多層血液製剤
血液製剤（１０）、血液製剤を調製する方法、この方法によって得られる血液製剤、および血液製剤調製容器手段。血液製剤は、全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む。血液製剤（１０）は、第１層（２１）、第２層（２２）、および第３層（２３）を含む。第２層（２２）は、第１層（２１）および第３層（２３）に隣接している。第１層（２１）は、血液製剤（１０）の第１外面（２４）を画定し、第３層（２３）は、血液製剤（１０）の第２外面（２５）を画定する。第１層（２１）は、大部分のフィブリンを含み、第２層（２２）は、大部分の血小板を含み、第３層（２３）は、大部分の白血球を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多層血液製剤、血液製剤を調製する方法、この方法によって得られる血液製剤、および血液製剤調製容器手段に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの凝固系は出血を止め、治癒を開始することができる。この系の機能はよく知られており、広く研究されている。しかしながら、治癒の開始における凝固産物の重要性は、最近認識されたばかりである。
【０００３】
フィブリン糊および濃厚血小板などの血液製剤は、抗凝固処理全血から多血小板血漿（ＰＲＰ）を単離することによって生成される。血小板および血漿の存在は、トロンビン活性化により、天然のヒト凝固系をある程度模倣する。これによりフィブリン基質中に成長促進因子の血小板含有自己濃縮物がもたらされる。このような組成物は、創傷表面を被覆するために用いることができ、治癒を開始すると言われている。
【０００４】
Ｄａｖｉｄ Ｍ．Ｄｏｈａｎらの「Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｒｉｃｈ ｆｉｂｒｉｎ（ＰＲＦ）：Ａ ｓｅｃｏｎｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ．Ｐａｒｔ Ｉ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４」は、どのような添加剤も試薬も添加することなく、全血から多血小板固体フィブリンネットワークを調製する方法を記載している。ＰＲＦプロトコルは以下のとおりである。抗凝固剤を用いずに、血液サンプルを１０ｍＬガラス管またはガラス被覆プラスチックにとり、これを直ちに約４００ｇで１０分間遠心分離する。抗凝固剤の不在は、ガラス管壁と接触して血液サンプルのほとんどの血小板が数分で活性化し、凝固カスケードが解放されることを意味する。フィブリノゲンは、最初は管の高所に集まり、その後、循環トロンビンがこれをフィブリンに変換する。次いで、管の中間部にフィブリンクロットが得られ、管底部の赤血球の上部から頂部の無細胞血漿に広がる。血小板はフィブリン網に大量に捕捉される。この技法の成功は、すべて血液採取と遠心分離機への輸送の速度にかかっている。実際、抗凝固剤を用いなければ、血液サンプルは管のガラスに接触するとほぼ即座に凝固を始め、管の中間部および上部にフィブリノゲンを集めるためには遠心分離で最短でも数分間かかる。迅速な取り扱いが、臨床上使用可能なＰＲＦクロットを得る唯一の方法である。血液の採取および遠心分離の開始に要する時間が過度に長い場合、失敗となる。フィブリンは管の中で拡散して重合し、一貫性のない小さい血液クロットのみが得られる。結論として、ＰＲＦプロトコルは、血清および血小板を含むフィブリンクロットの採集を可能にする。管からクロットを取り出し、手作業で赤血球部分を分離し、フィブリン基質に捕捉された流体（血清）を手作業で排除することによって、実施者は自己フィブリン膜を得る。
【０００５】
しかしながら、このフィブリンネットワークには、相当部分の赤血球を含有する赤色血栓が含まれ、これを手作業で分離しなければならない。さらに、フィブリン、白血球、および血小板などの生成されたフィブリンネットワークの成分は、生成物中に任意に分布し、網に捕捉されている。白血球の回収は記載されておらず、用いられる小さいｇ力では、一部が赤血球部分に含まれ、白血球の回収は低量である。フィブリン中の細胞が網に捕捉されていることにより、これらの細胞は放出されないか、または緩やかに放出され、これによって包含される白血球の接触依存性抗殺菌（ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｉｃｉｄａｌ）潜在性を阻害する。
【０００６】
Ｄｏｈａｎらの「Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４および２００６；１０１：Ｅ４５−５０」は、濃厚血小板の形状および構造でないネットワークを記載しており、これは創傷表面を被覆するためにそのまま適用できる。創傷表面を被覆するために使用可能な形状および形態／剛性を得るため、ならびに赤血球が含まれるのを防ぐために、既知の多血小板固体フィブリンネットワークは手作業で再形成し、圧縮しなければならない。さらに、この方法は幾つかの工程を含み、１つの閉鎖系では調製できず、従って臨床での使用に好都合でない。
【０００７】
Ｓｕｔｔｏｎらの「Ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ．１９８８；２５（４）：６６３−７３」は、抗凝固処理全血が遠心分離または受動的沈降によってどのように幾つかの層に分離されるかを記載している；赤血球、白血球および血小板（＝バフィーコート）、ならびに血漿。さらに、１０分間遠心分離力１００００ｇを用い、浮遊密度（ｆｌｏａｔ ｏｆ ｄｅｎｓｉｔｙ）１．０５３を用いることによって、バフィーコートをグルタルアルデヒドで固定し、研究のために取り出すことができる。しかしながら、グルタルアルデヒドの毒性のため、これは臨床では使用できない。抗凝固処理血液からバフィーコートを抽出するための幾つかの方法が存在し、これには密度確定物質（即ち、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）の使用が含まれる。抗凝固処理血液の必要性に加えて、抽出された細胞は必然的に包含される血漿に懸濁され、混合（分散）される。
【０００８】
ＥＰ１６３７１４５Ａは、シート様多孔質膜によって懸濁液から細胞を濾過する方法（例えば、血小板および白血球を含む血液細胞）を記載しており、記載されているように膜に細胞が残される。シート多孔質材料は、フィブリンから調製できる。しかしながら、層構造は得られず、細胞は多孔質材料の深部に捕捉されており、同種異系フィブリンの使用は他のヒトからの交差感染のリスクを高める。さらに、この方法は幾つかの工程を含み、１つの閉鎖系では調製できず、従って臨床での使用に好都合でない。
【０００９】
既知の方法は、これらの使用、特に臨床での使用が限定されている。細胞分離前の抗凝固剤の添加は、完全には自己由来でない製品を生じ、さらに創傷治癒促進物質（例えば、成長因子）の放出には、他の非自己物質（例えば、トロンビン、Ｃａ２など）との混合を要し、所望の細胞分布を持たない均質な最終製品がもたらされる。
【００１０】
抗凝固を排除した既知の方法は、細胞の無秩序な分布をもたらし、細胞は製品内部に固定され、これらの細胞の放出および潜在性を事実上限定している。さらに、これらの方法は、臨床での使用に物理的に適した製品を得るために、閉鎖系外部での手作業での取り扱いを必要とし、不適切に確定された取り扱いは、最適細胞収量より低い収量を伴う可変的な結果をもたらす。さらに、手作業での取り扱いは、作業時間（コスト）を必要とし、調製時間を長引かせる。
【００１１】
明確な層構造を記載する方法は、臨床での使用、得られた構造の固定および自立に適していない、抗凝固および毒性成分の添加に依存している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】欧州特許出願公開第１６３７１４５号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｒｉｃｈ ｆｉｂｒｉｎ（ＰＲＦ）：Ａ ｓｅｃｏｎｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ．Ｐａｒｔ Ｉ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４、Ｄａｖｉｄ Ｍ．Ｄｏｈａｎら
【非特許文献２】Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ４５−５０、Ｄｏｈａｎら
【非特許文献３】Ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ．１９８８；２５（４）：６６３−７３、Ｓｕｔｔｏｎら
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の目的は、従来技術の欠点の少なくとも１つを克服もしくは改善するか、または有用な代替を提供する、新規であり改善された血液製剤を提供することである。本発明の目的はさらに、従来技術の欠点の少なくとも１つを克服もしくは改善するか、または有用な代替を提供する血液製剤を得るための新規であり改善された方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の目的は、全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む血液製剤によって達成され、血液製剤は、第１層、第２層、および第３層を含み、第２層は、第１層および第３層に隣接しており、第１層は、血液製剤の第１外面を画定し、第３層は、血液製剤の第２外面を画定し、第１層は、大部分のフィブリンを含み、第２層は、大部分の血小板を含み、第３層は、大部分の白血球を含む。これにより、多層構造を有する血液製剤が提供され、各層はそれぞれの層の異なる組成のため、異なる機能性を提供する。血液製剤は、自己支持性、緻密、および固体であり、血液製剤を意図された用途にそのまま適用できるような構造を有する。大部分とは、フィブリン、血小板、または白血球などの成分が、各層の体積および／または質量に関して、および／または血液製剤の体積および／または質量に関して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはこれらの記載したパーセントの組み合わせから画定できる任意の区間を占めることを意味する。第１、第２、および第３層は、それぞれ連続しており、および／または実質的に互いに平行であり、例えば層状および／または多層血液製剤を形成する。血液製剤は、好ましくは３層、例えば大部分のフィブリンを含む第１層、大部分の血小板を含む第２層、および大部分の白血球を含む第３層からなる。血液製剤は、好ましくは最大幅／厚比１、２、３、４、または５を有するが、この比は１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０まで、または１００までであることができ、幅は血液製剤の層に沿って測定され、厚さは血液製剤の層と垂直に測定される。
【００１６】
本発明の一態様において、血液製剤に含まれる大部分のフィブリンは、第１層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分のフィブリンが第１層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１７】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の血小板は、第２層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の血小板が第２層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１８】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の白血球は、第３層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の白血球が第３層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１９】
本発明の別の態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、全血由来の成分のみからなる血液製剤が提供され、これは全血および／または血液製剤に添加剤が加えられていないこと、ならびに血液製剤が、全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導できることを意味する。
【００２０】
本発明の別の態様において、血液製剤は自己由来である。
【００２１】
本発明の別の態様において、血液製剤は可撓性である。これにより、通常の使用中、破裂することなく適用応力に耐えることのできる血液製剤が提供される。血液製剤の可撓性のため、血液製剤は、この血液製剤が適用される非常に連続的な輪郭に順応する。
【００２２】
本発明の別の態様において、血液製剤はさらに、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質を含む。これにより、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒潜在性が改善される血液製剤が提供される。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００２３】
本発明はまた、治療に使用するための血液製剤、および／または治療に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００２４】
本発明はまた、治療に使用する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００２５】
本発明はまた、創傷を治療するための血液製剤、および／または創傷を治療するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００２６】
本発明はまた、創傷を治療する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。これにより、創傷を治療する薬剤を製造するのに特に適した血液製剤が提供される。第３層は、第１活性細胞であり、従って感染を制御し、マクロファージを含む他の細胞を誘引する大部分の白血球を含み、第２層は、線維芽細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含み、血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に無菌に、例えば感染なく保持および／または維持される。第３層は、製品から容易に放出される大部分の白血球を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に感染なく保持および／または維持される。白血球は、感染および異物から身体を防御する免疫系の細胞であり、従って白血球は感染を制御し、さらにマクロファージを含む他の細胞を誘引する。第２層は、細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含む。白血球は製品から迅速に放出されるため、第２層は、成長促進物質を創傷に最適に送達するように、創傷面に面する。血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含む。
【００２７】
本発明はまた、自己使用するための血液製剤、および／または自己使用するための請求項１から７のいずれかに記載の血液製剤の使用に関する。
【００２８】
本発明はまた、自己薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００２９】
本発明はまた、例えば領域を密封するため、手術後の癒着を防ぐため、および／または吻合手技に用いる、手術に使用するための血液製剤、および／または手術に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００３０】
本発明はまた、手術に使用する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００３１】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用である。吻合のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００３２】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用の製剤を製造するために用いられる。
【００３３】
