喘息の治療における抗−ＴＮＦα抗体
【課題】喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体の治療において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤の提供。
【解決手段】喘息または気道の炎症の治療に使用するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【解決手段】喘息または気道の炎症の治療に使用するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、１９９９年３月２日に出願した米国特許出願第０９／２６０，９５３号の継続出願である、１９９９年１２月１７日に出願した米国特許出願第０９／４６５，６９１号の一部継続出願である。これらの出願の全ての教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、気道の慢性的な炎症性疾患であり、それは通常、ぜん鳴(wheezing)、無呼吸(breathlessness)、胸部緊張(chest tightness) および咳などの再発性の症状の発現の形で、特に夜または早朝に現れる。これらの症状の発現は、通常、一般的だが多様な気道閉塞（airflow obstruction)に関連し、それは、自発的または治療のいずれかにより、しばしば可逆性である。
【０００３】
多くの細胞および細胞成分、特に肥満細胞、好酸球、Ｔリンパ球、マクロファージ、好中球および上皮細胞は、気道の炎症に役割を演じている。炎症は、血漿の滲出、浮腫、平滑筋肥大、粘液填塞(mucus plugging)および上皮変化と関連している。また、炎症は、種々の刺激に対して存在する気管支過応答(hyperresponsiveness) の関連する増大を引き起こす。
【０００４】
多様な気道閉塞および気管支機能亢進（特異的および非特異的）は、症候性の喘息における主要な特徴である。気道の炎症は、気道平滑筋の萎縮、微小血管の破裂および気管支過応答を導く。気道の反応性が高いと、症状はより重く、持続的になり、肺機能の日中の変動の規模がより大きくなる。気道の炎症が気管支の反応性に関連しているメカニズムは不明である。最近の研究では、喘息の気道において増加して発現されている腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）が、おそらく気道の過応答の増大に関連していることが示されている（非特許文献１：Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５））。例えば、組み換えＴＮＦαのヒツジへの静脈注射により、ヒスタミン誘導性の気道反応性の顕著な増強が生じた（非特許文献２：Ｗｈｅｅｌｅｒら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，６８：２５４２−２５４９（１９９０））が、一方、エアゾール化されたＴＮＦαにラットを曝すと、気道の過応答が増大し、わずかに気道の炎症を誘導した（非特許文献３：Ｋｉｐｓら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４５：３３２−３３６（１９９２））。正常なヒトの被験者において、組み換えＴＮＦαの吸入は気管支反応性の増大を引き起こした（非特許文献４：Ｙａｔｅｓら、Ｔｈｏｒａｘ，４８：１０８０（１９９３））が、一方、軽度のアレルギー性喘息の気管支の生検の免疫組織化学的解析では、ＴＮＦα免疫反応性の増大が気道の過応答と相関することが示された（非特許文献５：Ｈｏｓｓｅｌｅｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１４９：Ａ９５７（１９９４））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５）
【非特許文献２】Ｗｈｅｅｌｅｒら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，６８：２５４２−２５４９（１９９０）
【非特許文献３】Ｋｉｐｓら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４５：３３２−３３６（１９９２）
【非特許文献４】Ｙａｔｅｓら、Ｔｈｏｒａｘ，４８：１０８０（１９９３）
【非特許文献５】Ｈｏｓｓｅｌｅｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１４９：Ａ９５７（１９９４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
喘息は、非常に一般的である。工業国の人口のほぼ５％がこれに罹患しており、まだ診断不顕性であり、治療も不十分(undertreated)である。喘息の発生率や罹患率が上昇しているという証拠がある。これらの傾向は、有効な喘息の治療が増大しているにも係わらず生じており、現在の喘息の治療方法が不十分なものであるかまたは適切に使用されていないことを示している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、喘息に関連した臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療により改善されうるという発見に関する。結果として、本発明は、喘息、または例えば喘息に関連するもののような気道の炎症の治療を必要とする個体において、その治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。また、本発明は、例えば喘息に関連するもののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体においてその蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。好ましい態様において、抗体は、ｃＡ２モノクローナル抗体などのキメラ抗体である。
【０００８】
また、本発明は、治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を個体に投与する工程を有する、個体において喘息、または例えば喘息に関連するもののような気道の炎症を治療する方法を提供する。さらに本発明は、例えば喘息に関連するもののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において、その蓄積を減少させる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、卵白アルブミン（ＯＡ；５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおける気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液の炎症細胞の蓄積（全蓄積および好酸球の蓄積）を示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。＊は、ビヒクル処理した群と比較して統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。
【図２】図２は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおけるＢＡＬ液の好酸球の蓄積を示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。値は、全細胞％の平均±ＳＥＭとして示す。＊は、ビヒクル処理した群と比較して統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。
【図３】図３は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおける全血清ＩｇＥを示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、喘息に関連する炎症細胞、特に気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）好酸球、脈管周囲白血球、間質性白血球および胸膜白血球の肺への蓄積が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療で有意に減少されるという予期しない驚くべき発見に関する。炎症細胞、特に好酸球による肺への気道浸潤は、喘息に特有の特徴の一つである（Ｈｏｌｇａｔｅ，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．，６：１５０７−１５２０（１９９３））。アレルギー性喘息をもつ患者において行った気管支の生検検査は、好酸球および活性化されたＴリンパ球の数の増加が気道組織およびＢＡＬにあることを示す。
【００１１】
末梢血およびＢＡＬ液における好酸球数は、気管支過反応の程度および喘息の重篤度の両方と相関することが示されている（ＣｏｒｒｉｇａｎとＫａｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１３：５０１−５０７（１９９２））。好酸球は、その顆粒中に４つの塩基性タンパク質：主塩基性タンパク質、好酸球由来の神経毒、好酸球カチオン性タンパク質および好酸球ペルオキシダーゼを蓄積している。これらのタンパク質の放出は、喘息での気道組織の損傷および気管支過応答の原因であるかもしれない（Ｆｌａｖａｈａｎら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．, １３８：６８５−６８８（１９８８））。
【００１２】
Ｔリンパ球は、体液性（ＩｇＥ）免疫応答はもちろん、細胞介在性免疫を活性化するサイトカインを産生する。アレルギー性喘息は、ＴおよびＢリンパ球で制御されるＩｇＥ応答に依存し、肥満細胞に結合したＩｇＥ分子と抗原との相互作用により活性化される。
【００１３】
本明細書に記載の結果は、抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療が喘息または気道の炎症を治療するのに有益であることを示す。本明細書の結果は、喘息に関連した臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療により改善することができること示す。結果として、本発明は、個体へ抗−ＴＮＦα抗体または抗−ＴＮＦα抗体の抗原結合断片を投与する工程を含む、個体の喘息または気道の炎症の治療方法を提供する。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した気道の炎症を治療する方法を提供する。また、本発明は、炎症細胞の肺への蓄積を減少することが必要な個体において炎症細胞の肺への蓄積を減少する方法を提供する。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した炎症細胞の肺への蓄積を減少する方法を提供する。本明細書で用いるように、症状とは自覚的な感情をいう。例えば、症状には、患者が無呼吸、胸部緊張、不眠症を訴える場合が含まれる。本明細書で用いるように、症候とは客観的に観察されるものをいう。例えば、症候には、肺検査および他の研究室での試験の結果が含まれる。
【００１４】
腫瘍壊死因子α
ＴＮＦαは、１７ｋＤのタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：６９５１−６９５４（１９８７））。膜に結合した２６ｋＤの前駆体型ＴＮＦαも存在する（Ｋｒｉｅｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ，５３：４５−５３（１９８８））。ＴＮＦαの総説については、Ｂｅｕｔｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３２０（６０６３）：５８４−５８８（１９８６）；Ｏｌｄ, Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３０：６３０−６３２（１９８６）；およびＬｅら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，５６：２３４（１９８７）を参照のこと。
【００１５】
ＴＮＦαは、単球およびマクロファージ、リンパ球、特にＴ細胞系統の細胞（Ｖａｓｓａｌｌｉ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０：４１１−４５２（１９９２））、好中球（Ｄｕｂｒａｖｅｃら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６７５８−６７６１（１９９０））、上皮細胞（Ｏｈｋａｗａｒａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８５−３９２（１９９２））および肥満細胞（Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５）；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３４６：２７４−２７６（１９９０）；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：１０３−１０７（１９９１）；Ｂｒａｄｄｉｎｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：４７１−４８０（１９９４）；Ｗａｌｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：４２２０−４２２４（１９９１）；Ｂｅｎｙｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２２５３−２２５８（１９９１）；およびＯｈｋａｗａｒａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８５−３９２（１９９２））を含む、様々な細胞により産生される。好酸球もまた、ＴＮＦαの供給源として提案されている（Ｃｏｓｔａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１：２６７３−２６８４（１９９３））。
【００１６】
抗−ＴＮＦα抗体
本明細書で用いるように、抗−腫瘍壊死因子α抗体は、インビボでＴＮＦα活性を低減、ブロック、阻害、排除または妨害する。好ましい態様において、抗体は特異的に抗原に結合する。前記抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであってもよく、抗体という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方を包含することが意図される。ポリクローナルおよびモノクローナルという用語は、抗体調製物の均質性の程度をいい、特定の生産方法に限定することを意図するものではない。一本鎖抗体、およびキメラの、ヒト化されたまたは霊長類化された(primatized)（骨格変化を有するまたは有しないＣＤＲ移植した(grafted) 抗体）、あるいはベニア化(veneered)抗体、加えて異なる種由来の部分を含むキメラの、ＣＤＲ移植したまたはベニア化一本鎖抗体なども、本発明および「抗体」という用語に包含される。
【００１７】
特定の態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラ抗体である。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラモノクローナル抗体ｃＡ２（もしくはその抗原結合断片）またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはその抗原結合断片）であるか、キメラ抗体ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそれらの抗原結合断片のものと類似のエピトープ特異性を有し、キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそれらの抗原結合断片により結合されるものと同一のもしくは機能的に同等のヒトＴＮＦαのエピトープと反応する抗体または抗原結合断片が含まれる。キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２のものと類似したエピトープ特異性を有する抗体には、キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはそれらの抗原結合断片）と、ヒトＴＮＦαへの結合について競合することができる抗体が含まれる。かかる抗体または断片は、前記のようにして得ることができる。また、キメラ抗体ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２およびこれらの抗体を得る方法は、Ｌｅら、米国特許第５，６５６，２７２号；Ｌｅら、米国特許第５，６９８，１９５号；米国特許出願第０８／１９２，０９３号（１９９４年２月４日出願）；米国特許第５，９１９，４５２号；Ｌｅ，Ｊ．ら、国際公開第ＷＯ９２／１６５５３号パンフレット（１９９２年１０月１日公開）；Ｋｎｉｇｈｔ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０：１４４３−１４５３（１９９３）；およびＳｉｅｇｅｌ，Ｓ．Ａ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，７（１）：１５−２５（１９９５）に記載されており、これらの各参考文献は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。また、キメラ抗体ｃＡ２は、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）およびＲＥＭＩＣＡＤＥとして知られている。
