速やかに活性型ビタミンＤ３に代謝される１α−ヒドロキシビタミンＤ３（１α−ＯＨ−ビタミンＤ３）や活性型ビタミンＤ３を投与した試験が数多く実施されており、一定の乳熱の予防効果が認められている（例えば、非特許文献１〜非特許文献３参照。）。しかし、一般的に反芻動物の飼料となる天然物には１α−ヒドロキシビタミンＤ３や活性型ビタミンＤ３はほとんど含まれておらず、上述の試験は全て合成品により実施されている。
【非特許文献１】Ｂａｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６８：１９５２−１９５８，１９８５
【非特許文献２】Ｓａｃｈｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．７０：１６７１−１６７５，１９８７
【非特許文献３】Ｇａｓｔ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６２：１００９−１０１３，１９７９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、天然物である活性型ビタミンＤ３様因子を含有するリュウキュウヤナギあるいはシロバナコウボクの葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を反芻動物に給与することによって、低カルシウム血症を予防もしくは緩和することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、反芻動物にリュウキュウヤナギあるいはシロバナコウボクの葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を反芻動物に給与することによって、血清活性型ビタミンＤ３（１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３）及びカルシウム濃度が上昇することで前記の課題が解決されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
ナス科の植物であるリュウキュウヤナギ（和名：ルリヤナギ、学名：Ｓｏｌａｎｕｍ ｍａｌａｃｏｘｙｌｏｎ（＝Ｓｏｌａｎｕｍ ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ））やシロバナコウボク（学名：Ｃｅｓｔｒｕｍ Ｄｉｕｒｎｕｍ）は活性型ビタミンＤ３様因子を含有していることが知られている（Ｈｅｒｒａｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｄｔｓｃｈ Ｍｅｄ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．Ｎｏｖ２２；９９（４７）：２４０７−２４０９，１９７４）（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｊａｎ６；６２（１）：８５−９１，１９７５）。これらの植物の葉が活性型ビタミンＤ３様活性を持つのは、水溶性成分として活性型ビタミンＤ３の配糖体が含まれていることによると考えられており（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｎｏｖ１９；１９４（４２６７）：８５３−８５５，１９７６）（Ｈｕｑｈｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｊｕｌ２８；２６８（５６１８）：３４７−３４９，１９７７）、その応用例として採卵鶏においては、リュウキュウヤナギの葉の給与によって血漿中活性型ビタミンＤ３濃度の上昇や卵殻質の改善などが報告されている（特願２０００−１３８５１０）。
近年の消費者は合成品の敬遠傾向が強いことから、天然の活性型ビタミンＤ３様因子を含むリュウキュウヤナギの葉あるいはシロバナコウボクの葉を低カルシウム血症の予防に活用できれば非常に有用であると考えられる。
【０００９】
ところが、活性型ビタミンＤ３は生体内での活性が強いが故に、用量によっては過剰症を引き起こす恐れがある。牛では活性型ビタミンＤ３の過剰症と考えられるリュウキュウヤナギ中毒症はＥｎｔｅｑｕｅ Ｓｅｃｏという病名で知られており、カルシウム代謝の異常、肺動脈・大動脈へのカルシウム沈着（Ｐｕｃｈｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．２６（１）：６１−６４，１９７８）や柔組織・表皮の萎縮、毛包・皮脂腺・汗腺の退行等の上皮組織の異常と上皮細胞増殖阻害（Ｇｉｍｅｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．４７（４）：２０１−２１１，２０００）等多数の症例報告がある。
また、シロバナコウボクについても同様に牛で中毒症が報告されている（Ｋｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｖｅｔ．Ｏｃｔ；６５（４）：５５７−５７５，１９７５）。
しかし、上記の報告は放牧牛の過剰摂取による中毒症状についてであり、薬理作用を及ぼす範囲の用量でリュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉を給与して、反芻動物に対する生物的効果もしくは低カルシウム血症の予防効果を検証した報告例はない。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明に係る実施例を示す。
実施例１：リュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉乾燥物
本発明で用いる乾燥物はリュウキュウヤナギの葉又はシロバナコウボクの葉あるいはリュウキュウヤナギの葉の搾汁又はシロバナコウボクの葉の搾汁を乾燥させたものを用いることができる。乾燥方法は公知の手段、例えば天日乾燥、加熱乾燥、流動層乾燥、凍結乾燥などを用いることができる。乾燥は常温で行なわれても加熱条件下で行なわれても良い。また、乾燥は常圧で行なわれても減圧下で行なわれてもよい。常圧で加熱する場合には８０℃以下の加熱で３時間以下であれば有効成分の損失はないが、この限りではない。水分は１２重量％以下とすることが望ましい。
【００１１】
実施例２：リュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉溶媒抽出物
