小血管の構造および機能を改善するための方法
【課題】小血管の構造及び機能を改善させ、そしてそれにより循環障害に関連する病的状態を緩解する新しい方法の提供。
【解決手段】本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。この方法は、典型的には、小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において本明細書に典型的に記載した活性剤１つ以上をそれを必要とする哺乳動物に投与することを包含する。
【解決手段】本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。この方法は、典型的には、小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において本明細書に典型的に記載した活性剤１つ以上をそれを必要とする哺乳動物に投与することを包含する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００４年１２月６日に出願された、ＵＳＳＮ６０／６３４，３１８号に対する優先権を主張する。ＵＳＳＮ６０／６３４，３１８号は、全ての目的のために、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（連邦支援研究開発下に行われた発明の権利に関する陳述）
本研究は米国国立衛生研究所のＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ Ｂｌｏｏｄ Ｌｕｎｇ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの認可番号ＨＬ３０５６８により部分的に支援されている。アメリカ合衆国政府は本発明における特定の権利を有してよい。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は血管医学の分野に関する。特に本発明は小血管の構造及び機能を改善させ、そしてそれにより循環障害に関連する病的状態を緩解する新しい方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
本明細書に記載する小動脈は２００μＭ未満の直径（灌流固定化後、又はインビボ）を有する動脈循環（静脈循環に対する）における血管である。高血圧、加齢、くも膜下出血、多発性梗塞痴呆、アルツハイマー病及び慢性腎臓病並びに他の状態に関連する小動脈の変化に関して広範な文献が存在する。種々の病理学的状態は正常な血管反応性の損失を伴うこれらの小動脈の肥厚化をもたらす場合がある。
【０００５】
血圧低下への正常な応答は抵抗を低減し、そして前方への流動を維持するための血管拡張である。血圧の低下に直面して小動脈を拡張することができないことは、標的臓器への血流の低下をもたらす。標的臓器が脳である場合は、前方への血流の低下は関与する小動脈の領域の梗塞をもたらす場合がある。
【０００６】
小動脈は大変小型のため、それらは通常は脳の小領域に対して機能しており、従って梗塞は小さく「物忘れ（ｓｅｎｉｏｒ ｍｏｍｅｎｔ）」として知覚されるのみである。しかしながら、本発明者等は長年に亘るこのような一連の傷害の蓄積が顕著な終末器損傷をもたらすと考える。
【０００７】
このような終末器損傷の防止のための主要な治療法は血圧の制御及び血漿中グルコース及び脂質の濃度の制御を包含する。小型〜大型の動脈の構造及び機能を改善するための特定の薬剤（例えばスタチン類）の使用は知られており、これらの薬剤がコレステロールを低下させ動脈への炎症細胞浸潤を低減する能力に関連していると推定されている（例えば、非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０９（２１Ｓｕｐｐｌ１）：ＩＩ１８−２６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。
【００１０】
即ち、特定の実施形態においては、本発明は小動脈の構造及び／又は機能を改善させる方法を提供する。方法は典型的には、小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において本明細書に典型的に記載した活性剤１つ以上をそれを必要とする哺乳動物に投与することを包含する。種々の実施形態において、小動脈は腎臓及び／又は脳及び／又は肺胞内の小動脈である。哺乳動物はヒト、例えばそのような治療又は予防を必要としている患者、又は非ヒトであることができる。即ち医療用及び獣医科用の用途が考えられる。種々の実施形態において、哺乳動物は記憶力損失又は学習力障害及び／又は腎機能障害及び／又は肺胞（肺）機能障害を有すると診断されたヒトである。特定の実施形態においては、哺乳動物はアテローム性動脈硬化症及び／又は関連の病的状態を有するかその危険性があると診断されていない、及び／又は、アテローム性動脈硬化症及び／又は関連する病的状態に関わる治療を受けていないヒトである。種々の実施形態において、活性剤（例えばペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質）は単位用量製剤である。種々の実施形態において、活性剤は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される。種々の実施形態において、投与の方法は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路によるものである。特定の実施形態においては、活性剤はＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ、環状変異Ｄ４Ｆ、環状変異Ｌ４Ｆ、環状変異リバースＬ４Ｆ、環状変異リバースＤ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される。種々の実施形態において、活性剤は製薬上許容しうる賦形剤との組み合わせにおいて提供される。
【００１１】
特定の実施形態においては、本発明は構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療における使用のための本明細書に記載した活性剤を提供する。更に又、構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療における使用のための医薬の製造のための本明細書に記載した活性剤の使用が提供される。
【００１２】
更に又、異常な小動脈の構造又は機能を特徴とする状態の治療のためのキットが提供される。キットは典型的には本明細書に記載した活性剤を含有する容器１つ以上、及び、異常な小動脈の構造又は機能を特徴とする状態の治療における活性剤の使用を教示する説明書を含む。種々の実施形態において、活性剤（例えばペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質）は単位用量製剤である。種々の実施形態において、活性剤は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される。特定の実施形態においては、活性剤はＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ、環状変異Ｄ４Ｆ、環状変異Ｌ４Ｆ、環状変異リバースＬ４Ｆ、環状変異リバースＤ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される。種々の実施形態において、活性剤は製薬上許容しうる賦形剤との組み合わせにおいて提供される。
定義
「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」という用語は、単離されたポリペプチドに言及している場合は、そのネイティブの状態において存在する場合に通常それに付随している成分を実質的又は本質的に含有しない物質を指す。核酸及び／又はポリペプチドに関しては、用語は、天然においてそれに典型的にフランキングしている配列にもはやフランキングされていない核酸又はポリペプチドを指す。化学的に合成されたポリペプチドは、それがネイティブの状態で（例えば血液、血清中において）存在しないため「単離された」ものである。特定の実施形態においては、「単離された」という用語はポリペプチドが天然に存在しない場合を指す。
【００１３】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「蛋白」という用語はアミノ酸残基の重合体を指すために本明細書においては互換的に使用する。用語はアミノ酸残基１つ以上が相当する天然に存在するアミノ酸の人工的化学的類縁体であるアミノ酸重合体、並びに、天然に存在するアミノ酸重合体に適用する。