【００１８】
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と表される、高親和性の中和マウス抗−ヒトＴＮＦα ＩｇＧ１抗体の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１、κ免疫グロブリンの定常領域とからなる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、同種異系抗体のエフェクター機能を向上させ、循環している血清の半減期を増大させ、抗体の免疫原性を低減する。キメラ抗体ｃＡ２の結合活性とエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領域に由来する。特定の態様おいて、マウス抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸の好ましい供給源は、Ａ２ハイブリドーマ細胞株である。
【００１９】
キメラＡ２（ｃＡ２）は、投与量に依存して、天然のヒトＴＮＦαおよび組み換えヒトＴＮＦαの両方の細胞毒性効果を中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組み換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２のアフィニティー定数を１．０４×１０10Ｍ-1と計算した。競合阻害により、モノクローナル抗体の特異性およびアフィニティーを決定するのに好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９２，１９９３）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７，１９９２，１９９３）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）に見ることができ、これらの参考文献は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。
【００２０】
特定の態様において、キメラ抗体ｃＡ２は、ｃ１６８Ａと表される細胞株により産生され、マウスモノクローナル抗体Ａ２は、ｃ１３４Ａと表される細胞株により産生される。
【００２１】
抗−ＴＮＦα抗体（またはその抗原結合断片）のさらなる例としては、当該技術分野において記載されている（例えば、米国特許第５，２３１，０２４号；Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号（１９９２年９月１１日出願）；Ｒａｔｈｊｅｎら、国際公開第ＷＯ９１／０２０７８号パンフレット（１９９１年２月２１日公開）；Ｒｕｂｉｎら、欧州特許公開公報第０ ２１８ ８６８号（１９８７年４月２２日公開）；Ｙｏｎｅら、欧州特許公開公報第０ ２８８ ０８８号（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，９６：５７−６２（１９８７）を参照のこと、これらの参考文献は参照によりそのまま本明細書に組み込まれる）。
【００２２】
適切な抗体が入手可能であるか、単離および／または組換え抗原またはその部分（合成ペプチド等の合成分子を含む）等の適切な免疫原、または組換え抗原を発現する宿主細胞で生じうる。さらに、トランスフェクトされた細胞等の組換え抗原を発現する細胞が、免疫原としてまたはレセプターに結合する抗体のスクリーンで使用されうる（例えば、Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：１７８３−１７８９（１９９４）；およびＣｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら、米国特許第５，４４０，０２１号明細書を参照のこと）。
【００２３】
免疫する抗原の調製、ならびにポリクローナルおよびモノクローナル抗体産生はいずれもの適切な技術を用いて行なわれうる。種々の方法が記載されている（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７（１９７５）およびＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６：５１１−５１９（１９７６）；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、２６６：５５０−５５２（１９７７）；Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、米国特許番号第４，１７２，１２４号明細書；Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）；およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２巻（補遺２７、’９４年夏）、Ａｕｓｕｂｅｌら、編、（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、１１章（１９９１）を参照のこと。）一般に、適切な不死細胞株（例えば、ＳＰ２／0 等の骨髄腫細胞株）を抗体産生細胞と融合することにより、ハイブリドーマが産生されうる。抗体産生細胞は、好ましくは、脾臓またはリンパ節のものであり、対象の抗原で免疫化した動物から得られうる。融合細胞（ハイブリドーマ）は、選択培地条件を使用して単離され、限界希釈によりクローン化されうる。所望の特異性をもつ抗体を産生する細胞が、適切なアッセイにより選択されうる（例えば、ＥＬＩＳＡ）。
【００２４】
ヒト抗体を含む、必要な特異性を有する抗体を産生または単離する他の適切な方法が使用されうる。例えばその方法は、例えばファージディスプレイ技術等により組換え抗体またはその部分がライブラリーから選択される方法を（例えば、Ｗｉｎｔｅｒｓら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、国際公開第９３／０６２１３号パンフレット；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；１９９４年６月２３日に公開された国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；Ｋｒｅｂｂｅｒら、米国特許第５，５１４，５４８号明細書；およびＤｏｗｅｒら、米国特許第５，４２７，９０８号明細書を参照のこと）、またはそれはヒト抗体の十分なレパートリーを産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）の免疫化に依存する方法（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１−２５５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、欧州特許第ＥＰ ０ ４６３ １５１ Ｂ１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５６９，８２５号明細書；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；およびＳｕｒａｎｉら、米国特許第５，５４５，８０７号明細書を参照のこと。）を含む。
【００２５】
一本鎖抗体、キメラ、ヒト化もしくは霊長類化（ＣＤＲ移植抗体、骨格変化有りまたは無し）、またはベニア化抗体、ならびに異なる種に由来する部分を含有するキメラ、ＣＤＲ移植またはベニア化一本鎖抗体の種々の部分が、通常の技術により共に化学的に結合され得、または遺伝子工学技術を用いて連続したタンパク質として調製されうる。例えば、キメラまたはヒト化鎖をコードする核酸が、連続したタンパク質を産生するために発現されうる。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許番号第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許番号第０，１２５，０２３ Ｂ１号明細書；Ｂｏｓｓら、米国特許番号第４，８１６，３９７号明細書；Ｂｏｓｓら、欧州特許番号第０，１２０，６９４ Ｂ１号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、国際公開第８６／０１５３３号パンフレット；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、欧州特許番号第０，１９４，２７６ Ｂ１号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許番号第５，２２５，５３９号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ、欧州特許番号第０，２３９，４００ Ｂ１号明細書；Ｑｕｅｅｎら、米国特許番号第５，５８５，０８９号明細書；Ｑｕｅｅｎら、欧州特許番号第０，４５１，２１６ Ｂ１号明細書；Ａｄａｉｒら、１９９１年７月１１日に公開された国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；Ａｄａｉｒら、欧州特許番号第０，４６０，１６７ Ｂ１号明細書；およびＰａｄｌａｎ，Ｅ．Ａ．ら、欧州特許番号第０，５１９，５９６ Ａ１号明細書を参照のこと。霊長類化抗体に関してはＮｅｗｍａｎ，Ｒ．ら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１４５５−１４６０（１９９２）、一本鎖抗体に関しては、Ｈｕｓｔｏｎら、米国特許第５，０９１，５１３号明細書；Ｈｕｓｔｏｎら、米国特許第５，１３２，４０５号明細書；Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第４，９４６，７７８号明細書およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８））もまた参照のこと。
【００２６】
さらに、キメラ、ヒト化、霊長類化、ベニア化または一本鎖抗体等の断片を含む抗体の抗原結合断片もまた、産生されうる。例えば、抗原結合断片としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）2 断片が挙げられる。抗原結合断片は、例えば、酵素開裂または組換え技術により産生されうる。例えば、パパインまたはペプシン開裂は、それぞれＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2 断片を生じうる。抗体はまた、１つまたはそれ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入される抗体遺伝子を用いる種々の切形型で産生されうる。例えば、Ｆ（ａｂ’）2 重鎖部分をコードするキメラ遺伝子が、重鎖のＣＨ1 領域およびヒンジドメインをコードするＤＮＡ配列を含むように設計されうる。
【００２７】
本発明の使用に適切な抗−ＴＮＦα抗体は、ＴＮＦαに対する高親和性結合および低毒性（ヒト抗−マウス抗体（ＨＡＭＡ）および／またはヒト抗−キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答を含む）により特徴付けられる。可変領域、定常領域および骨格等の個々の成分が個々におよび／または集合的に低免疫原性を保有する抗体は、本発明の使用に適切である。本発明に使用されうる抗体は、症状の優れた緩和および低毒性に対する効果をもって長期間患者を治療する能力によって特徴付けられる。低免疫原性および／または高親和性、ならびに他の規定されていない特性が、達成される治療結果に寄与されうる。「低い免疫原性」とは、治療された患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満で有意のＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ応答が生じるおよび／または治療された患者において低い力価を生じること（２重抗原酵素免疫アッセイで測定された約３００未満、好ましくは約１００未満）として本明細書で規定される（例えば、参照により本明細書に取り込まれる、Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）を参照のこと）。
【００２８】
本明細書で使用されるように、「抗原結合領域」という用語は、抗原と相互作用し、抗体にその特異性および抗原に対する親和性を与えるアミノ酸残基を含む抗体分子の部分をいう。抗原結合領域は、抗原結合残基の正しい構造を維持するのに必要な「骨格」アミノ酸残基を含む。
【００２９】
抗原という用語は、抗体により結合可能な分子または分子の部分をいい、それはさらに動物がその抗原のエピトープに選択的に結合可能な抗体を産生するようにすることができる。抗原は、１つまたは１つより多いエピトープを有しうる。
【００３０】
エピトープという用語は、１つ以上の抗体の抗原結合領域で、抗体により認識され結合されうる抗原の部分をいうことを意味する。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面群からなり、特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有する。「阻害および／または中和エピトープ」とは、抗体が結合した時、インビボまたはインビトロで、より好ましくはインビボでエピトープを含む分子の生物学的活性の損失を生じるエピトープを意味し、それにはＴＮＦαレセプターへのＴＮＦαの結合が含まれる。
【００３１】
投与
抗−ＴＮＦα抗体は種々の方法で患者に投与されうる。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は吸入により（例えば、吸入剤またはスプレーでまたは噴霧ミストとして）投与される。他の投与経路には、鼻腔内、経口、点滴および／またはボーラス注射を含む静脈内、皮内、経皮（例えば、遅放性ポリマーで）、筋内、腹腔内、皮下、局所、硬膜外、頬等の経路が含まれる。他の適切な投与経路を使用して、例えば、上皮または粘膜皮膚内層を通して吸収を達成することもできる。抗体はまた、遺伝子療法により投与され得、そこでは、例えば、インビボの治療レベルで特定のタンパク質またはペプチドを発現および分泌されるベクターを介して、特定の治療タンパク質またはペプチドをコードするＤＮＡ分子が患者に投与される。さらに、抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容されうる界面活性剤（例えば、グリセリド）、賦形剤（例えば、ラクトース）、担体、希釈剤およびビヒクル等の生物学的に活性な薬剤の他の成分と共に投与されうる。所望であれば、一定の甘味剤、香味剤および／または着色剤もまた添加されうる。
【００３２】
抗−ＴＮＦα抗体が、他の治療上の摂生または薬剤（例えば、多数の薬物摂生）の前に、それと同時に、またはそれに続けて、予防または治療的に個体に投与されうる。他の治療剤と同時に投与される抗−ＴＮＦα抗体は、同一または異なる組成で投与されうる。
【００３３】
抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容しうる非経口ビヒクルに関連して溶液、懸濁液、乳濁液または凍結乾燥粉体として調剤されうる。かかるビヒクルの例には、水、生理食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液、および５％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび固定油等の非水性ビヒクルもまた、使用されうる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉体は、等張性を維持する添加剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性を維持する添加剤（例えば、緩衝液および保存料）を含みうる。調剤は、通常使用される技術により滅菌されうる。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、鼻腔内経路（吸入による）を介して投与される。適切な薬剤の担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【００３４】
抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の「治療上有効量」は、個体に投与されると治療効力が十分な抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の量または投与量として、本明細書で規定される（例えば、喘息または気道の炎症に関連する症状または徴候、あるいは症状および徴候の両方を有意に低減または除去するのに十分な量）。個体に投与される投薬は、特定の抗−ＴＮＦα抗体の薬理的特性、投与の様式および経路；受容者の大きさ、年齢、性別、健康、体重および食物；治療される疾患または障害の症状の性質および程度、同時治療の種類、治療頻度および所望の効果を含む因子の変化により変化する。
【００３５】
治療上有効量は、単回でまたは分割投与（例えば、数日間、数週間、数カ月の間隔があけられた投与系列）で投与され得、あるいは症状の性質および程度、同時治療の種類および所望の効果等の因子に依存する、徐放形態で投与されうる。他の治療上の摂生または薬剤が、本発明に関連して使用されうる。確立された投薬範囲の調節および操作は当業者の能力内で十分である。