本発明で用いる葉溶媒抽出物は溶媒として水、エタノール又は両者を混合した含水エタノールを用いることができる。また、ここでいう抽出溶媒には水、エタノールのほか抽出効率を大きく損なわない範囲で他の成分（塩類、アミノ酸類、糖類）などが含まれても良い。抽出はリュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉を公知の手段、例えば浸漬、静置保存、加熱還流などによって行なうことができる。また、抽出は常温で行なわれても加熱条件下で行われてもよい。抽出に要する時間は温度や乾燥条件にもよるが、通常３０分程度以上である。抽出時間の上限は特に制限されないが、通常３年以下である。溶媒量は特に規定されないが、葉に対して等重量以上１０倍量以下の溶媒で抽出することが望ましい。
本発明によれば上記葉溶媒抽出物は低カルシウム血症の予防作用を持つ抽出液と残渣に分離する。分離方法は公知の手段に従ってよく、例えば遠心分離や濾過などが挙げられる。本発明には抽出液をそのまま用いても良いし、抽出液の濃縮液あるいは濃縮乾燥物を用いても良い。濃縮は常圧又は減圧条件下で行なわれる。濃縮乾燥物は常圧又は減圧条件下で溶媒を蒸発させることで得られる。本発明の葉溶媒抽出物は元の葉乾燥品に対して当重量の抽出物を得た場合の最適添加量を設定しているが、抽出物の希釈あるいは濃縮倍率に応じて後述の最適添加量を調整すれば良い。
また、葉抽出液あるいは葉濃縮液を賦形剤に吸着させて水分を調整して使用しても良い。賦形剤はフスマ、糠、豆乳粕、パーム核粕など一般に飼料原料として用いられる原料を混合すれば得られる。賦形剤による水分調整を行なった場合には水分は１２重量％以下にする事が望ましく、必要に応じて更に前述の葉乾燥物のように乾燥させても良い。
【００１２】
実施例３：リュウキュウヤナギの葉の給与が血液性状に及ぼす影響の検討（高水準）
ホルスタイン種雌牛４頭（２〜４歳齢、体重４６９〜６８９ｋｇ）を供試して、リュウキュウヤナギの葉の給与が血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度に及ぼす影響を検討した。アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉を用いて、無添加（無添加区）、体重１ｋｇ当たり２．５ｍｇ給与（２．５ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、１０ｍｇ給与（１０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、４０ｍｇ給与（４０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の４区を設定し、各区１頭を割り当てて４日間の給与試験を行なった。リュウキュウヤナギの葉は乾燥粉末にし、賦形剤として脱脂糠を用いて基礎飼料に添加して給与した。基礎飼料はチモシー乾草と市販飼料を３：７の割合で日本飼養標準・肉牛（２００１）成雌牛の維持要求量を満たす量を給与した。基礎飼料のミネラルの分析値を表１に示した。給与開始前及び４日間の給与終了時に採血を行い、各個体の血清の活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度を分析した。
表２に血清の分析結果を示した。リュウキュウヤナギの葉の給与量増加に伴い、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は上昇し、リュウキュウヤナギの葉の給与量と血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度との間に用量依存的な反応が確認された。また、１０ｍｇ／ｋｇＢＷ以上の給与水準においては給与４日以内に著しい飼料摂取量の低下が確認された。
【００１３】
ヒトにおける血清活性型ビタミンＤ３濃度の正常範囲は２０〜６０ｐｇ／ｍＬ程度と言われているが、分娩前後を除いて乳牛においてもヒトとほぼ同じ範囲内にあることが報告されている（Ｂａｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６４：８５０−８５２，１９８１，Ｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８５：１４２７−１４３６，２００２）。実施例３ではいずれの試験区においても正常範囲を超える高値となっており、特に１０ｍｇ／ｋｇ以上の水準においては２００ｐｇ／ｍＬを超える異常高値となっており、飼料摂取量の低下も確認されたことから一過性のビタミンＤ過剰症に陥ったものと推察された。
よって、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ以上の用量でリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を給与した場合には反芻動物がビタミンＤ過剰症を引き起こす恐れがあることが示唆された。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】
実施例４：リュウキュウヤナギの葉の給与が血液性状に及ぼす影響の検討（適正水準）
実施例３よりも低水準のリュウキュウヤナギの葉の給与が血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度に及ぼす影響を検討した。アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を用いて、無添加（無添加区）、体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ給与（０．５ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、１．０ｍｇ給与（１．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、２．０ｍｇ給与（２．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の４区を設定し、１期２週間の４×４ラテン方格法により試験を実施した。供試牛は実施例３と同一のホルスタイン雌牛４頭を用いた。使用したリュウキュウヤナギならびに基礎飼料についても実施例３と同様に設定した。ラテン方格の各試験期終了時に採血を行い、血清の活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度を分析した。
