安定化されたアントシアニン組成物
アントシアニンは、その化学構造の性質に部分的に起因して、不安定でありかつ分解しやすい傾向を有する。さらに、アントシアニンの安定性は、ｐＨ、数ヶ月の期間にわたる貯蔵、貯蔵温度、酵素の存在、光、酸素、ならびにタンパク質、フラボノイドおよび無機質の存在により影響を受ける。本発明は、安定なアントシアニン組成物、当該組成物を調製する方法、および多様な苦痛を治療するための当該組成物の使用方法を記載する。本発明は、アントシアニンおよび安定化化合物の独特の組成物であって、２つの成分の組み合わせが、アントシアニンが酸化、ｐＨ不安定性などの分解を容易に受けないことを提供する組成物を記載する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００８年３月１３日に出願された米国特許出願第１２／０４７，９９３号、２００７年３月１５日に出願された同第６０／８９５，０３４号、２００７年７月２６日に出願された同第６０／９５２，１１３号、および２００７年１１月５日に出願された同第６０／９８５，６０３号の利益を主張する。米国特許出願第１２／０４７，９９３号、同第６０／８９５，０３４号、同第６０／９５２，１１３号、および同第６０／９８５，６０３号のそれぞれの内容は、その全てが、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、アントシアニンおよびアントシアニジンを安定化するのに有用な方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
アントシアニンは、多くの花、果実および葉の魅力的な色に関与する水溶性色素である。一般に、それらは、酸性化アルコール性溶媒により植物から抽出され得、多くのものは食物着色料として市販で入手可能である。それらは、しばしば、飲料またはシリアルなどの他の食物に配合するのに適切な濃度の希釈液としてマルトデキストリンと共に供給される。
【０００４】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式Ｉに示す基本構造を有する。
【０００５】
【化１】
代表的な例は、シアニジン（３、５、７、３’、４’位でヒドロキシル化されている）、デルフィニジン（３、５、７、４’、５’位でヒドロキシル化されている）およびペラルゴニジン（３、５、７、３’位でヒドロキシル化されている）である。ヒドロキシル基は、通常、グリコシル化（例えば、アントシアニン）および／またはメトキシル化されている（例えば、マルビジンは、３’および５’ヒドロキシル基で置換され、ペオニジンおよびペツニジンは、３’ヒドロキシル基で置換される）。
【０００６】
アントシアニンは、２−フェニルベンゾピリウムまたはフラビリウム塩のポリヒドロキシルおよびポリメトキシル誘導体の水溶性グリコシドである。個々のアントシアニンは、分子中に存在するヒドロキシル基の数、これらのヒドロキシル基のメチル化の程度、分子に結合した糖の性質、数および位置、ならびに分子中の糖に結合した脂肪族または芳香族酸の数および性質が異なる。数百のアントシアニンが単離され、かつ分光測定手段により化学的に特徴づけられてきた。シアニジンおよびそれらの誘導体は、野菜、果実および花中に存在する最も一般的なアントシアニンである。
【０００７】
アントシアニンは、上記したように水素、水酸基またはメトキシル基が６つの異なる位置に見出され得る基本炭素骨格を共有する。果実および野菜では、炭素環に存在するヒドロキシル基の数およびこれらのヒドロキシル基のメチル化度の両方が異なる６つの基本的なアントシアニン化合物が主流である。炭素骨格に結合した糖の同一性、数および位置もまた可変性であり、炭素−３、炭素−５および時々炭素−７に結合し得る最も一般的な糖は、グルコース、アラビノース、ラムノースまたはガラクトースである。この基本に基づき、モノシド、ビオシドおよびトリオシドを区別することが可能である。
【０００８】
アントシアニンの化学構造に寄与する別の重要な可変物は、糖鎖上に存在し得るアシル化酸である。最も頻繁に用いられるアシル化剤は、カフェイン酸、フェルラ酸、シナピン酸およびｐ−クマル酸であるが、酢酸、リンゴ酸、マロン酸、シュウ酸およびコハク酸などの脂肪酸もまた存在し得る。３つまでのアシル化酸が同時に存在し得る。
【０００９】
それらの特定の化学構造のために、アントシアニンおよびアントシアニジンは、電子欠乏により特徴づけられ、このことにより、それらはフリーラジカルとしても知られる活性酸素種（ＲＯＳ）に対して非常に反応性になり、その結果、それらは強力な天然の抗酸化剤であると考えられる。
【００１０】
アントシアニンは、それらの化学構造の性質に部分的に起因して、不安定でありかつ分解しやすい傾向を有する。さらに、アントシアニンの安定性は、ｐＨ、数ヶ月の期間にわたる貯蔵、貯蔵温度、酵素の存在、光、酸素、ならびにタンパク質、フラボノイドおよび無機質の存在により影響を受ける。
【００１１】
より詳細には、アントシアニンの生物学的利用能は、ｐＨの変化に対するそれらの感受性に起因して低い。アントシアニンは、一般に、３．５以下のｐＨ値で安定であるので、胃条件下で安定である。しかしながら、それらは、より高いｐＨ値、より詳細には腸管などにより代表的なｐＨ値（ｐＨ７）で分解するので、有利な吸収および栄養価が非常に減少する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、安定化されたアントシアニンを提供する組成物および／または方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、驚くべきことに、安定なアントシアニン組成物、当該組成物を調製する方法および多様な苦痛を治療するための当該組成物の使用方法を提供する。本発明は、アントシアニンおよび安定化化合物の独特の組成物であって、２つの成分の組み合わせが、アントシアニンが分解を容易に受けないことを提供する組成物を記載する。本発明時まで、アントシアニンは、空気、光、タンパク質または酵素などの環境ストレスへの曝露により分解するであろうことが知られていた。より厄介なのは、中性または塩基性のｐＨを有する溶液中でのアントシアニンの不安定性であった。
【００１４】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンまたはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンを必要とする対象への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に対して、少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、４時間後のアントシアニンがシステインの存在下で送達される場合のアントシアニンの血漿濃度が、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量であることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンおよびシステインを投与することにより、対象において生物が利用可能なアントシアニンの量を増加させる方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達が一般に好ましい。１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１０〜約１である。
【００１５】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。安定化化合物の例には、（還元）グルタチオン、ジヒドロリポ酸、システイン、酵母抽出物およびそれらの混合物が挙げられる。
【００１６】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含まれると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００１７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対する比は、約０．１〜約１０、より詳細には約０．５〜約５、およびより詳細には約１〜約１である。
【００１８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２以上のｐＨ、例えば、約３のｐＨ、約４のｐＨ、約５のｐＨ、約６のｐＨ、約７のｐＨ、約８のｐＨ、約９のｐＨ、約１０のｐＨ、または約１１のｐＨ、約１２もしくはそれ以上の、例えば１４のｐＨを有する水性環境に曝露したときに、分解に対して安定である。
【００１９】
別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドである。
【００２０】
別のなおさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジンである。
【００２１】
本発明の別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン（ｐｅｒｌａｒｇｉｎｉｄｉｎ）、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンのグリコシド（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のアントシアノシドが挙げられる。
【００２２】
本発明はまた、本明細書に記載された安定化されたアントシアニン組成物を調製する方法に関する。
【００２３】
本発明はさらに、治療上の有効量の本明細書に記載された安定化されたアントシアニン組成物を投与することにより、多様な病気を治療する方法に関する。
【００２４】
従って、本発明はさらに、生物が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供する。
【００２５】
複数の実施態様が開示されているが、本発明のさらに他の実施態様は、以下の詳細な説明から、当業者に明らかになるであろう。明らかに、本発明は、全てが本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の明らかの局面において改変することが可能である。従って、詳細な説明は、事実上例示であり、限定するものではないと考えるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての深色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図２】図２は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての濃色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図３】図３は、ビルベリー抽出物（未保護）の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図４】図４は、図３に見られる無保護に対するＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図５】図５は、図３に見られる無保護に対するＧＳＨ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図６−１】図６Ａは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｂは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図６−２】図６Ｃは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｄは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図７】図７は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図８】図８は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたペツニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図９】図９は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図１０】図１０は、グルタチオンで保護されたまたは未保護のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの２つのｐＨ値における比較分解動態学を提供する。
【図１１】図１１は、ＤＨＬＡ保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較分解を提供する。
【図１２】図１２は、グルタチオン（ＧＳＨ）保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較の分解を提供する。
【図１３】図１３は、グルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて緩衝溶液中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１４】図１４は、ＣａＣｏ−２細胞を有するグルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて、インキュベーション培地中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１５】図１５は、リードアントシアノシドのＣａＣｏ−２細胞への細胞取り込みを実証する。
【図１６】図１６は、グルタチオンの有無でのビルベリーアントシアノシドの分解（３７℃、ｐＨ＝７．０で１時間）を提供する。
【図１７】図１７は、グルタチオンの有無でのＣａＣｏ−２細胞へのビルベリーアントシアノシドの細胞取り込みを実証する。
【図１８】図１８は、ＣａＣｏ−２実験のＨＰＬＣ解析についての勾配特性を提供する。
【図１９】図１９は、ＧＳＨで処理したビルベリー抽出物の安定性について、ｐＨ範囲３〜１１にわたって残留率およびｐＨ値を、および（同じｐＨ値における）ＧＳＨで処理しなかったビルベリー抽出の不安定性を、図で表現したものである。
【図２０】図２０は、特定のｐＨ範囲にわたるＧＳＨの保護効果を図で表現したものである。
【図２１】図２１は、０時間における２００７０６０１の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２２】図２２は、４時間後、３７℃での２００７０６０１のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２３】図２３は、０時間における２００７０６０２の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２４】図２４は、４時間後、３７℃での２００７０６０２のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２５】図２５は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０１のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２６】図２６は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０２のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２７】図２７は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察されたアントシアニジンの比較を提供する。
【図２８】図２８ａは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）のそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。図２８ｂは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全デルフィニジンのそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図２９】図２９は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペツニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３０】図３０は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペオニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３１】図３１は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全マルビジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３２】図３２は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３３】図３３は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３４】図３４は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３５】図３５は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３６】図３６Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。図３６Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。
【図３７】図３７Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。図３７Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。
【図３８】図３８Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。図３８Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。
【図３９】図３９Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。図３９Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。
【図４０】図４０Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。図４０Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび１つまたはそれ以上の安定化化合物を含む組成物に関する。従って、組成物は、アントシアニンが所定の期間にわたって容易に分解しないという点で「安定」である。
【００２８】
明細書および特許請求の範囲において、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープン・エンドな用語であり、「含むが、・・・に限定されない」ことを意味するものと解釈すべきである。これらの用語は、より限定的な用語「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」を包含する。
【００２９】
本明細書中で、および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに異なるように述べていない限り、複数の参照も含むことに留意すべきである。同様に、用語「１つの（ａ）」（または１つの（ａｎ））、「１つまたはそれ以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書中で互換可能に用いられ得る。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「により特徴付けられる」および「有する」が互換可能に用いられ得ることにも留意すべきである。
【００３０】
他に定義しない限り、本明細書中で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同様の意味を有する。本明細書中で特に言及される刊行物および特許は、本発明と関連付けて用いられ得たであろう刊行物に報告された化学物質、装置、統計学的解析および方法論を記載および開示することを含む全ての目的のために、それらの全体が参照として援用される。本明細書中で引用された全ての参考文献は、当業者の水準を示すものである。本明細書中のいかなるものも、先行発明のために本発明がそのような開示に先行する権利を与えられないことを自認するものと解釈されるべきではない。
【００３１】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン組成物を提供する。
【００３２】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、グリコシル化アントシアニン（アントシアノシド）およびアントシアノシドのアグリコン（アントシアニジン）の両方を包含することが意図される。本明細書の全体にわたって、アグリコンアントシアニジンがしばしば参照されるが、他に断りのない限り、限定的であると解釈すべきではない。いずれの用語が用いられる場合でも、他に断りのない限り、用語は互換的に用いられ、かつ、グリコシル化物質およびアグリコン物質を含むことが意図される。
【００３３】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式ＩＩに示す基本構造を有する。
【００３４】
【化２】
【００３５】
【表１】
式中、Ｒ１〜Ｒ７は、アントシアニジンの代表的な例を提供する。
【００３６】
アントシアニンのグリコシル化型は、アントシアニジンよりも水可溶性でありかつ安定である。アントシアノシドは、それらが含むグリコシル単位の数により分類される。モノグリコシドは、アグリコンの３−ヒドロキシル基に主に結合した１つの糖部分を含む。ジグリコシドは、一般に、３および５ヒドロキシ位、ならびにたまに３および７水酸化位に、２つの単糖を含む。トリグリコシドは、一般に、３位およびＣ−５またはＣ−７位の１つに２つの単位が存在する場合、結合を有する。３’、４’および／または５’位での糖鎖付加もまた可能である。
【００３７】
アントシアニンの最も一般的な糖には、単糖であるグルコース、ラムノース、ガラクトース、アラビノースおよびキシロースが挙げられる。アントシアニン中で最も頻繁に見出される二糖および三糖は、ルチノース、ソホロース、サンブビオースおよびグルコルチノースである。
【００３８】
アントシアニンは、カルボン酸での１つまたはそれ以上の水酸基によりアシル化され得る。酸は、最も一般的には、単糖の６位に連結するが、単糖の２、３および４位もまた可能である。一般的な脂肪酸には、マロン酸、酢酸、リンゴ酸、コハク酸およびシュウ酸が挙げられる。一般的な芳香族フェノール酸および脂肪族ジカルボン酸には、クマリン酸、カフェイン酸（ａｃｆｆｅｉｃ）、シナピン酸、フェルラ酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸および没食子酸が挙げられる。
【００３９】
用語「抽出物」は、葉、小枝、樹皮、根、幹、種子、花、液果、果実などの植物源から、例えば、適切な上記植物源から常套的な単離方法により得られたアントシアニン物質を意味することを意図するが、本明細書中に記載したものに限定されない。当業者に公知の種々のアントシアニンの抽出方法が存在する。これらの方法のいくつかは、例えば、米国特許第５，８１７，３５４号、米国特許第５，２００，１８６号、米国特許第５，９１２，３６３号、米国特許第４，２１１，５７７号、米国特許第４，３０２，２００号（それぞれ、参照として本明細書中で援用される）に記載されている。
【００４０】
適切なアントシアニン含有植物の例には、以下からなる群から選択される果実、野菜、花および他の植物が挙げられるが、これらに限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、アセロラ、セイヨウジュウニヒトエ（Ａｊｕｇａ ｒｅｐｔａｎｓ）、リンゴ、アンズ、チシマイチゴ、アボカド、バナナ、メギ、オオムギ、Ｂｅｇｏｎｉａ ｓｅｍｐｅｒｆｒｏｒｅｎｓ、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、シラン（Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｓｔｒｉａｔａ）、ビルベリー、クロマメ、クロダイズ、ブラックポテト、ブルーポテトおよびパープルポテト、ブラックベリー、ブルーベリー、クロマメノキ、ボイセンベリー、ソバ、カカオ、チャノキ、カナリーグラス、Ｃａｕｃａｓｉａｎ ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ、ロウバイ（Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｐｒａｅｃｏｘ）、セロリ、セイヨウミザクラ（Ｃｅｒａｓｕｓ ａｖｉｕｍ）、サクラ、セイヨウバクチノキ、チコリー、チャイブ、チョコベリー、セイヨウサンシュユ、コーンフラワー、コトネアスター、カウベリー、クランベリー、ガンコウラン、キク、サヨウオシャクジタケ（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ）、Ｄａｈｌｉａ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、セイヨウニワトコ、アメリカスノキ、デンドロビューム、ゴゼンタチバナ、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ｐｕｒｐｅａ、ナス、エルダーベリー、ソラマメ、ヤツデ、フェイジョア、イチジク、ニンニク、ガーベラ、オタネニンジン、アーティーチョーク、スグリ、ブドウ、グアバ、サンザシ、ハイビスカスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ Ｓａｂｄａｉｆｆａ、ハイブッシュブルーベリー、タチアオイ、スイカズラ、マルバアサガオ（Ｉｐｏｍｏｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ、ジャンボラン、キクイモ、インドマンゴスチン、レリオカトレア、レンズマメ、ローガンベリー、ルーピン、ライチ、トウモロコシ、マンゴー、マンゴスチン、マクイ、アラセイトウ（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ ｉｎｃａｎａ）、メコノプシス、Ｍｅｔｒｏｓｉｄｅｒｏｓ ｅｘｃｅｌｓａ、アワ、ナナカマドベリー、マルベリー、マートルベリー、オリーブ、タマネギ、オレンジ、ソメイヨシノ、パッションフルーツ、エンドウマメ、モモ、ピーナッツ、ナシ、エゴマ、ペチュニア、コチョウラン、ウオトリギ、アサガオ、パイナップル、ピスタチオ、セイヨウスモモ、ザクロ、Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ、パープルキャロット、マルメロ、ラビットアイ・ブルーベリー、ダイコン、レッドカラントおよびブラックカラント、レッドラズベリーおよびブラックラズベリー、レッドキャベツ、コメ、ダイオウ、ローズヒップ、ライムギ、サフラン、サラセニア、シープベリー、Ｓｏｐｈｏｒｏｎｉｔｉｓ ｃｏｃｃｉｎｅａ、ソルガム、スパークルベリー、イチゴ、Ｆｒａｇａｄａ Ｖｅｓｃａ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートチェリー、サツマイモ、タマリロ、タマリンド、タロイモ、タルトチェリー、Ｔｕｌｉｐ ｇｒｅｉｇｉｉ、カブ、スイレン、タニウツギ、コムギ、ワイルドライス、Ｖｅｒｂｅｎａ ｈｙｂｒｉｄａ、ヤムイモおよびそれらの混合物。
【００４１】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含まれると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００４２】
代表的には、抽出物は種々の方法で濃縮されて、アントシアニンが濃縮された溶液を提供する。例えば、限外濾過を用いて、分子量カットオフによる所望されない成分を除去することができる。濾過からの残留物は、液体として貯蔵され得るか、または例えば噴霧乾燥、凍結乾燥、フラッシュ乾燥、流動床乾燥、リング乾燥、トレー乾燥、真空乾燥、高周波乾燥またはマイクロ波乾燥によりさらに濃縮して粉末にすることができる。最終的に、抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。市販のアントシアニンは、Ａｒｔｅｍｉｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｆｏｒｔ Ｗａｙｎｅ，Ｉｎｄｉａｎａなどの供給源から得られ得る。市販のアントシアニン抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。従って、抽出物は、アントシアニン、および他のフラビノイド、糖などの他の植物性物質を含む。
【００４３】
アントシアニン抽出物は、さらに、クロマトグラフィ、ゲルクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ、結晶化、アフィニティクロマトグラフィ、分配クロマトグラフィなどの当該分野で公知の１つまたはそれ以上の方法で精製され得る。特定のアントシアニンの同定には、当業者に公知の方法で達成され得る１Ｈ ＮＭＲ、化学分解、クロマトグラフィおよび分光法、特に、単離されたアントシアニン化合物の特徴づけのためのホモ−およびヘテロ核の二次元ＮＭＲ技術などが挙げられる。
【００４４】
用語「精製された」および「単離された」は、上記アントシアニン抽出物からの１つまたはそれ以上のアントシアニンの精製および／または単離を参照するために用いられる。ここでも当該分野で公知の定法を用いて、アントシアニン抽出物の多様な成分を分離して精製物質とし得る。本発明の１つの局面では、抽出物のアントシアニンは、当該分野で公知の技術により実質的に精製および単離される。精製された化合物の純度は、通常、少なくとも約９０％、好ましくは少なくとも約９５％、ならびに最も好ましくは少なくとも約９９％、およびさらにより好ましくは少なくとも約９９．９重量％（例えば、約１００％）である。
【００４５】
本発明に従って、アントシアニン抽出物は、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニジン、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｌｄｉｎ）、ペツニジン、マルビジン、アピゲニニジン（ａｐｉｇｅｎｉｎｄｉｎ）、アウラチニジン（ａｕｒａｔｉｎｉｄｉｎ）、カペンシニジン、ユーロピニジン、ヒルスチジン、６−ヒドロキシシアニジン、ルテオリニジン、５−メチルシアニジン、プルチェリジン（ｐｕｌｃｈｅｌｌｉｄｉｎ）、ロシニジン、トリセトニジン（ｔｒｉｃｅｔｎｉｄｉｎ）、それらの誘導体および混合物からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび／またはアントシアニジンを含む。１つの実施態様では、アントシアニンおよびアントシアニジンは、シアニジン、ペオニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジン、それらのグリコシド誘導体およびそれらの混合物からなる群から選択される。さらに別の実施態様では、抽出物は、少なくとも１つのシアニジン塩基のアントシアニンを含む。
【００４６】
本明細書に記載される本発明において有用であり得るアントシアニンには、シアニジン−３−グルコシド；シアニジン ３−グルコシルルチノシド；シアニジン−３−ゲンチビオシド；シアニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−サンブニグリン、シアニジン−３−サンブ−５−グルコシド、シアニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン−３−ルチノシド、ペオニジン−３−グルコシド、ペオニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン、シアニジン、シアニジン−３ソフォロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、デルフィニジン−３−グルコシド、デルフィニジン−３−ガラクトシド、ペツニジン、ペツニジン−３−グルコシド、ペツニジン−３−ガラクトシド、マルビジン、マルビジン−３−アラビノシド、マルビジン−３−グルコシド、マルビジン−３−ガラクトシド、ケンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリンなどが挙げられるが、これらに限定されない：。
【００４７】
種々の植物由来のアントシアニンの適切な例には、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｉｕｍ）、シアニジン誘導体、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、シアニジン ３−（２”，３”−ジガロイル−β−グルコピラノース（３％）、シアニジン ３−（２”−ガロイル−β−グルコピラノース（３７％）、シアニジン ３−β−グルコピラノシド（６０％）、アセロラ、Ｍａｌｐｉｇｈｉａ ｍａｒｇｉｎａｔａ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、セイヨウジュウニヒトエ、シアニジン ３−（ジ−ｐ−クマロイル）ソフォロシド−５−グルコシド、リンゴ、Ｍａｌｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３アラビノシド、シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３グルコシド、シアニジン ３−キシロシド、アンズ、Ｐｒｕｎｕｓ ａｒｍｅｎｉａｃａ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３グルコシド、チシマイチゴ、Ｒｅｂｕｓ ｓｐｐ、アボカド、Ｐｅｒｓｅａ ｓｐｐ、アシル化シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、バナナ、Ｍｕｓａ ａｃｕｍｉｎａｔａ、Ｍ．ｂａｌｂｉｓｉａｎａ、イチジク、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｓｐｐ．、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、オオムギ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、シアニジンおよびシアン化物グリコシド、マメ、インゲンマメ（Ｐｈｅｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）（いくつかの栽培品種）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、Ｂｅｇｏｎｉａ ｓｅｍｐｅｒｆｌｏｒｅｎｓ ｃｖｓ、シアニジン誘導体、ベニバナチャ、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ ガラクトシド、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシド、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、３ シアニジン ３−誘導体、Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｓｔｒｉａｔａ、アシル化シアニジン ３，７，３’−トリグルコシド誘導体、ビルベリー、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｉｓ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ；Ｉｎｄｅｎａ、シアニジン−３−ガラクトシド（２２％）；シアニジン−３−ガラクトシド、シアニジン−３−グルコシド（９％）、シアニジン−３グルコシド、クロマメ、インゲンマメ、シアニジン−３−グルコシド（９６％）、シアニジン−３グルコシド、ブラックベリー（ヨーロッパ産およびアメリカ産）、Ｍｏｒｉｆｅｒｉ ｖｅｒｉ、Ｒｕｂｕｓ ｃａｅｓｉｕｓ、Ｒ．Ａｌｌｅｇｈｎｉｅｎｓｉｓ、Ｒ．ａｒｇｕｆｕｓ、Ｒ．ｃｕｎｅｉｆｏｌｉｕｓ、Ｒ．ｓｅｔｏｓｕｓ、Ｒ．ｔｒｉｖｉａｌｓ、シアニジン−グルコシド（７０−１００％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド、ブラックグレープ、多種多様、ブラックポテト、Ｓｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ、シアニジン−グリコシド、ブラックラズベリー、Ｒｕｂｕｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、シアニジン−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）（２０％）；シアニジン−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン−キシロシルルチノシド（４０％）；シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、（１７％）、シアニジン−ルチノシド（２３％）、クロダイズ、ダイズ、シアニジン−３−グルコシド（９６％）、シアニジン−３−グルコシド、ブルーベリー（５つの共通のＶａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｐｐ）、シアニジン−グルコシド（３％）；シアニジン−グルコシド、シアニジン−ガラクトシド（３％）、シアニジンガラクトシド、シアニジン−アラビノシド（３％）、シアニジン−３−アラビノシド、クロマメノキ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ、シアニジン−３−グルコシド（１４％）、シアニジン ３ グルコシド（１４％）、シアニジン＃アラビノシド（１０％）、シアニジン−３−アラビノシド（１０％）、シアニジン ３−ガラクトシド（６．５％）、シアニジン−３−ガラクトシド（６．５％）、ボイセンベリー（ニュージーランド）、シアニジン−３−ソフォロシド（４４．５％）、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド（２６．４％）、シアニジン−３ グリコシルルチノシド（２５．８％）、シアニジン−ルチノシド（３．３％）、ソバ、Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｓｐｐ．、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン−３−ガラクトシド、カカオ、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ、シアニジン ３−グルコシド（疑い）、シアニジン−３−グルコシド（疑い）、セロリ、Ａｐｉｕｍ ｓｐｐ．、セイヨウバクチノキ、Ｐｒｕｎｕｓ ｌａｕｒｏｃｅｒａｓｕｓ、シアニジン−３−アラビノシド、シアニジン−３−アラビノシド、チコリー、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、チャイブ、Ａｌｌｉｕｍ ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−アセチルグルコシド、シアニジン ３−（６マロニルグルコシド）、シアニジン ３−（３，６ジマロニルグルコシド）、チョークベリー、Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／ｌｐｒｏｎａ、シアニジン−３−ガラクトシド（６４．５％）、シアニジン−３−ガラクトシド、シアニジン−３−アラビノシド（２８．９％）、シアニジン−３ アラビノシド、シアニジン−３−グルコシド（２．４％）、シアニジン−３ グルコシド、シアニジン−３−キシロシド（４．２％）、シアニジン−３−キシロシド、コーヒー、Ｃｏｆｆｅａ Ａｒａｂｉｃａ ｃｖ．Ｂｏｕｒｂｏｎ Ｖｅｒｍｅｌｈｏ、シアナジン−３−グリコシド、シアナジン ３，５−ｄｉｇｌｙｅｏｓｉｄｅ、シアナジン ３−グリコシド、コトネアスター、Ｃｏｔｏｎｅａｓｔｅｒ Ｍｅｄｉｃ．Ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３ ガラクトシド、カウベリーまたはリンゴンベリー、Ｖ．ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ、シアニジン ３−ガラクトシド シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３ アラビノシド、シアニジン ３ グルコシド、Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｐｒａｅｃｏｘ、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−グルコシド、アシル化シアニジン ３−０−グルコシド、シアニジングリコシド、クランベリー（アメリカ産およびヨーロッパ産）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃｏｒｐｏｎ、Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ、シアニジン−ガラクトシド（１６〜２４％）、シアニジン−ガラクトシド、Ｖ．ｏｘｙｃｏｃｃｕｓ、シアニジン−アラビノシド（１３〜２５％）、シアニジンアラビノシド、クロウベリー（ＣｒＯｗｂｅｒｒｙ）、Ｅｍｐｅｔｒｕｍ ｎｉｇｒｕｍ、シアニジン ３−グルコシド シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ソフォロシド、キク、Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａ Ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ、シアニジン ３−オルト（６’−Ｏ−マロニル−β−グルコピラノシド、カラント（レッドおよびブラック）、Ｒｉｂｅｓ ｒｕｂｒｕｍ、Ｒ．ｎｉｇｒｕｍ、シアニジン−グルコシド（２〜１０％）、シアニジン−グルコシド、シアニジンサンブビオシド、シアニジン−ルチノシド（８〜１７％）、シアニジン−サンブビオシド（９−３１％）、シアニジン−ソフォロシド（４〜９％）、シアニジンキシロシルルチノシド（２８−７３％）、シアニジングルコシルルチノシド（１４〜２８％）、Ｃｙｎｅｉｎｏｎｕｒｎ ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、シアナジン ３−オルト（６−Ｏ ラムノシルグルコシド（８％）、セイヨウニワトコ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｅｂｕｌｕｓ、シアニジン ３−キシロシルグルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド、シアニジン ３サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド−５−グルコシド、シアニジン ３，５ ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノグルコシド、デンドロビューム、Ｐｈａｌａｅｎａｐｓｉｓ ｓｐｐ．、シアニジン誘導体、ゴゼンタチバナ、Ｃｏｍｕｓ ｓｕｅｃｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド（４％）、シアニジン ３−グルコシド（４％）、シアニジン ３−ガラクトシド（１６％）、２シアニジン誘導体（８０％）、エキネシア、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ｓｐｐ．、エルデンベリー（Ｅｌｄｅｎｂｅｒｒｙ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ、シアニジン−３−グルコシド（４２％）、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−サンブビオシド（４３％） シアニジン−３，５−ジグルコシド（２％）、シアニジン−３ サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）−５グルコシド（９％）、Ｇｅｎｔｉａｎｓ ｓｐｐ．、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドおよび３つの他の誘導体、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、Ｆａｔｓｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ、シアニジン ３−ラチロシド、フェイジョア、Ｆｅｉｊｏａ ｓｅｌｌｏｗｉａｎａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、イチジク、Ｆｉｃｕｓ ｃａｒｉｃａ ｓｐｐ、シアニジン ３−ラムノグルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ Ｘ、ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ｃｖ、Ｓｐｒｉｎｇ Ｇｌｏｒｙ、シアニジン誘導体、ニンニク、Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド（モノアシル化）、シアニジン ３−グルコシド（トリアシル化）、オタネニンジン、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラニル−（１ ２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、アーティチョーク、Ｃｙｎａｒａ ｓｃｏｌｙｍｕｓ、シアニジン ３−カフェイルグルコシド、シアニジン ３−カフェイルソフォロシド、シアニジン ３−ジカフェイルソフォロシド、スグリ、Ｒｉｂｅｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、ブドウ、Ｖｉｎｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ、シアニジン ３−モノグルコシド、シアニジン ３−モノグルコシド、シアニジン ３−モノグルコシド酢酸塩、シアニジン ３−モノグルコシド−ｐ−クマラート、グアバ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、サンザシ、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３ グルコシド、ハイビスカスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ、シアニジン−サンブビオシド（３０％）、タチアオイ、Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、他のシアニジングルコシド、スイカズラ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｎｉｔｉｄａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、ハナショウブ、Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ、シアニジン ３ＲＧ、シアニジン ３ＲＧ５Ｇ、シアニジン ３Ｒｇａｃ５Ｇ、アサガオ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ、６つのアシル化シアニジン ３−ソフォロシド−５ グルコシド、ジャンボラン、Ｍｙｔｃｉａｎａ ｊａｂｏｔｉｃａｂａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジ
ン ３−グルコシド、キクイモ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ、インドマンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎｉａ ｉｎｄｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド、シアニジン ３−サンブビオシド、レリオカトレア、アシル化シアン化物誘導体、レンズマメ、シアニジン ３−オルト（６”−マロニルグルコシド）、ローガンベリー、Ｒｕｂｕｓ ｌｏｇａｎｂａｃｃｕｓ、シアニジン−ソフォロシド（４８．１ ％）、シアニジングルコシド、シアニジン−グルコシド（２１．６％）、シアニジン−ルチノシド（６．２％）、ルーピン、Ｌｕｐｉｎｕｓ ｓｐｐ、シアニジングリコシド（存在を確認した）、ライチ、Ｌｉｔｃｈｉ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３ ガラクトシド、トウモロコシ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−（６”−マロニルグルコシド） シアニジン ３（３”，６”ジマロニル−グルコシド）マンゴー、Ｍａｎｇｉｆｅｒａ ｉｎｄｉｃａ（シアニジングリコシド、マンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ、シアニジン ３−ソフォロシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、マクイ、Ａｒｉｓｔｏｔｅｌｌａ ｃｈｉｌｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−，５−ジグルコシド、アラセイトウ、４つのアシル化シアニジン ３−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）−５ グルコシド、アワ、Ｐｅｒｎｎｉｓｅｔｕｍ ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、ナナカマドベリー、Ｓｏｒｂｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド シアニジン ３−β−Ｄグルコピラノシド、マルベリ、Ｍｏｒｕｓ ｎｉｇｒａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ソフォロシド、マートルベリー、Ｍｙｒｔｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド、オリーブ、Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン誘導体、タマネギ、Ａｌｌｉｕｍ ｓｅｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド、シアニジン ３−ラミナリオシド（ｌａｍｉｎａｒｉｏｓｉｄｅ）、オレンジ、Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−グルコシド（９５％）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、パッションフルーツ、Ｐａｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、エンドウマメ、Ｐｏｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｒｎ、シアニジン ３−ソフォロシド グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド−５−グルコシド、モモ、Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン誘導体、ピーナッツ、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ、シアニジングルコシド、ナシ、Ｐｙｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−アラビノシド、エゴマ、Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３，５−誘導体、Ｐｅｔｕｎｉａ ｓｐｐ．、シアニジン ３−ルチノシド、ウオトリギ、Ｇｒｅｗｉａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、パイナップル、Ａｎａｎｓ ｃｏｍｏｓｕｓ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、ピスタチオ、Ｐｉｓｔａｃｉａ ｖｅｒａ、Ｐｒａｇｍｉｔｅｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ、シアニジン−３誘導体、セイヨウスモモ、２０００品種、１５種、シアニジン−グルコシド（３７％）、シアニジングルコシド、シアニジン−ルチノシド（４５％）、ザクロ、Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔａｍ、シアニジン−グルコシド（３０％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ジグルコシド（１７％）、パープルキャロット、Ｄａｕｃｕｓ ｃａｒｏｔａ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシルガラクトシド、シアニジン−ガラクトシド、シアニジン−ジガラクトシド、シアニジン−ガラクトシド、マルメロ、Ｃｙｄｏｎｉａ ｏｂｌｏｎｇａ、シアニジン−３ グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン誘導体、ダイコン、Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ、アシル化シアニジン ３−ソフォロシド−５−グルコシド、アシル化シアニジン ３ ジグルコシド−５−グルコシド、レッドキャベツ、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ ｃａｐｉｔａｔａ、シアニジングリコシド、ヨシ、Ｐｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−（６’’−，マロニルグルコシド）、シアニジン ３（３’’，６’’ジマロニル−グルコシド）、レッドオニオン、Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジン ３−グルコシド誘導体、レッドペチュニア、Ｐｅｔｕｎｉａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ソフォロシド、レッドラズベリー、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ、シアニジングルコシド（１７％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド（７％）、シアニジン−ソフォロシド（５０％）、シアニジングリコシルルチノシド（２６％）、シアニジン−ジグルコシド、ダイオウ、Ｒｎｅｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、コメ、Ｏｒｙｚａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、ローズヒップ、Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、ライムギ、Ｓｅｃａｒｅ ｃｅｒｅａｌｅ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノシルグルコシド、シアニジン ３−ラムノシルジグルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ルチノシド誘導体、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、シープベリー、Ｖｉｂｕｍｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノシルサンブビオシド、モロコシ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、シアニジン、シアニジングリコシド、スパークルベリー、Ｖ ａｒｂｏｒｅｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−ガラクトシド、イチゴ、Ｆｒａｇａｃｉａ ａｎａｎａｓｓａ、シアニジン−グルコシド（微量）、シアニジン−グルコシド、ヒマワリ、Ｈｅｌｌａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３−キシロシド、アシル化シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３−バニリル サンブビオシド、スイートチェリー、Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｎｔｎ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド；シアニジン ３−スホロシド、サツマイモ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ ｂａｔａｔａｓ Ｓｏｐｈｒｏｎｉｔｉｓ ｃｏｃｃｉｎｅａ、シアニジン誘導体、５つのアシル化シアニジン ３，３’，７−トリグルコシド、タマリロまたはツリートマト、Ｃｙｐｈｏｍａｎｄｒｅａ ｂｅｔａｃｅａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、タマリンド、Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、タロイモ、Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｕｃｕｌｅｎｔａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、タルトチェリー（ｂａｌａｔｏｎ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ ｃｖ．、Ｂａｌａｔｏｎ，Ｎｕｔｒｉｌｉｔｅ、シアニジン−３−ルチノシド−ヘキソース（７５％）、シアニジン−３−ルチノシド−ペントース（３％）、シアニジン−３−ルチノシド（１８％）、タルトチェリー（ｍｏｎｔｍｏｒｅｎｃｙ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ ｃｖ．（Ｍｏｎｔｍｏｒｅｎｃｙ，Ｎｕｔｒｉｌｉｔｅ）、シアニジン−３−ソフォロシド（８０％）、シアニジン−３−グルコシド（２０％）、シアニジン−３−グルコシド（２０％）、チューリップ、Ｔｕｌｉｐａ ｓｐｐ、シアニジン ３−Ｏ−（６”−ラムノシルグルコシド）、シアニジン ３−Ｏ−誘導体、カブ、ｂｒｉｓｓｉｃａ ｒａｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド−５−グルコシド、スイレン、Ｎｙｍｐｈａｓａ ａｌｂａ、シアニジン ３−０−（６’’アセチル−β−ガラクトピロシナーゼ（２３％）、シアニジン ３−０−ガラクトシド（２％）、シアニジン ３−Ｏ−ガラクトシド（２％）、Ｗｅｉｇｅｌａ ｓｐｐ．、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン ３−Ｏ−グルコシドキシロース、コムギ、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジングルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、アシル化シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、ワイルドライス、Ｚｉｚａｎｉａ ａｑｕａｔｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノグルコシド、およびヤムイモ、Ｄｉｏｓｃｏｒａｃｅａ ｓｐｐ、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノグルコシド、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、アシル化シアニジングルコシド。
【００４８】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、単量体のアントシアニンだけでなく、二量体および重合体（すなわち、３〜２０個のアントシアニジン単量体残基を含む）型のアントシアニンおよびロイコアントシアニジン（フラバン−３，４−ジオールとしても知られる）もまた意味することを意図する。アントシアニンは、置換（例えば、アルキル基、アルコキシ基など）を含み、特に上記のようにＯ−グリコシル化され得る。
【００４９】
組成物中のアントシアニンは、単独のアントシアニンであり得るか、またはアントシアニンの混合物を含み得る。特に、アントシアニンは、マルビジン、シアニジン、デルフィニジン、ペオニジン、ペラルゴニジンおよびペツニジン、ならびにそれらのグリコシドからなる群から選択される。代表的な例は、精製された形態で市販されている塩化マルビン（マルビジンジグルコシド）である。あるいは、アントシアニンは、上記のブドウ、ブラックキャロット、レッドキャベツ、ブラックベリー、ブラックカラント、クランベリーなどのアントシアニン含有植物を抽出することにより得られ得る。
【００５０】
本明細書中で用いられる句「安定化されたアントシアニン組成物」は、グリコシド（アントシアノシド）としてまたはアグリコン（アントシアニジン）としてのアントシアニンが、例えば、約３７℃、ｐＨ＝約７．０で、少なくとも約３．５時間にわたって、アントシアニンの最初の割合から少なくとも約５０％が未分解であることを意味する。同様に、この句は、同様の安定性を有する約４、約５、約６および約８のｐＨ値を含む。
【００５１】
本明細書中で用いられる用語「安定化化合物」は、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を包含することを意図する。理論によって限定されるべきではないが、チオール基とアントシアニンとの間で相互作用が起こり、その結果、チオール含有基が（しばしば、ジスルフィド−Ｓ−Ｓ−に）酸化され、かつ、アントシアニンが、後に遊離する水素原子を受け取ると考えられる。
【００５２】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物（例えば、ビール酵母）、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）およびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００５３】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニンに対するモル比は、約０．１〜約１０であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１である。
【００５４】
理論により限定されるべきではないが、以下は、本発明に関する驚くべき独特の知見の説明である。アントシアノシドは、無色の誘導体を形成することにより、ｐＨ移動を受けやすい。フラビリウムカチオンおよびキノノイダル塩基は着色され、平衡は、ｐＨ依存性［ｐＨ値＜２］の両方の種の存在によって通常影響されない。（スキーム１参照）この平衡は、非常に急速に確立され、かつ、この反応は可逆的であると考えられる。適切な条件下での水の「攻撃」は、一連の無色の誘導体（カルビノール塩基、カルコン）を生じる。反応のこの部分は緩徐に進行し、通常は可逆的ではない。脱色プロセスは、約３．５を超えるｐＨ値で開始する。分子の保護による水の攻撃の予防により、本明細書を通して記載したアントシアノシドの安定化が提供される。
【００５５】
【化３】
理論に基づけば、共色素沈着の公知の現象（「共色素」の存在下でアントシアノシドの増加した安定性を記載する）により、深色（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフトする）効果および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果が得られる。従って、チオール化合物が共色素として作用し得たかどうかの解明を行った。
【００５６】
理論に基づけば、アントシアノシドは、自己会合により、それらの安定性を増加することができる。濃度がより高くなると、自己会合の影響の可能性が高い。自己会合は、約０．０００１モル溶液濃度を超える濃度で起こる。自己会合は、チオール化合物の保護効果を隠蔽することを助け得るので、保護効果は多様な濃度で試験した。
【００５７】
理論に基づけば、共色素沈着は、深色性（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフトする）および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果をもたらすはずである。
【００５８】
紫外分光法に基づく本調査により、図１および２に示すように、ＤＨＬＡ（ジヒドロリポ酸）またはＧＳＨ（グルタチオン）のいずれも、深色または濃色効果を生じなかった。従って、安定性の増加は、別のメカニズムに関連している可能性が最も高い。
【００５９】
異なるｐＨ値についての新たに溶解させたシアニジン−３−Ｏ−グルコシド（保護および無保護）のλｍａｘシフトの観点からのスペクトル特性は、図１および２に示すように、同一であった。
【００６０】
ビルベリー抽出物（種々の濃度、モル濃度をシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表す）の安定性を、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの存在／非存在下で、ｐＨ依存性のλｍａｘでの吸収を紫外分光光度法により測定することにより調べた。
【００６１】
図３、４および５に示すように、本調査は、アントシアノシドが、全ての試験された濃度において、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度）およびＤＨＬＡ（１．４４ｍｍｏｌ濃度）による分解に対して、特に５〜６を超えるｐＨ値で保護されていることを示した。種々のｐＨ試験におけるλｍａｘは、未保護のおよび保護された溶液の間で異ならなかった。シアニジン−グルコシドでは濃色効果が起こらないことが観察されたので、チオール含有保護剤の安定化された効果は、共色素沈着とは異なると考えられる。
【００６２】
０．０００１モル濃度（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと表す）でのビルベリー抽出物の安定性を、ＵＶ分光法により、異なるｐＨ値で、経時的に、ＤＨＬＡ（１．４４ｍｍｏｌ濃度溶液）の非存在／存在下で調べた。
【００６３】
図６Ａ〜６Ｄに示すこれらの実験は、ＤＨＬＡが、未保護のアントシアノシドが急速に分解するｐＨ値（ｐＨ＞５〜６）でアントシアノシドを保護することを実証する。最も興味深いことに、データを統計モデル（回帰分析）にフィッティングすると、未保護の分解動態学は、直線回帰にフィットするが、一方、ＤＨＬＡ保護の分解動態学は、指数関数的回帰分析にフィットする。このことは、経時的に構成される保護機構を示す。
【００６４】
ビルベリー抽出物から選択したアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解動態学を、ｐＨ＝７および２５℃で、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存在下でインキュベーションした後、ＨＰＬＣにより経時的に調べた。
【００６５】
選択した時点にて、デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（非常に分解しやすい）、ペツリジン−３−Ｏ−ガラクトシド（中程度の感受性）およびシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（やや安定）のピークエリアを、ＨＰＬＣによりチェックした（図７、８および９を参照）。安定化特性を、グルタチオンの存在下で観察し、これらもまた指数関数的回帰分析に良好にフィットした。従って、保護機構が共色素沈着とは異なり、保護効果が経時的に構成される機構を含むと結論づけることは合理的である。
【００６６】
シアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（０．００１モル濃度溶液）を、ｐＨ＝ ３．１またはｐＨ＝７．０で、それぞれ、ＤＨＬＡ（１．４４ミリモル濃度溶液）の存在／非存在下で溶解した。反復のインキュベーションを、２５℃にて３日間、ＨＰＬＣにより行った。
【００６７】
図１０に見られるように、ＤＨＬＡの効果は、驚くべきことに、長期持続性である。ｐＨ＝７．０にて２５℃で３日間後、約４７％のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドがＤＨＬＡの存在下で回収されたが、一方、未保護の試料は、ほぼ０％のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドを生じた。ｐＨ＝３．１についての比較値は、それぞれ９５％および６１％であった。
【００６８】
ビルベリー抽出物由来のアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解動態学を、保護ＤＨＬＡ（図１１）（１．４４ｍｍｏｌ濃度溶液）およびグルタチオン（０．６５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存在下で、ＨＰＬＣ（図１２）により調査した。
【００６９】
評価の焦点は、基本的なアントシアニジン骨格が、ある程度保護効果に関与しているのかどうかであった。得られた結果を見ると、チオール化合物の保護効果が、未保護の分解の受けやすさと逆に相関していたことは妥当であると思われた。アントシアニジン骨格が感受性であるほど、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの保護効果はより良好であった。ＧＳＨについてのやや良好な明白な効果が観察された。
【００７０】
ビルベリー抽出物中に存在するアントシアニジンの置換パターンを、以下の表に示す：
【００７１】
【表２】
上記表に示すように、（ａ）分解のおよび（ｂ）保護機構についての構造が関係する効果の証拠が存在する。第１に、アントシアニンに関する置換の数が特定の役割を担い、第２に、同じ数の置換の数の範囲内で、メトキシ基の存在が安定性に影響する。
【００７２】
最も感受性が高いアントシアニジンは、３個のヒドロキシル基をＢ−環に有するデルフィニジンである。最も安定なのはペオニジンであり、１個のヒドロキシル基および１個のメトキシ基（シアニジンにおけるような２個のヒドロキシル基よりも優れる）を有する。
【００７３】
提案された新しく発見された機構は、ｐＨ＝７．０においてフラビリウムカチオンの安定化に関係があると考えられている。試験された全ての化合物は、確かに、カルボン酸基およびフリーのチオール基を有する。
【００７４】
システインは、アントシアノシドとの２つの結合点を有する。第１に、チオール部分（おそらく、アントシアニジンと４位で、または糖部分とさえも強固に会合する）の強い相互作用が存在し、第２に、カルボン酸官能基が、陽イオン部分を保護する。
【００７５】
【化４】
同様の機構は、ＤＨＬＡについても提案されている。チオール基の存在は、ＤＨＬＡをアントシアニジンに結合させ、その結果、カルボン酸官能基が分子の保護を補助し得ると考えられる。おそらく、ＤＨＬＡのシステインと比べて増加した効果は、システイン中に見出される単一のチオールと比較して２つのチオール基の「会合」より安定に割り当てられ得るであろう。
【００７６】
【化５】
同様に、還元型グルタチオンとの反応を描くことが可能である。この場合、１つの代わりに２つのカルボン酸官能基により、優れた活性が得られる。
【００７７】
【化６】
この機構は、ラジカルスカベンジャーとして作用するが、フラビリウムカチオンの反応カスケードに関連すると考えられる。
【００７８】
試験された２Ｒ−ＳＨ／Ｒ−ＳＳ−Ｒ化合物の酸化還元電位は、アントシアノシドのそれより低い。例えば、２ＧＳＨ／ＧＳＳＧ＝約−０．２２ Ｖであるが、酸化還元電位Ａ−ＯＨ／Ａ＝Ｏ ＝約０．２０−０．７５Ｖである（以下を参照）。
【００７９】
アントシアノシドのラジカル除去特性は、以下の反応により説明され得る：
【００８０】
【化７】
キノン構造は４’置換を必要とするので、これらの（セミ）キニンの安定性は、置換パターンに関連すると考えられる。一旦キノンが形成されると、反応のフラビリウム構造への逆転は、より可能性が低い。一方、５’位の任意の置換は、セミキノンの形成を妨害する。
【００８１】
このことは、３’−ＯＨおよび４’メトキシ置換構造が最も安定である理由を説明し得る。これは、無色の生成物を形成する、水に攻撃され得ないセミキノンを形成する。このようなセミキノンは、フラビリウムカチオンにより容易に再転換し得るか、または容易に再転換し得ない。
【００８２】
アントシアニジン／アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）は、以下の反応により、セミキノン／キノン（Ａ＝Ｏ）に転換する：
Ａ−ＯＨ−＞Ａ＝Ｏ＋Ｈ＋＋ｅ−
Ｒ−ＳＨ化合物は、以下の反応を受ける：
全プロセス：２ＲＳＨ−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ＋２Ｈ＋＋２ｅ−
詳細には：Ｒ−ＳＨ−＞Ｒ−Ｓ−＋Ｈ＋−＞Ｒ−Ｓ°＋ｅ−＋Ｈ＋
２Ｒ−Ｓ°−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ（Ｒ−Ｓ°・・・ラジカル）
このような機構は、２分子のアントシアノシドが２分子のＲ−ＳＨから１分子のＲ−ＳＳ−Ｒを形成し得、かつセミキノンとして残される様式で、１：１の消費を示すであろう。あるいは、１つのアントシアノシド分子は、キノンに転換されることにより、１つのＲ−ＳＳ−Ｒを形成し得る。
【００８３】
代わりの反応が起こらない場合、以下の反応カスケードが合理的である：
中性ｐＨでのＲ−ＳＨおよびアントシアノシドの組み合わせにおいて、主にＲ−ＳＨがＲ−Ｓ°に転換する。
【００８４】
Ｒ−Ｓ°の部分が、アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）（これらは、それによってＡ＝Ｏセミキノンに転換する）によって除去される場合、再びＲ−ＳＨを生じる。
【００８５】
ｐＨ＝７では、Ａ＝ＯはＲ−ＳＨの消費によりＡ−ＯＨに再転換され、次いで、公知のように最終的に次第に分解する。
【００８６】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパインおよびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００８７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比は、約０．１〜約１０であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１である。
【００８８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２、約３、約４、約５などから約１４まで、例えば、７以上のｐＨを有する水性環境に曝露した場合に、分解に対して安定である。
【００８９】
さらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドである。
【００９０】
なおさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジンである。
【００９１】
本発明のさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンのグリコシダーゼ（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のアントシアノシドを含む。
【００９２】
本発明はまた、本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物を製造する方法に関する。
【００９３】
本発明は、安定化化合物が、抽出および／または製造プロセスの間にアントシアニン含有植物物質と混合されて、それにより、一般に加工の際および貯蔵の際にさえも起こるアントシアニンの酸化的破壊を減少または除去し得ることを提供する。例えば、米国特許出願公開第２００２／００１８８２１号、（Ｃｈｒｙｓｔｅｌｅ Ｓｏｕｌｉｅｒら、２００２年２月１４日公開、その内容はその全体が本明細書に参考として援用される）に開示された抽出プロセスの間に、１つまたはそれ以上の安定化化合物を本明細書に記載の比で抽出媒体（溶媒）に加え得る。
【００９４】
代表的には、アントシアニン抽出物を安定化化合物と直接的に混合する。これは、２つの物質を、固体として単純に混合する、粉砕する、併用することなどにより、または水などの溶媒中に溶解することにより、達成され得る。本明細書の以下に記載の担体、ビタミン、抗酸化剤などの追加の添加剤を、定法により混合物に加えることができる。
【００９５】
１つの実施態様では、アントシアノシドを含む赤色果実抽出物を水溶液に入れ、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理する。水抽出物を、それが１５℃未満の均一な温度に到達するまで冷却する。水抽出物を濾過し、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、得られた濾過物を回収し、マクロ架橋ポリマー樹脂上に装填する。次いで、樹脂を鉱質除去水ですすぎ、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで、得られた樹脂をアルコール溶出溶液で溶出させ、これは必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理され得る。得られた溶出物を濃縮し、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで乾燥する。
【００９６】
別の実施態様では、安定化のプロセスを、以下のプロセスに従って、アルコール性赤色果実抽出物で行う。まず、パルプを全赤色果実から分離し、パルプを、必要に応じて本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を含み得るアルコール抽出溶液と接触させる。固相を液相から分離し、次いで、液相を必要に応じて本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理する。液相に含まれる残留アルコールの大部分を、減圧下で蒸発させて、アルコール性濃縮物を得る。
【００９７】
有利には、アルコール抽出に用いられる溶媒は、メタノール、エタノール、ブタノールおよびアセトンを含む群から選択される。
【００９８】
実際には、アルコール抽出は、室温で、それぞれ２０分で完結する少なくとも２つの連続的な工程で行われる。次いで、溶媒を留去する。さらに、パルプ単独からだけではなく、全果実からのアントシアノシドの抽出を行うことが可能である。
【００９９】
本発明によれば、安定化の工程は、それぞれ液体または粉末の形態で提供される、市販のまたは予め精製されたアントシアノシド抽出物である果実の抽出物を用いて開始することにより行うことができる。この場合、果実の抽出物または予め精製された抽出物を、次いで、精製工程の前に、アルコール、特にメタノール、または水のいずれかを用いて取り出し、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を用いて処理し得る。
【０１００】
本発明の精製の工程において、赤色果実抽出物の冷却は、抽出物の温度が均一かつ１０℃未満、特に５℃未満になるまで、温度を少なくとも約１２時間維持しながら、有利に行う。
【０１０１】
水性抽出物またはアルコール抽出物の濾過の工程に関して、これは、セルロースフィルタまたはステンレス鋼ガーゼ上で、０〜１００μｍまたは等価のカットオフで行われ得る。
【０１０２】
最終抽出物中の安定化されたアントシアノシドの力価および濃度をさらに増加させるため、樹脂から安定化されたアントシアノシドを溶出するアルコール溶液は、エタノール濃度が１０〜９０％、有利には４０％付近であるエタノール水溶液である。
【０１０３】
得られた安定化された溶出液を、３０℃の領域で、制御された温度で濃縮し、次いで、安定化された粉末を得るため、凍結乾燥または噴霧乾燥する。
【０１０４】
１つの実施態様では、例えば、ビルベリー抽出物の濃縮物およびＬ−システイン塩酸塩を併用し（９：１、ｗ／ｗ）、噴霧乾燥して、安定化されたビルベリー抽出物を粉末として得る。通常、ビルベリー抽出物のフリーのシステインに対する比は、約１０：１（ｗ／ｗ）である。
【０１０５】
本発明はさらに、治療上有効量の本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物を投与することにより、種々の病気を治療する方法に関する。病気には、増加した抗酸化能の必要性、関節硬化、疼痛の減少、炎症が挙げられる。疼痛の減少または除去には、関節炎、月経困難症、頭痛、関節痛、筋肉痛、骨関節炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障、網膜症、およびそれらの組み合わせなどの種々の形態の疼痛が挙げられる。
【０１０６】