【００３６】
一度治療上有効量が投与されると、維持量の抗−ＴＮＦα抗体が個体に投与されうる。維持量は、治療上有効な投与量により得られる症状および／または徴候の低減または除去を維持するのに必要な抗−ＴＮＦα抗体の量である。単回または数日間または数週間の間隔があけられた投与系列（分割投与）の形態で、維持量が投与されうる。
【００３７】
２回目またはそれに続く投与が、初期または前に個体に投与された投与量と同一、それ未満またはそれより多い投薬で投与されうる。２回目またはそれに続く投与は、疾患もしくは疾患の症状の再発（relapse ）または拡大（flare-up）の間またはその直前が好ましい。例えば、２回目およびそれに続く投与が、前の投与から約１日〜３０週間の間に与えられうる。２回、３回、４回またはそれ以上の全投与が、必要な場合には個体に送達されうる。
【００３８】
内部投与に適切な投薬形態（組成物）は、１ユニット当たり約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの活性成分を一般的に含む。これらの製薬組成物において、活性成分は、組成物の全量に基づいて約０．５〜９５重量％の量で通常存在する。
【００３９】
ここで本発明を以下の実施例により説明するが、いかなる限定をも意図するものではない。
【実施例】
【００４０】
実施例１ アレルギー性喘息に対するマウスモデルにおけるモノクローナル抗−ＴＮＦα抗体の効果
マウスは、肺の薬理学研究で使用される標準種である。本明細書に記載される実験で使用されるアレルギー性喘息に対するマウスモデルは、その表現型特性においてヒト喘息によく似ている。特に、両方の疾患は気管支周囲の炎症細胞浸潤、特に肺への好酸球の流入により特徴付けられる。したがって、マウスモデルが、ヒト疾患に対する良好な近似として役に立つ。
【００４１】
抗−ＴＮＦα抗体
抗−ＴＮＦα抗体ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａが、セントコア社（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＭＡ）により構築された。ラット抗−マウスＴＮＦα抗体Ｖ１ｑを分泌するハイブリドーマ細胞を、ドイツ、ハイデルベルグのドイツガン研究センター（Ｇｅｒｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のペーター・クラマー（Ｐｅｔｅｒ Ｋｒａｍｍｅｒ）から得た（Ｅｃｈｔｅｎａｃｈｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３７６２−３７６６（１９９０））。Ｖ１ｑ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードする遺伝子をクローン化した。クローン化した重鎖を、４つの異なる遺伝子発現ベクターに挿入し、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ３、マウスＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａ定常領域のいずれかでｃＶ１ｑ重鎖をコードした。Ｖ１ｑ軽鎖遺伝子を他の発現ベクターに挿入し、ヒトκまたはマウスκ軽鎖定常領域のいずれかをコードした。
【００４２】
ＳＰ２／０骨髄種細胞を異なる重鎖および軽鎖遺伝子構築物にトランスフェクトした。標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用してヒトまたはマウスＩｇＧに対する細胞上清をアッセイすることにより、キメラＶ１ｑ（ｃＶ１ｑ）抗体を産生する細胞クローンを同定した。高産生クローンをサブクローン化して均一の細胞株を得た。マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンを、それぞれＣ２５７ＡおよびＣ２５８と呼ぶ。タンパク質Ａクロマトグラフィーにより、ｃＶ１ｑ抗体を細胞上清から精製した。
【００４３】
溶解性マウスＴＮＦαに対する親和性を測定し、ＷＥＨＩ細胞をマウスＴＮＦαの細胞毒性から保護する能力を試験し、マウスリンフォトキシンを中和または結合する能力を検査し、組換え膜貫通マウスＴＮＦαを発現する細胞の補体−媒介溶菌を誘発するマウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンの能力を比較し、ならびに致死性投与量のＬＰＳ（内毒素）からマウスを保護するヒトＩｇＧ１バージョンの能力を検査することにより、ｃＶ１ｑ抗体を特徴付けた。ｃＶ１ｑは、マウスＴＮＦ（ｍｕＴＮＦ）に高親和性で結合し、ＷＥＨＩ細胞の細胞毒性アッセイでｍｕＴＮＦを中和し、膜貫通ｍｕＴＮＦを発現する細胞のイソタイプ−依存様式の補体−媒介細胞毒性を誘発する。さらに、ｃＶ１ｑは、マウスリンフォトキシン細胞毒性活性を中和しなかった。ｃＶ１ｑ抗体のマウスＩｇＧ２ａバージョンを以下の実験手順で使用し、本明細書でｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体と呼ぶ。
【００４４】
実験手法
７週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス５０匹（体重１５〜２３ｇ）を、０．２ｍｌの滅菌生理食塩水中１．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, Inc., Purchase, NY）に混合した１０μｇの卵白アルブミン（ＯＡ；Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を、０、７および１４日目に腹腔内注射することにより免疫感作した。この懸濁液は、各マウスに腹腔内注射する１時間前に調製した。
【００４５】
免疫感作したマウス５０匹を５群（１０マウス／群）に分け、以下のように処理した：
【００４６】
【００４７】
２１日目にエーロゾル化ＯＡ（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc., Chicago, IL ））に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡで攻撃した。エーロゾルをＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）により作製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）チャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。
【００４８】
２４日目、ＯＡまたは生理食塩水のエーロゾル曝露の７２時間後、動物を眼窩後から（retroorbitally）採血し、全血清ＩｇＥ解析のために血清を回収し、凍結した。採血後、ウレタン（０．２ｇ／ｋｇ）で動物を麻酔し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行った。簡単には、気管を露出し、カニューレを挿入した。Ｃａ2+およびＭｇ2+を含有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する、２×０．５ｍｌの滅菌ハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ；Gibco, Grand Island, NY ）で肺を洗浄した。穏やかに吸引することにより洗浄液を３０秒後に回収し、動物ごとにプールした。試料を２０００ｒｐｍで１５分間５℃で遠心分離した。Ｃａ2+およびＭｇ2+を含有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する１ｍｌのＨＢＳＳで個々のペレットを再形成（reconstitute）した。ＢＡＬ全細胞数および白血球分画（好酸球）数を、Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ Ｈ１（Roche Diagnostics, Switzerland）およびサイトスライド（cytoslide ）のそれぞれを用いて測定した。
【００４９】
血清を各試料から分離し、ＥＬＩＳＡアッセイによりＩｇＥ抗体についてアッセイした。簡単には、マイクロタイタープレートを１００μｌのモノクローナルラット抗マウスＩｇＥ抗体でコートし、１時間（±１５分）、３７℃（±２°）で、および一晩４℃（±２°）でインキュベートした。プレートを３００μｌの１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で１時間（±１５分）、３７℃（±２°）でブロックした。プレートを５回洗浄した。リン酸緩衝生理食塩水＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０中の１％ＢＳＡ（ＰＢＳＴ）で、被検血清を１：３、１：６、１：１２および１：２４に希釈した。希釈した血清１００μｌを１組の(duplicate) ウェルに添加し、１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。プレート周囲の外側ウェルは、周辺(perimeter) 効果を回避するため使用しなかった。１００μｌのウサギ抗マウスＩｇＥを各ウェルに加え、プレートを１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。１００μｌのビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＧを各ウェルに加え、プレートを１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。ストレプトアビジンと結合したホースラディッシュペルオキシダーゼ（１００μｌ）を各ウェルに加え、プレートを１５分間（±２分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。各インキュベーションの間に、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。ＴＭＢペルオキシダーゼ基質（１００μｌ）を各ウェルに加え、３７℃（±２°）でインキュベートした。１００μｌの１Ｍリン酸を各ウェルに加え、反応を終了させた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｓｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（Sunnyvale, CA ）のＵＶＭａｘ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダーを用い、４５０ｎｍでの吸光度を読みとった。モノクローナルマウスＩｇＥ抗ＤＮＰ（ＳＰＥ−７）（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いた標準曲線の作成をアッセイと共に行った。
【００５０】
種々の処理群由来の全細胞、好酸球および血清ＩｇＥレベルを、ＡＮＯＶＡを用い、続いて多重比較検定（Zar, J.H., Biostatistical Analysis, Prentice Hall: Englewood, NJ, p.185 (1984)）により比較した。
【００５１】
全細胞、好酸球および血清ＩｇＥ
種々の処理群由来のＢＡＬ全細胞、好酸球および全血清ＩｇＥレベルを表１に示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】
図１に示すように、免疫感作したマウスへの２０分間のＯＡ（５％）曝露は、生理食塩水で攻撃したマウスと比べ、ＢＡＬ全細胞の約２倍の増加を生じた。気管支肺胞洗浄好酸球は、生理食塩水で攻撃したマウスで実質的に０から、ＯＡ攻撃７２時間後で０．４２±０．１１×１０6 に増加した（図１）。ＯＡ攻撃７２時間後のＢＡＬ全細胞の増加は、主に好酸球の増加に起因した（図２）。図３に示すように、全血清ＩｇＥレベルは、生理食塩水で攻撃した免疫感作マウスと比べ、免疫感作したマウスの抗原攻撃後で５６％増加した。
【００５４】
ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に陽性対照デキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ステロイド系抗炎症性）を投与すると、全細胞および好酸球の抗原誘導性の増加が、ビヒクル処理群と比べてそれぞれ３６％および６９％阻害された（図１）。デキサメタゾンはまた、ビヒクル処理群と比べて全血清ＩｇＥレベルの３０％低下を生じた（図３）。
【００５５】
抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで、抗原攻撃（ＯＡ攻撃）の１時間前ならびに抗原攻撃の２４時間後および４８時間後に静脈内投与すると、ビヒクル処理群と比べ、全細胞においてそれぞれ１８％および３７％の減少を生じた（図１）（１０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．５２±０．０９×１０6 ／ｍｌに対してビヒクル処理群において０．８３±０．１８×１０6 ／ｍｌ、有意差なし（ＮＳ））。また、ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体の投与を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで行なうと、ＢＡＬ好酸球における抗原誘導性（ＯＡ誘導性）の増加は、ビヒクル処理動物と比べてそれぞれ６７％および７９％阻害された（図１）（１０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．０９±０．０４×１０6 ／ｍｌに対してビヒクル処理群において０．４２±０．１１×１０6 ／ｍｌ、ｐ＜０．０５）。これらの結果は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積を調節することを示す。
【００５６】
要約すると、ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで、ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に静脈内投与すると、ビヒクル処理動物と比べ、それぞれ６７％および７９％のＢＡＬ好酸球の減少を生じた。したがって、抗ＴＮＦα抗体での処理は、ＢＡＬにおける全細胞および好酸球の数の有意な減少をもたらした。
【００５７】
薬物動態学
血清試料中におけるｃＶ１ｑ抗体濃度を、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）により解析した。簡単には、ｃＶ１ｑ抗体に特異的なモノクローナル抗イディオタイプ抗体（Lot SM970109；Centocor, Inc., Malvern, PA ）を９６穴マイクロタイタープレートにコートした。次いで、プレートを洗浄し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液でブロックし、非特異的結合を抑制した。このブロッキング溶液を除去した。ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体標準および希釈被検試料をプレートに加え、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、異なる抗ｃＶ１ｑモノクローナル抗体のビオチン化体をすべてのウェルに加え、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、第３のインキュベーション期間の際は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−ストレプトアビジンコンジュゲートとともにインキュベートした。最後の酵素的発色工程を、基質としてｏ−フェニレンジアミン（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いて行なった。４Ｎ硫酸の添加により発色を止め、マイクロタイタープレート分光光度計を用いて４９０ｎｍで吸光度を読み取った。ｃＶ１ｑ抗体標準濃度およびそれに対応する光学濃度値を用い、コンピュータ処理による、４変数方程式に対する最小二乗法フィットにより標準曲線を作成した。次いで、試料ｃＶ１ｑ抗体濃度を、標準曲線および該試料に対する血清希釈率を用いて決定した。
【００５８】
結果
１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑ抗体で処理したマウス由来の血清試料およびＢＡＬ試料中のｃＶ１ｑ抗体濃度を、それぞれ表２の上側および下側に示す。
【００５９】
【表２】
【００６０】
ビヒクル対照群（ｎ＝１０）由来の血清試料および気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料は、検出可能なレベルのｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ（ｃＶ１ｑ）抗体を有しなかった（＜０．０４μｇ／ｍｌ）。１ｍｇ／ｋｇでのｃＶ１ｑ抗体の反復（ｎ＝３）静脈投与後、これらの抗体処理マウス（ｎ＝１０）由来の血清試料は、ｃＶ１ｑ抗体濃度の平均±標準偏差が２７．１±５．０６μｇ／ｍｌであり；これらのマウス由来のＢＡＬ試料は、０．０６７±０．０３５μｇ／ｍｌの平均ｃＶ１ｑ抗体濃度を有した。１０ｍｇ／ｋｇの抗体の反復（ｎ＝３）静脈投与後の平均血清ｃＶ１ｑ抗体濃度（ｎ＝９）は３０２±４０．８μｇ／ｍｌであり；これらのマウス由来のＢＡＬ試料の平均ｃＶ１ｑ抗体濃度は０．５５±０．４８μｇ／ｍｌであった。
