塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤
【課題】ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質を見出し、当該物質を有効成分とするｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤を提供する。
【解決手段】ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤に、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有せしめる。
【解決手段】ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤に、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有せしめる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
塩基性線維芽細胞増殖因子（basic Fibroblast Growth Factor，ｂＦＧＦ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、紫外線照射により角化細胞からの遊離が促進され、遊離されたｂＦＧＦが色素細胞に作用してメラニン産生を促進し、かつ色素細胞の細胞分裂をも促進すると考えられている（非特許文献１参照）。また、ｂＦＧＦは、血管新生促進因子として知られており、腫瘍細胞（特に、悪性腫瘍細胞）における血管新生を促進すること等が知られている。
【０００４】
そのため、ｂＦＧＦの異常産生は、色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、シミ、ソバカス、くすみ等の原因となると考えられる。また、ｂＦＧＦの異常産生は、腫瘍細胞における血管新生を促進し、それにより腫瘍細胞の増殖につながるものと考えられる。
【０００５】
したがって、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇を抑制することは、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等の予防又は改善に有用であると考えられる。また、ｂＦＧＦの発現上昇を抑制することは、腫瘍細胞における血管新生を抑制し、腫瘍細胞の増殖を抑制することで、がん治療等に有用であると考えられる。
【０００６】
このような考えに基づき、ｂＦＧＦの作用を抑制し得るものとして、例えば、オノニスエキス等が知られている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−１０４９０４号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Halaban R. etal.，J. Cell. Biol.，No.107，1988，p.1611-1619
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質を見出し、当該物質を有効成分とするｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防、治療又は改善可能なｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することができるとともに、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する各種疾患を予防又は治療可能なｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について説明する。
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有する。
【００１３】
ここで、本発明において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１４】
本発明において使用する抽出原料は、スギナ、エイジツ、ワイルドタイム、カミツレ、センブリ及びウスベニアオイである。２種以上の植物を抽出原料として用いる場合、上記植物を任意に組み合わせて使用することができる。
【００１５】
スギナ（学名：Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓ）は、スギナ科に属する植物である。スギナは、北半球の暖帯に広く分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、地下部、地上部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。
【００１６】
エイジツ（学名：Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）は、バラ科植物のノイバラの成熟果実を乾燥させたもののことをいう。ノイバラは、北海道西南部から九州、朝鮮半島に分布する落葉の低木であって、ノイバラの成熟果実の乾燥物であるエイジツは、これらの地域から容易に入手することができる。
【００１７】
ワイルドタイム（学名：Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ 別名：ヨウシュイブキジャコウソウ）は、シソ科に属する植物である。ワイルドタイムは、ヨーロッパから北西アジアを原産とし、広い地域で生育しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、地上部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００１８】
カミツレ（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）は、キク科に属する一年草である。カミツレは、ヨーロッパから西アジアで自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは花部である。
【００１９】
センブリ（学名：Ｓｗｅｒｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）は、リンドウ科に属する植物である。センブリは、九州から北海道までの山野で自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、地下部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは全草である。
【００２０】
ウスベニアオイ（学名：Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ 別名：ゼニアオイ）は、アオイ科に属する植物である。ウスベニアオイは、ヨーロッパ原産の植物で広く栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば葉部、幹部、地上部、花部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部及び花部である。
【００２１】
上記抽出原料からの抽出物に含有されるｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に使用されている抽出方法によって、上記抽出原料から、これらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２２】
例えば、上記抽出原料を必要に応じて乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２３】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用するのが好ましい。
【００２４】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２６】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２７】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２８】
以上のようにして得られるスギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００２９】
また、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、そのｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、血管新生抑制剤、抗がん剤、抗腫瘍剤、がん細胞の転移を抑制する医薬組成物等）の有効成分として用いることもできる。
【００３０】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物のみからなるものでもよいし、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したものでもよい。
【００３１】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等が挙げられる。
【００３２】
なお、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する植物抽出物等を、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００３３】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の患者に対する投与方法としては、皮下組織内投与、筋肉内投与、静脈内投与、経口投与、経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００３４】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ｂＦＧＦの発現の上昇を抑制することができる。これにより色素細胞の増殖やメラニンの産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、腫瘍細胞における異常な血管新生を抑制し、がん等の疾患を予防、治療又は改善をすることができる。ただし、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３５】