表３に血清の分析結果を示した。リュウキュウヤナギの葉の給与量増加に伴い、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は上昇し、リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量と血清活性型ビタミンＤ３（回帰式１）及びカルシウム濃度（回帰式２）との間に用量依存的な反応が確認された。
（回帰式１）
Ｙ＝２３．４１Ｘ＋１６．３３（Ｒ２＝０．９６５）
Ｘ；リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量（ｍｇ／ｋｇＢＷ）
Ｙ；血清活性型ビタミンＤ３濃度（ｐｇ／ｍＬ）
（回帰式２）
Ｚ＝１．２００Ｘ＋９．１５０（Ｒ２＝０．９９３）
Ｘ；リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量（ｍｇ／ｋｇＢＷ）
Ｚ；血清カルシウム濃度（ｍｇ／ｄＬ）
【００１７】
リュウキュウヤナギの葉の給与量が最も多い２．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区における血清活性型ビタミンＤ３濃度は６０．６±６．１ｐｇ／ｍＬであり、この数値は前述の非泌乳牛の血清活性型ビタミンＤ３濃度の正常範囲２０〜６０ｐｇ／ｍＬの上限とほぼ一致した。また、血清カルシウム濃度は１１．６±０．９ｍｇ／ｄＬであり、牛の血清カルシウム濃度の正常範囲８〜１２ｍｇ／ｄＬの範囲内であった。以上の結果より、体重１ｋｇ当たり２．０ｍｇ以下の用量でリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を給与することにより、ビタミンＤ３過剰症や高カルシウム血症を引き起こさない正常の範囲内で血清活性型ビタミンＤ３濃度が上昇することが示唆された。
【００１８】
【表３】
【００１９】
実施例５：リュウキュウヤナギ事前給与牛への低カルシウム血症の誘起試験
次に、リュウキュウヤナギの葉を事前に給与した牛に対して人工的に低カルシウム血症を誘起し、反応を検討した。
アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を用いて、無添加（無添加区）及び体重１ｋｇ当たり４．０ｍｇ給与（４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の２区を設定し、実施例３と同一のホルスタイン雌牛４頭を２頭ずつ振り分けた。使用したリュウキュウヤナギならびに基礎飼料についても実施例３と同様に設定した。事前の給与期間は１４日間とし、１４日目の給与終了直後に採血を実施した。採血終了と同時に、低カルシウム血症を誘起させることを目的として４．７％（ｗ／ｖ）Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液１．５Ｌを頸静脈中に３〜４時間かけて点滴注入し、点滴開始より１２時間後まで３０分毎に採血した。血清活性型ビタミンＤ３濃度はＥＤＴＡ溶液の点滴開始時から３時間毎に採取した検体につき測定し、血清カルシウム濃度については全ての検体を測定した。
２週間の給与期間終了後（＝ＥＤＴＡ溶液の点滴開始時）の血清活性型ビタミンＤ３濃度及び血清カルシウム濃度を表４に示した。試験１と同様に、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区において高い値を示した。なお、２週間の給与期間中、飼料摂取量の低下は認められなかった。
【００２０】
【表４】
【００２１】
ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度の推移を図１及び図２に示した。
ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後、無添加区において血清活性型ビタミンＤ３濃度は時間の経過に伴い増加したのに対し、４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区では減少した。しかし、点滴開始時点で４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区が大きく上回っていたため、血清活性型ビタミンＤ３濃度は４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区の方が高い水準で推移した。
一方、血清カルシウム濃度は無添加区ではＥＤＴＡ溶液の点滴開始後１．５〜５．５時間の間、低カルシウム血症の指標となる８．０ｍｇ／ｄＬを下回ったのに対し、４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区では概ね１０ｍｇ／ｄＬ以上の水準を維持した。
【００２２】
分娩時にアルファルファと穀物からなるＴＭＲ（Ｔｏｔａｌ Ｍｉｘｅｄ Ｒａｔｉｏｎ）を給与した乳牛においては血清カルシウム濃度が平均約８ｍｇ／ｄＬであったものが分娩時には約５ｍｇ／ｄＬ程度に約３ｍｇ／ｄＬ程度低下することが報告されている（Ｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８５：１４２７−１４３６，２００２）。本試験においてもＥＤＴＡ溶液の点滴により無添加区と４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区いずれの区においても点滴開始２．５〜３．０時間後に点滴開始前と比較して血清カルシウム濃度が約３ｍｇ／ｄＬ低下し、分娩時に類似した状態を人為的に再現できたと言える。今回、４．０ｍｇ／ｋｇ区で１０ｍｇ／ｄＬ以上の水準を維持したが、これは事前のリュウキュウヤナギの給与により点滴開始時点の血清カルシウム濃度が高かったことが影響したものと考えられる。以上の結果より、リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の給与が低カルシウム血症を予防することが示唆された。
【００２３】
分娩前後の低カルシウム血症時の血清カルシウム濃度の低下幅を約３ｍｇ／ｄＬとすると、分娩時に８ｍｇ／ｄＬ以上の正常な血清カルシウム濃度を保つためには分娩に入る前の血清カルシウム濃度として１１ｍｇ／ｄＬ以上が必要となる。実施例４で得られた回帰式２より血清カルシウム濃度を１１ｍｇ／ｄＬ以上に保つために必要なリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の添加量は約１．５ｍｇ／ｋｇＢＷ以上となる。
