可溶性Ａ−βに対する抗体を生成させるための能動免疫
【課題】アルツハイマー病の予防若しくは処置を遂げるのに有用な方法の提供。
【解決手段】Ａ−βの中央若しくはＣ末端領域からのＡ−βフラグメントを投与し、該フラグメントは斑に結合することなく可溶性Ａ−βに特異的に結合する抗体のポリクローン性の混合物を誘導し得る方法。該抗体は、可溶性Ａβからの患者の脳中のＡ−βのアミロイド沈着物の形成を阻害してかように該疾患を予防若しくは治療し得る。フラグメントＡ−β１５−２４およびその５〜１０個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントが、高力価の抗体を生成させるそれらの能力により、好ましい免疫原である。
【解決手段】Ａ−βの中央若しくはＣ末端領域からのＡ−βフラグメントを投与し、該フラグメントは斑に結合することなく可溶性Ａ−βに特異的に結合する抗体のポリクローン性の混合物を誘導し得る方法。該抗体は、可溶性Ａβからの患者の脳中のＡ−βのアミロイド沈着物の形成を阻害してかように該疾患を予防若しくは治療し得る。フラグメントＡ−β１５−２４およびその５〜１０個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントが、高力価の抗体を生成させるそれらの能力により、好ましい免疫原である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との関係
本出願は、２００３年２月１日出願の米国特許出願第６０／４４４，１５０号明細書（全部の目的上引用することによりそっくりそのまま組込まれる）のＵ．Ｓ．Ｃ．第３５条§１１９（ｅ）の下での利益を主張する出願である。
【０００２】
本発明は免疫学および医学の技術分野に存する。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）は老年痴呆をもたらす進行性疾患である。全般として、非特許文献１；特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照されたい。大まかに言えば、該疾患は２つの範疇、すなわち高齢（６５歳以上）で発生する晩発型および老年期よりかなり以前に、すなわち３５と６０歳との間で発症する早発型に分けられる。双方の疾患型で病状は同一であるが、しかし異常性はより若年齢で開始する症例でより重篤かつ広範囲に及ぶ傾向がある。該疾患は脳中の少なくとも２種の型の病変すなわち老人斑および神経原線維変化を特徴とする。老人斑は、脳組織の切片の微視的分析により見える中央に細胞外アミロイド沈着物を伴う直径１５０μｍまでの無秩序の神経網の領域である。神経原線維変化は、相互に対になった周囲で捻れた２本の細糸よりなる微小管関連τタンパク質の細胞内沈着物である。
【０００４】
該斑の主構成要素はＡβすなわちβ−アミロイドペプチドと命名されたペプチドである。Ａβペプチドはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と命名された前駆体タンパク質の３９〜４３アミノ酸の内的フラグメントである。ＡＰＰタンパク質内の数種の突然変異がアルツハイマー病の存在と関係づけられている。例えば、非特許文献５（バリン７１７からイソロイシン）；非特許文献６（バリン７１７からグリシン）；非特許文献７（バリン７１７からフェニルアラニン）；非特許文献８（リシン５９５−メチオニン５９６からアスパラギン５９５−ロイシン５９６に変わる二重突然変異）を参照されたい。こうした突然変異はＡＰＰのＡβへの増大した若しくは変えられたプロセシング、とりわけ増大した量の長い形態のＡβ（すなわちＡβ１−４２およびＡβ１−４３）へのＡＰＰのプロセシングによりアルツハイマー病を引き起こすと考えられている。プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２のような他の遺伝子中の突然変異は、ＡＰＰのプロセシングに間接的に影響して増大した量の長い形態のＡβを生成させると考えられている（非特許文献９を参照されたい）。これらの観察結果は、Ａβおよびとりわけその長い形態がアルツハイマー病の原因となる要素であることを示す。
【０００５】
β−アミロイドペプチド（Ａβ）由来の免疫原でのＡＤのトランスジェニックマウスモデルの免疫化は、該マウスの脳中のアミロイド斑の形成を阻害かつ／若しくはそれを消失させる抗体応答をもたらす（非特許文献１０；非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３））。受動的に投与したＡβに対する抗体は類似の効果を達成した。ミクログリア細胞および／若しくはマクロファージによる抗体媒介性のＦｃ依存性の食作用が、既存のアミロイド斑の消失の１機構として提案されている（非特許文献１４））。この提案は、ある種の末梢で投与したＡβに対する抗体がトランスジェニックマウスのＣＮＳに入り、アミロイド斑を装飾しかつ斑の消失を誘発するという結果に基づく。また、ｉｎ ｖｉｖｏおよび斑消失活性を測定するためにＰＤＡＰＰ若しくはアルツハイマー病（ＡＤ）脳の切片を使用したｅｘ ｖｉｖｏアッセイで有効であった抗体間で、強い相関が報告された。ミクログリア細胞上のＦｃ受容体がｅｘ ｖｉｖｏアッセイで消失応答を遂げた。しかしながら、抗体の効力はＦｃ相互作用に依存しない機構によってもまたｉｎ ｖｉｖｏ
で得ることができることもまた報告されている（非特許文献１５）。アミロイド斑を認識し得ないＡβの中央部分に向けられた抗体は、可溶性Ａβに結合しかつ斑沈着を低下させることが報告された（非特許文献１６）。この抗体での短期間の処置がアミロイド負荷量に影響することなく対象認識課題での成績を改善することもまた報告されている（非特許文献１７）。
【０００６】
本出願は、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６（これらのそれぞれは全部の目的上引用することによりそっくりそのまま組み込まれる）に関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】Ｈａｒｄｙら、第ＷＯ ９２／１３０６９号明細書
【特許文献２】２０００年５月２６日出願の第ＷＯ ００／７２８８０号明細書
【特許文献３】１９９８年１１月３０日出願の第ＷＯ ９９／２７９４４号明細書
【特許文献４】１９９７年１２月２日出願の米国特許出願第６０／０６７，７４０号明細書
【特許文献５】１９９８年４月７日出願の米国特許出願第６０／０８０，９７０号明細書
【特許文献６】１９９８年１１月３０日出願の米国特許出願第０９／２０１，４３０号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｅｌｋｏｅ、ＴＩＮＳ １６、４０３−４０９（１９９３）
【非特許文献２】Ｓｅｌｋｏｅ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５３、４３８−４４７（１９９４）
【非特許文献３】Ｄｕｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、４７６−４７７（１９９５）
【非特許文献４】Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、５２３（１９９５）
【非特許文献５】Ｇｏａｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９、７０４）（１９９１）
【非特許文献６】Ｃｈａｒｔｉｅｒ Ｈａｒｌａｎら Ｎａｔｕｒｅ ３５３、８４４（１９９１））
【非特許文献７】Ｍｕｒｒｅｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４、９７（１９９１）
【非特許文献８】Ｍｕｌｌａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１、３４５（１９９２）
【非特許文献９】Ｈａｒｄｙ、ＴＩＮＳ ２０、１５４（１９９７）
【非特許文献１０】Ｓｃｈｅｎｋら、（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ４００、１７３−１７７
【非特許文献１１】Ｊａｎｕｓら、（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８、９７９−９８２
【非特許文献１２】Ｍｏｒｇａｎら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８、９８２−９８５
【非特許文献１３】Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎら、（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５９、４３９−４４７．１−４
【非特許文献１４】Ｂａｒｄら、（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、６、９１６−９１９
【非特許文献１５】Ｂａｃｓｋａｉら、（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２２、７８７３−７８７８
【非特許文献１６】ＤｅＭａｔｔｏｓら、（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８、８８５０−８８５５
【非特許文献１７】Ｄｏｄａｒｔら、（２００２）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、５、４５２−４５７
【発明の概要】
【０００９】
Ｉ．全般
本発明は、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントを使用するアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法、その予防を遂げる方法若しくは治療方法を提供する。こうしたフラグメントは、斑に結合することなく可溶性Ａβに特異的に結合する抗体のポリクローン性の混合物を誘導し得る。該抗体は、可溶性Ａβからの患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害し得、従って該疾患を予防若しくは治療し得る。フラグメントＡβ１５−２４およびその５〜１０個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントが、高力価の抗体を生成させるそれらの能力により好ましい免疫原である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ−Ｃ ＡβのＮ末端フラグメントを用いる免疫化により産生される抗体はアミロイド斑に結合する。図１Ａ。Ａβ１−４２（配列番号１）（卵アルブミン由来のＴ細胞エピトープに隣接して合成した）の多様なドメインを包含するペプチドを使用してＰＤＡＰＰマウスを免疫した。リバースマーＡβ５−１（配列番号２）を陰性対照として使用した。図１Ｂ。凝集したＡβ１−４２に対するＥＬＩＳＡ力価は、Ａβ５−１１およびＡβ１５−２４群でＡβ１−５群でよりも試験の長さにわたって有意により高かった（それぞれ、１：１４，４５７、ｐ＜０．０１および１：１２，２５７、ｐ＜０．０５対１：３，６４７；ＡＮＯＶＡ、次いでｐｏｓｔ ｈｏｃ Ｔｕｋｅｙ検定）。図１Ｃ。未処置のＰＤＡＰＰマウス脳からの未固定クライオスタット切片を、Ａβ５−１、Ａβ３−９、Ａβ５−１１若しくはＡβ１５−２４で免疫したマウスの血清に曝露させた（力価を染色について１：１０００に正規化した）。Ａβ１５−２４に対する抗体はアミロイド斑に結合しなかった。尺度の棒は５００μｍを表す。
【図２】図２Ａ−Ｃ 抗体による可溶性Ａβ１−４２の捕捉は低下したアミロイド負荷量若しくは神経炎の病状を伴わない。図２Ａ。Ａβのフラグメントで免疫したマウスからの血清を、放射標識した可溶性Ａβ１−４２を捕捉するそれらの能力についてラジオイムノアッセイで検査した。Ａβ１５−２４で免疫した全動物からの血清は、Ａβ１−５群の動物の２７％およびＡβ３−９群の３％に比較して、可溶性Ａβ１−４２を捕捉することが可能であった（１血清サンプルは１；１，３５０より高い力価を有し、かつ、正確な力価は測定されなかった）。図２Ｂ−Ｃ。アミロイド負荷量（図２Ｂ）および神経炎の病状（図２Ｃ）を、盲検化した顕微鏡使用者により画像解析で評価した。値はＡβ５−１群（陰性対照のリバースマーペプチド）の平均のパーセントとして表す。Ａβ５−１１群は他の群と離れた場所で（ａｔ ａ ｓｅｐａｒａｔｅ ｓｉｔｔｉｎｇ）、しかし内的参照としての同一の陰性対照群（第二のＡβ５−１リバースマーの組、左側）とともに評価した。アミロイド負荷量はＡβ１−５、Ａβ３−９およびＡβ５−１１群で有意に低下された（ｐ＜０．００１。棒は中央値を、また、水平の点線は対照値を表す。神経炎性の負荷はＡβ３−９およびＡβ５−１１群で有意に低下された（ｐ＜０．０５）。いずれのエンドポイントもＡβ１５−２４群での免疫化により有意に変えられなかった。統計学的解析は平方根変換を用いて（ノンパラメトリック分布を正規化するため）実施し、そしてＡＮＯＶＡで解析した。その後、複数の群Ａβ１−５、Ａβ３−９、Ａβ１５−２４群をそれらのＡβ５−１対照と比較するためＤｕｎｎｅｔｔ検定を、また、Ａβ５−１１群についてその対応するＡβ５−１リバースマー対照と比較するためＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙを使用した。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
ＩＩ．定義
アミノ酸置換を保存的若しくは非保存的と分類する目的上、アミノ酸を後に続くとおりグループ分けする。すなわち、群Ｉ（疎水性側鎖）：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖ
ａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；群ＩＩ（中性の親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；群ＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；群ＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；群Ｖ（鎖の方向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および群ＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は同一分類中のアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換はこれらの分類の１つの１メンバーを別の分類の１メンバーと交換することを構成する。
【００１２】
「全Ｄ」という用語は、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上および１００％のＤ−配置のアミノ酸を有するペプチドを指す。
【００１３】
「剤」という用語は薬理学的活性を有する若しくは有するとみられる化合物を記述するのに使用する。剤は、既知の薬物である化合物、薬理学的活性が同定されているがしかしさらなる治療評価を受けている化合物、ならびに薬理学的活性についてスクリーニングされるべきである集合物およびライブラリーのメンバーである化合物を包含する。
【００１４】
本発明の治療薬は、典型的には、望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これは、ある剤が、典型的には最低約５０％ｗ／ｗ（重量／重量）純度である、ならびに、妨害するタンパク質および汚染物質を実質的に含まないことを意味している。ときに、該剤は、最低約８０％ｗ／ｗ、およびより好ましくは最低９０若しくは約９５％ｗ／ｗ純度である。しかしながら、慣習的タンパク質精製技術を使用して、最低９９％ｗ／ｗの均質なペプチドを得ることができる。本発明の治療薬は、アミロイド沈着物と関連する疾患を予防しうるか、その予防を遂げうるか、若しくはそれを治療しうる。
【００１５】
２種の実体の間の特異的結合は、該実体が、無関係の抗原若しくは異なる抗原のような対照に対するいずれの実体の親和性よりも最低１０、１００若しくは１００倍より大きい相互に対する相互親和性を有することを意味している。相互に対する該２種の実体の相互親和性は、通常最低１０７、１０８、１０９Ｍ−１若しくは１０１０Ｍ−１である。１０８Ｍ−１より大きい親和性が好ましい。Ａβ内の１エピトープに対するポリクローナル抗体の特異的結合は、該ポリクローナル抗体集団の抗体がＡβの他のエピトープに結合することなくＡβの１エピトープに特異的に結合することを意味している。
【００１６】
「抗体」若しくは「免疫グロブリン」という用語は完全な（ｉｎｔａｃｔ）抗体およびそれらの結合フラグメントを包含するのに使用する。典型的には、フラグメントは、分離したＨ鎖、Ｌ鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃおよびＦｖを包含する抗原フラグメントへの特異的結合に関して、それらが由来した完全な抗体と競合する。フラグメントは組換えＤＮＡ技術、または完全な免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的分離により製造する。「抗体」という用語は、他のタンパク質を伴う融合タンパク質に化学的に結合されているか若しくは融合タンパク質として発現される１種若しくはそれ以上の免疫グロブリン鎖もまた包含する。「抗体」という用語は二特異性抗体もまた包含する。二特異性若しくは二機能性抗体は、２種の異なるＨ／Ｌ鎖対および２種の異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合若しくはＦａｂ’フラグメントの結合を包含する多様な方法により製造し得る。例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉとＬａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【００１７】
β−アミロイドペプチド若しくはＡ４ペプチドとしてもまた知られるＡβ（米国特許第４，６６６，８２９号明細書；ＧｌｅｎｎｅｒとＷｏｎｇ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１２０、１１３１（１９８４）を参照されたい）は、アルツハイマー病の特徴的な斑の主成分である３９〜４３アミノ酸のペプチドである。Ａβ
は数種の天然に存在する形態を有する。Ａβの天然のヒト形態はＡβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３と称される。これらのペプチドの配列およびＡＰＰ前駆体とのそれらの関係はＨａｒｄｙら、ＴＩＮＳ ２０、１５５−１５８（１９９７）の図１により具体的に説明されている。例えば、Ａβ４２は配列：
【００１８】
【化１】
を有する。
【００１９】
Ａβ４１、Ａβ４０およびＡβ３９は、Ｃ末端からのそれぞれＡｌａ、Ａｌａ−ＩｌｅおよびＡｌｅ−Ｉｌｅ−Ｖａｌの省略によりＡβ４２と異なる。Ａβ４３はＣ末端のトレオニン残基の存在によりＡβ４２と異なる。
【００２０】
ＡＰＰ６９５、ＡＰＰ７５１およびＡＰＰ７７０はそれぞれヒトＡＰＰ遺伝子によりコードされる６９５、７５１および７７０アミノ酸残基長のポリペプチドを指す。Ｋａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３２５、７７３（１９８７）；Ｐｏｎｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、５２５（１９８８）；およびＫｉｔａｇｕｃｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、５３０（１９８８）を参照されたい。ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内のアミノ酸はＡＰＰ７７０アイソフォームの配列に従って番号を割り当てられている。Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３のような用語はそれぞれアミノ酸残基１−３９、１−４０、１−４１、１−４２および１−４３を含有するＡβペプチドを指す。
【００２１】
解離型Ａβ若しくはそのフラグメントは単量体ペプチド単位を意味している。解離型Ａβ若しくはそのフラグメントは一般に可溶性であり、そして自己凝集して可溶性オリゴマーを形成することが可能である。Ａβおよびそのフラグメントのオリゴマーは通常可溶性でありかつ主としてα−へリックス若しくはランダムコイルとして存在する。単量体Ａβの一製造方法は、凍結乾燥したペプチドを希釈していないＤＭＳＯに超音波処理を用いて溶解することである。生じる溶液を遠心分離していかなる不溶性微粒子も除去する。凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントは、単量体単位が非共有結合により一緒に保持されかつ不溶性βシート集成体に会合しているＡβ若しくはその免疫原性フラグメントのオリゴマーを意味している。凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントはまた原線維の多量体（ｆｉｂｒｉｌｌａｒ ｐｏｌｙｍｅｒｓ）も意味している。原線維は通常不溶性である。数種の抗体は、可溶性Ａβ若しくはそのフラグメント、または凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントのいずれかを結合する。数種の抗体は可溶性Ａβ若しくはそのフラグメントおよび凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントの双方を結合する。数種の抗体は斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する。
【００２２】
「抗原」は抗体が特異的に結合する実体である。
【００２３】
「エピトープ」若しくは「抗原決定基」という用語は、Ｂおよび／若しくはＴ細胞が応答する抗原上の一部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、隣接するアミノ酸若しくはタンパク質の三次元のフォールディングにより並置される隣接しないアミノ酸の双方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒への曝露に際して典型的に保持される一方、三次元のフォールディングにより形成されるエピトープは典型的には変性溶媒での処理に際して喪失される。エピトープは、独特の空間配置にある典型的には最低３、およびより通常は最低５若しくは８〜１０アミノ酸を包含する。エピトープの空間的
配置の決定方法は、例えばｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴を包含する。例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．６６、Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６）を参照されたい。同一エピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を遮断する一抗体の能力を示す単純なイムノアッセイで同定し得る。Ｔ細胞は、ＣＤ８細胞について約９アミノ酸若しくはＣＤ４細胞について約１３〜１５アミノ酸の連続したエピトープを認識する。エピトープを認識するＴ細胞は、エピトープに応答してプライミングされたＴ細胞による３Ｈ−チミジン取り込みにより測定されるところの抗原依存性の増殖を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（Ｂｕｒｋｅら、Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．、１７０、１１１０−１９（１９９４））、抗原依存性の殺傷（細胞傷害性Ｔリンパ球アッセイ、Ｔｉｇｇｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５６、３９０１−３９１０）若しくはサイトカイン分泌により同定し得る。
【００２４】
ＡβのＮ末端エピトープは残基１−１１を伴うエピトープを意味している。Ｃ末端領域内のエピトープは残基２９−４３内のエピトープを意味し、また、中央領域内のエピトープは残基１２−２８を伴うエピトープを意味している。
【００２５】
「免疫学的」若しくは「免疫」応答という用語は、レシピエント患者におけるアミロイドペプチドに向けられた有益な体液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞若しくはそれらの分泌産物により媒介される）応答の発生である。こうした応答は、免疫原の投与により誘導される能動的応答または抗体の投与若しくはプライミングされたＴ細胞により誘導される受動的応答であり得る。細胞性免疫応答は、抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞および／若しくはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化するためのクラスＩ若しくはクラスＩＩ ＭＨＣ分子とともにのポリペプチドエピトープの提示により導き出される。該応答は、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球若しくは自然免疫の他成分の活性化もまた伴うことがある。細胞媒介性の免疫学的応答の存在は増殖アッセイ（ＣＤ４＋ Ｔ細胞）若しくはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイにより測定し得る（Ｂｕｒｋｅ、上記；Ｔｉｇｇｅｓ、上記を参照されたい）。免疫原の保護若しくは治療効果に対する体液性および細胞性の応答の相対的寄与は、免疫した同系動物から抗体およびＴ細胞を個別に単離すること、ならびに第二の被験体中で保護若しくは治療効果を測定することにより識別し得る。
【００２６】
「免疫原性の剤」若しくは「免疫原」は、場合によってはアジュバントともにの哺乳動物への投与に際してそれ自身に対する免疫学的応答を誘導することが可能である。
【００２７】
「裸のポリヌクレオチド」という用語はコロイド状物質と複合体形成されていないポリヌクレオチドを指す。裸のポリヌクレオチドはときにプラスミドベクター中にクローン化される。
【００２８】
「アジュバント」という用語は、抗原とともに投与される場合に該抗原に対する免疫応答を増強するがしかし単独で投与される場合に該抗原に対する免疫応答を生成しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球動員、Ｂおよび／若しくはＴ細胞の刺激、ならびにマクロファージの刺激を包含するいくつかの機構により免疫応答を増強し得る。
【００２９】
「患者」という用語は、予防的若しくは治療的いずれかの処置を受領するヒトおよび他の哺乳動物被験体を包含する。
【００３０】
抗体間の競合は、試験中の免疫グロブリンがＡβのような共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにより測定される。多数の型の競合的結合アッセイ、例えば：固相直接若しくは間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接若しくは間接エ
ンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、９：２４２−２５３（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７−１５（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７６：５４６−５５２（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：７７−８２（１９９０））が既知である。典型的には、こうしたアッセイは固体表面に結合された精製された抗原若しくはこれらのいずれかをもつ細胞、未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンの使用を必要とする。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面若しくは細胞に結合された標識の量を測定することにより測定する。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。競合アッセイにより同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同一エピトープに結合する抗体、および、参照抗体により結合されたエピトープに立体障害が起こるように十分近接した隣接エピトープに結合する抗体を包含する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、それは共通抗原への参照抗体の特異的結合を最低５０若しくは７５％阻害することができる。
【００３１】
可溶性Ａβに特異的に結合する抗体は、最低１０７Ｍ−１の親和性で可溶性Ａβに結合する抗体を意味している。数種の抗体は１０８Ｍ−１と１０１１Ｍ−１との間の親和性で可溶性Ａβに結合する。
【００３２】
斑に特異的に結合することなく可溶性Ａβに特異的に結合する抗体は、上述されたところの可溶性Ａβに結合しかつ以前のアルツハイマー病の患者若しくはトランスジェニック動物モデルの屍体からの斑（すなわち凝集型β−プリーツシートの形態のＡβ）に対し最低１０倍および通常は最低１００倍より低い特異的結合親和性を有する抗体を意味している。例えば、こうした抗体は１０９Ｍ−１の親和性で可溶性Ａβに、および１０７Ｍ−１未満の親和性で斑に結合するとみられる。こうした抗体の斑に対する親和性は通常１０７若しくは１０６Ｍ−１未満である。こうした抗体は、付加的に、若しくは、あるいは、該抗体を斑と接触させかつ（実施例の節に記述されるとおり）蛍光標識により結合を評価する場合に、無関係の対照抗体（例えばリバースマー（ｒｅｖｅｒｓｅｍｅｒ）Ａβペプチドに対する抗体若しくはポリクローナル抗体の混合物）に関しての蛍光強度により定義される。斑に結合することなく可溶性Ａβペプチドに結合する抗体の蛍光強度は、５の係数内、ときに２の係数内にあり、およびときに対照抗体のものと実験誤差内で識別不可能である。
【００３３】
１種若しくはそれ以上の列挙された要素を「含んでなる」組成物若しくは方法は具体的に列挙されない他要素を包含してよい。例えば、Ａβペプチドを含んでなる組成物は、単離されたＡβペプチドおよびより大きなポリペプチド配列の一成分としてのＡβペプチドの双方を包含する。
【００３４】
ＩＩＩ．能動免疫のためのＡβペプチド
本発明の方法での使用のためのＡβペプチドは、ヒト患者若しくは動物への投与に際して、Ａβの残基１−１１内の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成させることなくＡβの残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成する免疫原性ペプチドである。残基１２と４３との間のエピトープに特異的に結合する抗体は、Ａβの斑に結合することなく可溶性Ａβに特異的に
結合する。これらの型の抗体は、患者若しくはモデルの脳中のＡβ沈着物の斑に特異的に結合することなく、患者若しくはモデルのアミロイドの循環中の可溶性Ａβに特異的に結合し得る。可溶性Ａβへの抗体の特異的結合は、Ａβが斑中に取り込まれることを阻害して、従って、患者での斑の発生を阻害するかまたは処置が投与される前にこうした斑が既に発生している場合には斑の大きさ若しくは頻度のさらなる増大を阻害するかのいずれかである。
【００３５】
好ましくは、投与されたＡβのフラグメントは該フラグメントに応答するＴ細胞を生成させるとみられるエピトープを欠く。一般にＴ細胞エピトープは１０個の隣接するアミノ酸より大きい。従って、Ａβの好ましいフラグメントは大きさ５〜１０若しくは好ましくは７〜１０個の隣接するアミノ酸；すなわち、Ｔ細胞応答を生成させることなく抗体応答を生成させるのに十分な長さのものである。Ｔ細胞エピトープの非存在は、これらのエピトープがフラグメントの免疫原性の活性に必要とされずかつあるサブセットの患者において望ましくない炎症応答を引き起こすかもしれないため、好ましい（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８、３６９７−３７０１；Ｓｅｎｉｏｒ（２００２）Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．１，３）。いくつかの方法において、該フラグメントはＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０、３３−４２若しくは３５−４２以外のフラグメントである。大部分のＴ細胞エピトープはＡβのアミノ酸１４−３０内に存在する。