本発明はまた、ある体積の全血から血液製剤を調製する方法に関し、以下の工程：ａ）体積の全血を容器手段に入れる工程であって、容器手段が、全血が接触する内面を画定する第１材料を含む工程、ｂ）全血の凝固を活性化する工程、ｃ）容器手段に配置された全血に作用する遠心力によって、全血を赤血球、血清、および血液製剤に分離し、これによって全血が、赤血球、血液製剤、および血清間の密度の違いにより、赤血球、血液製剤、および血清を含む層に分離する工程であって、血液製剤は、フィブリン、白血球、および血小板を含み、適用される遠心力は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００倍大きい工程、ならびにｄ）血液製剤を容器手段から取り出す工程を含む。これにより、血液製剤が全血から誘導される方法が提供される。この方法は、赤血球を単離する必要がないため、閉鎖系において１サイクルで処理することができるが、この方法は、赤血球の単離を用いて行うこともできる。全血からフィブリンを抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％であり、全血から白血球を抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％であり、全血から血小板を抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％である。得られる血液製剤は、全血の体積の３０％、２０％、１５％、１０％未満、または５％未満の体積を有する。これにより、血液製剤が例えば遠心力を生じる遠心分離によって得ることのできる方法が提供される。適用される遠心力は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００倍、もしくは２００００倍大きいか、または適用される遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。遠心力が適用される時間は、少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分、もしくは３０分間であるか、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内、適用される。
【００３４】
本発明の一態様において、全血からフィブリンを抽出する方法の収率は、少なくとも６０％超である。
【００３５】
本発明の一態様において、全血から白血球を抽出する方法の収率は、少なくとも５０％超である。
【００３６】
本発明の一態様において、全血から血小板を抽出する方法の収率は、少なくとも６０％超である。
【００３７】
本発明の一態様において、遠心力は、少なくとも３０秒間適用される。遠心力が適用される時間は、少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分、もしくは３０分間であるか、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内、適用される。
【００３８】
本発明の一態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、血液製剤が全血から誘導され、従って全血由来の成分のみからなる方法が提供される。従って、この方法は、全血および／または血液製剤に添加剤を加えることなく行われる。
【００３９】
本発明の別の態様において、工程ｂ）の凝固は、内面を画定する第１材料によって活性化される。これにより、全血を内面と接触させたとき、凝固が開始され、従って凝固を開始するために、全血に物体などを添加することを回避できる方法が提供される。
【００４０】
本発明の別の態様において、工程ｂ）の凝固は、全血をガラスビーズなどの物体に暴露することによって活性化される。これにより、全血に添加した物体と全血を接触させたとき、凝固が開始される方法が提供される。これにより、この方法に最適である、選択された時点で凝固を開始できる。
【００４１】
本発明の別の態様において、容器手段の内面の第１材料は、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカルボナート、ポリアミド、アクリロニトリルブタジエンスチレン、スチレン、変性スチレン、ポリウレタン、および他のポリマー材料からなる群から選択される。記載した群のポリマーはさらに、ガラス充填され得る。これにより、第１材料の内面を有する容器手段が、すべての種類のポリマー、金属、またはガラスから製造された典型的な試験管などであることができる方法が提供される。この材料は、材料特性が血液製剤と内面との間の最小の接着力／摩擦を提供するように選択することもできる。ポリアミドおよびポリウレタンは、他のポリマーを用いて得られるレベルより高い、好ましい活性化レベルの範囲内で凝固を開始するため、これらの材料は好ましい。
【００４２】
本発明の別の態様において、容器手段の内面は、血液製剤と第１材料の内面との間の摩擦を下げるために、表面処理、例えば被覆されている。これにより、第１材料の内面を有する容器手段が、すべての種類のポリマー、金属、またはガラスから製造された典型的な試験管などであることができる方法が提供される。内面は、血液製剤と内面との間の最小の接着力／摩擦を得るために、表面処理および／または被覆され得る。
【００４３】
本発明の別の態様において、遠心力は、内面と血液製剤との間に作用する接着力より大きい。これにより、遠心力が接着力と比較して優位であり、これによって血液製剤の明確な層構造が確保される方法が提供される。遠心力は、接着力より少なくとも１０、１００、１０００、５０００、１００００、２００００、５００００、１０００００、１００００００、もしくは１０００００００倍大きい力であることができ、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。本発明の別の態様において、遠心力および遠心分離の時間は、内面とフィブリンとの間に作用する接着力が破壊／解放され、これによってフィブリン層が圧縮／圧搾されるような強度である。これにより、遠心力が接着力と比較して優位であり、これによって血液製剤の明確な層構造が確保される方法が提供される。壁への接着を解放するのに必要とされる遠心力は、フィブリン密度によって決まる。フィブリン密度は、凝固活性化、フィブリン濃度、時間などを含む幾つかの要因によって決まる。遠心分離力は、少なくとも１０、１００、１０００、５０００、１００００、２００００、５００００、もしくは１０００００ｇであることができ、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。
【００４４】
本発明の別の態様において、内面に接着している血液製剤は、工程ｃ）中、少なくとも１度、内面から剥離される。これにより、起こり得る血液製剤の内面への接着が、工程ｃ）中に少なくとも１度血液製剤を分離することによって対処できる方法が提供される。分離は、切断などの機械的手段によって行うことができる。その後、ｇ力はフィブリンを壁から解放する必要がないため、フィブリンの圧縮はより低いｇ力で行うことができる。
【００４５】
本発明の別の態様において、この方法はさらに、容器手段に配置されたフィルタなどの圧縮手段によって血液製剤が圧縮される圧縮工程を含む。これにより、例えばフィルタによって血液製剤を圧縮することのできる方法が提供される。フィルタは、容器手段に固定して、または移動可能に配置することができ、フィルタは、血液製剤を単離するために用いることができる。
【００４６】
本発明の別の態様において、この方法は、工程ｃ）中に赤血球が血液製剤から単離される単離工程をさらに含む。これにより、この方法の間に赤血球が血清および血液製剤から単離される方法が提供される。
【００４７】
本発明の別の態様において、この方法は、血液製剤が洗浄され、血液製剤に付着した実質的にすべての赤血球および／または血清が剥離される洗浄工程をさらに含む。これにより、血液製剤から他の成分が実質的に除去され、血液製剤が血液製剤自体である方法が提供される。遠心分離中に形成された血清を洗浄液として用いることができる。
【００４８】
本発明の別の態様において、容器手段は、取り外し可能な蓋で閉鎖可能な開口端、および閉鎖端を含む管である。これにより、標準の試験管などを用いて本方法を行うことができる方法が提供される。
【００４９】
本発明の別の態様において、工程ｂ）が工程ａ）に先行する。これにより、全血を容器手段に入れる前に、凝固を活性化することができ、従って容器手段は凝固活性化因子を含む必要がなく、および／または全血を容器手段に入れるとき、全血は凝固活性化因子を含む必要がない。凝固は、例として、採血管にガラスビーズを入れることによって、または血液を活性化する管材料を選択することによって、採血中に活性化することができる。従って、凝固を開始するために、全血に物体などを添加するのを回避することができる。
【００５０】
本発明の別の態様において、工程ｂ）は、工程ａ）の少なくとも１分前に行われる。これにより、非常に迅速な取り扱いを必要としない方法が提供される。工程ｂ）は、工程ａ）の少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、または２０分前に行うことができる。工程ｂ）の凝固活性化のレベルもこの方法によって制御できる。工程ｃ）の細胞分離は、フィブリンが細胞分離を阻害するのに十分なレベルである前に行わなければならないため、これによって工程ｂ）とａ）との間の時間を延長することが可能となる。
【００５１】
本発明の別の態様において、工程ｂ）は、工程ｃ）と同時に行われる。これにより、工程ｃ）中、この方法に最適な時点で凝固を活性化できる。凝固は、容器手段に組み入れた凝固活性化因子によって、および／または血液を活性化する容器材料を用いることによって、活性化／開始することができる。凝固因子材料は、容器手段において全血に添加されるガラスビーズなどの物体であることができる。
【００５２】
本発明の別の態様において、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質が全血に添加される。これにより、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒が改善される血液製剤を得ることができる。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００５３】
本発明の別の態様において、フィルタなどの圧縮手段は、第１固定位置および第２位置を有する。白血球および血小板は分離され、血清中のフィブリンは圧縮されていない遠心分離の最初の部分の間、フィルタは、赤血球を含有する容器手段の一部の位置に固定される。フィルタの密度が血清の密度より小さいならば、フィルタの解放によってフィルタは管の頂部に運ばれ、これによって白血球および血小板層の収集ならびにフィブリン層の圧縮が起こる。
【００５４】
本発明の別の態様において、フィルタなどの圧縮手段は、容器手段壁を変形することによって、第１固定位置に固定される。フィルタは、管壁を変形することによって固定される。フィルタは、壁の変形を取り除くことによって解放される。
【００５５】
本発明の別の態様において、全血の代わりに、フィブリンを含む血漿、ならびに白血球および血小板を含むバフィーコートが用いられる。これにより、赤血球を除く全血を用いることができ、従って血液製剤を全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導できる方法が提供される。
【００５６】
本発明の別の態様において、この方法は、１５分以内に行われる。この方法は、少なくとも１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分以内、または少なくとも３０分以内に行われる。
【００５７】
本発明の別の態様において、この方法によって得られる血液製剤は、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤である。
【００５８】
本発明はまた、全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含み、血液製剤は、第１層、第２層、および第３層を含み、第２層は、第１層および第３層に隣接しており、第１層は、血液製剤の第１外面を画定し、第３層は、血液製剤の第２外面を画定し、第１層は、大部分のフィブリンを含み、第２層は、大部分の血小板を含み、第３層は、大部分の白血球を含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤に関する。これにより、多層構造を有する血液製剤が得られ、各層はそれぞれの層の異なる組成のため、異なる機能性を提供する。血液製剤は、自己支持性、緻密、および固体であり、血液製剤を意図された用途にそのまま適用できるような構造を有する。大部分とは、フィブリン、血小板、または白血球などの成分が、各層の体積および／または質量に関して、または血液製剤の体積および／または質量に関して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはこれらの記載したパーセントの組み合わせから画定できる任意の区間を占めることを意味する。第１、第２、および第３層は、それぞれ連続しており、および／または実質的に互いに平行であり、例えば層状および／または多層血液製剤を形成する。血液製剤は、好ましくは３層、例えば大部分のフィブリンを含む第１層、大部分の血小板を含む第２層、および大部分の白血球を含む第３層からなる。血液製剤は、好ましくは最大幅／厚比１、２、３、４、または５を有するが、この比は１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０まで、または１００までであることができ、幅は血液製剤の層に沿って測定され、厚さは血液製剤の層と垂直に測定される。
【００５９】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分のフィブリンは、第１層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分のフィブリンが第１層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６０】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の血小板は、第２層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の血小板が第２層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６１】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の白血球は、第３層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の白血球が第３層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６２】
本発明の別の態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、全血由来の成分のみからなる血液製剤を得ることができ、これは全血および／または血液製剤に添加剤が加えられていないこと、ならびに血液製剤が、全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導されることを意味する。
【００６３】
本発明の別の態様において、血液製剤は自己由来である。
【００６４】
本発明の別の態様において、血液製剤は可撓性である。これにより、通常の使用中、破裂することなく適用応力に耐えることのできる血液製剤を得ることができる。血液製剤の可撓性のため、血液製剤は、この血液製剤が適用される非常に連続的な輪郭に順応する。
【００６５】
本発明の別の態様において、血液製剤はさらに、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質を含む。これにより、血液製剤は、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒が改善される。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００６６】
本発明の別の態様において、血液製剤は、治療に使用するためのものである。治療に使用するために、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００６７】
本発明の別の態様において、血液製剤は、治療に使用する薬剤を製造するために用いられる。
【００６８】
本発明の別の態様において、血液製剤は、創傷を治療するためのものである。創傷を治療するための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００６９】