また、実施例３においてリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の１０ｍｇ／ｋｇＢＷ以上の添加でビタミンＤ過剰症と考えられる著しい飼料摂取量の低下が見られた一方で、実施例５においては４ｍｇ／ｋｇＢＷの添加で飼料摂取量に影響が見られなかったことから、飼料摂取量の低下を引き起こさずに添加できるリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の添加上限は４ｍｇ／ｋｇ以上１０ｍｇ／ｋｇ未満と考えられた。
以上より低カルシウム血症予防の目的での体重１ｋｇあたりのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は１．５〜４．０ｍｇと考えられた。乳牛の標準的な生体重は約６５０ｋｇ、胎児の生体重は４０ｋｇ程度で合計約７００ｋｇ程度であることから、１日１頭当たりのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は約１〜２．８ｇと考えられた。一般的に分娩前の配合飼料給与量は２〜４ｋｇ、粗飼料も合算した総飼料摂取量は約１０ｋｇであることから、飼料に対してのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は配合飼料当たりおおよそ０．０２５〜０．１５重量％、トータルの飼料換算ではおおよそ０．０１〜０．０３重量％と推定された。
【００２４】
上記の実施例ではリュウキュウヤナギを含有させたものを示したが、シロバナコウボクを含有させた場合にも同様の低カルシウム血症の予防又は緩和効果が得られる。
リュウキュウヤナギに含まれる活性型ビタミンＤ３配糖体は活性型ビタミンＤ３換算で約６７〜８９ｐｐｂ程度であることが報告されている（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｎｏｖ１９；１９４（４２６７）：８５３−８５５，１９７６）。一方、シロバナコウボクは少なくとも活性型ビタミンＤ３換算で４ｐｐｂ以上の活性型ビタミンＤ３配糖体を含有することが知られている（Ｈｕｑｈｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｊｕｌ２８；２６８（５６１８）：３４７−３４９，１９７７）。よって、シロバナコウボクを約２０倍量含有させた場合にも、同一の有効成分が供給される。シロバナコウボクの最適添加量は配合飼料当たり０．５〜３．０重量％、トータルの飼料換算では０．２〜０．６重量％となる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清活性型ビタミンＤ３濃度の推移を示すものである。
【図２】ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清カルシウム濃度の推移を示すものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、反芻動物用飼料に関する。さらに詳述すれば、リュウキュウヤナギもしくはシロバナコウボクの葉乾燥粉末を配合した反芻動物用配合飼料及びその飼料を給与して、低カルシウム血症を抑制もしくは緩和する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
低カルシウム血症は、牛やめん羊等の反芻動物で発症する疾病であり、産歴の進んだ高泌乳牛の分娩前後に症例が多い。
低カルシウム血症は分娩に合わせて合成される乳汁への急激なカルシウム流出に対し、消化管からのカルシウム吸収や骨からのカルシウム動員（骨吸収）が著しく停滞することが原因で発症すると考えられている。実際、乳房を実験的に切除した乳牛においては分娩前後に血清カルシウム濃度の低下は認められない。
分娩時の低カルシウム血症のうち起立不能、体温低下、食欲不振などの症状を示すものを乳熱と呼び、重篤な場合には昏睡を経て死亡ないしは廃用に至る。乳熱による起立不能による圧挫は二次的に筋肉や神経の損傷を引き起こしてその後カルシウム剤の治療によっても起立不能が治癒しないダウナー症候群を引き起こすケースも多い。また、カルシウムは筋肉の運動に必要であることから、低カルシウム血症は第四胃の運動性を低下させて第四胃変位を引き起こす場合も多い。このように低カルシウム血症は周産期病と呼ばれる分娩前後の疾病の多くに深く関わっており、今日の遺伝的改良が進んだ高泌乳牛において生産性を低下させる重要な問題となっている。
【０００３】
従来、乳熱の予防には乾乳期における低カルシウム飼料の給与、分娩直前（２〜８日）のビタミンＤ製剤の投与、飼料中のカチオン−アニオンバランスの制御及び分娩前後の液状カルシウム剤の投与などの方法が実践されてきた。
【０００４】
しかしながら、低カルシウム飼料は飼料原料由来のカルシウムの影響が大きいために含量のコントロールが難しく、分娩後も継続された場合には逆に乳熱の発症リスクが高まってしまうことから、分娩前後でカルシウム濃度の異なる飼料に切り替えることや液状カルシウム剤の投与が推奨されるため高度な個体管理が要求される。ビタミンＤ製剤についても、分娩の４８時間以上前に投与しなければ効果が望めないと言われており、予定よりも分娩が早まってしまった牛には対応できない。飼料中のカチオン−アニオンバランスは粗飼料の品質によって大きく左右されるためコントロールが難しいことに加え、陰イオン塩を添加するなどした場合には嗜好性の低下を招く恐れがある。このような理由から、乳熱の予防方法は完全に確立されているとは言い難いのが現状であり、乳熱を予防する効果の高い配合飼料又は混合飼料の開発が望まれている。
【０００５】
ビタミンＤ３は、カルシウム結合蛋白質等を介した小腸からのカルシウムの能動的吸収や、骨から血中へのカルシウム放出（骨吸収）を促進する作用を有し、生体内のカルシウム代謝及び血中カルシウム濃度の維持に重要な役割を果たす。生体内で産生もしくは腸管から吸収されたビタミンＤ３は、肝臓で２５位が水酸化され２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ−ビタミンＤ３）となり、次いで腎臓で１α位が水酸化されて活性型ビタミンＤ３（１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３）へ代謝される。ビタミンＤ３及び２５−ヒドロキシビタミンＤ３はビタミンＤ受容体との親和性が低くビタミンＤ３としてほとんど機能しないが、活性型ビタミンＤ３に代謝されることによってビタミンＤ受容体と高い親和性を示すようになり、生体内で機能する。