【００１４】
「両親媒性ヘリックスペプチド」という用語は少なくとも１つの両親媒性ヘリックス（両親媒性ヘリックスドメイン）を含むペプチドを指す。本発明の特定の両親媒性ヘリックスペプチドは両親媒性ヘリックス２つ以上（例えば３、４、５等）を含むことができる。
【００１５】
「クラスＡ両親媒性ヘリックス」という用語は、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の隔離をもたらすα−ヘリックスを形成する蛋白構造を指す（例えばＳｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：１０３−１１７参照）。
【００１６】
「アポリポ蛋白Ｊ（ａｐｏＪ）」は種々の名称、例えばクラステリン、ＴＲＰＭ２、ＧＰ８０及びＳＰ４０，４０により知られている（Ｆｒｉｔｚ（１９９５）Ｐｐ１１２， Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ：Ｒｏｌｅ ｉｎ Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ（Ｈａｒｍｏｎｙ ＪＡＫ Ｅｄ．），Ｒ．Ｇ．Ｌａｎｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ，ＴＸ）。これは当初はヘテロ２量体糖蛋白及び培養ラットセルトーリ細胞の分泌蛋白の成分として説明されていた（Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ；２７：２３３２４０）。翻訳産物はジスルフィド結合した３４ｋＤａのαサブユニット及び４７ｋＤａのβサブユニットへの細胞内切断を起こす一本鎖前駆体蛋白である（Ｃｏｌｌａｒｄ ａｎｄ
Ｇｒｉｓｗｏｌｄ（１８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６：３２９７−３３０３）。これは細胞傷害、脂質輸送、アポトーシスに関連しており、そして細胞傷害又は細胞死により生じる細胞破砕物のクリアランスに関与している。クラステリンは脂質、ペプチド及び蛋白及び疎水性プローブ１−アニリノ−８−ナフタレンスルホネートを含む種々の分子に高い親和性で結合することがわかっている（Ｂａｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４０：１１８２８−１１８４０）。
【００１７】
クラスＧの両親媒性ヘリックスは球状蛋白中に存在し、そしてそのためクラスＧと称されている。このクラスの両親媒性ヘリックスの特徴は、それが狭小な非極性面と共に極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を保有している点である。狭小な非極性の面の為に、このクラスはリン脂質とは容易に会合しない（Ｓｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．８：１０３−１１７；Ｅｒｒａｔｕｍ（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．９：７９参照）。数個の交換可能なアポリポ蛋白はＧ両親媒性ヘリックスと同様であるが同一ではない特性を有している。クラスＧの両親媒性ヘリックスと同様、この別のクラスは極性の面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を有している。しかしながら、狭小な非極性の面を有するクラスＧの両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスは広大な非極性の面を有しており、これによりこのクラスはリン脂質と容易に結合することができ、クラスはこれを両親媒性ヘリックスのクラスＧと区別するためにＧ＊と命名されている（Ｓｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３：１４１−１６６；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｐ．１０９−１４２， Ｔｈｅ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｈｅｌｉｘ， Ｅｓｐａｎｄ，Ｒ．Ｍ．Ｅｄ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ参照）。両親媒性ヘリックスドメインを識別して分類するコンピュータープログラムがＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８７−２９６に記載されており、そして例えばヘリカルホイールプログラム（ＷＨＥＥＬＰＰＡＲＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットプログラム（ＨＥＬＮＥＴ、ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリカルホイールの追加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯ又はＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットの追加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）等が包含される。
【００１８】
「緩解する」という用語は「アテローム性動脈硬化症の症状１つ以上を緩解すること」に関して使用する場合は、アテローム性動脈硬化症及び／又は関連する病的状態の症状の特徴１つ以上の低減、防止又は排除を指す。このような低減は、例えば、酸化リン脂質の低減又は排除、アテローム性動脈硬化プラークの形成及び破壊の低減、心臓発作、アンギナ又は卒中のような臨床事象の低減、高血圧の低減、炎症性蛋白生合成の低減、血漿中コレステロールの低減等を包含する。
【００１９】
「エナンチオマーアミノ酸」という用語は相互に重ね合わせることができない鏡像である少なくとも２つの形態において存在できるアミノ酸を指す。大部分のアミノ酸（グリシンを除く）はエナンチオマー性であり、いわゆるＬ型（Ｌアミノ酸）又はＤ型（Ｄアミノ酸）として存在する。大部分の天然に存在するアミノ酸は「Ｌ」アミノ酸である。「Ｄアミノ酸」及び「Ｌアミノ酸」という用語は、面−偏光の回転の特定の方向よりはむしろアミノ酸の絶対的配置を指すために使用する。その使用法は当業者の知る標準的な使用法と合致する。アミノ酸は本明細書においては、標準的な１文字又は３文字のコード、例えばＨａｎｄｂｏｏｋ Ｏｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＤｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎにおけるＳｔａｎｄａｒｄ ＳＴ．２５に示されているものを用いて標記する。
【００２０】
「保護基」という用語は、アミノ酸の官能基（例えば側鎖、αアミノ基、αカルボキシル基等）に結合するとその官能基の性質をブロック又はマスクする化学基を指す。好ましいアミノ末端保護基は例えばアセチル又はアミノ基である。他のアミノ末端保護基は例えば脂肪酸の場合のようなアルキル鎖、プロペニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。好ましいカルボキシ末端保護基は例えばアミド又はエステルを形成する基を包含するがこれらに限定されない。
【００２１】
「酸化剤による酸化からリン脂質を保護する」という表現は、そのリン脂質が酸化剤（例えば過酸化水素、１３−（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５−（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、ＨＥＴＥ等）と接触した場合にリン脂質の酸化の速度（又は生成した酸化リン脂質の量）を低減する化合物の能力を指す。
【００２２】
「低密度リポ蛋白」又は「ＬＤＬ」という用語は当業者の通常の使用法に従って定義される。一般的に、ＬＤＬは超遠心分離で単離した場合に密度範囲ｄ＝１．０１９〜ｄ＝１．０６３に存在する脂質−蛋白複合体を指す。
【００２３】
「高密度リポ蛋白」又は「ＨＤＬ」という用語は当業者の通常の使用法に従って定義される。一般的に、ＨＤＬは超遠心分離で単離した場合に密度範囲ｄ＝１．０６３〜ｄ＝１．２１に存在する脂質−蛋白複合体を指す。
