多臓器機能不全を予防するための方法及び組成物
本発明の一側面は、外傷の発生の２４時間以内に、（ｉ）可消化水溶性炭水化物と、（ｉｉ）肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）増加成分及び／又はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有するペプチドとを哺乳動物に腸内投与することを含む、外傷を負っている哺乳動物の多臓器機能不全を予防する方法に関する。本発明の別の側面は、−２０から２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；−１から１００ｇ／Ｌのリボース均等物及び／又は２から２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイドと組み合わせた、５から５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物と；又はＡＣＥ阻害活性を有する０．０１から１０ｍＭのペプチドと；４５から９７．９５重量％の水とを含有する、水性液体組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の技術分野】
【０００１】
本発明の一側面は、外傷後の多臓器機能障害を予防する方法に関する。本方法は、外傷発生の直前及び／又は直後に、液体栄養組成物を腸内投与することを含む。
【０００２】
本発明の別の側面は、前記方法で使用するための液体栄養組成物に関する。
【発明の背景】
【０００３】
高度なモニタリングシステムとより効果的な単一臓器補助の登場により、患者が急性外傷から蘇生する可能性は増大し続けている。しかしながら、重大な病気の初期段階を「生存」した後、これらの患者は、しばしば、多臓器機能不全という臨床症候へと進行する。ＭＯＤは、進行性の悪化と、それに続く、身体生理系の不全を特徴とする。１これまでのところ、有効な治療が開発されていないので、ＭＯＤの死亡率は高い。
【０００４】
多臓器機能不全は、もはや、孤立した不全の連続とは見られていない。剖検を行うと、病変した臓器は似通ったパターンの組織損傷を呈するが、それらは、最初の傷害部位又は感染源からは離れていることが多い。この複雑な症候群は、かつて、心臓血管系の機能不全及び／又は単発性の臓器不全に過ぎないと考えられていたが、現在では、誘発因子に関わらず、傷害に対する持続的な炎症性応答によって媒介される全身性の障害と認識されている。多臓器機能不全は、臓器系の機能的状態及び病理的状態における、臓器系間での複雑な相互作用であることが明らかとなっている。
【０００５】
虚血後におけるＭＯＤの誘導には、複数の機序が関与していることが推測されている。この単一及び多臓器機能不全（Ｓ）ＭＯＤの誘導及び重篤度には、腸−肝臓−肺系が主要な役割を果たしている。より具体的には、腸は、しばしば、多臓器不全のけん引役と称される８−１１。反応性酸素種の虚血後の増加は、（マクロファージ及びリンパ球によって）直接的又は間接的に、好中球を活性化し、その後、好中球は組織傷害を引き起こす炎症の部位に浸潤することができる。これらの好中球は、最近、回腸において傍細胞の輸送を増加させることも報告されている。腸の障壁のかかる損傷は、しばしば、上皮細胞を横断する細菌輸送を増加させ、それらの内毒素が患者の炎症の誘発（ＭＯＤの誘発に関与すると報告されている。）をもたらすと報告されている。
【０００６】
最近、酸化的ストレス及び好中球の活性化が、虚血再灌流傷害の２つの要であることが示唆されている１２。再灌流（虚血後）が起こると、幾つかの機序によってＲＯＳが噴出され、これは、身体の抗酸化能を超えることがあり、酸化的ストレスを引き起こし得ることが一般的に認められている１３−１８。重要なことに、これらのＲＯＳは、炎症性転写因子ＮＦ−κＢを活性化する。炎症性応答が必要であり得るが、虚血後には、炎症性応答の制御の大半が失われ、従って、炎症促進性のサイトカインＴＮＦα及びＩＬ−６が、それらの必要性を超えて増悪され得る。ＮＦ−κＢ誘導におけるこれらのＲＯＳの重要性は、例えば、血漿中のグルタチオンレベルを上方制御し、ＮＦκＢ応答を減少させ、続いて、ＴＮＦαを低下させるＮ−アセチルシステインの添加によって実証される１２。
【０００７】
術前の絶食は、ストレスに対する形態的及び代謝的応答を変化させることが報告されており１９−２１、例えば、細菌の転位及びそれらの内毒素が増加することが報告されている２２−２４。この増加した転位は、腸障壁機能の減少、肝機能の減少（特に、肝臓の細網内皮系（ＲＥＳ）のクッパー細胞Ｐ３）又は両者に起因するものであり得る。さらに、腸の虚血に起因する細網内皮系（ＲＥＳ）の機能不全が、特に絶食した動物中で報告されている２５−２８。
【０００８】
ＥＰ−Ａ ０ ５６４ ５１１は、低浸透圧性（２５０−２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ）であり、１００ｍＬ当たり８から２０ｇの炭水化物を含有する水溶液からなる、術前摂取用飲料を開示する。この飲料は、患者の術後炭水化物代謝に対する外科的手術の悪影響を抑制するために、及び手術時又は手術後の出血に対する患者の防御能を向上させるために使用し得る。
【０００９】
米国特許第５，４３８，０４３号は、１００ｍＬ当たり８から２０グラムの炭水化物混合物の低浸透圧性水溶液を含む、術前に使用するための飲料を記載している。この米国特許は、溶解すると、１１．７ｇのデキストリンを含有する１００ｍＬ溶液を与える乾燥物質を記載している。ＥＰ−Ａ ０ ８７５ １５５は、４００ｍＬ当たりに、５から１３０ｇの可溶性炭水化物と１から３０ｇのグルタミン又はグルタミンとして計算されるグルタミン前駆体を含有する、手術前後に使用するための液体栄養組成物を記載している。この液体組成物は、麻酔及び胃の内容物排出という問題を引き起こさずに、同化代謝を維持するために、手術直前又は手術直後に投与されることが予定されている。
【００１０】
ＥＰ−Ａ ０ ３０２ ８０７は、アミノ窒素源、炭水化物、食用性脂肪、無機物、ビタミン及び少なくとも一つのヌクレオシドを含有する栄養的にバランスが取れた液体栄養製品を記載している。実施例ＩＸは、７．３２％のマルトデキストリンと０．１５％のヌクレオシド及び／又はヌクレオチドとを含有し、前記ヌクレオシド及び／又はヌクレオチドは１５０ｍｇのグアノシン及び／又は３０ｍｇのグアノシン一リン酸を含有する水性液体製品を開示している。
【発明の概要】
【００１１】
予定されている手術の前に、患者は、麻酔の安全性のために、並びに胃内容物の逆流及び吸引を防ぐために、最大２４時間、少なくとも８時間絶食するのが通常である。また、手術又は重い外傷の後、患者は、しばしば、８時間以上にわたって、全く栄養素を摂取しない。
【００１２】
本発明者らは、思いがけないことに、外傷後のＭＯＤの発生と、外傷の発生直前及び／又は発生直後の期間中の絶食の結果として起こる、可消化炭水化物の摂取の減少との間に相関が存在することを発見した。さらに、本発明者らは、肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）を増加させる成分及び／又はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有するペプチドとともに、消化性水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態で、消化性の水溶性炭水化物の相当量を、外傷発生の直前又は直後に腸内投与することによって、ＭＯＤのリスクが著しく軽減され得ることを確定した。本発明に従って有利に使用することができる肝臓ＧＴＰ増加成分は、グアノシン均等物及びリボース均等物である。
【００１３】
実験データは、絶食された動物に比べて、炭水化物溶液を手術前後に摂取した動物が、腸の透過性が著しく低く、肝臓、腎臓及び腸間膜のリンパ節への細菌の転位がずっと少なくなることも示唆する。これらのデータは、さらに、臓器当たりの酸化的ストレス及び肝臓のエネルギー状態の生化学的特性によって裏付けられる。
【００１４】
本発明者らは理論に拘泥するものではないが、ＭＯＤの発生に対する、可消化炭水化物の手術前後の投与の保護効果の背後に存在する機序は、何らかの形で、腸及び肝臓の両方に対する前記投与の効果と関連していると考えられている。この結果は、本発明の方法が外傷後の腸障壁機能の維持を補助することを示唆する。
【００１５】
不可欠な肝機能及びＭＯＤとの関係を確立した後、本発明者らは、さらに、本発明の液体組成物のＭＯＤに対する予防効果が、肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）を増加することができる一又は複数の成分の有効量を前記組成物中に取り込ませることによってさらに増強されることを発見した。本発明者らは、肝臓ＧＴＰ及びＭＯＤの発生との逆相関を発見した。肝臓ＧＴＰレベルは、グアノシン、リボース及び／又はこれらの成分の前駆体を投与することによって、本発明に従って、効果的に増加され得る。
【００１６】
非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）の血漿レベルの増加も、ＭＯＤに対する、さらなるリスク因子を構成すると推測される。本発明の液体組成物中に、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量のペプチドを含めると、ＡＤＭＡの血漿レベルが望ましくないほど高いレベルに達しないようにするのに役立つことも見出された。
【発明の詳細な説明】
【００１７】
従って、本発明の一側面は、外傷を受けた哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、（ｉ）２から２０００ｍｇのグアノシン均等物、０．５から４０ｇのリボース均等物及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分と、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも２０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記外傷の発生の２４時間以内に、前記哺乳動物に、腸内投与することを含む方法に関する。
【００１８】
本発明の別の側面は、外傷を受けた哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、（ｉ）ＡＣＥ阻害活性を有し、本明細書において定義される１０００未満のＩＣ５０濃度を示す０．０５から１００ｍｍｏｌのペプチドと、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記外傷の発生の２４時間以内に、前記哺乳動物に、腸内投与することを含む方法に関する。ＩＣ−５０濃度は、物質又は組成物がＡＣＥ活性を阻害する効力の指標であり、以下の「方法」に記載されているように決定し得る。
【００１９】
本明細書において使用される「可消化炭水化物」という用語は、消化管によってそのまま吸収され得る炭水化物、又は消化管によって吸収可能な成分へと分解され得る（但し、この分解は、腸管微生物叢による発酵的分解を含まない。）炭水化物を表す。
【００２０】
本明細書において使用される「グアノシン均等物」という用語は、グアノシン並びにグアノシンの塩及びグアノシンの前駆体、特に、前駆体分子のインビボ変換（例えば、加水分解）によってグアノシン又はグアノシン塩を遊離することができる前駆体を包含する。加水分解されて、グアノシン又はグアノシン塩を産生することができるグアノシン前駆体の典型的な例は、グアノシンエステルである。