従って、本発明はさらに、本明細書中で述べる種々の苦痛を治療するのに有用な、生物が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供する。安定化されたアントシアニン組成物は、以下で考察するいくつかの方法により投与され得る。
【０１０７】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンまたはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンのそれを必要とする対象への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に対して少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、アントシアニンがシステインの存在下で送達される場合、アントシアニンの血漿濃度が、投与の４時間後に、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量であることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンおよびシステインを投与することにより、対象における生物が利用可能なアントシアニンの量を増加させる方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達が一般に好ましい。
【０１０８】
１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１０〜約０．１、より詳細には約１０〜約０．５、そしてさらにより詳細には約１０〜約１である。本明細書中に記載の実施例で述べたように、システインを用いない場合、アントシアニンの生物学的利用能が劇的に減少することに留意することが重要である。
【０１０９】
システインの存在下でのアントシアニンの生物学的利用能の増加は、一般に、アントシアニンを単独で投与した後の生物学的利用能の少なくとも２倍である。理想的には、生物学的利用能は、生物学的利用能がシステインを配合しない同等のアントシアニンの３、４、５、１０および２０倍に増加するようにシステインを配合することにより、増加させられる。このことは驚くべき知見である。
【０１１０】
本発明の組成物は、種々の食物、飲料、スナックなどに配合され得る。１つの局面では、組成物は、消費の前に、食品の上に振り掛けられ得る。食品の上に振り掛けられる場合、デンプン、ショ糖またはラクトースなどの適切な担体を用いて、安定化されたアントシアニン組成物の濃度を分散させて食品への適用をより容易にし得る。
【０１１１】
本発明の組成物はまた、種々の調理済食品におけるサプリメントとして提供され得る。この応用の目的で、調理済食品とは、任意の本発明の組成物が添加された天然食品、加工食品、ダイエットまたは非ダイエット食品を意味する。本発明の組成物は、多くの調理済ダイエット食品（ダイエット飲料、ダイエットバーおよび調理済冷凍食品が挙げられるが、これらに限定されない）に直接配合され得る。さらに、本発明の組成物は、多くの調理済非ダイエット製品（キャンディ、チップスなどのスナック、調理済肉製品、ミルク、チーズ、ヨーグルト、スポーツバー、スポーツ飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、パンおよび任意の他の油脂含有食物などが挙げられるが、これらに限定されない）に配合され得る。本明細書中で用いられる用語「食品」は、ヒトまたは動物の消費に適した任意の物質を意味する。
【０１１２】
本発明の組成物は、フルーツジュース、ミルクセーキ、ミルクなどの種々の飲料に添加され得る。
【０１１３】
投与の好ましい方法は、経口である。本発明の組成物は、デンプン、ショ糖またはラクトースなどの適切な担体を用いて、錠剤、カプセル、溶液、シロップおよび乳濁液に処方され得る。本発明の錠剤またはカプセルは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する腸溶コーティングで被覆することができる。小腸で溶解するが胃で溶解しない適切な腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。
【０１１４】
本発明の組成物のソフトゲルカプセルへの製剤は、当該分野で公知の多くの方法で達成され得る。しばしば、製剤は、オイル、または他の懸濁剤もしくは乳化剤などの許容され得る担体を含むであろう。
【０１１５】
適切な任意の担体には、例えば、任意の供給源（例えば、天然または合成油、脂肪、ワックスまたはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）から誘導体化され得る脂肪酸、エステルおよびそれらの塩が挙げられる。さらに、脂肪酸は、非硬化油、部分硬化油、全硬化油またはそれらの組み合わせから、限定されることなく誘導体化され得る。脂肪酸（それらのエステルおよび塩）の非限定的な供給源の例には、種子油、魚油または水産油、キャノーラ油、植物油、ベニバナ油、ヒマワリ油、キンレンカ種子油、マスタード種子油、オリーブ油、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、米糠油、ババスナッツ油、パーム油、低エルカ酸ナタネ油、パーム核油、ルピナス油、ヤシ油、亜麻仁油、月見草油、ホホバ、コムギ胚芽油、獣脂、牛脂、バター、鶏脂、ラード、乳脂肪、シアバターまたはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１６】
特定の非限定的な魚油または水産油の供給源には、甲殻類油、マグロ油、サバ油、サケ油、メンハーデン、アンチョビー、ニシン、マス、イワシまたはこれらの組み合わせが挙げられる。特に、脂肪酸の供給源は、魚油または水産油（ドコサヘキサエン酸またはエイコサペンタエン酸）、ダイズ油または亜麻仁油である。あるいは、または上記で特定した担体と組み合わせて、蜜ロウ、ならびにシリカ（二酸化ケイ素）などの懸濁剤を、適切な担体として用いることができる。
【０１１７】
本発明の製剤はまた、栄養補助食品であるとも考えられる。用語「栄養補助食品」は、当該分野で認識されており、疾患を予防し得るかまたは望ましくない症状を緩和し得る食物において見出され得る特定の化学物質を説明することを意図する。
【０１１８】
本発明の製剤はさらに、有益な本発明の組成物の成分の安定化することを補助するか、または生物学的利用能を促進することを補助するか、もしくは個人の食事の追加の栄養素として働くための種々の成分を含み得る。適切な添加剤には、ビタミンおよび生物学的に許容され得るミネラルが挙げられ得る。ビタミンの非限定的な例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫおよび葉酸が挙げられる。ミネラルの非限定的な例には、鉄、カルシウム、マグネシウム、カリウム、銅、クロム、亜鉛、モリブデン、ヨード、ホウ素、セレン、マンガン、それらの誘導体、またはそれらの組み合わせが挙げられる。これらのビタミンおよび無機質は、限定されず、任意の供給源または供給源の組み合わせに由来し得る。ビタミンＢ群の非限定的な例には、チアミン、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、シアノコバラミン、ビオチン、パントテン酸またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
種々の添加物が、本組成物に配合され得る。本組成物の任意の添加物には、ヒアルロン酸、リン脂質、デンプン、糖、脂肪、抗酸化剤、アミノ酸、タンパク質、香料、着色料、加水分解デンプンおよびそれらの誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２０】
本明細書中で用いられる用語「抗酸化剤」は、当該分野で認識されており、化合物の酸化的劣化を防ぐかまたは遅延する合成物質または天然物質を意味する。抗酸化剤の例には、トコフェロール、フラボノイド、カテキン、スーパーオキシドジスムターゼ、レシチン、ガンマオリザノール；ビタミンＡ、Ｃ（アスコルビン酸）およびＥおよびβカロチンなどのビタミン；ローズマリーおよびサンザシ抽出物中に見出されるカモソール（ｃａｍｏｓｏｌ）、カモシン酸（ｃａｍｏｓｉｃ ａｃｉｄ）およびロスマノール、ブドウ種子またはマツ樹皮抽出物、ならびに緑茶抽出物中に見出されるプロアントシアニジンなどの天然成分が挙げられる。
【０１２１】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物を含む組成物は、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣製造の粉末化、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスにより製造され得る。組成物は、１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤または安定化されたアントシアニン組成物を使用され得る製剤に加工することを容易にする１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤または助剤を用いて、通常の様式で製剤され得る。
【０１２２】
本発明の組成物は、投与の実質的に任意の様式（例えば、経口、経頬、全身、注射、経皮、直腸、経腟など）に適した形態、または吸入またはガス注入による投与に適した形態をとり得る。
【０１２３】
全身用製剤には、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内または腹腔内注射）による投与のために設計されたもの、および経皮、経粘膜、経口または経肺投与のために設計されたものが挙げられる。
【０１２４】
有用な注射用製剤には、安定化されたアントシアニン組成物の水性または油性媒体中の無菌の懸濁液、溶液または乳濁液が挙げられる。組成物はまた、懸濁、安定化および／または分散された薬剤などの製剤を含み得る。注射用製剤は、例えば、アンプルまたは複数回投与容器中の単位投与形態で存在し得、かつ添加された保存料を含み得る。
【０１２５】
あるいは、注射用製剤は、使用の前に、適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱物質非含有水、緩衝液、ブドウ糖溶液などが挙げられるが、これらに限定されない）で再構成するための粉末形態で提供され得る。この目的のために、安定化されたアントシアニン組成物は、凍結乾燥などの任意の公知の技術で乾燥され、使用の前に再構成され得る。
【０１２６】
経粘膜投与のために、通過すべきバリアに適した浸透剤が製剤に用いられる。このような浸透剤は、当該分野で公知である。
【０１２７】
経口投与のために、本発明の組成物は、例えば、結合剤（例えば、α化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；賦形剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容され得る賦形剤を用いて通常の手段で製剤される、ロゼンジ、錠剤またはカプセルの形態をとり得る。錠剤は、例えば、糖、フィルムまたは腸溶コーティングを用いて、当該分野で周知の方法によりコーティングされ得る。
【０１２８】
経口投与用の液体製剤は、例えば、エリキシル剤、溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとり得るか、あるいは、使用の前に水または他の適切な媒体で構成するための乾燥製品として存在し得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素添加食用油脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分留植物油）；および保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸メチルもしくはプロピル）などの医薬上許容され得る添加物を用いて、通常の手段により製造され得る。製剤はまた、必要に応じて、緩衝塩、保存料、香料、着色料および甘味料を含み得る。
【０１２９】
経口投与用製剤は、適切に製剤されて、安定化されたアントシアニン組成物の周知されているような徐放を提供し得る。
【０１３０】
経頬投与用には、組成物は、通常の様式で製剤される錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。
【０１３１】
経直腸および経腟の投与経路のために、安定化されたアントシアニン組成物は、カカオバターまたは他のグリセリドなどの通常の坐薬基剤を含む溶液（停留浣腸）、坐薬または軟膏として製剤され得る。
【０１３２】
経鼻投与または吸入またはガス注入による投与のために、安定化されたアントシアニン組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フルオロカーボン、二酸化炭素または他の適切なガスを用いる加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾル噴霧の形態により、簡便に送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するための弁を提供することにより決定され得る。インヘラーまたはインサフレーター（例えば、ゼラチンから構成されるカプセルおよびカートリッジ）に用いるためのカプセルおよびカートリッジは、化合物およびラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤を含んで製剤され得る。
【０１３３】
持続性送達のために、安定化されたアントシアニン組成物は、移植または筋肉内注射による投与のためのデポー製剤として処方され得る。安定化されたアントシアニン組成物は、適切なポリマーもしくは疎水性物質（例えば、許容され得る油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性塩などの難溶性誘導体として、製剤され得る。あるいは、経皮吸収のために安定化されたアントシアニン組成物を徐々に遊離させる粘着ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達システムが用いられ得る。この目的のために、浸透促進剤を用いて、安定化されたアントシアニン組成物の経皮浸透を促進することができる。適切な経皮パッチは、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号；米国特許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１３４】
あるいは、他の送達システムが用いられ得る。リポソームおよび乳濁液は、安定化されたアントシアニン組成物を送達するのに用いられ得る送達媒体の周知例である。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの特定の有機溶媒もまた用いられ得るが、通常はより高い毒性の犠牲がある。
【０１３５】
所望であれば、組成物は、安定化されたアントシアニン組成物を含む１つまたはそれ以上の単位投与形態を含み得るパックまたはディスペンサー装置中に存在し得る。パックは、例えば、ブリスター包装などの金属またはプラスチックの箔を含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与のための指示書が添付され得る。
【０１３６】
軟質ゲルまたは軟質ゼラチンカプセルは、例えば、製剤を適切な媒体（例えば、米糠油および／または蜜ロウ）に分散させて高粘度混合物を形成することにより製剤され得るが、これに限定されない。次いで、この混合物を、軟質ゲル産業の当業者に公知の技術および機械を用いて、ゼラチンベースのフィルム中にカプセル化する。次いで、このように形成されたカプセルを、恒量まで乾燥させる。代表的には、カプセルの重量は、約１００〜約２５００ミリグラム、特に約１５００〜約１９００ミリグラムの重量であり、より詳細には、約１５００〜約２０００ミリグラムの重量である。
【０１３７】
例えば、軟質ゼラチンシェルを調製する場合、シェルは、約２０〜７０％のゼラチン、一般に、可塑剤および約５〜約６０重量％のソルビトールを含み得る。軟質ゼラチンカプセルの充填物は、液体（主に、米糠油もしくはコムギ胚芽油、および／または所望であれば蜜ロウ）などの担体であり、かつ、安定化されたアントシアニン組成物とは別に、親水性マトリックスを含み得る。親水性マトリックスは、存在する場合、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールである。さらなる成分は、必要に応じて、濃厚化剤および／または乳化剤である。１つの実施態様では、親水性マトリックスは、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール、５〜１５％のグリセロール、および５〜１５重量％の水を含む。ポリエチレングリコールはまた、プロピレングリコールおよび／または炭酸プロピレンと混合され得る。
【０１３８】
別の実施態様では、軟質ゲルカプセルは、ゼラチン、グリセリン、水および種々の添加物から調製される。代表的には、ゼラチンの割合（重量基準）は、約３０〜約５０重量％、特に約３５〜約重量％、およびより詳細には約４２重量％である。製剤は、約１５〜約２５重量％のグリセリン、より詳細には約１７〜約２３重量％、より詳細には約２０重量％のグリセリンを含む。
【０１３９】
カプセルの残りの部分は、代表的には水である。量は、約２５重量％〜約４０重量％で変動し、より詳細には約３０〜約３５重量％、およびより詳細には約３５重量％である。カプセルの残りは、一般に、香料、糖、着色料など、またはそれらの組み合わせから構成される約２〜約１０重量％で変動し得る。カプセルを加工した後、最終的なカプセルの含水量は、しばしば約５〜約１０重量％、より詳細には７〜約１２重量％、およびより詳細には約９〜約１０重量％である。
【０１４０】
製造については、標準的な軟質シェルゼラチンカプセルの製造技術を用いて、軟質シェル製品を調製し得ると考えられる。有用な製造技術の例は、プレートプロセス、Ｒ．Ｐ．Ｓｃｈｅｒｅｒによって開発されたロータリー・ダイ・プロセス、Ｎｏｒｔｏｎカプセルマシンを用いるプロセスならびにＬｅｄｅｒｌｅによって開発されたＡｃｃｏｇｅｌマシンおよびプロセスである。これらのプロセスのいずれも、成熟した技術であり、いずれも、軟質ゼラチンカプセルを調製することを望む者は誰でも広く利用可能である。
【０１４１】
乳化剤は、軟質ゼラチンカプセル内の成分の可溶化を補助するのに用いられ得る。界面活性物質、乳化剤または発泡剤の特定の例には、Ｄ−ソルビトール、エタノール、カラゲナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グアーガム、グリセロール、グリセロール脂肪酸エステル、コレステロール、白色蜜ロウ、ジオクチルソジウムスルホサクシネート、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ポリオキシル４０ステアリン酸、ソルビタンセスキオレアート、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、滑石、ソルビタントリオレアート、パラフィン、ジャガイモデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリコール、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油 ４０、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油 ６０、ポリオキシル３５ ヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、マクロゴール ４００、オクチルドデシルミリスチン酸、メチルセルロース、ソルビタンモノオレアート、グリセロールモノステアラート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート、ラウリルジメチルアミンオキシド溶液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール、乾燥炭酸ナトリウム、酒石酸、水酸化ナトリウム、精製ダイズレシチン、ダイズレシチン、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、中鎖トリグリセリド、無水クエン酸、綿実油−ダイズ油混合物および流動パラフィンが挙げられる。
【０１４２】
本発明はまた、本発明の組成物および適切な症状への使用についての指示書のパッケージ製剤を提供する。代表的には、いずれの形態のパッケージ製剤も、それを必要とする個体に投与される。代表的には、必要用量は、１日当たり約１〜約４用量である。
【０１４３】
本発明は、種々の症状の治療のための軟質ゼラチンカプセル中の本発明の組成物の製剤、使用、製造およびパッケージングを記載しているが、軟質ゼラチンカプセルのみに限定されると考えるべきではない。摂取可能な本発明の組成物は、上記のように、従来の錠剤、丸薬、ロゼンジ、エリキシル剤、乳濁液、硬質カプセル、液体、懸濁液などで送達され得る。
【０１４４】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物、またはその組成物は、一般に、意図する結果を達成するのに有効な量、例えば、治療される特定の炎症性に関連する症状を治療または予防するのに有効な量で用いられるであろう。組成物は、治療的に投与されて治療効果を達成し得るか、または予防的に投与されて予防的利益を達成し得る。治療効果とは、根本的な障害を根絶または緩和する、および／または根底にある障害に付随する１つまたはそれ以上の症状を根絶または緩和する結果、患者が気分または症状の改善を報告する（患者がまだ根本的な障害に罹患している可能性に関係なく）ことを意味する。例えば、本発明の組成物を、疼痛に罹患した患者に投与することにより、根底にある症状が根絶または緩和される場合のみではなく、患者が疼痛に付随する身体的不快感の重症度または持続時間の減少を報告する場合においても、治療効果が提供される。
【０１４５】
予防的投与のために、組成物は、上記症状の１つを発症するリスクを有する患者に投与され得る。
【０１４６】
投与される組成物の量は、例えば、治療される特定の症候、投与の様式、望まれる利点が予防上または治療上のいずれであるか、治療される症候の重症度、ならびに患者の年齢および重量などの種々の因子に依存するであろう。有効用量の決定は、当業者の能力の範囲内である。
【０１４７】
安定化されたアントシアニン組成物の全投与量は、代表的には、約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にあるであろうが、他の因子のなかでも、成分の活性、その生物学的利用能、投与様式および上記で考察した種々の因子に依存してより高くまたはより低くあり得る。投与の量および間隔は、個別に調整されて、治療上または予防上の効果を維持するのに十分な化合物の血漿レベルを提供し得る。例えば、化合物は、他の事項のなかでも、投与様式、治療すべき特定の症候および処方医の判断に依存して、週に１回、週に数回（例えば、隔日）、１日あたり１回または１日あたり複数回投与され得る。当業者は、過度の実験を行うことなく、有効な局所用量を最適化することができるであろう。
【０１４８】
１〜９１に連続的に列挙した以下の段落は、本発明の種々の局面を提供する。１つの実施態様では、第１段落（１）において、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物（但し、安定化化合物はグルタチオンではない）を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。
【０１４９】
２．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５０】
３．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１または２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５１】
４．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落１〜３のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５２】
５．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落１〜４のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５３】
６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１〜５のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５４】
７．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１５５】
８．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落７の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１５６】
９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５７】
１０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落９の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５８】
１１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落９または１０のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５９】
１２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落９〜１１のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６０】
１３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落９〜１２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６１】
１４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９〜１３のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６２】
１５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６３】
１６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落１５の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６４】
１７．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物（但し、安定化化合物は還元型グルタチオンではない）と組み合わせる工程を含む、方法。
【０１６５】
１８．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１７の方法。
【０１６６】
１９．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１７または１８のいずれかの方法。
【０１６７】
２０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落１７〜１９のいずれかの方法。
【０１６８】
２１．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落１７〜２０のいずれかの方法。
【０１６９】
２２．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７〜２１のいずれかの方法。
【０１７０】
２３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７の方法。
【０１７１】
２４．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落２３の方法。
【０１７２】
２５．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落１７の方法。
【０１７３】
２６．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落２２の方法。
【０１７４】
２７．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落２６の方法。
【０１７５】
２８．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物と組み合わせる工程を含む、方法。
【０１７６】
２９．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落２８の方法。
【０１７７】
３０．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落２８または２９のいずれかの方法。
【０１７８】
３１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落２８〜３０のいずれかの方法。
【０１７９】
３２．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落２８〜３１のいずれかの方法。
【０１８０】
３３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８〜３２のいずれかの方法。
【０１８１】
３４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８の方法。
【０１８２】
３５．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落３４の方法。
【０１８３】
３６．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落２８の方法。
【０１８４】
３７．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落３３の方法。
【０１８５】
３８．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落３７の方法。
【０１８６】
３９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８７】
４０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８８】
４１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落３９または４０のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８９】
４２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落３９〜４１のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９０】
４３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落３９〜４２のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９１】
４４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９〜４３のいずれかのｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９２】
４５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９３】
４６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落４５のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９４】
４７．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９５】
４８．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落４４のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９６】
４９．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落４８のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９７】
５０．ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物を製造する方法であって、組成物がｐＨ安定化するように、アントシアニン抽出物と少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物とを組み合わせる工程を含む、方法。
【０１９８】
５１．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落５０の方法。
【０１９９】
５２．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落５０または５１のいずれかの方法。
【０２００】
５３．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落５０〜５２のいずれかの方法。
【０２０１】
５４．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落５０〜５３のいずれかの方法。
【０２０２】
５５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０〜５４のいずれかの方法。
【０２０３】
５６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０の方法。
【０２０４】
５７．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落５６の方法。
【０２０５】
５８．安定化されたアントシアニン抽出物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落５０の方法。
【０２０６】
５９．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落５５の方法。
【０２０７】
６０．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落５９の方法。
【０２０８】
６１．治療上有益な量の安定化されたアントシアニン組成物を対象に提供する方法であって、治療上有益な量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン組成物を対象に投与する工程を含む、方法。
【０２０９】
６２．関節硬化を治療する方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１０】
６３．アントシアニンの細胞内抗酸化濃度を増加または維持する方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１１】
６４．対象において疼痛を軽減または減少させる方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１２】
６５．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、段落４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１３】
６６．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１４】
６７．上記安定化されたアントシアニン抽出物が、丸薬、錠剤、粉末、顆粒、薄皮、軟膏、クリーム、ペースト、溶液、混合物、シロップ、粘液、乳濁液、チンキ、スピリット、ペイント、液滴または浸出液の形態である、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１５】
６８．生理学的に許容され得るアジュバントをさらに含む、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１６】
６９．アジュバントが、希釈液、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、基剤、香味料、甘味料、着色料、保存料、抗酸化剤、コーティング材料、膜形成物質、溶媒、可溶化剤、湿潤剤、吸収剤、濾過助剤、乳化剤、界面活性剤、懸濁剤、増粘剤、可塑剤、キレート剤、エアロゾル噴霧剤、発泡剤、酸化剤、アルカリ化剤、緩衝剤またはそれらの混合物である、段落６８の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１７】
７０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、段落２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１８】
７１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１９】
７２．システインの誘導体が、Ｎ−アセチルシステインであり、かつＳＨ−プロテイナーゼが、パパイン、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）またはそれらの混合物である、段落６５または６６の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２２０】
７３．アントシアニン富化抽出物を安定化させる方法であって、
アントシアニン富化抽出物を、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する少なくとも１つの安定化化合物と接触させることを含み、安定化化合物が、抽出プロセスの間の任意の時にアントシアニンと接触され得る、方法。
【０２２１】
７４．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、システイン、グルタチオンまたはそれらの混合物である、段落７３記載の方法。
【０２２２】
７５．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物のアントシアニン化合物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落７３の方法。
【０２２３】
７６．モル比が約０．５〜約５である、段落７５の方法。
【０２２４】
７７．モル比が約１である、段落７５の方法。
【０２２５】
７８．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物と接触させられる前に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２６】
７９．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物を抽出溶媒と併用した後に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２７】
８０．加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障または網膜症を治療する方法であって、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかに記載の治療上有効量の安定化されたアントシアニン組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【０２２８】
８１．ビルベリー抽出物およびシステインを含む、安定化されたビルベリー組成物。
【０２２９】
８２．ビルベリー抽出物のシステインに対する比が、重量基準で約１０〜約１である、段落８１の安定化されたビルベリー組成物。
【０２３０】
８３．組成物が噴霧乾燥される、段落８１または８２に記載の安定化されたビルベリー組成物。
【０２３１】
８４．安定化された組成物が、ＨＰＬＣ解析により決定されるように、少なくとも約６ヶ月にわたって、少なくとも約８０％の初期のアントシアノシドを保持する、段落８１〜８３のいずれかの安定化されたビルベリー組成物。
【０２３２】