【００２４】
「グループＩのＨＤＬ」という用語は酸化脂質（例えば低密度リポ蛋白の場合）を低減するか、又は、酸化剤による酸化から酸化した脂質を保護する高密度リポ蛋白又はその成分（例えばａｐｏＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ等）を指す。
【００２５】
「グループＩＩのＨＤＬ」という用語は脂質を酸化から保護する、又は、酸化された脂質を修復（例えば還元）する場合に、低減された活性又は無活性を示すＨＤＬを指す。
【００２６】
「ＨＤＬ成分」という用語は高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）を含む成分（例えば分子）を指す。酸化から脂質を保護するか、修復する（例えば酸化された脂質を還元する）ＨＤＬの試験はまたそのような活性を示すＨＤＬの成分（例えばａｐｏＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ等）に関する試験を包含する。
【００２７】
「ヒトアポＡ−Ｉペプチド」という用語は完全長ヒトアポＡ−Ｉペプチドを指すか、又は、クラスＡの両親媒性ヘリックスを含むそのフラグメント又はドメインを指す。
【００２８】
「単球反応」とは本明細書においては、アテローム性動脈硬化プラークの形成に関連する「炎症応答」に特徴的な単球活性を指す。単球反応は血管壁の細胞（例えば血管内皮の細胞）への単球の接着、及び／又は、内皮下の空間への化学走性、及び／又は、マクロファージへの単球の分化を特徴とする。
【００２９】
「無変化」という用語は、酸化リン脂質の量に言及している場合は、検出可能な変化が無いこと、より好ましくは統計学的に有意な変化がないこと（例えば少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９８％又は９９％の信頼水準において）を指す。検出可能な変化の非存在はまた、酸化されたリン脂質の濃度が変化するが、本明細書に記載した蛋白の非存在下、又は他の陽性又は陰性の対照を比較対照とした場合ほどではない試験結果を指す場合もある。
【００３０】
以下の略記を本明細書においては使用する。ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＯＶＰＣ：１−パルミトイル−２−（５−オキソバレリル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＧＰＣ：１−パルミトイル−２−グルタリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＥＩＰＣ：１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシイソプロスタンＥ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＣｈＣ１８：２：コレステリルリノレエート；ＣｈＣ１８：２−ＯＯＨ：コレステリルリノレエートヒドロパーオキシド；ＤＭＰＣ：１，２−ジテトラデカノイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ホスホコリン；ＰＯＮ：パラオキソナーゼ；ＨＰＦ：標準化高電力場；ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＢＬ／６：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ；Ｃ３Ｈ：Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ。
【００３１】
「保存的置換」という用語は分子の活性（特異性（例えばリポ蛋白に対する））又は結合親和性（例えば脂質又はリポ蛋白に対する）を実質的に改変しないアミノ酸置換を反映した蛋白又はペプチドを指す。典型的には、保存的アミノ酸置換は、１つのアミノ酸の、同様の化学特性（例えば電荷又は疎水性）を有する別のアミノ酸との置換を包含する。以下の６つのグループは、相互に典型的な保存的置換であるアミノ酸を各々が含んでいる。１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；及び６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【００３２】
「同一」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関する場合、後述する配列比較アルゴリズムの１つを用いて、又は目視的検査により測定した場合に、最大の相応となるように対比整列させれば、同じであるか、又は同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドの特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。本発明のペプチドに関しては、配列の同一性はペプチドの完全長に亘り決定される。
【００３３】
配列比較のためには、典型的には１つの配列が比較対照配列として機能し、それに対して被験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合は、被験及び比較対照の配列をコンピューターに入力し、必要に応じてサブ配列の座標を指定し、そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターを指定する。次に配列比較アルゴリズムが指定されたプログラムパラメーターに基づいて比較対照配列と相対比較した場合の被験配列に関するパーセント配列同一性を計算する。
【００３４】
比較のための配列の最適アライメントは例えばＳｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所ホモロジーアルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４の同様性検索方法により、これらのアルゴリズムのコンピューター処理により（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、又は、目視的検査により実施することができる（例えば一般的には上出Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．参照）。
【００３５】
有用なアルゴリズムの１例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰはプログレッシブペアワイズアライメントを用いて関連する配列のグループから多重配列アライメントを作成することにより関連性及びパーセント配列同一性を示す。更にアライメントを作成するために使用したクラスタリングの関連性を示すツリー又は樹状図をプロットする。ＰＩＬＥＵＰはＦｅｎｇ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０のプログレッシブアライメント法の単純化を使用している。使用する方法はＨｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ５：１５１−１５３により記載された方法と同様である。プログラムは３００配列までをアラインすることができ、それぞれが５０００ヌクレオチド又はアミノ酸の最大長である。多重アライメントの操作法は２つの最も似ている配列のペアワイズなアライメントから開始され、２つのアラインされた配列のクラスターを形成する。その後このクラスターを次に最も関連している配列又はアラインされた配列のクラスターにアラインする。配列の２つのクラスターは２つの個々の配列のペアワイズなアライメントの単純な延長によりアラインされる。最終アライメントはプログレッシブペアワイズアライメントのシリーズにより達成される。プログラムは特定の配列及び配列比較の領域に関するそのアミノ酸又はヌクレオチド座標を指定することにより、そして、プログラムパラメーターを指定することにより実行される。例えば比較対照配列を他の被験配列と比較することにより、以下のパラメーター、即ち、デフォルトギャップウエイト（３．００）、デフォルトギャップ長ウエイト（０．１０）及びウエイト付けされた最終ギャップを用いながらパーセント配列同一性の関連性を決定することができる。
【００３６】