【００３６】
フラグメントＡβ１５−２４およびその７〜９個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントは、これらのペプチドがＡβペプチドに対する高い免疫原性の応答を一貫して生成させるため、好ましい。これらのフラグメントは、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５を包含する。例えばＡβ１５−２１という呼称は、Ａβの残基１５−２１を包含しかつＡβの他残基を欠くフラグメントを示す。５〜１０および好ましくは７〜１０個の隣接するアミノ酸のＡβ４２若しくは４３のＣ末端フラグメントもまた好ましい。これらのフラグメントは、末端特異的抗体を包含する抗体応答を生成させ得る。これらの抗体は、Ａβ３９−４１に特異的に結合することなくＡβ４２およびＡβ４３に特異的に結合することにおいて有利である。これらの抗体は斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する。
【００３７】
いくつかの方法において、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントは、Ｎ末端領域からの１フラグメントを投与することもまた包含するレジメンで投与される。一般に、こうしたフラグメントは、アミロイド斑に特異的に結合しかつ貪食細胞を介するそれらの消失を誘導する抗体を誘導する。こうした応答はＡβの既存の沈着物を消失させるのにとりわけ有用である。しかしながら、沈着物が一旦消失されれば、可溶性Ａβに対する抗体を誘導するためのＡβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントでのさらなる処置は、ある種の患者において炎症性の副作用の危険を伴わずにＡβのさらなる沈着を予防するために有利である。Ａβの残基１−３で開始しかつＡβの残基７−１１で終了するＮ末端フラグメントがとりわけ好ましい。例示的Ｎ末端フラグメントはＡβ１−５、１−６、１−７、１−１０、３−７、１−３および１−４を包含する。
【００３８】
別の方法で示されない限り、Ａβへの言及は、上で示された天然のヒトアミノ酸配列、ならびにアレル、種および誘導されたバリアントを包含するアナログを包含する。Ａβのアナログは天然のＡβペプチド（例えばＡβ４２）と特異的に結合する抗体を誘導する。Ａβのアナログは、典型的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０までの位置の変化により３０％までのアミノ酸位置で、天然に存在するペプチドと異なる。天然のアミノ酸残基の各欠失若しくは置換は、置換を伴わない１残基の挿入がそうであるよ
うに位置の変化と考えられる。アミノ酸置換はしばしば保存的置換である。
【００３９】
別の方法で示されない限り、Ａβフラグメントへの言及は、上で示された天然のヒトアミノ酸配列のフラグメント、ならびにアレル、種および誘導されたバリアントを包含するアナログを包含する。Ａβフラグメントのアナログは天然のＡβペプチド（例えばＡβ４２）と特異的に結合する抗体を誘導する。Ａβフラグメントのアナログは、典型的には、約３０％までのアミノ酸位置で、天然に存在するペプチドフラグメントと異なる。例えば、Ａβ１５−２１のアナログは、１、２、３若しくは４ １０までの位置の変化により変動しうる。天然のアミノ酸残基の各欠失若しくは置換は、置換を伴わない残基の挿入がそうであるように位置の変化と考えられる。アミノ酸置換はしばしば保存的置換である。
【００４０】
Ａβ若しくはＡβフラグメントのいくつかのアナログは、１、２、５、１０若しくはなお全部の位置で非天然のアミノ酸またはＮ若しくはＣ末端のアミノ酸の改変を包含してもまたよい。例えば、Ａβの位置１および／若しくは７の天然のアスパラギン酸残基はイソアスパラギン酸で置換され得る。非天然のアミノ酸の例は、Ｄ、α、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、ω−Ｎ−メチルアルギニン、β−アラニン、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サイロキシン、γ−アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリンおよびイソアスパラギン酸である。本発明のいくつかの治療薬は全−Ｄペプチド、例えば全−Ｄ Ａβ若しくは全−Ｄ Ａβフラグメント、および全−Ｄペプチドアナログである。フラグメントおよびアナログは、下述されるとおり、トランスジェニック動物モデルにおいて未処置の若しくはプラセボ対照と比較して予防若しくは治療上の有効性についてスクリーニングし得る。
【００４１】
Ａβ、そのフラグメントおよびアナログは固相ペプチド合成若しくは組換え発現により合成し得るか、または天然の供給源から得ることができる。自動ペプチド合成機は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティのような多数の供給元から商業的に入手可能である。組換え発現は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような細菌、酵母、昆虫細胞若しくは哺乳動物細胞中であり得る。組換え発現のための手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク 第２版、１９８９）により記述されている。いくつかの形態のＡβペプチドはまた商業的にも入手可能である（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サニーベール、およびＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．カリフォルニア州ナパ）。
【００４２】
治療薬はまた、例えば一方若しくは一方若しくは双方の側でＡβペプチドに隣接する１個若しくはそれ以上の他のアミノ酸と一緒にＡβペプチドの免疫原性フラグメントを包含するより長いポリペプチドも包含する。例えば、好ましい剤は、異種アミノ酸配列に対するヘルパーＴ細胞応答およびそれによりＡβセグメントに対するＢ細胞応答を誘導する異種アミノ酸配列に融合されたＡβの１セグメントを含んでなる融合タンパク質を包含する。１個若しくはそれ以上の隣接する異種アミノ酸はまた、製造、貯蔵若しくは使用において分解からそれを保護するためにＡβペプチドをキャップするのにも使用し得る。こうしたポリペプチドは、下述されるとおり、動物モデルにおいて未処置若しくはプラセボ対照と比較して予防若しくは治療上の有効性についてスクリーニングし得る。本発明の治療薬はポリリシン配列により隣接されたＡβの免疫原性フラグメントを包含する。該ポリリシン配列は、ＡβのＮ末端、Ｃ末端、若しくはＮおよびＣ末端の双方、またはＡβの免疫原性フラグメントに融合し得る。Ａβペプチド、アナログ、活性フラグメント若しくは他の
ポリペプチドは、会合したすなわち多量体の形態で若しくは解離した形態で投与し得る。治療薬は単量体の免疫原性の剤の多量体もまた包含する。
【００４３】
さらなる一変形において、Ａβの免疫原性フラグメントは免疫原性組成物の一部としてウイルス若しくは細菌により提示され得る。免疫原性ペプチドをコードする核酸はウイルス若しくは細菌のゲノム若しくはエピソーム中に組込まれる。場合によっては、該核酸は、分泌型タンパク質、または該ペプチドが発現されるようにウイルスの外表面タンパク質若しくは細菌の膜貫通タンパク質との融合タンパク質として該免疫原性ペプチドが発現されるような様式で組込まれる。こうした方法で使用されるウイルス若しくは細菌は非病原性であるか若しくは弱毒化されているべきである。適するウイルスは、アデノウイルス、ＨＳＶ、ベネズエラウマ脳炎ウイルスおよび他のアルファウイルス、水疱性口内炎ウイルスおよび他のラブドウイルス、ワクシニアおよび鶏痘を包含する。適する細菌はサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）を包含する。ＨＢＶのＨＢｓＡｇへの免疫原性ペプチドの融合がとりわけ適する。
【００４４】
治療薬はまた、Ａβと有意のアミノ酸配列の類似性を必ずしも有しないがしかしにもかかわらずＡβの模倣物としてはたらきかつ類似の免疫学的応答を誘導するペプチドおよび他の化合物も包含する。例えば、β−プリーツシートを形成するいずれかのペプチドおよびタンパク質を適合性についてスクリーニングし得る。Ａβ若しくは他のアミロイド原性のペプチドに対するモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体もまた使用し得る。こうした抗Ｉｄ抗体は抗原を模倣し、そしてそれに対する免疫応答を生成させる（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｉｔ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、パロアルト、第６版）を参照されたい）。Ａβペプチド以外の剤は、上に列挙されたＡβの好ましいセグメント（例えば１５−２４）の１種若しくはそれ以上に対する免疫原性の応答を誘導するはずである。好ましくは、こうした剤は、Ａβの他のセグメントに向けられることなくこれらのセグメントの１種に特異的に向けられる免疫原性の応答を誘導する。
【００４５】
ペプチド若しくは他の化合物のランダムライブラリーもまた適合性についてスクリーニングし得る。コンビナトリアルライブラリーを、段階的様式で合成し得る多くの型の化合物について製造し得る。こうした化合物は、ポリペプチド、β−ターン模倣物、多糖、リン脂質、ホルモン、プロスタグランジン、ステロイド、芳香族化合物、複素環化合物、ベンゾジアゼピン、オリゴマーのＮ置換グリシンおよびオリゴカルバメートを包含する。化合物の大型のコンビナトリアルライブラリーは、Ａｆｆｙｍａｘ、第ＷＯ ９５／１２６０８号明細書、Ａｆｆｙｍａｘ、第ＷＯ ９３／０６１２１号明細書、コロンビア大学（Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、第ＷＯ ９４／０８０５１号明細書、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ、第ＷＯ ９５／３５５０３号明細書およびＳｃｒｉｐｐｓ、第ＷＯ ９５／３０６４２号明細書（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより組み込まれる）に記述されるエンコード化合成ライブラリー（ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）（ＥＳＬ）法により構築し得る。ペプチドライブラリーはファージディスプレイ法によってもまた生成し得る。例えばＤｅｖｌｉｎ、第ＷＯ ９１／１８９８０号明細書を参照されたい。
【００４６】
コンビナトリアルライブラリーおよび他の化合物を、最初に、Ａβ若しくは他のアミロイド原性ペプチドに対し特異的であることが既知の抗体またはリンパ球（Ｂ若しくはＴ）に特異的に結合するそれらの能力を決定することにより適合性についてスクリーニングする。例えば、最初のスクリーニングは、Ａβ若しくはそのフラグメントに対するいずれかのポリクローナル血清若しくはモノクローナル抗体を用いて実施し得る。化合物をその後、Ａβ内の特定のエピトープ（例えば１５−２４）への特異的結合についてスクリーニングし得る。化合物は、抗体エピトープの特異性をマッピングするために記述された同一の
手順により試験し得る。こうしたスクリーニングにより同定された化合物をその後、Ａβ若しくはそのフラグメントに対する抗体若しくは反応性のリンパ球を誘導する能力についてさらに分析する。例えば、血清の多重希釈溶液を、Ａβ若しくはそのフラグメントでプレコートしたマイクロタイタープレート上で試験し得、そしてＡβ若しくはフラグメントに対し反応性の抗体について試験するため標準的ＥＬＩＳＡを実施し得る。化合物をその後、実施例に記述されるとおり、アミロイド原性疾患に対する素因を作られたトランスジェニック動物で予防および治療上の有効性について試験し得る。こうした動物は、例えば、Ｇａｍｅｓら、上記により記述されたＡＰＰの７１７突然変異をもつマウス、ならびに、ＭｃＣｏｎｌｏｇｕｅら、米国特許第５，６１２，４８６号明細書およびＨｓｉａｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７４、９９（１９９６）；Ｓｔａｕｆｅｎｂｉｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１３２８７−１３２９２（１９９７）；Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ−Ｐｉｅｒｒａｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１３２８７−１３２９２（１９９７）；Ｂｏｒｃｈｅｌｔら、Ｎｅｕｒｏｎ、１９：９３９−９４５（１９９７））により記述されたようなＡＰＰの６７０／６７１スウェーデン型突然変異をもつマウスを包含する。同一のスクリーニングアプローチを、上述されたＡβの他の潜在的剤のアナログおよびＡβのフラグメントを包含するより長いペプチドで使用し得る。
【００４７】
ＩＶ．複合物
免疫応答を誘導するための数種の剤は、ＬＢに対する免疫応答を誘導するための適切なエピトープを含有するがしかし免疫原性であるには小さすぎる。この状況で、ペプチド免疫原を適する担体分子に結合して免疫応答を導き出すのに役立つ複合物を形成し得る。単一の剤を単一の担体に結合し得るか、１種の剤の複数のコピーを１種の担体の複数のコピーに結合しそれらを順に相互に結合し得るか、１種の剤の風数のコピーを１種の担体の単一のコピーに結合し得るか、または、１種の剤の単一のコピーを１種の担体若しくは異なる担体の複数のコピーに結合し得る。適する担体は、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、卵アルブミン、破傷風トキソイド、またはジフテリア、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、コレラ若しくはＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）のような他の病原性細菌からのトキソイド、あるいは弱毒化トキシン誘導体を包含する。Ｔ細胞エピトープもまた適する担体分子である。数種の複合物は、免疫刺激性ポリマー分子（例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリンシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）若しくはグルカン（β−１→２ポリマー））、サイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１αおよびβペプチド、ＩＬ−２、γ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ）、ならびにケモカイン（例えばＭＩＰ１αおよびβ、ならびにＲＡＮＴＥＳ）に本発明の剤を結合することにより形成し得る。免疫原性の剤はまた、Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ、第ＷＯ ９７／１７６１３号および同第ＷＯ ９７／１７６１４号明細書に記述されるところの組織を横断する輸送を高めるペプチドにも結合し得る。免疫原はスペーサーアミノ酸（例えばｇｌｙ−ｇｌｙ）を用いて若しくは用いずに担体に結合してよい。
【００４８】
数種の複合物は本発明の剤を最低１種のＴ細胞エピトープに結合することにより形成し得る。数種のＴ細胞エピトープは無差別（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）である一方、他のＴ細胞エピトープは普遍的（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）である。無差別なＴ細胞エピトープは、多様なＨＬＡ型を表示する多様な被験体におけるＴ細胞免疫の誘導を高めることが可能である。無差別なＴ細胞エピトープと対照的に、普遍的Ｔ細胞エピトープは、異なるＨＬＡ−ＤＲアレルによりコードされる多様なＨＬＡ分子を表示する被験体の大きなパーセント、例えば最低７５％でＴ細胞免疫の誘導を高めることが可能である。
【００４９】
破傷風トキソイド（例えばＰ２およびＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、百日咳トキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
ｔｒａｃｈｏｍｉｔｉｓ）主要外膜タンパク質、ジフテリアトキソイド、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイド周囲Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）トリオースリン酸イソメラーゼ、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＴｒａＴ、およびインフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）のような多数の天然に存在するＴ細胞エピトープが存在する。本発明の免疫原性ペプチドは、Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ Ｆ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３６：７７８−７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚ Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７８：２７−４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒ Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ ７４：１９７−２０３（１９９３）；Ｆａｌｋ Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、３９：２３０−２４２（１９９４）；第ＷＯ ９８／２３６３５号明細書；およびＳｏｕｔｈｗｏｏｄ Ｓ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６０：３３６３−３３７３（１９９８）（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されるＴ細胞エピトープともまた複合させ得る。さらなる例は：
インフルエンザヘマグルチニン：ＨＡ３０７−３１９
マラリアＣＳ：Ｔ３エピトープＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＶＦＮＶ（配列番号４）
Ｂ型肝炎表面抗原：ＨＢｓＡｇ１９−２８ＦＦＬＬＴＲＩＬＴＩ（配列番号５）
熱ショックタンパク質６５：ｈｓｐ６５１５３−１７１ＤＱＳＩＧＤＬＩＡＥＡＭＤＫＶＧＮＥＧ（配列番号６）
カルメット−ゲラン杆菌 ＱＶＨＦＱＰＬＰＰＡＶＶＬＫ（配列番号７）
破傷風トキソイド：ＴＴ８３０−８４４ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）破傷風トキソイド：ＴＴ９４７−９６７ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号９）
ＨＩＶ ｇｐ１２０Ｔ１：ＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡ（配列番号１０）
を包含する。
【００５０】
あるいは、複合物は、汎ＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）のようなＭＨＣクラスＩＩ分子の大きな比率を結合することが可能な最低１種の人工的Ｔ細胞エピトープに本発明の剤を結合することにより形成し得る。ＰＡＤＲＥは米国特許第５，７３６１４１号明細書、第ＷＯ ９５／０７７０７号明細書、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１：７５１−７６１（１９９４）（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されている。好ましいＰＡＤＲＥペプチドはＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）であり、（共通の残基を太字で表す）、ここでＸは好ましくはシクロへキシルアラニン、チロシン若しくはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアラニンが最も好ましい。
【００５１】
免疫原性の剤は化学的架橋により担体に結合し得る。担体に免疫原を結合するための技術は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を使用するジスルフィド結合の形成を包含する（ペプチドがスルフヒドリル基を欠く場合、これをシステイン残基の付加により提供し得る）。これらの試薬はそれら自身と１種のタンパク質上のペプチドシステイン残基との間にジスルフィド結合を、および、リシン上のε−アミノ若しくは他のアミノ酸中の他の遊離のアミノ基によりアミド結合を創製する。多様なこうしたジスルフィド／アミド形成剤がＩｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．６２、１８５（１９８２）により記述されている。他の二官能性カップリング剤はジスルフィド結合よりむしろチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは商業的に入手可能であり、そして６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸および２−ヨード酢酸、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルを包含する。カルボキシル基は、それらをスクシンイミド若しくは１−ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホン酸ナトリウム炎と組合せることにより活性化し得る。
【００５２】
免疫原性は、Ｔｈエピトープと本発明のペプチド免疫原との間のスペーサー残基（例えばＧｌｙ−Ｇｌｙ）の付加により改善し得る。Ｂ細胞エピトープ（すなわちペプチド免疫原）からＴｈエピトープを物理的に分離することに加え、該グリシン残基はペプチド免疫原とのＴｈエピトープの結合により創製されるいかなる人工的二次構造も破壊し得、そしてそれによりＴおよび／若しくはＢ細胞応答の間の妨害を排除し得る。ヘルパーエピトープと抗体を導き出すドメインとの間のコンホメーション上の分離は、従って、提示される免疫原と適切なＴｈおよびＢ細胞との間のより効率的な相互作用を可能にする。
【００５３】
多様なＨＬＡ型を表示する被験体の大きなパーセントにおける、本発明の剤に対するＴ細胞免疫の誘導を高めるために、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う複合物の混合物を製造し得る。該混合物は、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低２種の複合物の混合物、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低３種の複合物の混合物、若しくは多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低４種の複合物の混合物を含有してよい。該混合物はアジュバントとともに投与してよい。
【００５４】
免疫原性ペプチドはまた担体（すなわち異種ペプチド）との融合タンパク質としても発現させ得る。免疫原性ペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシル末端若しくは双方で担体に結合し得る。場合によっては免疫原性ペプチドの複数の反復物（ｒｅｐｅａｔ）が融合タンパク質中に存在し得る。場合によっては免疫原性ペプチドを該ペプチドの例えばＮおよびＣ末端双方で異種ペプチドの複数のコピーに結合し得る。場合によっては、免疫原性ペプチドの複数のコピーを、相互に結合されている異種ペプチドの複数のコピーに結合し得る。数種の担体ペプチドは該担体ペプチドに対するヘルパーＴ細胞応答を誘導するようはたらく。該誘導されたヘルパーＴ細胞が順に、該担体に結合された免疫原性ペプチドに対するＢ細胞応答を誘導する。
【００５５】
本発明での使用に適する融合タンパク質のいくつかの例を下に示す。これらの融合タンパク質のいくつかは、米国特許第５，１９６，５１２号明細書、欧州特許第３７８，８８１号明細書および欧州特許第４２７，３４７号明細書に記述されるような破傷風トキソイドのエピトープに結合されたＡβのセグメントを含んでなる。数種の融合タンパク質は、米国特許第５，７３６，１４２号明細書に記述される最低１種のＰＡＤＲＥペプチドに結合されたＡβのセグメントを含んでなる。数種の異種ペプチドは無差別のＴ細胞エピトープである一方、他の異種ペプチドは普遍的なＴ細胞エピトープである。いくつかの方法において、投与のための剤は、単純に、直線状の配置で異種セグメントに結合されたＡβセグメントをもつ単一の融合タンパク質である。本発明の治療薬は式を使用して表し得る。例えば、いくつかの方法において、該剤は式２ｘ（式中ｘは１〜５からの整数である）により表される融合タンパク質の多量体である。好ましくはｘは１、２若しくは３であり、２が最も好ましい。ｘが２である場合、こうした多量体はＭＡＰ４と称される好ましい配置で結合された４種の融合タンパク質を有する（米国特許第５，２２９，４９０号明細書を参照されたい）。
【００５６】
ＭＡＰ４配置を下に示し、ここで、ペプチド合成をＮ末端およびリシンの側鎖アミンの双方で開始することにより分枝状構造が生じる。回数に依存してリシンが配列に組込まれ、そして分枝することを可能にされ、生じる構造は複数のＮ末端を提示することができる。この例において、分枝したリシンを含有する核上に４種の同一のＮ末端が生じられる。こうした多重性はコグネイトのＢ細胞の応答性を大きく高める。下の例において、ＺはＡβの免疫原性フラグメントを指し、また、Ｚ１−４はＡβの免疫原性フラグメント（１種若しくは複数）を指す。該フラグメントは相互に同一若しくは異なることができる。
【００５７】
【化２】
融合タンパク質の他の例は：
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号１２）
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド９４７−９６７：
Ｚ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号１３）
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号１４）
直線状の配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４＋９４７−９６７：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号１５）
ＰＡＤＲＥペプチド（全部が直線状の配置）、ここでＸは好ましくはシクロへキシルアラニン、チロシン若しくはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアミンが最も好ましい−Ｚ：
ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ−Ｚ（配列番号１６）
Ｚ×３−ＰＡＤＲＥペプチド：
Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１７）
直線状の配置のＺ−卵アルブミン３２３−３３９：
Ｚ−ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（配列番号２０）
を包含する。
【００５８】
融合タンパク質のさらなる例は：
ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｚ（配列番号１８）
Ｚ−ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１９）
ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−Ｚ−Ｚ−Ｚ（配列番号２１）
Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−Ｚ（配列番号２２）
Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ（配列番号２３）
Ｚ−Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ（配列番号２４）
Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−ＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＳＶＦＮＶ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号２５）
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＣＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＣＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ（配列番号２６）
二分枝状樹脂上のＺ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号２７）：フラグメントは相互と同一若しくは異なることができる。
【００５９】
【化３】
を包含する。
【００６０】
同一若しくは類似の担体タンパク質および結合方法を、Ａβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントに対する抗体の生成で使用されるべき免疫原を生成させるために使用し得る。例えば、担体に結合したＡβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントを、Ａβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントに対するモノクローナル抗体の製造で実験動物に投与し得る。
【００６１】
Ｖ．治療薬をコードする核酸
アミロイド沈着物に対する免疫応答は、Ａβペプチド、およびそれらのフラグメント、他のペプチド免疫原、若しくは受動免疫に使用される抗体およびそれらの構成要素の鎖のセグメントをコードする核酸の投与によってもまた誘導し得る。こうした核酸はＤＮＡ若しくはＲＮＡであり得る。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的に、患者の意図された標的細胞中で該ＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーのような調節要素に結合される。免疫応答の誘導に望ましいような血液細胞中での発現のためには、Ｌ若しくはＨ鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサー要素、若しくはＣＭＶ主要前初期プロモーターおよびエンハンサーが発現を指図するのに適する。結合された調節要素およびコーディング配列はしばしばベクターにクローン化される。二本鎖抗体の投与のため、該二本鎖を同一の若しくは別個のベクターにクローン化し得る。本発明の治療薬をコードする核酸はまた最低１種のＴ細胞エピトープもコードし得る。アジュバントの使用および担体の使用に関する本明細書の開示は、必要に応じて変更を加えて、本発明の治療薬をコードする核酸とともにのそれらの使用に当てはまる。
【００６２】