【００２１】
「リボース均等物」という用語は、グアニン均等物及び葉酸均等物に関して上記した定義に従って定義される。リボース均等物は、合成若しくは天然のリボースの形態で、又は、例えば、核酸塩基付加物の形態の前駆体として（例えば、リボースグアノシン付加物として）投与し得る。リボース前駆体の他の適切な例には、リボースエステルが含まれる。
【００２２】
「腸内投与する」という用語には、経口投与（経口胃管栄養法投与を含む。）及び直腸投与が包含されるが、経口投与が最も好ましい。別段の記載がなければ、本願に記載される投薬量は、単一の服用又は単一の投与行為中に送達される量を表す。本発明の組成物がガラス又は容器から摂取される場合、単一の服用又は単一の投与中に送達される量は、典型的には、前記ガラス又は容器の容積に等しいと思われる。
【００２３】
本方法を用いて予防的に治療することができるＭＯＤを引き起こし得る外傷の例には、手術並びに火傷、病変及び出血などの主要な傷害が含まれる。本発明の方法は、手術、特に、予め予定が決められた手術に起因するＭＯＤを予防するのに特に適している。例えば、予め予定が決められた手術の場合、外傷の発生する前に、本発明の液体組成物を投与することが可能である。外傷の発生前に液体組成物を投与することには、患者に液体組成物を飲むように単に依頼することによって組成物を投与できる、及び実際の外傷が発生したときに効果が発揮されるという重要な利点がある。
【００２４】
本発明に従って使用される可消化炭水化物は、単糖、二糖及び多糖を適切に含むことができる。本発明の特に好ましい実施形態では、可消化水溶性炭水化物は、大部分がグルコースをベースとする。本実施形態において、前記可消化水溶性炭水化物は、該可消化炭水化物の分子量に対して計算される、最大６％の量でグルコース以外の糖を必要に応じて含有する。可消化グルコースをベースとする炭水化物中に生じ得る他の糖質の例には、Ｄ−フルクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−ラムノース、Ｄ−リボース及びＤ−ガラクトースが含まれるが、これらの糖質は、本炭水化物の末端に位置しないことが好ましい。オリゴ糖及び多糖のグルコース単位は、好ましくは、可消化であるために、主としてα１−４結合又はα１−６結合を結合を介して接続される。本発明の可消化炭水化物には、直鎖及び分枝鎖オリゴ糖及び多糖がともに含まれる。糖単位の数は、数値ｎによって表される。オリゴ糖は、３から１０の数を有し、多糖は、１１から１０００、好ましくは１１から６０の数を有する。
【００２５】
好ましくは、単糖及び二糖に比べて、多糖はより遅く吸収されるので、本発明の液体組成物は、３０から２００ｇ／Ｌの可消化多糖を含有する。別の好ましい実施形態では、前記組成物は、多糖と単糖及び／又は二糖との組み合わせを含有する。より好ましくは、前記可消化炭水化物は、６０−９９重量％の可消化オリゴ糖及び／又は多糖と、１から４０重量％の可消化単糖及び／又は二糖とを含む。可消化水溶性オリゴ糖の適切な例は、グルコースシロップである。可消化水溶性多糖の適切な例には、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン、デキストラン及びそれらの組み合わせが含まれる。最も好ましくは、水溶性多糖は、デキストリン、マルトデキストリン及びそれらの組み合わせ（デキストリンが最も好ましい。）からなる群から選択される、少なくとも５０重量％、より好ましくは少なくとも８０重量％の多糖を含有する。特に好ましい実施形態において、前記可消化炭水化物は、少なくとも１重量％の単糖、特に少なくとも１重量％のフルクトースを含む。典型的には、前記可消化炭水化物は、単糖形態で２０重量％以下のフルクトースを含有するであろう。
【００２６】
本発明の特に好ましい実施形態において、前記方法は、外傷の発生の２４時間以内に、少なくとも５０ｇ、より好ましくは少なくとも７０ｇの可消化水溶性炭水化物を、水性形態組成物の形態で腸内投与することを含む。前記液体組成物は、単回の大量瞬時投与として投与することができ、あるいは、２４時間の間に、２以上の投薬で投与することができる。好ましくは、液体組成物は、２４時間の間に、少なくとも２回の分離した投薬で投与され、投与行為は、少なくとも１時間を隔てることが好ましい。特に適切なプロトコールは、外傷の２４から８時間前にわたる期間中に、少なくとも４０ｇの可消化炭水化物を送達するために、及び外傷の８から１時間前の期間中に、少なくとも２０ｇの可消化炭水化物を送達するために、十分な量の本発明の液体組成物を投与することを含む。
【００２７】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷発生の２４時間以内に、
２から４００ｍｇ、より好ましくは５から４０ｍｇのグアノシン均等物；
３から１０ｇのリボース均等物、より好ましくは２から１０ｇのＤ−リボース均等物；
及びそれらの組み合わせ；
からなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分を投与することを含む。
【００２８】
肝臓ＧＴＰは、葉酸又はその均等物を使用することによって、さらに増加させることができる。このように、好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷の２４時間以内に、０．１から１０ｍｇ、好ましくは０．２から５ｍｇの葉酸均等物を腸内投与することを含む。「葉酸均等物」という用語は、葉酸及び葉酸の塩並びに葉酸又は葉酸の塩の前駆体、特に、前駆体分子のインビボ変換（例えば、加水分解）によって葉酸、葉酸塩、又は代謝的に活性な形態の葉酸を遊離することができる前駆体を包含する。適切な前駆体の例には、テトラヒドロ葉酸（テトラヒドロプテロイル）ポリグルタミン酸、テトラヒドロ葉酸グルタミン酸、並びに５−メチル及び／又は１０−メチル置換されたそれらの類縁体が含まれる。本発明の葉酸均等物は、テトラヒドロ形態を使用することが好ましければ、ジヒドロ形態中にプテロイル基を含むこともできる。
【００２９】
表記濃度範囲の葉酸を含めることは、ＧＴＰの生合成に対する補助を与える。本発明において、葉酸を使用することの別の利点は、ＡＤＭＡ血漿濃度に対する好ましい影響である（下記参照）２９。葉酸とリボースの組み合わせは、肝臓ＧＴＰレベルを維持／回復する上で特に有効である。このように、特に好ましい実施形態では、本発明の方法は葉酸とリボースの組み合わせを使用する。
【００３０】
特に好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷の発生の２４時間以内に、２から１００ｍｇのグアノシン均等物、より好ましくは５から４０ｍｇのグアノシン均等物を投与することを含む。グアノシンは、ＧＴＰの前駆体である。思いがけないことに、本発明者らは、ＧＴＰの前駆体となり得るこれ以外の前駆体、例えば、グアニン及びグアノシン一リン酸（ＧＭＰ）は、ずっと適切でないことを発見した。
【００３１】
本発明の極めて好ましい実施形態において、前記方法は、外傷の発生の２４時間以内に、ＡＣＥ阻害活性を有し、１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示すペプチド０．１から５０ｍｍｏｌを投与することを含む。本発明者らは理論に拘泥することを望むものではないが、ＡＣＥ阻害剤は、内皮細胞に対するＮＯの生物学的利用性を増加させ、これにより、内皮機能を向上させ得ると考えられる。ＡＤＭＡは、尿中への排出によって、並びに肝臓及び腎臓中、及び内皮細胞中に豊富に発現されているジメチルアルガニンジメチルアミノヒドロラーゼによる代謝によって除去される。肝臓及び腎臓の排除機能は、血管新生が著しいこれらの臓器中の内皮細胞によって媒介されるという仮説が立てられている。このため、内皮細胞の生存性は、ＡＤＭＡのクリアランスにとって不可欠であろう。この仮説は、血管疾患を有する患者又は血管疾患に対するリスク因子（高コレステロール血症及び高血圧など）を有する者では、ＡＤＭＡレベルが通常増加するという観察によって、さらに裏付けられる。これらの全ての症状では、内皮機能が損なわれているのに対して、肝機能及び腎機能は、しばしば影響を受けていない。
【００３２】
本発明の有利なさらに別の実施形態において、本発明の方法は、外傷の発生の２４時間以内に、０．５から２００ｍｇ、好ましくは１から１００ｍｇ、最も好ましくは５から５０ｍｇの量で、フラボノイドを同時投与することを含む。ルテオリン、ケルセチン及びアピゲニンなどのフラボノイドは、キサンチンオキシダーゼの優れた阻害剤であること、及び、マロンジアルデヒドの血漿濃度に対するそれらの効果によって実証されるように、酸化的ストレスを阻害することが明らかにされている。さらに、フラボノイドは、肝臓ＧＴＰの維持及び回復を補助することも見出された。特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ルテオリン、ケルセチン、アピゲニン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるフラボノイドを、好ましくは少なくとも２ｍｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも５ｍｇ／Ｌ、最も好ましくは少なくとも１０ｍｇ／Ｌの濃度で含有する。
【００３３】
本発明の別の側面は、本発明の方法で使用するための水性液体栄養組成物に関する。より具体的には、本側面は、
・２０から２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物；
・５から５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物、並びに以下のうち少なくとも一つ：
・１から１００ｇ／Ｌのリボース均等物；
・２から２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイド；及び
・４５から９７．９５重量％の水を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物に関する。
【００３４】
好ましい一実施形態において、前記水性液体組成物は、少なくとも１から１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する。別の好ましい実施形態において、前記液体組成物は、２から２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイドを含有する。特に好ましいのは、表記の量で、グアノシン均等物、リボース均等物及びフラボノイドを含有する液体組成物である。
【００３５】
本発明のさらに別の側面は、
・２０から２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示す、ＡＣＥ阻害活性を有する０．０１から１０ｍＭのペプチドと；及び
・４５から９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物に関する。
【００３６】
特に好ましい実施形態において、前記液体組成物は、さらに少なくとも５ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物を含有する。別の特に好ましい実施形態において、前記液体組成物は、さらに、少なくとも1ｇ／Ｌ、より好ましくは、少なくとも３ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する。典型的には、液体組成物中に含有されるリボース均等物の量は、１００ｇ／Ｌを超えず、好ましくは、５０ｇ／Ｌを超えない。本発明のさらに別の有利な実施形態では、前記水性液体組成物は、２から２０００ｍｇ／Ｌの濃度でフラボノイドを含有する。