パーセント配列同一性及び配列同様性を調べるために適しているアルゴリズムの別の例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウエアはＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）より入手可能である。このアルゴリズムでは先ず、質問配列における長さＷの短いワードを識別することにより高スコア配列ペア（ＨＳＰ）を発見し、これはデータベース配列内の同じ長さのワードとアラインした場合にマッチするか、又はある正の値を有する閾値評点Ｔを満足するものである。Ｔは近隣ワード評点閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，上出）。これらの初期の近隣ワードのヒットはそれらを含有するより長いＨＳＰを発見するための検索を開始するための根源となる。次にワードヒットを累積アライメント評点が増大できる限り各配列に沿って両方向に延長する。累積評点はヌクレオチド配列の場合はパラメーターＭ（マッチする残基のペアに対するリワード評点；常時＞０）及びＮ（ミスマッチ残基に対するペナルティー評点；常時＜０）を用いて計算する。アミノ酸配列の場合は、採点マトリックスを用いて累積評点を計算する。各方向のワードヒットの延長を停止する時は、累積アライメント評点がその最大達成値から量Ｘだけ低下するか；１つ以上の負の評点の残基のアライメントの累積により累積評点が０以下となるか；又は何れかの配列の末端に到達した時である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ及びＸはアライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＩＮプログラム（ヌクレオチド配列の場合）はデフォルト値として１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４及び両方の鎖の比較を使用している。アミノ酸配列の場合は、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルト値として３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２採点マトリックスを使用している（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５参照）。
【００３７】
パーセント配列同一性を計算するほかに、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列の間の同様性の統計学的分析を実施する（例えばＫａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３−５７８７参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより与えられる同様性の１つの尺度は最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列の間のマッチが偶然起こる確率の指標を与えるものである。例えば、被験核酸の比較対照核酸との比較において最小合計確率が約０．１未満である場合、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合に、核酸は比較対照配列と同様とみなされる。
【００３８】
「環状変異した蛋白」とは、蛋白の天然／本来の末端が連結され、そして形成された環状蛋白が別の点で開裂することにより新しいＣ及びＮ末端が形成されているものである。環状変異蛋白は末端の実際の連結及び別の点における開裂により必ずしも形成される必要はなく、むしろ環状変異した変異体と同一の配列を有するように新規に合成／発現されてもよい。２つの蛋白は、第１の蛋白のＣ末端部分におけるフラグメントが第２の蛋白のＮ末端部分におけるフラグメントとマッチし、そして第１の蛋白のＮ末端部分におけるフラグメントが第２の蛋白のＣ末端部分のフラグメントとマッチする場合に、環状変異（ＣＰ）により関連付けられる。環状変異を発見する方法は当該分野で知られている（例えばＵｌｉｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１５（１１）：９３０−９３６参照）。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
小動脈の構造及び／又は機能を改善させる方法であって、該方法が下記工程：
小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において１つ以上の表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載した小有機分子をそれを必要とする哺乳動物に投与すること、
を含む、方法。
（項目２）
前記小動脈が腎臓における小動脈である、項目１記載の方法。
（項目３）
前記小動脈が脳における小動脈である、項目１記載の方法。
（項目４）
前記哺乳動物がヒトである、項目１記載の方法。
（項目５）
前記哺乳動物が記憶力損失又は学習力障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目６）
前記哺乳動物が腎機能障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目７）
前記哺乳動物が肺胞機能障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目８）
前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症を有するかその危険性があると診断されていないヒトである、項目１記載の方法。
（項目９）
前記ペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質が単位用量製剤中にある、項目１記載の方法。
（項目１０）
活性剤が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される、項目１記載の方法。
（項目１１）
前記投与が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による、項目１記載の方法。
（項目１２）
前記活性剤がＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目１３）
前記活性剤が製薬上許容しうる賦形剤と組み合わせて提供される、項目１記載の方法。
（項目１４）
前記活性剤が単位用量製剤において提供される、項目１記載の方法。
（項目１５）
構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療において使用するための表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子。
（項目１６）
構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療のための医薬の製造のための、表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子の使用。
（項目１７）
異常な小動脈の構造及び／又は機能を特徴とする状態の治療のためのキットであって、該キットが下記成分：
表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子１つ以上を含有する容器；及び、
異常な小動脈の構造及び／又は機能を特徴とする状態の治療における活性剤の使用を教示する説明書；
を含む、キット。
（項目１８）
前記ペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質が単位用量製剤中にある、項目１７記載のキット。
（項目１９）
活性剤が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される、項目１７記載のキット。
（項目２０）
前記投与が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による、項目１７記載のキット。
（項目２１）
前記活性剤がＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される、項目１７記載のキット。
（項目２２）
前記活性剤が製薬上許容しうる賦形剤と組み合わせて提供される、項目１７記載のキット。
（項目２３）
前記活性剤が単位用量製剤において提供される、項目１７記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ａ：小型小動脈（１５〜４０μｍ直径）の壁厚。