本発明の別の態様において、血液製剤は、創傷を治療する薬剤を製造するために用いられる。これにより、創傷を治療する薬剤を製造するのに特に適した血液製剤を得ることができる。第３層は、第１活性細胞であり、従って感染を制御し、マクロファージを含む他の細胞を誘引する大部分の白血球を含み、第２層は、創傷治癒および／または肉芽形成を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含み、血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に無菌に、例えば感染なく保持および／または維持される。第３層は、製品から容易に放出される大部分の白血球を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に感染なく保持および／または維持される。白血球は、感染および異物から身体を防御する免疫系の細胞であり、従って白血球は感染を制御し、さらにマクロファージを含む他の細胞を誘引する。第２層は、細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含む。白血球は製品から迅速に放出されるため、第２層は、成長促進物質を創傷に最適に送達するように、創傷面に面する。血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含む。
【００７０】
本発明の別の態様において、血液製剤は、自己使用のために用いられる。自己使用のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００７１】
本発明の別の態様において、血液製剤は、自己薬剤を製造するために用いられる。
【００７２】
本発明はまた、例えば領域を密封するため、手術後の癒着を防ぐため、および／または吻合手技に用いる、手術に使用するための血液製剤、および／または手術に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００７３】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用である。吻合のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００７４】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用の製剤を製造するために用いられる。
【００７５】
本発明はまた、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を調製するための血液製剤調製容器手段に関し、血液製剤調製容器手段は、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む。これにより、全血の凝固を活性化するか、またはより具体的には補体活性化を提供し、同時にポリマー脆弱性および／またはコストのため、ガラス容器より好ましく、これらの凝固不活性特性のため他のポリマー容器より好ましいポリマー材料を含む血液製剤調製容器手段が提供される。ポリアミドおよび／またはポリウレタンが全血の凝固を活性化するという事実は驚くべきものであり、この血液製剤調製容器手段は、既知のガラス容器手段とポリマー容器手段の利点を兼ね備えているため、典型的な既知のガラス容器手段および凝固不活性ポリマー容器手段の良好な代替手段が提供される。
【００７６】
本発明はまた、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を製造するための、請求項５８に記載の血液製剤調製容器手段の使用に関する。
【００７７】
本発明はまた、血液製剤調製容器手段に関し、血液製剤調製容器手段は、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む。これにより、全血の凝固を活性化するか、またはより具体的には補体活性化を提供し、同時にポリマー脆弱性および／またはコストのため、ガラス容器より好ましく、これらの凝固不活性特性のため他のポリマー容器より好ましいポリマー材料を含む血液製剤調製容器手段が提供される。ポリアミドおよび／またはポリウレタンが全血の凝固を活性化するという事実は驚くべきものであり、この血液製剤調製容器手段は、既知のガラス容器手段とポリマー容器手段の利点を兼ね備えているため、典型的な既知のガラス容器手段および凝固不活性ポリマー容器手段の良好な代替手段が提供される。
【００７８】
本発明はまた、血液製剤を製造するための、請求項６０に記載の血液製剤調製容器手段の使用に関する。
本発明を次の図面を参照して以下に詳しく説明する。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】本発明による容器手段の第１の実施形態の断面図である。
【図２】本発明による容器手段の第２の実施形態の断面図である。
【図３】本発明による容器手段の第３の実施形態の断面図である。
【図４】本発明による容器手段の第４の実施形態の断面図である。
【図５】本発明による容器手段の第１の実施形態の断面図である。
【図６】本発明による容器手段の第２の実施形態の断面図である。
【図７】本発明による容器手段の第３の実施形態の断面図である。
【図８】本発明による容器手段の第４の実施形態の断面図である。
【図９】本発明による血液製剤の実施形態の断面図である。
【図１０】本発明による血液製剤の実施形態の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
図１から４はそれぞれ、容器手段１の第１、第２、第３、および第４の実施形態を例示する。４つの実施形態において、容器手段１は、内面３を有する空洞を含む。空洞は、壁４、閉鎖端１２、および蓋２によって閉鎖可能な開口端によって境界を定められる。容器手段１は、ある体積の全血５を含み、容器手段１の開口端に搭載された蓋２によって周囲から閉鎖される。容器手段１は任意の材料で製造され得、材料は、容器手段１の材料が内面３を介して全血５と接触することにより、全血５の凝固カスケードをあるいは活性化するように選択することができ、これは図１の第１の実施形態および図３の第３の実施形態の場合である。または、容器手段１の材料は、材料が全血５の凝固カスケードに関して不活性であるように選択することができ、これは図２の第２の実施形態および図３の第４の実施形態の場合であり、ここでは物体７を用いて全血５の凝固カスケードが活性化されるように、血液５の凝固カスケードを活性化する材料で製造された物体７が、代わりに全血５に添加される。４つの実施形態において、容器手段１の内面３は、内面３と血液５の任意の成分との間の摩擦を下げるために、被覆および／または表面処理され得、さらに容器手段１の材料は、例えば低タンパク結合能を有する材料を選択することによって、内面３と血液５の任意の成分との間の低い摩擦が得られるように選択することができる。図３および４に示した第３および第４の実施形態において、フィルタなどの圧縮手段８は、容器手段１内に配置されており、これによって血液製剤１０は、圧縮手段に対して圧縮される。
【００８１】
工程の初期部分では、圧縮手段８は容器手段１の閉鎖端１２に固定され得、ここに赤血球が位置する。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血漿より低いならば、圧縮手段は血漿の頂部に送られる。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８２】
工程の初期部分では、圧縮手段８は容器手段１の閉鎖端１２に固定され得、ここに赤血球が位置する。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血清より低いならば、圧縮手段は血清の頂部に送られる。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８３】
４つの実施形態すべてにおいて、全血５は、例示のとおり下向きに作用する遠心力６に供されるが遠心力６は、示した方向に限定されない。全血５の成分は異なる密度を有し、従って遠心力６に対して異なる応答をするため、遠心力６は分離手段として機能する。
【００８４】
図１から４は、遠心力６が適用されたばかりであり、従って全血５の分離が目に見えない時点での容器手段１の４つの実施形態を例示し、図５から８はそれぞれ、遠心力６が十分に長く、十分な大きさで作用し、従って全血５が血清９、血液製剤１０、および赤血球１１に分離した時点での容器手段１の第１、第２、第３、および第４の実施形態を示す。
【００８５】
図１から４は、遠心力６が適用されたばかりであり、従って全血５の分離が目に見えない時点での容器手段１の４つの実施形態を例示し、遠心力６が十分に長く、十分な大きさで作用し、従って全血５が、この血清部分全体にフィブリンが分布している血清９、血小板および白血球層１０、および赤血球１１に分離した時点での１。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血清より低いならば、圧縮手段は血清の頂部に送られ、これによってフィブリンが壁から放出され、フィブリンが圧縮される。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８６】
図９は、第１層２１、第２層２２、および第３層２３を含む血液製剤１０の概略的な断面図を例示し、ここで第２層は、第１層２１および第３層２３に隣接している。第１層２１は、血液製剤１０の第１外面２４を画定し、第３層２３は、血液製剤１０の第２外面を画定する。第１層２１は、大部分のフィブリンを含み、第２層２２は、大部分の血小板を含み、第３層２３は、大部分の白血球を含む。従って、血液製剤１０は、各層が異なる組成を有し、従って異なる機能性を有する明確な多層構造を有する。
【００８７】
図１０は、容器手段としてポリプロピレンで製造された試験管を用いて実験的に得られた血液製剤の断面図を示す。
【００８８】
本発明を好ましい実施形態に関して記載した。しかしながら、本発明の範囲は例示した実施形態に限定されず、本発明の範囲から逸脱することなく、変更、組み合わせ、および修正を行うことができる。
【実施例１】
【００８９】
１．プラスチック容器（例えば、２ｍｌマイクロ遠心管）を用い、凝固トリガー、例えば４つのガラスビーズ（直径２ｍｍ）を添加する。
２．プラスチック容器に採血する。
３．血液および凝固活性化因子を２分間転倒混合する。
４．容器を１６２００ｇで２０分間スピンする。
５．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
６．鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
【００９０】
この方法において、必要とされるスピン時間およびスピン速度は、活性化の力によって決まる。例えば、凝固活性化が高度である場合、細胞は、これらがフィブリンネットワークに捕捉される前に分離されなければならず、高いスピン速度を必要とする。高いスピン速度のため、スピン時間は低値であることができる。
【実施例２】
【００９１】
１．標準の５０ｍｌ遠心管容器を用い、凝固トリガー、例えばガラスビーズを添加する。
２．遠心管に採血する。
３．管の血液を１分間混合する。
４．管を３０００ｇで２０分間スピンする。
５．蓋を開け、壁からフィブリン（頂部の血清に形成）を解離させる（細いプラスチック棒または針を使用）。
６．サンプルをさらに５分間３０００ｇでスピンする。
７．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
８．鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
【実施例３】
【００９２】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．蓋をして、容器の内部に真空を作る。
３．患者に針を挿入する。
４．真空のまま、針を容器に接続する。
５．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
６．管を１５０００ｇで１２分間スピンする。
７．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
８．蓋を取り、血液製剤を鉗子で取り出す。
【実施例４】
【００９３】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は１未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
３．例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
４．蓋をして、容器の内部に真空を作る。
５．患者に針を挿入する。
６．真空のまま、針を容器に接続する。
７．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
８．管を３０００ｇで８分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、ｇ力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
９．底のディスクを解放する。
１０．管を３０００ｇで２分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は１つのシートに圧縮される。
１１．蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
【実施例５】
【００９４】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は１未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
３．例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
４．容器の内部に真空を作り、蓋をする。
５．患者に針を挿入する。
６．真空のまま、針を容器に接続する。
７．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
８．管を３７００ｇで３分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、ｇ力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
９．８分間待つ。
１０．底のディスクを解放する。
１１．管を３０００ｇで２分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は１つのシートに圧縮される。
１２．蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
【００９５】
上記の実施例から考えられるように、凝固活性化、スピン速度（ｇ）、スピン時間、スピン間の静止時間は、ある範囲内で多様であり得る。
【００９６】
これらを以下の表に例示する。
【００９７】
【表１】
【００９８】
ディスクを用いて処理する場合。
【００９９】
【表２】
【実施例６】
【０１００】
相対遠心分離力および時間の最適化
【０１０１】
１．全血（ｆｕｌｌ ｂｌｏｏｄ）を６ｍｌＥＤＴＡ管（Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ、ＢＤ（登録商標））に採血した。
２．ポリアミドまたはポリウレタンから調製した２０ｍｌ容器（内径２６ｍｍ）に１８ｍｌ充填し、様々なＲＣＦ（相対遠心分離力）で様々な時間スピンした。
３．上記スピン時間後、底部（底から約５ｍｍ上）および頂部（表面から約５ｍｍ下）のサンプル（約３００ｕｌ）をシリンジ採取し、その後、次のサンプルを得るために、スピンを継続した。底部サンプルをＤ−ＰＢＳで１：１に希釈した。
４．自動細胞計測（ＸＥ２１００、Ｓｙｓｍｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）によってサンプルを分析し、元のサンプルの細胞数を算出した。結果はｍｌ当たり細胞（１００万）で示す。
【０１０２】
時間（分）の関数としての、所与の相対遠心分離力（ｇ）で遠心分離した血液の上部（頂部）および下部（底部）のミリリットル当たり血小板（１００万）
【０１０３】
【表３】
【０１０４】
時間（分）の関数としての、所与の相対遠心分離力（ｘｇ）で遠心分離した血液の上部（頂部）および下部（底部）のミリリットル当たり白血球（１００万）
【０１０５】
【表４】
【実施例７】
【０１０６】
慢性創傷液に対する応答としての成長因子放出
【０１０７】
１．実施例１に示した方法によって血液製剤を生成した。
２．血液製剤を半分に切断し、１００ｕｌＰＢＳ１％ＢＳＡまたは１００ｕｌ慢性損傷液（静脈性下腿潰瘍から２４時間採取）に加え、３７℃でインキュベートした。
３．所与の時点（１、２、３．５、７、１４、２２、および２９時間）後、サンプルを１６０００ｇで１０分間スピンし、上清を新しい管に移し、１／１０（８１ｕｌサンプル＋９ｕｌＰＩ）プロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）を添加し、−８０℃で凍結させた。
４．製造業者によって記載されているとおり、ＥＬＩＳＡキット（ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）ＥＬＩＳＡカタログ番号ＤＹ２２２、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、血小板由来成長因子−ＡＢレベルを求めた。元のサンプルのＰＤＧＦ−ＡＢ濃度を算出した。