【００３７】
好ましくは、本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害活性を有するペプチド又はこのようなペプチドの混合物を、該ペプチド又はペプチドの混合物のＩＣ−５０濃度の１０％以上、好ましくは５０％以上の濃度で含有する。ＡＣＥ阻害ペプチドは、タンパク質加水分解物、特に乳タンパク質加水分解物の形態で、本発明の組成物中に適切に取り込ませることができる。
本発明の液体組成物は、少なくとも１０ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物を有利に含有する。一般に、前記組成物中のグアノシン均等物の濃度は２０００ｍｇ／Ｌ、好ましくは１０００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは５００ｍｇ／Ｌを超えない。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、本発明の液体組成物は、0.2から４００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する。より好ましくは、前記組成物は、０．５から１００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する。
【００３９】
好ましくは、フラボノイドは、少なくとも５ｍｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ／Ｌの濃度で、本発明の組成物中に含有される。通常、フラボノイドの濃度は、１０００ｍｇ／Ｌを超えず、好ましくは５００ｍｇ／Ｌを超えない。ルテオリン、ケルセチン及びアピゲニンなどのフラボノイドは、キサンチンオキシダーゼの優れた阻害剤であること、及び、マロンジアルデヒドの血漿濃度に対するそれらの効果によって実証されるように、酸化的ストレスを阻害することが明らかされた。さらに、フラボノイドは、肝臓ＧＴＰレベルの維持及び回復を補助することも見出された。特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも５ｍｇ／Ｌの濃度でルテオリン、ケルセチン、アピゲニン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるフラボノイドを含有する。
【００４０】
嚥下が困難である患者又は吐き気を催す患者などの場合、前記可消化炭水化物は濃縮された液体形態で送達できることが重要である。従って、可消化水溶性炭水化物を、少なくとも５０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも７０ｇ／Ｌ、最も好ましくは少なくとも８０ｇ／Ｌの濃度で含めることが好ましい。
【００４１】
逆流のリスクを最小限に抑え、また、胃内の滞留時間を最小限に抑えるために、液体組成物は３０ｇ／Ｌ未満の脂質、より好ましくは２０ｇ／Ｌ未満の脂質、最も好ましくは１０ｇ／Ｌの脂質を含有することが好ましい。同様の理由で、本発明の組成物のタンパク質レベルも、比較的低いことが好ましく、特に４０ｇ／Ｌ未満とすることが好ましい。逆流のリスクを軽減するための別の方法は、服用の容量サイズを（例えば、１００ｍＬ未満に）減らすか、又は十二指腸中に管を与えることである。
【００４２】
本発明の液体組成物は、例えば、溶液、懸濁液又はエマルジョンの形態を採ることができる。実質的に未溶解成分を全く含有しない溶液の形態で（例えば、液体組成物が澄んで、透明であるという事実によって示される。）液体組成物を使用することが好ましい。
【００４３】
本発明のさらに別の側面は、水で戻して、本発明の水性液体組成物にすることができる組成物に関する。典型的には、液体で戻すことができる組成物は、液体濃縮物、ペースト、粉末、顆粒、錠剤などの形態を採ることができる。好ましくは、液体で戻すことができる組成物は、乾燥製品であり、特に、１０重量％未満、好ましくは７重量％未満の水分含量を有する乾燥産物である。
【参考文献】
【００４４】
方法
ＩＣ−５０濃度の測定
本願において、ＩＣ−５０濃度とは、以下に記載されている検査条件を用いて、ある物質がアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の活性を５０％減少させる濃度である。
【００４５】
ＡＣＥは、基質ＦＡＰＧＧ（Ｎ−［３−（２−フリル）アクリロイル］−Ｌ−フェニルアラニルグリシルグリシンを切断して、ＦＡＰとＧＧにすることができる。変化を受けていない基質は、３４０ｎｍの波長で、分光学的に検出することができる。切断産物は、前記波長で検出することができない。ＡＣＥが添加された、基質の水溶液の吸光度は、基質の酵素的切断の結果、時が経過するにつれて減少するであろう。物質のＡＣＥ阻害特性を評価するために、これらの物質は様々な濃度でＡＣＥ−基質混合物中に導入される。３４０ｎｍの吸光度を２０分間追跡し、このデータから、吸収が減少する速度を計算する。
【００４６】
この方法は、較正のために、陽性対照と陰性対照を使用する。
【００４７】
陰性対照：ＡＣＥ及びＦＡＰＰＧ（検査物質なし）
陽性対照；ＡＣＥ／ＦＡＰＧＧ及び薬理学的ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトトリル、２５ｎＭ）
材料：
９６ウェルプレート
マイクロプレートリーダー（３４０ｎｍフィルター；速度論プロトコール）
アンギオテンシン変換酵素、0.16mU／μL、ｅｘＳｉｇｍａ（Ｒ）（Ａ−６７７８）
ＦＡＰＧＧ、２ｍｇ／ｍＬ（５ｍＭ） ｅｘ Ｓｉｇｍａ（Ｆ−７１３１）
ＡＣＥ緩衝液：１７．６ｍｇ／ｍＬ（３００ｍＭ）ＮａＣｌ、１２ｍｇ／ｍＬ（５０ｎＭ） Ｈｅｐｅｓ， pH ７．５
方法：
マイクロプレートリーダーのインキュベータを３７℃になるように調節する
ACE緩衝液中に検査成分を溶解し、希釈する
９６ウェルプレート中の６０μL／ウェルの試料（陽性及び陰性対照を含む。）をピペットで取る
３０μL／ウェルのFAPGG（２ｍｇ／ｍL、ACE緩衝液中）を添加
このプレートを３７℃で５分間インキュベートする
１０μL／ウェルのACE（０．１６ｍＵ／μＬ）を添加する
３４０ｎｍの吸光度を２０分間測定する（速度論プロトコール、８０回測定、１５秒ごとに１回測定）
【実施例】
【００４８】
実施例１
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００４９】
グルコース １ｇ
マルトデキストリンＤＥ ５ １０ｇ
グアノシン ５ｍｇ
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、２回投与されるべきである。
【００５０】
実施例２
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５１】
グルコースシロップ ＤＥ １２ １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 １００μｇ
グアノシン ２ｍｇ
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、３回投与されるべきである。
【００５２】
実施例３
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５３】
デキストリン １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 １００μｇ
αＳ１−カゼイン加水分解物＃ ７ｇ
＃ＥＸ ＤＭＶ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ； ６％のＣ１２ペプチドを含有
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回投与されるべきである。
【００５４】
実施例４
投与すべき水性液体組成物は、１２５ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５５】
グルコースシロップ ＤＥ 19 １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 ２００μｇ
カゼイン加水分解物＄ １．７５ｇ
＄６μＭのＩＣ−５０を有する０．０５ｇ（７６μｍｏｌ）のＡＣＥ阻害ペプチドを含有する
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回投与されるべきである。
【００５６】
実施例５
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５７】
マルトース １ｇ
グルコースシロップ ＤＥ ２９ １０ｇ
葉酸 ２００μｇ
ＧＴＰ ５ｍｇ
リボース １ｇ
大豆タンパク質加水分解物＠ ２ｇ
＠２００μＭ未満のＩＣ−５０を有する少なくとも０．１ｇのＡＣＥ阻害ペプチドを含有する。
【００５８】
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、２回分で投与されるべきである。
【００５９】
実施例６
投与すべき水性液体組成物は、５００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００６０】
マルトース １ｇ
グルコースシロップ ＤＥ 32 １０ｇ
葉酸 ５０μｇ
ＧＴＰ １ｍｇ
リボース ０．５ｇ
αＳ１カゼインタンパク質加水分解物＊ ２ｇ
＃ｅｘ ＤＭＶ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；８％のＣ１２ペプチドを含有
この液体は、経管栄養法によって外傷の発生から２４時間以内に２回分で投与されるべきである。
【００６１】
実施例７
２００ｍＬの水で、一回分に戻されるべき粉末製剤：
デキストリン ２３ｇ
グルコース ４ｇ
葉酸 ２００μｇ
カゼイン加水分解物＃ １．７４ｇ
＃５μＭのＩＣ−５０を有する０．０５ｇのＡＣＥ阻害ペプチドを含有する
戻された液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回分で投与されるべきである。
【００６２】
実施例８
術前に炭水化物を補充することによって、術後の臓器機能が向上し、多臓器機能不全に随伴するリスク因子が減少するかどうかを明らかにするために、ラット研究を実施した。
【００６３】
方法：
上腸間膜静脈をクランプで締める前に、雄のwistarラットの一群を１６時間絶食した（水は自由に摂取可能）。介入群には、１１３ｇのデキストリンと１２．７ｇのフルクトース／Ｌの他、飲み水中の塩及びクエン酸の等張混合液を与え、手術の５日前から開始し、手術日まで続けた。水を自由に与えたものを対照とした。瀉血によって、動物を屠殺し、腸の透過性と細菌の転位を直ちに測定し、臓器機能のパラメータを測定するために、血漿及び様々な臓器の試料を液体窒素中に凍結した。偽断食動物を対照とした。
【００６４】
結果−腸
絶食動物における虚血再灌流は、腸の透過性を著しく増加させた（図１）。術前に炭水化物飲料を自由に与えると、一晩絶食した虚血ラットに比べて、腸の障壁機能が有意に（Ｐ＜０．０５）良好に保存されることが示された（図１）。
【００６５】
結果−細菌の転位