レトロウイルス系（例えばＬａｗｒｉｅとＴｕｍｉｎ、Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３、１０２−１０９（１９９３）を参照されたい）；アデノウイルスベクター（例えばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７、５９１１（１９９３）を参照されたい）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９、１８６７（１９９４）を参照されたい）、ワクシニアウイルスおよび禽痘ウイルスを包含するポックス科からのウイルスベクター、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウイルス由来のもののようなアルファウイルス属からのウイルスベクター（例えばＤｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０、５０８−５１９（１９９６）を参照されたい）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号明細書を参照されたい）、ならびに水疱性口内炎ウイルス（第ＷＯ ９６／３４６２５号明細書を参照されたい）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６、３２５−３３３（１９９５）；Ｗｏｏら、第ＷＯ ９４／１２６２９号明細書およびＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４、２６３０−２６２２（１９９６））のようなラブドウイルスを包含する多数のウイルスベクター系が利用可能である。
【００６３】
免疫原をコードするＤＮＡ若しくはそれを含有するベクターをリポソーム中にパッケージングし得る。適する脂質および関連するアナログは米国特許第５，２０８，０３６号、同第５，２６４，６１８号、同第５，２７９，８３３号および同第５，２８３，１８５号明細書により記述されている。ベクターおよび免疫原をコードするＤＮＡはまた微粒子担体に吸着若しくはそれらと会合し得、それらの例はポリメチルメタクリレートポリマーならびにポリラクチドおよびポリ（ラクチドコグリコリド）を包含する。例えばＭｃＧｅｅ
ら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照されたい。
【００６４】
遺伝子治療ベクター若しくは裸のＤＮＡは、個々の患者への投与により、典型的には全身投与（例えば静脈内、腹腔内、鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下若しくは頭蓋内注入）または局所適用（例えば米国特許第５，３９９，３４６号明細書を参照されたい）によりｉｎ
ｖｉｖｏで送達し得る。こうしたベクターはブピバカインのような促進剤をさらに包含し得る（米国特許第５，５９３，９７０号明細書）。ＤＮＡは遺伝子銃を使用してもまた投与し得る（ＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、上記を参照されたい）。免疫原をコードするＤＮＡを極微の金属ビーズの表面上に沈殿させる。微小発射体はショック波若しくは膨張するヘリウムガスで加速されそして数細胞層の深さまで組織に浸透する。例えば、Ａｇａｃｅｒｕｓ，Ｉｎｃ．、ウィスコンシン州ミドルタウンにより製造されるアクセル［Ａｃｃｅｌ］ＴＭ遺伝子送達装置が適する。あるいは、裸のＤＮＡを、化学的若しくは機械的刺激を用いて皮膚上にＤＮＡを単にスポットすることにより皮膚を通して血流中に進ませる（第ＷＯ ９５／０５８５３号明細書を参照されたい）。
【００６５】
さらなる一変形において、免疫原をコードするベクターを、個々の患者から外植した細胞（例えばリンパ球、骨髄吸引物、組織生検）若しくは普遍的ドナー造血幹細胞のような細胞にｅｘ ｖｉｖｏで送達し得、次いで通常はベクターを取り込んだ細胞についての選択後に患者に該細胞を再植込し得る。
【００６６】
ＶＩ．アジュバント
ペプチドのような本発明の免疫原性の剤はときにアジュバントとともに投与する。アジュバントは、該ペプチドが単独で使用された場合の状況に関して誘導される抗体の力価および／若しくは誘導される抗体の結合親和性を増大させる。多様なアジュバントをＡβの免疫原性フラグメントとともに使用して免疫応答を導き出し得る。好ましいアジュバントは、免疫原に対する固有の応答の質的形態に影響を及ぼす免疫原中のコンホメーション変化を引き起こすことなく該応答を増強する。好ましいアジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＴＭ）（英国特許第２２２０２１１号明細書（ＲＩＢＩ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．、モンタナ州ハミルトン、現在Ｃｏｒｉｘａの一部）を参照されたい）を包含する。スティミュロン［Ｓｔｉｍｕｌｏｎ］ＴＭＱＳ−２１は南米で見出されるシャボンノキ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）樹の樹皮から単離されたトリテルペン配糖体すなわちサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌら、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＰｏｗｅｌｌとＮｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９５）中；米国特許第５，０５７，５４０号明細書を参照されたい）、（Ａｑｕｉｌａ ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、マサチューセッツ州フラミンガム）。他のアジュバントは、場合によってはモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６、８６−９１（１９９７）を参照されたい）、プルロニックポリマーおよび殺したミコバクテリアのような免疫刺激剤と組合せの水中油型乳剤（スクアレン若しくはラッカセイ油のような）である。別のアジュバントはＣｐＧである（第ＷＯ ９８／４０１００号明細書）。アジュバントは、有効成分を含む治療的組成物の１成分として投与し得るか、または、治療薬の投与と別個にその前、同時に若しくは後に投与し得る。
【００６７】
アジュバントの好ましい一分類は水酸化アルミニウム塩、リン酸アルミニウム塩、硫酸アルミニウム塩のようなアルミニウム塩（ミョウバン）である。こうしたアジュバントは、ＭＰＬ若しくは３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、ポリグルタミン酸若しくはポリリシンのような多量体若しくは単量体のアミノ酸のような他の特定の免疫刺激剤とともに若しくはそれらを伴わずに使用し得る。別の分類のアジュバントは水中油型乳剤製剤である。こうしたアジュバントは、ムラミルペプチド（例えばＮ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ
−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）ｔｅｒａｍｉｄｅＴＭ）、若しくは他の細菌の細胞壁の成分のような他の特定の免疫刺激剤とともに若しくはそれらを伴わずに使用し得る。水中油型乳剤は、（ａ）モデル１１０Ｙ微小流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、マサチューセッツ州ニュートン）のような微小流動化装置を使用してミクロン以下の粒子に処方した、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％Ｓｐａｎ ８５を含有する（場合によっては多様な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）ＭＦ５９（第ＷＯ ９０／１４８３７号明細書）、（ｂ）ミクロン以下の乳剤に微小流動化したか若しくはより大きな粒子径の乳剤を生成するようにボルテックス攪拌したかのいずれかの、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）よりなる群からの１種若しくはそれ以上の細菌の細胞壁の成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（デトックス［Ｄｅｔｏｘ］ＴＭ）を含有するＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、モンタナ州ハミルトン）を包含する。
【００６８】
好ましいアジュバントの別の分類は、スティミュロン［Ｓｔｉｍｕｌｏｎ］ＴＭ（ＱＳ−２１、Ａｑｕｉｌａ、マサチューセッツ州フラミンガム）のようなサポニンアジュバント、若しくはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸのようなそれから生成される粒子である。他のアジュバントはＲＣ−５２９、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびにフロイントの完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイントの不完全アジュバント（ＩＦＡ）を包含する。他のアジュバントは、インターロイキン（例えばＩＬ−１αおよびβペプチド、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３ならびにＩＬ−１５）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなサイトカイン、ＭＩＰ１αおよびβならびにＲＡＮＴＥＳのようなケモカインを包含する。アジュバントの別の分類は、Ｎ−グリコシルアミド、Ｎ−グリコシル尿素およびＮ−グリコシルカルバメートを包含する糖脂質アナログであり、それらのそれぞれは免疫調節物質若しくはアジュバントとして糖残基中でアミノ酸により置換されている（米国特許第４，８５５，２８３号明細書を参照されたい）。熱ショックタンパク質、例えばＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０もまたアジュバントとして使用しうる。
【００６９】
アジュバントは単一組成物として免疫原とともに投与し得るか、または免疫原の投与前、同時に若しくは後に投与し得る。免疫原およびアジュバントは同一のバイアルに包装かつ供給し得るか、若しくは別個のバイアル中に包装しかつ使用前に混合し得る。免疫原およびアジュバントは、典型的には意図される治療上の応用を示すラベルを付けて包装される。免疫原およびアジュバントが別個に包装される場合、該包装は、典型的には使用前に混合するための説明書を包含する。アジュバントおよび／若しくは担体の選択は、アジュバントを含有する免疫原性の製剤の安定性、投与経路、投与スケジュール、ワクチン接種されている種に対する該アジュバントの有効性に依存し、また、ヒトにおいては、製薬学的に許容できるアジュバントは関係する規制団体によりヒト投与について承認された若しくは承認可能であるものである。例えば、フロイントの完全アジュバントはヒト投与には適しない。ミョウバン、ＭＰＬおよびＱＳ−２１が好ましい。場合によっては２種若しくはそれ以上の異なるアジュバントを同時に使用し得る。好ましい組合せは、ＭＰＬを伴うミョウバン、ＱＳ−２１を伴うミョウバン、ＱＳ−２１を伴うＭＰＬ、ＧＭ−ＣＳＦを伴
うＭＰＬ若しくはＲＣ−５２９、ならびにミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬを一緒にを包含する。また、フロイントの不完全アジュバントは、場合によってはミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬのいずれか、ならびにそれらの全部の組合せとともに使用し得る（Ｃｈａｎｇら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２、１７３−１８６（１９９８））。
【００７０】
ＶＩＩ．抗体の受動的投与
Ａβのフラグメントでの能動免疫は抗体の受動的投与と組合せ得る。受動的投与に使用される抗体は、斑の食作用的消失応答の誘導のためのＡβのＮ末端エピトープに対する抗体であり得るか、または可溶性Ａβを消失させるためのＡβの中央若しくはＣ末端領域に対する抗体であり得る。いくつかの方法において、Ｎ末端領域抗体に対する抗体を用いる受動的投与を最初に実施して既存のアミロイド沈着物を消失させる。その後、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントを投与して、可溶性Ａβからのアミロイド沈着物のさらなる沈着を予防する。他の方法において、Ａβの中央若しくはＣ末端部分に対するフラグメントを用いる能動的投与を最初に実施して、可溶性Ａβを消失させる抗体を生成させる。その後、血中の抗体のレベルが少なくなり始める場合に、Ａβの中央若しくはＣ末端エピトープに特異的に結合する抗体の受動的投与により付加的な用量を供給する。
【００７１】
受動的投与での使用に適する抗体は、引用することにより組み込まれる第ＷＯ ００／７２８８０号および同第ＷＯ ０２／４６２３７号明細書に記述されている。ＡβのＮ末端エピトープに特異的に結合する好ましい抗体は、Ａβの残基１−３で開始しかつ残基７−１１で終了する１エピトープに結合する。いくつかの好ましい抗体はアミノ酸１−３、１−４、１−５、１−６、１−７若しくは３−７内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの好ましい抗体はＡβの残基１−３で開始しかつ残基７−１１で終了する１エピトープに特異的に結合する。こうした抗体は、典型的にはアミロイド沈着物に特異的に結合するが、しかし可溶性Ａβに結合してもしなくてもよい。ＡβのＣ末端エピトープに特異的に結合するいくつかの好ましい抗体は、天然に存在する短い形態のＡβ（すなわちＡβ３９、４０若しくは４１）に特異的に結合することなく天然に存在する長い形態のＡβ（すなわちＡβ４２およびＡβ４３に特異的に結合する。のＣ末端および中央のエピトープに対する抗体は、典型的には、アミロイド沈着物への特異的結合を伴わずに可溶性物（ｓｏｌｕｂｌｅ）に特異的に結合する。抗体が例えばＡβ１−５のような指定された残基内の１エピトープに特異的に結合すると言われる場合、意味しているものは、該抗体が該指定される残基（すなわちこの一例においてＡβ１−５）を含有するポリペプチドに特異的に結合することである。こうした抗体はＡβ１−５内のすべての残基に必ずしも接触しない。また、Ａβ１−５内のすべての単一アミノ酸置換若しくは欠失も結合親和性に必ずしも有意に影響を及ぼさない。ある抗体のエピトープ特異性は例えば第ＷＯ ００／７２８８０号明細書により記述されるとおり決定し得る。
【００７２】
抗体はポリクローン性若しくはモノクローン性であり得る。ポリクローナル血清は、典型的に、Ａβの長さに沿っていくつかのエピトープに特異的に結合する抗体の混合した集団を含有する。しかしながら、ポリクローナル血清はＡβ１−１０のようなＡβの特定の一セグメントに特異的であり得る。好ましい抗体は、キメラ、ヒト化（Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）ならびに第ＷＯ ９０／０７８６１号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号明細書およびＷｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号明細書を参照されたい）、若しくはヒト（Ｌｏｎｂｅｒｇら、第ＷＯ９３／１２２２７号明細書（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５
４５，８０６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ １４８、１５４７−１５３３（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｇｙ １４、８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、第ＷＯ ９１／１０７４１号明細書（１９９１））である。異なる結合特異性の数種のマウス抗体がヒト化抗体を作成するための出発原料として利用可能である。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が、食細胞上のＦｃＲＩ受容体に対するヒトアイソタイプの最高の親和性を有するそれのためのＮ末端領域に対する抗体に好ましい。いくつかの抗体は、約１０７、１０８、１０９若しくは１０１０Ｍ−１より大きいかもしくはそれらに等しい結合親和性でＡβに特異的に結合する。
【００７３】
ＶＩＩＩ．処置の影響を受けやすい患者
処置の影響を受けやすい患者は、疾患の危険にさらされているがしかし症状を示さない個体、ならびに現在症状を示している患者を包含する。アルツハイマー病の場合、彼若しくは彼女が十分に長く生きる場合は事実上誰でもアルツハイマー病に罹る危険にさらされている。従って、本方法は、対象患者の危険のいかなる評価に対する必要性も伴わずに一般集団に予防的に投与し得る。本方法は、アルツハイマー病の既知の遺伝的危険を有する個体にとりわけ有用である。こうした個体は、本疾患を経験した親族を有する者、および遺伝的若しくは生化学的マーカーの分析によりその危険が決定される者を包含する。アルツハイマー病に対する危険の遺伝的マーカーは、ＡＰＰ遺伝子中の突然変異、とりわけそれぞれハーディおよびスウェーデン型突然変異と称される位置７１７ならびに位置６７０および６７１の突然変異を包含する（Ｈａｒｄｙ、ＴＩＮＳ、上記を参照されたい）。危険の他のマーカーはプレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２ならびにＡｐｏＥ４中の突然変異、ＡＤの家族歴、抗コレステロール血症若しくはアテローム硬化症である。現在アルツハイマー病に罹っている個体は、特徴的な痴呆、ならびに上述された危険因子の存在から認識され得る。加えて、ＡＤを有する個体を同定するための多数の診断的検査が利用可能である。これらはＣＳＦτおよびＡβ４２のレベルの測定を包含する。上昇したτおよび減少したＡβ４２レベルはＡＤの存在を意味する。アルツハイマー病に罹っている個体はまた、第ＷＯ ００／７２８８０号明細書にて論考されるところのＡＤＲＤＡ基準によっても診断し得る。
【００７４】
無症候性の患者において、処置はいずれの年齢（例えば１０、２０、３０歳）でも開始し得る。通常、しかしながら、患者が４０、５０、６０若しくは７０歳に達するまで処置を開始することは必要でない。処置は、典型的にはある期間にわたる複数の投薬量を伴う。処置は、長期にわたる治療薬（例えばＡβペプチド）に対する抗体または活性化されたＴ細胞（副作用）若しくはＢ細胞応答をアッセイすることによりモニターし得る。応答が下落する場合、追加免疫投薬量を指示する。潜在的なダウン症候群患者の場合、処置は、母親に治療薬を投与することにより出生前に若しくは出生直後に開始し得る。
【００７５】
ＩＸ．処置レジメン
一般に、処置レジメンは、患者にＡβに対する免疫原性の応答を誘導するのに有効な剤、好ましくはＡβの免疫原性フラグメントを投与することを必要とする。予防的応用において、製薬学的組成物若しくは医薬品を、アルツハイマー病に感受性の、そうでなければその危険にさらされている患者に、該危険を排除若しくは低下させるか、重症度を小さくするか、または該疾患の生理学的、生化学的、組織学的および／若しくは行動的症状を包含する疾患、該疾患の発症の間に提示する合併症および中間的な病理学的表現型の発生を遅延させるのに十分な量で投与する。治療的応用においては、剤を、該疾患の発症におけるその合併症および中間的な病理学的表現型を包含する該疾患の症状（生理学的、生化学的、組織学的および／若しくは行動的）を治癒、または少なくとも部分的にその悪化を停止若しくは阻害するのに十分な剤の投与量および頻度を含んでなるレジメンで、こうした疾患が疑われるか若しくは既に罹っている患者に投与する。いくつかの方法において、剤の投与は、特徴的なアルツハイマー病の病状を未だ発症していない患者における筋認識（
ｍｙｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）障害を低下若しくは排除する。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量を治療上若しくは予防上有効な用量と定義する。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量および投薬頻度の組合せを治療上若しくは予防上有効なレジメンと定義する。予防的および治療的双方のレジメンにおいて、剤は通常、十分な免疫応答が達成されるまでいくつかの投薬量で投与される。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な投薬量および投与頻度を治療上若しくは予防上有効なレジメンと定義する。典型的には、患者の免疫応答をモニターし、そして免疫応答が弱まり始める場合に反復した投薬量を与える。免疫応答は、患者の血液中のＡＢに対する抗体を検出すること、脳中のＡＢ若しくは斑のレベル、またはＭＭＳＥならびにＡＤＡＳ（アルツハイマー病の状態および機能を伴う患者を評価するための包括的尺度である）のような精神測定的尺度による症状を検出することにより、モニターし得る。
【００７６】
上述された状態の処置のための本発明の剤および組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか若しくは動物であるか、投与される他の医薬品、および処置が予防的であるか若しくは治療的であるかを包含する多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、しかし、トランスジェニック哺乳動物を包含する非ヒト哺乳動物もまた処置し得る。処置投薬量は安全性および有効性を至適化するように滴定される必要がある。免疫原の量はアジュバントもまた投与されるかどうかに依存し、より高い投薬量がアジュバントの非存在下で必要とされる。投与のための免疫原の量は、ときに、患者あたり１〜５００μｇから、およびより通常はヒト投与について注入あたり５〜５００μｇから変動する。ときに注入あたり１〜２ｍｇというより高用量を使用する。典型的には、最低１０、２０、５０若しくは１００μｇを各ヒト注入に使用する。免疫原の量は全体としての免疫原の量に対する免疫原内の免疫原性のエピトープの質量比にもまた依存する。典型的には、１０−３ないし１０−５マイクロモルの免疫原性のエピトープをマイクログラムの免疫原に使用する。注入のタイミングは１日１回から年１回まで、１０年に１回まで大きく変動し得る。免疫原の１投薬量を与えるいずれの所定の日にも、投薬量は、アジュバントもまた投与される場合に１μｇ／患者より大きくかつ通常は１０μｇ／患者より大きく、また、アジュバントの非存在下で１０μｇ／患者より大きくかつ通常は１００μｇ／患者より大きい。典型的なレジメンは１回の免疫化、次いで６週間隔のような時間間隔での追加免疫注入よりなる。別のレジメンは１回の免疫化、次いで１、２および１２か月後の追加免疫注入よりなる。別のレジメンは生涯２か月ごとに１注入を必要とする。あるいは、追加免疫注入は免疫応答のモニタリングにより示されるとおり不規則であり得る。
【００７７】
免疫原をコードする核酸の用量は、患者あたり約１０ｎｇから１ｇまで、１００ｎｇないし１００ｍｇ、１μｇないし１０ｍｇ若しくは３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲にわたる。感染性ウイルスベクターの用量は、投与あたり１０〜１００個若しくはそれ以上のビリオンから変動する。
【００７８】
（併用療法における）抗体での受動免疫のためには、投薬量は約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇまで、およびより通常は０．０１ないし５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲にわたる。例えば、投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、あるいは言い換えれば７０ｋｇの患者について７０ｍｇ若しくは７００ｍｇ、または７０〜７００ｍｇの範囲内であり得る。例示的処置レジメンは、２週間ごとあたり１回若しくは月１回若しくは３ないし６か月ごとに１回の投与を必要とする。いくつかの方法において、異なる結合特異性をもつ２種若しくはそれ以上のモノクローナル抗体を同時に投与し、この場合、投与される各抗体の投薬量は指示される範囲内にある。抗体は通常複数の機会に投与する。単一投薬量間の間隔は週、月若しくは年であり得る。間隔はまた、患者でのＡβに対する抗体の血液レベルを測定することにより示されるように不規則でもあり得る。いくつかの方法において、投薬量は１〜１０００μｇ／ｍｌ、
およびいくつかの方法においては２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調節する。あるいは、抗体は徐放性製剤として投与し得、この場合、より少なく頻繁な投与が必要とされる。投薬量および頻度は患者での該抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、次いでヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体である。投薬量および投与頻度は、該処置が予防的であるか若しくは治療的であるかに依存して変動し得る。予防的応用においては比較的低投薬量を長期間にわたり比較的頻繁でない間隔で投与する。若干の患者は彼らの生涯の残りの間処置を受領し続ける。治療的応用においては、疾患の進行が低下若しくは停止されるまで、および好ましくは患者が疾患の症状の部分的若しくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高投薬量がときに必要とされる。その後、患者に予防的レジメンを投与し得る。
【００７９】
免疫応答を誘導するための剤は、予防的および／若しくは治療的処置のために非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内若しくは筋肉内の手段により投与し得る。免疫原性の剤の最も典型的な投与経路は皮下であるとは言え、他の経路が等しく有効であり得る。次に最も一般的な経路は筋肉内注入である。この型の注入は腕若しくは脚の筋肉で最も典型的に実施される。いくつかの方法において、剤は、沈着物が蓄積している特定の組織に直接注入される（例えば頭蓋内注入）。筋肉内注入若しくは静脈内注入が抗体の投与に好ましい（併用療法において）。いくつかの方法においては特定の治療的抗体を頭蓋中に直接注入する。いくつかの方法においては、抗体を徐放性組成物若しくはメディパッド［Ｍｅｄｉｐａｄ］ＴＭ装置のような装置として投与する。
【００８０】
本発明の剤はしばしば有効な治療薬、すなわち、および多様な他の製薬学的に許容できる成分を含んでなる製薬学的組成物として投与される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン、１９８０）を参照されたい。好ましい形態は意図される投与様式および治療的応用に依存する。該組成物は所望の製剤に依存して、動物若しくはヒト投与のための製薬学的組成物を処方するために一般に使用されるベヒクルと定義される製薬学的に許容できる非毒性の担体若しくは希釈剤もまた包含し得る。希釈剤は組合せの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択する。こうした希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理的食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液およびハンクス液である。加えて、製薬学的組成物若しくは製剤は、他の担体、補助物質若しくは非毒性の非治療的非免疫原性安定剤などもまた包含してよい。
【００８１】
製薬学的組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（ラテックス官能性化セファロース（ＴＭ）、アガロース、セルロースなどのような）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマーならびに脂質凝集物（油滴若しくはリポソームのような）のような大型のゆっくりと代謝される巨大分子もまた包含し得る。加えて、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）として機能し得る。
【００８２】
非経口投与のため、本発明の剤は、水、油、生理的食塩水、グリセロール若しくはエタノールのような無菌の液体であり得る製薬学的担体を含む生理学的に許容できる希釈剤中の物質の溶液若しくは懸濁剤の注入可能な投薬量として投与し得る。加えて、湿潤剤若しくは乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助的物質が組成物中に存在し得る。製薬学的組成物の他の成分は、石油、動物、植物若しくは合成起源のもの、例えばラッカセイ油、ダイズ油および鉱物油である。一般に、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールのようなグリコールはとりわけ注入可能な溶液に好ましい液体の担体である。抗体は、有効成分の徐放性を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込製剤の形態で投与し得る。例示的一組成物は、ＨＣｌでｐＨ６．０に調節した５０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌよりなる水性緩衝液中で処方された５ｍｇ／ｍＬのモノクローナル抗体を含んでなる。非経口投与のための組成物は典型的には実
質的に無菌、等張であり、そしてＦＤＡ若しくは類似の団体のＧＭＰ条件下で製造される。
【００８３】
典型的には、組成物は、液体の溶液若しくは懸濁剤のいずれかのような注入可能物として製造され；注入前に液体ベヒクル中の溶液若しくは懸濁剤に適する固体の形態もまた製造し得る。該製剤はまた、乳化、あるいはリポソームまたは上で論考されたところの高められたアジュバント効果のためのポリラクチド、ポリグリコリド若しくはコポリマーのような微粒子中に被包化もし得る（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９、１５２７（１９９０）およびＨａｎｅｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８、９７−１１９（１９９７）を参照されたい）。本発明の剤は、有効成分の徐放性若しくは拍動性放出を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込製剤の形態で投与し得る。
【００８４】
他の投与様式に適する付加的な製剤は、経口、鼻内、および肺製剤、坐剤、ならびに経皮適用を包含する。
【００８５】
坐剤については、結合剤および担体は例えばポリアルキレングリコール若しくはトリグリセリドを包含し；こうした坐剤は０．５％ないし１０％、好ましくは１％〜２％の範囲の有効成分を含有する混合物から形成し得る。経口製剤は、製薬学的等級のマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロースおよび炭酸マグネシウムのような賦形剤を包含する。これらの組成物は溶液、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤若しくは散剤の形態をとり、そして１０％〜９５％、好ましくは２５％〜７０％の有効成分を含有する。
【００８６】
局所適用は経皮若しくは皮内送達をもたらし得る。局所投与はコレラトキシン、またはそれ若しくは他の類似の細菌のトキシンの無毒化した誘導体若しくはサブユニットとの剤の共投与により助長し得る（Ｇｌｅｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３９１、８５１（１９９８）を参照されたい）。共投与は、成分を混合物としてまたは化学的架橋若しくは融合タンパク質としての発現により得られる結合した分子として使用することにより達成し得る。
【００８７】
あるいは、経皮送達は皮膚経路を使用して若しくはトランスフェロソーム（ｔｒａｎｓｆｅｒｏｓｏｍｅ）（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５、３５２１−２４（１９９５）；Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３６８、２０１−１５（１９９８））を使用して達成し得る。