【００６１】
血清試料およびＢＡＬマウス試料由来のｃＶ１ｑ抗体の測定された濃度により、抗ＴＮＦα抗体での用量依存性処理、および静脈投与後のＢＡＬにおいて抗体が検出可能であることが確認される。
【００６２】
実施例２ マウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積：組織病理学的評価
免疫感作した雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウスの肺において組織病理学的評価を行なった。
【００６３】
実験手法
数週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス２０匹を、０．２ｍｌの滅菌生理食塩水中１．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, Inc., Purchase, NY）に混合した１０μｇのＯＡ（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を、０、７および１４日目に腹腔内注射することにより免疫感作した。この懸濁液は、各マウスに腹腔内注射する１時間前に調製した。
【００６４】
免疫感作したマウス２０匹を２群（１０マウス／群）に分けた。一方のマウス群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後および４８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体（グループ２）を静脈内投与した。他方のマウス群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後および４８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇのダルベッコＰＢＳ（Centocor, Inc., Malvern, PA ）（ビヒクル）（グループ１）を静脈内投与した。２１日目に、エーロゾル化したもの（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc., Chicago, IL ））に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡ（抗原）で攻撃した。エーロゾルをＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）により作製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）チャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。
【００６５】
抗原攻撃の７２時間後、マウスを屠殺し、肺を取り出して１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ；Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）で満たした。次いで、肺をパラフィンに包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。鏡検での変化を、変化の重度に応じて、１〜４段階（最小、微小／軽度、中等度および顕著／重度）で評価した。
【００６６】
結果
評価できなかった鏡検での変化は存在した(Present) （Ｐ）で示した。すべての鏡検所見を表３に示す。
【００６７】
【表３】
【００６８】
両被検群の個々のマウスの肺の３つの領域において、炎症細胞蓄積が存在し、それを数えた。白血球蓄積を、気管支領域の脈管周辺の脈管周囲組織、肺胞領域の間質組織および胸膜／胸膜下組織において評価した。両群の数匹のマウスは、気管支領域の脈管周辺に脈管周囲水腫を有した。両群の個々のマウスは、間質組織の毛細脈管においてエオシン好性フィブリン様沈着物を有した。グループ２の６番および１０番のマウスは、気管支周囲のリンパ節において、それぞれ中等度および重度のエオシン染色性マクロファージの蓄積を有した。グループ２の１０番のマウスはまた、胸膜組織および炎症細胞が混在した気管支周囲組織において、エオシン染色性マクロファージの重度の蓄積を有した。
【００６９】
グループとしてグループ１（ビヒクル処理マウス）と比較すると、組織病理学的解析では、グループ２のマウス（ｃＶ１ｑ処理マウス）において、脈管周囲白血球、間質白血球および胸膜白血球の数の有意な低下が示された。これらの結果は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積を調節することを示す。
【００７０】
実施例３：ステロイド耐性喘息のインフリキシマブ（Infliximab）治療
軽度の慢性閉塞性肺疾患および重度のステロイド依存性喘息を有する５３歳の高齢女性（Ｎ．Ｌ．）は、４０ｍｇの経口プレドニゾン、ステロイド吸入、イプラトロピウム吸入、アルブテロール吸入、サルメテロール（salmeterol）吸入、経口テオフィリンおよびジレウトン（zileuton）による集中治療にもかかわらず、数週間にわたって喘息悪化を呈した。この内容はあるが効果のなかったプログラムによる副作用は、体重増加、皮膚の薄層化および挫傷を含んだ。
【００７１】
インフリキシマブでの治療は表４に従って実施した。
【００７２】
【表４】
【００７３】
患者は、治療期間において、４回の注入で合計１，２００ｍｇのインフリキシマブを投与された。
【００７４】
結果
喘息症状の低減、夜間の目覚めの停止、ステロイド使用の低減および吸入治療依存の低減が認められた。この改善は、インフリキシマブ治療の２４時間以内に始まった。それを、表５の患者のダイアリーカードに記録する。
【００７５】
【表５】
【００７６】
最大流量スコア（peak flow score ）は、呼吸試験で測定したときの、患者について記録された最大空気流速度である。前処理の最大流量スコアが１６０〜２００ｍｌ／分であることとは対照的に、インフリキシマブ治療日程では、３４０〜４００ｍｌ／分のピークが記録された。低いスコアよりも、高い最大流量スコアの方がよい。
【００７７】
インフリキシマブ治療の間、アルブテロール吸入は必要でなかった。また、ステロイドの使用は、１日おきに１０ｍｇに低下した。
【００７８】
患者の生活の質は、インフリキシマブの投与を受けると大きく改善された。例えば、患者の生活の質の反応を比較すると、患者の喘息は良好に制御された状態となり、インフリキシマブ治療の第２日目以降、夜間の目覚めが消失した。
【００７９】
表６は、肺機能検査における客観的な改善を示す。
【００８０】
【表６】
【００８１】
努力肺活量（Forced voluntary capacity ）（ＦＶＣ）は、呼気流量の測定値である。１秒間における努力呼気肺活量（ＦＥＶ1 ）は、１秒間に患者が吐き出すことができる空気の最大量である。努力呼気流量（ＦＥＦ２５〜７５）は、１秒の第１四半期と第３四半期の間の流速測定値である。低値よりも高値の方がよい。観察されたＦＥＶ1 値は、約２年の治療の間で該患者について記録された最大値であった。
【００８２】
この５３歳の高齢女性患者は、インフリキシマブ治療の間、治療耐性喘息の兆候および症状の両方において迅速かつ継続的な改善を有した。インフリキシマブ治療は、耐性の低い治療または有効でない治療の必要性を低減または削減した。
【００８３】
本発明をその好ましい態様を参照して具体的に示し記載したが、当業者は、添付の請求の範囲により規定される本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく本発明において形態および詳細の種々の変更を行いうることを理解するだろう。
【００８４】
[1] 喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体の治療において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
[2] 炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において炎症細胞の肺への蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
[3] 抗体がキメラ抗体である上記[1]または[2]記載の使用。
[4] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合を競合的に阻害する、上記[3]記載の使用。
[5] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である上記[3]記載の使用。
[6] 治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を個体に投与する工程を含む、個体における喘息の治療方法。
[7] 抗体がキメラ抗体である上記[6]記載の方法。
[8] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合を競合的に阻害する、上記[7]記載の方法。
[9] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である上記[7]記載の方法。
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、１９９９年３月２日に出願した米国特許出願第０９／２６０，９５３号の継続出願である、１９９９年１２月１７日に出願した米国特許出願第０９／４６５，６９１号の一部継続出願である。これらの出願の全ての教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、気道の慢性的な炎症性疾患であり、それは通常、ぜん鳴(wheezing)、無呼吸(breathlessness)、胸部緊張(chest tightness) および咳などの再発性の症状の発現の形で、特に夜または早朝に現れる。これらの症状の発現は、通常、一般的だが多様な気道閉塞（airflow obstruction)に関連し、それは、自発的または治療のいずれかにより、しばしば可逆性である。
【０００３】
多くの細胞および細胞成分、特に肥満細胞、好酸球、Ｔリンパ球、マクロファージ、好中球および上皮細胞は、気道の炎症に役割を演じている。炎症は、血漿の滲出、浮腫、平滑筋肥大、粘液填塞(mucus plugging)および上皮変化と関連している。また、炎症は、種々の刺激に対して存在する気管支過応答(hyperresponsiveness) の関連する増大を引き起こす。
【０００４】
多様な気道閉塞および気管支機能亢進（特異的および非特異的）は、症候性の喘息における主要な特徴である。気道の炎症は、気道平滑筋の萎縮、微小血管の破裂および気管支過応答を導く。気道の反応性が高いと、症状はより重く、持続的になり、肺機能の日中の変動の規模がより大きくなる。気道の炎症が気管支の反応性に関連しているメカニズムは不明である。最近の研究では、喘息の気道において増加して発現されている腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）が、おそらく気道の過応答の増大に関連していることが示されている（非特許文献１：Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５））。例えば、組み換えＴＮＦαのヒツジへの静脈注射により、ヒスタミン誘導性の気道反応性の顕著な増強が生じた（非特許文献２：Ｗｈｅｅｌｅｒら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，６８：２５４２−２５４９（１９９０））が、一方、エアゾール化されたＴＮＦαにラットを曝すと、気道の過応答が増大し、わずかに気道の炎症を誘導した（非特許文献３：Ｋｉｐｓら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４５：３３２−３３６（１９９２））。正常なヒトの被験者において、組み換えＴＮＦαの吸入は気管支反応性の増大を引き起こした（非特許文献４：Ｙａｔｅｓら、Ｔｈｏｒａｘ，４８：１０８０（１９９３））が、一方、軽度のアレルギー性喘息の気管支の生検の免疫組織化学的解析では、ＴＮＦα免疫反応性の増大が気道の過応答と相関することが示された（非特許文献５：Ｈｏｓｓｅｌｅｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１４９：Ａ９５７（１９９４））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５）
【非特許文献２】Ｗｈｅｅｌｅｒら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，６８：２５４２−２５４９（１９９０）
【非特許文献３】Ｋｉｐｓら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４５：３３２−３３６（１９９２）
【非特許文献４】Ｙａｔｅｓら、Ｔｈｏｒａｘ，４８：１０８０（１９９３）
【非特許文献５】Ｈｏｓｓｅｌｅｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１４９：Ａ９５７（１９９４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
喘息は、非常に一般的である。工業国の人口のほぼ５％がこれに罹患しており、まだ診断不顕性であり、治療も不十分(undertreated)である。喘息の発生率や罹患率が上昇しているという証拠がある。これらの傾向は、有効な喘息の治療が増大しているにも係わらず生じており、現在の喘息の治療方法が不十分なものであるかまたは適切に使用されていないことを示している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、喘息に関連した臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療により改善されうるという発見に関する。結果として、本発明は、喘息、または例えば喘息に関連するもののような気道の炎症の治療を必要とする個体において、その治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。また、本発明は、例えば喘息に関連するもののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体においてその蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。好ましい態様において、抗体は、ｃＡ２モノクローナル抗体などのキメラ抗体である。
【０００８】
また、本発明は、治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を個体に投与する工程を有する、個体において喘息、または例えば喘息に関連するもののような気道の炎症を治療する方法を提供する。さらに本発明は、例えば喘息に関連するもののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において、その蓄積を減少させる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、卵白アルブミン（ＯＡ；５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおける気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液の炎症細胞の蓄積（全蓄積および好酸球の蓄積）を示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。＊は、ビヒクル処理した群と比較して統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。
【図２】図２は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおけるＢＡＬ液の好酸球の蓄積を示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。値は、全細胞％の平均±ＳＥＭとして示す。＊は、ビヒクル処理した群と比較して統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。
【図３】図３は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおける全血清ＩｇＥを示す棒グラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、喘息に関連する炎症細胞、特に気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）好酸球、脈管周囲白血球、間質性白血球および胸膜白血球の肺への蓄積が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療で有意に減少されるという予期しない驚くべき発見に関する。炎症細胞、特に好酸球による肺への気道浸潤は、喘息に特有の特徴の一つである（Ｈｏｌｇａｔｅ，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．，６：１５０７−１５２０（１９９３））。アレルギー性喘息をもつ患者において行った気管支の生検検査は、好酸球および活性化されたＴリンパ球の数の増加が気道組織およびＢＡＬにあることを示す。
【００１１】