なお、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３６】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００３７】
なお、本実施例で使用する、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、スギナ抽出液、エイジツ抽出液、ワイルドタイム抽出液、カミツレ抽出液、センブリ抽出液及びウスベニアオイ抽出液（全て丸善製薬社製）の各凍結乾燥品を各植物の抽出物（試料）として用いた。
【００３８】
〔試験例１〕ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
各植物抽出物について、以下のようにしてｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００３９】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
【００４０】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（FALCON社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は下記表１を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN（ニッポンジーン社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００４１】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A，タカラバイオ社製）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加および紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００４２】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。結果を表１に示す。
【００４３】
〔表１〕
試料名 試料添加濃度（μｇ／ｍＬ） bFGFmRNA発現上昇抑制率（％）
スギナ抽出物 ２０ ７６．３
エイジツ抽出物 １０ ３５．７
ワイルドタイム抽出物 １０ ５５．１
カミツレ抽出物 １ ９．０
１０ ３１．３
センブリ抽出物 １ ６６．７
１０ ４３．１
ウスベニアオイ抽出物 １０ ２７．０
【００４４】
表１に示すように、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、優れたｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する
ことが確認された。
【００４５】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
スギナ抽出物 ０．０１ｇ
センブリ抽出物 ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
プラセンタエキス ０．１ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
グリチルレチン酸ステアリル ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
ヒノキチオール ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４６】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
エイジツ抽出物 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４７】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
ワイルドタイム抽出物 ０．０５ｇ
ウスベニアオイ抽出物 ０．０５ｇ
アロエエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４８】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
カミツレ抽出物 ０．０５ｇ
ヨクイニンエキス ０．１ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等の予防・改善に大きく貢献できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
塩基性線維芽細胞増殖因子（basic Fibroblast Growth Factor，ｂＦＧＦ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、紫外線照射により角化細胞からの遊離が促進され、遊離されたｂＦＧＦが色素細胞に作用してメラニン産生を促進し、かつ色素細胞の細胞分裂をも促進すると考えられている（非特許文献１参照）。また、ｂＦＧＦは、血管新生促進因子として知られており、腫瘍細胞（特に、悪性腫瘍細胞）における血管新生を促進すること等が知られている。
【０００４】
そのため、ｂＦＧＦの異常産生は、色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、シミ、ソバカス、くすみ等の原因となると考えられる。また、ｂＦＧＦの異常産生は、腫瘍細胞における血管新生を促進し、それにより腫瘍細胞の増殖につながるものと考えられる。
【０００５】
したがって、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇を抑制することは、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等の予防又は改善に有用であると考えられる。また、ｂＦＧＦの発現上昇を抑制することは、腫瘍細胞における血管新生を抑制し、腫瘍細胞の増殖を抑制することで、がん治療等に有用であると考えられる。
【０００６】
このような考えに基づき、ｂＦＧＦの作用を抑制し得るものとして、例えば、オノニスエキス等が知られている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−１０４９０４号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Halaban R. etal.，J. Cell. Biol.，No.107，1988，p.1611-1619
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質を見出し、当該物質を有効成分とするｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防、治療又は改善可能なｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することができるとともに、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する各種疾患を予防又は治療可能なｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について説明する。
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有する。
【００１３】
ここで、本発明において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１４】
本発明において使用する抽出原料は、スギナ、エイジツ、ワイルドタイム、カミツレ、センブリ及びウスベニアオイである。２種以上の植物を抽出原料として用いる場合、上記植物を任意に組み合わせて使用することができる。
【００１５】
スギナ（学名：Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓ）は、スギナ科に属する植物である。スギナは、北半球の暖帯に広く分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、地下部、地上部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。
【００１６】
エイジツ（学名：Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）は、バラ科植物のノイバラの成熟果実を乾燥させたもののことをいう。ノイバラは、北海道西南部から九州、朝鮮半島に分布する落葉の低木であって、ノイバラの成熟果実の乾燥物であるエイジツは、これらの地域から容易に入手することができる。
【００１７】
ワイルドタイム（学名：Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ 別名：ヨウシュイブキジャコウソウ）は、シソ科に属する植物である。ワイルドタイムは、ヨーロッパから北西アジアを原産とし、広い地域で生育しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、地上部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００１８】
カミツレ（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）は、キク科に属する一年草である。カミツレは、ヨーロッパから西アジアで自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは花部である。
【００１９】