ビタミンＤ３から活性型ビタミンＤ３への代謝は、腎臓や上皮小体の機能及びカルシウム・リンの血中レベルに依存して、１α位の水酸化の段階で厳密に制御されているため、ビタミンＤ３の投与は活性型ビタミンＤ３濃度の上昇に必ずしも直結するわけではない。そこで、１α位が水酸化されていることから速やかに活性型ビタミンＤ３に代謝される１α−ヒドロキシビタミンＤ３（１α−ＯＨ−ビタミンＤ３）や活性型ビタミンＤ３を投与した試験が数多く実施されており、一定の乳熱の予防効果が認められている（例えば、非特許文献１〜非特許文献３参照。）。しかし、一般的に反芻動物の飼料となる天然物には１α−ヒドロキシビタミンＤ３や活性型ビタミンＤ３はほとんど含まれておらず、上述の試験は全て合成品により実施されている。
【非特許文献１】Ｂａｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６８：１９５２−１９５８，１９８５
【非特許文献２】Ｓａｃｈｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．７０：１６７１−１６７５，１９８７
【非特許文献３】Ｇａｓｔ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６２：１００９−１０１３，１９７９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、天然物である活性型ビタミンＤ３様因子を含有するリュウキュウヤナギあるいはシロバナコウボクの葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を反芻動物に給与することによって、低カルシウム血症を予防もしくは緩和することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、反芻動物にリュウキュウヤナギあるいはシロバナコウボクの葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を反芻動物に給与することによって、血清活性型ビタミンＤ３（１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３）及びカルシウム濃度が上昇することで前記の課題が解決されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
ナス科の植物であるリュウキュウヤナギ（和名：ルリヤナギ、学名：Ｓｏｌａｎｕｍ ｍａｌａｃｏｘｙｌｏｎ（＝Ｓｏｌａｎｕｍ ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ））やシロバナコウボク（学名：Ｃｅｓｔｒｕｍ Ｄｉｕｒｎｕｍ）は活性型ビタミンＤ３様因子を含有していることが知られている（Ｈｅｒｒａｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｄｔｓｃｈ Ｍｅｄ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．Ｎｏｖ２２；９９（４７）：２４０７−２４０９，１９７４）（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｊａｎ６；６２（１）：８５−９１，１９７５）。これらの植物の葉が活性型ビタミンＤ３様活性を持つのは、水溶性成分として活性型ビタミンＤ３の配糖体が含まれていることによると考えられており（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｎｏｖ１９；１９４（４２６７）：８５３−８５５，１９７６）（Ｈｕｑｈｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｊｕｌ２８；２６８（５６１８）：３４７−３４９，１９７７）、その応用例として採卵鶏においては、リュウキュウヤナギの葉の給与によって血漿中活性型ビタミンＤ３濃度の上昇や卵殻質の改善などが報告されている（特願２０００−１３８５１０）。
近年の消費者は合成品の敬遠傾向が強いことから、天然の活性型ビタミンＤ３様因子を含むリュウキュウヤナギの葉あるいはシロバナコウボクの葉を低カルシウム血症の予防に活用できれば非常に有用であると考えられる。
【０００９】
ところが、活性型ビタミンＤ３は生体内での活性が強いが故に、用量によっては過剰症を引き起こす恐れがある。牛では活性型ビタミンＤ３の過剰症と考えられるリュウキュウヤナギ中毒症はＥｎｔｅｑｕｅ Ｓｅｃｏという病名で知られており、カルシウム代謝の異常、肺動脈・大動脈へのカルシウム沈着（Ｐｕｃｈｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．２６（１）：６１−６４，１９７８）や柔組織・表皮の萎縮、毛包・皮脂腺・汗腺の退行等の上皮組織の異常と上皮細胞増殖阻害（Ｇｉｍｅｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．４７（４）：２０１−２１１，２０００）等多数の症例報告がある。
また、シロバナコウボクについても同様に牛で中毒症が報告されている（Ｋｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｖｅｔ．Ｏｃｔ；６５（４）：５５７−５７５，１９７５）。
しかし、上記の報告は放牧牛の過剰摂取による中毒症状についてであり、薬理作用を及ぼす範囲の用量でリュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉を給与して、反芻動物に対する生物的効果もしくは低カルシウム血症の予防効果を検証した報告例はない。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明に係る実施例を示す。
実施例１：リュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉乾燥物
本発明で用いる乾燥物はリュウキュウヤナギの葉又はシロバナコウボクの葉あるいはリュウキュウヤナギの葉の搾汁又はシロバナコウボクの葉の搾汁を乾燥させたものを用いることができる。乾燥方法は公知の手段、例えば天日乾燥、加熱乾燥、流動層乾燥、凍結乾燥などを用いることができる。乾燥は常温で行なわれても加熱条件下で行なわれても良い。また、乾燥は常圧で行なわれても減圧下で行なわれてもよい。常圧で加熱する場合には８０℃以下の加熱で３時間以下であれば有効成分の損失はないが、この限りではない。水分は１２重量％以下とすることが望ましい。