８５．アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシアニン組成物を対象に投与する工程を含む、アントシアニン組成物の生物学的利用能を増加させる方法であって、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を欠くアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する、方法。
【０２３３】
８６．アントシアニン物質が抽出物である、段落８５の方法。
【０２３４】
８７．抽出物がビルベリー抽出物である、段落８６の方法。
【０２３５】
８８．アントシアニン物質の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対する比が、重量基準に基づき約１０：０．１〜約１：１である、段落８５の方法。
【０２３６】
８９．ビルベリー抽出物の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対するアントシアニンの比が、約１０〜約１である、段落８７の方法。
【０２３７】
９０．システインの存在下におけるアントシアニンの投与の４時間後の血漿濃度が、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在がないアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量である、段落８５の方法。
【０２３８】
９１．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落８５〜９０のいずれかの方法。
【０２３９】
以下の実施例は、限定的なものであることを意味しないが、本発明のさらなる情報およびサポートを提供するために示される。
【０２４０】
本例示の章は、以下の表に示すように、ビルベリー抽出物およびブラックカラント抽出物に関する。
【０２４１】
【表３】
【実施例】
【０２４２】
実施例１
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２４３】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２４４】
試料ｃ）３０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．１４４ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２４５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２４６】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡまたはＧＳＨのいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランクの試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観察されたことを示したが、一方、保護された試料は、６０％を超える残留アントシアノシドを生じた。３０ｍｇのＤＨＬＡの保護効率は、２０ｍｇのＧＳＨに匹敵する。保護効率は、シアニジングリコシドと比較して一層保護が少ないデルフィニジングリコシドにより例示される基礎のアントシアニン骨格に関連するように思われる。各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多く残留するアントシアノシドを観察した。
【０２４７】
【表４】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２４８】
実施例２
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す追加の１ｍｌの試料（ブランク試料）を１５分毎にサンプリングした。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分析した。
【０２４９】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で保持した。１５分毎に、１ｍｌの試料を取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２５０】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられた。保護活性は、選択したアントシアノシドについて経時の比較的減衰により示すように、溶解後即時に開始し、かつ少なくとも４時間持続する。ここでも、保護効果は、４時間３０分のインキュベーション後の６５％の残留デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトース、６７％の残留ペツニジン−３−Ｏ−ガラクトースおよび７７％の残留シアニジン−３−Ｏ−ガラクトースにより例証されるアントシアニン骨格に関連すると考えられる。試験された各個別のアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシアノシドを観察した。
【０２５１】
【表５】
【０２５２】
【表６】
【０２５３】
【表７】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２５４】
実施例３
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら４時間保持した。その後、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２５５】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５６】
試料ｃ）２０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０９６ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５７】
試料ｄ）２０ｍｇのＬ−システイン酸（０．１６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５８】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２５９】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡ、ＧＳＨまたはＬ−システインのいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランクの試料では、９．５〜３３．４％の残留アントシアノシドが観察されたが、一方、ＧＳＨ保護された試料は、５０．４〜６５．０％の残留アントシアノシドを生じた。ＤＨＬＡについての比較の数値は３６．７〜３８．９％であった。各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシアノシドを観察した。
【０２６０】
【表８】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２６１】
実施例４
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。その後、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２６２】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０２４〜０．２８８ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した（水浴）。
【０２６３】
試料ｆ〜ｉ）５、１０、２０または６０ｍｇのＧＳＨ（０．０１６〜０．１９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した（水浴）。
【０２６４】
試料ｊ〜ｍ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２６５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのリードアントシアノシド（Ｄｐ−３−Ｏ−Ｇｌｕ、Ｄｐ−３−Ｏ−Ｒｕｔ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｇｌｕ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｒｕｔ）について４時間後の％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０２６６】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＤＨＬＡ、ＧＳＨまたはＬ−システインにより実質的に保護されていたことが決定された。
【０２６７】
【表９】
【０２６８】
【表１０】
【０２６９】
【表１１】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２７０】
実施例５
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を１５分毎に取った。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分析した。
【０２７１】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。１５分毎に、１ｍｌの試料を取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２７２】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられ得た。保護活性は、アントシアノシドについて経時の比較減少により示すように、溶解直後に開始し、かつ少なくとも４時間持続する。保護の有効性は、シアニジングリコシドの保護がデルフィニジングリコシドと比較して改善されたことにより例証されるように、アントシアニン骨格に依存的であり得る。しかしながら、ブランクを保護された試料と比較した場合、デルフィニジングリコシドは、シアン化物グリコシドよりも実質的により良く保護されていた。
【０２７３】
各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多く残留するアントシアノシドを観察した。
【０２７４】
【表１２】
【０２７５】
【表１３】
【０２７６】
【表１４】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２７７】
実施例６
試料ａ）５ｍｇの塩化デルフィニン（０．０１５ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、即時に試料を取り、１５分後、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７８】
試料ｂ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、試料を即時に取り、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７９】
試料ｃ）５ｍｇの塩化デルフィニジン（０．０１５ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ（０．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、ならびに１、２および３時間のインキュベーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２８０】
試料ｄ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ（０．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、１、２および３時間のインキュベーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２８１】
以下の表から、ＧＳＨはフリーのアントシアニン骨格をあまり保護しなかったことが決定された。ＧＳＨとデルフィニジンまたはマルビジンとのモル比は２：１より高いが、このことは、活性がないことはＧＳＨの低濃度に無関係であることを示す。フリーのアントシアニンの減衰は、ＧＳＨの存在によりほとんど影響を受けないが、これは、同じ骨格を有するアントシアニングリコシドを用いる知見とは対照的である。
【０２８２】
【表１５】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２８３】
実施例７
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整した）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化した。
【０２８４】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整した）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２８５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのアントシアノシドについて４時間後の％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表す。
【０２８６】
以下の表から、ＧＳＨは、特にアントシアノシドが分解を受けやすいｐＨ範囲（ｐＨ＞５）においてグルタチオンを保護することが決定された。驚くべきことではないが、アントシアノシドがそれ自身で安定なより低いｐＨ値では、保護効果は減少する。
【０２８７】
【表１６】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２８８】
保護効果は、保護された試料の残留比を、ブランク試料（選択されたｐＨ値でビルベリー抽出物を含むが、還元型グルタチオンは含まない）の残留比で割ることにより計算されるパラメータである。従って、この差は、ビルベリー抽出物のアントシアニンの安定性の約３〜約１１のｐＨ範囲にわたる還元Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）の効果を実証する。
【０２８９】
ｐＨ値が増加すると、抽出物の分解が増加することが認められた。試験されたｐＨ値の全てにおいて、Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）はアントシアニンを保護した。さらに、保護効果は、ｐＨ値と共に増加した。アルカリ性の環境では、グルタチオンは、上記表ならびに図１９および２０に示されるように、より高い安定化効果を有した。
【０２９０】
実施例８
試料ａ）６０ｍｇのＧＳＨ（０．１９２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌフラスコに入れ、溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１、２、３および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨの酸化型を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９１】
試料ｂ）６０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．１９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｏｌ）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１、２、３および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨの酸化型を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９２】
以下の表より、ＧＳＨは、水性緩衝液（ｐＨ＝７．０）中、３７℃でＧＳＳＧに酸化されたことが決定された。ビルベリー抽出物の添加は、ＧＳＨのＧＳＳＧへの酸化を約２〜約３ファクター促進するが、このことは、ビルベリー抽出物が、酸化還元反応のパートナーとして作用することを示唆する。この結果に基づき、ＧＳＨ／ＧＳＳＧの対が、酸化されたＧＳＳＧおよび還元されたアントシアノシドを生じるかなり低い酸化還元電位を有することが明らかであった。
【０２９３】
【表１７】
【０２９４】
【表１８】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２９５】
ブラックカラント抽出物の安定性
１２０ｍｇのブラックカラント抽出物／１００ｍｌの溶液を、ＣａＣｏ−２吸収試験に用いられるインキュベーション培地としての３０ｍｇのグルタチオン（ＧＳＨ）／緩衝化溶液中１００ｍｌ（ｐＨ＝７．０）と共にインキュベートした。
【０２９６】
これらの調査は、分析用溶液中およびグルタチオンの存在下でのＣａＣｏ−２試験に用いられるインキュベーション培地中での選択されたブラックカラントリードアントシアノシドの安定性／分解の情報を提供する。
【０２９７】
デルフィンジン−３−Ｏ−グルコシド、（Ｄｐ−Ｇｌｕ）、デルフィニジン−３−Ｏ−ルチノシド（Ｄｐ−Ｒｕｔ）およびシアニジン−３−Ｏ−ルチノシド（Ｃｎ−Ｒｕｔ）を、分析用に選択した。
【０２９８】
これらの調査は、調査した両方のデルフィニジングリコシドが、シアニジンルチノシドよりも分解しやすいことを示した。調査したＤｐ−ｇｌｃは、所定の条件下で、Ｄｐ−ｒｕｔよりも感受性であった。調査した全てのアントシアノシドは、回腸液を模したインキュベーション培地中で、緩衝溶液よりもわずかにより安定であった（図１３および１４を参照のこと）。安定性の増加は、複合培地（最終的にグルタチオンを再利用する）における推定上の安定化成分の存在によって引き起こされる可能性が最も高い。
【０２９９】
ＣａＣｏ−２細胞を、３７℃で２時間まで、１２０ｍｇのブラックカラント抽出物および３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌ培地でインキュベートした。３０、６０および１２０分で、３つのウェルを、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアントシアノシドの抽出により、分析用に加工した。
【０３００】
図１５に見られるように、調査した３つのアントシアノシドの全てが、ＣａＣｏ−２細胞に吸収された。６０分のインキュベーション後、最も高い吸収が、Ｃｎ−Ｒｕｔについて観察された。この時点で、ＣａＣｏ−２細胞中でのアントシアノシドの回収は、上清インキュベーション培地中で決定された濃度の２．５％の量であった。最も興味深いことに、％取り込みは、緩衝液培地およびインキュベーション培地（細胞非含有）中でのアントシアノシドの安定性に類似する。さらに、全てのアントシアノシドについて、６０分のインキュベーション後に最大吸収が見られることが観察された。
【０３０１】
６０ｍｇのビルベリー抽出物±３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌの無細胞インキュベーション培地を、３７℃で１時間保持した。試料を、ビルベリー抽出物中に存在する１５のアントシアノシドについて、インキュベーション時間の前後で分析した。
【０３０２】
本調査は、ＣａＣｏ−２試験の間に適用された条件で、インキュベーション培地（ｐＨ＝７．０）中でのアントシアノシドの安定性に基づく情報を提供する。次に、グルタチオンが安定性に及ぼす影響を解明する。
【０３０３】
図１６中で見られるように、全てのアントシアノシドが、グルタチオンにより安定化された。最も明白な安定化は、Ｄｐ−グリコシドについて観察された。このことは、Ｄｐ−グリコシドがｐＨ＝７．０で最も分解されやすいビルベリーグルコシドであるので、重要である。この分析調査より、グルタチオンは、ｐＨ＝７．０でアントシアノシドを分解から保護することが決定された。さらに、グルタチオンは、ビルベリー中に存在する全てのアントシアニジン構造を保護することが認められる。
【０３０４】
保護の詳細な分析により、保護の強度とアントシアニジンの化学構造との間に傾向が存在することが明らかになる。最も感受性である構造Ｄｐは、最も高い程度で安定化されるが、一方、最も安定な構造（Ｃｎ）に対する保護効果は、比較的低い。まとめると、調査した全てのアントシアノシドは、ｐＨ＝７．０で、１時間の間、３７℃で、グルタチオンの存在下で、２５％未満が分解した。
【０３０５】
ＣａＣｏ−２細胞を、６０ｍｇのビルベリー抽出物／３０ｍｇのグルタチオン含有または非含有／１００ｍ培地で、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３つのウェルを、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアントシアノシドの抽出により、分析用に加工した。
【０３０６】
図１７中で見られるように、調査した全てのビルベリーアントシアノシドは、グルタチオンの存在下でより良好に吸収された。このことは、増加した吸収と、アントシアノシドのグルタチオンでの安定化との相関を示す。最も可能性の高い説明は、アントシアノシドの吸収の程度は、インキュベーション培地中の無傷のアントシアノシドの濃度に依存するということである。換言すれば、アントシアノシドの吸収は、細胞の外側と内側との間での濃度勾配に依存し得るということである（外側の濃度がより高いと、吸収がより高い）。グルタチオンが細胞の外側でアントシアノシドの安定性を増加することが示されたので、細胞内への吸収は、提唱された理論に従う。
【０３０７】
実施例９
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）をリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分析した。残った溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３０８】
試料ｂ）２０ｍｇのＬ−システイン（０．０６５ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、十分に溶解するまで撹拌し、次いで、３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。
【０３０９】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシドの含有量を分析した。分解を、個々のピークのピークエリアにおける減少として表す（４時間後の％残留として計算された）。
【０３１０】
以下の表から、アントシアノシドは、ブランク（無保護の）試料と比較すると、ｐＨ＝７．０、３７℃で、Ｌ−システインの存在下、実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランク試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観察されたことを示したが、一方、保護された試料は、６５％を超える残留アントシアノシドを生じた。
【０３１１】
【表１９】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で上記に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注入した。
【０３１２】
実施例１０
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分析した。残存溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３１３】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。次いで、撹拌してビルベリー抽出物を溶解し、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０３１４】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、全てのアントシアノシドについて４時間後の残留％として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０３１５】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＬ−システインにより実質的に保護されていたことが決定された。
【０３１６】
【表２０】
実施例１１
物質
Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨにより提供されたビルベリーカプセル、試料番号：２００７０６０１および２００７０６０２。
【０３１７】
ビルベリー抽出物のみを含む試料番号２００７０６０１、ブランク試料として
ビルベリー抽出物および１０％システインを含む試料番号２００７０６０２
５％リン酸ナトリウム緩衝液
分析方法
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ、５３０ｎｍでの紫外可視検出器
実験
１００ｍｌのフラスコに、５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）および６０．０ｍｇのビルベリー抽出物の粉末を、カプセルから加えた。溶液を、全ての固体が十分に溶解するまで超音波処理した。試料を即時に取り、次いで、フラスコを３７℃の水浴に入れて４時間維持し、アントシアニンの残留率を決定した。
【０３１８】
結果および結論
ＨＰＬＣデータ
ＨＰＬＣエリアを、化合物の含有量の尺度として用いた。
【０３１９】
含有量は、未置換アントシアニジン塩基を含まなかった。
【０３２０】
２つのカプセル（２００７０６０１および２００７０６０２）の比較
以下の表および図２１〜２６は、システインの使用がビルベリー抽出物を安定化させるのに役立つ証拠を提供する。
【０３２１】
【表２１】
【０３２２】
【表２２】
【０３２３】
【表２３】
方法
ＣａＣｏ−２細胞の培養
ＣａＣｏ−２細胞を、２０％のウシ胎仔血清、１，２％の非必須アミノ酸、０．８３ ｍＭのＬ−グルタミン、１，２％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび０，１％のメルカプトエタノールを含むダルベッコ修飾イーグル培地中、５％ＣＯ２および９５％空気雰囲気下、３７℃で培養した。
【０３２４】
細胞を、７５ｃｍ２の培養フラスコ（Ｔ７５）中で生育させ、１週間後に継代した（ＰＢＳ緩衝液で隔日洗浄し、トリプシンで除去し、新しい培養フラスコに移した）。
【０３２５】
ＣａＣｏ−２試験
実験のため、細胞を１ウェル当たり３×１０５個の細胞の密度で６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２および９５％空気雰囲気下、３７℃で７〜８日間、コンフルエンシーに達するまで生育させた。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、ビルベリー（３０〜６０ｍｇ／１００ｍｌ培地）またはブラックカラント抽出物（３０〜６０ｍｇ／１００ｍｌ培地）を含む４ｍｌの培地で３０、６０または１２０分インキュベートした。安定化実験のために、１００ｍｌに３０ｍｇのグルタチオンを含む培地を用いた。
【０３２６】
対応するインキュベーション時間後、用いたインキュベーション培地の９００μｌを各ウェルから取り、１００μｌのギ酸と混合した。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１ｍｌの１０％ギ酸を用いて取り出した。細胞を３０秒にわたって３回超音波処理し、１０分間遠心分離し、ペレットを捨てた。上清をＨＰＬＣ用の試料として用いた。
【０３２７】
比較のため、アントシアノシドの安定性を、細胞非含有のインキュベーション培地中、３７℃にて、０〜１２０分試験した。インキュベーション培地を、上記のようにギ酸で安定化させた。
【０３２８】
ＨＰＬＣ分析方法（物質、機器および方法）：
アセトニトリル、メタノール（ＨＰＬＣグレード）、ギ酸（ＡＲ）、蒸留水。参照標準：シアニジン−３−Ｏ−グルコシド（Ｃｌ塩、項目１２０１、Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＡＳ、ノルウェー）
ポンプ：Ｍｅｒｃｋ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｕｍｐ ６２００
オートサンプラー：Ｍｅｒｃｋ ＡＳ ２０００、
検出器：ＨＰ−ＭＶＤ １０５０、５２０ ｎｍに設定
カラム：Ｂｉｓｃｈｏｆｆ、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ、２５０×４．６ｍｍ
移動相：Ａ：ギ酸／水＝１０／９０
Ｂ：メタノール／アセトニトリル／ギ酸／水＝２０／２０／１０／５０
勾配特性：（図１８を参照のこと）
流速：１．５ｍｌ／分
注入容積：２０μｌ
温度：４５℃
検出：５２０ｎｍ
較正 シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−Ｏ−グルコシドを用いる５点較正
定量：直線回帰解析に基づく外部標準化。分離した全てのアントシアノシドの応答因子を、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドに対して定量する。
【０３２９】
標準試料（シアニジン−３−Ｏ−グルコシド）
適切な量の標準を１０ｍｌフラスコに移し、１ｍｌのＭｅＯＨに溶解する。フラスコを、容積まで１０％リン酸で満たす。希釈物を、１０％リン酸中で調製した。
【０３３０】
試料の調製
アントシアノシドをギ酸で安定化した後、インキュベーション実験（細胞含有／非含有および安定化剤含有／非含有）からの試験溶液を、分析に用いた。試料を、ＨＰＬＣシステムに注入する前に、濾過により浄化した。
【０３３１】
例えば、０．５００ｇのビルベリー抽出物を、２％ＨＣｌを含む１０ｍｌのメタノール中に溶解し、２分間超音波処理した。１ｍｌの溶液を１０ｍｌフラスコに移し、１０％リン酸を用いて容積まで希釈した。試料をＨＰＬＣシステムに注入した。
【０３３２】
データ評価
％分解を、得られた初期値の％で表す。
【０３３３】
細胞への％取り込みとは、細胞中で見出された量に対する、対応する時間におけるインキュベーション培地中で得られた量の比を意味する。
【０３３４】
種々のｐＨ値における安定化されたアントシアニン
原料物質
ビルベリー抽出物、２００７０６０２、Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨ
還元Ｌ−グルタチオン、Ｂｉｏ−Ｃｈｅｍｉｃａｌの試薬
リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ値３．０〜１１．０
２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオンを、６０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（適切なｐＨのため）と共に１００ｍｌフラスコに加えた。固体が完全に溶解した後、６０ｍｇのビルベリー抽出物を撹拌しながら加え、３７℃で水浴に入れた。種々のｐＨ緩衝液溶液からの試料を取り、上記方法により、ＨＰＬＣにより分析した。
【０３３５】
実施例１２
製品（ビルベリー抽出物、Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨ（Ｈａｍｂｕｒｇ）を、３７％（ｍ／ｍ）アントシアノシドに調整した。未使用ビルベリー中のアントシアノシドの０．３〜０．４％（ｍ／ｍ）の平均含有量に基づき、手元の抽出物は、１００：１濃縮を表した。抽出物の残りの６３％は、大部分が未使用液果中に存在するタンパク質および炭水化物で表される。５００ｍｇのビルベリー抽出物および５０ｍｇのＬ−システインを含む５００ｍｇのビルベリー抽出物を併用して、以下で利用されるビルベリー／システインの組み合わせを製造した。以下に示すビルベリー抽出物は、システインを添加しない上記の生成物である。
【０３３６】
１２名のボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー抽出物を摂取した。１週間の休薬期間後、同じボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー／システインの組み合わせを摂取した。
【０３３７】
設計は、ランダム化したクロスオーバー観察であった。
【０３３８】
血漿試料を、対応する処置の第１日（処置前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５および４時間後）、第４日（処置前、ならびに処置の０．５時間後）および第７日（処置前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５および４時間後）の各期間の間に採取した。
【０３３９】
調査の主な目的は、両製剤中に存在するアントシアニンの血漿レベルを決定することである。
【０３４０】
分析の最初の実行において、血漿中に存在する全てのアントシアニンを固相抽出により抽出し、収集後、加水分解して、アントシアニジンを得た。この手順は、両方の製剤からのビルベリーアントシアニンの実際の吸収についての情報を提供し、かつ吸収された化合物の代謝による誤った結論を回避するために選択された。効力はアントシアニジン骨格に存在し、特定のグリコシド化パターンには存在しないが、各代謝産物（すなわち、グルクロニド）が製剤から吸収されたとは考えられないであろう。
【０３４１】
分析は、５４０ｎｍでの紫外検出によるＨＰＬＣを含んだ。定量は、信頼できるアントシアニジン標準での外部標準化に基づいた。方法の回収率は、デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシドおよびシアニジン−３−Ｏ−グルコシドを用いて評価した。これらの２つのビルベリーアントシアニンを、ブランク血漿に混合し、抽出し、調査試料と同じ方法で加水分解した。回収率は９５％を超えることが示された。調査試料の安定性は、処理されたブランク血漿試料に混合し、調査試料と正確に同じ方法で貯蔵することにより確認した。
【０３４２】
薬物動態学的パラメータは、標準的な非区画法（ｎｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ）を用いて計算された。
【０３４３】
略号一覧
ＡＮＯＶＡ・・・・・・分散分析
Ａｒａ・・・アラビノース
ＡＵＣ・・・曲線下面積
ＡＵＣ（０−ｉｎｆ） ・・・０時点から無限大までのＡＵＣ。
ＡＵＣ（０−ｔ） ・・・０時点から最後に測定した時点までのＡＵＣ。
ＡＵ（０−４ｈ） ・・・０時点から８時間までの曲線下面積。
β・・・排出速度定数
Ｃｍａｘ・・・得られた最大血漿濃度
Ｃｎ・・・シアニジン
ＣＶ・・・変動係数
Ｄｐ・・・デルフィニジン
Ｇａｌ・・・ガラクトース
Ｇｌｃ・・・グルコース
ＨＰＬＣ・・・高速液体クロマトグラフィ
ＭＳ・・・質量分析
Ｍｖ・・・マルビジン
Ｐｅ・・・ペオニジン
Ｐｔ・・・ペツニジン
ｔ１／２ ・・・最終血漿半減期
Ｔｍａｘ・・・最大血漿濃度までの時間（Ｃｍａｘ）
ＵＶ・・・紫外線
調査結果：
図２７〜４０は、ビルベリー／システインの組み合わせのアントシアニジン濃度が、システインを添加しなかったビルベリー由来の試料と比較した場合、血漿中のアントシアニジン濃度の少なくとも２倍量増加することを実証する。このことは、全アントシアニジン含有量および個別のアントシアニジンで観察され得る。
【０３４４】
以下の表は、ビルベリー中に存在する５つのアントシアニジン（すなわちシアニジン［Ｃｎ］、デルフィンジン［Ｄｐ］、ペツニジン［Ｐｔ］、ペオニジン［Ｐｅ］およびマルビジン［Ｍｖ］）について決定された血漿レベルの平均値±標準偏差（ｓ．ｄ．）を提供する。
【０３４５】
【表２４】
【０３４６】
【表２５】
【０３４７】
【表２６】
【０３４８】
【表２７】
【０３４９】
【表２８】
以下の表は、観察された平均血漿レベルから計算された薬物動態学的パラメータを提供する。
【０３５０】
【表２９】
【０３５１】
【表３０】
【０３５２】
【表３１】
【０３５３】
【表３２】
【０３５４】
【表３３】
実施例１３
試料の調製：
試料Ａは、実施例１のブランク試料と同じであった。
【０３５５】
試料Ｂ：４８ｍｇ（９．５重量％の還元型グルタチオン）のビール酵母抽出物を、６０．０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）を有する１００ｍｌフラスコに加えた。溶液を均質になるまで攪拌し、次いで、６０ｍｇ（０．０４９ｍｏｌのアントシアニン）のビルベリー抽出物を均質になるまで攪拌しながら加えた。試料を、撹拌しながら、３７℃の水浴中に４時間入れた。分解速度の分析をＨＰＬＣにより監視した。
【０３５６】
試料Ｃ：調製は、ビール酵母抽出物の量が１２０ｍｇであったという条件で、実施例Ｂと同じであった。
結果：
【０３５７】
【表３４】
ＨＰＬＣ試験パラメータは、上記実施例と同じであった。
【０３５８】
本実施例は、ビール酵母抽出物が試料のアントシアニン（ａｎｙｔｈｏｃｙａｎｉｎ）内容物の分解を減少させる強力な保護効果を示す。
【０３５９】
本発明を、好ましい実施態様を参照して記載してきたが、当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく形式および詳細において改変がなされ得ることを理解するであろう。明細書全体を通して引用された、全ての参考文献（背景におけるものを含む）は、その全体が本明細書中に援用される。
【０３６０】
当業者は、常套的な実験を用いるだけで、本明細書に特別に記載した発明の特定の実施態様の多くの均等物を理解するか、または確認することができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲の範囲内に包含されることが意図される。
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００８年３月１３日に出願された米国特許出願第１２／０４７，９９３号、２００７年３月１５日に出願された同第６０／８９５，０３４号、２００７年７月２６日に出願された同第６０／９５２，１１３号、および２００７年１１月５日に出願された同第６０／９８５，６０３号の利益を主張する。米国特許出願第１２／０４７，９９３号、同第６０／８９５，０３４号、同第６０／９５２，１１３号、および同第６０／９８５，６０３号のそれぞれの内容は、その全てが、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、アントシアニンおよびアントシアニジンを安定化するのに有用な方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
アントシアニンは、多くの花、果実および葉の魅力的な色に関与する水溶性色素である。一般に、それらは、酸性化アルコール性溶媒により植物から抽出され得、多くのものは食物着色料として市販で入手可能である。それらは、しばしば、飲料またはシリアルなどの他の食物に配合するのに適切な濃度の希釈液としてマルトデキストリンと共に供給される。
【０００４】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式Ｉに示す基本構造を有する。
【０００５】
【化１】
代表的な例は、シアニジン（３、５、７、３’、４’位でヒドロキシル化されている）、デルフィニジン（３、５、７、４’、５’位でヒドロキシル化されている）およびペラルゴニジン（３、５、７、３’位でヒドロキシル化されている）である。ヒドロキシル基は、通常、グリコシル化（例えば、アントシアニン）および／またはメトキシル化されている（例えば、マルビジンは、３’および５’ヒドロキシル基で置換され、ペオニジンおよびペツニジンは、３’ヒドロキシル基で置換される）。
【０００６】
アントシアニンは、２−フェニルベンゾピリウムまたはフラビリウム塩のポリヒドロキシルおよびポリメトキシル誘導体の水溶性グリコシドである。個々のアントシアニンは、分子中に存在するヒドロキシル基の数、これらのヒドロキシル基のメチル化の程度、分子に結合した糖の性質、数および位置、ならびに分子中の糖に結合した脂肪族または芳香族酸の数および性質が異なる。数百のアントシアニンが単離され、かつ分光測定手段により化学的に特徴づけられてきた。シアニジンおよびそれらの誘導体は、野菜、果実および花中に存在する最も一般的なアントシアニンである。
【０００７】
アントシアニンは、上記したように水素、水酸基またはメトキシル基が６つの異なる位置に見出され得る基本炭素骨格を共有する。果実および野菜では、炭素環に存在するヒドロキシル基の数およびこれらのヒドロキシル基のメチル化度の両方が異なる６つの基本的なアントシアニン化合物が主流である。炭素骨格に結合した糖の同一性、数および位置もまた可変性であり、炭素−３、炭素−５および時々炭素−７に結合し得る最も一般的な糖は、グルコース、アラビノース、ラムノースまたはガラクトースである。この基本に基づき、モノシド、ビオシドおよびトリオシドを区別することが可能である。
【０００８】
アントシアニンの化学構造に寄与する別の重要な可変物は、糖鎖上に存在し得るアシル化酸である。最も頻繁に用いられるアシル化剤は、カフェイン酸、フェルラ酸、シナピン酸およびｐ−クマル酸であるが、酢酸、リンゴ酸、マロン酸、シュウ酸およびコハク酸などの脂肪酸もまた存在し得る。３つまでのアシル化酸が同時に存在し得る。