【図１Ｂ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ｂ：中型小動脈（４１〜８０μｍ直径）の壁厚。
【図１Ｃ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ｃ：大型小動脈（８１〜１６０μｍ直径）の壁厚。
【図２】図２はＤ４Ｆ及び「スクランブルド」Ｄ４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育するＬＤＲ−／−マウスにおけるＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）の結果を示す。
【図３】図３はパーセント交替として標示したＤ４Ｆ及びスクランブルド（ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育するＬＤＲ−／−マウスにおけるＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）の結果を示す。
【図４】図４はＤ４Ｆの投与によるＴ迷路試験における改善を示す。
【図５】図５はＷｅｓｔｅｒｎ試料で飼育するＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける血管反応性を経口ＤＭＰＣが改善することを示している。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ａは直径１５〜４０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ｂは直径４１〜８０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは平均±ＳＥＭを示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図６Ｃ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ｃは直径８１〜１６０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは平均±ＳＥＭを示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図７−１】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ａは直径１０〜２０μｍの管腔を有する小動脈に関する壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−２】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｂは直径２１〜５０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。図７Ｃは直径５１〜１００μｍの小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−３】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｄはマウスに関する小動脈管腔直径を示す。図７Ｅは直径１０〜２０μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−４】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｆは直径２１〜５０μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。図７Ｇは直径５１〜１００μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図８−１】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ａ：ＬＤＬ受容体ヌルマウスに飼料（ｎ＝１０）又はＷｅｓｔｅｒｎ食餌（ＷＤ）（ｎ＝１０）を６週間与え、その脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色し、壁と管腔の比を各小動脈について計算した。示した数値は各群１０匹のマウスの平均±ＳＥＭである。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｂ：平滑筋αアクチンに関して染色した脳小動脈の例。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図８−２】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｃ：図７のマウスの直径１０〜２０μｍの管腔を有する小動脈の壁と管腔の比。図８Ｄ：図７のマウスの直径２１〜５０μｍの管腔を有する小動脈の壁と管腔の比。
【図８−３】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｂ：平滑筋αアクチンに関して染色した脳小動脈の例。図８Ｅ：図７のマウスの直径５１〜１００μｍの小動脈の壁と管腔の比。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図９−１】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ａ：自発的交替の数を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【図９−２】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｂ：パーセント自発的交替を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｃ：５０％無作為選択と異なる自発的交替率を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【図９−３】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｄ：試行を完了するまでの時間を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｅ〜９Ｇ：図７及び８Ｂ−８Ｅに記載したマウスを上記した空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。
【図９−４】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｆ：パーセント自発的交替を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｇ：５０％無作為選択と異なる自発的交替率を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。
【００４１】
本発明者等が大型動脈において研究した異常が小型動脈及び更にはより小型の動脈、即ち小動脈にも拡張されるかどうかを検討した。小動脈は直径が約２００μ未満、より典型的には約１００μｍ未満である血管である。本発明者等は又、アポＡ−Ｉミメティックペプチド（Ｄ−４Ｆ）の有利な作用が大型動脈（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５：２９０−２９２；Ｖａｎ Ｌｅｎｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０６：１１２７−１１３２）及び小型動脈（Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０７：２３３７−２３４１）の両方において観察されるならば、その有利な作用は小動脈にもみられる、という仮説を立てた。本明細書において本発明者等は、直径１０〜１００μｍの範囲の脳の小動脈の壁は野生型と比較してＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいて肥厚すること、肥厚化はＷｅｓｔｅｒｎ食餌により悪化し、そしてＴ迷路連続交替作業における遂行能力の低下を伴うことを報告する。脳小動脈壁厚の増大は部分的には脳小動脈平滑筋αアクチン含量の増大に起因しており、Ｄ−４Ｆ投与により顕著に改善した。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えたＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＤ−４Ｆの投与は血漿中脂質及び小動脈管腔直径に関わらず脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善すると考えられる。