【００１１】
実施例２：リュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉溶媒抽出物
本発明で用いる葉溶媒抽出物は溶媒として水、エタノール又は両者を混合した含水エタノールを用いることができる。また、ここでいう抽出溶媒には水、エタノールのほか抽出効率を大きく損なわない範囲で他の成分（塩類、アミノ酸類、糖類）などが含まれても良い。抽出はリュウキュウヤナギ又はシロバナコウボクの葉を公知の手段、例えば浸漬、静置保存、加熱還流などによって行なうことができる。また、抽出は常温で行なわれても加熱条件下で行われてもよい。抽出に要する時間は温度や乾燥条件にもよるが、通常３０分程度以上である。抽出時間の上限は特に制限されないが、通常３年以下である。溶媒量は特に規定されないが、葉に対して等重量以上１０倍量以下の溶媒で抽出することが望ましい。
本発明によれば上記葉溶媒抽出物は低カルシウム血症の予防作用を持つ抽出液と残渣に分離する。分離方法は公知の手段に従ってよく、例えば遠心分離や濾過などが挙げられる。本発明には抽出液をそのまま用いても良いし、抽出液の濃縮液あるいは濃縮乾燥物を用いても良い。濃縮は常圧又は減圧条件下で行なわれる。濃縮乾燥物は常圧又は減圧条件下で溶媒を蒸発させることで得られる。本発明の葉溶媒抽出物は元の葉乾燥品に対して当重量の抽出物を得た場合の最適添加量を設定しているが、抽出物の希釈あるいは濃縮倍率に応じて後述の最適添加量を調整すれば良い。
また、葉抽出液あるいは葉濃縮液を賦形剤に吸着させて水分を調整して使用しても良い。賦形剤はフスマ、糠、豆乳粕、パーム核粕など一般に飼料原料として用いられる原料を混合すれば得られる。賦形剤による水分調整を行なった場合には水分は１２重量％以下にする事が望ましく、必要に応じて更に前述の葉乾燥物のように乾燥させても良い。
【００１２】
実施例３：リュウキュウヤナギの葉の給与が血液性状に及ぼす影響の検討（高水準）
ホルスタイン種雌牛４頭（２〜４歳齢、体重４６９〜６８９ｋｇ）を供試して、リュウキュウヤナギの葉の給与が血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度に及ぼす影響を検討した。アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉を用いて、無添加（無添加区）、体重１ｋｇ当たり２．５ｍｇ給与（２．５ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、１０ｍｇ給与（１０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、４０ｍｇ給与（４０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の４区を設定し、各区１頭を割り当てて４日間の給与試験を行なった。リュウキュウヤナギの葉は乾燥粉末にし、賦形剤として脱脂糠を用いて基礎飼料に添加して給与した。基礎飼料はチモシー乾草と市販飼料を３：７の割合で日本飼養標準・肉牛（２００１）成雌牛の維持要求量を満たす量を給与した。基礎飼料のミネラルの分析値を表１に示した。給与開始前及び４日間の給与終了時に採血を行い、各個体の血清の活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度を分析した。
表２に血清の分析結果を示した。リュウキュウヤナギの葉の給与量増加に伴い、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は上昇し、リュウキュウヤナギの葉の給与量と血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度との間に用量依存的な反応が確認された。また、１０ｍｇ／ｋｇＢＷ以上の給与水準においては給与４日以内に著しい飼料摂取量の低下が確認された。
【００１３】
ヒトにおける血清活性型ビタミンＤ３濃度の正常範囲は２０〜６０ｐｇ／ｍＬ程度と言われているが、分娩前後を除いて乳牛においてもヒトとほぼ同じ範囲内にあることが報告されている（Ｂａｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．６４：８５０−８５２，１９８１，Ｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８５：１４２７−１４３６，２００２）。実施例３ではいずれの試験区においても正常範囲を超える高値となっており、特に１０ｍｇ／ｋｇ以上の水準においては２００ｐｇ／ｍＬを超える異常高値となっており、飼料摂取量の低下も確認されたことから一過性のビタミンＤ過剰症に陥ったものと推察された。
よって、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ以上の用量でリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を給与した場合には反芻動物がビタミンＤ過剰症を引き起こす恐れがあることが示唆された。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】
実施例４：リュウキュウヤナギの葉の給与が血液性状に及ぼす影響の検討（適正水準）
実施例３よりも低水準のリュウキュウヤナギの葉の給与が血清活性型ビタミンＤ３及びカルシウム濃度に及ぼす影響を検討した。アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を用いて、無添加（無添加区）、体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ給与（０．５ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、１．０ｍｇ給与（１．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）、２．０ｍｇ給与（２．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の４区を設定し、１期２週間の４×４ラテン方格法により試験を実施した。供試牛は実施例３と同一のホルスタイン雌牛４頭を用いた。使用したリュウキュウヤナギならびに基礎飼料についても実施例３と同様に設定した。ラテン方格の各試験期終了時に採血を行い、血清の活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度を分析した。