【０１０８】
時間（時）の関数としての、血液製剤からの血小板由来成長因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）放出（ｎｇ／血液製剤ｍｌ）
【０１０９】
【表５】
【実施例８】
【０１１０】
１．実施例１に示した方法によって血液製剤を生成した。
２．２つの血液製剤を１ｍｌＤＭＥＭ（ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中、３７℃および５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。
３．並行して、２つの血液製剤を、リポ多糖（（１０ｎｇ／ｍｌ）大腸菌由来ＬＰＳ；Ｌ２６５４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む１ｍｌＤＭＥＭ（ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中、３７℃および５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。
４．４８時間後、媒質をマイクロ遠心管に移し、１６２００ｘｇで２０分間スピンした。分析まで、上清を−８０℃で凍結させた。
５．両方のキットでバッファ４（ＡＲＹ００７）を用いたことを除いて、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓによって記載されているとおり、プロテオーム・プロファイラ・アレイＡＲＹ００７およびＡＲＹ００５（共にＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を実行した。Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓによって記載されているとおり、４２０ｕｌ上清を５００ｕｌバッファ４および５８０ｕｌバッファ５で希釈した。
６．化学発光ＨＲＰ基質（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ Ｗｅｓｔｅｒｎ（商標）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳ）を用いて、アレイによる反応性を検出した。
７．Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ３０００システム（Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ、ＵＳ）を用いて、発光を捕捉した。Ｆｌｏｕｒｃｈｅｍソフトウェア（Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ、ＵＳ）で平均ピクセル密度を得た。
【０１１１】
【表６】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多層血液製剤、血液製剤を調製する方法、この方法によって得られる血液製剤、および血液製剤調製容器手段に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの凝固系は出血を止め、治癒を開始することができる。この系の機能はよく知られており、広く研究されている。しかしながら、治癒の開始における凝固産物の重要性は、最近認識されたばかりである。
【０００３】
フィブリン糊および濃厚血小板などの血液製剤は、抗凝固処理全血から多血小板血漿（ＰＲＰ）を単離することによって生成される。血小板および血漿の存在は、トロンビン活性化により、天然のヒト凝固系をある程度模倣する。これによりフィブリン基質中に成長促進因子の血小板含有自己濃縮物がもたらされる。このような組成物は、創傷表面を被覆するために用いることができ、治癒を開始すると言われている。
【０００４】
Ｄａｖｉｄ Ｍ．Ｄｏｈａｎらの「Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｒｉｃｈ ｆｉｂｒｉｎ（ＰＲＦ）：Ａ ｓｅｃｏｎｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ．Ｐａｒｔ Ｉ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４」は、どのような添加剤も試薬も添加することなく、全血から多血小板固体フィブリンネットワークを調製する方法を記載している。ＰＲＦプロトコルは以下のとおりである。抗凝固剤を用いずに、血液サンプルを１０ｍＬガラス管またはガラス被覆プラスチックにとり、これを直ちに約４００ｇで１０分間遠心分離する。抗凝固剤の不在は、ガラス管壁と接触して血液サンプルのほとんどの血小板が数分で活性化し、凝固カスケードが解放されることを意味する。フィブリノゲンは、最初は管の高所に集まり、その後、循環トロンビンがこれをフィブリンに変換する。次いで、管の中間部にフィブリンクロットが得られ、管底部の赤血球の上部から頂部の無細胞血漿に広がる。血小板はフィブリン網に大量に捕捉される。この技法の成功は、すべて血液採取と遠心分離機への輸送の速度にかかっている。実際、抗凝固剤を用いなければ、血液サンプルは管のガラスに接触するとほぼ即座に凝固を始め、管の中間部および上部にフィブリノゲンを集めるためには遠心分離で最短でも数分間かかる。迅速な取り扱いが、臨床上使用可能なＰＲＦクロットを得る唯一の方法である。血液の採取および遠心分離の開始に要する時間が過度に長い場合、失敗となる。フィブリンは管の中で拡散して重合し、一貫性のない小さい血液クロットのみが得られる。結論として、ＰＲＦプロトコルは、血清および血小板を含むフィブリンクロットの採集を可能にする。管からクロットを取り出し、手作業で赤血球部分を分離し、フィブリン基質に捕捉された流体（血清）を手作業で排除することによって、実施者は自己フィブリン膜を得る。
【０００５】
しかしながら、このフィブリンネットワークには、相当部分の赤血球を含有する赤色血栓が含まれ、これを手作業で分離しなければならない。さらに、フィブリン、白血球、および血小板などの生成されたフィブリンネットワークの成分は、生成物中に任意に分布し、網に捕捉されている。白血球の回収は記載されておらず、用いられる小さいｇ力では、一部が赤血球部分に含まれ、白血球の回収は低量である。フィブリン中の細胞が網に捕捉されていることにより、これらの細胞は放出されないか、または緩やかに放出され、これによって包含される白血球の接触依存性抗殺菌（ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｉｃｉｄａｌ）潜在性を阻害する。
【０００６】
Ｄｏｈａｎらの「Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４および２００６；１０１：Ｅ４５−５０」は、濃厚血小板の形状および構造でないネットワークを記載しており、これは創傷表面を被覆するためにそのまま適用できる。創傷表面を被覆するために使用可能な形状および形態／剛性を得るため、ならびに赤血球が含まれるのを防ぐために、既知の多血小板固体フィブリンネットワークは手作業で再形成し、圧縮しなければならない。さらに、この方法は幾つかの工程を含み、１つの閉鎖系では調製できず、従って臨床での使用に好都合でない。
【０００７】
Ｓｕｔｔｏｎらの「Ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ．１９８８；２５（４）：６６３−７３」は、抗凝固処理全血が遠心分離または受動的沈降によってどのように幾つかの層に分離されるかを記載している；赤血球、白血球および血小板（＝バフィーコート）、ならびに血漿。さらに、１０分間遠心分離力１００００ｇを用い、浮遊密度（ｆｌｏａｔ ｏｆ ｄｅｎｓｉｔｙ）１．０５３を用いることによって、バフィーコートをグルタルアルデヒドで固定し、研究のために取り出すことができる。しかしながら、グルタルアルデヒドの毒性のため、これは臨床では使用できない。抗凝固処理血液からバフィーコートを抽出するための幾つかの方法が存在し、これには密度確定物質（即ち、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）の使用が含まれる。抗凝固処理血液の必要性に加えて、抽出された細胞は必然的に包含される血漿に懸濁され、混合（分散）される。
【０００８】
ＥＰ１６３７１４５Ａは、シート様多孔質膜によって懸濁液から細胞を濾過する方法（例えば、血小板および白血球を含む血液細胞）を記載しており、記載されているように膜に細胞が残される。シート多孔質材料は、フィブリンから調製できる。しかしながら、層構造は得られず、細胞は多孔質材料の深部に捕捉されており、同種異系フィブリンの使用は他のヒトからの交差感染のリスクを高める。さらに、この方法は幾つかの工程を含み、１つの閉鎖系では調製できず、従って臨床での使用に好都合でない。
【０００９】
既知の方法は、これらの使用、特に臨床での使用が限定されている。細胞分離前の抗凝固剤の添加は、完全には自己由来でない製品を生じ、さらに創傷治癒促進物質（例えば、成長因子）の放出には、他の非自己物質（例えば、トロンビン、Ｃａ２など）との混合を要し、所望の細胞分布を持たない均質な最終製品がもたらされる。
【００１０】
抗凝固を排除した既知の方法は、細胞の無秩序な分布をもたらし、細胞は製品内部に固定され、これらの細胞の放出および潜在性を事実上限定している。さらに、これらの方法は、臨床での使用に物理的に適した製品を得るために、閉鎖系外部での手作業での取り扱いを必要とし、不適切に確定された取り扱いは、最適細胞収量より低い収量を伴う可変的な結果をもたらす。さらに、手作業での取り扱いは、作業時間（コスト）を必要とし、調製時間を長引かせる。
【００１１】
明確な層構造を記載する方法は、臨床での使用、得られた構造の固定および自立に適していない、抗凝固および毒性成分の添加に依存している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】欧州特許出願公開第１６３７１４５号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｒｉｃｈ ｆｉｂｒｉｎ（ＰＲＦ）：Ａ ｓｅｃｏｎｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ．Ｐａｒｔ Ｉ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ３７−４４、Ｄａｖｉｄ Ｍ．Ｄｏｈａｎら
【非特許文献２】Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ Ｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｌ Ｅｎｄｏｄ ２００６；１０１：Ｅ４５−５０、Ｄｏｈａｎら
【非特許文献３】Ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ．１９８８；２５（４）：６６３−７３、Ｓｕｔｔｏｎら
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の目的は、従来技術の欠点の少なくとも１つを克服もしくは改善するか、または有用な代替を提供する、新規であり改善された血液製剤を提供することである。本発明の目的はさらに、従来技術の欠点の少なくとも１つを克服もしくは改善するか、または有用な代替を提供する血液製剤を得るための新規であり改善された方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の目的は、全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む血液製剤によって達成され、血液製剤は、第１層、第２層、および第３層を含み、第２層は、第１層および第３層に隣接しており、第１層は、血液製剤の第１外面を画定し、第３層は、血液製剤の第２外面を画定し、第１層は、大部分のフィブリンを含み、第２層は、大部分の血小板を含み、第３層は、大部分の白血球を含む。これにより、多層構造を有する血液製剤が提供され、各層はそれぞれの層の異なる組成のため、異なる機能性を提供する。血液製剤は、自己支持性、緻密、および固体であり、血液製剤を意図された用途にそのまま適用できるような構造を有する。大部分とは、フィブリン、血小板、または白血球などの成分が、各層の体積および／または質量に関して、および／または血液製剤の体積および／または質量に関して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはこれらの記載したパーセントの組み合わせから画定できる任意の区間を占めることを意味する。第１、第２、および第３層は、それぞれ連続しており、および／または実質的に互いに平行であり、例えば層状および／または多層血液製剤を形成する。血液製剤は、好ましくは３層、例えば大部分のフィブリンを含む第１層、大部分の血小板を含む第２層、および大部分の白血球を含む第３層からなる。血液製剤は、好ましくは最大幅／厚比１、２、３、４、または５を有するが、この比は１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０まで、または１００までであることができ、幅は血液製剤の層に沿って測定され、厚さは血液製剤の層と垂直に測定される。
【００１６】
本発明の一態様において、血液製剤に含まれる大部分のフィブリンは、第１層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分のフィブリンが第１層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１７】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の血小板は、第２層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の血小板が第２層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１８】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の白血球は、第３層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の白血球が第３層に含まれる血液製剤が提供される。
【００１９】
本発明の別の態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、全血由来の成分のみからなる血液製剤が提供され、これは全血および／または血液製剤に添加剤が加えられていないこと、ならびに血液製剤が、全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導できることを意味する。
【００２０】
本発明の別の態様において、血液製剤は自己由来である。
【００２１】
本発明の別の態様において、血液製剤は可撓性である。これにより、通常の使用中、破裂することなく適用応力に耐えることのできる血液製剤が提供される。血液製剤の可撓性のため、血液製剤は、この血液製剤が適用される非常に連続的な輪郭に順応する。
【００２２】
本発明の別の態様において、血液製剤はさらに、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質を含む。これにより、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒潜在性が改善される血液製剤が提供される。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００２３】
本発明はまた、治療に使用するための血液製剤、および／または治療に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００２４】
本発明はまた、治療に使用する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００２５】
本発明はまた、創傷を治療するための血液製剤、および／または創傷を治療するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００２６】