【０００９】
それらの特定の化学構造のために、アントシアニンおよびアントシアニジンは、電子欠乏により特徴づけられ、このことにより、それらはフリーラジカルとしても知られる活性酸素種（ＲＯＳ）に対して非常に反応性になり、その結果、それらは強力な天然の抗酸化剤であると考えられる。
【００１０】
アントシアニンは、それらの化学構造の性質に部分的に起因して、不安定でありかつ分解しやすい傾向を有する。さらに、アントシアニンの安定性は、ｐＨ、数ヶ月の期間にわたる貯蔵、貯蔵温度、酵素の存在、光、酸素、ならびにタンパク質、フラボノイドおよび無機質の存在により影響を受ける。
【００１１】
より詳細には、アントシアニンの生物学的利用能は、ｐＨの変化に対するそれらの感受性に起因して低い。アントシアニンは、一般に、３．５以下のｐＨ値で安定であるので、胃条件下で安定である。しかしながら、それらは、より高いｐＨ値、より詳細には腸管などにより代表的なｐＨ値（ｐＨ７）で分解するので、有利な吸収および栄養価が非常に減少する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、安定化されたアントシアニンを提供する組成物および／または方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、驚くべきことに、安定なアントシアニン組成物、当該組成物を調製する方法および多様な苦痛を治療するための当該組成物の使用方法を提供する。本発明は、アントシアニンおよび安定化化合物の独特の組成物であって、２つの成分の組み合わせが、アントシアニンが分解を容易に受けないことを提供する組成物を記載する。本発明時まで、アントシアニンは、空気、光、タンパク質または酵素などの環境ストレスへの曝露により分解するであろうことが知られていた。より厄介なのは、中性または塩基性のｐＨを有する溶液中でのアントシアニンの不安定性であった。
【００１４】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンまたはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンを必要とする対象への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に対して、少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、４時間後のアントシアニンがシステインの存在下で送達される場合のアントシアニンの血漿濃度が、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量であることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンおよびシステインを投与することにより、対象において生物が利用可能なアントシアニンの量を増加させる方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達が一般に好ましい。１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１０〜約１である。
【００１５】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。安定化化合物の例には、（還元）グルタチオン、ジヒドロリポ酸、システイン、酵母抽出物およびそれらの混合物が挙げられる。
【００１６】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含まれると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００１７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対する比は、約０．１〜約１０、より詳細には約０．５〜約５、およびより詳細には約１〜約１である。
【００１８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２以上のｐＨ、例えば、約３のｐＨ、約４のｐＨ、約５のｐＨ、約６のｐＨ、約７のｐＨ、約８のｐＨ、約９のｐＨ、約１０のｐＨ、または約１１のｐＨ、約１２もしくはそれ以上の、例えば１４のｐＨを有する水性環境に曝露したときに、分解に対して安定である。
【００１９】
別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドである。
【００２０】
別のなおさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジンである。
【００２１】
本発明の別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン（ｐｅｒｌａｒｇｉｎｉｄｉｎ）、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンのグリコシド（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のアントシアノシドが挙げられる。
【００２２】
本発明はまた、本明細書に記載された安定化されたアントシアニン組成物を調製する方法に関する。
【００２３】
本発明はさらに、治療上の有効量の本明細書に記載された安定化されたアントシアニン組成物を投与することにより、多様な病気を治療する方法に関する。
【００２４】
従って、本発明はさらに、生物が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供する。
【００２５】
複数の実施態様が開示されているが、本発明のさらに他の実施態様は、以下の詳細な説明から、当業者に明らかになるであろう。明らかに、本発明は、全てが本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の明らかの局面において改変することが可能である。従って、詳細な説明は、事実上例示であり、限定するものではないと考えるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての深色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図２】図２は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての濃色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図３】図３は、ビルベリー抽出物（未保護）の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図４】図４は、図３に見られる無保護に対するＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図５】図５は、図３に見られる無保護に対するＧＳＨ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図６−１】図６Ａは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｂは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図６−２】図６Ｃは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｄは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図７】図７は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図８】図８は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたペツニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図９】図９は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図１０】図１０は、グルタチオンで保護されたまたは未保護のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの２つのｐＨ値における比較分解動態学を提供する。
【図１１】図１１は、ＤＨＬＡ保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較分解を提供する。
【図１２】図１２は、グルタチオン（ＧＳＨ）保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較の分解を提供する。
【図１３】図１３は、グルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて緩衝溶液中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１４】図１４は、ＣａＣｏ−２細胞を有するグルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて、インキュベーション培地中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１５】図１５は、リードアントシアノシドのＣａＣｏ−２細胞への細胞取り込みを実証する。
【図１６】図１６は、グルタチオンの有無でのビルベリーアントシアノシドの分解（３７℃、ｐＨ＝７．０で１時間）を提供する。
【図１７】図１７は、グルタチオンの有無でのＣａＣｏ−２細胞へのビルベリーアントシアノシドの細胞取り込みを実証する。
【図１８】図１８は、ＣａＣｏ−２実験のＨＰＬＣ解析についての勾配特性を提供する。
【図１９】図１９は、ＧＳＨで処理したビルベリー抽出物の安定性について、ｐＨ範囲３〜１１にわたって残留率およびｐＨ値を、および（同じｐＨ値における）ＧＳＨで処理しなかったビルベリー抽出の不安定性を、図で表現したものである。
【図２０】図２０は、特定のｐＨ範囲にわたるＧＳＨの保護効果を図で表現したものである。
【図２１】図２１は、０時間における２００７０６０１の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２２】図２２は、４時間後、３７℃での２００７０６０１のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２３】図２３は、０時間における２００７０６０２の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２４】図２４は、４時間後、３７℃での２００７０６０２のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２５】図２５は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０１のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２６】図２６は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０２のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２７】図２７は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察されたアントシアニジンの比較を提供する。
【図２８】図２８ａは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）のそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。図２８ｂは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全デルフィニジンのそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図２９】図２９は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペツニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３０】図３０は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペオニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３１】図３１は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全マルビジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３２】図３２は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３３】図３３は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３４】図３４は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３５】図３５は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３６】図３６Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。図３６Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。
【図３７】図３７Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。図３７Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。
【図３８】図３８Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。図３８Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。
【図３９】図３９Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。図３９Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。
【図４０】図４０Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。図４０Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび１つまたはそれ以上の安定化化合物を含む組成物に関する。従って、組成物は、アントシアニンが所定の期間にわたって容易に分解しないという点で「安定」である。
【００２８】
明細書および特許請求の範囲において、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープン・エンドな用語であり、「含むが、・・・に限定されない」ことを意味するものと解釈すべきである。これらの用語は、より限定的な用語「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」を包含する。
【００２９】
本明細書中で、および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに異なるように述べていない限り、複数の参照も含むことに留意すべきである。同様に、用語「１つの（ａ）」（または１つの（ａｎ））、「１つまたはそれ以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書中で互換可能に用いられ得る。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「により特徴付けられる」および「有する」が互換可能に用いられ得ることにも留意すべきである。
【００３０】
他に定義しない限り、本明細書中で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同様の意味を有する。本明細書中で特に言及される刊行物および特許は、本発明と関連付けて用いられ得たであろう刊行物に報告された化学物質、装置、統計学的解析および方法論を記載および開示することを含む全ての目的のために、それらの全体が参照として援用される。本明細書中で引用された全ての参考文献は、当業者の水準を示すものである。本明細書中のいかなるものも、先行発明のために本発明がそのような開示に先行する権利を与えられないことを自認するものと解釈されるべきではない。
【００３１】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン組成物を提供する。
【００３２】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、グリコシル化アントシアニン（アントシアノシド）およびアントシアノシドのアグリコン（アントシアニジン）の両方を包含することが意図される。本明細書の全体にわたって、アグリコンアントシアニジンがしばしば参照されるが、他に断りのない限り、限定的であると解釈すべきではない。いずれの用語が用いられる場合でも、他に断りのない限り、用語は互換的に用いられ、かつ、グリコシル化物質およびアグリコン物質を含むことが意図される。
【００３３】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式ＩＩに示す基本構造を有する。
【００３４】
【化２】
【００３５】
【表１】
式中、Ｒ１〜Ｒ７は、アントシアニジンの代表的な例を提供する。
【００３６】
アントシアニンのグリコシル化型は、アントシアニジンよりも水可溶性でありかつ安定である。アントシアノシドは、それらが含むグリコシル単位の数により分類される。モノグリコシドは、アグリコンの３−ヒドロキシル基に主に結合した１つの糖部分を含む。ジグリコシドは、一般に、３および５ヒドロキシ位、ならびにたまに３および７水酸化位に、２つの単糖を含む。トリグリコシドは、一般に、３位およびＣ−５またはＣ−７位の１つに２つの単位が存在する場合、結合を有する。３’、４’および／または５’位での糖鎖付加もまた可能である。
【００３７】
アントシアニンの最も一般的な糖には、単糖であるグルコース、ラムノース、ガラクトース、アラビノースおよびキシロースが挙げられる。アントシアニン中で最も頻繁に見出される二糖および三糖は、ルチノース、ソホロース、サンブビオースおよびグルコルチノースである。
【００３８】
アントシアニンは、カルボン酸での１つまたはそれ以上の水酸基によりアシル化され得る。酸は、最も一般的には、単糖の６位に連結するが、単糖の２、３および４位もまた可能である。一般的な脂肪酸には、マロン酸、酢酸、リンゴ酸、コハク酸およびシュウ酸が挙げられる。一般的な芳香族フェノール酸および脂肪族ジカルボン酸には、クマリン酸、カフェイン酸（ａｃｆｆｅｉｃ）、シナピン酸、フェルラ酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸および没食子酸が挙げられる。
【００３９】
用語「抽出物」は、葉、小枝、樹皮、根、幹、種子、花、液果、果実などの植物源から、例えば、適切な上記植物源から常套的な単離方法により得られたアントシアニン物質を意味することを意図するが、本明細書中に記載したものに限定されない。当業者に公知の種々のアントシアニンの抽出方法が存在する。これらの方法のいくつかは、例えば、米国特許第５，８１７，３５４号、米国特許第５，２００，１８６号、米国特許第５，９１２，３６３号、米国特許第４，２１１，５７７号、米国特許第４，３０２，２００号（それぞれ、参照として本明細書中で援用される）に記載されている。
【００４０】
適切なアントシアニン含有植物の例には、以下からなる群から選択される果実、野菜、花および他の植物が挙げられるが、これらに限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、アセロラ、セイヨウジュウニヒトエ（Ａｊｕｇａ ｒｅｐｔａｎｓ）、リンゴ、アンズ、チシマイチゴ、アボカド、バナナ、メギ、オオムギ、Ｂｅｇｏｎｉａ ｓｅｍｐｅｒｆｒｏｒｅｎｓ、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、シラン（Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｓｔｒｉａｔａ）、ビルベリー、クロマメ、クロダイズ、ブラックポテト、ブルーポテトおよびパープルポテト、ブラックベリー、ブルーベリー、クロマメノキ、ボイセンベリー、ソバ、カカオ、チャノキ、カナリーグラス、Ｃａｕｃａｓｉａｎ ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ、ロウバイ（Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｐｒａｅｃｏｘ）、セロリ、セイヨウミザクラ（Ｃｅｒａｓｕｓ ａｖｉｕｍ）、サクラ、セイヨウバクチノキ、チコリー、チャイブ、チョコベリー、セイヨウサンシュユ、コーンフラワー、コトネアスター、カウベリー、クランベリー、ガンコウラン、キク、サヨウオシャクジタケ（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ）、Ｄａｈｌｉａ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、セイヨウニワトコ、アメリカスノキ、デンドロビューム、ゴゼンタチバナ、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ｐｕｒｐｅａ、ナス、エルダーベリー、ソラマメ、ヤツデ、フェイジョア、イチジク、ニンニク、ガーベラ、オタネニンジン、アーティーチョーク、スグリ、ブドウ、グアバ、サンザシ、ハイビスカスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ Ｓａｂｄａｉｆｆａ、ハイブッシュブルーベリー、タチアオイ、スイカズラ、マルバアサガオ（Ｉｐｏｍｏｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ、ジャンボラン、キクイモ、インドマンゴスチン、レリオカトレア、レンズマメ、ローガンベリー、ルーピン、ライチ、トウモロコシ、マンゴー、マンゴスチン、マクイ、アラセイトウ（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ ｉｎｃａｎａ）、メコノプシス、Ｍｅｔｒｏｓｉｄｅｒｏｓ ｅｘｃｅｌｓａ、アワ、ナナカマドベリー、マルベリー、マートルベリー、オリーブ、タマネギ、オレンジ、ソメイヨシノ、パッションフルーツ、エンドウマメ、モモ、ピーナッツ、ナシ、エゴマ、ペチュニア、コチョウラン、ウオトリギ、アサガオ、パイナップル、ピスタチオ、セイヨウスモモ、ザクロ、Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ、パープルキャロット、マルメロ、ラビットアイ・ブルーベリー、ダイコン、レッドカラントおよびブラックカラント、レッドラズベリーおよびブラックラズベリー、レッドキャベツ、コメ、ダイオウ、ローズヒップ、ライムギ、サフラン、サラセニア、シープベリー、Ｓｏｐｈｏｒｏｎｉｔｉｓ ｃｏｃｃｉｎｅａ、ソルガム、スパークルベリー、イチゴ、Ｆｒａｇａｄａ Ｖｅｓｃａ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートチェリー、サツマイモ、タマリロ、タマリンド、タロイモ、タルトチェリー、Ｔｕｌｉｐ ｇｒｅｉｇｉｉ、カブ、スイレン、タニウツギ、コムギ、ワイルドライス、Ｖｅｒｂｅｎａ ｈｙｂｒｉｄａ、ヤムイモおよびそれらの混合物。
【００４１】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含まれると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００４２】
代表的には、抽出物は種々の方法で濃縮されて、アントシアニンが濃縮された溶液を提供する。例えば、限外濾過を用いて、分子量カットオフによる所望されない成分を除去することができる。濾過からの残留物は、液体として貯蔵され得るか、または例えば噴霧乾燥、凍結乾燥、フラッシュ乾燥、流動床乾燥、リング乾燥、トレー乾燥、真空乾燥、高周波乾燥またはマイクロ波乾燥によりさらに濃縮して粉末にすることができる。最終的に、抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。市販のアントシアニンは、Ａｒｔｅｍｉｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｆｏｒｔ Ｗａｙｎｅ，Ｉｎｄｉａｎａなどの供給源から得られ得る。市販のアントシアニン抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。従って、抽出物は、アントシアニン、および他のフラビノイド、糖などの他の植物性物質を含む。
【００４３】
アントシアニン抽出物は、さらに、クロマトグラフィ、ゲルクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ、結晶化、アフィニティクロマトグラフィ、分配クロマトグラフィなどの当該分野で公知の１つまたはそれ以上の方法で精製され得る。特定のアントシアニンの同定には、当業者に公知の方法で達成され得る１Ｈ ＮＭＲ、化学分解、クロマトグラフィおよび分光法、特に、単離されたアントシアニン化合物の特徴づけのためのホモ−およびヘテロ核の二次元ＮＭＲ技術などが挙げられる。
【００４４】
用語「精製された」および「単離された」は、上記アントシアニン抽出物からの１つまたはそれ以上のアントシアニンの精製および／または単離を参照するために用いられる。ここでも当該分野で公知の定法を用いて、アントシアニン抽出物の多様な成分を分離して精製物質とし得る。本発明の１つの局面では、抽出物のアントシアニンは、当該分野で公知の技術により実質的に精製および単離される。精製された化合物の純度は、通常、少なくとも約９０％、好ましくは少なくとも約９５％、ならびに最も好ましくは少なくとも約９９％、およびさらにより好ましくは少なくとも約９９．９重量％（例えば、約１００％）である。
【００４５】
本発明に従って、アントシアニン抽出物は、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニジン、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｌｄｉｎ）、ペツニジン、マルビジン、アピゲニニジン（ａｐｉｇｅｎｉｎｄｉｎ）、アウラチニジン（ａｕｒａｔｉｎｉｄｉｎ）、カペンシニジン、ユーロピニジン、ヒルスチジン、６−ヒドロキシシアニジン、ルテオリニジン、５−メチルシアニジン、プルチェリジン（ｐｕｌｃｈｅｌｌｉｄｉｎ）、ロシニジン、トリセトニジン（ｔｒｉｃｅｔｎｉｄｉｎ）、それらの誘導体および混合物からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび／またはアントシアニジンを含む。１つの実施態様では、アントシアニンおよびアントシアニジンは、シアニジン、ペオニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジン、それらのグリコシド誘導体およびそれらの混合物からなる群から選択される。さらに別の実施態様では、抽出物は、少なくとも１つのシアニジン塩基のアントシアニンを含む。
【００４６】
本明細書に記載される本発明において有用であり得るアントシアニンには、シアニジン−３−グルコシド；シアニジン ３−グルコシルルチノシド；シアニジン−３−ゲンチビオシド；シアニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−サンブニグリン、シアニジン−３−サンブ−５−グルコシド、シアニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン−３−ルチノシド、ペオニジン−３−グルコシド、ペオニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン、シアニジン、シアニジン−３ソフォロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、デルフィニジン−３−グルコシド、デルフィニジン−３−ガラクトシド、ペツニジン、ペツニジン−３−グルコシド、ペツニジン−３−ガラクトシド、マルビジン、マルビジン−３−アラビノシド、マルビジン−３−グルコシド、マルビジン−３−ガラクトシド、ケンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリンなどが挙げられるが、これらに限定されない：。
【００４７】
種々の植物由来のアントシアニンの適切な例には、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｉｕｍ）、シアニジン誘導体、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、シアニジン ３−（２”，３”−ジガロイル−β−グルコピラノース（３％）、シアニジン ３−（２”−ガロイル−β−グルコピラノース（３７％）、シアニジン ３−β−グルコピラノシド（６０％）、アセロラ、Ｍａｌｐｉｇｈｉａ ｍａｒｇｉｎａｔａ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、セイヨウジュウニヒトエ、シアニジン ３−（ジ−ｐ−クマロイル）ソフォロシド−５−グルコシド、リンゴ、Ｍａｌｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３アラビノシド、シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３グルコシド、シアニジン ３−キシロシド、アンズ、Ｐｒｕｎｕｓ ａｒｍｅｎｉａｃａ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３グルコシド、チシマイチゴ、Ｒｅｂｕｓ ｓｐｐ、アボカド、Ｐｅｒｓｅａ ｓｐｐ、アシル化シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、バナナ、Ｍｕｓａ ａｃｕｍｉｎａｔａ、Ｍ．ｂａｌｂｉｓｉａｎａ、イチジク、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｓｐｐ．、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、オオムギ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、シアニジンおよびシアン化物グリコシド、マメ、インゲンマメ（Ｐｈｅｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）（いくつかの栽培品種）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、Ｂｅｇｏｎｉａ ｓｅｍｐｅｒｆｌｏｒｅｎｓ ｃｖｓ、シアニジン誘導体、ベニバナチャ、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ ガラクトシド、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシド、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、３ シアニジン ３−誘導体、Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｓｔｒｉａｔａ、アシル化シアニジン ３，７，３’−トリグルコシド誘導体、ビルベリー、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｉｓ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ；Ｉｎｄｅｎａ、シアニジン−３−ガラクトシド（２２％）；シアニジン−３−ガラクトシド、シアニジン−３−グルコシド（９％）、シアニジン−３グルコシド、クロマメ、インゲンマメ、シアニジン−３−グルコシド（９６％）、シアニジン−３グルコシド、ブラックベリー（ヨーロッパ産およびアメリカ産）、Ｍｏｒｉｆｅｒｉ ｖｅｒｉ、Ｒｕｂｕｓ ｃａｅｓｉｕｓ、Ｒ．Ａｌｌｅｇｈｎｉｅｎｓｉｓ、Ｒ．ａｒｇｕｆｕｓ、Ｒ．ｃｕｎｅｉｆｏｌｉｕｓ、Ｒ．ｓｅｔｏｓｕｓ、Ｒ．ｔｒｉｖｉａｌｓ、シアニジン−グルコシド（７０−１００％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド、ブラックグレープ、多種多様、ブラックポテト、Ｓｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ、シアニジン−グリコシド、ブラックラズベリー、Ｒｕｂｕｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、シアニジン−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）（２０％）；シアニジン−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン−キシロシルルチノシド（４０％）；シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、（１７％）、シアニジン−ルチノシド（２３％）、クロダイズ、ダイズ、シアニジン−３−グルコシド（９６％）、シアニジン−３−グルコシド、ブルーベリー（５つの共通のＶａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｐｐ）、シアニジン−グルコシド（３％）；シアニジン−グルコシド、シアニジン−ガラクトシド（３％）、シアニジンガラクトシド、シアニジン−アラビノシド（３％）、シアニジン−３−アラビノシド、クロマメノキ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ、シアニジン−３−グルコシド（１４％）、シアニジン ３ グルコシド（１４％）、シアニジン＃アラビノシド（１０％）、シアニジン−３−アラビノシド（１０％）、シアニジン ３−ガラクトシド（６．５％）、シアニジン−３−ガラクトシド（６．５％）、ボイセンベリー（ニュージーランド）、シアニジン−３−ソフォロシド（４４．５％）、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド（２６．４％）、シアニジン−３ グリコシルルチノシド（２５．８％）、シアニジン−ルチノシド（３．３％）、ソバ、Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｓｐｐ．、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン−３−ガラクトシド、カカオ、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ、シアニジン ３−グルコシド（疑い）、シアニジン−３−グルコシド（疑い）、セロリ、Ａｐｉｕｍ ｓｐｐ．、セイヨウバクチノキ、Ｐｒｕｎｕｓ ｌａｕｒｏｃｅｒａｓｕｓ、シアニジン−３−アラビノシド、シアニジン−３−アラビノシド、チコリー、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、チャイブ、Ａｌｌｉｕｍ ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−アセチルグルコシド、シアニジン ３−（６マロニルグルコシド）、シアニジン ３−（３，６ジマロニルグルコシド）、チョークベリー、Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／ｌｐｒｏｎａ、シアニジン−３−ガラクトシド（６４．５％）、シアニジン−３−ガラクトシド、シアニジン−３−アラビノシド（２８．９％）、シアニジン−３ アラビノシド、シアニジン−３−グルコシド（２．４％）、シアニジン−３ グルコシド、シアニジン−３−キシロシド（４．２％）、シアニジン−３−キシロシド、コーヒー、Ｃｏｆｆｅａ Ａｒａｂｉｃａ ｃｖ．Ｂｏｕｒｂｏｎ Ｖｅｒｍｅｌｈｏ、シアナジン−３−グリコシド、シアナジン ３，５−ｄｉｇｌｙｅｏｓｉｄｅ、シアナジン ３−グリコシド、コトネアスター、Ｃｏｔｏｎｅａｓｔｅｒ Ｍｅｄｉｃ．Ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３ ガラクトシド、カウベリーまたはリンゴンベリー、Ｖ．ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ、シアニジン ３−ガラクトシド シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３ アラビノシド、シアニジン ３ グルコシド、Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｐｒａｅｃｏｘ、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−グルコシド、アシル化シアニジン ３−０−グルコシド、シアニジングリコシド、クランベリー（アメリカ産およびヨーロッパ産）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃｏｒｐｏｎ、Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ、シアニジン−ガラクトシド（１６〜２４％）、シアニジン−ガラクトシド、Ｖ．ｏｘｙｃｏｃｃｕｓ、シアニジン−アラビノシド（１３〜２５％）、シアニジンアラビノシド、クロウベリー（ＣｒＯｗｂｅｒｒｙ）、Ｅｍｐｅｔｒｕｍ ｎｉｇｒｕｍ、シアニジン ３−グルコシド シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ソフォロシド、キク、Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａ Ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ、シアニジン ３−オルト（６’−Ｏ−マロニル−β−グルコピラノシド、カラント（レッドおよびブラック）、Ｒｉｂｅｓ ｒｕｂｒｕｍ、Ｒ．ｎｉｇｒｕｍ、シアニジン−グルコシド（２〜１０％）、シアニジン−グルコシド、シアニジンサンブビオシド、シアニジン−ルチノシド（８〜１７％）、シアニジン−サンブビオシド（９−３１％）、シアニジン−ソフォロシド（４〜９％）、シアニジンキシロシルルチノシド（２８−７３％）、シアニジングルコシルルチノシド（１４〜２８％）、Ｃｙｎｅｉｎｏｎｕｒｎ ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、シアナジン ３−オルト（６−Ｏ ラムノシルグルコシド（８％）、セイヨウニワトコ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｅｂｕｌｕｓ、シアニジン ３−キシロシルグルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド、シアニジン ３サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド−５−グルコシド、シアニジン ３，５ ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノグルコシド、デンドロビューム、Ｐｈａｌａｅｎａｐｓｉｓ ｓｐｐ．、シアニジン誘導体、ゴゼンタチバナ、Ｃｏｍｕｓ ｓｕｅｃｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド（４％）、シアニジン ３−グルコシド（４％）、シアニジン ３−ガラクトシド（１６％）、２シアニジン誘導体（８０％）、エキネシア、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ｓｐｐ．、エルデンベリー（Ｅｌｄｅｎｂｅｒｒｙ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ、シアニジン−３−グルコシド（４２％）、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−サンブビオシド（４３％） シアニジン−３，５−ジグルコシド（２％）、シアニジン−３ サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）−５グルコシド（９％）、Ｇｅｎｔｉａｎｓ ｓｐｐ．、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドおよび３つの他の誘導体、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、Ｆａｔｓｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ、シアニジン ３−ラチロシド、フェイジョア、Ｆｅｉｊｏａ ｓｅｌｌｏｗｉａｎａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、イチジク、Ｆｉｃｕｓ ｃａｒｉｃａ ｓｐｐ、シアニジン ３−ラムノグルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ Ｘ、ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ｃｖ、Ｓｐｒｉｎｇ Ｇｌｏｒｙ、シアニジン誘導体、ニンニク、Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド（モノアシル化）、シアニジン ３−グルコシド（トリアシル化）、オタネニンジン、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、シアニジン ３−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラニル−（１ ２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、アーティチョーク、Ｃｙｎａｒａ ｓｃｏｌｙｍｕｓ、シアニジン ３−カフェイルグルコシド、シアニジン ３−カフェイルソフォロシド、シアニジン ３−ジカフェイルソフォロシド、スグリ、Ｒｉｂｅｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、ブドウ、Ｖｉｎｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ、シアニジン ３−モノグルコシド、シアニジン ３−モノグルコシド、シアニジン ３−モノグルコシド酢酸塩、シアニジン ３−モノグルコシド−ｐ−クマラート、グアバ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、サンザシ、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３ グルコシド、ハイビスカスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ、シアニジン−サンブビオシド（３０％）、タチアオイ、Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、他のシアニジングルコシド、スイカズラ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｎｉｔｉｄａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、ハナショウブ、Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ、シアニジン ３ＲＧ、シアニジン ３ＲＧ５Ｇ、シアニジン ３Ｒｇａｃ５Ｇ、アサガオ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ、６つのアシル化シアニジン ３−ソフォロシド−５ グルコシド、ジャンボラン、Ｍｙｔｃｉａｎａ ｊａｂｏｔｉｃａｂａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジ
ン ３−グルコシド、キクイモ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ、インドマンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎｉａ ｉｎｄｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド、シアニジン ３−サンブビオシド、レリオカトレア、アシル化シアン化物誘導体、レンズマメ、シアニジン ３−オルト（６”−マロニルグルコシド）、ローガンベリー、Ｒｕｂｕｓ ｌｏｇａｎｂａｃｃｕｓ、シアニジン−ソフォロシド（４８．１ ％）、シアニジングルコシド、シアニジン−グルコシド（２１．６％）、シアニジン−ルチノシド（６．２％）、ルーピン、Ｌｕｐｉｎｕｓ ｓｐｐ、シアニジングリコシド（存在を確認した）、ライチ、Ｌｉｔｃｈｉ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３ ガラクトシド、トウモロコシ、Ｚｅａ ｍａｙｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−（６”−マロニルグルコシド） シアニジン ３（３”，６”ジマロニル−グルコシド）マンゴー、Ｍａｎｇｉｆｅｒａ ｉｎｄｉｃａ（シアニジングリコシド、マンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ、シアニジン ３−ソフォロシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、マクイ、Ａｒｉｓｔｏｔｅｌｌａ ｃｈｉｌｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−，５−ジグルコシド、アラセイトウ、４つのアシル化シアニジン ３−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）−５ グルコシド、アワ、Ｐｅｒｎｎｉｓｅｔｕｍ ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、ナナカマドベリー、Ｓｏｒｂｕｓ ｓｐｐ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド シアニジン ３−β−Ｄグルコピラノシド、マルベリ、Ｍｏｒｕｓ ｎｉｇｒａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ソフォロシド、マートルベリー、Ｍｙｒｔｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド、オリーブ、Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン誘導体、タマネギ、Ａｌｌｉｕｍ ｓｅｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド、シアニジン ３−ラミナリオシド（ｌａｍｉｎａｒｉｏｓｉｄｅ）、オレンジ、Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン ３−グルコシド（９５％）、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、パッションフルーツ、Ｐａｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、エンドウマメ、Ｐｏｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｒｎ、シアニジン ３−ソフォロシド グルコシド、シアニジン ３−サンブビオシド−５−グルコシド、モモ、Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン誘導体、ピーナッツ、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ、シアニジングルコシド、ナシ、Ｐｙｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−アラビノシド、エゴマ、Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３，５−誘導体、Ｐｅｔｕｎｉａ ｓｐｐ．、シアニジン ３−ルチノシド、ウオトリギ、Ｇｒｅｗｉａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、パイナップル、Ａｎａｎｓ ｃｏｍｏｓｕｓ、シアニジン ３−ガラクトシド、シアニジン ３−ガラクトシド、ピスタチオ、Ｐｉｓｔａｃｉａ ｖｅｒａ、Ｐｒａｇｍｉｔｅｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ、シアニジン−３誘導体、セイヨウスモモ、２０００品種、１５種、シアニジン−グルコシド（３７％）、シアニジングルコシド、シアニジン−ルチノシド（４５％）、ザクロ、Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔａｍ、シアニジン−グルコシド（３０％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ジグルコシド（１７％）、パープルキャロット、Ｄａｕｃｕｓ ｃａｒｏｔａ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシルガラクトシド、シアニジン−ガラクトシド、シアニジン−ジガラクトシド、シアニジン−ガラクトシド、マルメロ、Ｃｙｄｏｎｉａ ｏｂｌｏｎｇａ、シアニジン−３ グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン誘導体、ダイコン、Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ、アシル化シアニジン ３−ソフォロシド−５−グルコシド、アシル化シアニジン ３ ジグルコシド−５−グルコシド、レッドキャベツ、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ ｃａｐｉｔａｔａ、シアニジングリコシド、ヨシ、Ｐｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−（６’’−，マロニルグルコシド）、シアニジン ３（３’’，６’’ジマロニル−グルコシド）、レッドオニオン、Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジン ３−グルコシド誘導体、レッドペチュニア、Ｐｅｔｕｎｉａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ソフォロシド、レッドラズベリー、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ、シアニジングルコシド（１７％）、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド（７％）、シアニジン−ソフォロシド（５０％）、シアニジングリコシルルチノシド（２６％）、シアニジン−ジグルコシド、ダイオウ、Ｒｎｅｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、コメ、Ｏｒｙｚａ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、ローズヒップ、Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３，５−ジグルコシド、ライムギ、Ｓｅｃａｒｅ ｃｅｒｅａｌｅ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノシルグルコシド、シアニジン ３−ラムノシルジグルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ルチノシド誘導体、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、シープベリー、Ｖｉｂｕｍｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノシルサンブビオシド、モロコシ、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ、シアニジン、シアニジングリコシド、スパークルベリー、Ｖ ａｒｂｏｒｅｕｍ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−アラビノシド、シアニジン ３−ガラクトシド、イチゴ、Ｆｒａｇａｃｉａ ａｎａｎａｓｓａ、シアニジン−グルコシド（微量）、シアニジン−グルコシド、ヒマワリ、Ｈｅｌｌａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３−キシロシド、アシル化シアニジン ３−キシロシド、シアニジン ３−バニリル サンブビオシド、スイートチェリー、Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｎｔｎ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド；シアニジン ３−スホロシド、サツマイモ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ ｂａｔａｔａｓ Ｓｏｐｈｒｏｎｉｔｉｓ ｃｏｃｃｉｎｅａ、シアニジン誘導体、５つのアシル化シアニジン ３，３’，７−トリグルコシド、タマリロまたはツリートマト、Ｃｙｐｈｏｍａｎｄｒｅａ ｂｅｔａｃｅａ、シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、タマリンド、Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、タロイモ、Ｃｏｌｏｃａｓｉａ ｅｓｕｃｕｌｅｎｔａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、タルトチェリー（ｂａｌａｔｏｎ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ ｃｖ．、Ｂａｌａｔｏｎ，Ｎｕｔｒｉｌｉｔｅ、シアニジン−３−ルチノシド−ヘキソース（７５％）、シアニジン−３−ルチノシド−ペントース（３％）、シアニジン−３−ルチノシド（１８％）、タルトチェリー（ｍｏｎｔｍｏｒｅｎｃｙ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ ｃｖ．（Ｍｏｎｔｍｏｒｅｎｃｙ，Ｎｕｔｒｉｌｉｔｅ）、シアニジン−３−ソフォロシド（８０％）、シアニジン−３−グルコシド（２０％）、シアニジン−３−グルコシド（２０％）、チューリップ、Ｔｕｌｉｐａ ｓｐｐ、シアニジン ３−Ｏ−（６”−ラムノシルグルコシド）、シアニジン ３−Ｏ−誘導体、カブ、ｂｒｉｓｓｉｃａ ｒａｐａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ジグルコシド−５−グルコシド、スイレン、Ｎｙｍｐｈａｓａ ａｌｂａ、シアニジン ３−０−（６’’アセチル−β−ガラクトピロシナーゼ（２３％）、シアニジン ３−０−ガラクトシド（２％）、シアニジン ３−Ｏ−ガラクトシド（２％）、Ｗｅｉｇｅｌａ ｓｐｐ．、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン ３−Ｏ−グルコシドキシロース、コムギ、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｓｐｐ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、アシル化シアニジングルコシド、シアニジン ３−ルチノシド、アシル化シアニジン ３−ルチノシド、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、ワイルドライス、Ｚｉｚａｎｉａ ａｑｕａｔｉｃａ、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノグルコシド、およびヤムイモ、Ｄｉｏｓｃｏｒａｃｅａ ｓｐｐ、シアニジン ３，５−ジグルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−グルコシド、シアニジン ３−ラムノグルコシド、シアニジン ３−ゲンチオビオシド、アシル化シアニジングルコシド。
【００４８】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、単量体のアントシアニンだけでなく、二量体および重合体（すなわち、３〜２０個のアントシアニジン単量体残基を含む）型のアントシアニンおよびロイコアントシアニジン（フラバン−３，４−ジオールとしても知られる）もまた意味することを意図する。アントシアニンは、置換（例えば、アルキル基、アルコキシ基など）を含み、特に上記のようにＯ−グリコシル化され得る。
【００４９】
組成物中のアントシアニンは、単独のアントシアニンであり得るか、またはアントシアニンの混合物を含み得る。特に、アントシアニンは、マルビジン、シアニジン、デルフィニジン、ペオニジン、ペラルゴニジンおよびペツニジン、ならびにそれらのグリコシドからなる群から選択される。代表的な例は、精製された形態で市販されている塩化マルビン（マルビジンジグルコシド）である。あるいは、アントシアニンは、上記のブドウ、ブラックキャロット、レッドキャベツ、ブラックベリー、ブラックカラント、クランベリーなどのアントシアニン含有植物を抽出することにより得られ得る。
【００５０】
本明細書中で用いられる句「安定化されたアントシアニン組成物」は、グリコシド（アントシアノシド）としてまたはアグリコン（アントシアニジン）としてのアントシアニンが、例えば、約３７℃、ｐＨ＝約７．０で、少なくとも約３．５時間にわたって、アントシアニンの最初の割合から少なくとも約５０％が未分解であることを意味する。同様に、この句は、同様の安定性を有する約４、約５、約６および約８のｐＨ値を含む。
【００５１】
本明細書中で用いられる用語「安定化化合物」は、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を包含することを意図する。理論によって限定されるべきではないが、チオール基とアントシアニンとの間で相互作用が起こり、その結果、チオール含有基が（しばしば、ジスルフィド−Ｓ−Ｓ−に）酸化され、かつ、アントシアニンが、後に遊離する水素原子を受け取ると考えられる。
【００５２】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物（例えば、ビール酵母）、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）およびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００５３】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニンに対するモル比は、約０．１〜約１０であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１である。
【００５４】
理論により限定されるべきではないが、以下は、本発明に関する驚くべき独特の知見の説明である。アントシアノシドは、無色の誘導体を形成することにより、ｐＨ移動を受けやすい。フラビリウムカチオンおよびキノノイダル塩基は着色され、平衡は、ｐＨ依存性［ｐＨ値＜２］の両方の種の存在によって通常影響されない。（スキーム１参照）この平衡は、非常に急速に確立され、かつ、この反応は可逆的であると考えられる。適切な条件下での水の「攻撃」は、一連の無色の誘導体（カルビノール塩基、カルコン）を生じる。反応のこの部分は緩徐に進行し、通常は可逆的ではない。脱色プロセスは、約３．５を超えるｐＨ値で開始する。分子の保護による水の攻撃の予防により、本明細書を通して記載したアントシアノシドの安定化が提供される。
【００５５】
【化３】
理論に基づけば、共色素沈着の公知の現象（「共色素」の存在下でアントシアノシドの増加した安定性を記載する）により、深色（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフトする）効果および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果が得られる。従って、チオール化合物が共色素として作用し得たかどうかの解明を行った。
【００５６】
理論に基づけば、アントシアノシドは、自己会合により、それらの安定性を増加することができる。濃度がより高くなると、自己会合の影響の可能性が高い。自己会合は、約０．０００１モル溶液濃度を超える濃度で起こる。自己会合は、チオール化合物の保護効果を隠蔽することを助け得るので、保護効果は多様な濃度で試験した。
【００５７】
理論に基づけば、共色素沈着は、深色性（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフトする）および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果をもたらすはずである。
【００５８】
紫外分光法に基づく本調査により、図１および２に示すように、ＤＨＬＡ（ジヒドロリポ酸）またはＧＳＨ（グルタチオン）のいずれも、深色または濃色効果を生じなかった。従って、安定性の増加は、別のメカニズムに関連している可能性が最も高い。
【００５９】
異なるｐＨ値についての新たに溶解させたシアニジン−３−Ｏ−グルコシド（保護および無保護）のλｍａｘシフトの観点からのスペクトル特性は、図１および２に示すように、同一であった。
【００６０】
ビルベリー抽出物（種々の濃度、モル濃度をシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表す）の安定性を、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの存在／非存在下で、ｐＨ依存性のλｍａｘでの吸収を紫外分光光度法により測定することにより調べた。
【００６１】
図３、４および５に示すように、本調査は、アントシアノシドが、全ての試験された濃度において、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度）およびＤＨＬＡ（１．４４ｍｍｏｌ濃度）による分解に対して、特に５〜６を超えるｐＨ値で保護されていることを示した。種々のｐＨ試験におけるλｍａｘは、未保護のおよび保護された溶液の間で異ならなかった。シアニジン−グルコシドでは濃色効果が起こらないことが観察されたので、チオール含有保護剤の安定化された効果は、共色素沈着とは異なると考えられる。
【００６２】
０．０００１モル濃度（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと表す）でのビルベリー抽出物の安定性を、ＵＶ分光法により、異なるｐＨ値で、経時的に、ＤＨＬＡ（１．４４ｍｍｏｌ濃度溶液）の非存在／存在下で調べた。
【００６３】
図６Ａ〜６Ｄに示すこれらの実験は、ＤＨＬＡが、未保護のアントシアノシドが急速に分解するｐＨ値（ｐＨ＞５〜６）でアントシアノシドを保護することを実証する。最も興味深いことに、データを統計モデル（回帰分析）にフィッティングすると、未保護の分解動態学は、直線回帰にフィットするが、一方、ＤＨＬＡ保護の分解動態学は、指数関数的回帰分析にフィットする。このことは、経時的に構成される保護機構を示す。
【００６４】
ビルベリー抽出物から選択したアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解動態学を、ｐＨ＝７および２５℃で、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存在下でインキュベーションした後、ＨＰＬＣにより経時的に調べた。
【００６５】
選択した時点にて、デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（非常に分解しやすい）、ペツリジン−３−Ｏ−ガラクトシド（中程度の感受性）およびシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（やや安定）のピークエリアを、ＨＰＬＣによりチェックした（図７、８および９を参照）。安定化特性を、グルタチオンの存在下で観察し、これらもまた指数関数的回帰分析に良好にフィットした。従って、保護機構が共色素沈着とは異なり、保護効果が経時的に構成される機構を含むと結論づけることは合理的である。
【００６６】
シアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（０．００１モル濃度溶液）を、ｐＨ＝ ３．１またはｐＨ＝７．０で、それぞれ、ＤＨＬＡ（１．４４ミリモル濃度溶液）の存在／非存在下で溶解した。反復のインキュベーションを、２５℃にて３日間、ＨＰＬＣにより行った。
【００６７】
図１０に見られるように、ＤＨＬＡの効果は、驚くべきことに、長期持続性である。ｐＨ＝７．０にて２５℃で３日間後、約４７％のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドがＤＨＬＡの存在下で回収されたが、一方、未保護の試料は、ほぼ０％のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドを生じた。ｐＨ＝３．１についての比較値は、それぞれ９５％および６１％であった。
【００６８】
ビルベリー抽出物由来のアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解動態学を、保護ＤＨＬＡ（図１１）（１．４４ｍｍｏｌ濃度溶液）およびグルタチオン（０．６５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存在下で、ＨＰＬＣ（図１２）により調査した。
【００６９】
評価の焦点は、基本的なアントシアニジン骨格が、ある程度保護効果に関与しているのかどうかであった。得られた結果を見ると、チオール化合物の保護効果が、未保護の分解の受けやすさと逆に相関していたことは妥当であると思われた。アントシアニジン骨格が感受性であるほど、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの保護効果はより良好であった。ＧＳＨについてのやや良好な明白な効果が観察された。
【００７０】
ビルベリー抽出物中に存在するアントシアニジンの置換パターンを、以下の表に示す：
【００７１】
【表２】
上記表に示すように、（ａ）分解のおよび（ｂ）保護機構についての構造が関係する効果の証拠が存在する。第１に、アントシアニンに関する置換の数が特定の役割を担い、第２に、同じ数の置換の数の範囲内で、メトキシ基の存在が安定性に影響する。
【００７２】
最も感受性が高いアントシアニジンは、３個のヒドロキシル基をＢ−環に有するデルフィニジンである。最も安定なのはペオニジンであり、１個のヒドロキシル基および１個のメトキシ基（シアニジンにおけるような２個のヒドロキシル基よりも優れる）を有する。
【００７３】
提案された新しく発見された機構は、ｐＨ＝７．０においてフラビリウムカチオンの安定化に関係があると考えられている。試験された全ての化合物は、確かに、カルボン酸基およびフリーのチオール基を有する。
【００７４】
システインは、アントシアノシドとの２つの結合点を有する。第１に、チオール部分（おそらく、アントシアニジンと４位で、または糖部分とさえも強固に会合する）の強い相互作用が存在し、第２に、カルボン酸官能基が、陽イオン部分を保護する。
【００７５】
【化４】
同様の機構は、ＤＨＬＡについても提案されている。チオール基の存在は、ＤＨＬＡをアントシアニジンに結合させ、その結果、カルボン酸官能基が分子の保護を補助し得ると考えられる。おそらく、ＤＨＬＡのシステインと比べて増加した効果は、システイン中に見出される単一のチオールと比較して２つのチオール基の「会合」より安定に割り当てられ得るであろう。
【００７６】
【化５】
同様に、還元型グルタチオンとの反応を描くことが可能である。この場合、１つの代わりに２つのカルボン酸官能基により、優れた活性が得られる。
【００７７】
【化６】
この機構は、ラジカルスカベンジャーとして作用するが、フラビリウムカチオンの反応カスケードに関連すると考えられる。
【００７８】
試験された２Ｒ−ＳＨ／Ｒ−ＳＳ−Ｒ化合物の酸化還元電位は、アントシアノシドのそれより低い。例えば、２ＧＳＨ／ＧＳＳＧ＝約−０．２２ Ｖであるが、酸化還元電位Ａ−ＯＨ／Ａ＝Ｏ ＝約０．２０−０．７５Ｖである（以下を参照）。
【００７９】
アントシアノシドのラジカル除去特性は、以下の反応により説明され得る：
【００８０】
【化７】
キノン構造は４’置換を必要とするので、これらの（セミ）キニンの安定性は、置換パターンに関連すると考えられる。一旦キノンが形成されると、反応のフラビリウム構造への逆転は、より可能性が低い。一方、５’位の任意の置換は、セミキノンの形成を妨害する。
【００８１】
このことは、３’−ＯＨおよび４’メトキシ置換構造が最も安定である理由を説明し得る。これは、無色の生成物を形成する、水に攻撃され得ないセミキノンを形成する。このようなセミキノンは、フラビリウムカチオンにより容易に再転換し得るか、または容易に再転換し得ない。
【００８２】
アントシアニジン／アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）は、以下の反応により、セミキノン／キノン（Ａ＝Ｏ）に転換する：
Ａ−ＯＨ−＞Ａ＝Ｏ＋Ｈ＋＋ｅ−
Ｒ−ＳＨ化合物は、以下の反応を受ける：
全プロセス：２ＲＳＨ−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ＋２Ｈ＋＋２ｅ−
詳細には：Ｒ−ＳＨ−＞Ｒ−Ｓ−＋Ｈ＋−＞Ｒ−Ｓ°＋ｅ−＋Ｈ＋
２Ｒ−Ｓ°−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ（Ｒ−Ｓ°・・・ラジカル）
このような機構は、２分子のアントシアノシドが２分子のＲ−ＳＨから１分子のＲ−ＳＳ−Ｒを形成し得、かつセミキノンとして残される様式で、１：１の消費を示すであろう。あるいは、１つのアントシアノシド分子は、キノンに転換されることにより、１つのＲ−ＳＳ−Ｒを形成し得る。
【００８３】
代わりの反応が起こらない場合、以下の反応カスケードが合理的である：
中性ｐＨでのＲ−ＳＨおよびアントシアノシドの組み合わせにおいて、主にＲ−ＳＨがＲ−Ｓ°に転換する。
【００８４】
Ｒ−Ｓ°の部分が、アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）（これらは、それによってＡ＝Ｏセミキノンに転換する）によって除去される場合、再びＲ−ＳＨを生じる。
【００８５】
ｐＨ＝７では、Ａ＝ＯはＲ−ＳＨの消費によりＡ−ＯＨに再転換され、次いで、公知のように最終的に次第に分解する。
【００８６】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパインおよびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００８７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比は、約０．１〜約１０であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１である。
【００８８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２、約３、約４、約５などから約１４まで、例えば、７以上のｐＨを有する水性環境に曝露した場合に、分解に対して安定である。
【００８９】
さらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドである。
【００９０】
なおさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジンである。
【００９１】
本発明のさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンのグリコシダーゼ（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のアントシアノシドを含む。
【００９２】
本発明はまた、本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物を製造する方法に関する。
【００９３】
本発明は、安定化化合物が、抽出および／または製造プロセスの間にアントシアニン含有植物物質と混合されて、それにより、一般に加工の際および貯蔵の際にさえも起こるアントシアニンの酸化的破壊を減少または除去し得ることを提供する。例えば、米国特許出願公開第２００２／００１８８２１号、（Ｃｈｒｙｓｔｅｌｅ Ｓｏｕｌｉｅｒら、２００２年２月１４日公開、その内容はその全体が本明細書に参考として援用される）に開示された抽出プロセスの間に、１つまたはそれ以上の安定化化合物を本明細書に記載の比で抽出媒体（溶媒）に加え得る。
【００９４】
代表的には、アントシアニン抽出物を安定化化合物と直接的に混合する。これは、２つの物質を、固体として単純に混合する、粉砕する、併用することなどにより、または水などの溶媒中に溶解することにより、達成され得る。本明細書の以下に記載の担体、ビタミン、抗酸化剤などの追加の添加剤を、定法により混合物に加えることができる。
【００９５】
１つの実施態様では、アントシアノシドを含む赤色果実抽出物を水溶液に入れ、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理する。水抽出物を、それが１５℃未満の均一な温度に到達するまで冷却する。水抽出物を濾過し、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、得られた濾過物を回収し、マクロ架橋ポリマー樹脂上に装填する。次いで、樹脂を鉱質除去水ですすぎ、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで、得られた樹脂をアルコール溶出溶液で溶出させ、これは必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理され得る。得られた溶出物を濃縮し、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで乾燥する。
【００９６】
別の実施態様では、安定化のプロセスを、以下のプロセスに従って、アルコール性赤色果実抽出物で行う。まず、パルプを全赤色果実から分離し、パルプを、必要に応じて本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を含み得るアルコール抽出溶液と接触させる。固相を液相から分離し、次いで、液相を必要に応じて本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理する。液相に含まれる残留アルコールの大部分を、減圧下で蒸発させて、アルコール性濃縮物を得る。
【００９７】
有利には、アルコール抽出に用いられる溶媒は、メタノール、エタノール、ブタノールおよびアセトンを含む群から選択される。
【００９８】
実際には、アルコール抽出は、室温で、それぞれ２０分で完結する少なくとも２つの連続的な工程で行われる。次いで、溶媒を留去する。さらに、パルプ単独からだけではなく、全果実からのアントシアノシドの抽出を行うことが可能である。
【００９９】
本発明によれば、安定化の工程は、それぞれ液体または粉末の形態で提供される、市販のまたは予め精製されたアントシアノシド抽出物である果実の抽出物を用いて開始することにより行うことができる。この場合、果実の抽出物または予め精製された抽出物を、次いで、精製工程の前に、アルコール、特にメタノール、または水のいずれかを用いて取り出し、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を用いて処理し得る。
【０１００】
本発明の精製の工程において、赤色果実抽出物の冷却は、抽出物の温度が均一かつ１０℃未満、特に５℃未満になるまで、温度を少なくとも約１２時間維持しながら、有利に行う。
【０１０１】
水性抽出物またはアルコール抽出物の濾過の工程に関して、これは、セルロースフィルタまたはステンレス鋼ガーゼ上で、０〜１００μｍまたは等価のカットオフで行われ得る。
【０１０２】
最終抽出物中の安定化されたアントシアノシドの力価および濃度をさらに増加させるため、樹脂から安定化されたアントシアノシドを溶出するアルコール溶液は、エタノール濃度が１０〜９０％、有利には４０％付近であるエタノール水溶液である。
【０１０３】
得られた安定化された溶出液を、３０℃の領域で、制御された温度で濃縮し、次いで、安定化された粉末を得るため、凍結乾燥または噴霧乾燥する。
【０１０４】
１つの実施態様では、例えば、ビルベリー抽出物の濃縮物およびＬ−システイン塩酸塩を併用し（９：１、ｗ／ｗ）、噴霧乾燥して、安定化されたビルベリー抽出物を粉末として得る。通常、ビルベリー抽出物のフリーのシステインに対する比は、約１０：１（ｗ／ｗ）である。
【０１０５】
本発明はさらに、治療上有効量の本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物を投与することにより、種々の病気を治療する方法に関する。病気には、増加した抗酸化能の必要性、関節硬化、疼痛の減少、炎症が挙げられる。疼痛の減少または除去には、関節炎、月経困難症、頭痛、関節痛、筋肉痛、骨関節炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障、網膜症、およびそれらの組み合わせなどの種々の形態の疼痛が挙げられる。
【０１０６】
従って、本発明はさらに、本明細書中で述べる種々の苦痛を治療するのに有用な、生物が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供する。安定化されたアントシアニン組成物は、以下で考察するいくつかの方法により投与され得る。
【０１０７】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンまたはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンのそれを必要とする対象への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に対して少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、アントシアニンがシステインの存在下で送達される場合、アントシアニンの血漿濃度が、投与の４時間後に、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量であることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンおよびシステインを投与することにより、対象における生物が利用可能なアントシアニンの量を増加させる方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達が一般に好ましい。
【０１０８】
１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１０〜約０．１、より詳細には約１０〜約０．５、そしてさらにより詳細には約１０〜約１である。本明細書中に記載の実施例で述べたように、システインを用いない場合、アントシアニンの生物学的利用能が劇的に減少することに留意することが重要である。
【０１０９】
システインの存在下でのアントシアニンの生物学的利用能の増加は、一般に、アントシアニンを単独で投与した後の生物学的利用能の少なくとも２倍である。理想的には、生物学的利用能は、生物学的利用能がシステインを配合しない同等のアントシアニンの３、４、５、１０および２０倍に増加するようにシステインを配合することにより、増加させられる。このことは驚くべき知見である。
【０１１０】
本発明の組成物は、種々の食物、飲料、スナックなどに配合され得る。１つの局面では、組成物は、消費の前に、食品の上に振り掛けられ得る。食品の上に振り掛けられる場合、デンプン、ショ糖またはラクトースなどの適切な担体を用いて、安定化されたアントシアニン組成物の濃度を分散させて食品への適用をより容易にし得る。
【０１１１】
本発明の組成物はまた、種々の調理済食品におけるサプリメントとして提供され得る。この応用の目的で、調理済食品とは、任意の本発明の組成物が添加された天然食品、加工食品、ダイエットまたは非ダイエット食品を意味する。本発明の組成物は、多くの調理済ダイエット食品（ダイエット飲料、ダイエットバーおよび調理済冷凍食品が挙げられるが、これらに限定されない）に直接配合され得る。さらに、本発明の組成物は、多くの調理済非ダイエット製品（キャンディ、チップスなどのスナック、調理済肉製品、ミルク、チーズ、ヨーグルト、スポーツバー、スポーツ飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、パンおよび任意の他の油脂含有食物などが挙げられるが、これらに限定されない）に配合され得る。本明細書中で用いられる用語「食品」は、ヒトまたは動物の消費に適した任意の物質を意味する。
【０１１２】
本発明の組成物は、フルーツジュース、ミルクセーキ、ミルクなどの種々の飲料に添加され得る。
【０１１３】
投与の好ましい方法は、経口である。本発明の組成物は、デンプン、ショ糖またはラクトースなどの適切な担体を用いて、錠剤、カプセル、溶液、シロップおよび乳濁液に処方され得る。本発明の錠剤またはカプセルは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する腸溶コーティングで被覆することができる。小腸で溶解するが胃で溶解しない適切な腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。