表３に血清の分析結果を示した。リュウキュウヤナギの葉の給与量増加に伴い、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は上昇し、リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量と血清活性型ビタミンＤ３（回帰式１）及びカルシウム濃度（回帰式２）との間に用量依存的な反応が確認された。
（回帰式１）
Ｙ＝２３．４１Ｘ＋１６．３３（Ｒ２＝０．９６５）
Ｘ；リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量（ｍｇ／ｋｇＢＷ）
Ｙ；血清活性型ビタミンＤ３濃度（ｐｇ／ｍＬ）
（回帰式２）
Ｚ＝１．２００Ｘ＋９．１５０（Ｒ２＝０．９９３）
Ｘ；リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末給与量（ｍｇ／ｋｇＢＷ）
Ｚ；血清カルシウム濃度（ｍｇ／ｄＬ）
【００１７】
リュウキュウヤナギの葉の給与量が最も多い２．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区における血清活性型ビタミンＤ３濃度は６０．６±６．１ｐｇ／ｍＬであり、この数値は前述の非泌乳牛の血清活性型ビタミンＤ３濃度の正常範囲２０〜６０ｐｇ／ｍＬの上限とほぼ一致した。また、血清カルシウム濃度は１１．６±０．９ｍｇ／ｄＬであり、牛の血清カルシウム濃度の正常範囲８〜１２ｍｇ／ｄＬの範囲内であった。以上の結果より、体重１ｋｇ当たり２．０ｍｇ以下の用量でリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を給与することにより、ビタミンＤ３過剰症や高カルシウム血症を引き起こさない正常の範囲内で血清活性型ビタミンＤ３濃度が上昇することが示唆された。
【００１８】
【表３】
【００１９】
実施例５：リュウキュウヤナギ事前給与牛への低カルシウム血症の誘起試験
次に、リュウキュウヤナギの葉を事前に給与した牛に対して人工的に低カルシウム血症を誘起し、反応を検討した。
アルゼンチン産のリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末を用いて、無添加（無添加区）及び体重１ｋｇ当たり４．０ｍｇ給与（４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区）の２区を設定し、実施例３と同一のホルスタイン雌牛４頭を２頭ずつ振り分けた。使用したリュウキュウヤナギならびに基礎飼料についても実施例３と同様に設定した。事前の給与期間は１４日間とし、１４日目の給与終了直後に採血を実施した。採血終了と同時に、低カルシウム血症を誘起させることを目的として４．７％（ｗ／ｖ）Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液１．５Ｌを頸静脈中に３〜４時間かけて点滴注入し、点滴開始より１２時間後まで３０分毎に採血した。血清活性型ビタミンＤ３濃度はＥＤＴＡ溶液の点滴開始時から３時間毎に採取した検体につき測定し、血清カルシウム濃度については全ての検体を測定した。
２週間の給与期間終了後（＝ＥＤＴＡ溶液の点滴開始時）の血清活性型ビタミンＤ３濃度及び血清カルシウム濃度を表４に示した。試験１と同様に、血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度は４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区において高い値を示した。なお、２週間の給与期間中、飼料摂取量の低下は認められなかった。
【００２０】
【表４】
【００２１】
ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清活性型ビタミンＤ３濃度及びカルシウム濃度の推移を図１及び図２に示した。
ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後、無添加区において血清活性型ビタミンＤ３濃度は時間の経過に伴い増加したのに対し、４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区では減少した。しかし、点滴開始時点で４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区が大きく上回っていたため、血清活性型ビタミンＤ３濃度は４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区の方が高い水準で推移した。
一方、血清カルシウム濃度は無添加区ではＥＤＴＡ溶液の点滴開始後１．５〜５．５時間の間、低カルシウム血症の指標となる８．０ｍｇ／ｄＬを下回ったのに対し、４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区では概ね１０ｍｇ／ｄＬ以上の水準を維持した。
【００２２】
分娩時にアルファルファと穀物からなるＴＭＲ（Ｔｏｔａｌ Ｍｉｘｅｄ Ｒａｔｉｏｎ）を給与した乳牛においては血清カルシウム濃度が平均約８ｍｇ／ｄＬであったものが分娩時には約５ｍｇ／ｄＬ程度に約３ｍｇ／ｄＬ程度低下することが報告されている（Ｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８５：１４２７−１４３６，２００２）。本試験においてもＥＤＴＡ溶液の点滴により無添加区と４．０ｍｇ／ｋｇＢＷ区いずれの区においても点滴開始２．５〜３．０時間後に点滴開始前と比較して血清カルシウム濃度が約３ｍｇ／ｄＬ低下し、分娩時に類似した状態を人為的に再現できたと言える。今回、４．０ｍｇ／ｋｇ区で１０ｍｇ／ｄＬ以上の水準を維持したが、これは事前のリュウキュウヤナギの給与により点滴開始時点の血清カルシウム濃度が高かったことが影響したものと考えられる。以上の結果より、リュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の給与が低カルシウム血症を予防することが示唆された。
【００２３】