末梢血およびＢＡＬ液における好酸球数は、気管支過反応の程度および喘息の重篤度の両方と相関することが示されている（ＣｏｒｒｉｇａｎとＫａｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１３：５０１−５０７（１９９２））。好酸球は、その顆粒中に４つの塩基性タンパク質：主塩基性タンパク質、好酸球由来の神経毒、好酸球カチオン性タンパク質および好酸球ペルオキシダーゼを蓄積している。これらのタンパク質の放出は、喘息での気道組織の損傷および気管支過応答の原因であるかもしれない（Ｆｌａｖａｈａｎら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．, １３８：６８５−６８８（１９８８））。
【００１２】
Ｔリンパ球は、体液性（ＩｇＥ）免疫応答はもちろん、細胞介在性免疫を活性化するサイトカインを産生する。アレルギー性喘息は、ＴおよびＢリンパ球で制御されるＩｇＥ応答に依存し、肥満細胞に結合したＩｇＥ分子と抗原との相互作用により活性化される。
【００１３】
本明細書に記載の結果は、抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療が喘息または気道の炎症を治療するのに有益であることを示す。本明細書の結果は、喘息に関連した臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療により改善することができること示す。結果として、本発明は、個体へ抗−ＴＮＦα抗体または抗−ＴＮＦα抗体の抗原結合断片を投与する工程を含む、個体の喘息または気道の炎症の治療方法を提供する。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した気道の炎症を治療する方法を提供する。また、本発明は、炎症細胞の肺への蓄積を減少することが必要な個体において炎症細胞の肺への蓄積を減少する方法を提供する。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した炎症細胞の肺への蓄積を減少する方法を提供する。本明細書で用いるように、症状とは自覚的な感情をいう。例えば、症状には、患者が無呼吸、胸部緊張、不眠症を訴える場合が含まれる。本明細書で用いるように、症候とは客観的に観察されるものをいう。例えば、症候には、肺検査および他の研究室での試験の結果が含まれる。
【００１４】
腫瘍壊死因子α
ＴＮＦαは、１７ｋＤのタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：６９５１−６９５４（１９８７））。膜に結合した２６ｋＤの前駆体型ＴＮＦαも存在する（Ｋｒｉｅｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ，５３：４５−５３（１９８８））。ＴＮＦαの総説については、Ｂｅｕｔｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３２０（６０６３）：５８４−５８８（１９８６）；Ｏｌｄ, Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３０：６３０−６３２（１９８６）；およびＬｅら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，５６：２３４（１９８７）を参照のこと。
【００１５】
ＴＮＦαは、単球およびマクロファージ、リンパ球、特にＴ細胞系統の細胞（Ｖａｓｓａｌｌｉ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０：４１１−４５２（１９９２））、好中球（Ｄｕｂｒａｖｅｃら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６７５８−６７６１（１９９０））、上皮細胞（Ｏｈｋａｗａｒａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８５−３９２（１９９２））および肥満細胞（Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５）；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３４６：２７４−２７６（１９９０）；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：１０３−１０７（１９９１）；Ｂｒａｄｄｉｎｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：４７１−４８０（１９９４）；Ｗａｌｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：４２２０−４２２４（１９９１）；Ｂｅｎｙｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２２５３−２２５８（１９９１）；およびＯｈｋａｗａｒａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８５−３９２（１９９２））を含む、様々な細胞により産生される。好酸球もまた、ＴＮＦαの供給源として提案されている（Ｃｏｓｔａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１：２６７３−２６８４（１９９３））。
【００１６】
抗−ＴＮＦα抗体
本明細書で用いるように、抗−腫瘍壊死因子α抗体は、インビボでＴＮＦα活性を低減、ブロック、阻害、排除または妨害する。好ましい態様において、抗体は特異的に抗原に結合する。前記抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであってもよく、抗体という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方を包含することが意図される。ポリクローナルおよびモノクローナルという用語は、抗体調製物の均質性の程度をいい、特定の生産方法に限定することを意図するものではない。一本鎖抗体、およびキメラの、ヒト化されたまたは霊長類化された(primatized)（骨格変化を有するまたは有しないＣＤＲ移植した(grafted) 抗体）、あるいはベニア化(veneered)抗体、加えて異なる種由来の部分を含むキメラの、ＣＤＲ移植したまたはベニア化一本鎖抗体なども、本発明および「抗体」という用語に包含される。
【００１７】
特定の態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラ抗体である。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラモノクローナル抗体ｃＡ２（もしくはその抗原結合断片）またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはその抗原結合断片）であるか、キメラ抗体ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそれらの抗原結合断片のものと類似のエピトープ特異性を有し、キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそれらの抗原結合断片により結合されるものと同一のもしくは機能的に同等のヒトＴＮＦαのエピトープと反応する抗体または抗原結合断片が含まれる。キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２のものと類似したエピトープ特異性を有する抗体には、キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはそれらの抗原結合断片）と、ヒトＴＮＦαへの結合について競合することができる抗体が含まれる。かかる抗体または断片は、前記のようにして得ることができる。また、キメラ抗体ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２およびこれらの抗体を得る方法は、Ｌｅら、米国特許第５，６５６，２７２号；Ｌｅら、米国特許第５，６９８，１９５号；米国特許出願第０８／１９２，０９３号（１９９４年２月４日出願）；米国特許第５，９１９，４５２号；Ｌｅ，Ｊ．ら、国際公開第ＷＯ９２／１６５５３号パンフレット（１９９２年１０月１日公開）；Ｋｎｉｇｈｔ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０：１４４３−１４５３（１９９３）；およびＳｉｅｇｅｌ，Ｓ．Ａ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，７（１）：１５−２５（１９９５）に記載されており、これらの各参考文献は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。また、キメラ抗体ｃＡ２は、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）およびＲＥＭＩＣＡＤＥとして知られている。
【００１８】
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と表される、高親和性の中和マウス抗−ヒトＴＮＦα ＩｇＧ１抗体の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１、κ免疫グロブリンの定常領域とからなる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、同種異系抗体のエフェクター機能を向上させ、循環している血清の半減期を増大させ、抗体の免疫原性を低減する。キメラ抗体ｃＡ２の結合活性とエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領域に由来する。特定の態様おいて、マウス抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸の好ましい供給源は、Ａ２ハイブリドーマ細胞株である。
【００１９】
キメラＡ２（ｃＡ２）は、投与量に依存して、天然のヒトＴＮＦαおよび組み換えヒトＴＮＦαの両方の細胞毒性効果を中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組み換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２のアフィニティー定数を１．０４×１０10Ｍ-1と計算した。競合阻害により、モノクローナル抗体の特異性およびアフィニティーを決定するのに好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９２，１９９３）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７，１９９２，１９９３）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）に見ることができ、これらの参考文献は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。
【００２０】
特定の態様において、キメラ抗体ｃＡ２は、ｃ１６８Ａと表される細胞株により産生され、マウスモノクローナル抗体Ａ２は、ｃ１３４Ａと表される細胞株により産生される。
【００２１】
抗−ＴＮＦα抗体（またはその抗原結合断片）のさらなる例としては、当該技術分野において記載されている（例えば、米国特許第５，２３１，０２４号；Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号（１９９２年９月１１日出願）；Ｒａｔｈｊｅｎら、国際公開第ＷＯ９１／０２０７８号パンフレット（１９９１年２月２１日公開）；Ｒｕｂｉｎら、欧州特許公開公報第０ ２１８ ８６８号（１９８７年４月２２日公開）；Ｙｏｎｅら、欧州特許公開公報第０ ２８８ ０８８号（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，９６：５７−６２（１９８７）を参照のこと、これらの参考文献は参照によりそのまま本明細書に組み込まれる）。
【００２２】
適切な抗体が入手可能であるか、単離および／または組換え抗原またはその部分（合成ペプチド等の合成分子を含む）等の適切な免疫原、または組換え抗原を発現する宿主細胞で生じうる。さらに、トランスフェクトされた細胞等の組換え抗原を発現する細胞が、免疫原としてまたはレセプターに結合する抗体のスクリーンで使用されうる（例えば、Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：１７８３−１７８９（１９９４）；およびＣｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら、米国特許第５，４４０，０２１号明細書を参照のこと）。
【００２３】
免疫する抗原の調製、ならびにポリクローナルおよびモノクローナル抗体産生はいずれもの適切な技術を用いて行なわれうる。種々の方法が記載されている（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７（１９７５）およびＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６：５１１−５１９（１９７６）；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、２６６：５５０−５５２（１９７７）；Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、米国特許番号第４，１７２，１２４号明細書；Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）；およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２巻（補遺２７、’９４年夏）、Ａｕｓｕｂｅｌら、編、（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、１１章（１９９１）を参照のこと。）一般に、適切な不死細胞株（例えば、ＳＰ２／0 等の骨髄腫細胞株）を抗体産生細胞と融合することにより、ハイブリドーマが産生されうる。抗体産生細胞は、好ましくは、脾臓またはリンパ節のものであり、対象の抗原で免疫化した動物から得られうる。融合細胞（ハイブリドーマ）は、選択培地条件を使用して単離され、限界希釈によりクローン化されうる。所望の特異性をもつ抗体を産生する細胞が、適切なアッセイにより選択されうる（例えば、ＥＬＩＳＡ）。
【００２４】
ヒト抗体を含む、必要な特異性を有する抗体を産生または単離する他の適切な方法が使用されうる。例えばその方法は、例えばファージディスプレイ技術等により組換え抗体またはその部分がライブラリーから選択される方法を（例えば、Ｗｉｎｔｅｒｓら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、国際公開第９３／０６２１３号パンフレット；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；１９９４年６月２３日に公開された国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；Ｋｒｅｂｂｅｒら、米国特許第５，５１４，５４８号明細書；およびＤｏｗｅｒら、米国特許第５，４２７，９０８号明細書を参照のこと）、またはそれはヒト抗体の十分なレパートリーを産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）の免疫化に依存する方法（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１−２５５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、欧州特許第ＥＰ ０ ４６３ １５１ Ｂ１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５６９，８２５号明細書；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；およびＳｕｒａｎｉら、米国特許第５，５４５，８０７号明細書を参照のこと。）を含む。
【００２５】
一本鎖抗体、キメラ、ヒト化もしくは霊長類化（ＣＤＲ移植抗体、骨格変化有りまたは無し）、またはベニア化抗体、ならびに異なる種に由来する部分を含有するキメラ、ＣＤＲ移植またはベニア化一本鎖抗体の種々の部分が、通常の技術により共に化学的に結合され得、または遺伝子工学技術を用いて連続したタンパク質として調製されうる。例えば、キメラまたはヒト化鎖をコードする核酸が、連続したタンパク質を産生するために発現されうる。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許番号第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許番号第０，１２５，０２３ Ｂ１号明細書；Ｂｏｓｓら、米国特許番号第４，８１６，３９７号明細書；Ｂｏｓｓら、欧州特許番号第０，１２０，６９４ Ｂ１号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、国際公開第８６／０１５３３号パンフレット；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、欧州特許番号第０，１９４，２７６ Ｂ１号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許番号第５，２２５，５３９号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ、欧州特許番号第０，２３９，４００ Ｂ１号明細書；Ｑｕｅｅｎら、米国特許番号第５，５８５，０８９号明細書；Ｑｕｅｅｎら、欧州特許番号第０，４５１，２１６ Ｂ１号明細書；Ａｄａｉｒら、１９９１年７月１１日に公開された国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；Ａｄａｉｒら、欧州特許番号第０，４６０，１６７ Ｂ１号明細書；およびＰａｄｌａｎ，Ｅ．Ａ．ら、欧州特許番号第０，５１９，５９６ Ａ１号明細書を参照のこと。霊長類化抗体に関してはＮｅｗｍａｎ，Ｒ．ら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１４５５−１４６０（１９９２）、一本鎖抗体に関しては、Ｈｕｓｔｏｎら、米国特許第５，０９１，５１３号明細書；Ｈｕｓｔｏｎら、米国特許第５，１３２，４０５号明細書；Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第４，９４６，７７８号明細書およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８））もまた参照のこと。