手術を受けた絶食ラットは、偽絶食ラット又は偽摂食ラットに比べると、肝臓、腎臓及び腸間膜リンパ節への細菌転位の増加を示した（図２Ａ−Ｃ）。炭水化物飲料の術前補充は、ＩＲ絶食動物に比べて、肝臓、腎臓及び腸間膜リンパ節への細菌の転位を有意に減少させた（図３Ａ−Ｃ）。さらに、術前摂食動物の脾臓には、細菌転位が減少する傾向（Ｐ＝０．０７）が見られた（図２Ｄ）。
【００６６】
結果−肺
肺は、ミエロペルオキシダーゼ活性によって示されるように、偽絶食群に比べて、ＩＲ絶食群で好中球浸潤の増加を示した（図３Ａ）。炭水化物混合物を術前に補充した群は、ＩＲ絶食ラットに比べて、有意な（Ｐ＜０．０２）減少を示した（図２Ａ）。さらに、ＩＲ絶食群は、術前補充群に比べて、有意に（Ｐ＝０．０１４）減少したＧＳＨ濃度を示した。これに対して、ＩＲ補充群のＧＳＨ濃度は、偽絶食動物のレベルで、ほぼ保持された(図３Ｂ)。ＭＤＡ濃度によって示される酸化的ストレスは、ＩＲ絶食動物と比べて、減少する傾向（Ｐ＜０．１）を示した。
【００６７】
結果−全身的パラメータ
術前に自由に炭水化物飲料を飲むことができたラットは、ＩＲ絶食ラットと比べて、尿素濃度の有意な（Ｐ＝０．０２８）減少を示した（図４）。
【００６８】
結果−血漿ＡＤＭＡ及びＩＬ−６濃度
最近、臓器機能不全に対するリスク因子であることが示唆された、非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）濃度は、偽絶食ラットに比べて、ＩＲ摂食ラットで有意に増加した（Ｐ＜０．０２）（図５Ａ）。重要なことに、術前補充された群は、有意に（Ｐ＜０．０１）減少したＡＤＭＡ濃度を示し、それぞれ、ＩＲ絶食動物及び偽絶食動物と比較すると、ＡＤＭＡの増加が失われることが示された（図５Ａ）。単一及び多臓器機能不全（（Ｓ）ＭＯＤ）の発生及び重篤度に、濃度依存的に関連している別のパラメータは、炎症促進性のサイトカインであるＩＬ−６である。ＩＬ−６濃度は、炭水化物混合物を術前に補充した群では、ＩＲ絶食ラットに比べて、有意な（Ｐ＝０．０２）減少を示した（図５Ｂ）。
【００６９】
結論
結論的には、炭水化物の術前投与は、ＭＯＤを減少させた。この減少は、腸の障壁機能の改善と細菌の転位の低下によって示された。さらに、肺の炎症、肺の酸化的ストレス及び血漿尿素は減少した。炭水化物摂食ラットにおける、臓器機能パラメータのこのような改善は、ＡＤＭＡ及びＩＬ−６濃度の同時減少と平行して起こった。ＭＯＤ及びＭＯＤ関連因子の減少に対する、術前の炭水化物補充の有益な効果は、術後の回復を改善するために術前栄養が重要な役割を果たすことを示唆している。
実施例９
実施例８に記載したモデルを使用してラット研究を行った。介入グループには、術前に自由な摂食を行わせるか、又はフラボノイド混合物を餌に追加して、術前に自由な摂食を行わせた。15kgの後者には、４ｇのケルセチン、３ｇのルテオリン、３ｇのアピゲニンス、５ｇのエピカテキン及び１０ｇの緑茶抽出物が添加された。瀉血後に、肝臓ＧＴＰレベル、血漿クレアチニン及び血漿尿素レベルを測定した。得られた結果を図６−８に示す。
【００７０】
図６から推定できるように、肝臓ＧＴＰは、ＩＲ絶食動物に比べて、摂食したＩＲ絶食ラットで増加し、ＩＲ摂食＋フラボノイドラットではさらに増加した（Ｐ＜０．０５）。
【００７１】
図７は、虚血再灌流絶食動物に比べて、虚血再灌流摂食動物において腎臓機能が改善されることを示しており、フラボノイドを追加して摂食させた虚血再灌流摂食動物では、さらに改善しており、偽処理のレベルに戻る（ｐ＜０．０５）。
【００７２】
図８は、虚血再灌流絶食動物に比べて、虚血再灌流摂食動物において血漿尿素レベルが改善されることを示しており、フラボノイドを追加して摂食させた虚血再灌流摂食動物では、さらに改善されることを示している（ｐ＜０．０５）。
実施例１０
ＨｅｐＧ２細胞、ヒト肝癌細胞株をＡＴＣＣから取得した。１０％ ＦＣＳ；１％ ＮＥＡＡ； １％ ペニシリン／ストレプトマイシン混合物を補充したＭＥＭ中で、これらを生育させた。最初に、約１から２×１０６細胞の密度で細胞を播種し、分裂させ、７０から９０％の集密度を示した時点で、新しいフラスコに移した。０．３５×１０６細胞／ウェルを含有する９６ウェルのマイクロタイタープレート（ｅｘ Ｍｉｃｒｏｎｉｃ， Ｌｅｙｓｌｓｔａｄ， ＮＬ）を、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。無葉酸培地を１時間添加することによって、ＨｅｐＧ２に葉酸誘発を行った。葉酸誘発を行ったこの細胞を、増加する濃度の葉酸又はリボースに留めた細胞と比較した。
【００７３】
ヌクレオチド測定
ｖａｎ Ｈｏｏｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）， ３２０，８２−８７によって記載されているとおりに、ヌクレオチドを測定した。
【００７４】
本研究のために行われた実験：
１．葉酸を枯渇させた培地又は２．２７μＭの葉酸を含有する培地中の何れかで、ＨｅｐＧ２細胞を６．５時間インキュベートする
本実験によって、２．２７μＭの葉酸の存在下にあるＨｅｐＧ２細胞は、図９から明らかなように、葉酸を誘発した細胞に比べて、ＧＴＰ濃度を有意に増加した。
【００７５】
同様の実験で、リボースが類似のＧＴＰ増加効果を有すること、さらに、リボースが葉酸の効果に対して相加効果を有し得ることが示された（図１０）。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】腸の透過性
【図２】細菌の転位
【図３】肺の炎症及び酸化能
【図４】血漿尿素
【図５】ＡＤＭＡおよびＩＬ−６濃度
【図６】肝臓中のＧＴＰ濃度
【図７】腎臓機能［血漿クレアチニン］
【図８】血漿尿素レベル
【図９】細胞のＧＴＰレベルに対する葉酸の効果
【図１０】細胞のＧＴＰレベルに対するリボースおよび葉酸の相加効果
【発明の技術分野】
【０００１】
本発明の一側面は、外傷後の多臓器機能障害を予防する方法に関する。本方法は、外傷発生の直前及び／又は直後に、液体栄養組成物を腸内投与することを含む。
【０００２】
本発明の別の側面は、前記方法で使用するための液体栄養組成物に関する。
【発明の背景】
【０００３】
高度なモニタリングシステムとより効果的な単一臓器補助の登場により、患者が急性外傷から蘇生する可能性は増大し続けている。しかしながら、重大な病気の初期段階を「生存」した後、これらの患者は、しばしば、多臓器機能不全という臨床症候へと進行する。ＭＯＤは、進行性の悪化と、それに続く、身体生理系の不全を特徴とする。１これまでのところ、有効な治療が開発されていないので、ＭＯＤの死亡率は高い。
【０００４】
多臓器機能不全は、もはや、孤立した不全の連続とは見られていない。剖検を行うと、病変した臓器は似通ったパターンの組織損傷を呈するが、それらは、最初の傷害部位又は感染源からは離れていることが多い。この複雑な症候群は、かつて、心臓血管系の機能不全及び／又は単発性の臓器不全に過ぎないと考えられていたが、現在では、誘発因子に関わらず、傷害に対する持続的な炎症性応答によって媒介される全身性の障害と認識されている。多臓器機能不全は、臓器系の機能的状態及び病理的状態における、臓器系間での複雑な相互作用であることが明らかとなっている。
【０００５】
虚血後におけるＭＯＤの誘導には、複数の機序が関与していることが推測されている。この単一及び多臓器機能不全（Ｓ）ＭＯＤの誘導及び重篤度には、腸−肝臓−肺系が主要な役割を果たしている。より具体的には、腸は、しばしば、多臓器不全のけん引役と称される８−１１。反応性酸素種の虚血後の増加は、（マクロファージ及びリンパ球によって）直接的又は間接的に、好中球を活性化し、その後、好中球は組織傷害を引き起こす炎症の部位に浸潤することができる。これらの好中球は、最近、回腸において傍細胞の輸送を増加させることも報告されている。腸の障壁のかかる損傷は、しばしば、上皮細胞を横断する細菌輸送を増加させ、それらの内毒素が患者の炎症の誘発（ＭＯＤの誘発に関与すると報告されている。）をもたらすと報告されている。
【０００６】
最近、酸化的ストレス及び好中球の活性化が、虚血再灌流傷害の２つの要であることが示唆されている１２。再灌流（虚血後）が起こると、幾つかの機序によってＲＯＳが噴出され、これは、身体の抗酸化能を超えることがあり、酸化的ストレスを引き起こし得ることが一般的に認められている１３−１８。重要なことに、これらのＲＯＳは、炎症性転写因子ＮＦ−κＢを活性化する。炎症性応答が必要であり得るが、虚血後には、炎症性応答の制御の大半が失われ、従って、炎症促進性のサイトカインＴＮＦα及びＩＬ−６が、それらの必要性を超えて増悪され得る。ＮＦ−κＢ誘導におけるこれらのＲＯＳの重要性は、例えば、血漿中のグルタチオンレベルを上方制御し、ＮＦκＢ応答を減少させ、続いて、ＴＮＦαを低下させるＮ−アセチルシステインの添加によって実証される１２。
【０００７】
術前の絶食は、ストレスに対する形態的及び代謝的応答を変化させることが報告されており１９−２１、例えば、細菌の転位及びそれらの内毒素が増加することが報告されている２２−２４。この増加した転位は、腸障壁機能の減少、肝機能の減少（特に、肝臓の細網内皮系（ＲＥＳ）のクッパー細胞Ｐ３）又は両者に起因するものであり得る。さらに、腸の虚血に起因する細網内皮系（ＲＥＳ）の機能不全が、特に絶食した動物中で報告されている２５−２８。
【０００８】
ＥＰ−Ａ ０ ５６４ ５１１は、低浸透圧性（２５０−２９５ｍＯｓｍ／ｋｇ）であり、１００ｍＬ当たり８から２０ｇの炭水化物を含有する水溶液からなる、術前摂取用飲料を開示する。この飲料は、患者の術後炭水化物代謝に対する外科的手術の悪影響を抑制するために、及び手術時又は手術後の出血に対する患者の防御能を向上させるために使用し得る。
【０００９】
米国特許第５，４３８，０４３号は、１００ｍＬ当たり８から２０グラムの炭水化物混合物の低浸透圧性水溶液を含む、術前に使用するための飲料を記載している。この米国特許は、溶解すると、１１．７ｇのデキストリンを含有する１００ｍＬ溶液を与える乾燥物質を記載している。ＥＰ−Ａ ０ ８７５ １５５は、４００ｍＬ当たりに、５から１３０ｇの可溶性炭水化物と１から３０ｇのグルタミン又はグルタミンとして計算されるグルタミン前駆体を含有する、手術前後に使用するための液体栄養組成物を記載している。この液体組成物は、麻酔及び胃の内容物排出という問題を引き起こさずに、同化代謝を維持するために、手術直前又は手術直後に投与されることが予定されている。
【００１０】
ＥＰ−Ａ ０ ３０２ ８０７は、アミノ窒素源、炭水化物、食用性脂肪、無機物、ビタミン及び少なくとも一つのヌクレオシドを含有する栄養的にバランスが取れた液体栄養製品を記載している。実施例ＩＸは、７．３２％のマルトデキストリンと０．１５％のヌクレオシド及び／又はヌクレオチドとを含有し、前記ヌクレオシド及び／又はヌクレオチドは１５０ｍｇのグアノシン及び／又は３０ｍｇのグアノシン一リン酸を含有する水性液体製品を開示している。
【発明の概要】
【００１１】
予定されている手術の前に、患者は、麻酔の安全性のために、並びに胃内容物の逆流及び吸引を防ぐために、最大２４時間、少なくとも８時間絶食するのが通常である。また、手術又は重い外傷の後、患者は、しばしば、８時間以上にわたって、全く栄養素を摂取しない。
【００１２】
本発明者らは、思いがけないことに、外傷後のＭＯＤの発生と、外傷の発生直前及び／又は発生直後の期間中の絶食の結果として起こる、可消化炭水化物の摂取の減少との間に相関が存在することを発見した。さらに、本発明者らは、肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）を増加させる成分及び／又はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有するペプチドとともに、消化性水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態で、消化性の水溶性炭水化物の相当量を、外傷発生の直前又は直後に腸内投与することによって、ＭＯＤのリスクが著しく軽減され得ることを確定した。本発明に従って有利に使用することができる肝臓ＧＴＰ増加成分は、グアノシン均等物及びリボース均等物である。