センブリ（学名：Ｓｗｅｒｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）は、リンドウ科に属する植物である。センブリは、九州から北海道までの山野で自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、地下部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは全草である。
【００２０】
ウスベニアオイ（学名：Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ 別名：ゼニアオイ）は、アオイ科に属する植物である。ウスベニアオイは、ヨーロッパ原産の植物で広く栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば葉部、幹部、地上部、花部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部及び花部である。
【００２１】
上記抽出原料からの抽出物に含有されるｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に使用されている抽出方法によって、上記抽出原料から、これらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２２】
例えば、上記抽出原料を必要に応じて乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２３】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用するのが好ましい。
【００２４】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２６】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２７】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２８】
以上のようにして得られるスギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００２９】
また、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、そのｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、血管新生抑制剤、抗がん剤、抗腫瘍剤、がん細胞の転移を抑制する医薬組成物等）の有効成分として用いることもできる。
【００３０】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物のみからなるものでもよいし、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したものでもよい。
【００３１】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等が挙げられる。
【００３２】
なお、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する植物抽出物等を、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００３３】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の患者に対する投与方法としては、皮下組織内投与、筋肉内投与、静脈内投与、経口投与、経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００３４】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ｂＦＧＦの発現の上昇を抑制することができる。これにより色素細胞の増殖やメラニンの産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、腫瘍細胞における異常な血管新生を抑制し、がん等の疾患を予防、治療又は改善をすることができる。ただし、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３５】
なお、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３６】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００３７】
なお、本実施例で使用する、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、スギナ抽出液、エイジツ抽出液、ワイルドタイム抽出液、カミツレ抽出液、センブリ抽出液及びウスベニアオイ抽出液（全て丸善製薬社製）の各凍結乾燥品を各植物の抽出物（試料）として用いた。
【００３８】
〔試験例１〕ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
各植物抽出物について、以下のようにしてｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００３９】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
【００４０】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（FALCON社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は下記表１を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN（ニッポンジーン社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００４１】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A，タカラバイオ社製）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加および紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００４２】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。結果を表１に示す。
【００４３】
〔表１〕
試料名 試料添加濃度（μｇ／ｍＬ） bFGFmRNA発現上昇抑制率（％）
スギナ抽出物 ２０ ７６．３
エイジツ抽出物 １０ ３５．７
ワイルドタイム抽出物 １０ ５５．１
カミツレ抽出物 １ ９．０
１０ ３１．３
センブリ抽出物 １ ６６．７
１０ ４３．１
ウスベニアオイ抽出物 １０ ２７．０
【００４４】
表１に示すように、スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物は、優れたｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する
ことが確認された。
【００４５】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
スギナ抽出物 ０．０１ｇ
センブリ抽出物 ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
プラセンタエキス ０．１ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
グリチルレチン酸ステアリル ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
ヒノキチオール ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４６】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
エイジツ抽出物 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４７】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
ワイルドタイム抽出物 ０．０５ｇ
ウスベニアオイ抽出物 ０．０５ｇ
アロエエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００４８】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
カミツレ抽出物 ０．０５ｇ
ヨクイニンエキス ０．１ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等の予防・改善に大きく貢献できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項２】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤。
【請求項１】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項２】
スギナ抽出物、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物、カミツレ抽出物、センブリ抽出物及びウスベニアオイ抽出物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤。
【公開番号】特開２０１１−１３２８（Ｐ２０１１−１３２８Ａ）
【公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１４７２２３（Ｐ２００９−１４７２２３）
【出願日】平成２１年６月２２日（２００９．６．２２）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月２２日（２００９．６．２２）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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