分娩前後の低カルシウム血症時の血清カルシウム濃度の低下幅を約３ｍｇ／ｄＬとすると、分娩時に８ｍｇ／ｄＬ以上の正常な血清カルシウム濃度を保つためには分娩に入る前の血清カルシウム濃度として１１ｍｇ／ｄＬ以上が必要となる。実施例４で得られた回帰式２より血清カルシウム濃度を１１ｍｇ／ｄＬ以上に保つために必要なリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の添加量は約１．５ｍｇ／ｋｇＢＷ以上となる。
また、実施例３においてリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の１０ｍｇ／ｋｇＢＷ以上の添加でビタミンＤ過剰症と考えられる著しい飼料摂取量の低下が見られた一方で、実施例５においては４ｍｇ／ｋｇＢＷの添加で飼料摂取量に影響が見られなかったことから、飼料摂取量の低下を引き起こさずに添加できるリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の添加上限は４ｍｇ／ｋｇ以上１０ｍｇ／ｋｇ未満と考えられた。
以上より低カルシウム血症予防の目的での体重１ｋｇあたりのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は１．５〜４．０ｍｇと考えられた。乳牛の標準的な生体重は約６５０ｋｇ、胎児の生体重は４０ｋｇ程度で合計約７００ｋｇ程度であることから、１日１頭当たりのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は約１〜２．８ｇと考えられた。一般的に分娩前の配合飼料給与量は２〜４ｋｇ、粗飼料も合算した総飼料摂取量は約１０ｋｇであることから、飼料に対してのリュウキュウヤナギの葉乾燥粉末の最適添加量は配合飼料当たりおおよそ０．０２５〜０．１５重量％、トータルの飼料換算ではおおよそ０．０１〜０．０３重量％と推定された。
【００２４】
上記の実施例ではリュウキュウヤナギを含有させたものを示したが、シロバナコウボクを含有させた場合にも同様の低カルシウム血症の予防又は緩和効果が得られる。
リュウキュウヤナギに含まれる活性型ビタミンＤ３配糖体は活性型ビタミンＤ３換算で約６７〜８９ｐｐｂ程度であることが報告されている（Ｗａｓｓｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｎｏｖ１９；１９４（４２６７）：８５３−８５５，１９７６）。一方、シロバナコウボクは少なくとも活性型ビタミンＤ３換算で４ｐｐｂ以上の活性型ビタミンＤ３配糖体を含有することが知られている（Ｈｕｑｈｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｊｕｌ２８；２６８（５６１８）：３４７−３４９，１９７７）。よって、シロバナコウボクを約２０倍量含有させた場合にも、同一の有効成分が供給される。シロバナコウボクの最適添加量は配合飼料当たり０．５〜３．０重量％、トータルの飼料換算では０．２〜０．６重量％となる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清活性型ビタミンＤ３濃度の推移を示すものである。
【図２】ＥＤＴＡ溶液の点滴開始後の血清カルシウム濃度の推移を示すものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リュウキュウヤナギ、シロバナコウボクからなる群から選ばれた少なくとも１種類の葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を含有することを特徴とする反芻動物用飼料。
【請求項２】
前記葉溶媒抽出物が水、エタノールからなる群から選ばれた少なくとも１種類の溶媒による抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の反芻動物用飼料。
【請求項３】
反芻動物が、牛、めん羊及び山羊からなる群から選ばれたものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の反芻動物用飼料。
【請求項４】
給与期間が分娩３週間前から分娩１週間後の期間を含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料。
【請求項５】
低カルシウム血症あるいは低カルシウム血症に起因する乳熱、ダウナー症候群、第四胃変異の予防性又は緩和効果を有することを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料を反芻動物に給与することを特徴とする反芻動物の飼育方法。
【請求項１】
リュウキュウヤナギ、シロバナコウボクからなる群から選ばれた少なくとも１種類の葉乾燥粉末又は葉溶媒抽出物を含有することを特徴とする反芻動物用飼料。
【請求項２】
前記葉溶媒抽出物が水、エタノールからなる群から選ばれた少なくとも１種類の溶媒による抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の反芻動物用飼料。
【請求項３】
反芻動物が、牛、めん羊及び山羊からなる群から選ばれたものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の反芻動物用飼料。
【請求項４】
給与期間が分娩３週間前から分娩１週間後の期間を含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料。
【請求項５】
低カルシウム血症あるいは低カルシウム血症に起因する乳熱、ダウナー症候群、第四胃変異の予防性又は緩和効果を有することを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の反芻動物用飼料を反芻動物に給与することを特徴とする反芻動物の飼育方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−２９１６５（Ｐ２０１０−２９１６５Ａ）
【公開日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１９７７９４（Ｐ２００８−１９７７９４）
【出願日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（５９１０１０５０５）日本配合飼料株式会社 (10)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（５９１０１０５０５）日本配合飼料株式会社 (10)
【Ｆターム（参考）】
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