【００１３】
実験データは、絶食された動物に比べて、炭水化物溶液を手術前後に摂取した動物が、腸の透過性が著しく低く、肝臓、腎臓及び腸間膜のリンパ節への細菌の転位がずっと少なくなることも示唆する。これらのデータは、さらに、臓器当たりの酸化的ストレス及び肝臓のエネルギー状態の生化学的特性によって裏付けられる。
【００１４】
本発明者らは理論に拘泥するものではないが、ＭＯＤの発生に対する、可消化炭水化物の手術前後の投与の保護効果の背後に存在する機序は、何らかの形で、腸及び肝臓の両方に対する前記投与の効果と関連していると考えられている。この結果は、本発明の方法が外傷後の腸障壁機能の維持を補助することを示唆する。
【００１５】
不可欠な肝機能及びＭＯＤとの関係を確立した後、本発明者らは、さらに、本発明の液体組成物のＭＯＤに対する予防効果が、肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）を増加することができる一又は複数の成分の有効量を前記組成物中に取り込ませることによってさらに増強されることを発見した。本発明者らは、肝臓ＧＴＰ及びＭＯＤの発生との逆相関を発見した。肝臓ＧＴＰレベルは、グアノシン、リボース及び／又はこれらの成分の前駆体を投与することによって、本発明に従って、効果的に増加され得る。
【００１６】
非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）の血漿レベルの増加も、ＭＯＤに対する、さらなるリスク因子を構成すると推測される。本発明の液体組成物中に、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量のペプチドを含めると、ＡＤＭＡの血漿レベルが望ましくないほど高いレベルに達しないようにするのに役立つことも見出された。
【発明の詳細な説明】
【００１７】
従って、本発明の一側面は、外傷を受けた哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、（ｉ）２から２０００ｍｇのグアノシン均等物、０．５から４０ｇのリボース均等物及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分と、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも２０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記外傷の発生の２４時間以内に、前記哺乳動物に、腸内投与することを含む方法に関する。
【００１８】
本発明の別の側面は、外傷を受けた哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、（ｉ）ＡＣＥ阻害活性を有し、本明細書において定義される１０００未満のＩＣ５０濃度を示す０．０５から１００ｍｍｏｌのペプチドと、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記外傷の発生の２４時間以内に、前記哺乳動物に、腸内投与することを含む方法に関する。ＩＣ−５０濃度は、物質又は組成物がＡＣＥ活性を阻害する効力の指標であり、以下の「方法」に記載されているように決定し得る。
【００１９】
本明細書において使用される「可消化炭水化物」という用語は、消化管によってそのまま吸収され得る炭水化物、又は消化管によって吸収可能な成分へと分解され得る（但し、この分解は、腸管微生物叢による発酵的分解を含まない。）炭水化物を表す。
【００２０】
本明細書において使用される「グアノシン均等物」という用語は、グアノシン並びにグアノシンの塩及びグアノシンの前駆体、特に、前駆体分子のインビボ変換（例えば、加水分解）によってグアノシン又はグアノシン塩を遊離することができる前駆体を包含する。加水分解されて、グアノシン又はグアノシン塩を産生することができるグアノシン前駆体の典型的な例は、グアノシンエステルである。
【００２１】
「リボース均等物」という用語は、グアニン均等物及び葉酸均等物に関して上記した定義に従って定義される。リボース均等物は、合成若しくは天然のリボースの形態で、又は、例えば、核酸塩基付加物の形態の前駆体として（例えば、リボースグアノシン付加物として）投与し得る。リボース前駆体の他の適切な例には、リボースエステルが含まれる。
【００２２】
「腸内投与する」という用語には、経口投与（経口胃管栄養法投与を含む。）及び直腸投与が包含されるが、経口投与が最も好ましい。別段の記載がなければ、本願に記載される投薬量は、単一の服用又は単一の投与行為中に送達される量を表す。本発明の組成物がガラス又は容器から摂取される場合、単一の服用又は単一の投与中に送達される量は、典型的には、前記ガラス又は容器の容積に等しいと思われる。
【００２３】
本方法を用いて予防的に治療することができるＭＯＤを引き起こし得る外傷の例には、手術並びに火傷、病変及び出血などの主要な傷害が含まれる。本発明の方法は、手術、特に、予め予定が決められた手術に起因するＭＯＤを予防するのに特に適している。例えば、予め予定が決められた手術の場合、外傷の発生する前に、本発明の液体組成物を投与することが可能である。外傷の発生前に液体組成物を投与することには、患者に液体組成物を飲むように単に依頼することによって組成物を投与できる、及び実際の外傷が発生したときに効果が発揮されるという重要な利点がある。
【００２４】
本発明に従って使用される可消化炭水化物は、単糖、二糖及び多糖を適切に含むことができる。本発明の特に好ましい実施形態では、可消化水溶性炭水化物は、大部分がグルコースをベースとする。本実施形態において、前記可消化水溶性炭水化物は、該可消化炭水化物の分子量に対して計算される、最大６％の量でグルコース以外の糖を必要に応じて含有する。可消化グルコースをベースとする炭水化物中に生じ得る他の糖質の例には、Ｄ−フルクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−ラムノース、Ｄ−リボース及びＤ−ガラクトースが含まれるが、これらの糖質は、本炭水化物の末端に位置しないことが好ましい。オリゴ糖及び多糖のグルコース単位は、好ましくは、可消化であるために、主としてα１−４結合又はα１−６結合を結合を介して接続される。本発明の可消化炭水化物には、直鎖及び分枝鎖オリゴ糖及び多糖がともに含まれる。糖単位の数は、数値ｎによって表される。オリゴ糖は、３から１０の数を有し、多糖は、１１から１０００、好ましくは１１から６０の数を有する。
【００２５】
好ましくは、単糖及び二糖に比べて、多糖はより遅く吸収されるので、本発明の液体組成物は、３０から２００ｇ／Ｌの可消化多糖を含有する。別の好ましい実施形態では、前記組成物は、多糖と単糖及び／又は二糖との組み合わせを含有する。より好ましくは、前記可消化炭水化物は、６０−９９重量％の可消化オリゴ糖及び／又は多糖と、１から４０重量％の可消化単糖及び／又は二糖とを含む。可消化水溶性オリゴ糖の適切な例は、グルコースシロップである。可消化水溶性多糖の適切な例には、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン、デキストラン及びそれらの組み合わせが含まれる。最も好ましくは、水溶性多糖は、デキストリン、マルトデキストリン及びそれらの組み合わせ（デキストリンが最も好ましい。）からなる群から選択される、少なくとも５０重量％、より好ましくは少なくとも８０重量％の多糖を含有する。特に好ましい実施形態において、前記可消化炭水化物は、少なくとも１重量％の単糖、特に少なくとも１重量％のフルクトースを含む。典型的には、前記可消化炭水化物は、単糖形態で２０重量％以下のフルクトースを含有するであろう。
【００２６】
本発明の特に好ましい実施形態において、前記方法は、外傷の発生の２４時間以内に、少なくとも５０ｇ、より好ましくは少なくとも７０ｇの可消化水溶性炭水化物を、水性形態組成物の形態で腸内投与することを含む。前記液体組成物は、単回の大量瞬時投与として投与することができ、あるいは、２４時間の間に、２以上の投薬で投与することができる。好ましくは、液体組成物は、２４時間の間に、少なくとも２回の分離した投薬で投与され、投与行為は、少なくとも１時間を隔てることが好ましい。特に適切なプロトコールは、外傷の２４から８時間前にわたる期間中に、少なくとも４０ｇの可消化炭水化物を送達するために、及び外傷の８から１時間前の期間中に、少なくとも２０ｇの可消化炭水化物を送達するために、十分な量の本発明の液体組成物を投与することを含む。
【００２７】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷発生の２４時間以内に、
２から４００ｍｇ、より好ましくは５から４０ｍｇのグアノシン均等物；
３から１０ｇのリボース均等物、より好ましくは２から１０ｇのＤ−リボース均等物；
及びそれらの組み合わせ；
からなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分を投与することを含む。
【００２８】
肝臓ＧＴＰは、葉酸又はその均等物を使用することによって、さらに増加させることができる。このように、好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷の２４時間以内に、０．１から１０ｍｇ、好ましくは０．２から５ｍｇの葉酸均等物を腸内投与することを含む。「葉酸均等物」という用語は、葉酸及び葉酸の塩並びに葉酸又は葉酸の塩の前駆体、特に、前駆体分子のインビボ変換（例えば、加水分解）によって葉酸、葉酸塩、又は代謝的に活性な形態の葉酸を遊離することができる前駆体を包含する。適切な前駆体の例には、テトラヒドロ葉酸（テトラヒドロプテロイル）ポリグルタミン酸、テトラヒドロ葉酸グルタミン酸、並びに５−メチル及び／又は１０−メチル置換されたそれらの類縁体が含まれる。本発明の葉酸均等物は、テトラヒドロ形態を使用することが好ましければ、ジヒドロ形態中にプテロイル基を含むこともできる。
【００２９】
表記濃度範囲の葉酸を含めることは、ＧＴＰの生合成に対する補助を与える。本発明において、葉酸を使用することの別の利点は、ＡＤＭＡ血漿濃度に対する好ましい影響である（下記参照）２９。葉酸とリボースの組み合わせは、肝臓ＧＴＰレベルを維持／回復する上で特に有効である。このように、特に好ましい実施形態では、本発明の方法は葉酸とリボースの組み合わせを使用する。
【００３０】
特に好ましい実施形態において、本発明の方法は、外傷の発生の２４時間以内に、２から１００ｍｇのグアノシン均等物、より好ましくは５から４０ｍｇのグアノシン均等物を投与することを含む。グアノシンは、ＧＴＰの前駆体である。思いがけないことに、本発明者らは、ＧＴＰの前駆体となり得るこれ以外の前駆体、例えば、グアニン及びグアノシン一リン酸（ＧＭＰ）は、ずっと適切でないことを発見した。
【００３１】