【００４２】
従って、Ｄ−４Ｆ、Ｌ−４Ｆ及びペプチドとして本明細書に記載する他の活性剤の使用は小動脈の構造及び／又は機能を改善するため、及び、小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態の症状１つ以上を緩解するために有効である。このような状態は、例えば、神経学的機能障害（例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、加齢による記憶力損失、卒中関連記憶力損失、Ｂｅｎｓｗａｎｇｅｒ病等）、腎臓機能障害、肺胞機能障害等を包含する。
【００４３】
即ち一部の実施形態においては、本発明は、炎症性脂質を封鎖、及び／又は、除去、及び／又は破壊し、そして前炎症性高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）を抗炎症性に変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とする薬剤１つ以上を投与することにより小動脈の構造及び機能を改善するための新しい方法を提供する。これらの活性剤はクラスＡの両親媒性ヘリックスを含有する特定のペプチド（例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許６，６６４，２３０、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２／１５９２３及びＷＯ２００４／０３４９７７及び同時係争中の出願ＵＳＳＮ：０９／８９６，８４１、１０／１８７，２１５、１０／２７３，３８６及び１０／４２３，８３０参照）、Ｇ＊両親媒性ヘリックスを含有するペプチド（参照により全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０８６，３２６及び同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ１０／１２０，５０８参照）、短鎖のペプチド又は非ペプチドであって分子量が９００ダルトン未満であり、酢酸エチルに少なくとも４ｍｇ／ｍｌの溶解度を有し、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、そして水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、そして、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成するもの（例えば参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６２８８、同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び１０／９１３，８００及び同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ６０／６００，９２５をそれぞれ参照）；及びｓｎ−１及びｓｎ−２位が同一であり少なくとも３炭素原子を含有する経口用合成リン脂質（例えば参照により本明細書に組み込まれる同時係争中の米国出願０９／５３９，５６９及び０９／９９４，２２７及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６８参照）を包含する。
【００４４】
特定の実施形態においては本発明は本明細書に記載した活性剤（ペプチド、ペプチド模倣物、脂質、小型有機分子等）１つ以上を哺乳動物（例えばヒト）に投与することにより実施される。活性剤は好ましくは小動脈、好ましくは約２００μｍ未満の直径を有する、より好ましくは約１６０μｍ未満の直径を有する、更に好ましくは約８０μｍ未満の直径を有する、そして最も好ましくは約５０μｍ又は４０μｍ未満の直径を有する小動脈の構造及び／又は機能を改善するために十分な用量又は用法において投与する。
Ｉ．活性剤
広範な種類の活性剤が上記した適応症の１つ以上の治療の為に適している。これらの薬剤の例は限定しないが、クラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド、非極性面に芳香族又は脂肪族の残基を有するアポＡ−ＩのクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド模倣物、小型ペプチド、例えばペンタペプチド、テトラペプチド、トリペプチド、ジペプチド及びアミノ酸の対、Ａｐｏ−Ｊ（Ｇ＊ペプチド）及びペプチド模倣物、例えば上記したものを包含する。
Ａ）クラスＡ両親媒性ヘリカルペプチド
特定の実施形態においては、本発明の方法において使用するための活性剤はクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド、例えば米国特許６，６６４，２３０及びＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３及びＷＯ２００４／０３４９７７に記載されているものを包含する。クラスＡの両親媒性へリックス（「クラスＡペプチド」）を含むペプチドは、アテローム性動脈硬化症の症状１つ以上を緩解することができることに加えて、本明細書に記載する他の適応症の１つ以上の治療においても有用であることがわかった。
【００４５】
クラスＡペプチドは極性及び非極性の残基の隔離をもたらすことにより極性及び非極性の面を形成し、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする、α−ヘリックスの形成を特徴とする（例えばＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：６２６−６６８参照）。アポＡ−Ｉの第４番目のエクソンは３．６６７残基／ターンに折り畳まれるとクラスＡの両親媒性ヘリカル構造をもたらすことが知られている。
【００４６】
１つのクラスＡペプチドは１８Ａと標記され（例えばＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：６２６−６６８参照）、本明細書に記載する通り修飾することにより、経口投与可能でアテローム性動脈硬化症及び／又は本明細書に記載する他の適応症の症状１つ以上を抑制又は予防する場合に高度に有効なペプチドを生成した。特定の理論に制約されないが、本発明のペプチドはＬＤＬの酸化を低減するシード分子をピックアップすることによりインビボで機能すると考えられる。
【００４７】
１８Ａの疎水性の面の上のＰｈｅ残基の数を増大させると、理論的には、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ＆Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１６：３２８−３３８に記載されている計算で求めた場合の脂質の親和性を増大させることになる。理論的には、Ｐｈｅによる１８Ａの非極性面における残基の系統的置換は６ペプチドを与えることになる。追加の２、３及び４Ｐｈｅを有するペプチドはそれぞれ１３，１４及び１５単位の理論的脂質親和性（λ）値を有することになる。しかしながら、追加のＰｈｅが４から５に増大するとλ値は４単位の飛躍的増大を示す（１９λ単位になる）。６又は７Ｐｈｅに増大すると増大はそれほど劇的ではなくなる（それぞれ２０及び２１λ単位）。
【００４８】
これらのクラスＡペプチドの多くが作成されており、例えば４Ｆ、Ｄ４Ｆ、５Ｆ及びＤ５Ｆ等と標記されるペプチドが包含される。種々のクラスＡペプチドがアテローム性動脈硬化症に罹患しやすいマウスにおける患部の形成を抑制している。更に又、ペプチドは本明細書に記載した種々の病的状態の症状の１つ以上を緩和することにおいて、変動性ではあるが有意な程度の薬効を示している。このようなペプチドの多数を表１に示す。
【００４９】
表１．本発明において使用するための例示されるクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド
【００５０】
【表１−１】
【００５１】
【表１−２】
【００５２】
【表１−３】
【００５３】
【表１−４】