本発明はまた、創傷を治療する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。これにより、創傷を治療する薬剤を製造するのに特に適した血液製剤が提供される。第３層は、第１活性細胞であり、従って感染を制御し、マクロファージを含む他の細胞を誘引する大部分の白血球を含み、第２層は、線維芽細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含み、血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に無菌に、例えば感染なく保持および／または維持される。第３層は、製品から容易に放出される大部分の白血球を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に感染なく保持および／または維持される。白血球は、感染および異物から身体を防御する免疫系の細胞であり、従って白血球は感染を制御し、さらにマクロファージを含む他の細胞を誘引する。第２層は、細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含む。白血球は製品から迅速に放出されるため、第２層は、成長促進物質を創傷に最適に送達するように、創傷面に面する。血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含む。
【００２７】
本発明はまた、自己使用するための血液製剤、および／または自己使用するための請求項１から７のいずれかに記載の血液製剤の使用に関する。
【００２８】
本発明はまた、自己薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００２９】
本発明はまた、例えば領域を密封するため、手術後の癒着を防ぐため、および／または吻合手技に用いる、手術に使用するための血液製剤、および／または手術に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００３０】
本発明はまた、手術に使用する薬剤を製造するための血液製剤の使用に関する。
【００３１】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用である。吻合のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００３２】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用の製剤を製造するために用いられる。
【００３３】
本発明はまた、ある体積の全血から血液製剤を調製する方法に関し、以下の工程：ａ）体積の全血を容器手段に入れる工程であって、容器手段が、全血が接触する内面を画定する第１材料を含む工程、ｂ）全血の凝固を活性化する工程、ｃ）容器手段に配置された全血に作用する遠心力によって、全血を赤血球、血清、および血液製剤に分離し、これによって全血が、赤血球、血液製剤、および血清間の密度の違いにより、赤血球、血液製剤、および血清を含む層に分離する工程であって、血液製剤は、フィブリン、白血球、および血小板を含み、適用される遠心力は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００倍大きい工程、ならびにｄ）血液製剤を容器手段から取り出す工程を含む。これにより、血液製剤が全血から誘導される方法が提供される。この方法は、赤血球を単離する必要がないため、閉鎖系において１サイクルで処理することができるが、この方法は、赤血球の単離を用いて行うこともできる。全血からフィブリンを抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％であり、全血から白血球を抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％であり、全血から血小板を抽出する方法の収率は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％超、または１００％である。得られる血液製剤は、全血の体積の３０％、２０％、１５％、１０％未満、または５％未満の体積を有する。これにより、血液製剤が例えば遠心力を生じる遠心分離によって得ることのできる方法が提供される。適用される遠心力は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００倍、もしくは２００００倍大きいか、または適用される遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。遠心力が適用される時間は、少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分、もしくは３０分間であるか、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内、適用される。
【００３４】
本発明の一態様において、全血からフィブリンを抽出する方法の収率は、少なくとも６０％超である。
【００３５】
本発明の一態様において、全血から白血球を抽出する方法の収率は、少なくとも５０％超である。
【００３６】
本発明の一態様において、全血から血小板を抽出する方法の収率は、少なくとも６０％超である。
【００３７】
本発明の一態様において、遠心力は、少なくとも３０秒間適用される。遠心力が適用される時間は、少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分、もしくは３０分間であるか、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内、適用される。
【００３８】
本発明の一態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、血液製剤が全血から誘導され、従って全血由来の成分のみからなる方法が提供される。従って、この方法は、全血および／または血液製剤に添加剤を加えることなく行われる。
【００３９】
本発明の別の態様において、工程ｂ）の凝固は、内面を画定する第１材料によって活性化される。これにより、全血を内面と接触させたとき、凝固が開始され、従って凝固を開始するために、全血に物体などを添加することを回避できる方法が提供される。
【００４０】
本発明の別の態様において、工程ｂ）の凝固は、全血をガラスビーズなどの物体に暴露することによって活性化される。これにより、全血に添加した物体と全血を接触させたとき、凝固が開始される方法が提供される。これにより、この方法に最適である、選択された時点で凝固を開始できる。
【００４１】
本発明の別の態様において、容器手段の内面の第１材料は、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカルボナート、ポリアミド、アクリロニトリルブタジエンスチレン、スチレン、変性スチレン、ポリウレタン、および他のポリマー材料からなる群から選択される。記載した群のポリマーはさらに、ガラス充填され得る。これにより、第１材料の内面を有する容器手段が、すべての種類のポリマー、金属、またはガラスから製造された典型的な試験管などであることができる方法が提供される。この材料は、材料特性が血液製剤と内面との間の最小の接着力／摩擦を提供するように選択することもできる。ポリアミドおよびポリウレタンは、他のポリマーを用いて得られるレベルより高い、好ましい活性化レベルの範囲内で凝固を開始するため、これらの材料は好ましい。
【００４２】
本発明の別の態様において、容器手段の内面は、血液製剤と第１材料の内面との間の摩擦を下げるために、表面処理、例えば被覆されている。これにより、第１材料の内面を有する容器手段が、すべての種類のポリマー、金属、またはガラスから製造された典型的な試験管などであることができる方法が提供される。内面は、血液製剤と内面との間の最小の接着力／摩擦を得るために、表面処理および／または被覆され得る。
【００４３】
本発明の別の態様において、遠心力は、内面と血液製剤との間に作用する接着力より大きい。これにより、遠心力が接着力と比較して優位であり、これによって血液製剤の明確な層構造が確保される方法が提供される。遠心力は、接着力より少なくとも１０、１００、１０００、５０００、１００００、２００００、５００００、１０００００、１００００００、もしくは１０００００００倍大きい力であることができ、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。本発明の別の態様において、遠心力および遠心分離の時間は、内面とフィブリンとの間に作用する接着力が破壊／解放され、これによってフィブリン層が圧縮／圧搾されるような強度である。これにより、遠心力が接着力と比較して優位であり、これによって血液製剤の明確な層構造が確保される方法が提供される。壁への接着を解放するのに必要とされる遠心力は、フィブリン密度によって決まる。フィブリン密度は、凝固活性化、フィブリン濃度、時間などを含む幾つかの要因によって決まる。遠心分離力は、少なくとも１０、１００、１０００、５０００、１００００、２００００、５００００、もしくは１０００００ｇであることができ、または遠心力は、記載した数値の組み合わせから画定できる任意の区間内である。
【００４４】
本発明の別の態様において、内面に接着している血液製剤は、工程ｃ）中、少なくとも１度、内面から剥離される。これにより、起こり得る血液製剤の内面への接着が、工程ｃ）中に少なくとも１度血液製剤を分離することによって対処できる方法が提供される。分離は、切断などの機械的手段によって行うことができる。その後、ｇ力はフィブリンを壁から解放する必要がないため、フィブリンの圧縮はより低いｇ力で行うことができる。
【００４５】
本発明の別の態様において、この方法はさらに、容器手段に配置されたフィルタなどの圧縮手段によって血液製剤が圧縮される圧縮工程を含む。これにより、例えばフィルタによって血液製剤を圧縮することのできる方法が提供される。フィルタは、容器手段に固定して、または移動可能に配置することができ、フィルタは、血液製剤を単離するために用いることができる。
【００４６】
本発明の別の態様において、この方法は、工程ｃ）中に赤血球が血液製剤から単離される単離工程をさらに含む。これにより、この方法の間に赤血球が血清および血液製剤から単離される方法が提供される。
【００４７】
本発明の別の態様において、この方法は、血液製剤が洗浄され、血液製剤に付着した実質的にすべての赤血球および／または血清が剥離される洗浄工程をさらに含む。これにより、血液製剤から他の成分が実質的に除去され、血液製剤が血液製剤自体である方法が提供される。遠心分離中に形成された血清を洗浄液として用いることができる。
【００４８】
本発明の別の態様において、容器手段は、取り外し可能な蓋で閉鎖可能な開口端、および閉鎖端を含む管である。これにより、標準の試験管などを用いて本方法を行うことができる方法が提供される。
【００４９】
本発明の別の態様において、工程ｂ）が工程ａ）に先行する。これにより、全血を容器手段に入れる前に、凝固を活性化することができ、従って容器手段は凝固活性化因子を含む必要がなく、および／または全血を容器手段に入れるとき、全血は凝固活性化因子を含む必要がない。凝固は、例として、採血管にガラスビーズを入れることによって、または血液を活性化する管材料を選択することによって、採血中に活性化することができる。従って、凝固を開始するために、全血に物体などを添加するのを回避することができる。
【００５０】
本発明の別の態様において、工程ｂ）は、工程ａ）の少なくとも１分前に行われる。これにより、非常に迅速な取り扱いを必要としない方法が提供される。工程ｂ）は、工程ａ）の少なくとも３０秒、４０秒、５０秒、６０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、または２０分前に行うことができる。工程ｂ）の凝固活性化のレベルもこの方法によって制御できる。工程ｃ）の細胞分離は、フィブリンが細胞分離を阻害するのに十分なレベルである前に行わなければならないため、これによって工程ｂ）とａ）との間の時間を延長することが可能となる。
【００５１】
本発明の別の態様において、工程ｂ）は、工程ｃ）と同時に行われる。これにより、工程ｃ）中、この方法に最適な時点で凝固を活性化できる。凝固は、容器手段に組み入れた凝固活性化因子によって、および／または血液を活性化する容器材料を用いることによって、活性化／開始することができる。凝固因子材料は、容器手段において全血に添加されるガラスビーズなどの物体であることができる。
【００５２】
本発明の別の態様において、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質が全血に添加される。これにより、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒が改善される血液製剤を得ることができる。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００５３】
本発明の別の態様において、フィルタなどの圧縮手段は、第１固定位置および第２位置を有する。白血球および血小板は分離され、血清中のフィブリンは圧縮されていない遠心分離の最初の部分の間、フィルタは、赤血球を含有する容器手段の一部の位置に固定される。フィルタの密度が血清の密度より小さいならば、フィルタの解放によってフィルタは管の頂部に運ばれ、これによって白血球および血小板層の収集ならびにフィブリン層の圧縮が起こる。
【００５４】
本発明の別の態様において、フィルタなどの圧縮手段は、容器手段壁を変形することによって、第１固定位置に固定される。フィルタは、管壁を変形することによって固定される。フィルタは、壁の変形を取り除くことによって解放される。
【００５５】
本発明の別の態様において、全血の代わりに、フィブリンを含む血漿、ならびに白血球および血小板を含むバフィーコートが用いられる。これにより、赤血球を除く全血を用いることができ、従って血液製剤を全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導できる方法が提供される。
【００５６】
本発明の別の態様において、この方法は、１５分以内に行われる。この方法は、少なくとも１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、２１分、２２分、２３分、２４分、２５分、２６分、２７分、２８分、２９分以内、または少なくとも３０分以内に行われる。
【００５７】
本発明の別の態様において、この方法によって得られる血液製剤は、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤である。
【００５８】
本発明はまた、全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含み、血液製剤は、第１層、第２層、および第３層を含み、第２層は、第１層および第３層に隣接しており、第１層は、血液製剤の第１外面を画定し、第３層は、血液製剤の第２外面を画定し、第１層は、大部分のフィブリンを含み、第２層は、大部分の血小板を含み、第３層は、大部分の白血球を含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤に関する。これにより、多層構造を有する血液製剤が得られ、各層はそれぞれの層の異なる組成のため、異なる機能性を提供する。血液製剤は、自己支持性、緻密、および固体であり、血液製剤を意図された用途にそのまま適用できるような構造を有する。大部分とは、フィブリン、血小板、または白血球などの成分が、各層の体積および／または質量に関して、または血液製剤の体積および／または質量に関して、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはこれらの記載したパーセントの組み合わせから画定できる任意の区間を占めることを意味する。第１、第２、および第３層は、それぞれ連続しており、および／または実質的に互いに平行であり、例えば層状および／または多層血液製剤を形成する。血液製剤は、好ましくは３層、例えば大部分のフィブリンを含む第１層、大部分の血小板を含む第２層、および大部分の白血球を含む第３層からなる。血液製剤は、好ましくは最大幅／厚比１、２、３、４、または５を有するが、この比は１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０まで、または１００までであることができ、幅は血液製剤の層に沿って測定され、厚さは血液製剤の層と垂直に測定される。
【００５９】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分のフィブリンは、第１層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分のフィブリンが第１層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６０】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の血小板は、第２層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の血小板が第２層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６１】
本発明の別の態様において、血液製剤に含まれる大部分の白血球は、第３層に含まれる。これにより、全血液製剤に含まれる大部分の白血球が第３層に含まれる血液製剤を得ることができる。
【００６２】