【００８８】
Ｘ．モニタリング方法
本発明は、アミロイド原性疾患に罹っているかもしくはそれに感受性の患者におけるＡβペプチドに対する抗体応答の検出方法を提供する。該方法は患者に投与されている処置の経過をモニターするのにとりわけ有用である。該方法を使用して症候性の患者での治療的処置および無症候性の患者での予防的処置の双方をモニターし得る。いくつかの方法は、免疫原性の剤の１投薬量を投与する前に患者における抗体応答の基礎値を測定すること、および処置後の免疫応答についての値とこれを比較することを必要とする。抗体応答の値の有意の増大（すなわち、こうした測定値の平均からの１標準偏差として表される同一サンプルの反復測定における典型的な実験誤差より大きい）は正の処置の転帰（すなわち該剤の投与が免疫応答を達成したか若しくは増強したこと）を知らせる。抗体応答の値が有意に変化しないか若しくは減少する場合は、負の処置の転帰を示す。一般に、免疫原性の剤を用いる処置の最初の１クールを受ける患者は、連続的投薬で抗体応答の増大（最終的にはプラトーに達する）を示すと期待される。剤の投与は一般に抗体応答が増大している間は継続する。プラトーの達成は、処置の投与を中断し得るかまたは投薬量若しくは頻度を低下し得ることの指標である。
【００８９】
他の方法において、抗体応答の対照値（すなわち平均および標準偏差）を対照集団について決定する。典型的には対照集団の個体は前の処置を受領していない。治療薬を投与した後の患者の抗体応答の測定値をその後対照値と比較する。対照値に関して有意の増大（例えば平均から１標準偏差以上大きい）は正の処置の転帰を知らせる。有意の増大の欠如若しくは減少は負の処置の転帰を知らせる。剤の投与は、一般に抗体応答が対照値に関して増大している間は継続する。前のとおり、対照値に関してプラトーの達成は、処置の投与を中断し得るかまたは投薬量若しくは頻度を低下し得ることの指標である。
【００９０】
他の方法において、抗体応答の対照値（例えば平均および標準偏差）を、治療薬での処置を受けかつその抗体応答が処置に応答してプラトーに達した個体の対照集団から決定する。患者での抗体応答の測定値を対照値と比較する。患者で測定されたレベルが対照値と有意に異ならない（例えば１標準偏差より大きくない）場合は処置を中断し得る。患者でのレベルが対照値の有意に下である場合は剤の継続投与が正当化される。患者でのレベルが対照値より下で持続する場合には、処置レジメンの変更、例えば異なるアジュバント、フラグメントの使用若しくは受動的投与への切替えを指示してもよい。
【００９１】
他の方法において、現在処置を受領していないがしかし１クールの以前の処置を受けたことがある患者を、処置の再開が必要とされるかどうかを決定するために抗体応答についてモニターする。該患者での抗体応答の測定値を、１クールの以前の処置後に該患者で以前に達成された抗体応答の値と比較し得る。以前の測定値に関して有意の低下（すなわち同一サンプルの反復測定での典型的な誤差より大きい）は処置を再開し得ることの指標である。あるいは、患者で測定された値を、１クールの処置を受けた後の患者の１集団で測定した対照値（平均および標準偏差）と比較し得る。あるいは、患者での測定値を、疾患の症状を伴わないままである予防的に処置した患者の集団、若しくは疾患の特徴の改善を示す治療的に処置した患者の集団での対照値と比較し得る。これらの場合の全部において、対照レベルに関して有意の低下（すなわち１標準偏差より大きい）は処置を患者で再開すべきであることの指標である。
【００９２】
分析のための組織サンプルは、典型的には患者からの血液、血漿、血清、粘液若しくは脳脊髄液である。サンプルをいずれかの形態のＡβペプチド、典型的にはＡβ４２若しくは免疫化に使用したペプチドに対する免疫応答の指標について分析する。免疫応答はＡβペプチドに特異的に結合する抗体の存在から決定し得る。抗体は、該抗体に特異的に結合するリガンドへの結合アッセイで検出し得る。典型的にはリガンドは固定されている。結合は標識抗イディオタイプ抗体を使用して検出し得る。
【００９３】
能動的および受動的双方の投与を使用する併用レジメンにおいて、類似のアプローチを使用して、第ＷＯ ００／７２８８０号明細書に記述されるところの受動的投与から生じる抗体のレベルをモニターし得る。
【実施例】
【００９４】
材料および方法
Ａβフラグメント。Ａβ１−５、Ａβ３−９、Ａβ５−１１、Ａβ１５−２４および逆配列Ａβ５−１に対応するペプチドを、分枝状のペプチド枠組み（４個のペプチド腕をもつ三重のリシン核（ｔｒｉｐｌｅｔ−ｌｙｓｉｎｅ ｃｏｒｅ））上で卵アルブミン由来の１７アミノ酸のＴ細胞エピトープ（アミノ酸３２３−３２９−ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（配列番号３））に隣接して合成して、Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、５４０９−５４１３により記述されるところの多抗原ペプチドを製造した。ポリクローナル抗体（Ｐａｂ）Ａβ１−４２を生じさせ、そして、Ｂａｒｄ，Ｆ．ら、（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６、９１６−９１９
により以前に記述されたとおり免疫グロブリン画分を単離した。ポリクローナルＰａｂ−ＥＬ１６、Ｐａｂ−ＥＬ１７およびＰａｂ−ＥＬ２０は、それぞれ上述されたところの分枝状枠組みで合成したＡβ１−７、Ａβ１５−２４およびＡβ３−９に対応するペプチドで免疫したＰＤＡＰＰマウスの血清から得た。Ｐａｂ−ＥＬ２６はＡβ（７−１）−４２で免疫したマウスの血清から得た。ペプチドはＡｎａＳｐｅｃ、米国カリフォルニア州サンノゼにより合成された。
【００９５】
免疫化手順。１００μｇのＡβフラグメントをフロイントの完全アジュバント中の腹腔内注入により投与し、次いで２および４週、ならびにその後毎月、フロイントの不完全アジュバント中の１００μｇのペプチドで追加免疫した。
【００９６】
凝集型および可溶性Ａβ１−４２への抗体結合。血清力価（連続希釈により測定した）および凝集した合成Ａβ１−４２へのモノクローナル抗体結合を、Ｓｃｈｅｎｋ Ｄ．ら、（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ４００、１７３−１７７により以前に記述されたとおりＥＬＩＳＡにより実施した。可溶性Ａβ１−４２はジメチルスルホキシド中で超音波処理した合成Ａβ１−４２ペプチドを指す。抗体の連続希釈溶液を５０，０００ｃｐｍの１２５Ｉ−Ａβ１−４２とともに室温で一夜インキュベートした。７５ｍｇ／ｍｌのプロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、スウェーデン・ウプサラ）／２００μｇのウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、米国ペンシルバニア州ウエストグローブ）を含有する５０μｌのスラリーを、希釈した抗体とともに室温で１時間インキュベートし、２回洗浄し、そしてＷａｌｌａｃガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国イリノイ州グローブ）でカウントした。全部の段階は１０ｍＭトリス、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌゼラチンおよび０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、ｐＨ８．０よりなるラジオイムノアッセイ緩衝液中で実施した。
【００９７】
結果
一連のペプチドを、ｉｎ ｖｉｖｏでの効果的な抗体応答を誘発するそれらの能力について比較した。１２ないし１３月齢のＰＤＡＰＰマウスを、３種のＮ末端ペプチドフラグメント（Ａβ１−５、Ａβ３−９若しくはＡβ５−１１）の１種若しくは該ペプチドの内的領域由来のフラグメント（Ａβ１５−２４）で免疫した（図１ａ）。内的ペプチドＡβ１５−２４は、可溶性Ａβに対する高い親和性を表し（Ｓｅｕｂｅｒｔら、（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３５９、３２５−３２７．）、固定されていないＡＤ若しくはＰＤＡＰＰ組織の切片中の斑を認識しない、抗体２６６のエピトープを包含する。従って、このペプチドに向けられたポリクローン性の応答が斑認識が可能な抗体を産生し得たかどうか、若しくは可溶性Ａβ単独との反応性が有効性を提供するのに十分であったかどうかを決定することは興味深かった。これらの研究において、逆配列をもつペプチドＡβ５−１は陰性対照としてはたらいた。ペプチドは卵アルブミン由来の１７アミノ酸のＴ細胞エピトープに隣接して合成し、そして同一の多価配置で提示された（材料および方法を参照されたい）。ペプチドの全部（Ａβ５−１リバースマーを除く）は凝集した合成Ａβ１−４２をＥＬＩＳＡにより認識した血清を生じさせたとは言え、Ａβ５−１１およびＡβ１５−２４はＡβ１−５より有意により高い力価を生じさせた（それぞれｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５）（図１ｂ）。対照的に、Ｎ末端ペプチドに対する血清のみが斑内のＡβを認識することが可能であり；Ａβ１５−２４に対する抗血清は、合成の凝集したペプチドとの強い反応性にもかかわらず斑を結合しなかった（図１ｃ）。可溶性Ａβを捕捉するそれらの能力にもまた血清群間で差異が存在した（図２ａ）。Ａβ１−５若しくはＡβ３−９で免疫したマウスからの血清の３０％未満が可溶性ペプチドを捕捉した（それぞれ２７％および５％）。対照的に、Ａβ５−１１で免疫した動物のおよそ半分からの血清、およびＡβ１５−２４で免疫したものの全部が、可溶性Ａβ１−４２を捕捉した。
【００９８】
Ａβ沈着の程度はＰＤＡＰＰマウスが加齢する際に大きく変動し得るため、群あたり最低３０動物を用いるｉｎ ｖｉｖｏ試験を設計した。有効性データは個々のマウスについて示し、そして対照の平均（１００％に設定した）に関するアミロイド負荷量若しくは神経炎性ジストロフィーのいずれかのパーセントとして表す。３種のＮ末端ペプチドのそれぞれでの免疫化はアミロイド負荷量を有意に低下させた（４６〜６１％、ｐ＜０．００２）（図２ｂ）。さらに、Ａβ３−９およびＡβ５−１１は神経炎性の病状を有意に低下させた（それぞれ３４％および４１％、ｐ＜０．０５）、（図２ｃ）。Ａβ１５−２４での免疫化はアミロイド負荷量若しくは神経炎性の病状のいずれに対する保護も提供しなかった。これらの結果は抗体の有効性に関する１機構としての斑結合を裏付ける。それらはまた、可溶性Ａβの捕捉が神経炎性の病状の低下に必要とされないことも示す。Ａβ３−９に対する抗体応答は強い斑反応性および神経ジストロフィーに対する最高レベルの保護を提供したが、それでもなお可溶性ペプチドの認識について最も弱い能力を表したからである。斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する抗体はまた、より高力価で若しくはより長期間にわたって投与される場合にもこうした活性を有するとみられる。斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する抗体はまた、Ａβの形成および／若しくはさらなる沈着の予防においても有用であり得る。Ａβ１５−２４での免疫化により生成される高力価の抗体は、このフラグメントおよびそのサブフラグメントが本目的上高力価の可溶性抗体を生成させるためにとりわけ有用であることを示す。
【００９９】
前述の発明は理解の明瞭さの目的上詳細に記述したとは言え、付属として付けられる請求の範囲の範囲内である種の改変を実施しうることが明らかであろう。本明細書に引用される全部の刊行物および特許文書は、これにより、それぞれが個々にそのように示されると同一の程度まで全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる。情況から別の方法で明らかでない限り、本発明の各要素、特徴若しくは態様をいかなる他者とも組合せで使用し得る。
【０１００】
以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。
【０１０１】
１．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントは残基１〜１１の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、かつ、該フラグメントはＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０、３３−４２若しくは３５−４２でなく、それにより誘導される抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法。
【０１０２】
２．該フラグメントがＡβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、１．に記載の方法。
【０１０３】
３．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、１．に記載の方法。
【０１０４】
４．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、１．に記載の方法。
【０１０５】
５．該フラグメントがＡβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、１．に記載の方法。
【０１０６】
６．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−
２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、１．に記載の方法。
【０１０７】
７．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、１．に記載の方法。
【０１０８】
８．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントはＡβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択され、そしてそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法。
【０１０９】
９．Ａβ１−１１をもつ１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントを投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１１０】
１０．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントが、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を該フラグメントが誘導する前に投与される、９．に記載の方法。
【０１１１】
１１．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１１２】
１２．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体が、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するフラグメントの前に投与される、１．に記載の方法。
【０１１３】
１３．疾患が認識障害を特徴とする、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１４】
１４．疾患がアルツハイマー病である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１５】
１５．疾患がダウン症候群である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１６】
１６．疾患が軽度の認識障害である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１７】
１７．患者がヒトである、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１８】
１８．患者中で誘導された抗体をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１９】
１９．患者が無症候性である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２０】
２０．患者が無症候性でありかつ該投与することが該患者の症状の悪化を阻害する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２１】
２１．患者が５０歳未満である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２２】
２２．患者がアルツハイマー病に対する感受性を示す遺伝的危険因子を有する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２３】
２３．患者が、投与段階が最初に実施された後５年間、検出可能な症状を発症しない、１９．に記載の方法。
【０１２４】
２４．患者がアルツハイマー病に対する既知の危険因子を有しない、１．〜２１．および２３．のいずれかに記載の方法。
【０１２５】
２５．該レジメンが、複数の日に最低５０マイクログラムのフラグメントの投薬量を投与することを含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２６】
２６．該フラグメントが、該フラグメントにより誘導される抗体のレベルを増大させるアジュバントとともに投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２７】
２７．該フラグメントが、腹腔内、経口、鼻内、皮下、筋肉内、局所若しくは静脈内に投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２８】
２８．該フラグメントが、患者中で発現されて該フラグメントを産生する、該フラグメントをコードするポリヌクレオチドを投与することにより投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２９】
２９．患者の血液中の誘導された抗体のレベルについて患者をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１３０】
３０．該フラグメントが最低３か月の期間にわたり複数の投薬量で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１３１】
３１．投薬量が最低５０マイクログラムである、３０．に記載の方法。
【０１３２】
３２．該フラグメントが担体分子に結合されて複合物を形成する、１．に記載の方法。
【０１３３】
３３．担体が異種ポリペプチドである、３２．のいずれかに記載の方法。
【０１３４】
３４．該フラグメントの複数のコピーが１個の担体分子に結合されて複合物を形成する、３２．に記載の方法。
【０１３５】
３５．該フラグメントの複数のコピーが、相互に結合されている担体分子の複数のコピーに結合されている、３２．に記載の方法。
【０１３６】
３６．異種ポリペプチドがＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）を含んでなる、３３．に記載の方法。
【０１３７】
３７．異種ポリペプチドがアミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）を含んでなる、３３．に記載の方法。
【０１３８】
３８．該ポリペプチドが異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答およびそれにより該フラグメントに対するＢ細胞応答を誘導する、３３．に記載の方法。
【０１３９】
３９．該フラグメント単独を投与することに関して誘導される抗体の力価および／若しくは結合親和性を高めるアジュバントを投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１４０】
４０．アジュバントおよびポリペプチドが組成物として一緒に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４１】
４１．アジュバントがポリペプチドの前に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４２】
４２．アジュバントがポリペプチドの後に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４３】
４３．アジュバントがミョウバンである、３９．に記載の方法。
【０１４４】
４４．アジュバントがＭＰＬである、３９．に記載の方法。
【０１４５】
４５．アジュバントがＱＳ−２１である、３９．に記載の方法。
【０１４６】
４６．アジュバントがフロイントの不完全アジュバントである、３９．に記載の方法。
【０１４７】
４７．該フラグメントの投薬量が１０マイクログラム以上である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１４８】
４８．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントは残基１〜１１、およびフラグメント、３３−４２ Ａβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０若しくは３５−４２の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、それにより該誘導された抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療する、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の治療方法。
【０１４９】
４９．該フラグメントが、Ａβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、４８．に記載の方法。
【０１５０】
５０．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、４８．に記載の方法。
【０１５１】
５１．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、４８．に記載の方法。
【０１５２】
５２．該フラグメントが、Ａβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、４８．に記載の方法。
【０１５３】
５３．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、４８．に記載の方法。
【０１５４】
５４．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、４８．に記載の方法。
【０１５５】
５５．Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択されるＡβのフラグメントの有効なレジメンを投与しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療することを含んでなる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の治療方法。
【０１５６】
５６．Ａβ１−１１をもつ１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントを投与することをさらに含んでなる、５５．に記載の方法。
【０１５７】
５７．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントが、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を該フラグメントが誘導する前に投与される、５６．に記載の方法。
【０１５８】
５８．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を投与することをさらに含んでなる、４８．に記載の方法。
【０１５９】
５９．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体が、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するフラグメントの前に投与される、４８．に記載の方法。
【０１６０】
６０．疾患が認識障害を特徴とする、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６１】
６１．疾患がアルツハイマー病である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６２】
６２．疾患がダウン症候群である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６３】
６３．疾患が軽度の認識障害である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６４】
６４．患者がヒトである、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６５】
６５．患者での誘導される抗体をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６６】
６６．患者が無症候性である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６７】
６７．患者が無症候性でありかつ該投与することが該患者の症状の悪化を阻害する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６８】
６８．患者が５０歳未満である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６９】
６９．患者がアルツハイマー病に対する感受性を示す遺伝的危険因子を有する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７０】
７０．患者が、該投与する段階を最初に実施した後５年間、検出可能な症状を発症しない
、６６．に記載の方法。
【０１７１】
７１．患者がアルツハイマー病に対する既知の危険因子を有しない、１．〜６８．および７０．のいずれかに記載の方法。
【０１７２】
７２．該レジメンが、複数の日に最低５０マイクログラムの該フラグメントの投薬量を投与することを含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７３】
７３．該フラグメントが、該フラグメントにより誘導される抗体のレベルを増大させるアジュバントとともに投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７４】
７４．該フラグメントが、腹腔内、経口、鼻内、皮下、筋肉内、局所若しくは静脈内で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７５】
７５．該フラグメントが、患者中で発現されて該フラグメントを産生する、該フラグメントをコードするポリヌクレオチドを投与することにより投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７６】
７６．患者の血液中の誘導された抗体のレベルについて患者をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７７】
７７．該フラグメントが最低３か月の期間にわたり複数の投薬量で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７８】
７８．投薬量が最低５０マイクログラムである、７７．に記載の方法。
【０１７９】
７９．該フラグメントが担体に結合されて複合物を形成する、５５．に記載の方法。
【０１８０】
８０．担体が異種ポリペプチドである、７９．のいずれかに記載の方法。
【０１８１】
８１．該フラグメントの複数のコピーが担体に結合されて複合物を形成する、７９．に記載の方法。
【０１８２】
８２．該フラグメントの複数のコピーが、相互に結合されている担体の複数のコピーに結合されている、７９．に記載の方法。
【０１８３】
８３．異種ポリペプチドがＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）を含んでなる、８０．に記載の方法。
【０１８４】
８４．異種ポリペプチドがアミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）を含んでなる、８０．に記載の方法。
【０１８５】
８５．該ポリペプチドが異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答およびそれにより該フラグメントに対するＢ細胞応答を誘導する、８０．に記載の方法。
【０１８６】
８６．該フラグメント単独を投与することに関して誘導される抗体の力価および／若しくは結合親和性を高めるアジュバントを投与することをさらに含んでなる、５５．に記載の方法。
【０１８７】
８７．アジュバントおよびポリペプチドが組成物として一緒に投与される、８６．に記載
の方法。
【０１８８】
８８．アジュバントがポリペプチドの前に投与される、８６．に記載の方法。
【０１８９】
８９．アジュバントがポリペプチドの後に投与される、８６．に記載の方法。
【０１９０】
９０．アジュバントがミョウバンである、８６．に記載の方法。
【０１９１】
９１．アジュバントがＭＰＬである、８６．に記載の方法。
【０１９２】
９２．アジュバントがＱＳ−２１である、８６．に記載の方法。
【０１９３】
９３．アジュバントがフロイントの不完全アジュバントである、８６．に記載の方法。
【０１９４】
９４．該フラグメントの投薬量が１０マイクログラム以上である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１９５】
９５．４８．〜５５．のいずれかで定義されるところのＡβのフラグメントおよびアジュバントを含んでなる製薬学的組成物。
【０１９６】
９６．Ａβのフラグメントが残基１〜１１の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、かつ、該フラグメントがＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０若しくは３５−４２でなく、それにより誘導される抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、医薬品の製造における患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療若しくはその予防を遂げるのに有効なＡβのフラグメントの使用。
【０１９７】
９７．該フラグメントがＡβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、９６．に記載の使用。
【０１９８】
９８．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、９６．に記載の使用。
【０１９９】
９９．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、９６．に記載の使用。
【０２００】
１００．該フラグメントがＡβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、９６．に記載の使用。
【０２０１】
１０１．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、９６．に記載の使用。
【０２０２】
１０２．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、９６．に記載の使用。
【技術分野】
【０００１】
関連出願との関係
本出願は、２００３年２月１日出願の米国特許出願第６０／４４４，１５０号明細書（全部の目的上引用することによりそっくりそのまま組込まれる）のＵ．Ｓ．Ｃ．第３５条§１１９（ｅ）の下での利益を主張する出願である。
【０００２】