【００２６】
さらに、キメラ、ヒト化、霊長類化、ベニア化または一本鎖抗体等の断片を含む抗体の抗原結合断片もまた、産生されうる。例えば、抗原結合断片としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）2 断片が挙げられる。抗原結合断片は、例えば、酵素開裂または組換え技術により産生されうる。例えば、パパインまたはペプシン開裂は、それぞれＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2 断片を生じうる。抗体はまた、１つまたはそれ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入される抗体遺伝子を用いる種々の切形型で産生されうる。例えば、Ｆ（ａｂ’）2 重鎖部分をコードするキメラ遺伝子が、重鎖のＣＨ1 領域およびヒンジドメインをコードするＤＮＡ配列を含むように設計されうる。
【００２７】
本発明の使用に適切な抗−ＴＮＦα抗体は、ＴＮＦαに対する高親和性結合および低毒性（ヒト抗−マウス抗体（ＨＡＭＡ）および／またはヒト抗−キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答を含む）により特徴付けられる。可変領域、定常領域および骨格等の個々の成分が個々におよび／または集合的に低免疫原性を保有する抗体は、本発明の使用に適切である。本発明に使用されうる抗体は、症状の優れた緩和および低毒性に対する効果をもって長期間患者を治療する能力によって特徴付けられる。低免疫原性および／または高親和性、ならびに他の規定されていない特性が、達成される治療結果に寄与されうる。「低い免疫原性」とは、治療された患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満で有意のＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ応答が生じるおよび／または治療された患者において低い力価を生じること（２重抗原酵素免疫アッセイで測定された約３００未満、好ましくは約１００未満）として本明細書で規定される（例えば、参照により本明細書に取り込まれる、Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）を参照のこと）。
【００２８】
本明細書で使用されるように、「抗原結合領域」という用語は、抗原と相互作用し、抗体にその特異性および抗原に対する親和性を与えるアミノ酸残基を含む抗体分子の部分をいう。抗原結合領域は、抗原結合残基の正しい構造を維持するのに必要な「骨格」アミノ酸残基を含む。
【００２９】
抗原という用語は、抗体により結合可能な分子または分子の部分をいい、それはさらに動物がその抗原のエピトープに選択的に結合可能な抗体を産生するようにすることができる。抗原は、１つまたは１つより多いエピトープを有しうる。
【００３０】
エピトープという用語は、１つ以上の抗体の抗原結合領域で、抗体により認識され結合されうる抗原の部分をいうことを意味する。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面群からなり、特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有する。「阻害および／または中和エピトープ」とは、抗体が結合した時、インビボまたはインビトロで、より好ましくはインビボでエピトープを含む分子の生物学的活性の損失を生じるエピトープを意味し、それにはＴＮＦαレセプターへのＴＮＦαの結合が含まれる。
【００３１】
投与
抗−ＴＮＦα抗体は種々の方法で患者に投与されうる。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は吸入により（例えば、吸入剤またはスプレーでまたは噴霧ミストとして）投与される。他の投与経路には、鼻腔内、経口、点滴および／またはボーラス注射を含む静脈内、皮内、経皮（例えば、遅放性ポリマーで）、筋内、腹腔内、皮下、局所、硬膜外、頬等の経路が含まれる。他の適切な投与経路を使用して、例えば、上皮または粘膜皮膚内層を通して吸収を達成することもできる。抗体はまた、遺伝子療法により投与され得、そこでは、例えば、インビボの治療レベルで特定のタンパク質またはペプチドを発現および分泌されるベクターを介して、特定の治療タンパク質またはペプチドをコードするＤＮＡ分子が患者に投与される。さらに、抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容されうる界面活性剤（例えば、グリセリド）、賦形剤（例えば、ラクトース）、担体、希釈剤およびビヒクル等の生物学的に活性な薬剤の他の成分と共に投与されうる。所望であれば、一定の甘味剤、香味剤および／または着色剤もまた添加されうる。
【００３２】
抗−ＴＮＦα抗体が、他の治療上の摂生または薬剤（例えば、多数の薬物摂生）の前に、それと同時に、またはそれに続けて、予防または治療的に個体に投与されうる。他の治療剤と同時に投与される抗−ＴＮＦα抗体は、同一または異なる組成で投与されうる。
【００３３】
抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容しうる非経口ビヒクルに関連して溶液、懸濁液、乳濁液または凍結乾燥粉体として調剤されうる。かかるビヒクルの例には、水、生理食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液、および５％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび固定油等の非水性ビヒクルもまた、使用されうる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉体は、等張性を維持する添加剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性を維持する添加剤（例えば、緩衝液および保存料）を含みうる。調剤は、通常使用される技術により滅菌されうる。好ましい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、鼻腔内経路（吸入による）を介して投与される。適切な薬剤の担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【００３４】
抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の「治療上有効量」は、個体に投与されると治療効力が十分な抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の量または投与量として、本明細書で規定される（例えば、喘息または気道の炎症に関連する症状または徴候、あるいは症状および徴候の両方を有意に低減または除去するのに十分な量）。個体に投与される投薬は、特定の抗−ＴＮＦα抗体の薬理的特性、投与の様式および経路；受容者の大きさ、年齢、性別、健康、体重および食物；治療される疾患または障害の症状の性質および程度、同時治療の種類、治療頻度および所望の効果を含む因子の変化により変化する。
【００３５】
治療上有効量は、単回でまたは分割投与（例えば、数日間、数週間、数カ月の間隔があけられた投与系列）で投与され得、あるいは症状の性質および程度、同時治療の種類および所望の効果等の因子に依存する、徐放形態で投与されうる。他の治療上の摂生または薬剤が、本発明に関連して使用されうる。確立された投薬範囲の調節および操作は当業者の能力内で十分である。
【００３６】
一度治療上有効量が投与されると、維持量の抗−ＴＮＦα抗体が個体に投与されうる。維持量は、治療上有効な投与量により得られる症状および／または徴候の低減または除去を維持するのに必要な抗−ＴＮＦα抗体の量である。単回または数日間または数週間の間隔があけられた投与系列（分割投与）の形態で、維持量が投与されうる。
【００３７】
２回目またはそれに続く投与が、初期または前に個体に投与された投与量と同一、それ未満またはそれより多い投薬で投与されうる。２回目またはそれに続く投与は、疾患もしくは疾患の症状の再発（relapse ）または拡大（flare-up）の間またはその直前が好ましい。例えば、２回目およびそれに続く投与が、前の投与から約１日〜３０週間の間に与えられうる。２回、３回、４回またはそれ以上の全投与が、必要な場合には個体に送達されうる。
【００３８】
内部投与に適切な投薬形態（組成物）は、１ユニット当たり約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの活性成分を一般的に含む。これらの製薬組成物において、活性成分は、組成物の全量に基づいて約０．５〜９５重量％の量で通常存在する。
【００３９】
ここで本発明を以下の実施例により説明するが、いかなる限定をも意図するものではない。
【実施例】
【００４０】
実施例１ アレルギー性喘息に対するマウスモデルにおけるモノクローナル抗−ＴＮＦα抗体の効果
マウスは、肺の薬理学研究で使用される標準種である。本明細書に記載される実験で使用されるアレルギー性喘息に対するマウスモデルは、その表現型特性においてヒト喘息によく似ている。特に、両方の疾患は気管支周囲の炎症細胞浸潤、特に肺への好酸球の流入により特徴付けられる。したがって、マウスモデルが、ヒト疾患に対する良好な近似として役に立つ。
【００４１】
抗−ＴＮＦα抗体
抗−ＴＮＦα抗体ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａが、セントコア社（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＭＡ）により構築された。ラット抗−マウスＴＮＦα抗体Ｖ１ｑを分泌するハイブリドーマ細胞を、ドイツ、ハイデルベルグのドイツガン研究センター（Ｇｅｒｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のペーター・クラマー（Ｐｅｔｅｒ Ｋｒａｍｍｅｒ）から得た（Ｅｃｈｔｅｎａｃｈｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３７６２−３７６６（１９９０））。Ｖ１ｑ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードする遺伝子をクローン化した。クローン化した重鎖を、４つの異なる遺伝子発現ベクターに挿入し、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ３、マウスＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａ定常領域のいずれかでｃＶ１ｑ重鎖をコードした。Ｖ１ｑ軽鎖遺伝子を他の発現ベクターに挿入し、ヒトκまたはマウスκ軽鎖定常領域のいずれかをコードした。
【００４２】
ＳＰ２／０骨髄種細胞を異なる重鎖および軽鎖遺伝子構築物にトランスフェクトした。標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用してヒトまたはマウスＩｇＧに対する細胞上清をアッセイすることにより、キメラＶ１ｑ（ｃＶ１ｑ）抗体を産生する細胞クローンを同定した。高産生クローンをサブクローン化して均一の細胞株を得た。マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンを、それぞれＣ２５７ＡおよびＣ２５８と呼ぶ。タンパク質Ａクロマトグラフィーにより、ｃＶ１ｑ抗体を細胞上清から精製した。
【００４３】
溶解性マウスＴＮＦαに対する親和性を測定し、ＷＥＨＩ細胞をマウスＴＮＦαの細胞毒性から保護する能力を試験し、マウスリンフォトキシンを中和または結合する能力を検査し、組換え膜貫通マウスＴＮＦαを発現する細胞の補体−媒介溶菌を誘発するマウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンの能力を比較し、ならびに致死性投与量のＬＰＳ（内毒素）からマウスを保護するヒトＩｇＧ１バージョンの能力を検査することにより、ｃＶ１ｑ抗体を特徴付けた。ｃＶ１ｑは、マウスＴＮＦ（ｍｕＴＮＦ）に高親和性で結合し、ＷＥＨＩ細胞の細胞毒性アッセイでｍｕＴＮＦを中和し、膜貫通ｍｕＴＮＦを発現する細胞のイソタイプ−依存様式の補体−媒介細胞毒性を誘発する。さらに、ｃＶ１ｑは、マウスリンフォトキシン細胞毒性活性を中和しなかった。ｃＶ１ｑ抗体のマウスＩｇＧ２ａバージョンを以下の実験手順で使用し、本明細書でｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体と呼ぶ。
【００４４】
実験手法
７週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス５０匹（体重１５〜２３ｇ）を、０．２ｍｌの滅菌生理食塩水中１．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, Inc., Purchase, NY）に混合した１０μｇの卵白アルブミン（ＯＡ；Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を、０、７および１４日目に腹腔内注射することにより免疫感作した。この懸濁液は、各マウスに腹腔内注射する１時間前に調製した。
【００４５】
免疫感作したマウス５０匹を５群（１０マウス／群）に分け、以下のように処理した：
【００４６】
【００４７】
２１日目にエーロゾル化ＯＡ（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc., Chicago, IL ））に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡで攻撃した。エーロゾルをＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）により作製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）チャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。
【００４８】
２４日目、ＯＡまたは生理食塩水のエーロゾル曝露の７２時間後、動物を眼窩後から（retroorbitally）採血し、全血清ＩｇＥ解析のために血清を回収し、凍結した。採血後、ウレタン（０．２ｇ／ｋｇ）で動物を麻酔し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行った。簡単には、気管を露出し、カニューレを挿入した。Ｃａ2+およびＭｇ2+を含有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する、２×０．５ｍｌの滅菌ハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ；Gibco, Grand Island, NY ）で肺を洗浄した。穏やかに吸引することにより洗浄液を３０秒後に回収し、動物ごとにプールした。試料を２０００ｒｐｍで１５分間５℃で遠心分離した。Ｃａ2+およびＭｇ2+を含有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する１ｍｌのＨＢＳＳで個々のペレットを再形成（reconstitute）した。ＢＡＬ全細胞数および白血球分画（好酸球）数を、Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ Ｈ１（Roche Diagnostics, Switzerland）およびサイトスライド（cytoslide ）のそれぞれを用いて測定した。
【００４９】