本発明の別の態様において、血液製剤は、全血由来の成分のみからなる。これにより、全血由来の成分のみからなる血液製剤を得ることができ、これは全血および／または血液製剤に添加剤が加えられていないこと、ならびに血液製剤が、全血、全血画分、または全血画分の組み合わせから直接誘導されることを意味する。
【００６３】
本発明の別の態様において、血液製剤は自己由来である。
【００６４】
本発明の別の態様において、血液製剤は可撓性である。これにより、通常の使用中、破裂することなく適用応力に耐えることのできる血液製剤を得ることができる。血液製剤の可撓性のため、血液製剤は、この血液製剤が適用される非常に連続的な輪郭に順応する。
【００６５】
本発明の別の態様において、血液製剤はさらに、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質を含む。これにより、血液製剤は、皮膚再生に重要であることが知られている追加の細胞を含み、これによってさらに慢性損傷、特に成長能力が低いか、または成長可能でない周囲組織を有する領域の創傷の治癒が改善される。既知の皮膚成分であるヒアルロン酸は、血液製剤の水結合能を増大し、組織損失領域での血液製剤の取り込み／浸透可能性を増大する潜在性を有する。
【００６６】
本発明の別の態様において、血液製剤は、治療に使用するためのものである。治療に使用するために、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００６７】
本発明の別の態様において、血液製剤は、治療に使用する薬剤を製造するために用いられる。
【００６８】
本発明の別の態様において、血液製剤は、創傷を治療するためのものである。創傷を治療するための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００６９】
本発明の別の態様において、血液製剤は、創傷を治療する薬剤を製造するために用いられる。これにより、創傷を治療する薬剤を製造するのに特に適した血液製剤を得ることができる。第３層は、第１活性細胞であり、従って感染を制御し、マクロファージを含む他の細胞を誘引する大部分の白血球を含み、第２層は、創傷治癒および／または肉芽形成を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含み、血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に無菌に、例えば感染なく保持および／または維持される。第３層は、製品から容易に放出される大部分の白血球を含むため、第３層によって定められる第２外面を創傷に適用することによって、創傷は、実質的に感染なく保持および／または維持される。白血球は、感染および異物から身体を防御する免疫系の細胞であり、従って白血球は感染を制御し、さらにマクロファージを含む他の細胞を誘引する。第２層は、細胞を刺激する成長促進因子を含む大部分の血小板を含む。白血球は製品から迅速に放出されるため、第２層は、成長促進物質を創傷に最適に送達するように、創傷面に面する。血液製剤の第１層は、大部分のフィブリンを含み、従って血液製剤の第１外面は、周囲からの汚染に対して有効な防御を提供し、第１層はさらに、経時的に放出される成長促進因子を含む。
【００７０】
本発明の別の態様において、血液製剤は、自己使用のために用いられる。自己使用のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００７１】
本発明の別の態様において、血液製剤は、自己薬剤を製造するために用いられる。
【００７２】
本発明はまた、例えば領域を密封するため、手術後の癒着を防ぐため、および／または吻合手技に用いる、手術に使用するための血液製剤、および／または手術に使用するための前述の血液製剤の使用に関する。
【００７３】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用である。吻合のための、前述の方法によって得られる血液製剤の使用。
【００７４】
本発明の別の態様において、血液製剤は、吻合用の製剤を製造するために用いられる。
【００７５】
本発明はまた、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を調製するための血液製剤調製容器手段に関し、血液製剤調製容器手段は、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む。これにより、全血の凝固を活性化するか、またはより具体的には補体活性化を提供し、同時にポリマー脆弱性および／またはコストのため、ガラス容器より好ましく、これらの凝固不活性特性のため他のポリマー容器より好ましいポリマー材料を含む血液製剤調製容器手段が提供される。ポリアミドおよび／またはポリウレタンが全血の凝固を活性化するという事実は驚くべきものであり、この血液製剤調製容器手段は、既知のガラス容器手段とポリマー容器手段の利点を兼ね備えているため、典型的な既知のガラス容器手段および凝固不活性ポリマー容器手段の良好な代替手段が提供される。
【００７６】
本発明はまた、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を製造するための、請求項５８に記載の血液製剤調製容器手段の使用に関する。
【００７７】
本発明はまた、血液製剤調製容器手段に関し、血液製剤調製容器手段は、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む。これにより、全血の凝固を活性化するか、またはより具体的には補体活性化を提供し、同時にポリマー脆弱性および／またはコストのため、ガラス容器より好ましく、これらの凝固不活性特性のため他のポリマー容器より好ましいポリマー材料を含む血液製剤調製容器手段が提供される。ポリアミドおよび／またはポリウレタンが全血の凝固を活性化するという事実は驚くべきものであり、この血液製剤調製容器手段は、既知のガラス容器手段とポリマー容器手段の利点を兼ね備えているため、典型的な既知のガラス容器手段および凝固不活性ポリマー容器手段の良好な代替手段が提供される。
【００７８】
本発明はまた、血液製剤を製造するための、請求項６０に記載の血液製剤調製容器手段の使用に関する。
本発明を次の図面を参照して以下に詳しく説明する。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】本発明による容器手段の第１の実施形態の断面図である。
【図２】本発明による容器手段の第２の実施形態の断面図である。
【図３】本発明による容器手段の第３の実施形態の断面図である。
【図４】本発明による容器手段の第４の実施形態の断面図である。
【図５】本発明による容器手段の第１の実施形態の断面図である。
【図６】本発明による容器手段の第２の実施形態の断面図である。
【図７】本発明による容器手段の第３の実施形態の断面図である。
【図８】本発明による容器手段の第４の実施形態の断面図である。
【図９】本発明による血液製剤の実施形態の断面図である。
【図１０】本発明による血液製剤の実施形態の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
図１から４はそれぞれ、容器手段１の第１、第２、第３、および第４の実施形態を例示する。４つの実施形態において、容器手段１は、内面３を有する空洞を含む。空洞は、壁４、閉鎖端１２、および蓋２によって閉鎖可能な開口端によって境界を定められる。容器手段１は、ある体積の全血５を含み、容器手段１の開口端に搭載された蓋２によって周囲から閉鎖される。容器手段１は任意の材料で製造され得、材料は、容器手段１の材料が内面３を介して全血５と接触することにより、全血５の凝固カスケードをあるいは活性化するように選択することができ、これは図１の第１の実施形態および図３の第３の実施形態の場合である。または、容器手段１の材料は、材料が全血５の凝固カスケードに関して不活性であるように選択することができ、これは図２の第２の実施形態および図３の第４の実施形態の場合であり、ここでは物体７を用いて全血５の凝固カスケードが活性化されるように、血液５の凝固カスケードを活性化する材料で製造された物体７が、代わりに全血５に添加される。４つの実施形態において、容器手段１の内面３は、内面３と血液５の任意の成分との間の摩擦を下げるために、被覆および／または表面処理され得、さらに容器手段１の材料は、例えば低タンパク結合能を有する材料を選択することによって、内面３と血液５の任意の成分との間の低い摩擦が得られるように選択することができる。図３および４に示した第３および第４の実施形態において、フィルタなどの圧縮手段８は、容器手段１内に配置されており、これによって血液製剤１０は、圧縮手段に対して圧縮される。
【００８１】
工程の初期部分では、圧縮手段８は容器手段１の閉鎖端１２に固定され得、ここに赤血球が位置する。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血漿より低いならば、圧縮手段は血漿の頂部に送られる。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８２】
工程の初期部分では、圧縮手段８は容器手段１の閉鎖端１２に固定され得、ここに赤血球が位置する。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血清より低いならば、圧縮手段は血清の頂部に送られる。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８３】
４つの実施形態すべてにおいて、全血５は、例示のとおり下向きに作用する遠心力６に供されるが遠心力６は、示した方向に限定されない。全血５の成分は異なる密度を有し、従って遠心力６に対して異なる応答をするため、遠心力６は分離手段として機能する。
【００８４】
図１から４は、遠心力６が適用されたばかりであり、従って全血５の分離が目に見えない時点での容器手段１の４つの実施形態を例示し、図５から８はそれぞれ、遠心力６が十分に長く、十分な大きさで作用し、従って全血５が血清９、血液製剤１０、および赤血球１１に分離した時点での容器手段１の第１、第２、第３、および第４の実施形態を示す。
【００８５】
図１から４は、遠心力６が適用されたばかりであり、従って全血５の分離が目に見えない時点での容器手段１の４つの実施形態を例示し、遠心力６が十分に長く、十分な大きさで作用し、従って全血５が、この血清部分全体にフィブリンが分布している血清９、血小板および白血球層１０、および赤血球１１に分離した時点での１。後の時点では、圧縮手段８は解放され得、圧縮手段８の密度が血清より低いならば、圧縮手段は血清の頂部に送られ、これによってフィブリンが壁から放出され、フィブリンが圧縮される。蓋２を取り外すことによって、血液製剤１０を容器手段１から取り出すことができる。容器手段１からの輸送時、血液製剤１０を支持するために、圧縮手段８または圧縮手段の一部を用いることができる。
【００８６】
図９は、第１層２１、第２層２２、および第３層２３を含む血液製剤１０の概略的な断面図を例示し、ここで第２層は、第１層２１および第３層２３に隣接している。第１層２１は、血液製剤１０の第１外面２４を画定し、第３層２３は、血液製剤１０の第２外面を画定する。第１層２１は、大部分のフィブリンを含み、第２層２２は、大部分の血小板を含み、第３層２３は、大部分の白血球を含む。従って、血液製剤１０は、各層が異なる組成を有し、従って異なる機能性を有する明確な多層構造を有する。
【００８７】
図１０は、容器手段としてポリプロピレンで製造された試験管を用いて実験的に得られた血液製剤の断面図を示す。
【００８８】
本発明を好ましい実施形態に関して記載した。しかしながら、本発明の範囲は例示した実施形態に限定されず、本発明の範囲から逸脱することなく、変更、組み合わせ、および修正を行うことができる。
【実施例１】
【００８９】
１．プラスチック容器（例えば、２ｍｌマイクロ遠心管）を用い、凝固トリガー、例えば４つのガラスビーズ（直径２ｍｍ）を添加する。
２．プラスチック容器に採血する。
３．血液および凝固活性化因子を２分間転倒混合する。
４．容器を１６２００ｇで２０分間スピンする。
５．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
６．鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
【００９０】
この方法において、必要とされるスピン時間およびスピン速度は、活性化の力によって決まる。例えば、凝固活性化が高度である場合、細胞は、これらがフィブリンネットワークに捕捉される前に分離されなければならず、高いスピン速度を必要とする。高いスピン速度のため、スピン時間は低値であることができる。
【実施例２】
【００９１】
１．標準の５０ｍｌ遠心管容器を用い、凝固トリガー、例えばガラスビーズを添加する。
２．遠心管に採血する。
３．管の血液を１分間混合する。
４．管を３０００ｇで２０分間スピンする。
５．蓋を開け、壁からフィブリン（頂部の血清に形成）を解離させる（細いプラスチック棒または針を使用）。
６．サンプルをさらに５分間３０００ｇでスピンする。
７．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
８．鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
【実施例３】
【００９２】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．蓋をして、容器の内部に真空を作る。
３．患者に針を挿入する。
４．真空のまま、針を容器に接続する。
５．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
６．管を１５０００ｇで１２分間スピンする。
７．この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
８．蓋を取り、血液製剤を鉗子で取り出す。
【実施例４】
【００９３】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は１未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
３．例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
４．蓋をして、容器の内部に真空を作る。
５．患者に針を挿入する。
６．真空のまま、針を容器に接続する。
７．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
８．管を３０００ｇで８分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、ｇ力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
９．底のディスクを解放する。
１０．管を３０００ｇで２分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は１つのシートに圧縮される。
１１．蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
【実施例５】
【００９４】
１．ポリアミドまたはポリウレタンから調製された２０ｍｌ容器（内径：２６ｍｍ）を用いる。
２．容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は１未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
３．例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
４．容器の内部に真空を作り、蓋をする。
５．患者に針を挿入する。
６．真空のまま、針を容器に接続する。
７．真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
８．管を３７００ｇで３分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、ｇ力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
９．８分間待つ。
１０．底のディスクを解放する。
１１．管を３０００ｇで２分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は１つのシートに圧縮される。
１２．蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
【００９５】
上記の実施例から考えられるように、凝固活性化、スピン速度（ｇ）、スピン時間、スピン間の静止時間は、ある範囲内で多様であり得る。
【００９６】
これらを以下の表に例示する。
【００９７】
【表１】
【００９８】
ディスクを用いて処理する場合。
【００９９】
【表２】
【実施例６】
【０１００】
相対遠心分離力および時間の最適化
【０１０１】
１．全血（ｆｕｌｌ ｂｌｏｏｄ）を６ｍｌＥＤＴＡ管（Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ、ＢＤ（登録商標））に採血した。