特定の好ましい実施形態においては、ペプチドは４Ｆの変異を包含する（（表１の配列番号５、Ｌ−４Ｆとしても知られており、全ての残基がＬ型アミノ酸である）又は残基１つ以上がＤ型アミノ酸であるＤ−４Ｆ）。本明細書に記載したペプチドの何れかにおいて、Ｃ末端及び／又はＮ末端及び／又は内部の残基を本明細書に記載するブロッキング基１つ以上でブロックすることができる。
【００５４】
アミノ末端を保護するアセチル基又はＮ−メチルアントラニリル基、及び、カルボキシ末端を保護するアミド基を有する種々のペプチドを表１に示したが、これらの保護基の何れも排除及び／又は本明細書に記載する別の保護基で置き換えてよい。特に好ましい実施形態においては、ペプチドは本明細書に記載したＤ型アミノ酸１つ以上を含む。特定の実施形態においては、表１のペプチドの各アミノ酸（例えば各エナンチオマーアミノ酸）はＤ型アミノ酸である。
【００５５】
表１が全てを完全に包含するわけではない。本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチドが日常的に作成できる（例えば保存的又は半保存的な置換（例えばＤをＥで置き換える）、伸長、欠失等）。即ち、例えば、１つの実施形態は本明細書に示したペプチドの何れかの１つ以上のトランケーションを利用している（例えば表１において配列番号２〜２０及び３９により識別されるペプチド）。即ち、例えば、配列番号２１はＤアミノ酸１つ以上を含む１８ＡのＣ末端に由来する１４アミノ酸を含むペプチドを示しており、配列番号２２〜３８は他のトランケーションを示す。
【００５６】
より長いペプチドも適している。そのようなより長いペプチドは完全にクラスＡの両親媒性ヘリックスを形成してよく、又は、クラスＡ両親媒性ヘリックスがペプチドのドメイン１つ以上を形成することができる。更に、本発明はペプチドの多量体型も意図している（例えばコンカタマー）。即ち、例えば本明細書に示したペプチドを共にカップリングすることができる（直接又は介在アミノ酸１つ以上を有するリンカー（例えば炭素リンカー又はアミノ酸１つ以上）を介して）。例示される重合体ペプチドは、Ｄアミノ酸１つ以上、より好ましくは何れのアミノ酸においても本明細書に記載するＤアミノ酸及び／又は一端又は両端が保護されているものを含む特定の実施形態においては、１８Ａ−Ｐｒｏ−１８Ａ及び配列番号７８〜８５のペプチドを包含する。
【００５７】
当然ながら、本明細書に例示したペプチド配列のほかに、本発明は又これらのペプチドの各々のレトロ及びレトロインベルソの形態も意図している。レトロ型においては、配列の方向が逆転する。インバース型においては、構成成分のアミノ酸のキラル性が逆転する（即ち、Ｌ型アミノ酸はＤ型アミノ酸になり、Ｄ型アミノ酸はＬ型アミノ酸になる）。レトロインベルソ型においては、アミノ酸の順番とキラル性の両方が逆転する。即ち、例えばアミノ末端がアスパルテート（Ｄ）にありカルボキシ末端がフェニルアラニン（Ｆ）にあるＤ４Ｆペプチドのレトロ型（ＤＷＦＫＡＦＹＤＫＶＡＥＫＦＫＥＡＦ、配列番号５）は同じ配列を有するが、アミノ末端はフェニルアラニンにあり、カルボキシ末端はアスパルテートにある（即ちＦＡＥＫＦＫＥＡＶＫＤＹＦＡＫＦＷＤ、配列番号４４４）。Ｄ４Ｆペプチドが全てのＤ型アミノ酸を含む場合は、レトロインベルソ型は上記した配列（配列番号４４４）を有し全てのＬ型アミノ酸を含むことになる。即ち、例えば、４Ｆ及びＲｅｖ−４Ｆは、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の同一の隔離を有する相互の鏡像となる。アミノ酸の同じ重合体のこれらの鏡像は正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の隔離という点において同一である。レトロ及びレトロインベルソ型のペプチドの考察は例えばＣｈｏｒｅｖ ａｎｄ Ｇｏｏｄｍａｎ，（１９９５）ＴｉｂＴｅｃｈ，１３：４３９−４４５を参照できる。
【００５８】
配列に言及し、方向を標示しない場合は、配列はアミノからカルボキシの方向のアミノ酸配列、レトロ型（即ちカルボキシからアミノの方向のアミノ酸配列）、Ｌ型アミノ酸がＤ型アミノ酸と置き換えられている、又はＤ型アミノ酸がＬ型アミノ酸と置き換えられているレトロ型、及び、順番が逆転にし、アミノ酸キラル性も逆転しているレトロインベルソ型を示すものとして捉えることができる。
【００５９】
当然ながら、本明細書に標示するペプチド配列に加えて、本発明はそのようなペプチドの環状変異（ＣＰ）及び／又はそのようなペプチドのレトロ、インベルソ又はレトロインベルソ型の環状変異も意図している。ペプチドの環状変異は元のペプチドのアミノ及びカルボキシル末端を連結し、そしてこのようにして形成された環状ペプチドを開裂して新しいアミノ及びカルボキシ末端を形成することにより生成されるものと同一なアミノ酸配列を有するペプチドである。
Ｂ）非極性面に芳香族又は脂肪族の残基を有するアポＡ−Ｉの他のクラスＡ両親媒性ヘリカルペプチド模倣物
特定の実施形態においては、本発明はまた修飾されたクラスＡの両親媒性ヘリックスペプチドを提供する。特定の好ましいペプチドは非極性面、例えば３ＦＣπ（４Ｆに存在）の中心に芳香族残基１つ以上を取り込んでいるか、又は、非極性面、例えば３ＦＩπに脂肪族残基１つ以上を有し、例えば表２を参照できる。特定の理論に制約されないが、本発明者等はペプチドの非極性面３ＦＣπ上の中心の芳香族残基は、非極性面の中心のπ電子の存在の為に、水分子をペプチド−脂質複合体の疎水性脂質のアルキル鎖の近傍まで浸透させ、次にこれがそれらを細胞表面から遮蔽している反応性酸素物質種（例えば脂質のヒドロパーオキシド）の進入を可能にすると考える。同様に本発明者等はまた、非極性面、例えば３ＦＩπの中心に脂肪族残基を有するペプチドは同様に機能するが、３ＦＣπほど有効ではないと考える。
【００６０】
好ましいペプチドは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、又は抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とし、及び／又は、Ｄ４Ｆ又は表１に示す他のペプチドと同等以上の動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減する。
【００６１】
表２．特定の好ましいペプチドの例
【００６２】
【表２】
Ｃ）より小型のペプチド
好ましくは（必須ではない）アミノ酸のＤ型立体異性体であるアミノ酸１つ以上を有し、そして、脂質蛋白相互作用を可能にする疎水性ドメイン及びある程度の水溶性を可能にする親水性ドメインを保有している最低３アミノ酸よりなる特定の小型ペプチドもまた顕著な抗炎症特性を有し、そして本明細書に記載した病的状態１つ以上の治療において有用であることもまた意外な発見であった。「小型ペプチド」は典型的には２アミノ酸〜約１５アミノ酸、より好ましくは約３アミノ酸〜約１０又は１１アミノ酸、そして最も好ましくは約４〜約８又は１０アミノ酸の長さの範囲にある。種々の実施形態において、ペプチドは典型的には疎水性の末端アミノ酸、又は、疎水性の「保護基」１つ以上の結合により疎水性とされた末端アミノ酸を有することを特徴とする。種々の「小型ペプチド」が同時係争中の２００３年８月２６日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び２００４年８月６日出願のＵＳＳＮ１０／９１３，８００及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６２８８に記載されている。
【００６３】
特定の実施形態においては、ペプチドは下記式Ｉ：
【００６４】
【化１】
［式中、ｎは０又は１であり、Ｘ１は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は、疎水性の保護基を担持しており、Ｘ４は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は、疎水性の保護基を担持しており、そしてｎが０である場合は、Ｘ２は酸性又は塩基性のアミノ酸であり；ｎが１である場合は、Ｘ２及びＸ３は独立して酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であるが、ここでＸ２が酸性アミノ酸である場合は；Ｘ３は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であり；Ｘ２が塩基性アミノ酸である場合は；Ｘ３は酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であり；そしてＸ２が脂肪族又は芳香族アミノ酸である場合は、Ｘ３は酸性アミノ酸又は塩基性アミノ酸である］により特徴付けることができる。