本発明は免疫学および医学の技術分野に存する。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）は老年痴呆をもたらす進行性疾患である。全般として、非特許文献１；特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照されたい。大まかに言えば、該疾患は２つの範疇、すなわち高齢（６５歳以上）で発生する晩発型および老年期よりかなり以前に、すなわち３５と６０歳との間で発症する早発型に分けられる。双方の疾患型で病状は同一であるが、しかし異常性はより若年齢で開始する症例でより重篤かつ広範囲に及ぶ傾向がある。該疾患は脳中の少なくとも２種の型の病変すなわち老人斑および神経原線維変化を特徴とする。老人斑は、脳組織の切片の微視的分析により見える中央に細胞外アミロイド沈着物を伴う直径１５０μｍまでの無秩序の神経網の領域である。神経原線維変化は、相互に対になった周囲で捻れた２本の細糸よりなる微小管関連τタンパク質の細胞内沈着物である。
【０００４】
該斑の主構成要素はＡβすなわちβ−アミロイドペプチドと命名されたペプチドである。Ａβペプチドはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と命名された前駆体タンパク質の３９〜４３アミノ酸の内的フラグメントである。ＡＰＰタンパク質内の数種の突然変異がアルツハイマー病の存在と関係づけられている。例えば、非特許文献５（バリン７１７からイソロイシン）；非特許文献６（バリン７１７からグリシン）；非特許文献７（バリン７１７からフェニルアラニン）；非特許文献８（リシン５９５−メチオニン５９６からアスパラギン５９５−ロイシン５９６に変わる二重突然変異）を参照されたい。こうした突然変異はＡＰＰのＡβへの増大した若しくは変えられたプロセシング、とりわけ増大した量の長い形態のＡβ（すなわちＡβ１−４２およびＡβ１−４３）へのＡＰＰのプロセシングによりアルツハイマー病を引き起こすと考えられている。プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２のような他の遺伝子中の突然変異は、ＡＰＰのプロセシングに間接的に影響して増大した量の長い形態のＡβを生成させると考えられている（非特許文献９を参照されたい）。これらの観察結果は、Ａβおよびとりわけその長い形態がアルツハイマー病の原因となる要素であることを示す。
【０００５】
β−アミロイドペプチド（Ａβ）由来の免疫原でのＡＤのトランスジェニックマウスモデルの免疫化は、該マウスの脳中のアミロイド斑の形成を阻害かつ／若しくはそれを消失させる抗体応答をもたらす（非特許文献１０；非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３））。受動的に投与したＡβに対する抗体は類似の効果を達成した。ミクログリア細胞および／若しくはマクロファージによる抗体媒介性のＦｃ依存性の食作用が、既存のアミロイド斑の消失の１機構として提案されている（非特許文献１４））。この提案は、ある種の末梢で投与したＡβに対する抗体がトランスジェニックマウスのＣＮＳに入り、アミロイド斑を装飾しかつ斑の消失を誘発するという結果に基づく。また、ｉｎ ｖｉｖｏおよび斑消失活性を測定するためにＰＤＡＰＰ若しくはアルツハイマー病（ＡＤ）脳の切片を使用したｅｘ ｖｉｖｏアッセイで有効であった抗体間で、強い相関が報告された。ミクログリア細胞上のＦｃ受容体がｅｘ ｖｉｖｏアッセイで消失応答を遂げた。しかしながら、抗体の効力はＦｃ相互作用に依存しない機構によってもまたｉｎ ｖｉｖｏ
で得ることができることもまた報告されている（非特許文献１５）。アミロイド斑を認識し得ないＡβの中央部分に向けられた抗体は、可溶性Ａβに結合しかつ斑沈着を低下させることが報告された（非特許文献１６）。この抗体での短期間の処置がアミロイド負荷量に影響することなく対象認識課題での成績を改善することもまた報告されている（非特許文献１７）。
【０００６】
本出願は、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６（これらのそれぞれは全部の目的上引用することによりそっくりそのまま組み込まれる）に関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】Ｈａｒｄｙら、第ＷＯ ９２／１３０６９号明細書
【特許文献２】２０００年５月２６日出願の第ＷＯ ００／７２８８０号明細書
【特許文献３】１９９８年１１月３０日出願の第ＷＯ ９９／２７９４４号明細書
【特許文献４】１９９７年１２月２日出願の米国特許出願第６０／０６７，７４０号明細書
【特許文献５】１９９８年４月７日出願の米国特許出願第６０／０８０，９７０号明細書
【特許文献６】１９９８年１１月３０日出願の米国特許出願第０９／２０１，４３０号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｅｌｋｏｅ、ＴＩＮＳ １６、４０３−４０９（１９９３）
【非特許文献２】Ｓｅｌｋｏｅ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５３、４３８−４４７（１９９４）
【非特許文献３】Ｄｕｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、４７６−４７７（１９９５）
【非特許文献４】Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３、５２３（１９９５）
【非特許文献５】Ｇｏａｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９、７０４）（１９９１）
【非特許文献６】Ｃｈａｒｔｉｅｒ Ｈａｒｌａｎら Ｎａｔｕｒｅ ３５３、８４４（１９９１））
【非特許文献７】Ｍｕｒｒｅｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４、９７（１９９１）
【非特許文献８】Ｍｕｌｌａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１、３４５（１９９２）
【非特許文献９】Ｈａｒｄｙ、ＴＩＮＳ ２０、１５４（１９９７）
【非特許文献１０】Ｓｃｈｅｎｋら、（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ４００、１７３−１７７
【非特許文献１１】Ｊａｎｕｓら、（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８、９７９−９８２
【非特許文献１２】Ｍｏｒｇａｎら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８、９８２−９８５
【非特許文献１３】Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎら、（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５９、４３９−４４７．１−４
【非特許文献１４】Ｂａｒｄら、（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、６、９１６−９１９
【非特許文献１５】Ｂａｃｓｋａｉら、（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２２、７８７３−７８７８
【非特許文献１６】ＤｅＭａｔｔｏｓら、（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８、８８５０−８８５５
【非特許文献１７】Ｄｏｄａｒｔら、（２００２）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、５、４５２−４５７
【発明の概要】
【０００９】
Ｉ．全般
本発明は、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントを使用するアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法、その予防を遂げる方法若しくは治療方法を提供する。こうしたフラグメントは、斑に結合することなく可溶性Ａβに特異的に結合する抗体のポリクローン性の混合物を誘導し得る。該抗体は、可溶性Ａβからの患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害し得、従って該疾患を予防若しくは治療し得る。フラグメントＡβ１５−２４およびその５〜１０個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントが、高力価の抗体を生成させるそれらの能力により好ましい免疫原である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ−Ｃ ＡβのＮ末端フラグメントを用いる免疫化により産生される抗体はアミロイド斑に結合する。図１Ａ。Ａβ１−４２（配列番号１）（卵アルブミン由来のＴ細胞エピトープに隣接して合成した）の多様なドメインを包含するペプチドを使用してＰＤＡＰＰマウスを免疫した。リバースマーＡβ５−１（配列番号２）を陰性対照として使用した。図１Ｂ。凝集したＡβ１−４２に対するＥＬＩＳＡ力価は、Ａβ５−１１およびＡβ１５−２４群でＡβ１−５群でよりも試験の長さにわたって有意により高かった（それぞれ、１：１４，４５７、ｐ＜０．０１および１：１２，２５７、ｐ＜０．０５対１：３，６４７；ＡＮＯＶＡ、次いでｐｏｓｔ ｈｏｃ Ｔｕｋｅｙ検定）。図１Ｃ。未処置のＰＤＡＰＰマウス脳からの未固定クライオスタット切片を、Ａβ５−１、Ａβ３−９、Ａβ５−１１若しくはＡβ１５−２４で免疫したマウスの血清に曝露させた（力価を染色について１：１０００に正規化した）。Ａβ１５−２４に対する抗体はアミロイド斑に結合しなかった。尺度の棒は５００μｍを表す。
【図２】図２Ａ−Ｃ 抗体による可溶性Ａβ１−４２の捕捉は低下したアミロイド負荷量若しくは神経炎の病状を伴わない。図２Ａ。Ａβのフラグメントで免疫したマウスからの血清を、放射標識した可溶性Ａβ１−４２を捕捉するそれらの能力についてラジオイムノアッセイで検査した。Ａβ１５−２４で免疫した全動物からの血清は、Ａβ１−５群の動物の２７％およびＡβ３−９群の３％に比較して、可溶性Ａβ１−４２を捕捉することが可能であった（１血清サンプルは１；１，３５０より高い力価を有し、かつ、正確な力価は測定されなかった）。図２Ｂ−Ｃ。アミロイド負荷量（図２Ｂ）および神経炎の病状（図２Ｃ）を、盲検化した顕微鏡使用者により画像解析で評価した。値はＡβ５−１群（陰性対照のリバースマーペプチド）の平均のパーセントとして表す。Ａβ５−１１群は他の群と離れた場所で（ａｔ ａ ｓｅｐａｒａｔｅ ｓｉｔｔｉｎｇ）、しかし内的参照としての同一の陰性対照群（第二のＡβ５−１リバースマーの組、左側）とともに評価した。アミロイド負荷量はＡβ１−５、Ａβ３−９およびＡβ５−１１群で有意に低下された（ｐ＜０．００１。棒は中央値を、また、水平の点線は対照値を表す。神経炎性の負荷はＡβ３−９およびＡβ５−１１群で有意に低下された（ｐ＜０．０５）。いずれのエンドポイントもＡβ１５−２４群での免疫化により有意に変えられなかった。統計学的解析は平方根変換を用いて（ノンパラメトリック分布を正規化するため）実施し、そしてＡＮＯＶＡで解析した。その後、複数の群Ａβ１−５、Ａβ３−９、Ａβ１５−２４群をそれらのＡβ５−１対照と比較するためＤｕｎｎｅｔｔ検定を、また、Ａβ５−１１群についてその対応するＡβ５−１リバースマー対照と比較するためＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙを使用した。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
ＩＩ．定義
アミノ酸置換を保存的若しくは非保存的と分類する目的上、アミノ酸を後に続くとおりグループ分けする。すなわち、群Ｉ（疎水性側鎖）：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖ
ａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；群ＩＩ（中性の親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；群ＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；群ＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；群Ｖ（鎖の方向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および群ＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は同一分類中のアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換はこれらの分類の１つの１メンバーを別の分類の１メンバーと交換することを構成する。
【００１２】
「全Ｄ」という用語は、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上および１００％のＤ−配置のアミノ酸を有するペプチドを指す。
【００１３】
「剤」という用語は薬理学的活性を有する若しくは有するとみられる化合物を記述するのに使用する。剤は、既知の薬物である化合物、薬理学的活性が同定されているがしかしさらなる治療評価を受けている化合物、ならびに薬理学的活性についてスクリーニングされるべきである集合物およびライブラリーのメンバーである化合物を包含する。
【００１４】
本発明の治療薬は、典型的には、望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これは、ある剤が、典型的には最低約５０％ｗ／ｗ（重量／重量）純度である、ならびに、妨害するタンパク質および汚染物質を実質的に含まないことを意味している。ときに、該剤は、最低約８０％ｗ／ｗ、およびより好ましくは最低９０若しくは約９５％ｗ／ｗ純度である。しかしながら、慣習的タンパク質精製技術を使用して、最低９９％ｗ／ｗの均質なペプチドを得ることができる。本発明の治療薬は、アミロイド沈着物と関連する疾患を予防しうるか、その予防を遂げうるか、若しくはそれを治療しうる。
【００１５】
２種の実体の間の特異的結合は、該実体が、無関係の抗原若しくは異なる抗原のような対照に対するいずれの実体の親和性よりも最低１０、１００若しくは１００倍より大きい相互に対する相互親和性を有することを意味している。相互に対する該２種の実体の相互親和性は、通常最低１０７、１０８、１０９Ｍ−１若しくは１０１０Ｍ−１である。１０８Ｍ−１より大きい親和性が好ましい。Ａβ内の１エピトープに対するポリクローナル抗体の特異的結合は、該ポリクローナル抗体集団の抗体がＡβの他のエピトープに結合することなくＡβの１エピトープに特異的に結合することを意味している。
【００１６】
「抗体」若しくは「免疫グロブリン」という用語は完全な（ｉｎｔａｃｔ）抗体およびそれらの結合フラグメントを包含するのに使用する。典型的には、フラグメントは、分離したＨ鎖、Ｌ鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃおよびＦｖを包含する抗原フラグメントへの特異的結合に関して、それらが由来した完全な抗体と競合する。フラグメントは組換えＤＮＡ技術、または完全な免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的分離により製造する。「抗体」という用語は、他のタンパク質を伴う融合タンパク質に化学的に結合されているか若しくは融合タンパク質として発現される１種若しくはそれ以上の免疫グロブリン鎖もまた包含する。「抗体」という用語は二特異性抗体もまた包含する。二特異性若しくは二機能性抗体は、２種の異なるＨ／Ｌ鎖対および２種の異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合若しくはＦａｂ’フラグメントの結合を包含する多様な方法により製造し得る。例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉとＬａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【００１７】
β−アミロイドペプチド若しくはＡ４ペプチドとしてもまた知られるＡβ（米国特許第４，６６６，８２９号明細書；ＧｌｅｎｎｅｒとＷｏｎｇ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１２０、１１３１（１９８４）を参照されたい）は、アルツハイマー病の特徴的な斑の主成分である３９〜４３アミノ酸のペプチドである。Ａβ
は数種の天然に存在する形態を有する。Ａβの天然のヒト形態はＡβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３と称される。これらのペプチドの配列およびＡＰＰ前駆体とのそれらの関係はＨａｒｄｙら、ＴＩＮＳ ２０、１５５−１５８（１９９７）の図１により具体的に説明されている。例えば、Ａβ４２は配列：
【００１８】
【化１】
を有する。
【００１９】
Ａβ４１、Ａβ４０およびＡβ３９は、Ｃ末端からのそれぞれＡｌａ、Ａｌａ−ＩｌｅおよびＡｌｅ−Ｉｌｅ−Ｖａｌの省略によりＡβ４２と異なる。Ａβ４３はＣ末端のトレオニン残基の存在によりＡβ４２と異なる。
【００２０】
ＡＰＰ６９５、ＡＰＰ７５１およびＡＰＰ７７０はそれぞれヒトＡＰＰ遺伝子によりコードされる６９５、７５１および７７０アミノ酸残基長のポリペプチドを指す。Ｋａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３２５、７７３（１９８７）；Ｐｏｎｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、５２５（１９８８）；およびＫｉｔａｇｕｃｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、５３０（１９８８）を参照されたい。ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内のアミノ酸はＡＰＰ７７０アイソフォームの配列に従って番号を割り当てられている。Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３のような用語はそれぞれアミノ酸残基１−３９、１−４０、１−４１、１−４２および１−４３を含有するＡβペプチドを指す。
【００２１】
解離型Ａβ若しくはそのフラグメントは単量体ペプチド単位を意味している。解離型Ａβ若しくはそのフラグメントは一般に可溶性であり、そして自己凝集して可溶性オリゴマーを形成することが可能である。Ａβおよびそのフラグメントのオリゴマーは通常可溶性でありかつ主としてα−へリックス若しくはランダムコイルとして存在する。単量体Ａβの一製造方法は、凍結乾燥したペプチドを希釈していないＤＭＳＯに超音波処理を用いて溶解することである。生じる溶液を遠心分離していかなる不溶性微粒子も除去する。凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントは、単量体単位が非共有結合により一緒に保持されかつ不溶性βシート集成体に会合しているＡβ若しくはその免疫原性フラグメントのオリゴマーを意味している。凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントはまた原線維の多量体（ｆｉｂｒｉｌｌａｒ ｐｏｌｙｍｅｒｓ）も意味している。原線維は通常不溶性である。数種の抗体は、可溶性Ａβ若しくはそのフラグメント、または凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントのいずれかを結合する。数種の抗体は可溶性Ａβ若しくはそのフラグメントおよび凝集型Ａβ若しくはそのフラグメントの双方を結合する。数種の抗体は斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する。
【００２２】
「抗原」は抗体が特異的に結合する実体である。
【００２３】
「エピトープ」若しくは「抗原決定基」という用語は、Ｂおよび／若しくはＴ細胞が応答する抗原上の一部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、隣接するアミノ酸若しくはタンパク質の三次元のフォールディングにより並置される隣接しないアミノ酸の双方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒への曝露に際して典型的に保持される一方、三次元のフォールディングにより形成されるエピトープは典型的には変性溶媒での処理に際して喪失される。エピトープは、独特の空間配置にある典型的には最低３、およびより通常は最低５若しくは８〜１０アミノ酸を包含する。エピトープの空間的
配置の決定方法は、例えばｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴を包含する。例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．６６、Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６）を参照されたい。同一エピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を遮断する一抗体の能力を示す単純なイムノアッセイで同定し得る。Ｔ細胞は、ＣＤ８細胞について約９アミノ酸若しくはＣＤ４細胞について約１３〜１５アミノ酸の連続したエピトープを認識する。エピトープを認識するＴ細胞は、エピトープに応答してプライミングされたＴ細胞による３Ｈ−チミジン取り込みにより測定されるところの抗原依存性の増殖を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（Ｂｕｒｋｅら、Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．、１７０、１１１０−１９（１９９４））、抗原依存性の殺傷（細胞傷害性Ｔリンパ球アッセイ、Ｔｉｇｇｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５６、３９０１−３９１０）若しくはサイトカイン分泌により同定し得る。
【００２４】
ＡβのＮ末端エピトープは残基１−１１を伴うエピトープを意味している。Ｃ末端領域内のエピトープは残基２９−４３内のエピトープを意味し、また、中央領域内のエピトープは残基１２−２８を伴うエピトープを意味している。
【００２５】
「免疫学的」若しくは「免疫」応答という用語は、レシピエント患者におけるアミロイドペプチドに向けられた有益な体液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞若しくはそれらの分泌産物により媒介される）応答の発生である。こうした応答は、免疫原の投与により誘導される能動的応答または抗体の投与若しくはプライミングされたＴ細胞により誘導される受動的応答であり得る。細胞性免疫応答は、抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞および／若しくはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化するためのクラスＩ若しくはクラスＩＩ ＭＨＣ分子とともにのポリペプチドエピトープの提示により導き出される。該応答は、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球若しくは自然免疫の他成分の活性化もまた伴うことがある。細胞媒介性の免疫学的応答の存在は増殖アッセイ（ＣＤ４＋ Ｔ細胞）若しくはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイにより測定し得る（Ｂｕｒｋｅ、上記；Ｔｉｇｇｅｓ、上記を参照されたい）。免疫原の保護若しくは治療効果に対する体液性および細胞性の応答の相対的寄与は、免疫した同系動物から抗体およびＴ細胞を個別に単離すること、ならびに第二の被験体中で保護若しくは治療効果を測定することにより識別し得る。
【００２６】
「免疫原性の剤」若しくは「免疫原」は、場合によってはアジュバントともにの哺乳動物への投与に際してそれ自身に対する免疫学的応答を誘導することが可能である。
【００２７】
「裸のポリヌクレオチド」という用語はコロイド状物質と複合体形成されていないポリヌクレオチドを指す。裸のポリヌクレオチドはときにプラスミドベクター中にクローン化される。
【００２８】
「アジュバント」という用語は、抗原とともに投与される場合に該抗原に対する免疫応答を増強するがしかし単独で投与される場合に該抗原に対する免疫応答を生成しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球動員、Ｂおよび／若しくはＴ細胞の刺激、ならびにマクロファージの刺激を包含するいくつかの機構により免疫応答を増強し得る。
【００２９】
「患者」という用語は、予防的若しくは治療的いずれかの処置を受領するヒトおよび他の哺乳動物被験体を包含する。
【００３０】
抗体間の競合は、試験中の免疫グロブリンがＡβのような共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにより測定される。多数の型の競合的結合アッセイ、例えば：固相直接若しくは間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接若しくは間接エ
ンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、９：２４２−２５３（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７−１５（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７６：５４６−５５２（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：７７−８２（１９９０））が既知である。典型的には、こうしたアッセイは固体表面に結合された精製された抗原若しくはこれらのいずれかをもつ細胞、未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンの使用を必要とする。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面若しくは細胞に結合された標識の量を測定することにより測定する。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。競合アッセイにより同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同一エピトープに結合する抗体、および、参照抗体により結合されたエピトープに立体障害が起こるように十分近接した隣接エピトープに結合する抗体を包含する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、それは共通抗原への参照抗体の特異的結合を最低５０若しくは７５％阻害することができる。
【００３１】
可溶性Ａβに特異的に結合する抗体は、最低１０７Ｍ−１の親和性で可溶性Ａβに結合する抗体を意味している。数種の抗体は１０８Ｍ−１と１０１１Ｍ−１との間の親和性で可溶性Ａβに結合する。
【００３２】
斑に特異的に結合することなく可溶性Ａβに特異的に結合する抗体は、上述されたところの可溶性Ａβに結合しかつ以前のアルツハイマー病の患者若しくはトランスジェニック動物モデルの屍体からの斑（すなわち凝集型β−プリーツシートの形態のＡβ）に対し最低１０倍および通常は最低１００倍より低い特異的結合親和性を有する抗体を意味している。例えば、こうした抗体は１０９Ｍ−１の親和性で可溶性Ａβに、および１０７Ｍ−１未満の親和性で斑に結合するとみられる。こうした抗体の斑に対する親和性は通常１０７若しくは１０６Ｍ−１未満である。こうした抗体は、付加的に、若しくは、あるいは、該抗体を斑と接触させかつ（実施例の節に記述されるとおり）蛍光標識により結合を評価する場合に、無関係の対照抗体（例えばリバースマー（ｒｅｖｅｒｓｅｍｅｒ）Ａβペプチドに対する抗体若しくはポリクローナル抗体の混合物）に関しての蛍光強度により定義される。斑に結合することなく可溶性Ａβペプチドに結合する抗体の蛍光強度は、５の係数内、ときに２の係数内にあり、およびときに対照抗体のものと実験誤差内で識別不可能である。
【００３３】
１種若しくはそれ以上の列挙された要素を「含んでなる」組成物若しくは方法は具体的に列挙されない他要素を包含してよい。例えば、Ａβペプチドを含んでなる組成物は、単離されたＡβペプチドおよびより大きなポリペプチド配列の一成分としてのＡβペプチドの双方を包含する。
【００３４】
ＩＩＩ．能動免疫のためのＡβペプチド
本発明の方法での使用のためのＡβペプチドは、ヒト患者若しくは動物への投与に際して、Ａβの残基１−１１内の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成させることなくＡβの残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成する免疫原性ペプチドである。残基１２と４３との間のエピトープに特異的に結合する抗体は、Ａβの斑に結合することなく可溶性Ａβに特異的に
結合する。これらの型の抗体は、患者若しくはモデルの脳中のＡβ沈着物の斑に特異的に結合することなく、患者若しくはモデルのアミロイドの循環中の可溶性Ａβに特異的に結合し得る。可溶性Ａβへの抗体の特異的結合は、Ａβが斑中に取り込まれることを阻害して、従って、患者での斑の発生を阻害するかまたは処置が投与される前にこうした斑が既に発生している場合には斑の大きさ若しくは頻度のさらなる増大を阻害するかのいずれかである。
【００３５】
好ましくは、投与されたＡβのフラグメントは該フラグメントに応答するＴ細胞を生成させるとみられるエピトープを欠く。一般にＴ細胞エピトープは１０個の隣接するアミノ酸より大きい。従って、Ａβの好ましいフラグメントは大きさ５〜１０若しくは好ましくは７〜１０個の隣接するアミノ酸；すなわち、Ｔ細胞応答を生成させることなく抗体応答を生成させるのに十分な長さのものである。Ｔ細胞エピトープの非存在は、これらのエピトープがフラグメントの免疫原性の活性に必要とされずかつあるサブセットの患者において望ましくない炎症応答を引き起こすかもしれないため、好ましい（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８、３６９７−３７０１；Ｓｅｎｉｏｒ（２００２）Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．１，３）。いくつかの方法において、該フラグメントはＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０、３３−４２若しくは３５−４２以外のフラグメントである。大部分のＴ細胞エピトープはＡβのアミノ酸１４−３０内に存在する。
【００３６】
フラグメントＡβ１５−２４およびその７〜９個の隣接するアミノ酸のサブフラグメントは、これらのペプチドがＡβペプチドに対する高い免疫原性の応答を一貫して生成させるため、好ましい。これらのフラグメントは、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５を包含する。例えばＡβ１５−２１という呼称は、Ａβの残基１５−２１を包含しかつＡβの他残基を欠くフラグメントを示す。５〜１０および好ましくは７〜１０個の隣接するアミノ酸のＡβ４２若しくは４３のＣ末端フラグメントもまた好ましい。これらのフラグメントは、末端特異的抗体を包含する抗体応答を生成させ得る。これらの抗体は、Ａβ３９−４１に特異的に結合することなくＡβ４２およびＡβ４３に特異的に結合することにおいて有利である。これらの抗体は斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する。
【００３７】