血清を各試料から分離し、ＥＬＩＳＡアッセイによりＩｇＥ抗体についてアッセイした。簡単には、マイクロタイタープレートを１００μｌのモノクローナルラット抗マウスＩｇＥ抗体でコートし、１時間（±１５分）、３７℃（±２°）で、および一晩４℃（±２°）でインキュベートした。プレートを３００μｌの１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で１時間（±１５分）、３７℃（±２°）でブロックした。プレートを５回洗浄した。リン酸緩衝生理食塩水＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０中の１％ＢＳＡ（ＰＢＳＴ）で、被検血清を１：３、１：６、１：１２および１：２４に希釈した。希釈した血清１００μｌを１組の(duplicate) ウェルに添加し、１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。プレート周囲の外側ウェルは、周辺(perimeter) 効果を回避するため使用しなかった。１００μｌのウサギ抗マウスＩｇＥを各ウェルに加え、プレートを１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。１００μｌのビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＧを各ウェルに加え、プレートを１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。ストレプトアビジンと結合したホースラディッシュペルオキシダーゼ（１００μｌ）を各ウェルに加え、プレートを１５分間（±２分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。各インキュベーションの間に、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。ＴＭＢペルオキシダーゼ基質（１００μｌ）を各ウェルに加え、３７℃（±２°）でインキュベートした。１００μｌの１Ｍリン酸を各ウェルに加え、反応を終了させた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｓｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（Sunnyvale, CA ）のＵＶＭａｘ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダーを用い、４５０ｎｍでの吸光度を読みとった。モノクローナルマウスＩｇＥ抗ＤＮＰ（ＳＰＥ−７）（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いた標準曲線の作成をアッセイと共に行った。
【００５０】
種々の処理群由来の全細胞、好酸球および血清ＩｇＥレベルを、ＡＮＯＶＡを用い、続いて多重比較検定（Zar, J.H., Biostatistical Analysis, Prentice Hall: Englewood, NJ, p.185 (1984)）により比較した。
【００５１】
全細胞、好酸球および血清ＩｇＥ
種々の処理群由来のＢＡＬ全細胞、好酸球および全血清ＩｇＥレベルを表１に示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】
図１に示すように、免疫感作したマウスへの２０分間のＯＡ（５％）曝露は、生理食塩水で攻撃したマウスと比べ、ＢＡＬ全細胞の約２倍の増加を生じた。気管支肺胞洗浄好酸球は、生理食塩水で攻撃したマウスで実質的に０から、ＯＡ攻撃７２時間後で０．４２±０．１１×１０6 に増加した（図１）。ＯＡ攻撃７２時間後のＢＡＬ全細胞の増加は、主に好酸球の増加に起因した（図２）。図３に示すように、全血清ＩｇＥレベルは、生理食塩水で攻撃した免疫感作マウスと比べ、免疫感作したマウスの抗原攻撃後で５６％増加した。
【００５４】
ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に陽性対照デキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ステロイド系抗炎症性）を投与すると、全細胞および好酸球の抗原誘導性の増加が、ビヒクル処理群と比べてそれぞれ３６％および６９％阻害された（図１）。デキサメタゾンはまた、ビヒクル処理群と比べて全血清ＩｇＥレベルの３０％低下を生じた（図３）。
【００５５】
抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで、抗原攻撃（ＯＡ攻撃）の１時間前ならびに抗原攻撃の２４時間後および４８時間後に静脈内投与すると、ビヒクル処理群と比べ、全細胞においてそれぞれ１８％および３７％の減少を生じた（図１）（１０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．５２±０．０９×１０6 ／ｍｌに対してビヒクル処理群において０．８３±０．１８×１０6 ／ｍｌ、有意差なし（ＮＳ））。また、ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体の投与を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで行なうと、ＢＡＬ好酸球における抗原誘導性（ＯＡ誘導性）の増加は、ビヒクル処理動物と比べてそれぞれ６７％および７９％阻害された（図１）（１０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．０９±０．０４×１０6 ／ｍｌに対してビヒクル処理群において０．４２±０．１１×１０6 ／ｍｌ、ｐ＜０．０５）。これらの結果は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積を調節することを示す。
【００５６】
要約すると、ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで、ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に静脈内投与すると、ビヒクル処理動物と比べ、それぞれ６７％および７９％のＢＡＬ好酸球の減少を生じた。したがって、抗ＴＮＦα抗体での処理は、ＢＡＬにおける全細胞および好酸球の数の有意な減少をもたらした。
【００５７】
薬物動態学
血清試料中におけるｃＶ１ｑ抗体濃度を、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）により解析した。簡単には、ｃＶ１ｑ抗体に特異的なモノクローナル抗イディオタイプ抗体（Lot SM970109；Centocor, Inc., Malvern, PA ）を９６穴マイクロタイタープレートにコートした。次いで、プレートを洗浄し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液でブロックし、非特異的結合を抑制した。このブロッキング溶液を除去した。ｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体標準および希釈被検試料をプレートに加え、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、異なる抗ｃＶ１ｑモノクローナル抗体のビオチン化体をすべてのウェルに加え、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、第３のインキュベーション期間の際は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−ストレプトアビジンコンジュゲートとともにインキュベートした。最後の酵素的発色工程を、基質としてｏ−フェニレンジアミン（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いて行なった。４Ｎ硫酸の添加により発色を止め、マイクロタイタープレート分光光度計を用いて４９０ｎｍで吸光度を読み取った。ｃＶ１ｑ抗体標準濃度およびそれに対応する光学濃度値を用い、コンピュータ処理による、４変数方程式に対する最小二乗法フィットにより標準曲線を作成した。次いで、試料ｃＶ１ｑ抗体濃度を、標準曲線および該試料に対する血清希釈率を用いて決定した。
【００５８】
結果
１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑ抗体で処理したマウス由来の血清試料およびＢＡＬ試料中のｃＶ１ｑ抗体濃度を、それぞれ表２の上側および下側に示す。
【００５９】
【表２】
【００６０】
ビヒクル対照群（ｎ＝１０）由来の血清試料および気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料は、検出可能なレベルのｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ（ｃＶ１ｑ）抗体を有しなかった（＜０．０４μｇ／ｍｌ）。１ｍｇ／ｋｇでのｃＶ１ｑ抗体の反復（ｎ＝３）静脈投与後、これらの抗体処理マウス（ｎ＝１０）由来の血清試料は、ｃＶ１ｑ抗体濃度の平均±標準偏差が２７．１±５．０６μｇ／ｍｌであり；これらのマウス由来のＢＡＬ試料は、０．０６７±０．０３５μｇ／ｍｌの平均ｃＶ１ｑ抗体濃度を有した。１０ｍｇ／ｋｇの抗体の反復（ｎ＝３）静脈投与後の平均血清ｃＶ１ｑ抗体濃度（ｎ＝９）は３０２±４０．８μｇ／ｍｌであり；これらのマウス由来のＢＡＬ試料の平均ｃＶ１ｑ抗体濃度は０．５５±０．４８μｇ／ｍｌであった。
【００６１】
血清試料およびＢＡＬマウス試料由来のｃＶ１ｑ抗体の測定された濃度により、抗ＴＮＦα抗体での用量依存性処理、および静脈投与後のＢＡＬにおいて抗体が検出可能であることが確認される。
【００６２】
実施例２ マウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積：組織病理学的評価
免疫感作した雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウスの肺において組織病理学的評価を行なった。
【００６３】
実験手法
数週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス２０匹を、０．２ｍｌの滅菌生理食塩水中１．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, Inc., Purchase, NY）に混合した１０μｇのＯＡ（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を、０、７および１４日目に腹腔内注射することにより免疫感作した。この懸濁液は、各マウスに腹腔内注射する１時間前に調製した。
【００６４】
免疫感作したマウス２０匹を２群（１０マウス／群）に分けた。一方のマウス群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後および４８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑ ｍｕＧ２ａ抗体（グループ２）を静脈内投与した。他方のマウス群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後および４８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇのダルベッコＰＢＳ（Centocor, Inc., Malvern, PA ）（ビヒクル）（グループ１）を静脈内投与した。２１日目に、エーロゾル化したもの（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc., Chicago, IL ））に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡ（抗原）で攻撃した。エーロゾルをＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）により作製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）チャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。
【００６５】
抗原攻撃の７２時間後、マウスを屠殺し、肺を取り出して１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ；Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）で満たした。次いで、肺をパラフィンに包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。鏡検での変化を、変化の重度に応じて、１〜４段階（最小、微小／軽度、中等度および顕著／重度）で評価した。
【００６６】
結果
評価できなかった鏡検での変化は存在した(Present) （Ｐ）で示した。すべての鏡検所見を表３に示す。
【００６７】
【表３】
【００６８】
両被検群の個々のマウスの肺の３つの領域において、炎症細胞蓄積が存在し、それを数えた。白血球蓄積を、気管支領域の脈管周辺の脈管周囲組織、肺胞領域の間質組織および胸膜／胸膜下組織において評価した。両群の数匹のマウスは、気管支領域の脈管周辺に脈管周囲水腫を有した。両群の個々のマウスは、間質組織の毛細脈管においてエオシン好性フィブリン様沈着物を有した。グループ２の６番および１０番のマウスは、気管支周囲のリンパ節において、それぞれ中等度および重度のエオシン染色性マクロファージの蓄積を有した。グループ２の１０番のマウスはまた、胸膜組織および炎症細胞が混在した気管支周囲組織において、エオシン染色性マクロファージの重度の蓄積を有した。
【００６９】
グループとしてグループ１（ビヒクル処理マウス）と比較すると、組織病理学的解析では、グループ２のマウス（ｃＶ１ｑ処理マウス）において、脈管周囲白血球、間質白血球および胸膜白血球の数の有意な低下が示された。これらの結果は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積を調節することを示す。
【００７０】
実施例３：ステロイド耐性喘息のインフリキシマブ（Infliximab）治療
軽度の慢性閉塞性肺疾患および重度のステロイド依存性喘息を有する５３歳の高齢女性（Ｎ．Ｌ．）は、４０ｍｇの経口プレドニゾン、ステロイド吸入、イプラトロピウム吸入、アルブテロール吸入、サルメテロール（salmeterol）吸入、経口テオフィリンおよびジレウトン（zileuton）による集中治療にもかかわらず、数週間にわたって喘息悪化を呈した。この内容はあるが効果のなかったプログラムによる副作用は、体重増加、皮膚の薄層化および挫傷を含んだ。
【００７１】
インフリキシマブでの治療は表４に従って実施した。
【００７２】
【表４】
【００７３】
患者は、治療期間において、４回の注入で合計１，２００ｍｇのインフリキシマブを投与された。
【００７４】
結果
喘息症状の低減、夜間の目覚めの停止、ステロイド使用の低減および吸入治療依存の低減が認められた。この改善は、インフリキシマブ治療の２４時間以内に始まった。それを、表５の患者のダイアリーカードに記録する。
【００７５】
【表５】
【００７６】
最大流量スコア（peak flow score ）は、呼吸試験で測定したときの、患者について記録された最大空気流速度である。前処理の最大流量スコアが１６０〜２００ｍｌ／分であることとは対照的に、インフリキシマブ治療日程では、３４０〜４００ｍｌ／分のピークが記録された。低いスコアよりも、高い最大流量スコアの方がよい。
【００７７】
インフリキシマブ治療の間、アルブテロール吸入は必要でなかった。また、ステロイドの使用は、１日おきに１０ｍｇに低下した。
【００７８】
患者の生活の質は、インフリキシマブの投与を受けると大きく改善された。例えば、患者の生活の質の反応を比較すると、患者の喘息は良好に制御された状態となり、インフリキシマブ治療の第２日目以降、夜間の目覚めが消失した。
【００７９】
表６は、肺機能検査における客観的な改善を示す。
【００８０】
【表６】
【００８１】
努力肺活量（Forced voluntary capacity ）（ＦＶＣ）は、呼気流量の測定値である。１秒間における努力呼気肺活量（ＦＥＶ1 ）は、１秒間に患者が吐き出すことができる空気の最大量である。努力呼気流量（ＦＥＦ２５〜７５）は、１秒の第１四半期と第３四半期の間の流速測定値である。低値よりも高値の方がよい。観察されたＦＥＶ1 値は、約２年の治療の間で該患者について記録された最大値であった。
【００８２】
この５３歳の高齢女性患者は、インフリキシマブ治療の間、治療耐性喘息の兆候および症状の両方において迅速かつ継続的な改善を有した。インフリキシマブ治療は、耐性の低い治療または有効でない治療の必要性を低減または削減した。
【００８３】
本発明をその好ましい態様を参照して具体的に示し記載したが、当業者は、添付の請求の範囲により規定される本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく本発明において形態および詳細の種々の変更を行いうることを理解するだろう。
【００８４】
[1] 喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体の治療において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
[2] 炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において炎症細胞の肺への蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
[3] 抗体がキメラ抗体である上記[1]または[2]記載の使用。
[4] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合を競合的に阻害する、上記[3]記載の使用。
[5] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である上記[3]記載の使用。
[6] 治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を個体に投与する工程を含む、個体における喘息の治療方法。