【０１１４】
本発明の組成物のソフトゲルカプセルへの製剤は、当該分野で公知の多くの方法で達成され得る。しばしば、製剤は、オイル、または他の懸濁剤もしくは乳化剤などの許容され得る担体を含むであろう。
【０１１５】
適切な任意の担体には、例えば、任意の供給源（例えば、天然または合成油、脂肪、ワックスまたはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）から誘導体化され得る脂肪酸、エステルおよびそれらの塩が挙げられる。さらに、脂肪酸は、非硬化油、部分硬化油、全硬化油またはそれらの組み合わせから、限定されることなく誘導体化され得る。脂肪酸（それらのエステルおよび塩）の非限定的な供給源の例には、種子油、魚油または水産油、キャノーラ油、植物油、ベニバナ油、ヒマワリ油、キンレンカ種子油、マスタード種子油、オリーブ油、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、米糠油、ババスナッツ油、パーム油、低エルカ酸ナタネ油、パーム核油、ルピナス油、ヤシ油、亜麻仁油、月見草油、ホホバ、コムギ胚芽油、獣脂、牛脂、バター、鶏脂、ラード、乳脂肪、シアバターまたはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１６】
特定の非限定的な魚油または水産油の供給源には、甲殻類油、マグロ油、サバ油、サケ油、メンハーデン、アンチョビー、ニシン、マス、イワシまたはこれらの組み合わせが挙げられる。特に、脂肪酸の供給源は、魚油または水産油（ドコサヘキサエン酸またはエイコサペンタエン酸）、ダイズ油または亜麻仁油である。あるいは、または上記で特定した担体と組み合わせて、蜜ロウ、ならびにシリカ（二酸化ケイ素）などの懸濁剤を、適切な担体として用いることができる。
【０１１７】
本発明の製剤はまた、栄養補助食品であるとも考えられる。用語「栄養補助食品」は、当該分野で認識されており、疾患を予防し得るかまたは望ましくない症状を緩和し得る食物において見出され得る特定の化学物質を説明することを意図する。
【０１１８】
本発明の製剤はさらに、有益な本発明の組成物の成分の安定化することを補助するか、または生物学的利用能を促進することを補助するか、もしくは個人の食事の追加の栄養素として働くための種々の成分を含み得る。適切な添加剤には、ビタミンおよび生物学的に許容され得るミネラルが挙げられ得る。ビタミンの非限定的な例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫおよび葉酸が挙げられる。ミネラルの非限定的な例には、鉄、カルシウム、マグネシウム、カリウム、銅、クロム、亜鉛、モリブデン、ヨード、ホウ素、セレン、マンガン、それらの誘導体、またはそれらの組み合わせが挙げられる。これらのビタミンおよび無機質は、限定されず、任意の供給源または供給源の組み合わせに由来し得る。ビタミンＢ群の非限定的な例には、チアミン、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、シアノコバラミン、ビオチン、パントテン酸またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
種々の添加物が、本組成物に配合され得る。本組成物の任意の添加物には、ヒアルロン酸、リン脂質、デンプン、糖、脂肪、抗酸化剤、アミノ酸、タンパク質、香料、着色料、加水分解デンプンおよびそれらの誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２０】
本明細書中で用いられる用語「抗酸化剤」は、当該分野で認識されており、化合物の酸化的劣化を防ぐかまたは遅延する合成物質または天然物質を意味する。抗酸化剤の例には、トコフェロール、フラボノイド、カテキン、スーパーオキシドジスムターゼ、レシチン、ガンマオリザノール；ビタミンＡ、Ｃ（アスコルビン酸）およびＥおよびβカロチンなどのビタミン；ローズマリーおよびサンザシ抽出物中に見出されるカモソール（ｃａｍｏｓｏｌ）、カモシン酸（ｃａｍｏｓｉｃ ａｃｉｄ）およびロスマノール、ブドウ種子またはマツ樹皮抽出物、ならびに緑茶抽出物中に見出されるプロアントシアニジンなどの天然成分が挙げられる。
【０１２１】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物を含む組成物は、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣製造の粉末化、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスにより製造され得る。組成物は、１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤または安定化されたアントシアニン組成物を使用され得る製剤に加工することを容易にする１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤または助剤を用いて、通常の様式で製剤され得る。
【０１２２】
本発明の組成物は、投与の実質的に任意の様式（例えば、経口、経頬、全身、注射、経皮、直腸、経腟など）に適した形態、または吸入またはガス注入による投与に適した形態をとり得る。
【０１２３】
全身用製剤には、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内または腹腔内注射）による投与のために設計されたもの、および経皮、経粘膜、経口または経肺投与のために設計されたものが挙げられる。
【０１２４】
有用な注射用製剤には、安定化されたアントシアニン組成物の水性または油性媒体中の無菌の懸濁液、溶液または乳濁液が挙げられる。組成物はまた、懸濁、安定化および／または分散された薬剤などの製剤を含み得る。注射用製剤は、例えば、アンプルまたは複数回投与容器中の単位投与形態で存在し得、かつ添加された保存料を含み得る。
【０１２５】
あるいは、注射用製剤は、使用の前に、適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱物質非含有水、緩衝液、ブドウ糖溶液などが挙げられるが、これらに限定されない）で再構成するための粉末形態で提供され得る。この目的のために、安定化されたアントシアニン組成物は、凍結乾燥などの任意の公知の技術で乾燥され、使用の前に再構成され得る。
【０１２６】
経粘膜投与のために、通過すべきバリアに適した浸透剤が製剤に用いられる。このような浸透剤は、当該分野で公知である。
【０１２７】
経口投与のために、本発明の組成物は、例えば、結合剤（例えば、α化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；賦形剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容され得る賦形剤を用いて通常の手段で製剤される、ロゼンジ、錠剤またはカプセルの形態をとり得る。錠剤は、例えば、糖、フィルムまたは腸溶コーティングを用いて、当該分野で周知の方法によりコーティングされ得る。
【０１２８】
経口投与用の液体製剤は、例えば、エリキシル剤、溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとり得るか、あるいは、使用の前に水または他の適切な媒体で構成するための乾燥製品として存在し得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素添加食用油脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分留植物油）；および保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸メチルもしくはプロピル）などの医薬上許容され得る添加物を用いて、通常の手段により製造され得る。製剤はまた、必要に応じて、緩衝塩、保存料、香料、着色料および甘味料を含み得る。
【０１２９】
経口投与用製剤は、適切に製剤されて、安定化されたアントシアニン組成物の周知されているような徐放を提供し得る。
【０１３０】
経頬投与用には、組成物は、通常の様式で製剤される錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。
【０１３１】
経直腸および経腟の投与経路のために、安定化されたアントシアニン組成物は、カカオバターまたは他のグリセリドなどの通常の坐薬基剤を含む溶液（停留浣腸）、坐薬または軟膏として製剤され得る。
【０１３２】
経鼻投与または吸入またはガス注入による投与のために、安定化されたアントシアニン組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フルオロカーボン、二酸化炭素または他の適切なガスを用いる加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾル噴霧の形態により、簡便に送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するための弁を提供することにより決定され得る。インヘラーまたはインサフレーター（例えば、ゼラチンから構成されるカプセルおよびカートリッジ）に用いるためのカプセルおよびカートリッジは、化合物およびラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤を含んで製剤され得る。
【０１３３】
持続性送達のために、安定化されたアントシアニン組成物は、移植または筋肉内注射による投与のためのデポー製剤として処方され得る。安定化されたアントシアニン組成物は、適切なポリマーもしくは疎水性物質（例えば、許容され得る油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性塩などの難溶性誘導体として、製剤され得る。あるいは、経皮吸収のために安定化されたアントシアニン組成物を徐々に遊離させる粘着ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達システムが用いられ得る。この目的のために、浸透促進剤を用いて、安定化されたアントシアニン組成物の経皮浸透を促進することができる。適切な経皮パッチは、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号；米国特許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１３４】
あるいは、他の送達システムが用いられ得る。リポソームおよび乳濁液は、安定化されたアントシアニン組成物を送達するのに用いられ得る送達媒体の周知例である。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの特定の有機溶媒もまた用いられ得るが、通常はより高い毒性の犠牲がある。
【０１３５】
所望であれば、組成物は、安定化されたアントシアニン組成物を含む１つまたはそれ以上の単位投与形態を含み得るパックまたはディスペンサー装置中に存在し得る。パックは、例えば、ブリスター包装などの金属またはプラスチックの箔を含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与のための指示書が添付され得る。
【０１３６】
軟質ゲルまたは軟質ゼラチンカプセルは、例えば、製剤を適切な媒体（例えば、米糠油および／または蜜ロウ）に分散させて高粘度混合物を形成することにより製剤され得るが、これに限定されない。次いで、この混合物を、軟質ゲル産業の当業者に公知の技術および機械を用いて、ゼラチンベースのフィルム中にカプセル化する。次いで、このように形成されたカプセルを、恒量まで乾燥させる。代表的には、カプセルの重量は、約１００〜約２５００ミリグラム、特に約１５００〜約１９００ミリグラムの重量であり、より詳細には、約１５００〜約２０００ミリグラムの重量である。
【０１３７】
例えば、軟質ゼラチンシェルを調製する場合、シェルは、約２０〜７０％のゼラチン、一般に、可塑剤および約５〜約６０重量％のソルビトールを含み得る。軟質ゼラチンカプセルの充填物は、液体（主に、米糠油もしくはコムギ胚芽油、および／または所望であれば蜜ロウ）などの担体であり、かつ、安定化されたアントシアニン組成物とは別に、親水性マトリックスを含み得る。親水性マトリックスは、存在する場合、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールである。さらなる成分は、必要に応じて、濃厚化剤および／または乳化剤である。１つの実施態様では、親水性マトリックスは、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール、５〜１５％のグリセロール、および５〜１５重量％の水を含む。ポリエチレングリコールはまた、プロピレングリコールおよび／または炭酸プロピレンと混合され得る。
【０１３８】
別の実施態様では、軟質ゲルカプセルは、ゼラチン、グリセリン、水および種々の添加物から調製される。代表的には、ゼラチンの割合（重量基準）は、約３０〜約５０重量％、特に約３５〜約重量％、およびより詳細には約４２重量％である。製剤は、約１５〜約２５重量％のグリセリン、より詳細には約１７〜約２３重量％、より詳細には約２０重量％のグリセリンを含む。
【０１３９】
カプセルの残りの部分は、代表的には水である。量は、約２５重量％〜約４０重量％で変動し、より詳細には約３０〜約３５重量％、およびより詳細には約３５重量％である。カプセルの残りは、一般に、香料、糖、着色料など、またはそれらの組み合わせから構成される約２〜約１０重量％で変動し得る。カプセルを加工した後、最終的なカプセルの含水量は、しばしば約５〜約１０重量％、より詳細には７〜約１２重量％、およびより詳細には約９〜約１０重量％である。
【０１４０】
製造については、標準的な軟質シェルゼラチンカプセルの製造技術を用いて、軟質シェル製品を調製し得ると考えられる。有用な製造技術の例は、プレートプロセス、Ｒ．Ｐ．Ｓｃｈｅｒｅｒによって開発されたロータリー・ダイ・プロセス、Ｎｏｒｔｏｎカプセルマシンを用いるプロセスならびにＬｅｄｅｒｌｅによって開発されたＡｃｃｏｇｅｌマシンおよびプロセスである。これらのプロセスのいずれも、成熟した技術であり、いずれも、軟質ゼラチンカプセルを調製することを望む者は誰でも広く利用可能である。
【０１４１】
乳化剤は、軟質ゼラチンカプセル内の成分の可溶化を補助するのに用いられ得る。界面活性物質、乳化剤または発泡剤の特定の例には、Ｄ−ソルビトール、エタノール、カラゲナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グアーガム、グリセロール、グリセロール脂肪酸エステル、コレステロール、白色蜜ロウ、ジオクチルソジウムスルホサクシネート、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ポリオキシル４０ステアリン酸、ソルビタンセスキオレアート、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、滑石、ソルビタントリオレアート、パラフィン、ジャガイモデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリコール、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油 ４０、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油 ６０、ポリオキシル３５ ヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、マクロゴール ４００、オクチルドデシルミリスチン酸、メチルセルロース、ソルビタンモノオレアート、グリセロールモノステアラート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート、ラウリルジメチルアミンオキシド溶液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール、乾燥炭酸ナトリウム、酒石酸、水酸化ナトリウム、精製ダイズレシチン、ダイズレシチン、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、中鎖トリグリセリド、無水クエン酸、綿実油−ダイズ油混合物および流動パラフィンが挙げられる。
【０１４２】
本発明はまた、本発明の組成物および適切な症状への使用についての指示書のパッケージ製剤を提供する。代表的には、いずれの形態のパッケージ製剤も、それを必要とする個体に投与される。代表的には、必要用量は、１日当たり約１〜約４用量である。
【０１４３】
本発明は、種々の症状の治療のための軟質ゼラチンカプセル中の本発明の組成物の製剤、使用、製造およびパッケージングを記載しているが、軟質ゼラチンカプセルのみに限定されると考えるべきではない。摂取可能な本発明の組成物は、上記のように、従来の錠剤、丸薬、ロゼンジ、エリキシル剤、乳濁液、硬質カプセル、液体、懸濁液などで送達され得る。
【０１４４】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物、またはその組成物は、一般に、意図する結果を達成するのに有効な量、例えば、治療される特定の炎症性に関連する症状を治療または予防するのに有効な量で用いられるであろう。組成物は、治療的に投与されて治療効果を達成し得るか、または予防的に投与されて予防的利益を達成し得る。治療効果とは、根本的な障害を根絶または緩和する、および／または根底にある障害に付随する１つまたはそれ以上の症状を根絶または緩和する結果、患者が気分または症状の改善を報告する（患者がまだ根本的な障害に罹患している可能性に関係なく）ことを意味する。例えば、本発明の組成物を、疼痛に罹患した患者に投与することにより、根底にある症状が根絶または緩和される場合のみではなく、患者が疼痛に付随する身体的不快感の重症度または持続時間の減少を報告する場合においても、治療効果が提供される。
【０１４５】
予防的投与のために、組成物は、上記症状の１つを発症するリスクを有する患者に投与され得る。
【０１４６】
投与される組成物の量は、例えば、治療される特定の症候、投与の様式、望まれる利点が予防上または治療上のいずれであるか、治療される症候の重症度、ならびに患者の年齢および重量などの種々の因子に依存するであろう。有効用量の決定は、当業者の能力の範囲内である。
【０１４７】
安定化されたアントシアニン組成物の全投与量は、代表的には、約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にあるであろうが、他の因子のなかでも、成分の活性、その生物学的利用能、投与様式および上記で考察した種々の因子に依存してより高くまたはより低くあり得る。投与の量および間隔は、個別に調整されて、治療上または予防上の効果を維持するのに十分な化合物の血漿レベルを提供し得る。例えば、化合物は、他の事項のなかでも、投与様式、治療すべき特定の症候および処方医の判断に依存して、週に１回、週に数回（例えば、隔日）、１日あたり１回または１日あたり複数回投与され得る。当業者は、過度の実験を行うことなく、有効な局所用量を最適化することができるであろう。
【０１４８】
１〜９１に連続的に列挙した以下の段落は、本発明の種々の局面を提供する。１つの実施態様では、第１段落（１）において、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物（但し、安定化化合物はグルタチオンではない）を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。
【０１４９】
２．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５０】
３．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１または２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５１】
４．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落１〜３のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５２】
５．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落１〜４のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５３】
６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１〜５のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５４】
７．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１５５】
８．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落７の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１５６】
９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５７】
１０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落９の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５８】
１１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落９または１０のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５９】
１２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落９〜１１のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６０】
１３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落９〜１２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６１】
１４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９〜１３のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６２】
１５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６３】
１６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落１５の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６４】
１７．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物（但し、安定化化合物は還元型グルタチオンではない）と組み合わせる工程を含む、方法。
【０１６５】
１８．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１７の方法。
【０１６６】
１９．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１７または１８のいずれかの方法。
【０１６７】
２０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落１７〜１９のいずれかの方法。
【０１６８】
２１．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落１７〜２０のいずれかの方法。
【０１６９】
２２．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７〜２１のいずれかの方法。
【０１７０】
２３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７の方法。
【０１７１】
２４．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落２３の方法。
【０１７２】
２５．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落１７の方法。
【０１７３】
２６．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落２２の方法。
【０１７４】
２７．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落２６の方法。
【０１７５】
２８．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物と組み合わせる工程を含む、方法。
【０１７６】
２９．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落２８の方法。
【０１７７】
３０．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落２８または２９のいずれかの方法。
【０１７８】
３１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落２８〜３０のいずれかの方法。
【０１７９】
３２．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落２８〜３１のいずれかの方法。
【０１８０】
３３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８〜３２のいずれかの方法。
【０１８１】
３４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８の方法。
【０１８２】
３５．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落３４の方法。
【０１８３】
３６．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落２８の方法。
【０１８４】
３７．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落３３の方法。
【０１８５】
３８．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落３７の方法。
【０１８６】
３９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８７】
４０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８８】
４１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落３９または４０のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８９】
４２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落３９〜４１のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９０】
４３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落３９〜４２のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９１】
４４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９〜４３のいずれかのｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９２】
４５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９３】
４６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落４５のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９４】
４７．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９５】
４８．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落４４のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９６】
４９．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落４８のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９７】
５０．ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物を製造する方法であって、組成物がｐＨ安定化するように、アントシアニン抽出物と少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物とを組み合わせる工程を含む、方法。
【０１９８】
５１．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落５０の方法。
【０１９９】
５２．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、段落５０または５１のいずれかの方法。
【０２００】
５３．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落５０〜５２のいずれかの方法。
【０２０１】
５４．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、段落５０〜５３のいずれかの方法。
【０２０２】
５５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０〜５４のいずれかの方法。
【０２０３】
５６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０の方法。
【０２０４】
５７．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドである、段落５６の方法。
【０２０５】
５８．安定化されたアントシアニン抽出物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、段落５０の方法。
【０２０６】
５９．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段落５５の方法。
【０２０７】
６０．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落５９の方法。
【０２０８】
６１．治療上有益な量の安定化されたアントシアニン組成物を対象に提供する方法であって、治療上有益な量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン組成物を対象に投与する工程を含む、方法。
【０２０９】
６２．関節硬化を治療する方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１０】
６３．アントシアニンの細胞内抗酸化濃度を増加または維持する方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１１】
６４．対象において疼痛を軽減または減少させる方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１２】
６５．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、段落４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１３】
６６．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１４】
６７．上記安定化されたアントシアニン抽出物が、丸薬、錠剤、粉末、顆粒、薄皮、軟膏、クリーム、ペースト、溶液、混合物、シロップ、粘液、乳濁液、チンキ、スピリット、ペイント、液滴または浸出液の形態である、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１５】
６８．生理学的に許容され得るアジュバントをさらに含む、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１６】
６９．アジュバントが、希釈液、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、基剤、香味料、甘味料、着色料、保存料、抗酸化剤、コーティング材料、膜形成物質、溶媒、可溶化剤、湿潤剤、吸収剤、濾過助剤、乳化剤、界面活性剤、懸濁剤、増粘剤、可塑剤、キレート剤、エアロゾル噴霧剤、発泡剤、酸化剤、アルカリ化剤、緩衝剤またはそれらの混合物である、段落６８の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１７】
７０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、段落２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１８】
７１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１９】
７２．システインの誘導体が、Ｎ−アセチルシステインであり、かつＳＨ−プロテイナーゼが、パパイン、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）またはそれらの混合物である、段落６５または６６の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２２０】
７３．アントシアニン富化抽出物を安定化させる方法であって、
アントシアニン富化抽出物を、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する少なくとも１つの安定化化合物と接触させることを含み、安定化化合物が、抽出プロセスの間の任意の時にアントシアニンと接触され得る、方法。
【０２２１】
７４．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、システイン、グルタチオンまたはそれらの混合物である、段落７３記載の方法。
【０２２２】
７５．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物のアントシアニン化合物に対するモル比が約０．１〜約１０である、段落７３の方法。
【０２２３】
７６．モル比が約０．５〜約５である、段落７５の方法。
【０２２４】
７７．モル比が約１である、段落７５の方法。
【０２２５】
７８．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物と接触させられる前に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２６】
７９．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物を抽出溶媒と併用した後に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２７】
８０．加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障または網膜症を治療する方法であって、段落１〜１６または３９〜４９のいずれかに記載の治療上有効量の安定化されたアントシアニン組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【０２２８】
８１．ビルベリー抽出物およびシステインを含む、安定化されたビルベリー組成物。
【０２２９】
８２．ビルベリー抽出物のシステインに対する比が、重量基準で約１０〜約１である、段落８１の安定化されたビルベリー組成物。
【０２３０】
８３．組成物が噴霧乾燥される、段落８１または８２に記載の安定化されたビルベリー組成物。
【０２３１】
８４．安定化された組成物が、ＨＰＬＣ解析により決定されるように、少なくとも約６ヶ月にわたって、少なくとも約８０％の初期のアントシアノシドを保持する、段落８１〜８３のいずれかの安定化されたビルベリー組成物。
【０２３２】
８５．アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシアニン組成物を対象に投与する工程を含む、アントシアニン組成物の生物学的利用能を増加させる方法であって、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を欠くアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する、方法。
【０２３３】
８６．アントシアニン物質が抽出物である、段落８５の方法。
【０２３４】
８７．抽出物がビルベリー抽出物である、段落８６の方法。
【０２３５】
８８．アントシアニン物質の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対する比が、重量基準に基づき約１０：０．１〜約１：１である、段落８５の方法。
【０２３６】
８９．ビルベリー抽出物の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対するアントシアニンの比が、約１０〜約１である、段落８７の方法。
【０２３７】
９０．システインの存在下におけるアントシアニンの投与の４時間後の血漿濃度が、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在がないアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量である、段落８５の方法。
【０２３８】
９１．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落８５〜９０のいずれかの方法。
【０２３９】
以下の実施例は、限定的なものであることを意味しないが、本発明のさらなる情報およびサポートを提供するために示される。
【０２４０】
本例示の章は、以下の表に示すように、ビルベリー抽出物およびブラックカラント抽出物に関する。
【０２４１】
【表３】
【実施例】
【０２４２】
実施例１
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２４３】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２４４】
試料ｃ）３０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．１４４ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２４５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２４６】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡまたはＧＳＨのいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランクの試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観察されたことを示したが、一方、保護された試料は、６０％を超える残留アントシアノシドを生じた。３０ｍｇのＤＨＬＡの保護効率は、２０ｍｇのＧＳＨに匹敵する。保護効率は、シアニジングリコシドと比較して一層保護が少ないデルフィニジングリコシドにより例示される基礎のアントシアニン骨格に関連するように思われる。各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多く残留するアントシアノシドを観察した。
【０２４７】
【表４】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２４８】
実施例２
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す追加の１ｍｌの試料（ブランク試料）を１５分毎にサンプリングした。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分析した。