いくつかの方法において、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントは、Ｎ末端領域からの１フラグメントを投与することもまた包含するレジメンで投与される。一般に、こうしたフラグメントは、アミロイド斑に特異的に結合しかつ貪食細胞を介するそれらの消失を誘導する抗体を誘導する。こうした応答はＡβの既存の沈着物を消失させるのにとりわけ有用である。しかしながら、沈着物が一旦消失されれば、可溶性Ａβに対する抗体を誘導するためのＡβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントでのさらなる処置は、ある種の患者において炎症性の副作用の危険を伴わずにＡβのさらなる沈着を予防するために有利である。Ａβの残基１−３で開始しかつＡβの残基７−１１で終了するＮ末端フラグメントがとりわけ好ましい。例示的Ｎ末端フラグメントはＡβ１−５、１−６、１−７、１−１０、３−７、１−３および１−４を包含する。
【００３８】
別の方法で示されない限り、Ａβへの言及は、上で示された天然のヒトアミノ酸配列、ならびにアレル、種および誘導されたバリアントを包含するアナログを包含する。Ａβのアナログは天然のＡβペプチド（例えばＡβ４２）と特異的に結合する抗体を誘導する。Ａβのアナログは、典型的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０までの位置の変化により３０％までのアミノ酸位置で、天然に存在するペプチドと異なる。天然のアミノ酸残基の各欠失若しくは置換は、置換を伴わない１残基の挿入がそうであるよ
うに位置の変化と考えられる。アミノ酸置換はしばしば保存的置換である。
【００３９】
別の方法で示されない限り、Ａβフラグメントへの言及は、上で示された天然のヒトアミノ酸配列のフラグメント、ならびにアレル、種および誘導されたバリアントを包含するアナログを包含する。Ａβフラグメントのアナログは天然のＡβペプチド（例えばＡβ４２）と特異的に結合する抗体を誘導する。Ａβフラグメントのアナログは、典型的には、約３０％までのアミノ酸位置で、天然に存在するペプチドフラグメントと異なる。例えば、Ａβ１５−２１のアナログは、１、２、３若しくは４ １０までの位置の変化により変動しうる。天然のアミノ酸残基の各欠失若しくは置換は、置換を伴わない残基の挿入がそうであるように位置の変化と考えられる。アミノ酸置換はしばしば保存的置換である。
【００４０】
Ａβ若しくはＡβフラグメントのいくつかのアナログは、１、２、５、１０若しくはなお全部の位置で非天然のアミノ酸またはＮ若しくはＣ末端のアミノ酸の改変を包含してもまたよい。例えば、Ａβの位置１および／若しくは７の天然のアスパラギン酸残基はイソアスパラギン酸で置換され得る。非天然のアミノ酸の例は、Ｄ、α、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、ω−Ｎ−メチルアルギニン、β−アラニン、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サイロキシン、γ−アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリンおよびイソアスパラギン酸である。本発明のいくつかの治療薬は全−Ｄペプチド、例えば全−Ｄ Ａβ若しくは全−Ｄ Ａβフラグメント、および全−Ｄペプチドアナログである。フラグメントおよびアナログは、下述されるとおり、トランスジェニック動物モデルにおいて未処置の若しくはプラセボ対照と比較して予防若しくは治療上の有効性についてスクリーニングし得る。
【００４１】
Ａβ、そのフラグメントおよびアナログは固相ペプチド合成若しくは組換え発現により合成し得るか、または天然の供給源から得ることができる。自動ペプチド合成機は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティのような多数の供給元から商業的に入手可能である。組換え発現は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような細菌、酵母、昆虫細胞若しくは哺乳動物細胞中であり得る。組換え発現のための手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク 第２版、１９８９）により記述されている。いくつかの形態のＡβペプチドはまた商業的にも入手可能である（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サニーベール、およびＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．カリフォルニア州ナパ）。
【００４２】
治療薬はまた、例えば一方若しくは一方若しくは双方の側でＡβペプチドに隣接する１個若しくはそれ以上の他のアミノ酸と一緒にＡβペプチドの免疫原性フラグメントを包含するより長いポリペプチドも包含する。例えば、好ましい剤は、異種アミノ酸配列に対するヘルパーＴ細胞応答およびそれによりＡβセグメントに対するＢ細胞応答を誘導する異種アミノ酸配列に融合されたＡβの１セグメントを含んでなる融合タンパク質を包含する。１個若しくはそれ以上の隣接する異種アミノ酸はまた、製造、貯蔵若しくは使用において分解からそれを保護するためにＡβペプチドをキャップするのにも使用し得る。こうしたポリペプチドは、下述されるとおり、動物モデルにおいて未処置若しくはプラセボ対照と比較して予防若しくは治療上の有効性についてスクリーニングし得る。本発明の治療薬はポリリシン配列により隣接されたＡβの免疫原性フラグメントを包含する。該ポリリシン配列は、ＡβのＮ末端、Ｃ末端、若しくはＮおよびＣ末端の双方、またはＡβの免疫原性フラグメントに融合し得る。Ａβペプチド、アナログ、活性フラグメント若しくは他の
ポリペプチドは、会合したすなわち多量体の形態で若しくは解離した形態で投与し得る。治療薬は単量体の免疫原性の剤の多量体もまた包含する。
【００４３】
さらなる一変形において、Ａβの免疫原性フラグメントは免疫原性組成物の一部としてウイルス若しくは細菌により提示され得る。免疫原性ペプチドをコードする核酸はウイルス若しくは細菌のゲノム若しくはエピソーム中に組込まれる。場合によっては、該核酸は、分泌型タンパク質、または該ペプチドが発現されるようにウイルスの外表面タンパク質若しくは細菌の膜貫通タンパク質との融合タンパク質として該免疫原性ペプチドが発現されるような様式で組込まれる。こうした方法で使用されるウイルス若しくは細菌は非病原性であるか若しくは弱毒化されているべきである。適するウイルスは、アデノウイルス、ＨＳＶ、ベネズエラウマ脳炎ウイルスおよび他のアルファウイルス、水疱性口内炎ウイルスおよび他のラブドウイルス、ワクシニアおよび鶏痘を包含する。適する細菌はサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）を包含する。ＨＢＶのＨＢｓＡｇへの免疫原性ペプチドの融合がとりわけ適する。
【００４４】
治療薬はまた、Ａβと有意のアミノ酸配列の類似性を必ずしも有しないがしかしにもかかわらずＡβの模倣物としてはたらきかつ類似の免疫学的応答を誘導するペプチドおよび他の化合物も包含する。例えば、β−プリーツシートを形成するいずれかのペプチドおよびタンパク質を適合性についてスクリーニングし得る。Ａβ若しくは他のアミロイド原性のペプチドに対するモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体もまた使用し得る。こうした抗Ｉｄ抗体は抗原を模倣し、そしてそれに対する免疫応答を生成させる（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｉｔ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、パロアルト、第６版）を参照されたい）。Ａβペプチド以外の剤は、上に列挙されたＡβの好ましいセグメント（例えば１５−２４）の１種若しくはそれ以上に対する免疫原性の応答を誘導するはずである。好ましくは、こうした剤は、Ａβの他のセグメントに向けられることなくこれらのセグメントの１種に特異的に向けられる免疫原性の応答を誘導する。
【００４５】
ペプチド若しくは他の化合物のランダムライブラリーもまた適合性についてスクリーニングし得る。コンビナトリアルライブラリーを、段階的様式で合成し得る多くの型の化合物について製造し得る。こうした化合物は、ポリペプチド、β−ターン模倣物、多糖、リン脂質、ホルモン、プロスタグランジン、ステロイド、芳香族化合物、複素環化合物、ベンゾジアゼピン、オリゴマーのＮ置換グリシンおよびオリゴカルバメートを包含する。化合物の大型のコンビナトリアルライブラリーは、Ａｆｆｙｍａｘ、第ＷＯ ９５／１２６０８号明細書、Ａｆｆｙｍａｘ、第ＷＯ ９３／０６１２１号明細書、コロンビア大学（Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、第ＷＯ ９４／０８０５１号明細書、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ、第ＷＯ ９５／３５５０３号明細書およびＳｃｒｉｐｐｓ、第ＷＯ ９５／３０６４２号明細書（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより組み込まれる）に記述されるエンコード化合成ライブラリー（ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）（ＥＳＬ）法により構築し得る。ペプチドライブラリーはファージディスプレイ法によってもまた生成し得る。例えばＤｅｖｌｉｎ、第ＷＯ ９１／１８９８０号明細書を参照されたい。
【００４６】
コンビナトリアルライブラリーおよび他の化合物を、最初に、Ａβ若しくは他のアミロイド原性ペプチドに対し特異的であることが既知の抗体またはリンパ球（Ｂ若しくはＴ）に特異的に結合するそれらの能力を決定することにより適合性についてスクリーニングする。例えば、最初のスクリーニングは、Ａβ若しくはそのフラグメントに対するいずれかのポリクローナル血清若しくはモノクローナル抗体を用いて実施し得る。化合物をその後、Ａβ内の特定のエピトープ（例えば１５−２４）への特異的結合についてスクリーニングし得る。化合物は、抗体エピトープの特異性をマッピングするために記述された同一の
手順により試験し得る。こうしたスクリーニングにより同定された化合物をその後、Ａβ若しくはそのフラグメントに対する抗体若しくは反応性のリンパ球を誘導する能力についてさらに分析する。例えば、血清の多重希釈溶液を、Ａβ若しくはそのフラグメントでプレコートしたマイクロタイタープレート上で試験し得、そしてＡβ若しくはフラグメントに対し反応性の抗体について試験するため標準的ＥＬＩＳＡを実施し得る。化合物をその後、実施例に記述されるとおり、アミロイド原性疾患に対する素因を作られたトランスジェニック動物で予防および治療上の有効性について試験し得る。こうした動物は、例えば、Ｇａｍｅｓら、上記により記述されたＡＰＰの７１７突然変異をもつマウス、ならびに、ＭｃＣｏｎｌｏｇｕｅら、米国特許第５，６１２，４８６号明細書およびＨｓｉａｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７４、９９（１９９６）；Ｓｔａｕｆｅｎｂｉｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１３２８７−１３２９２（１９９７）；Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ−Ｐｉｅｒｒａｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１３２８７−１３２９２（１９９７）；Ｂｏｒｃｈｅｌｔら、Ｎｅｕｒｏｎ、１９：９３９−９４５（１９９７））により記述されたようなＡＰＰの６７０／６７１スウェーデン型突然変異をもつマウスを包含する。同一のスクリーニングアプローチを、上述されたＡβの他の潜在的剤のアナログおよびＡβのフラグメントを包含するより長いペプチドで使用し得る。
【００４７】
ＩＶ．複合物
免疫応答を誘導するための数種の剤は、ＬＢに対する免疫応答を誘導するための適切なエピトープを含有するがしかし免疫原性であるには小さすぎる。この状況で、ペプチド免疫原を適する担体分子に結合して免疫応答を導き出すのに役立つ複合物を形成し得る。単一の剤を単一の担体に結合し得るか、１種の剤の複数のコピーを１種の担体の複数のコピーに結合しそれらを順に相互に結合し得るか、１種の剤の風数のコピーを１種の担体の単一のコピーに結合し得るか、または、１種の剤の単一のコピーを１種の担体若しくは異なる担体の複数のコピーに結合し得る。適する担体は、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、卵アルブミン、破傷風トキソイド、またはジフテリア、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、コレラ若しくはＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）のような他の病原性細菌からのトキソイド、あるいは弱毒化トキシン誘導体を包含する。Ｔ細胞エピトープもまた適する担体分子である。数種の複合物は、免疫刺激性ポリマー分子（例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリンシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）若しくはグルカン（β−１→２ポリマー））、サイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１αおよびβペプチド、ＩＬ−２、γ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ）、ならびにケモカイン（例えばＭＩＰ１αおよびβ、ならびにＲＡＮＴＥＳ）に本発明の剤を結合することにより形成し得る。免疫原性の剤はまた、Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ、第ＷＯ ９７／１７６１３号および同第ＷＯ ９７／１７６１４号明細書に記述されるところの組織を横断する輸送を高めるペプチドにも結合し得る。免疫原はスペーサーアミノ酸（例えばｇｌｙ−ｇｌｙ）を用いて若しくは用いずに担体に結合してよい。
【００４８】
数種の複合物は本発明の剤を最低１種のＴ細胞エピトープに結合することにより形成し得る。数種のＴ細胞エピトープは無差別（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）である一方、他のＴ細胞エピトープは普遍的（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）である。無差別なＴ細胞エピトープは、多様なＨＬＡ型を表示する多様な被験体におけるＴ細胞免疫の誘導を高めることが可能である。無差別なＴ細胞エピトープと対照的に、普遍的Ｔ細胞エピトープは、異なるＨＬＡ−ＤＲアレルによりコードされる多様なＨＬＡ分子を表示する被験体の大きなパーセント、例えば最低７５％でＴ細胞免疫の誘導を高めることが可能である。
【００４９】
破傷風トキソイド（例えばＰ２およびＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、百日咳トキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
ｔｒａｃｈｏｍｉｔｉｓ）主要外膜タンパク質、ジフテリアトキソイド、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）スポロゾイド周囲Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）トリオースリン酸イソメラーゼ、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＴｒａＴ、およびインフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）のような多数の天然に存在するＴ細胞エピトープが存在する。本発明の免疫原性ペプチドは、Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ Ｆ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３６：７７８−７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚ Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７８：２７−４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒ Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ ７４：１９７−２０３（１９９３）；Ｆａｌｋ Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、３９：２３０−２４２（１９９４）；第ＷＯ ９８／２３６３５号明細書；およびＳｏｕｔｈｗｏｏｄ Ｓ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６０：３３６３−３３７３（１９９８）（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されるＴ細胞エピトープともまた複合させ得る。さらなる例は：
インフルエンザヘマグルチニン：ＨＡ３０７−３１９
マラリアＣＳ：Ｔ３エピトープＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＶＦＮＶ（配列番号４）
Ｂ型肝炎表面抗原：ＨＢｓＡｇ１９−２８ＦＦＬＬＴＲＩＬＴＩ（配列番号５）
熱ショックタンパク質６５：ｈｓｐ６５１５３−１７１ＤＱＳＩＧＤＬＩＡＥＡＭＤＫＶＧＮＥＧ（配列番号６）
カルメット−ゲラン杆菌 ＱＶＨＦＱＰＬＰＰＡＶＶＬＫ（配列番号７）
破傷風トキソイド：ＴＴ８３０−８４４ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）破傷風トキソイド：ＴＴ９４７−９６７ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号９）
ＨＩＶ ｇｐ１２０Ｔ１：ＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡ（配列番号１０）
を包含する。
【００５０】
あるいは、複合物は、汎ＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）のようなＭＨＣクラスＩＩ分子の大きな比率を結合することが可能な最低１種の人工的Ｔ細胞エピトープに本発明の剤を結合することにより形成し得る。ＰＡＤＲＥは米国特許第５，７３６１４１号明細書、第ＷＯ ９５／０７７０７号明細書、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１：７５１−７６１（１９９４）（それらのそれぞれは全部の目的上引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されている。好ましいＰＡＤＲＥペプチドはＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）であり、（共通の残基を太字で表す）、ここでＸは好ましくはシクロへキシルアラニン、チロシン若しくはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアラニンが最も好ましい。
【００５１】
免疫原性の剤は化学的架橋により担体に結合し得る。担体に免疫原を結合するための技術は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を使用するジスルフィド結合の形成を包含する（ペプチドがスルフヒドリル基を欠く場合、これをシステイン残基の付加により提供し得る）。これらの試薬はそれら自身と１種のタンパク質上のペプチドシステイン残基との間にジスルフィド結合を、および、リシン上のε−アミノ若しくは他のアミノ酸中の他の遊離のアミノ基によりアミド結合を創製する。多様なこうしたジスルフィド／アミド形成剤がＩｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．６２、１８５（１９８２）により記述されている。他の二官能性カップリング剤はジスルフィド結合よりむしろチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは商業的に入手可能であり、そして６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸および２−ヨード酢酸、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルを包含する。カルボキシル基は、それらをスクシンイミド若しくは１−ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホン酸ナトリウム炎と組合せることにより活性化し得る。
【００５２】
免疫原性は、Ｔｈエピトープと本発明のペプチド免疫原との間のスペーサー残基（例えばＧｌｙ−Ｇｌｙ）の付加により改善し得る。Ｂ細胞エピトープ（すなわちペプチド免疫原）からＴｈエピトープを物理的に分離することに加え、該グリシン残基はペプチド免疫原とのＴｈエピトープの結合により創製されるいかなる人工的二次構造も破壊し得、そしてそれによりＴおよび／若しくはＢ細胞応答の間の妨害を排除し得る。ヘルパーエピトープと抗体を導き出すドメインとの間のコンホメーション上の分離は、従って、提示される免疫原と適切なＴｈおよびＢ細胞との間のより効率的な相互作用を可能にする。
【００５３】
多様なＨＬＡ型を表示する被験体の大きなパーセントにおける、本発明の剤に対するＴ細胞免疫の誘導を高めるために、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う複合物の混合物を製造し得る。該混合物は、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低２種の複合物の混合物、多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低３種の複合物の混合物、若しくは多様なＴｈ細胞エピトープを伴う最低４種の複合物の混合物を含有してよい。該混合物はアジュバントとともに投与してよい。
【００５４】
免疫原性ペプチドはまた担体（すなわち異種ペプチド）との融合タンパク質としても発現させ得る。免疫原性ペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシル末端若しくは双方で担体に結合し得る。場合によっては免疫原性ペプチドの複数の反復物（ｒｅｐｅａｔ）が融合タンパク質中に存在し得る。場合によっては免疫原性ペプチドを該ペプチドの例えばＮおよびＣ末端双方で異種ペプチドの複数のコピーに結合し得る。場合によっては、免疫原性ペプチドの複数のコピーを、相互に結合されている異種ペプチドの複数のコピーに結合し得る。数種の担体ペプチドは該担体ペプチドに対するヘルパーＴ細胞応答を誘導するようはたらく。該誘導されたヘルパーＴ細胞が順に、該担体に結合された免疫原性ペプチドに対するＢ細胞応答を誘導する。
【００５５】
本発明での使用に適する融合タンパク質のいくつかの例を下に示す。これらの融合タンパク質のいくつかは、米国特許第５，１９６，５１２号明細書、欧州特許第３７８，８８１号明細書および欧州特許第４２７，３４７号明細書に記述されるような破傷風トキソイドのエピトープに結合されたＡβのセグメントを含んでなる。数種の融合タンパク質は、米国特許第５，７３６，１４２号明細書に記述される最低１種のＰＡＤＲＥペプチドに結合されたＡβのセグメントを含んでなる。数種の異種ペプチドは無差別のＴ細胞エピトープである一方、他の異種ペプチドは普遍的なＴ細胞エピトープである。いくつかの方法において、投与のための剤は、単純に、直線状の配置で異種セグメントに結合されたＡβセグメントをもつ単一の融合タンパク質である。本発明の治療薬は式を使用して表し得る。例えば、いくつかの方法において、該剤は式２ｘ（式中ｘは１〜５からの整数である）により表される融合タンパク質の多量体である。好ましくはｘは１、２若しくは３であり、２が最も好ましい。ｘが２である場合、こうした多量体はＭＡＰ４と称される好ましい配置で結合された４種の融合タンパク質を有する（米国特許第５，２２９，４９０号明細書を参照されたい）。
【００５６】
ＭＡＰ４配置を下に示し、ここで、ペプチド合成をＮ末端およびリシンの側鎖アミンの双方で開始することにより分枝状構造が生じる。回数に依存してリシンが配列に組込まれ、そして分枝することを可能にされ、生じる構造は複数のＮ末端を提示することができる。この例において、分枝したリシンを含有する核上に４種の同一のＮ末端が生じられる。こうした多重性はコグネイトのＢ細胞の応答性を大きく高める。下の例において、ＺはＡβの免疫原性フラグメントを指し、また、Ｚ１−４はＡβの免疫原性フラグメント（１種若しくは複数）を指す。該フラグメントは相互に同一若しくは異なることができる。
【００５７】
【化２】
融合タンパク質の他の例は：
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号１２）
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド９４７−９６７：
Ｚ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号１３）
ＭＡＰ４配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号１４）
直線状の配置のＺ−破傷風トキソイド８３０−８４４＋９４７−９６７：
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号１５）
ＰＡＤＲＥペプチド（全部が直線状の配置）、ここでＸは好ましくはシクロへキシルアラニン、チロシン若しくはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアミンが最も好ましい−Ｚ：
ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ−Ｚ（配列番号１６）
Ｚ×３−ＰＡＤＲＥペプチド：
Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１７）
直線状の配置のＺ−卵アルブミン３２３−３３９：
Ｚ−ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（配列番号２０）
を包含する。
【００５８】
融合タンパク質のさらなる例は：
ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｚ（配列番号１８）
Ｚ−ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１９）
ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−Ｚ−Ｚ−Ｚ（配列番号２１）
Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−Ｚ（配列番号２２）
Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ（配列番号２３）
Ｚ−Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ（配列番号２４）
Ｚ−ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ−ＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＳＶＦＮＶ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ−ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号２５）
Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＣＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＣＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ−Ｚ（配列番号２６）
二分枝状樹脂上のＺ−ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号２７）：フラグメントは相互と同一若しくは異なることができる。
【００５９】
【化３】
を包含する。
【００６０】
同一若しくは類似の担体タンパク質および結合方法を、Ａβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントに対する抗体の生成で使用されるべき免疫原を生成させるために使用し得る。例えば、担体に結合したＡβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントを、Ａβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントに対するモノクローナル抗体の製造で実験動物に投与し得る。
【００６１】
Ｖ．治療薬をコードする核酸
アミロイド沈着物に対する免疫応答は、Ａβペプチド、およびそれらのフラグメント、他のペプチド免疫原、若しくは受動免疫に使用される抗体およびそれらの構成要素の鎖のセグメントをコードする核酸の投与によってもまた誘導し得る。こうした核酸はＤＮＡ若しくはＲＮＡであり得る。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的に、患者の意図された標的細胞中で該ＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーのような調節要素に結合される。免疫応答の誘導に望ましいような血液細胞中での発現のためには、Ｌ若しくはＨ鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサー要素、若しくはＣＭＶ主要前初期プロモーターおよびエンハンサーが発現を指図するのに適する。結合された調節要素およびコーディング配列はしばしばベクターにクローン化される。二本鎖抗体の投与のため、該二本鎖を同一の若しくは別個のベクターにクローン化し得る。本発明の治療薬をコードする核酸はまた最低１種のＴ細胞エピトープもコードし得る。アジュバントの使用および担体の使用に関する本明細書の開示は、必要に応じて変更を加えて、本発明の治療薬をコードする核酸とともにのそれらの使用に当てはまる。
【００６２】
レトロウイルス系（例えばＬａｗｒｉｅとＴｕｍｉｎ、Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３、１０２−１０９（１９９３）を参照されたい）；アデノウイルスベクター（例えばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７、５９１１（１９９３）を参照されたい）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９、１８６７（１９９４）を参照されたい）、ワクシニアウイルスおよび禽痘ウイルスを包含するポックス科からのウイルスベクター、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウイルス由来のもののようなアルファウイルス属からのウイルスベクター（例えばＤｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０、５０８−５１９（１９９６）を参照されたい）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号明細書を参照されたい）、ならびに水疱性口内炎ウイルス（第ＷＯ ９６／３４６２５号明細書を参照されたい）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６、３２５−３３３（１９９５）；Ｗｏｏら、第ＷＯ ９４／１２６２９号明細書およびＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４、２６３０−２６２２（１９９６））のようなラブドウイルスを包含する多数のウイルスベクター系が利用可能である。
【００６３】
免疫原をコードするＤＮＡ若しくはそれを含有するベクターをリポソーム中にパッケージングし得る。適する脂質および関連するアナログは米国特許第５，２０８，０３６号、同第５，２６４，６１８号、同第５，２７９，８３３号および同第５，２８３，１８５号明細書により記述されている。ベクターおよび免疫原をコードするＤＮＡはまた微粒子担体に吸着若しくはそれらと会合し得、それらの例はポリメチルメタクリレートポリマーならびにポリラクチドおよびポリ（ラクチドコグリコリド）を包含する。例えばＭｃＧｅｅ