本発明の極めて好ましい実施形態において、前記方法は、外傷の発生の２４時間以内に、ＡＣＥ阻害活性を有し、１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示すペプチド０．１から５０ｍｍｏｌを投与することを含む。本発明者らは理論に拘泥することを望むものではないが、ＡＣＥ阻害剤は、内皮細胞に対するＮＯの生物学的利用性を増加させ、これにより、内皮機能を向上させ得ると考えられる。ＡＤＭＡは、尿中への排出によって、並びに肝臓及び腎臓中、及び内皮細胞中に豊富に発現されているジメチルアルガニンジメチルアミノヒドロラーゼによる代謝によって除去される。肝臓及び腎臓の排除機能は、血管新生が著しいこれらの臓器中の内皮細胞によって媒介されるという仮説が立てられている。このため、内皮細胞の生存性は、ＡＤＭＡのクリアランスにとって不可欠であろう。この仮説は、血管疾患を有する患者又は血管疾患に対するリスク因子（高コレステロール血症及び高血圧など）を有する者では、ＡＤＭＡレベルが通常増加するという観察によって、さらに裏付けられる。これらの全ての症状では、内皮機能が損なわれているのに対して、肝機能及び腎機能は、しばしば影響を受けていない。
【００３２】
本発明の有利なさらに別の実施形態において、本発明の方法は、外傷の発生の２４時間以内に、０．５から２００ｍｇ、好ましくは１から１００ｍｇ、最も好ましくは５から５０ｍｇの量で、フラボノイドを同時投与することを含む。ルテオリン、ケルセチン及びアピゲニンなどのフラボノイドは、キサンチンオキシダーゼの優れた阻害剤であること、及び、マロンジアルデヒドの血漿濃度に対するそれらの効果によって実証されるように、酸化的ストレスを阻害することが明らかにされている。さらに、フラボノイドは、肝臓ＧＴＰの維持及び回復を補助することも見出された。特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ルテオリン、ケルセチン、アピゲニン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるフラボノイドを、好ましくは少なくとも２ｍｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも５ｍｇ／Ｌ、最も好ましくは少なくとも１０ｍｇ／Ｌの濃度で含有する。
【００３３】
本発明の別の側面は、本発明の方法で使用するための水性液体栄養組成物に関する。より具体的には、本側面は、
・２０から２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物；
・５から５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物、並びに以下のうち少なくとも一つ：
・１から１００ｇ／Ｌのリボース均等物；
・２から２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイド；及び
・４５から９７．９５重量％の水を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物に関する。
【００３４】
好ましい一実施形態において、前記水性液体組成物は、少なくとも１から１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する。別の好ましい実施形態において、前記液体組成物は、２から２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイドを含有する。特に好ましいのは、表記の量で、グアノシン均等物、リボース均等物及びフラボノイドを含有する液体組成物である。
【００３５】
本発明のさらに別の側面は、
・２０から２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示す、ＡＣＥ阻害活性を有する０．０１から１０ｍＭのペプチドと；及び
・４５から９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物に関する。
【００３６】
特に好ましい実施形態において、前記液体組成物は、さらに少なくとも５ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物を含有する。別の特に好ましい実施形態において、前記液体組成物は、さらに、少なくとも1ｇ／Ｌ、より好ましくは、少なくとも３ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する。典型的には、液体組成物中に含有されるリボース均等物の量は、１００ｇ／Ｌを超えず、好ましくは、５０ｇ／Ｌを超えない。本発明のさらに別の有利な実施形態では、前記水性液体組成物は、２から２０００ｍｇ／Ｌの濃度でフラボノイドを含有する。
【００３７】
好ましくは、本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害活性を有するペプチド又はこのようなペプチドの混合物を、該ペプチド又はペプチドの混合物のＩＣ−５０濃度の１０％以上、好ましくは５０％以上の濃度で含有する。ＡＣＥ阻害ペプチドは、タンパク質加水分解物、特に乳タンパク質加水分解物の形態で、本発明の組成物中に適切に取り込ませることができる。
本発明の液体組成物は、少なくとも１０ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物を有利に含有する。一般に、前記組成物中のグアノシン均等物の濃度は２０００ｍｇ／Ｌ、好ましくは１０００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは５００ｍｇ／Ｌを超えない。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、本発明の液体組成物は、0.2から４００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する。より好ましくは、前記組成物は、０．５から１００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する。
【００３９】
好ましくは、フラボノイドは、少なくとも５ｍｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ／Ｌの濃度で、本発明の組成物中に含有される。通常、フラボノイドの濃度は、１０００ｍｇ／Ｌを超えず、好ましくは５００ｍｇ／Ｌを超えない。ルテオリン、ケルセチン及びアピゲニンなどのフラボノイドは、キサンチンオキシダーゼの優れた阻害剤であること、及び、マロンジアルデヒドの血漿濃度に対するそれらの効果によって実証されるように、酸化的ストレスを阻害することが明らかされた。さらに、フラボノイドは、肝臓ＧＴＰレベルの維持及び回復を補助することも見出された。特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも５ｍｇ／Ｌの濃度でルテオリン、ケルセチン、アピゲニン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるフラボノイドを含有する。
【００４０】
嚥下が困難である患者又は吐き気を催す患者などの場合、前記可消化炭水化物は濃縮された液体形態で送達できることが重要である。従って、可消化水溶性炭水化物を、少なくとも５０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも７０ｇ／Ｌ、最も好ましくは少なくとも８０ｇ／Ｌの濃度で含めることが好ましい。
【００４１】
逆流のリスクを最小限に抑え、また、胃内の滞留時間を最小限に抑えるために、液体組成物は３０ｇ／Ｌ未満の脂質、より好ましくは２０ｇ／Ｌ未満の脂質、最も好ましくは１０ｇ／Ｌの脂質を含有することが好ましい。同様の理由で、本発明の組成物のタンパク質レベルも、比較的低いことが好ましく、特に４０ｇ／Ｌ未満とすることが好ましい。逆流のリスクを軽減するための別の方法は、服用の容量サイズを（例えば、１００ｍＬ未満に）減らすか、又は十二指腸中に管を与えることである。
【００４２】
本発明の液体組成物は、例えば、溶液、懸濁液又はエマルジョンの形態を採ることができる。実質的に未溶解成分を全く含有しない溶液の形態で（例えば、液体組成物が澄んで、透明であるという事実によって示される。）液体組成物を使用することが好ましい。
【００４３】
本発明のさらに別の側面は、水で戻して、本発明の水性液体組成物にすることができる組成物に関する。典型的には、液体で戻すことができる組成物は、液体濃縮物、ペースト、粉末、顆粒、錠剤などの形態を採ることができる。好ましくは、液体で戻すことができる組成物は、乾燥製品であり、特に、１０重量％未満、好ましくは７重量％未満の水分含量を有する乾燥産物である。
【参考文献】
【００４４】
方法
ＩＣ−５０濃度の測定
本願において、ＩＣ−５０濃度とは、以下に記載されている検査条件を用いて、ある物質がアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の活性を５０％減少させる濃度である。
【００４５】
ＡＣＥは、基質ＦＡＰＧＧ（Ｎ−［３−（２−フリル）アクリロイル］−Ｌ−フェニルアラニルグリシルグリシンを切断して、ＦＡＰとＧＧにすることができる。変化を受けていない基質は、３４０ｎｍの波長で、分光学的に検出することができる。切断産物は、前記波長で検出することができない。ＡＣＥが添加された、基質の水溶液の吸光度は、基質の酵素的切断の結果、時が経過するにつれて減少するであろう。物質のＡＣＥ阻害特性を評価するために、これらの物質は様々な濃度でＡＣＥ−基質混合物中に導入される。３４０ｎｍの吸光度を２０分間追跡し、このデータから、吸収が減少する速度を計算する。
【００４６】
この方法は、較正のために、陽性対照と陰性対照を使用する。
【００４７】
陰性対照：ＡＣＥ及びＦＡＰＰＧ（検査物質なし）
陽性対照；ＡＣＥ／ＦＡＰＧＧ及び薬理学的ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトトリル、２５ｎＭ）
材料：
９６ウェルプレート
マイクロプレートリーダー（３４０ｎｍフィルター；速度論プロトコール）
アンギオテンシン変換酵素、0.16mU／μL、ｅｘＳｉｇｍａ（Ｒ）（Ａ−６７７８）
ＦＡＰＧＧ、２ｍｇ／ｍＬ（５ｍＭ） ｅｘ Ｓｉｇｍａ（Ｆ−７１３１）
ＡＣＥ緩衝液：１７．６ｍｇ／ｍＬ（３００ｍＭ）ＮａＣｌ、１２ｍｇ／ｍＬ（５０ｎＭ） Ｈｅｐｅｓ， pH ７．５
方法：
マイクロプレートリーダーのインキュベータを３７℃になるように調節する
ACE緩衝液中に検査成分を溶解し、希釈する
９６ウェルプレート中の６０μL／ウェルの試料（陽性及び陰性対照を含む。）をピペットで取る
３０μL／ウェルのFAPGG（２ｍｇ／ｍL、ACE緩衝液中）を添加
このプレートを３７℃で５分間インキュベートする
１０μL／ウェルのACE（０．１６ｍＵ／μＬ）を添加する
３４０ｎｍの吸光度を２０分間測定する（速度論プロトコール、８０回測定、１５秒ごとに１回測定）
【実施例】
【００４８】
実施例１
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００４９】
グルコース １ｇ
マルトデキストリンＤＥ ５ １０ｇ
グアノシン ５ｍｇ
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、２回投与されるべきである。
【００５０】
実施例２
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５１】
グルコースシロップ ＤＥ １２ １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 １００μｇ
グアノシン ２ｍｇ
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、３回投与されるべきである。