[7] 抗体がキメラ抗体である上記[6]記載の方法。
[8] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合を競合的に阻害する、上記[7]記載の方法。
[9] キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である上記[7]記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項２】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体の肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項３】
抗体がキメラ抗体である請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
喘息または気道の炎症がステロイド耐性喘息である請求項１または３に記載の使用。
【請求項５】
喘息または気道の炎症の治療を必要とするヒトにおいて、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項６】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としているヒトの肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項７】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選択される請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン クラスＩｇＧ１またはＩｇＧ３のものである請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記薬剤が、非経口投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記薬剤が、吸入、鼻腔内投与、注入、静脈内投与、皮下投与または筋内投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記薬剤が、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬理学上許容しうる担体とを含む請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記薬剤が、約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの抗−TNFα抗体もしくはその抗原結合断片を含む単回または分割投与で投与されるためのものである請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片が、４回の注入で合計１２００ｍｇの抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片で投与される請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項１５】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項１６】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１７】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１８】
努力呼気肺活量の値を上昇させる必要があるヒトにおいて、努力呼気肺活量の値を上昇させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１９】
喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項２０】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体の肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項２１】
抗体がキメラ抗体である請求項１９または２０記載の薬剤。
【請求項２２】
喘息または気道の炎症がステロイド耐性喘息である請求項１９または２１に記載の薬剤。
【請求項２３】
喘息または気道の炎症の治療を必要とするヒトにおいて、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項２４】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としているヒトの肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項２５】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選択される請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン クラスＩｇＧ１またはＩｇＧ３のものである請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２７】
前記薬剤が、非経口投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１９〜２６のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２８】
前記薬剤が、吸入、鼻腔内投与、注入、静脈内投与、皮下投与または筋内投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１９〜２６のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２９】
前記薬剤が、さらに、薬理学上許容しうる担体を含む、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３０】
前記薬剤が、約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの抗−TNFα抗体もしくはその抗原結合断片を含む単回または分割投与で投与されるためのものである請求項１９〜２９のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３１】
抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片が、４回の注入で合計１２００ｍｇの抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片で投与される請求項１９〜２９のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３２】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項３３】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項３４】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項３５】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項３６】
努力呼気肺活量の値を上昇させる必要があるヒトにおいて、努力呼気肺活量の値を上昇させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項１】
喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項２】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体の肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項３】
抗体がキメラ抗体である請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
喘息または気道の炎症がステロイド耐性喘息である請求項１または３に記載の使用。
【請求項５】
喘息または気道の炎症の治療を必要とするヒトにおいて、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項６】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としているヒトの肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項７】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選択される請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン クラスＩｇＧ１またはＩｇＧ３のものである請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記薬剤が、非経口投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記薬剤が、吸入、鼻腔内投与、注入、静脈内投与、皮下投与または筋内投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記薬剤が、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬理学上許容しうる担体とを含む請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記薬剤が、約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの抗−TNFα抗体もしくはその抗原結合断片を含む単回または分割投与で投与されるためのものである請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片が、４回の注入で合計１２００ｍｇの抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片で投与される請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項１５】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記使用。
【請求項１６】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１７】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１８】
努力呼気肺活量の値を上昇させる必要があるヒトにおいて、努力呼気肺活量の値を上昇させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用であって、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記使用。
【請求項１９】
喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項２０】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体の肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項２１】
抗体がキメラ抗体である請求項１９または２０記載の薬剤。
【請求項２２】
喘息または気道の炎症がステロイド耐性喘息である請求項１９または２１に記載の薬剤。
【請求項２３】
喘息または気道の炎症の治療を必要とするヒトにおいて、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項２４】
炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としているヒトの肺において炎症細胞の蓄積を減少させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項２５】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選択される請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン クラスＩｇＧ１またはＩｇＧ３のものである請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２７】
前記薬剤が、非経口投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１９〜２６のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２８】
前記薬剤が、吸入、鼻腔内投与、注入、静脈内投与、皮下投与または筋内投与によってヒトに投与されるためのものである請求項１９〜２６のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項２９】
前記薬剤が、さらに、薬理学上許容しうる担体を含む、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３０】
前記薬剤が、約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの抗−TNFα抗体もしくはその抗原結合断片を含む単回または分割投与で投与されるためのものである請求項１９〜２９のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３１】
抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片が、４回の注入で合計１２００ｍｇの抗−TNFα抗体またはその抗原結合断片で投与される請求項１９〜２９のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項３２】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項３３】
喘息の治療を必要とするヒトにおいて、喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害する、前記薬剤。
【請求項３４】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒト定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項３５】
ステロイド耐性喘息の治療を必要とするヒトにおいて、ステロイド耐性喘息の治療に使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【請求項３６】
努力呼気肺活量の値を上昇させる必要があるヒトにおいて、努力呼気肺活量の値を上昇させるのに使用するための薬剤であって、抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｃＡ２（REMICADE（登録商標）インフリキシマブ）のヒトTNFαへの結合を競合的に阻害し、かつ（ｉｉ）１．０４×１０１０Ｍ−１のアフィニティー定数でヒトＴＮＦαに結合する、前記薬剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１１−６４６４（Ｐ２０１１−６４６４Ａ）
【公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１９５８１８（Ｐ２０１０−１９５８１８）
【出願日】平成２２年９月１日（２０１０．９．１）
【分割の表示】特願２０００−６０２３０３（Ｐ２０００−６０２３０３）の分割
【原出願日】平成１２年３月１日（２０００．３．１）
【出願人】（５９１１２３５５１）セントコール， インコーポレイテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＯＣＯＲ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】２００ Ｇｒｅａｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｐａｒｋｗａｙ， Ｍａｌｖｅｒｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９３５５−１３０７， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月１日（２０１０．９．１）
【分割の表示】特願２０００−６０２３０３（Ｐ２０００−６０２３０３）の分割
【原出願日】平成１２年３月１日（２０００．３．１）
【出願人】（５９１１２３５５１）セントコール， インコーポレイテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＯＣＯＲ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】２００ Ｇｒｅａｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｐａｒｋｗａｙ， Ｍａｌｖｅｒｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９３５５−１３０７， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
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