２．ポリアミドまたはポリウレタンから調製した２０ｍｌ容器（内径２６ｍｍ）に１８ｍｌ充填し、様々なＲＣＦ（相対遠心分離力）で様々な時間スピンした。
３．上記スピン時間後、底部（底から約５ｍｍ上）および頂部（表面から約５ｍｍ下）のサンプル（約３００ｕｌ）をシリンジ採取し、その後、次のサンプルを得るために、スピンを継続した。底部サンプルをＤ−ＰＢＳで１：１に希釈した。
４．自動細胞計測（ＸＥ２１００、Ｓｙｓｍｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）によってサンプルを分析し、元のサンプルの細胞数を算出した。結果はｍｌ当たり細胞（１００万）で示す。
【０１０２】
時間（分）の関数としての、所与の相対遠心分離力（ｇ）で遠心分離した血液の上部（頂部）および下部（底部）のミリリットル当たり血小板（１００万）
【０１０３】
【表３】
【０１０４】
時間（分）の関数としての、所与の相対遠心分離力（ｘｇ）で遠心分離した血液の上部（頂部）および下部（底部）のミリリットル当たり白血球（１００万）
【０１０５】
【表４】
【実施例７】
【０１０６】
慢性創傷液に対する応答としての成長因子放出
【０１０７】
１．実施例１に示した方法によって血液製剤を生成した。
２．血液製剤を半分に切断し、１００ｕｌＰＢＳ１％ＢＳＡまたは１００ｕｌ慢性損傷液（静脈性下腿潰瘍から２４時間採取）に加え、３７℃でインキュベートした。
３．所与の時点（１、２、３．５、７、１４、２２、および２９時間）後、サンプルを１６０００ｇで１０分間スピンし、上清を新しい管に移し、１／１０（８１ｕｌサンプル＋９ｕｌＰＩ）プロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）を添加し、−８０℃で凍結させた。
４．製造業者によって記載されているとおり、ＥＬＩＳＡキット（ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）ＥＬＩＳＡカタログ番号ＤＹ２２２、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、血小板由来成長因子−ＡＢレベルを求めた。元のサンプルのＰＤＧＦ−ＡＢ濃度を算出した。
【０１０８】
時間（時）の関数としての、血液製剤からの血小板由来成長因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）放出（ｎｇ／血液製剤ｍｌ）
【０１０９】
【表５】
【実施例８】
【０１１０】
１．実施例１に示した方法によって血液製剤を生成した。
２．２つの血液製剤を１ｍｌＤＭＥＭ（ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中、３７℃および５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。
３．並行して、２つの血液製剤を、リポ多糖（（１０ｎｇ／ｍｌ）大腸菌由来ＬＰＳ；Ｌ２６５４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む１ｍｌＤＭＥＭ（ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中、３７℃および５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。
４．４８時間後、媒質をマイクロ遠心管に移し、１６２００ｘｇで２０分間スピンした。分析まで、上清を−８０℃で凍結させた。
５．両方のキットでバッファ４（ＡＲＹ００７）を用いたことを除いて、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓによって記載されているとおり、プロテオーム・プロファイラ・アレイＡＲＹ００７およびＡＲＹ００５（共にＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を実行した。Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓによって記載されているとおり、４２０ｕｌ上清を５００ｕｌバッファ４および５８０ｕｌバッファ５で希釈した。
６．化学発光ＨＲＰ基質（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ Ｗｅｓｔｅｒｎ（商標）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳ）を用いて、アレイによる反応性を検出した。
７．Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ３０００システム（Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ、ＵＳ）を用いて、発光を捕捉した。Ｆｌｏｕｒｃｈｅｍソフトウェア（Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ、ＵＳ）で平均ピクセル密度を得た。
【０１１１】
【表６】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む血液製剤（１０）であって、第１層（２１）、第２層（２２）、および第３層（２３）を含み、第２層（２２）は、第１層（２１）および第３層（２３）に隣接しており、第１層（２１）は、血液製剤（１０）の第１外面（２４）を画定し、第３層（２３）は、血液製剤（１０）の第２外面（２５）を画定し、第１層（２１）は、大部分のフィブリンを含み、第２層（２２）は、大部分の血小板を含み、第３層（２３）は、大部分の白血球を含む血液製剤（１０）。
【請求項２】
血液製剤（１０）に含まれる大部分のフィブリンが、第１層（２１）に含まれる、請求項１に記載の血液製剤。
【請求項３】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の血小板が、第２層（２２）に含まれる、請求項１または２に記載の血液製剤。
【請求項４】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の白血球が、第３層（２３）に含まれる、請求項１、２、または３に記載の血液製剤。
【請求項５】
血液製剤（１０）が、全血由来の成分のみからなる、請求項１から４のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項６】
血液製剤（１０）が、自己由来である、請求項１から５のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項７】
血液製剤（１０）が、可撓性である、請求項１から６のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項８】
血液製剤（１０）が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質をさらに含む、請求項１から７のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１０】
治療に使用する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１１】
創傷を治療するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１２】
創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１３】
自己使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１４】
自己薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１５】
手術に使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１６】
手術に使用する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１７】
ある体積の全血（５）から血液製剤（１０）を調製する方法であって、以下の工程：
ａ）体積の全血（５）を容器手段（１）に入れる工程であって、容器手段（１）が、全血（５）が接触する内面（３）を画定する第１材料を含む工程、
ｂ）全血（５）の凝固を活性化する工程、
ｃ）容器手段（１）に配置された全血（５）に作用する遠心力（６）によって、全血（５）を赤血球（１１）、血清（９）、および血液製剤（１０）に分離し、これによって全血（１０）が、赤血球（１１）、血液製剤（１０）、および血清（９）間の密度の違いにより、赤血球（１１）、血液製剤（１０）、および血清（９）を含む層に分離する工程であって、血液製剤（１０）は、フィブリン、白血球、および血小板を含み、適用される遠心力（６）は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００倍大きい工程、ならびに
ｄ）血液製剤（１０）を容器手段（１）から取り出す工程を含む方法。
【請求項１８】
全血からフィブリンを抽出する方法の収率が、少なくとも６０％超である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
全血から白血球を抽出する方法の収率が、少なくとも５０％超である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
全血から血小板を抽出する方法の収率が、少なくとも６０％超である、請求項１７、１８、または１９に記載の方法。
【請求項２１】
遠心力が、少なくとも３０秒間適用される、請求項１７から２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
血液製剤（１０）が、全血由来の成分のみからなる、請求項１７から２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
工程ｂ）の凝固が、内面（３）を画定する第１材料によって活性化される、請求項１７から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
工程ｂ）の凝固が、全血（５）をガラスビーズなどの物体（７）に暴露することによって活性化される、請求項１７から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
容器手段（１）の内面（３）の第１材料が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカルボナート、ポリアミド、アクリロニトリルブタジエンスチレン、スチレン、変性スチレン、ポリウレタン、および他のポリマー材料からなる群から選択される、請求項１７から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
容器手段（１）の内面（３）が、血液製剤（１０）と第１材料の内面（３）との間の摩擦を下げるために、表面処理、例えば被覆されている、請求項１７から２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
遠心力（６）が、内面（３）と血液製剤（１０）との間に作用する接着力より大きい、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
内面（３）に接着している血液製剤（１０）が、工程ｃ）中、少なくとも１度、内面（３）から剥離される、請求項１７から２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
容器手段（１）に配置されたフィルタなどの圧縮手段（８）によって血液製剤（１０）が圧縮される圧縮工程をさらに含む、請求項１７から２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
工程ｃ）中に赤血球（１１）が血液製剤（１０）から単離される単離工程をさらに含む、請求項１７から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
血液製剤（１０）が洗浄され、血液製剤（１０）に付着した実質的にすべての赤血球（１１）および／または血清（９）が剥離される洗浄工程をさらに含む、請求項１７から３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
容器手段（１）が、取り外し可能な蓋（２）で閉鎖可能な開口端、および閉鎖端（１２）を含む管（４）である、請求項１７から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
工程ｂ）が工程ａ）に先行する、請求項１７から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
工程ｂ）が、工程ａ）の少なくとも１分前に行われる、請求項１７から３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
工程ｂ）が、工程ｃ）と同時に行われる、請求項１７から３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質が全血に添加される、請求項１７から３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
フィルタなどの圧縮手段（８）が、第１固定位置および第２位置を有する、請求項１７から３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
フィルタなどの圧縮手段（８）が、容器手段（１）の壁を変形することによって第１固定位置に固定される、請求項１７から３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
全血（５）の代わりに、フィブリンを含む血漿、ならびに白血球および血小板を含むバフィーコートが用いられる、請求項１７から３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
１５分以内に行われる、請求項１７から３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
請求項１７から４０のいずれかに記載の方法であって、該方法によって得られた血液製剤（１０）が、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤（１０）である、方法。
【請求項４２】
全血（５）由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含み、血液製剤（１０）は、第１層（２１）、第２層（２２）、および第３層（２３）を含み、第２層（２２）は、第１層（２１）および第３層（２３）に隣接しており、第１層（２１）は、血液製剤（１０）の第１外面（２４）を画定し、第３層（２３）は、血液製剤（１０）の第２外面（２５）を画定し、第１層（２１）は、大部分のフィブリンを含み、第２層（２２）は、大部分の血小板を含み、第３層（２３）は、大部分の白血球を含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤（１０）。
【請求項４３】
血液製剤（１０）に含まれる大部分のフィブリンが、第１層（２１）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４４】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の血小板が、第２層（２２）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４５】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の白血球が、第３層（２３）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４６】
血液製剤（１０）が、全血（５）由来の成分のみからなる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４７】
血液製剤（１０）が、自己由来である、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４８】
血液製剤（１０）が、可撓性である、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４９】
血液製剤（１０）が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質をさらに含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５０】
治療に使用するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５１】
治療に使用する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５２】