【００５２】
実施例３
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５３】
デキストリン １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 １００μｇ
αＳ１−カゼイン加水分解物＃ ７ｇ
＃ＥＸ ＤＭＶ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ； ６％のＣ１２ペプチドを含有
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回投与されるべきである。
【００５４】
実施例４
投与すべき水性液体組成物は、１２５ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５５】
グルコースシロップ ＤＥ 19 １１．５ｇ
グルコース ２ｇ
葉酸 ２００μｇ
カゼイン加水分解物＄ １．７５ｇ
＄６μＭのＩＣ−５０を有する０．０５ｇ（７６μｍｏｌ）のＡＣＥ阻害ペプチドを含有する
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回投与されるべきである。
【００５６】
実施例５
投与すべき水性液体組成物は、２００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００５７】
マルトース １ｇ
グルコースシロップ ＤＥ ２９ １０ｇ
葉酸 ２００μｇ
ＧＴＰ ５ｍｇ
リボース １ｇ
大豆タンパク質加水分解物＠ ２ｇ
＠２００μＭ未満のＩＣ−５０を有する少なくとも０．１ｇのＡＣＥ阻害ペプチドを含有する。
【００５８】
この液体は、外傷の発生から２４時間以内に、２回分で投与されるべきである。
【００５９】
実施例６
投与すべき水性液体組成物は、５００ｍＬの一回分の中に、１００ｍＬ当たり以下のものを含む。
【００６０】
マルトース １ｇ
グルコースシロップ ＤＥ 32 １０ｇ
葉酸 ５０μｇ
ＧＴＰ １ｍｇ
リボース ０．５ｇ
αＳ１カゼインタンパク質加水分解物＊ ２ｇ
＃ｅｘ ＤＭＶ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；８％のＣ１２ペプチドを含有
この液体は、経管栄養法によって外傷の発生から２４時間以内に２回分で投与されるべきである。
【００６１】
実施例７
２００ｍＬの水で、一回分に戻されるべき粉末製剤：
デキストリン ２３ｇ
グルコース ４ｇ
葉酸 ２００μｇ
カゼイン加水分解物＃ １．７４ｇ
＃５μＭのＩＣ−５０を有する０．０５ｇのＡＣＥ阻害ペプチドを含有する
戻された液体は、外傷の発生から２４時間以内に、４回分で投与されるべきである。
【００６２】
実施例８
術前に炭水化物を補充することによって、術後の臓器機能が向上し、多臓器機能不全に随伴するリスク因子が減少するかどうかを明らかにするために、ラット研究を実施した。
【００６３】
方法：
上腸間膜静脈をクランプで締める前に、雄のwistarラットの一群を１６時間絶食した（水は自由に摂取可能）。介入群には、１１３ｇのデキストリンと１２．７ｇのフルクトース／Ｌの他、飲み水中の塩及びクエン酸の等張混合液を与え、手術の５日前から開始し、手術日まで続けた。水を自由に与えたものを対照とした。瀉血によって、動物を屠殺し、腸の透過性と細菌の転位を直ちに測定し、臓器機能のパラメータを測定するために、血漿及び様々な臓器の試料を液体窒素中に凍結した。偽断食動物を対照とした。
【００６４】
結果−腸
絶食動物における虚血再灌流は、腸の透過性を著しく増加させた（図１）。術前に炭水化物飲料を自由に与えると、一晩絶食した虚血ラットに比べて、腸の障壁機能が有意に（Ｐ＜０．０５）良好に保存されることが示された（図１）。
【００６５】
結果−細菌の転位
手術を受けた絶食ラットは、偽絶食ラット又は偽摂食ラットに比べると、肝臓、腎臓及び腸間膜リンパ節への細菌転位の増加を示した（図２Ａ−Ｃ）。炭水化物飲料の術前補充は、ＩＲ絶食動物に比べて、肝臓、腎臓及び腸間膜リンパ節への細菌の転位を有意に減少させた（図３Ａ−Ｃ）。さらに、術前摂食動物の脾臓には、細菌転位が減少する傾向（Ｐ＝０．０７）が見られた（図２Ｄ）。
【００６６】
結果−肺
肺は、ミエロペルオキシダーゼ活性によって示されるように、偽絶食群に比べて、ＩＲ絶食群で好中球浸潤の増加を示した（図３Ａ）。炭水化物混合物を術前に補充した群は、ＩＲ絶食ラットに比べて、有意な（Ｐ＜０．０２）減少を示した（図２Ａ）。さらに、ＩＲ絶食群は、術前補充群に比べて、有意に（Ｐ＝０．０１４）減少したＧＳＨ濃度を示した。これに対して、ＩＲ補充群のＧＳＨ濃度は、偽絶食動物のレベルで、ほぼ保持された(図３Ｂ)。ＭＤＡ濃度によって示される酸化的ストレスは、ＩＲ絶食動物と比べて、減少する傾向（Ｐ＜０．１）を示した。
【００６７】
結果−全身的パラメータ
術前に自由に炭水化物飲料を飲むことができたラットは、ＩＲ絶食ラットと比べて、尿素濃度の有意な（Ｐ＝０．０２８）減少を示した（図４）。
【００６８】
結果−血漿ＡＤＭＡ及びＩＬ−６濃度
最近、臓器機能不全に対するリスク因子であることが示唆された、非対称性ジメチルアルギニン（ＡＤＭＡ）濃度は、偽絶食ラットに比べて、ＩＲ摂食ラットで有意に増加した（Ｐ＜０．０２）（図５Ａ）。重要なことに、術前補充された群は、有意に（Ｐ＜０．０１）減少したＡＤＭＡ濃度を示し、それぞれ、ＩＲ絶食動物及び偽絶食動物と比較すると、ＡＤＭＡの増加が失われることが示された（図５Ａ）。単一及び多臓器機能不全（（Ｓ）ＭＯＤ）の発生及び重篤度に、濃度依存的に関連している別のパラメータは、炎症促進性のサイトカインであるＩＬ−６である。ＩＬ−６濃度は、炭水化物混合物を術前に補充した群では、ＩＲ絶食ラットに比べて、有意な（Ｐ＝０．０２）減少を示した（図５Ｂ）。
【００６９】
結論
結論的には、炭水化物の術前投与は、ＭＯＤを減少させた。この減少は、腸の障壁機能の改善と細菌の転位の低下によって示された。さらに、肺の炎症、肺の酸化的ストレス及び血漿尿素は減少した。炭水化物摂食ラットにおける、臓器機能パラメータのこのような改善は、ＡＤＭＡ及びＩＬ−６濃度の同時減少と平行して起こった。ＭＯＤ及びＭＯＤ関連因子の減少に対する、術前の炭水化物補充の有益な効果は、術後の回復を改善するために術前栄養が重要な役割を果たすことを示唆している。
実施例９
実施例８に記載したモデルを使用してラット研究を行った。介入グループには、術前に自由な摂食を行わせるか、又はフラボノイド混合物を餌に追加して、術前に自由な摂食を行わせた。15kgの後者には、４ｇのケルセチン、３ｇのルテオリン、３ｇのアピゲニンス、５ｇのエピカテキン及び１０ｇの緑茶抽出物が添加された。瀉血後に、肝臓ＧＴＰレベル、血漿クレアチニン及び血漿尿素レベルを測定した。得られた結果を図６−８に示す。
【００７０】
図６から推定できるように、肝臓ＧＴＰは、ＩＲ絶食動物に比べて、摂食したＩＲ絶食ラットで増加し、ＩＲ摂食＋フラボノイドラットではさらに増加した（Ｐ＜０．０５）。
【００７１】
図７は、虚血再灌流絶食動物に比べて、虚血再灌流摂食動物において腎臓機能が改善されることを示しており、フラボノイドを追加して摂食させた虚血再灌流摂食動物では、さらに改善しており、偽処理のレベルに戻る（ｐ＜０．０５）。
【００７２】
図８は、虚血再灌流絶食動物に比べて、虚血再灌流摂食動物において血漿尿素レベルが改善されることを示しており、フラボノイドを追加して摂食させた虚血再灌流摂食動物では、さらに改善されることを示している（ｐ＜０．０５）。
実施例１０
ＨｅｐＧ２細胞、ヒト肝癌細胞株をＡＴＣＣから取得した。１０％ ＦＣＳ；１％ ＮＥＡＡ； １％ ペニシリン／ストレプトマイシン混合物を補充したＭＥＭ中で、これらを生育させた。最初に、約１から２×１０６細胞の密度で細胞を播種し、分裂させ、７０から９０％の集密度を示した時点で、新しいフラスコに移した。０．３５×１０６細胞／ウェルを含有する９６ウェルのマイクロタイタープレート（ｅｘ Ｍｉｃｒｏｎｉｃ， Ｌｅｙｓｌｓｔａｄ， ＮＬ）を、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。無葉酸培地を１時間添加することによって、ＨｅｐＧ２に葉酸誘発を行った。葉酸誘発を行ったこの細胞を、増加する濃度の葉酸又はリボースに留めた細胞と比較した。
【００７３】
ヌクレオチド測定
ｖａｎ Ｈｏｏｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）， ３２０，８２−８７によって記載されているとおりに、ヌクレオチドを測定した。
【００７４】
本研究のために行われた実験：
１．葉酸を枯渇させた培地又は２．２７μＭの葉酸を含有する培地中の何れかで、ＨｅｐＧ２細胞を６．５時間インキュベートする
本実験によって、２．２７μＭの葉酸の存在下にあるＨｅｐＧ２細胞は、図９から明らかなように、葉酸を誘発した細胞に比べて、ＧＴＰ濃度を有意に増加した。
【００７５】
同様の実験で、リボースが類似のＧＴＰ増加効果を有すること、さらに、リボースが葉酸の効果に対して相加効果を有し得ることが示された（図１０）。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】腸の透過性
【図２】細菌の転位
【図３】肺の炎症及び酸化能
【図４】血漿尿素
【図５】ＡＤＭＡおよびＩＬ−６濃度
【図６】肝臓中のＧＴＰ濃度
【図７】腎臓機能［血漿クレアチニン］
【図８】血漿尿素レベル
【図９】細胞のＧＴＰレベルに対する葉酸の効果
【図１０】細胞のＧＴＰレベルに対するリボースおよび葉酸の相加効果
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外傷を負っている哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、前記外傷の発生の２４時間以内に、（ｉ）２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物；０．５〜４０ｇのリボース均等物；及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分と、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記哺乳動物に腸内投与することを含む方法において使用するための水性液体組成物の製造における、可消化水溶性炭水化物及び肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）増加成分の使用。
【請求項２】
前記方法が、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有し、本明細書に定義されているＩＣ−５０濃度が１０００μＭ未満である０．０５〜１００ｍｍｏｌのペプチドを、外傷の発生の２４時間以内に投与することを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
外傷を負っている哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、前記外傷の発生の２４時間以内に、（ｉ）ＡＣＥ阻害活性を有し、本明細書に定義されているＩＣ−５０濃度が１０００μＭ未満である０．０５〜１００ｍｍｏｌのペプチドと、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記哺乳動物に腸内投与することを含む方法において使用するための水性液体組成物の製造における、可消化水溶性炭水化物及びＡＣＥ阻害活性を有するペプチドの使用。