ら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照されたい。
【００６４】
遺伝子治療ベクター若しくは裸のＤＮＡは、個々の患者への投与により、典型的には全身投与（例えば静脈内、腹腔内、鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下若しくは頭蓋内注入）または局所適用（例えば米国特許第５，３９９，３４６号明細書を参照されたい）によりｉｎ
ｖｉｖｏで送達し得る。こうしたベクターはブピバカインのような促進剤をさらに包含し得る（米国特許第５，５９３，９７０号明細書）。ＤＮＡは遺伝子銃を使用してもまた投与し得る（ＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、上記を参照されたい）。免疫原をコードするＤＮＡを極微の金属ビーズの表面上に沈殿させる。微小発射体はショック波若しくは膨張するヘリウムガスで加速されそして数細胞層の深さまで組織に浸透する。例えば、Ａｇａｃｅｒｕｓ，Ｉｎｃ．、ウィスコンシン州ミドルタウンにより製造されるアクセル［Ａｃｃｅｌ］ＴＭ遺伝子送達装置が適する。あるいは、裸のＤＮＡを、化学的若しくは機械的刺激を用いて皮膚上にＤＮＡを単にスポットすることにより皮膚を通して血流中に進ませる（第ＷＯ ９５／０５８５３号明細書を参照されたい）。
【００６５】
さらなる一変形において、免疫原をコードするベクターを、個々の患者から外植した細胞（例えばリンパ球、骨髄吸引物、組織生検）若しくは普遍的ドナー造血幹細胞のような細胞にｅｘ ｖｉｖｏで送達し得、次いで通常はベクターを取り込んだ細胞についての選択後に患者に該細胞を再植込し得る。
【００６６】
ＶＩ．アジュバント
ペプチドのような本発明の免疫原性の剤はときにアジュバントとともに投与する。アジュバントは、該ペプチドが単独で使用された場合の状況に関して誘導される抗体の力価および／若しくは誘導される抗体の結合親和性を増大させる。多様なアジュバントをＡβの免疫原性フラグメントとともに使用して免疫応答を導き出し得る。好ましいアジュバントは、免疫原に対する固有の応答の質的形態に影響を及ぼす免疫原中のコンホメーション変化を引き起こすことなく該応答を増強する。好ましいアジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＴＭ）（英国特許第２２２０２１１号明細書（ＲＩＢＩ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．、モンタナ州ハミルトン、現在Ｃｏｒｉｘａの一部）を参照されたい）を包含する。スティミュロン［Ｓｔｉｍｕｌｏｎ］ＴＭＱＳ−２１は南米で見出されるシャボンノキ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）樹の樹皮から単離されたトリテルペン配糖体すなわちサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌら、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＰｏｗｅｌｌとＮｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９５）中；米国特許第５，０５７，５４０号明細書を参照されたい）、（Ａｑｕｉｌａ ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、マサチューセッツ州フラミンガム）。他のアジュバントは、場合によってはモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６、８６−９１（１９９７）を参照されたい）、プルロニックポリマーおよび殺したミコバクテリアのような免疫刺激剤と組合せの水中油型乳剤（スクアレン若しくはラッカセイ油のような）である。別のアジュバントはＣｐＧである（第ＷＯ ９８／４０１００号明細書）。アジュバントは、有効成分を含む治療的組成物の１成分として投与し得るか、または、治療薬の投与と別個にその前、同時に若しくは後に投与し得る。
【００６７】
アジュバントの好ましい一分類は水酸化アルミニウム塩、リン酸アルミニウム塩、硫酸アルミニウム塩のようなアルミニウム塩（ミョウバン）である。こうしたアジュバントは、ＭＰＬ若しくは３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、ポリグルタミン酸若しくはポリリシンのような多量体若しくは単量体のアミノ酸のような他の特定の免疫刺激剤とともに若しくはそれらを伴わずに使用し得る。別の分類のアジュバントは水中油型乳剤製剤である。こうしたアジュバントは、ムラミルペプチド（例えばＮ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ
−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）ｔｅｒａｍｉｄｅＴＭ）、若しくは他の細菌の細胞壁の成分のような他の特定の免疫刺激剤とともに若しくはそれらを伴わずに使用し得る。水中油型乳剤は、（ａ）モデル１１０Ｙ微小流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、マサチューセッツ州ニュートン）のような微小流動化装置を使用してミクロン以下の粒子に処方した、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％Ｓｐａｎ ８５を含有する（場合によっては多様な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）ＭＦ５９（第ＷＯ ９０／１４８３７号明細書）、（ｂ）ミクロン以下の乳剤に微小流動化したか若しくはより大きな粒子径の乳剤を生成するようにボルテックス攪拌したかのいずれかの、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）よりなる群からの１種若しくはそれ以上の細菌の細胞壁の成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（デトックス［Ｄｅｔｏｘ］ＴＭ）を含有するＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、モンタナ州ハミルトン）を包含する。
【００６８】
好ましいアジュバントの別の分類は、スティミュロン［Ｓｔｉｍｕｌｏｎ］ＴＭ（ＱＳ−２１、Ａｑｕｉｌａ、マサチューセッツ州フラミンガム）のようなサポニンアジュバント、若しくはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸのようなそれから生成される粒子である。他のアジュバントはＲＣ−５２９、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびにフロイントの完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイントの不完全アジュバント（ＩＦＡ）を包含する。他のアジュバントは、インターロイキン（例えばＩＬ−１αおよびβペプチド、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３ならびにＩＬ−１５）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなサイトカイン、ＭＩＰ１αおよびβならびにＲＡＮＴＥＳのようなケモカインを包含する。アジュバントの別の分類は、Ｎ−グリコシルアミド、Ｎ−グリコシル尿素およびＮ−グリコシルカルバメートを包含する糖脂質アナログであり、それらのそれぞれは免疫調節物質若しくはアジュバントとして糖残基中でアミノ酸により置換されている（米国特許第４，８５５，２８３号明細書を参照されたい）。熱ショックタンパク質、例えばＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０もまたアジュバントとして使用しうる。
【００６９】
アジュバントは単一組成物として免疫原とともに投与し得るか、または免疫原の投与前、同時に若しくは後に投与し得る。免疫原およびアジュバントは同一のバイアルに包装かつ供給し得るか、若しくは別個のバイアル中に包装しかつ使用前に混合し得る。免疫原およびアジュバントは、典型的には意図される治療上の応用を示すラベルを付けて包装される。免疫原およびアジュバントが別個に包装される場合、該包装は、典型的には使用前に混合するための説明書を包含する。アジュバントおよび／若しくは担体の選択は、アジュバントを含有する免疫原性の製剤の安定性、投与経路、投与スケジュール、ワクチン接種されている種に対する該アジュバントの有効性に依存し、また、ヒトにおいては、製薬学的に許容できるアジュバントは関係する規制団体によりヒト投与について承認された若しくは承認可能であるものである。例えば、フロイントの完全アジュバントはヒト投与には適しない。ミョウバン、ＭＰＬおよびＱＳ−２１が好ましい。場合によっては２種若しくはそれ以上の異なるアジュバントを同時に使用し得る。好ましい組合せは、ＭＰＬを伴うミョウバン、ＱＳ−２１を伴うミョウバン、ＱＳ−２１を伴うＭＰＬ、ＧＭ−ＣＳＦを伴
うＭＰＬ若しくはＲＣ−５２９、ならびにミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬを一緒にを包含する。また、フロイントの不完全アジュバントは、場合によってはミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬのいずれか、ならびにそれらの全部の組合せとともに使用し得る（Ｃｈａｎｇら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２、１７３−１８６（１９９８））。
【００７０】
ＶＩＩ．抗体の受動的投与
Ａβのフラグメントでの能動免疫は抗体の受動的投与と組合せ得る。受動的投与に使用される抗体は、斑の食作用的消失応答の誘導のためのＡβのＮ末端エピトープに対する抗体であり得るか、または可溶性Ａβを消失させるためのＡβの中央若しくはＣ末端領域に対する抗体であり得る。いくつかの方法において、Ｎ末端領域抗体に対する抗体を用いる受動的投与を最初に実施して既存のアミロイド沈着物を消失させる。その後、Ａβの中央若しくはＣ末端領域からのフラグメントを投与して、可溶性Ａβからのアミロイド沈着物のさらなる沈着を予防する。他の方法において、Ａβの中央若しくはＣ末端部分に対するフラグメントを用いる能動的投与を最初に実施して、可溶性Ａβを消失させる抗体を生成させる。その後、血中の抗体のレベルが少なくなり始める場合に、Ａβの中央若しくはＣ末端エピトープに特異的に結合する抗体の受動的投与により付加的な用量を供給する。
【００７１】
受動的投与での使用に適する抗体は、引用することにより組み込まれる第ＷＯ ００／７２８８０号および同第ＷＯ ０２／４６２３７号明細書に記述されている。ＡβのＮ末端エピトープに特異的に結合する好ましい抗体は、Ａβの残基１−３で開始しかつ残基７−１１で終了する１エピトープに結合する。いくつかの好ましい抗体はアミノ酸１−３、１−４、１−５、１−６、１−７若しくは３−７内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの好ましい抗体はＡβの残基１−３で開始しかつ残基７−１１で終了する１エピトープに特異的に結合する。こうした抗体は、典型的にはアミロイド沈着物に特異的に結合するが、しかし可溶性Ａβに結合してもしなくてもよい。ＡβのＣ末端エピトープに特異的に結合するいくつかの好ましい抗体は、天然に存在する短い形態のＡβ（すなわちＡβ３９、４０若しくは４１）に特異的に結合することなく天然に存在する長い形態のＡβ（すなわちＡβ４２およびＡβ４３に特異的に結合する。のＣ末端および中央のエピトープに対する抗体は、典型的には、アミロイド沈着物への特異的結合を伴わずに可溶性物（ｓｏｌｕｂｌｅ）に特異的に結合する。抗体が例えばＡβ１−５のような指定された残基内の１エピトープに特異的に結合すると言われる場合、意味しているものは、該抗体が該指定される残基（すなわちこの一例においてＡβ１−５）を含有するポリペプチドに特異的に結合することである。こうした抗体はＡβ１−５内のすべての残基に必ずしも接触しない。また、Ａβ１−５内のすべての単一アミノ酸置換若しくは欠失も結合親和性に必ずしも有意に影響を及ぼさない。ある抗体のエピトープ特異性は例えば第ＷＯ ００／７２８８０号明細書により記述されるとおり決定し得る。
【００７２】
抗体はポリクローン性若しくはモノクローン性であり得る。ポリクローナル血清は、典型的に、Ａβの長さに沿っていくつかのエピトープに特異的に結合する抗体の混合した集団を含有する。しかしながら、ポリクローナル血清はＡβ１−１０のようなＡβの特定の一セグメントに特異的であり得る。好ましい抗体は、キメラ、ヒト化（Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）ならびに第ＷＯ ９０／０７８６１号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号明細書およびＷｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号明細書を参照されたい）、若しくはヒト（Ｌｏｎｂｅｒｇら、第ＷＯ９３／１２２２７号明細書（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５
４５，８０６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ １４８、１５４７−１５３３（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｇｙ １４、８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、第ＷＯ ９１／１０７４１号明細書（１９９１））である。異なる結合特異性の数種のマウス抗体がヒト化抗体を作成するための出発原料として利用可能である。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が、食細胞上のＦｃＲＩ受容体に対するヒトアイソタイプの最高の親和性を有するそれのためのＮ末端領域に対する抗体に好ましい。いくつかの抗体は、約１０７、１０８、１０９若しくは１０１０Ｍ−１より大きいかもしくはそれらに等しい結合親和性でＡβに特異的に結合する。
【００７３】
ＶＩＩＩ．処置の影響を受けやすい患者
処置の影響を受けやすい患者は、疾患の危険にさらされているがしかし症状を示さない個体、ならびに現在症状を示している患者を包含する。アルツハイマー病の場合、彼若しくは彼女が十分に長く生きる場合は事実上誰でもアルツハイマー病に罹る危険にさらされている。従って、本方法は、対象患者の危険のいかなる評価に対する必要性も伴わずに一般集団に予防的に投与し得る。本方法は、アルツハイマー病の既知の遺伝的危険を有する個体にとりわけ有用である。こうした個体は、本疾患を経験した親族を有する者、および遺伝的若しくは生化学的マーカーの分析によりその危険が決定される者を包含する。アルツハイマー病に対する危険の遺伝的マーカーは、ＡＰＰ遺伝子中の突然変異、とりわけそれぞれハーディおよびスウェーデン型突然変異と称される位置７１７ならびに位置６７０および６７１の突然変異を包含する（Ｈａｒｄｙ、ＴＩＮＳ、上記を参照されたい）。危険の他のマーカーはプレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２ならびにＡｐｏＥ４中の突然変異、ＡＤの家族歴、抗コレステロール血症若しくはアテローム硬化症である。現在アルツハイマー病に罹っている個体は、特徴的な痴呆、ならびに上述された危険因子の存在から認識され得る。加えて、ＡＤを有する個体を同定するための多数の診断的検査が利用可能である。これらはＣＳＦτおよびＡβ４２のレベルの測定を包含する。上昇したτおよび減少したＡβ４２レベルはＡＤの存在を意味する。アルツハイマー病に罹っている個体はまた、第ＷＯ ００／７２８８０号明細書にて論考されるところのＡＤＲＤＡ基準によっても診断し得る。
【００７４】
無症候性の患者において、処置はいずれの年齢（例えば１０、２０、３０歳）でも開始し得る。通常、しかしながら、患者が４０、５０、６０若しくは７０歳に達するまで処置を開始することは必要でない。処置は、典型的にはある期間にわたる複数の投薬量を伴う。処置は、長期にわたる治療薬（例えばＡβペプチド）に対する抗体または活性化されたＴ細胞（副作用）若しくはＢ細胞応答をアッセイすることによりモニターし得る。応答が下落する場合、追加免疫投薬量を指示する。潜在的なダウン症候群患者の場合、処置は、母親に治療薬を投与することにより出生前に若しくは出生直後に開始し得る。
【００７５】
ＩＸ．処置レジメン
一般に、処置レジメンは、患者にＡβに対する免疫原性の応答を誘導するのに有効な剤、好ましくはＡβの免疫原性フラグメントを投与することを必要とする。予防的応用において、製薬学的組成物若しくは医薬品を、アルツハイマー病に感受性の、そうでなければその危険にさらされている患者に、該危険を排除若しくは低下させるか、重症度を小さくするか、または該疾患の生理学的、生化学的、組織学的および／若しくは行動的症状を包含する疾患、該疾患の発症の間に提示する合併症および中間的な病理学的表現型の発生を遅延させるのに十分な量で投与する。治療的応用においては、剤を、該疾患の発症におけるその合併症および中間的な病理学的表現型を包含する該疾患の症状（生理学的、生化学的、組織学的および／若しくは行動的）を治癒、または少なくとも部分的にその悪化を停止若しくは阻害するのに十分な剤の投与量および頻度を含んでなるレジメンで、こうした疾患が疑われるか若しくは既に罹っている患者に投与する。いくつかの方法において、剤の投与は、特徴的なアルツハイマー病の病状を未だ発症していない患者における筋認識（
ｍｙｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）障害を低下若しくは排除する。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量を治療上若しくは予防上有効な用量と定義する。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量および投薬頻度の組合せを治療上若しくは予防上有効なレジメンと定義する。予防的および治療的双方のレジメンにおいて、剤は通常、十分な免疫応答が達成されるまでいくつかの投薬量で投与される。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な投薬量および投与頻度を治療上若しくは予防上有効なレジメンと定義する。典型的には、患者の免疫応答をモニターし、そして免疫応答が弱まり始める場合に反復した投薬量を与える。免疫応答は、患者の血液中のＡＢに対する抗体を検出すること、脳中のＡＢ若しくは斑のレベル、またはＭＭＳＥならびにＡＤＡＳ（アルツハイマー病の状態および機能を伴う患者を評価するための包括的尺度である）のような精神測定的尺度による症状を検出することにより、モニターし得る。
【００７６】
上述された状態の処置のための本発明の剤および組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか若しくは動物であるか、投与される他の医薬品、および処置が予防的であるか若しくは治療的であるかを包含する多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、しかし、トランスジェニック哺乳動物を包含する非ヒト哺乳動物もまた処置し得る。処置投薬量は安全性および有効性を至適化するように滴定される必要がある。免疫原の量はアジュバントもまた投与されるかどうかに依存し、より高い投薬量がアジュバントの非存在下で必要とされる。投与のための免疫原の量は、ときに、患者あたり１〜５００μｇから、およびより通常はヒト投与について注入あたり５〜５００μｇから変動する。ときに注入あたり１〜２ｍｇというより高用量を使用する。典型的には、最低１０、２０、５０若しくは１００μｇを各ヒト注入に使用する。免疫原の量は全体としての免疫原の量に対する免疫原内の免疫原性のエピトープの質量比にもまた依存する。典型的には、１０−３ないし１０−５マイクロモルの免疫原性のエピトープをマイクログラムの免疫原に使用する。注入のタイミングは１日１回から年１回まで、１０年に１回まで大きく変動し得る。免疫原の１投薬量を与えるいずれの所定の日にも、投薬量は、アジュバントもまた投与される場合に１μｇ／患者より大きくかつ通常は１０μｇ／患者より大きく、また、アジュバントの非存在下で１０μｇ／患者より大きくかつ通常は１００μｇ／患者より大きい。典型的なレジメンは１回の免疫化、次いで６週間隔のような時間間隔での追加免疫注入よりなる。別のレジメンは１回の免疫化、次いで１、２および１２か月後の追加免疫注入よりなる。別のレジメンは生涯２か月ごとに１注入を必要とする。あるいは、追加免疫注入は免疫応答のモニタリングにより示されるとおり不規則であり得る。
【００７７】
免疫原をコードする核酸の用量は、患者あたり約１０ｎｇから１ｇまで、１００ｎｇないし１００ｍｇ、１μｇないし１０ｍｇ若しくは３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲にわたる。感染性ウイルスベクターの用量は、投与あたり１０〜１００個若しくはそれ以上のビリオンから変動する。
【００７８】
（併用療法における）抗体での受動免疫のためには、投薬量は約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇまで、およびより通常は０．０１ないし５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲にわたる。例えば、投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、あるいは言い換えれば７０ｋｇの患者について７０ｍｇ若しくは７００ｍｇ、または７０〜７００ｍｇの範囲内であり得る。例示的処置レジメンは、２週間ごとあたり１回若しくは月１回若しくは３ないし６か月ごとに１回の投与を必要とする。いくつかの方法において、異なる結合特異性をもつ２種若しくはそれ以上のモノクローナル抗体を同時に投与し、この場合、投与される各抗体の投薬量は指示される範囲内にある。抗体は通常複数の機会に投与する。単一投薬量間の間隔は週、月若しくは年であり得る。間隔はまた、患者でのＡβに対する抗体の血液レベルを測定することにより示されるように不規則でもあり得る。いくつかの方法において、投薬量は１〜１０００μｇ／ｍｌ、
およびいくつかの方法においては２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調節する。あるいは、抗体は徐放性製剤として投与し得、この場合、より少なく頻繁な投与が必要とされる。投薬量および頻度は患者での該抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、次いでヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体である。投薬量および投与頻度は、該処置が予防的であるか若しくは治療的であるかに依存して変動し得る。予防的応用においては比較的低投薬量を長期間にわたり比較的頻繁でない間隔で投与する。若干の患者は彼らの生涯の残りの間処置を受領し続ける。治療的応用においては、疾患の進行が低下若しくは停止されるまで、および好ましくは患者が疾患の症状の部分的若しくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高投薬量がときに必要とされる。その後、患者に予防的レジメンを投与し得る。
【００７９】
免疫応答を誘導するための剤は、予防的および／若しくは治療的処置のために非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内若しくは筋肉内の手段により投与し得る。免疫原性の剤の最も典型的な投与経路は皮下であるとは言え、他の経路が等しく有効であり得る。次に最も一般的な経路は筋肉内注入である。この型の注入は腕若しくは脚の筋肉で最も典型的に実施される。いくつかの方法において、剤は、沈着物が蓄積している特定の組織に直接注入される（例えば頭蓋内注入）。筋肉内注入若しくは静脈内注入が抗体の投与に好ましい（併用療法において）。いくつかの方法においては特定の治療的抗体を頭蓋中に直接注入する。いくつかの方法においては、抗体を徐放性組成物若しくはメディパッド［Ｍｅｄｉｐａｄ］ＴＭ装置のような装置として投与する。
【００８０】
本発明の剤はしばしば有効な治療薬、すなわち、および多様な他の製薬学的に許容できる成分を含んでなる製薬学的組成物として投与される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン、１９８０）を参照されたい。好ましい形態は意図される投与様式および治療的応用に依存する。該組成物は所望の製剤に依存して、動物若しくはヒト投与のための製薬学的組成物を処方するために一般に使用されるベヒクルと定義される製薬学的に許容できる非毒性の担体若しくは希釈剤もまた包含し得る。希釈剤は組合せの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択する。こうした希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理的食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液およびハンクス液である。加えて、製薬学的組成物若しくは製剤は、他の担体、補助物質若しくは非毒性の非治療的非免疫原性安定剤などもまた包含してよい。
【００８１】
製薬学的組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（ラテックス官能性化セファロース（ＴＭ）、アガロース、セルロースなどのような）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマーならびに脂質凝集物（油滴若しくはリポソームのような）のような大型のゆっくりと代謝される巨大分子もまた包含し得る。加えて、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）として機能し得る。
【００８２】
非経口投与のため、本発明の剤は、水、油、生理的食塩水、グリセロール若しくはエタノールのような無菌の液体であり得る製薬学的担体を含む生理学的に許容できる希釈剤中の物質の溶液若しくは懸濁剤の注入可能な投薬量として投与し得る。加えて、湿潤剤若しくは乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助的物質が組成物中に存在し得る。製薬学的組成物の他の成分は、石油、動物、植物若しくは合成起源のもの、例えばラッカセイ油、ダイズ油および鉱物油である。一般に、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールのようなグリコールはとりわけ注入可能な溶液に好ましい液体の担体である。抗体は、有効成分の徐放性を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込製剤の形態で投与し得る。例示的一組成物は、ＨＣｌでｐＨ６．０に調節した５０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌよりなる水性緩衝液中で処方された５ｍｇ／ｍＬのモノクローナル抗体を含んでなる。非経口投与のための組成物は典型的には実
質的に無菌、等張であり、そしてＦＤＡ若しくは類似の団体のＧＭＰ条件下で製造される。
【００８３】
典型的には、組成物は、液体の溶液若しくは懸濁剤のいずれかのような注入可能物として製造され；注入前に液体ベヒクル中の溶液若しくは懸濁剤に適する固体の形態もまた製造し得る。該製剤はまた、乳化、あるいはリポソームまたは上で論考されたところの高められたアジュバント効果のためのポリラクチド、ポリグリコリド若しくはコポリマーのような微粒子中に被包化もし得る（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９、１５２７（１９９０）およびＨａｎｅｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８、９７−１１９（１９９７）を参照されたい）。本発明の剤は、有効成分の徐放性若しくは拍動性放出を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込製剤の形態で投与し得る。
【００８４】
他の投与様式に適する付加的な製剤は、経口、鼻内、および肺製剤、坐剤、ならびに経皮適用を包含する。
【００８５】
坐剤については、結合剤および担体は例えばポリアルキレングリコール若しくはトリグリセリドを包含し；こうした坐剤は０．５％ないし１０％、好ましくは１％〜２％の範囲の有効成分を含有する混合物から形成し得る。経口製剤は、製薬学的等級のマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロースおよび炭酸マグネシウムのような賦形剤を包含する。これらの組成物は溶液、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤若しくは散剤の形態をとり、そして１０％〜９５％、好ましくは２５％〜７０％の有効成分を含有する。
【００８６】
局所適用は経皮若しくは皮内送達をもたらし得る。局所投与はコレラトキシン、またはそれ若しくは他の類似の細菌のトキシンの無毒化した誘導体若しくはサブユニットとの剤の共投与により助長し得る（Ｇｌｅｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３９１、８５１（１９９８）を参照されたい）。共投与は、成分を混合物としてまたは化学的架橋若しくは融合タンパク質としての発現により得られる結合した分子として使用することにより達成し得る。
【００８７】
あるいは、経皮送達は皮膚経路を使用して若しくはトランスフェロソーム（ｔｒａｎｓｆｅｒｏｓｏｍｅ）（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５、３５２１−２４（１９９５）；Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３６８、２０１−１５（１９９８））を使用して達成し得る。
【００８８】
Ｘ．モニタリング方法
本発明は、アミロイド原性疾患に罹っているかもしくはそれに感受性の患者におけるＡβペプチドに対する抗体応答の検出方法を提供する。該方法は患者に投与されている処置の経過をモニターするのにとりわけ有用である。該方法を使用して症候性の患者での治療的処置および無症候性の患者での予防的処置の双方をモニターし得る。いくつかの方法は、免疫原性の剤の１投薬量を投与する前に患者における抗体応答の基礎値を測定すること、および処置後の免疫応答についての値とこれを比較することを必要とする。抗体応答の値の有意の増大（すなわち、こうした測定値の平均からの１標準偏差として表される同一サンプルの反復測定における典型的な実験誤差より大きい）は正の処置の転帰（すなわち該剤の投与が免疫応答を達成したか若しくは増強したこと）を知らせる。抗体応答の値が有意に変化しないか若しくは減少する場合は、負の処置の転帰を示す。一般に、免疫原性の剤を用いる処置の最初の１クールを受ける患者は、連続的投薬で抗体応答の増大（最終的にはプラトーに達する）を示すと期待される。剤の投与は一般に抗体応答が増大している間は継続する。プラトーの達成は、処置の投与を中断し得るかまたは投薬量若しくは頻度を低下し得ることの指標である。
【００８９】
他の方法において、抗体応答の対照値（すなわち平均および標準偏差）を対照集団について決定する。典型的には対照集団の個体は前の処置を受領していない。治療薬を投与した後の患者の抗体応答の測定値をその後対照値と比較する。対照値に関して有意の増大（例えば平均から１標準偏差以上大きい）は正の処置の転帰を知らせる。有意の増大の欠如若しくは減少は負の処置の転帰を知らせる。剤の投与は、一般に抗体応答が対照値に関して増大している間は継続する。前のとおり、対照値に関してプラトーの達成は、処置の投与を中断し得るかまたは投薬量若しくは頻度を低下し得ることの指標である。