【０２４９】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で保持した。１５分毎に、１ｍｌの試料を取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２５０】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられた。保護活性は、選択したアントシアノシドについて経時の比較的減衰により示すように、溶解後即時に開始し、かつ少なくとも４時間持続する。ここでも、保護効果は、４時間３０分のインキュベーション後の６５％の残留デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトース、６７％の残留ペツニジン−３−Ｏ−ガラクトースおよび７７％の残留シアニジン−３−Ｏ−ガラクトースにより例証されるアントシアニン骨格に関連すると考えられる。試験された各個別のアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシアノシドを観察した。
【０２５１】
【表５】
【０２５２】
【表６】
【０２５３】
【表７】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２５４】
実施例３
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら４時間保持した。その後、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２５５】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５６】
試料ｃ）２０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０９６ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５７】
試料ｄ）２０ｍｇのＬ−システイン酸（０．１６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５８】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２５９】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡ、ＧＳＨまたはＬ−システインのいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランクの試料では、９．５〜３３．４％の残留アントシアノシドが観察されたが、一方、ＧＳＨ保護された試料は、５０．４〜６５．０％の残留アントシアノシドを生じた。ＤＨＬＡについての比較の数値は３６．７〜３８．９％であった。各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシアノシドを観察した。
【０２６０】
【表８】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２６１】
実施例４
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。その後、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２６２】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０２４〜０．２８８ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した（水浴）。
【０２６３】
試料ｆ〜ｉ）５、１０、２０または６０ｍｇのＧＳＨ（０．０１６〜０．１９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した（水浴）。
【０２６４】
試料ｊ〜ｍ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２６５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのリードアントシアノシド（Ｄｐ−３−Ｏ−Ｇｌｕ、Ｄｐ−３−Ｏ−Ｒｕｔ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｇｌｕ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｒｕｔ）について４時間後の％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０２６６】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＤＨＬＡ、ＧＳＨまたはＬ−システインにより実質的に保護されていたことが決定された。
【０２６７】
【表９】
【０２６８】
【表１０】
【０２６９】
【表１１】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２７０】
実施例５
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を１５分毎に取った。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分析した。
【０２７１】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。１５分毎に、１ｍｌの試料を取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２７２】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられ得た。保護活性は、アントシアノシドについて経時の比較減少により示すように、溶解直後に開始し、かつ少なくとも４時間持続する。保護の有効性は、シアニジングリコシドの保護がデルフィニジングリコシドと比較して改善されたことにより例証されるように、アントシアニン骨格に依存的であり得る。しかしながら、ブランクを保護された試料と比較した場合、デルフィニジングリコシドは、シアン化物グリコシドよりも実質的により良く保護されていた。
【０２７３】
各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多く残留するアントシアノシドを観察した。
【０２７４】
【表１２】
【０２７５】
【表１３】
【０２７６】
【表１４】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２７７】
実施例６
試料ａ）５ｍｇの塩化デルフィニン（０．０１５ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、即時に試料を取り、１５分後、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７８】
試料ｂ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、試料を即時に取り、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７９】
試料ｃ）５ｍｇの塩化デルフィニジン（０．０１５ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ（０．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、ならびに１、２および３時間のインキュベーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２８０】
試料ｄ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ（０．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、１、２および３時間のインキュベーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２８１】
以下の表から、ＧＳＨはフリーのアントシアニン骨格をあまり保護しなかったことが決定された。ＧＳＨとデルフィニジンまたはマルビジンとのモル比は２：１より高いが、このことは、活性がないことはＧＳＨの低濃度に無関係であることを示す。フリーのアントシアニンの減衰は、ＧＳＨの存在によりほとんど影響を受けないが、これは、同じ骨格を有するアントシアニングリコシドを用いる知見とは対照的である。
【０２８２】
【表１５】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２８３】
実施例７
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整した）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化した。
【０２８４】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整した）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２８５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのアントシアノシドについて４時間後の％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表す。
【０２８６】
以下の表から、ＧＳＨは、特にアントシアノシドが分解を受けやすいｐＨ範囲（ｐＨ＞５）においてグルタチオンを保護することが決定された。驚くべきことではないが、アントシアノシドがそれ自身で安定なより低いｐＨ値では、保護効果は減少する。
【０２８７】
【表１６】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２８８】
保護効果は、保護された試料の残留比を、ブランク試料（選択されたｐＨ値でビルベリー抽出物を含むが、還元型グルタチオンは含まない）の残留比で割ることにより計算されるパラメータである。従って、この差は、ビルベリー抽出物のアントシアニンの安定性の約３〜約１１のｐＨ範囲にわたる還元Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）の効果を実証する。
【０２８９】
ｐＨ値が増加すると、抽出物の分解が増加することが認められた。試験されたｐＨ値の全てにおいて、Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）はアントシアニンを保護した。さらに、保護効果は、ｐＨ値と共に増加した。アルカリ性の環境では、グルタチオンは、上記表ならびに図１９および２０に示されるように、より高い安定化効果を有した。
【０２９０】
実施例８
試料ａ）６０ｍｇのＧＳＨ（０．１９２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌフラスコに入れ、溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１、２、３および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨの酸化型を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９１】
試料ｂ）６０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．１９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｏｌ）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１、２、３および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨの酸化型を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９２】
以下の表より、ＧＳＨは、水性緩衝液（ｐＨ＝７．０）中、３７℃でＧＳＳＧに酸化されたことが決定された。ビルベリー抽出物の添加は、ＧＳＨのＧＳＳＧへの酸化を約２〜約３ファクター促進するが、このことは、ビルベリー抽出物が、酸化還元反応のパートナーとして作用することを示唆する。この結果に基づき、ＧＳＨ／ＧＳＳＧの対が、酸化されたＧＳＳＧおよび還元されたアントシアノシドを生じるかなり低い酸化還元電位を有することが明らかであった。
【０２９３】
【表１７】
【０２９４】
【表１８】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射した。
【０２９５】
ブラックカラント抽出物の安定性
１２０ｍｇのブラックカラント抽出物／１００ｍｌの溶液を、ＣａＣｏ−２吸収試験に用いられるインキュベーション培地としての３０ｍｇのグルタチオン（ＧＳＨ）／緩衝化溶液中１００ｍｌ（ｐＨ＝７．０）と共にインキュベートした。
【０２９６】
これらの調査は、分析用溶液中およびグルタチオンの存在下でのＣａＣｏ−２試験に用いられるインキュベーション培地中での選択されたブラックカラントリードアントシアノシドの安定性／分解の情報を提供する。
【０２９７】
デルフィンジン−３−Ｏ−グルコシド、（Ｄｐ−Ｇｌｕ）、デルフィニジン−３−Ｏ−ルチノシド（Ｄｐ−Ｒｕｔ）およびシアニジン−３−Ｏ−ルチノシド（Ｃｎ−Ｒｕｔ）を、分析用に選択した。
【０２９８】
これらの調査は、調査した両方のデルフィニジングリコシドが、シアニジンルチノシドよりも分解しやすいことを示した。調査したＤｐ−ｇｌｃは、所定の条件下で、Ｄｐ−ｒｕｔよりも感受性であった。調査した全てのアントシアノシドは、回腸液を模したインキュベーション培地中で、緩衝溶液よりもわずかにより安定であった（図１３および１４を参照のこと）。安定性の増加は、複合培地（最終的にグルタチオンを再利用する）における推定上の安定化成分の存在によって引き起こされる可能性が最も高い。
【０２９９】
ＣａＣｏ−２細胞を、３７℃で２時間まで、１２０ｍｇのブラックカラント抽出物および３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌ培地でインキュベートした。３０、６０および１２０分で、３つのウェルを、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアントシアノシドの抽出により、分析用に加工した。
【０３００】
図１５に見られるように、調査した３つのアントシアノシドの全てが、ＣａＣｏ−２細胞に吸収された。６０分のインキュベーション後、最も高い吸収が、Ｃｎ−Ｒｕｔについて観察された。この時点で、ＣａＣｏ−２細胞中でのアントシアノシドの回収は、上清インキュベーション培地中で決定された濃度の２．５％の量であった。最も興味深いことに、％取り込みは、緩衝液培地およびインキュベーション培地（細胞非含有）中でのアントシアノシドの安定性に類似する。さらに、全てのアントシアノシドについて、６０分のインキュベーション後に最大吸収が見られることが観察された。
【０３０１】
６０ｍｇのビルベリー抽出物±３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌの無細胞インキュベーション培地を、３７℃で１時間保持した。試料を、ビルベリー抽出物中に存在する１５のアントシアノシドについて、インキュベーション時間の前後で分析した。
【０３０２】
本調査は、ＣａＣｏ−２試験の間に適用された条件で、インキュベーション培地（ｐＨ＝７．０）中でのアントシアノシドの安定性に基づく情報を提供する。次に、グルタチオンが安定性に及ぼす影響を解明する。
【０３０３】
図１６中で見られるように、全てのアントシアノシドが、グルタチオンにより安定化された。最も明白な安定化は、Ｄｐ−グリコシドについて観察された。このことは、Ｄｐ−グリコシドがｐＨ＝７．０で最も分解されやすいビルベリーグルコシドであるので、重要である。この分析調査より、グルタチオンは、ｐＨ＝７．０でアントシアノシドを分解から保護することが決定された。さらに、グルタチオンは、ビルベリー中に存在する全てのアントシアニジン構造を保護することが認められる。
【０３０４】
保護の詳細な分析により、保護の強度とアントシアニジンの化学構造との間に傾向が存在することが明らかになる。最も感受性である構造Ｄｐは、最も高い程度で安定化されるが、一方、最も安定な構造（Ｃｎ）に対する保護効果は、比較的低い。まとめると、調査した全てのアントシアノシドは、ｐＨ＝７．０で、１時間の間、３７℃で、グルタチオンの存在下で、２５％未満が分解した。
【０３０５】
ＣａＣｏ−２細胞を、６０ｍｇのビルベリー抽出物／３０ｍｇのグルタチオン含有または非含有／１００ｍ培地で、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３つのウェルを、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアントシアノシドの抽出により、分析用に加工した。
【０３０６】
図１７中で見られるように、調査した全てのビルベリーアントシアノシドは、グルタチオンの存在下でより良好に吸収された。このことは、増加した吸収と、アントシアノシドのグルタチオンでの安定化との相関を示す。最も可能性の高い説明は、アントシアノシドの吸収の程度は、インキュベーション培地中の無傷のアントシアノシドの濃度に依存するということである。換言すれば、アントシアノシドの吸収は、細胞の外側と内側との間での濃度勾配に依存し得るということである（外側の濃度がより高いと、吸収がより高い）。グルタチオンが細胞の外側でアントシアノシドの安定性を増加することが示されたので、細胞内への吸収は、提唱された理論に従う。
【０３０７】
実施例９
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）をリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分析した。残った溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３０８】
試料ｂ）２０ｍｇのＬ−システイン（０．０６５ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）をフラスコに加え、十分に溶解するまで撹拌し、次いで、３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。
【０３０９】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシドの含有量を分析した。分解を、個々のピークのピークエリアにおける減少として表す（４時間後の％残留として計算された）。
【０３１０】
以下の表から、アントシアノシドは、ブランク（無保護の）試料と比較すると、ｐＨ＝７．０、３７℃で、Ｌ−システインの存在下、実質的により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランク試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観察されたことを示したが、一方、保護された試料は、６５％を超える残留アントシアノシドを生じた。
【０３１１】
【表１９】
試料を、ＨＰＬＣ分析法で上記に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注入した。
【０３１２】
実施例１０
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフラスコに加え、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分析した。残存溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３１３】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。次いで、撹拌してビルベリー抽出物を溶解し、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０３１４】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、全てのアントシアノシドについて４時間後の残留％として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０３１５】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＬ−システインにより実質的に保護されていたことが決定された。
【０３１６】
【表２０】
実施例１１
物質
Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨにより提供されたビルベリーカプセル、試料番号：２００７０６０１および２００７０６０２。
【０３１７】
ビルベリー抽出物のみを含む試料番号２００７０６０１、ブランク試料として
ビルベリー抽出物および１０％システインを含む試料番号２００７０６０２
５％リン酸ナトリウム緩衝液
分析方法
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ、５３０ｎｍでの紫外可視検出器
実験
１００ｍｌのフラスコに、５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）および６０．０ｍｇのビルベリー抽出物の粉末を、カプセルから加えた。溶液を、全ての固体が十分に溶解するまで超音波処理した。試料を即時に取り、次いで、フラスコを３７℃の水浴に入れて４時間維持し、アントシアニンの残留率を決定した。
【０３１８】
結果および結論
ＨＰＬＣデータ
ＨＰＬＣエリアを、化合物の含有量の尺度として用いた。
【０３１９】
含有量は、未置換アントシアニジン塩基を含まなかった。
【０３２０】
２つのカプセル（２００７０６０１および２００７０６０２）の比較
以下の表および図２１〜２６は、システインの使用がビルベリー抽出物を安定化させるのに役立つ証拠を提供する。
【０３２１】
【表２１】
【０３２２】
【表２２】
【０３２３】
【表２３】
方法
ＣａＣｏ−２細胞の培養
ＣａＣｏ−２細胞を、２０％のウシ胎仔血清、１，２％の非必須アミノ酸、０．８３ ｍＭのＬ−グルタミン、１，２％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび０，１％のメルカプトエタノールを含むダルベッコ修飾イーグル培地中、５％ＣＯ２および９５％空気雰囲気下、３７℃で培養した。
【０３２４】
細胞を、７５ｃｍ２の培養フラスコ（Ｔ７５）中で生育させ、１週間後に継代した（ＰＢＳ緩衝液で隔日洗浄し、トリプシンで除去し、新しい培養フラスコに移した）。
【０３２５】
ＣａＣｏ−２試験
実験のため、細胞を１ウェル当たり３×１０５個の細胞の密度で６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２および９５％空気雰囲気下、３７℃で７〜８日間、コンフルエンシーに達するまで生育させた。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、ビルベリー（３０〜６０ｍｇ／１００ｍｌ培地）またはブラックカラント抽出物（３０〜６０ｍｇ／１００ｍｌ培地）を含む４ｍｌの培地で３０、６０または１２０分インキュベートした。安定化実験のために、１００ｍｌに３０ｍｇのグルタチオンを含む培地を用いた。
【０３２６】
対応するインキュベーション時間後、用いたインキュベーション培地の９００μｌを各ウェルから取り、１００μｌのギ酸と混合した。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１ｍｌの１０％ギ酸を用いて取り出した。細胞を３０秒にわたって３回超音波処理し、１０分間遠心分離し、ペレットを捨てた。上清をＨＰＬＣ用の試料として用いた。
【０３２７】
比較のため、アントシアノシドの安定性を、細胞非含有のインキュベーション培地中、３７℃にて、０〜１２０分試験した。インキュベーション培地を、上記のようにギ酸で安定化させた。
【０３２８】
ＨＰＬＣ分析方法（物質、機器および方法）：
アセトニトリル、メタノール（ＨＰＬＣグレード）、ギ酸（ＡＲ）、蒸留水。参照標準：シアニジン−３−Ｏ−グルコシド（Ｃｌ塩、項目１２０１、Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＡＳ、ノルウェー）
ポンプ：Ｍｅｒｃｋ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｕｍｐ ６２００
オートサンプラー：Ｍｅｒｃｋ ＡＳ ２０００、
検出器：ＨＰ−ＭＶＤ １０５０、５２０ ｎｍに設定
カラム：Ｂｉｓｃｈｏｆｆ、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ、２５０×４．６ｍｍ
移動相：Ａ：ギ酸／水＝１０／９０
Ｂ：メタノール／アセトニトリル／ギ酸／水＝２０／２０／１０／５０
勾配特性：（図１８を参照のこと）
流速：１．５ｍｌ／分
注入容積：２０μｌ
温度：４５℃
検出：５２０ｎｍ
較正 シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−Ｏ−グルコシドを用いる５点較正
定量：直線回帰解析に基づく外部標準化。分離した全てのアントシアノシドの応答因子を、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドに対して定量する。
【０３２９】
標準試料（シアニジン−３−Ｏ−グルコシド）
適切な量の標準を１０ｍｌフラスコに移し、１ｍｌのＭｅＯＨに溶解する。フラスコを、容積まで１０％リン酸で満たす。希釈物を、１０％リン酸中で調製した。
【０３３０】
試料の調製
アントシアノシドをギ酸で安定化した後、インキュベーション実験（細胞含有／非含有および安定化剤含有／非含有）からの試験溶液を、分析に用いた。試料を、ＨＰＬＣシステムに注入する前に、濾過により浄化した。
【０３３１】
例えば、０．５００ｇのビルベリー抽出物を、２％ＨＣｌを含む１０ｍｌのメタノール中に溶解し、２分間超音波処理した。１ｍｌの溶液を１０ｍｌフラスコに移し、１０％リン酸を用いて容積まで希釈した。試料をＨＰＬＣシステムに注入した。
【０３３２】
データ評価
％分解を、得られた初期値の％で表す。
【０３３３】
細胞への％取り込みとは、細胞中で見出された量に対する、対応する時間におけるインキュベーション培地中で得られた量の比を意味する。
【０３３４】
種々のｐＨ値における安定化されたアントシアニン
原料物質
ビルベリー抽出物、２００７０６０２、Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨ
還元Ｌ−グルタチオン、Ｂｉｏ−Ｃｈｅｍｉｃａｌの試薬
リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ値３．０〜１１．０
２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオンを、６０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（適切なｐＨのため）と共に１００ｍｌフラスコに加えた。固体が完全に溶解した後、６０ｍｇのビルベリー抽出物を撹拌しながら加え、３７℃で水浴に入れた。種々のｐＨ緩衝液溶液からの試料を取り、上記方法により、ＨＰＬＣにより分析した。
【０３３５】
実施例１２
製品（ビルベリー抽出物、Ｏｍｎｉｃａ ＧｍｂＨ（Ｈａｍｂｕｒｇ）を、３７％（ｍ／ｍ）アントシアノシドに調整した。未使用ビルベリー中のアントシアノシドの０．３〜０．４％（ｍ／ｍ）の平均含有量に基づき、手元の抽出物は、１００：１濃縮を表した。抽出物の残りの６３％は、大部分が未使用液果中に存在するタンパク質および炭水化物で表される。５００ｍｇのビルベリー抽出物および５０ｍｇのＬ−システインを含む５００ｍｇのビルベリー抽出物を併用して、以下で利用されるビルベリー／システインの組み合わせを製造した。以下に示すビルベリー抽出物は、システインを添加しない上記の生成物である。
【０３３６】
１２名のボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー抽出物を摂取した。１週間の休薬期間後、同じボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー／システインの組み合わせを摂取した。
【０３３７】
設計は、ランダム化したクロスオーバー観察であった。
【０３３８】
血漿試料を、対応する処置の第１日（処置前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５および４時間後）、第４日（処置前、ならびに処置の０．５時間後）および第７日（処置前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５および４時間後）の各期間の間に採取した。
【０３３９】
調査の主な目的は、両製剤中に存在するアントシアニンの血漿レベルを決定することである。
【０３４０】
分析の最初の実行において、血漿中に存在する全てのアントシアニンを固相抽出により抽出し、収集後、加水分解して、アントシアニジンを得た。この手順は、両方の製剤からのビルベリーアントシアニンの実際の吸収についての情報を提供し、かつ吸収された化合物の代謝による誤った結論を回避するために選択された。効力はアントシアニジン骨格に存在し、特定のグリコシド化パターンには存在しないが、各代謝産物（すなわち、グルクロニド）が製剤から吸収されたとは考えられないであろう。
【０３４１】
分析は、５４０ｎｍでの紫外検出によるＨＰＬＣを含んだ。定量は、信頼できるアントシアニジン標準での外部標準化に基づいた。方法の回収率は、デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシドおよびシアニジン−３−Ｏ−グルコシドを用いて評価した。これらの２つのビルベリーアントシアニンを、ブランク血漿に混合し、抽出し、調査試料と同じ方法で加水分解した。回収率は９５％を超えることが示された。調査試料の安定性は、処理されたブランク血漿試料に混合し、調査試料と正確に同じ方法で貯蔵することにより確認した。
【０３４２】
薬物動態学的パラメータは、標準的な非区画法（ｎｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ）を用いて計算された。
【０３４３】
略号一覧
ＡＮＯＶＡ・・・・・・分散分析
Ａｒａ・・・アラビノース
ＡＵＣ・・・曲線下面積
ＡＵＣ（０−ｉｎｆ） ・・・０時点から無限大までのＡＵＣ。
ＡＵＣ（０−ｔ） ・・・０時点から最後に測定した時点までのＡＵＣ。
ＡＵ（０−４ｈ） ・・・０時点から８時間までの曲線下面積。
β・・・排出速度定数
Ｃｍａｘ・・・得られた最大血漿濃度
Ｃｎ・・・シアニジン
ＣＶ・・・変動係数
Ｄｐ・・・デルフィニジン
Ｇａｌ・・・ガラクトース
Ｇｌｃ・・・グルコース
ＨＰＬＣ・・・高速液体クロマトグラフィ
ＭＳ・・・質量分析
Ｍｖ・・・マルビジン
Ｐｅ・・・ペオニジン
Ｐｔ・・・ペツニジン
ｔ１／２ ・・・最終血漿半減期
Ｔｍａｘ・・・最大血漿濃度までの時間（Ｃｍａｘ）
ＵＶ・・・紫外線
調査結果：
図２７〜４０は、ビルベリー／システインの組み合わせのアントシアニジン濃度が、システインを添加しなかったビルベリー由来の試料と比較した場合、血漿中のアントシアニジン濃度の少なくとも２倍量増加することを実証する。このことは、全アントシアニジン含有量および個別のアントシアニジンで観察され得る。
【０３４４】
以下の表は、ビルベリー中に存在する５つのアントシアニジン（すなわちシアニジン［Ｃｎ］、デルフィンジン［Ｄｐ］、ペツニジン［Ｐｔ］、ペオニジン［Ｐｅ］およびマルビジン［Ｍｖ］）について決定された血漿レベルの平均値±標準偏差（ｓ．ｄ．）を提供する。
【０３４５】
【表２４】
【０３４６】
【表２５】
【０３４７】
【表２６】
【０３４８】
【表２７】
【０３４９】
【表２８】
以下の表は、観察された平均血漿レベルから計算された薬物動態学的パラメータを提供する。
【０３５０】
【表２９】
【０３５１】
【表３０】
【０３５２】
【表３１】
【０３５３】
【表３２】
【０３５４】
【表３３】
実施例１３
試料の調製：
試料Ａは、実施例１のブランク試料と同じであった。
【０３５５】
試料Ｂ：４８ｍｇ（９．５重量％の還元型グルタチオン）のビール酵母抽出物を、６０．０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）を有する１００ｍｌフラスコに加えた。溶液を均質になるまで攪拌し、次いで、６０ｍｇ（０．０４９ｍｏｌのアントシアニン）のビルベリー抽出物を均質になるまで攪拌しながら加えた。試料を、撹拌しながら、３７℃の水浴中に４時間入れた。分解速度の分析をＨＰＬＣにより監視した。
【０３５６】
試料Ｃ：調製は、ビール酵母抽出物の量が１２０ｍｇであったという条件で、実施例Ｂと同じであった。
結果：
【０３５７】
【表３４】
ＨＰＬＣ試験パラメータは、上記実施例と同じであった。
【０３５８】
本実施例は、ビール酵母抽出物が試料のアントシアニン（ａｎｙｔｈｏｃｙａｎｉｎ）内容物の分解を減少させる強力な保護効果を示す。
【０３５９】
本発明を、好ましい実施態様を参照して記載してきたが、当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく形式および詳細において改変がなされ得ることを理解するであろう。明細書全体を通して引用された、全ての参考文献（背景におけるものを含む）は、その全体が本明細書中に援用される。
【０３６０】
当業者は、常套的な実験を用いるだけで、本明細書に特別に記載した発明の特定の実施態様の多くの均等物を理解するか、または確認することができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲の範囲内に包含されることが意図される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項２】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項３】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項４】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項４に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項７】
組成物が、約２と約１２の間のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項８】
アントシアニン抽出物組成物を安定化する方法であって、アントシアニンが安定化されるように、アントシアニン抽出物を十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物と併用する工程を含む、方法。
【請求項９】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１６】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１７】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１８】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１６記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１９】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１５に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２０】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１８に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２１】
アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシアニン組成物を対象に与える工程を含む、アントシアニンの生物学的利用能を増加させる方法であって、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を有しないアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する、方法。
【請求項２２】
安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在下における投与の４時間後のアントシアニンの血漿濃度が、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の非存在下におけるアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量である、請求項２１に記載の方法。
【請求項１】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項２】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項３】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項４】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項４に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項７】
組成物が、約２と約１２の間のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項８】
アントシアニン抽出物組成物を安定化する方法であって、アントシアニンが安定化されるように、アントシアニン抽出物を十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物と併用する工程を含む、方法。
【請求項９】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１６】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１７】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１８】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１６記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１９】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１５に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２０】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項１８に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２１】
アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシアニン組成物を対象に与える工程を含む、アントシアニンの生物学的利用能を増加させる方法であって、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を有しないアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する、方法。
【請求項２２】
安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在下における投与の４時間後のアントシアニンの血漿濃度が、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の非存在下におけるアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量である、請求項２１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【公表番号】特表２０１０−５２１４４９（Ｐ２０１０−５２１４４９Ａ）
【公表日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５３２４０（Ｐ２００９−５５３２４０）
【出願日】平成２０年３月１４日（２００８．３．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３１０５１
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０７１２８３４４）オムニカ ゲーエムベーハー (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月１４日（２００８．３．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３１０５１
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０７１２８３４４）オムニカ ゲーエムベーハー (10)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]