【請求項４】
前記方法が、２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物；０．１〜１０ｇの葉酸均等物；０．５〜４０ｇのリボース均等物；及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分を、外傷の発生の２４時間以内に投与することを含む、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記外傷が手術であり、好ましくは予めスケジュールが定められた手術である、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記液体組成物が外傷の発生の前に投与される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記液体組成物が３０〜２００ｇ／Ｌの可消化多糖を含有する、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記可消化水溶性炭水化物が、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン、デキストラン及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記方法が、外傷の発生の２４時間以内に、少なくとも５０ｇの可消化水溶性炭水化物を、水性液体組成物の形態で腸内投与することを含む、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記方法が、外傷の発生の２４時間以内に、２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物を投与することを含む、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項１１】
・２０〜２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物と；
・少なくとも一つの１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物及び２〜２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイドと；
・４５〜９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物。
【請求項１２】
５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物及び少なくとも１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する、請求項１１に記載の水性液体組成物。
【請求項１３】
・２０〜２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・ＡＣＥ阻害活性を有し、１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示す０．０１〜１０ｍＭのペプチドと；
・４５〜９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物及び／又は１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する、請求項１３に記載の液体組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、０．２〜４００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する、請求項１１〜１４の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、２〜２０００ｍｇ／Ｌの範囲内の濃度でフラボノイドを含有する、請求項１１〜１５の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１７】
前記液体組成物が透明な水溶液である、請求項１１〜１６の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１８】
請求項１１〜１７の何れか一項に記載の液体組成物に水で戻すことができる組成物。
【請求項１】
外傷を負っている哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、前記外傷の発生の２４時間以内に、（ｉ）２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物；０．５〜４０ｇのリボース均等物；及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分と、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記哺乳動物に腸内投与することを含む方法において使用するための水性液体組成物の製造における、可消化水溶性炭水化物及び肝臓グアノシン−５’−三リン酸（ＧＴＰ）増加成分の使用。
【請求項２】
前記方法が、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有し、本明細書に定義されているＩＣ−５０濃度が１０００μＭ未満である０．０５〜１００ｍｍｏｌのペプチドを、外傷の発生の２４時間以内に投与することを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
外傷を負っている哺乳動物において多臓器機能不全を予防する方法であって、前記外傷の発生の２４時間以内に、（ｉ）ＡＣＥ阻害活性を有し、本明細書に定義されているＩＣ−５０濃度が１０００μＭ未満である０．０５〜１００ｍｍｏｌのペプチドと、（ｉｉ）少なくとも１０ｇ／Ｌの可消化水溶性炭水化物を含有する水性液体組成物の形態の、少なくとも２０ｇの可消化水溶性炭水化物とを、前記哺乳動物に腸内投与することを含む方法において使用するための水性液体組成物の製造における、可消化水溶性炭水化物及びＡＣＥ阻害活性を有するペプチドの使用。
【請求項４】
前記方法が、２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物；０．１〜１０ｇの葉酸均等物；０．５〜４０ｇのリボース均等物；及びそれらの組み合わせからなる群から選択される肝臓ＧＴＰ増加成分を、外傷の発生の２４時間以内に投与することを含む、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記外傷が手術であり、好ましくは予めスケジュールが定められた手術である、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記液体組成物が外傷の発生の前に投与される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記液体組成物が３０〜２００ｇ／Ｌの可消化多糖を含有する、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記可消化水溶性炭水化物が、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン、デキストラン及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記方法が、外傷の発生の２４時間以内に、少なくとも５０ｇの可消化水溶性炭水化物を、水性液体組成物の形態で腸内投与することを含む、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記方法が、外傷の発生の２４時間以内に、２〜２０００ｍｇのグアノシン均等物を投与することを含む、先行する請求項の何れか一項に記載の使用。
【請求項１１】
・２０〜２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物と；
・少なくとも一つの１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物及び２〜２０００ｍｇ／Ｌのフラボノイドと；
・４５〜９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物。
【請求項１２】
５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物及び少なくとも１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する、請求項１１に記載の水性液体組成物。
【請求項１３】
・２０〜２００ｇ／Ｌの溶解された可消化炭水化物と；
・ＡＣＥ阻害活性を有し、１０００μＭ未満のＩＣ−５０濃度を示す０．０１〜１０ｍＭのペプチドと；
・４５〜９７．９５重量％の水と
を含有する、腸内投与に適した水性液体組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、５〜５０００ｍｇ／Ｌのグアノシン均等物及び／又は１〜１００ｇ／Ｌのリボース均等物を含有する、請求項１３に記載の液体組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、０．２〜４００ｍｇ／Ｌの葉酸均等物を含有する、請求項１１〜１４の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、２〜２０００ｍｇ／Ｌの範囲内の濃度でフラボノイドを含有する、請求項１１〜１５の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１７】
前記液体組成物が透明な水溶液である、請求項１１〜１６の何れか一項に記載の液体組成物。
【請求項１８】
請求項１１〜１７の何れか一項に記載の液体組成物に水で戻すことができる組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２００７−５０５８９９（Ｐ２００７−５０５８９９Ａ）
【公表日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２６８４６（Ｐ２００６−５２６８４６）
【出願日】平成１６年９月２０日（２００４．９．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００４／０００６５０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２７６６０
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（５０５２９６８２１）エヌ．ブイ．・ヌートリシア (32)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２０日（２００４．９．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００４／０００６５０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２７６６０
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（５０５２９６８２１）エヌ．ブイ．・ヌートリシア (32)
【Ｆターム（参考）】
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