【００９０】
他の方法において、抗体応答の対照値（例えば平均および標準偏差）を、治療薬での処置を受けかつその抗体応答が処置に応答してプラトーに達した個体の対照集団から決定する。患者での抗体応答の測定値を対照値と比較する。患者で測定されたレベルが対照値と有意に異ならない（例えば１標準偏差より大きくない）場合は処置を中断し得る。患者でのレベルが対照値の有意に下である場合は剤の継続投与が正当化される。患者でのレベルが対照値より下で持続する場合には、処置レジメンの変更、例えば異なるアジュバント、フラグメントの使用若しくは受動的投与への切替えを指示してもよい。
【００９１】
他の方法において、現在処置を受領していないがしかし１クールの以前の処置を受けたことがある患者を、処置の再開が必要とされるかどうかを決定するために抗体応答についてモニターする。該患者での抗体応答の測定値を、１クールの以前の処置後に該患者で以前に達成された抗体応答の値と比較し得る。以前の測定値に関して有意の低下（すなわち同一サンプルの反復測定での典型的な誤差より大きい）は処置を再開し得ることの指標である。あるいは、患者で測定された値を、１クールの処置を受けた後の患者の１集団で測定した対照値（平均および標準偏差）と比較し得る。あるいは、患者での測定値を、疾患の症状を伴わないままである予防的に処置した患者の集団、若しくは疾患の特徴の改善を示す治療的に処置した患者の集団での対照値と比較し得る。これらの場合の全部において、対照レベルに関して有意の低下（すなわち１標準偏差より大きい）は処置を患者で再開すべきであることの指標である。
【００９２】
分析のための組織サンプルは、典型的には患者からの血液、血漿、血清、粘液若しくは脳脊髄液である。サンプルをいずれかの形態のＡβペプチド、典型的にはＡβ４２若しくは免疫化に使用したペプチドに対する免疫応答の指標について分析する。免疫応答はＡβペプチドに特異的に結合する抗体の存在から決定し得る。抗体は、該抗体に特異的に結合するリガンドへの結合アッセイで検出し得る。典型的にはリガンドは固定されている。結合は標識抗イディオタイプ抗体を使用して検出し得る。
【００９３】
能動的および受動的双方の投与を使用する併用レジメンにおいて、類似のアプローチを使用して、第ＷＯ ００／７２８８０号明細書に記述されるところの受動的投与から生じる抗体のレベルをモニターし得る。
【実施例】
【００９４】
材料および方法
Ａβフラグメント。Ａβ１−５、Ａβ３−９、Ａβ５−１１、Ａβ１５−２４および逆配列Ａβ５−１に対応するペプチドを、分枝状のペプチド枠組み（４個のペプチド腕をもつ三重のリシン核（ｔｒｉｐｌｅｔ−ｌｙｓｉｎｅ ｃｏｒｅ））上で卵アルブミン由来の１７アミノ酸のＴ細胞エピトープ（アミノ酸３２３−３２９−ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ（配列番号３））に隣接して合成して、Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、５４０９−５４１３により記述されるところの多抗原ペプチドを製造した。ポリクローナル抗体（Ｐａｂ）Ａβ１−４２を生じさせ、そして、Ｂａｒｄ，Ｆ．ら、（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６、９１６−９１９
により以前に記述されたとおり免疫グロブリン画分を単離した。ポリクローナルＰａｂ−ＥＬ１６、Ｐａｂ−ＥＬ１７およびＰａｂ−ＥＬ２０は、それぞれ上述されたところの分枝状枠組みで合成したＡβ１−７、Ａβ１５−２４およびＡβ３−９に対応するペプチドで免疫したＰＤＡＰＰマウスの血清から得た。Ｐａｂ−ＥＬ２６はＡβ（７−１）−４２で免疫したマウスの血清から得た。ペプチドはＡｎａＳｐｅｃ、米国カリフォルニア州サンノゼにより合成された。
【００９５】
免疫化手順。１００μｇのＡβフラグメントをフロイントの完全アジュバント中の腹腔内注入により投与し、次いで２および４週、ならびにその後毎月、フロイントの不完全アジュバント中の１００μｇのペプチドで追加免疫した。
【００９６】
凝集型および可溶性Ａβ１−４２への抗体結合。血清力価（連続希釈により測定した）および凝集した合成Ａβ１−４２へのモノクローナル抗体結合を、Ｓｃｈｅｎｋ Ｄ．ら、（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ４００、１７３−１７７により以前に記述されたとおりＥＬＩＳＡにより実施した。可溶性Ａβ１−４２はジメチルスルホキシド中で超音波処理した合成Ａβ１−４２ペプチドを指す。抗体の連続希釈溶液を５０，０００ｃｐｍの１２５Ｉ−Ａβ１−４２とともに室温で一夜インキュベートした。７５ｍｇ／ｍｌのプロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、スウェーデン・ウプサラ）／２００μｇのウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、米国ペンシルバニア州ウエストグローブ）を含有する５０μｌのスラリーを、希釈した抗体とともに室温で１時間インキュベートし、２回洗浄し、そしてＷａｌｌａｃガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国イリノイ州グローブ）でカウントした。全部の段階は１０ｍＭトリス、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌゼラチンおよび０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、ｐＨ８．０よりなるラジオイムノアッセイ緩衝液中で実施した。
【００９７】
結果
一連のペプチドを、ｉｎ ｖｉｖｏでの効果的な抗体応答を誘発するそれらの能力について比較した。１２ないし１３月齢のＰＤＡＰＰマウスを、３種のＮ末端ペプチドフラグメント（Ａβ１−５、Ａβ３−９若しくはＡβ５−１１）の１種若しくは該ペプチドの内的領域由来のフラグメント（Ａβ１５−２４）で免疫した（図１ａ）。内的ペプチドＡβ１５−２４は、可溶性Ａβに対する高い親和性を表し（Ｓｅｕｂｅｒｔら、（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３５９、３２５−３２７．）、固定されていないＡＤ若しくはＰＤＡＰＰ組織の切片中の斑を認識しない、抗体２６６のエピトープを包含する。従って、このペプチドに向けられたポリクローン性の応答が斑認識が可能な抗体を産生し得たかどうか、若しくは可溶性Ａβ単独との反応性が有効性を提供するのに十分であったかどうかを決定することは興味深かった。これらの研究において、逆配列をもつペプチドＡβ５−１は陰性対照としてはたらいた。ペプチドは卵アルブミン由来の１７アミノ酸のＴ細胞エピトープに隣接して合成し、そして同一の多価配置で提示された（材料および方法を参照されたい）。ペプチドの全部（Ａβ５−１リバースマーを除く）は凝集した合成Ａβ１−４２をＥＬＩＳＡにより認識した血清を生じさせたとは言え、Ａβ５−１１およびＡβ１５−２４はＡβ１−５より有意により高い力価を生じさせた（それぞれｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５）（図１ｂ）。対照的に、Ｎ末端ペプチドに対する血清のみが斑内のＡβを認識することが可能であり；Ａβ１５−２４に対する抗血清は、合成の凝集したペプチドとの強い反応性にもかかわらず斑を結合しなかった（図１ｃ）。可溶性Ａβを捕捉するそれらの能力にもまた血清群間で差異が存在した（図２ａ）。Ａβ１−５若しくはＡβ３−９で免疫したマウスからの血清の３０％未満が可溶性ペプチドを捕捉した（それぞれ２７％および５％）。対照的に、Ａβ５−１１で免疫した動物のおよそ半分からの血清、およびＡβ１５−２４で免疫したものの全部が、可溶性Ａβ１−４２を捕捉した。
【００９８】
Ａβ沈着の程度はＰＤＡＰＰマウスが加齢する際に大きく変動し得るため、群あたり最低３０動物を用いるｉｎ ｖｉｖｏ試験を設計した。有効性データは個々のマウスについて示し、そして対照の平均（１００％に設定した）に関するアミロイド負荷量若しくは神経炎性ジストロフィーのいずれかのパーセントとして表す。３種のＮ末端ペプチドのそれぞれでの免疫化はアミロイド負荷量を有意に低下させた（４６〜６１％、ｐ＜０．００２）（図２ｂ）。さらに、Ａβ３−９およびＡβ５−１１は神経炎性の病状を有意に低下させた（それぞれ３４％および４１％、ｐ＜０．０５）、（図２ｃ）。Ａβ１５−２４での免疫化はアミロイド負荷量若しくは神経炎性の病状のいずれに対する保護も提供しなかった。これらの結果は抗体の有効性に関する１機構としての斑結合を裏付ける。それらはまた、可溶性Ａβの捕捉が神経炎性の病状の低下に必要とされないことも示す。Ａβ３−９に対する抗体応答は強い斑反応性および神経ジストロフィーに対する最高レベルの保護を提供したが、それでもなお可溶性ペプチドの認識について最も弱い能力を表したからである。斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する抗体はまた、より高力価で若しくはより長期間にわたって投与される場合にもこうした活性を有するとみられる。斑に結合することなく可溶性Ａβに結合する抗体はまた、Ａβの形成および／若しくはさらなる沈着の予防においても有用であり得る。Ａβ１５−２４での免疫化により生成される高力価の抗体は、このフラグメントおよびそのサブフラグメントが本目的上高力価の可溶性抗体を生成させるためにとりわけ有用であることを示す。
【００９９】
前述の発明は理解の明瞭さの目的上詳細に記述したとは言え、付属として付けられる請求の範囲の範囲内である種の改変を実施しうることが明らかであろう。本明細書に引用される全部の刊行物および特許文書は、これにより、それぞれが個々にそのように示されると同一の程度まで全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる。情況から別の方法で明らかでない限り、本発明の各要素、特徴若しくは態様をいかなる他者とも組合せで使用し得る。
【０１００】
以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。
【０１０１】
１．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントは残基１〜１１の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、かつ、該フラグメントはＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０、３３−４２若しくは３５−４２でなく、それにより誘導される抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法。
【０１０２】
２．該フラグメントがＡβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、１．に記載の方法。
【０１０３】
３．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、１．に記載の方法。
【０１０４】
４．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、１．に記載の方法。
【０１０５】
５．該フラグメントがＡβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、１．に記載の方法。
【０１０６】
６．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−
２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、１．に記載の方法。
【０１０７】
７．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、１．に記載の方法。
【０１０８】
８．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントはＡβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択され、そしてそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防方法。
【０１０９】
９．Ａβ１−１１をもつ１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントを投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１１０】
１０．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントが、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を該フラグメントが誘導する前に投与される、９．に記載の方法。
【０１１１】
１１．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１１２】
１２．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体が、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するフラグメントの前に投与される、１．に記載の方法。
【０１１３】
１３．疾患が認識障害を特徴とする、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１４】
１４．疾患がアルツハイマー病である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１５】
１５．疾患がダウン症候群である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１６】
１６．疾患が軽度の認識障害である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１７】
１７．患者がヒトである、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１８】
１８．患者中で誘導された抗体をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１１９】
１９．患者が無症候性である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２０】
２０．患者が無症候性でありかつ該投与することが該患者の症状の悪化を阻害する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２１】
２１．患者が５０歳未満である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２２】
２２．患者がアルツハイマー病に対する感受性を示す遺伝的危険因子を有する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２３】
２３．患者が、投与段階が最初に実施された後５年間、検出可能な症状を発症しない、１９．に記載の方法。
【０１２４】
２４．患者がアルツハイマー病に対する既知の危険因子を有しない、１．〜２１．および２３．のいずれかに記載の方法。
【０１２５】
２５．該レジメンが、複数の日に最低５０マイクログラムのフラグメントの投薬量を投与することを含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２６】
２６．該フラグメントが、該フラグメントにより誘導される抗体のレベルを増大させるアジュバントとともに投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２７】
２７．該フラグメントが、腹腔内、経口、鼻内、皮下、筋肉内、局所若しくは静脈内に投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２８】
２８．該フラグメントが、患者中で発現されて該フラグメントを産生する、該フラグメントをコードするポリヌクレオチドを投与することにより投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１２９】
２９．患者の血液中の誘導された抗体のレベルについて患者をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１３０】
３０．該フラグメントが最低３か月の期間にわたり複数の投薬量で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１３１】
３１．投薬量が最低５０マイクログラムである、３０．に記載の方法。
【０１３２】
３２．該フラグメントが担体分子に結合されて複合物を形成する、１．に記載の方法。
【０１３３】
３３．担体が異種ポリペプチドである、３２．のいずれかに記載の方法。
【０１３４】
３４．該フラグメントの複数のコピーが１個の担体分子に結合されて複合物を形成する、３２．に記載の方法。
【０１３５】
３５．該フラグメントの複数のコピーが、相互に結合されている担体分子の複数のコピーに結合されている、３２．に記載の方法。
【０１３６】
３６．異種ポリペプチドがＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）を含んでなる、３３．に記載の方法。
【０１３７】
３７．異種ポリペプチドがアミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）を含んでなる、３３．に記載の方法。
【０１３８】
３８．該ポリペプチドが異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答およびそれにより該フラグメントに対するＢ細胞応答を誘導する、３３．に記載の方法。
【０１３９】
３９．該フラグメント単独を投与することに関して誘導される抗体の力価および／若しくは結合親和性を高めるアジュバントを投与することをさらに含んでなる、１．に記載の方法。
【０１４０】
４０．アジュバントおよびポリペプチドが組成物として一緒に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４１】
４１．アジュバントがポリペプチドの前に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４２】
４２．アジュバントがポリペプチドの後に投与される、３９．に記載の方法。
【０１４３】
４３．アジュバントがミョウバンである、３９．に記載の方法。
【０１４４】
４４．アジュバントがＭＰＬである、３９．に記載の方法。
【０１４５】
４５．アジュバントがＱＳ−２１である、３９．に記載の方法。
【０１４６】
４６．アジュバントがフロイントの不完全アジュバントである、３９．に記載の方法。
【０１４７】
４７．該フラグメントの投薬量が１０マイクログラム以上である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１４８】
４８．Ａβのフラグメントの有効なレジメンを投与することを含んでなり、該フラグメントは残基１〜１１、およびフラグメント、３３−４２ Ａβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０若しくは３５−４２の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、それにより該誘導された抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療する、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の治療方法。
【０１４９】
４９．該フラグメントが、Ａβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、４８．に記載の方法。
【０１５０】
５０．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、４８．に記載の方法。
【０１５１】
５１．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、４８．に記載の方法。
【０１５２】
５２．該フラグメントが、Ａβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、４８．に記載の方法。
【０１５３】
５３．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、４８．に記載の方法。
【０１５４】
５４．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、４８．に記載の方法。
【０１５５】
５５．Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択されるＡβのフラグメントの有効なレジメンを投与しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療することを含んでなる、患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の治療方法。
【０１５６】
５６．Ａβ１−１１をもつ１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントを投与することをさらに含んでなる、５５．に記載の方法。
【０１５７】
５７．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するＡβのフラグメントが、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を該フラグメントが誘導する前に投与される、５６．に記載の方法。
【０１５８】
５８．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体を投与することをさらに含んでなる、４８．に記載の方法。
【０１５９】
５９．Ａβ１−１１をもつ１エピトープでＡβに特異的に結合する抗体が、残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導するフラグメントの前に投与される、４８．に記載の方法。
【０１６０】
６０．疾患が認識障害を特徴とする、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６１】
６１．疾患がアルツハイマー病である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６２】
６２．疾患がダウン症候群である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６３】
６３．疾患が軽度の認識障害である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６４】
６４．患者がヒトである、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６５】
６５．患者での誘導される抗体をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６６】
６６．患者が無症候性である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６７】
６７．患者が無症候性でありかつ該投与することが該患者の症状の悪化を阻害する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６８】
６８．患者が５０歳未満である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１６９】
６９．患者がアルツハイマー病に対する感受性を示す遺伝的危険因子を有する、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７０】
７０．患者が、該投与する段階を最初に実施した後５年間、検出可能な症状を発症しない
、６６．に記載の方法。
【０１７１】
７１．患者がアルツハイマー病に対する既知の危険因子を有しない、１．〜６８．および７０．のいずれかに記載の方法。
【０１７２】
７２．該レジメンが、複数の日に最低５０マイクログラムの該フラグメントの投薬量を投与することを含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７３】
７３．該フラグメントが、該フラグメントにより誘導される抗体のレベルを増大させるアジュバントとともに投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７４】
７４．該フラグメントが、腹腔内、経口、鼻内、皮下、筋肉内、局所若しくは静脈内で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７５】
７５．該フラグメントが、患者中で発現されて該フラグメントを産生する、該フラグメントをコードするポリヌクレオチドを投与することにより投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７６】
７６．患者の血液中の誘導された抗体のレベルについて患者をモニターすることをさらに含んでなる、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７７】
７７．該フラグメントが最低３か月の期間にわたり複数の投薬量で投与される、先行するいずれかに記載の方法。
【０１７８】
７８．投薬量が最低５０マイクログラムである、７７．に記載の方法。
【０１７９】
７９．該フラグメントが担体に結合されて複合物を形成する、５５．に記載の方法。
【０１８０】
８０．担体が異種ポリペプチドである、７９．のいずれかに記載の方法。
【０１８１】
８１．該フラグメントの複数のコピーが担体に結合されて複合物を形成する、７９．に記載の方法。
【０１８２】
８２．該フラグメントの複数のコピーが、相互に結合されている担体の複数のコピーに結合されている、７９．に記載の方法。
【０１８３】
８３．異種ポリペプチドがＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）を含んでなる、８０．に記載の方法。
【０１８４】
８４．異種ポリペプチドがアミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号１１）を含んでなる、８０．に記載の方法。
【０１８５】
８５．該ポリペプチドが異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答およびそれにより該フラグメントに対するＢ細胞応答を誘導する、８０．に記載の方法。
【０１８６】
８６．該フラグメント単独を投与することに関して誘導される抗体の力価および／若しくは結合親和性を高めるアジュバントを投与することをさらに含んでなる、５５．に記載の方法。
【０１８７】
８７．アジュバントおよびポリペプチドが組成物として一緒に投与される、８６．に記載
の方法。
【０１８８】
８８．アジュバントがポリペプチドの前に投与される、８６．に記載の方法。
【０１８９】
８９．アジュバントがポリペプチドの後に投与される、８６．に記載の方法。
【０１９０】
９０．アジュバントがミョウバンである、８６．に記載の方法。
【０１９１】
９１．アジュバントがＭＰＬである、８６．に記載の方法。
【０１９２】
９２．アジュバントがＱＳ−２１である、８６．に記載の方法。
【０１９３】
９３．アジュバントがフロイントの不完全アジュバントである、８６．に記載の方法。
【０１９４】
９４．該フラグメントの投薬量が１０マイクログラム以上である、先行するいずれかに記載の方法。
【０１９５】
９５．４８．〜５５．のいずれかで定義されるところのＡβのフラグメントおよびアジュバントを含んでなる製薬学的組成物。
【０１９６】
９６．Ａβのフラグメントが残基１〜１１の間の１個若しくはそれ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導することなく残基１２と４３との間の１個若しくはそれ以上のエピトープでＡβに特異的に結合する抗体を誘導し、かつ、該フラグメントがＡβ１３−２８、１７−２８、２５−３５、３５−４０若しくは３５−４２でなく、それにより誘導される抗体は患者中の可溶性Ａβに特異的に結合してそれにより可溶性Ａβからの脳中のＡβのアミロイド沈着物の形成を阻害しかつそれによりＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防を遂げる、医薬品の製造における患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患を治療若しくはその予防を遂げるのに有効なＡβのフラグメントの使用。
【０１９７】
９７．該フラグメントがＡβに対するＴ細胞応答を誘導する完全なＴ細胞エピトープを含まない、９６．に記載の使用。
【０１９８】
９８．誘導される抗体がＡβのアミロイド沈着物に特異的に結合する能力を欠く、９６．に記載の使用。
【０１９９】
９９．該フラグメントがＡβの５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、９６．に記載の使用。
【０２００】
１００．該フラグメントがＡβ１５−２４内の５〜１０個の隣接するアミノ酸のセグメントを含有する、９６．に記載の使用。
【０２０１】
１０１．該フラグメントが、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５およびＡβ１５−２５よりなる群から選択される、９６．に記載の使用。
【０２０２】
１０２．該フラグメントが、Ａβ３９、４０若しくは４１に特異的に結合することなくＡβ４２および／若しくはＡβ４３に特異的に結合する抗体を誘導するＣ末端フラグメントである、９６．に記載の使用。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者でのアルツハイマー病の処置若しくは予防を遂げるための医薬品の製造における、ｉ）Ａβ１６−２３よりなりかつアミノ酸配列ＫＬＶＦＦＡＥＤを有するＡβのフラグメント、若しくは
ｉｉ）Ａβ１６−２３よりなりかつアミノ酸配列ＫＬＶＦＦＡＥＤを有するＡβのフラグメントであって、該フラグメントは担体分子に結合されて複合物を形成し、この担体分子は該フラグメントに対する免疫応答を導き出すのを助ける、
の使用。
【請求項１】
患者でのアルツハイマー病の処置若しくは予防を遂げるための医薬品の製造における、ｉ）Ａβ１６−２３よりなりかつアミノ酸配列ＫＬＶＦＦＡＥＤを有するＡβのフラグメント、若しくは
ｉｉ）Ａβ１６−２３よりなりかつアミノ酸配列ＫＬＶＦＦＡＥＤを有するＡβのフラグメントであって、該フラグメントは担体分子に結合されて複合物を形成し、この担体分子は該フラグメントに対する免疫応答を導き出すのを助ける、
の使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１１−２０１９０２（Ｐ２０１１−２０１９０２Ａ）
【公開日】平成２３年１０月１３日（２０１１．１０．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１１２７８９（Ｐ２０１１−１１２７８９）
【出願日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【分割の表示】特願２００６−５０３２３３（Ｐ２００６−５０３２３３）の分割
【原出願日】平成１６年１月３１日（２００４．１．３１）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【出願人】（５１００２００２２）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１０月１３日（２０１１．１０．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【分割の表示】特願２００６−５０３２３３（Ｐ２００６−５０３２３３）の分割
【原出願日】平成１６年１月３１日（２００４．１．３１）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【出願人】（５１００２００２２）
【Ｆターム（参考）】
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