創傷を治療するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５３】
創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５４】
自己使用のための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５５】
自己薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５６】
手術に使用するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５７】
手術に使用する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５８】
請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を調製するための血液製剤調製容器手段（１）であって、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む血液製剤調製容器手段（１）。
【請求項５９】
請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤（１０）を製造するための、請求項５８に記載の血液製剤調製容器手段（１）の使用。
【請求項６０】
ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む、血液製剤調製容器手段（１）。
【請求項６１】
血液製剤（１０）を製造するための、請求項６０に記載の血液製剤調製容器手段（１）の使用。
【請求項１】
全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む血液製剤（１０）であって、第１層（２１）、第２層（２２）、および第３層（２３）を含み、第２層（２２）は、第１層（２１）および第３層（２３）に隣接しており、第１層（２１）は、血液製剤（１０）の第１外面（２４）を画定し、第３層（２３）は、血液製剤（１０）の第２外面（２５）を画定し、第１層（２１）は、大部分のフィブリンを含み、第２層（２２）は、大部分の血小板を含み、第３層（２３）は、大部分の白血球を含む血液製剤（１０）。
【請求項２】
血液製剤（１０）に含まれる大部分のフィブリンが、第１層（２１）に含まれる、請求項１に記載の血液製剤。
【請求項３】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の血小板が、第２層（２２）に含まれる、請求項１または２に記載の血液製剤。
【請求項４】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の白血球が、第３層（２３）に含まれる、請求項１、２、または３に記載の血液製剤。
【請求項５】
血液製剤（１０）が、全血由来の成分のみからなる、請求項１から４のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項６】
血液製剤（１０）が、自己由来である、請求項１から５のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項７】
血液製剤（１０）が、可撓性である、請求項１から６のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項８】
血液製剤（１０）が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質をさらに含む、請求項１から７のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１０】
治療に使用する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１１】
創傷を治療するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１２】
創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１３】
自己使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１４】
自己薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１５】
手術に使用するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤。
【請求項１６】
手術に使用する薬剤を製造するための、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤の使用。
【請求項１７】
ある体積の全血（５）から血液製剤（１０）を調製する方法であって、以下の工程：
ａ）体積の全血（５）を容器手段（１）に入れる工程であって、容器手段（１）が、全血（５）が接触する内面（３）を画定する第１材料を含む工程、
ｂ）全血（５）の凝固を活性化する工程、
ｃ）容器手段（１）に配置された全血（５）に作用する遠心力（６）によって、全血（５）を赤血球（１１）、血清（９）、および血液製剤（１０）に分離し、これによって全血（１０）が、赤血球（１１）、血液製剤（１０）、および血清（９）間の密度の違いにより、赤血球（１１）、血液製剤（１０）、および血清（９）を含む層に分離する工程であって、血液製剤（１０）は、フィブリン、白血球、および血小板を含み、適用される遠心力（６）は、全血に作用する重力、例えばｇより少なくとも１０００倍大きい工程、ならびに
ｄ）血液製剤（１０）を容器手段（１）から取り出す工程を含む方法。
【請求項１８】
全血からフィブリンを抽出する方法の収率が、少なくとも６０％超である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
全血から白血球を抽出する方法の収率が、少なくとも５０％超である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
全血から血小板を抽出する方法の収率が、少なくとも６０％超である、請求項１７、１８、または１９に記載の方法。
【請求項２１】
遠心力が、少なくとも３０秒間適用される、請求項１７から２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
血液製剤（１０）が、全血由来の成分のみからなる、請求項１７から２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
工程ｂ）の凝固が、内面（３）を画定する第１材料によって活性化される、請求項１７から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
工程ｂ）の凝固が、全血（５）をガラスビーズなどの物体（７）に暴露することによって活性化される、請求項１７から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
容器手段（１）の内面（３）の第１材料が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカルボナート、ポリアミド、アクリロニトリルブタジエンスチレン、スチレン、変性スチレン、ポリウレタン、および他のポリマー材料からなる群から選択される、請求項１７から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
容器手段（１）の内面（３）が、血液製剤（１０）と第１材料の内面（３）との間の摩擦を下げるために、表面処理、例えば被覆されている、請求項１７から２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
遠心力（６）が、内面（３）と血液製剤（１０）との間に作用する接着力より大きい、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
内面（３）に接着している血液製剤（１０）が、工程ｃ）中、少なくとも１度、内面（３）から剥離される、請求項１７から２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
容器手段（１）に配置されたフィルタなどの圧縮手段（８）によって血液製剤（１０）が圧縮される圧縮工程をさらに含む、請求項１７から２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
工程ｃ）中に赤血球（１１）が血液製剤（１０）から単離される単離工程をさらに含む、請求項１７から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
血液製剤（１０）が洗浄され、血液製剤（１０）に付着した実質的にすべての赤血球（１１）および／または血清（９）が剥離される洗浄工程をさらに含む、請求項１７から３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
容器手段（１）が、取り外し可能な蓋（２）で閉鎖可能な開口端、および閉鎖端（１２）を含む管（４）である、請求項１７から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
工程ｂ）が工程ａ）に先行する、請求項１７から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
工程ｂ）が、工程ａ）の少なくとも１分前に行われる、請求項１７から３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
工程ｂ）が、工程ｃ）と同時に行われる、請求項１７から３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質が全血に添加される、請求項１７から３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
フィルタなどの圧縮手段（８）が、第１固定位置および第２位置を有する、請求項１７から３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
フィルタなどの圧縮手段（８）が、容器手段（１）の壁を変形することによって第１固定位置に固定される、請求項１７から３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
全血（５）の代わりに、フィブリンを含む血漿、ならびに白血球および血小板を含むバフィーコートが用いられる、請求項１７から３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
１５分以内に行われる、請求項１７から３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
請求項１７から４０のいずれかに記載の方法であって、該方法によって得られた血液製剤（１０）が、請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤（１０）である、方法。
【請求項４２】
全血（５）由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含み、血液製剤（１０）は、第１層（２１）、第２層（２２）、および第３層（２３）を含み、第２層（２２）は、第１層（２１）および第３層（２３）に隣接しており、第１層（２１）は、血液製剤（１０）の第１外面（２４）を画定し、第３層（２３）は、血液製剤（１０）の第２外面（２５）を画定し、第１層（２１）は、大部分のフィブリンを含み、第２層（２２）は、大部分の血小板を含み、第３層（２３）は、大部分の白血球を含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤（１０）。
【請求項４３】
血液製剤（１０）に含まれる大部分のフィブリンが、第１層（２１）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４４】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の血小板が、第２層（２２）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４５】
血液製剤（１０）に含まれる大部分の白血球が、第３層（２３）に含まれる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４６】
血液製剤（１０）が、全血（５）由来の成分のみからなる、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４７】
血液製剤（１０）が、自己由来である、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４８】
血液製剤（１０）が、可撓性である、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項４９】
血液製剤（１０）が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第１物質をさらに含む、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５０】
治療に使用するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５１】
治療に使用する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５２】
創傷を治療するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５３】
創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５４】
自己使用のための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５５】
自己薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５６】
手術に使用するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
【請求項５７】
手術に使用する薬剤を製造するための、請求項１７から４１のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
【請求項５８】
請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤を調製するための血液製剤調製容器手段（１）であって、ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む血液製剤調製容器手段（１）。
【請求項５９】
請求項１から８のいずれかに記載の血液製剤（１０）を製造するための、請求項５８に記載の血液製剤調製容器手段（１）の使用。
【請求項６０】
ポリアミドおよび／またはポリウレタンを含む、血液製剤調製容器手段（１）。
【請求項６１】
血液製剤（１０）を製造するための、請求項６０に記載の血液製剤調製容器手段（１）の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１２−５００７７９（Ｐ２０１２−５００７７９Ａ）
【公表日】平成２４年１月１２日（２０１２．１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２３３０６（Ｐ２０１１−５２３３０６）
【出願日】平成２１年８月２４日（２００９．８．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００９／０５０２０９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２０２５４
【国際公開日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【出願人】（５１１０４５５４５）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１月１２日（２０１２．１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年８月２４日（２００９．８．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００９／０５０２０９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２０２５４
【国際公開日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【出願人】（５１１０４５５４５）
【Ｆターム（参考）】
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