【００６５】
より長いペプチド（例えば１０、１１又は１５アミノ酸まで）もまた本発明の範囲内に意図される。典型的には、より短いペプチド（例えば式Ｉのペプチド）が酸性、塩基性、脂肪族又は芳香族のアミノ酸により特徴付けられる場合は、より長いペプチドはその型のアミノ酸２つ以上を含む酸性、塩基性、脂肪族又は芳香族のドメインにより特徴づけられる。
１）活性小型ペプチドの機能的特性
本発明の小型ペプチド（例えば１０アミノ酸未満、好ましくは８アミノ酸未満、より好ましくは約３〜約５又は６アミノ酸）がＨＤＬをより抗炎症性にし、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症及び／又は炎症応答を特徴とする他の病的状態を緩解する能力を多くの物理的特性が予測していることは本発明の意外な発見であった。物理的特性は酢酸エチル中の高い溶解度（例えば約４ｍｇ／ｍｌ超）及びｐＨ７．０の水性緩衝液中の溶解性を包含する。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で接触させると、特に有効な小型ペプチドは約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約３８ｎｍの嚢胞構造の形成を誘導するかそれに関与する。特定の好ましい実施形態においては、小型ペプチドは約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００６６】
即ち、特定の実施形態においては、本発明は本明細書に記載する適応症／病的状態、例えば炎症状態の症状１つ以上を緩解する小型ペプチドを意図しており、その場合、ペプチドは約３〜約８アミノ酸、好ましくは約３〜約６又は７アミノ酸、より好ましくは約３〜約５アミノ酸の長さの範囲であり；約４ｍｇ／ｍｌ超の濃度で酢酸エチルに可溶であり；ｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり；水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成し；約９００ダルトン未満の分子量を有し；前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、又は抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とし；そして特にＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ及びＳｅｒが全てＬ型アミノ酸であるアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号２３５）を有さない。特定の実施形態においては、これらの小型ペプチドは酸化剤による酸化からリン脂質を保護する。
【００６７】
これらの小型ペプチドはそのように限定されるわけではないが、特定の実施形態においては、これらの小型ペプチドは以下に記載する小型ペプチドを包含することができる。
２）トリペプチド
本明細書に記載した望ましい特性（例えば前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する能力、動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減する能力、前ベータＨＤＬを増大させる能力等）を示す特定のトリペプチド（３アミノ酸ペプチド）を合成できることがわかった。特定の実施形態においては、ペプチドは下記式ＩＩ：
【００６８】
【化２】
［式中、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である］として示されるＮがゼロである式Ｉにより特徴付けられる。特定の実施形態においては、Ｘ２アミノ酸は酸性（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等）又は塩基性（例えばヒスチジン、アルギニン、リジン等）である。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか、又は１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を包含してよい。
【００６９】
本発明の特定の好ましいトリペプチドは表３に示すペプチドを包含するがこれらに限定されない。
【００７０】
表３．疎水性のブロッキング基及び酸性、塩基性又はヒスチジン中心アミノ酸を担持した特定の好ましいトリペプチドの例
【００７１】
【表３−１】
【００７２】
【表３−２】
【００７３】
【表３−３】
【００７４】
【表３−４】
表３のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
３）中央の酸性及び塩基性のアミノ酸を有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性アミノ酸及び酸性アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン及び／又は酸性ドメインをより長い分子中に含む。
【００７５】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性でありＸ３が塩基性であるか、又は、Ｘ２が塩基性でありＸ３が酸性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。
【００７６】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表４に示すペプチドである。
【００７７】
表４．中央の酸性及び塩基性のアミノ酸を有する小型ペプチドの代表例
【００７８】
【表４−１】
【００７９】
【表４−２】
【００８０】
【表４−３】
【００８１】
【表４−４】
【００８２】
【表４−５】
表４のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
４）中央の脂肪族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性又は酸性のアミノ酸及び脂肪族アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン又は酸性ドメイン及び脂肪族ドメインをより長い分子中に含む。
【００８３】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性又は塩基性でありＸ３が脂肪族であるか、又は、Ｘ２が脂肪族でありＸ３が酸性又は塩基性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。
【００８４】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表５に示すペプチドである。
【００８５】
表５．中央の脂肪族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する特定の好ましいペプチドの例
【００８６】
【表５】
表５のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
５）中央の芳香族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明の「小型」ペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性又は酸性のアミノ酸及び芳香族アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン又は酸性ドメイン及び芳香族ドメインをより長い分子中に含む。
【００８７】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性又は塩基性でありＸ３が芳香族であるか、又は、Ｘ２が芳香族でありＸ３が酸性又は塩基性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。５量体はＸ５が表６に示すように挿入され、そして、Ｘ５が典型的には芳香族アミノ酸である式Ｉの僅少な修飾により表すことができる。
【００８８】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表６に示すペプチドである。
【００８９】
表６．中央の芳香族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する特定の好ましいペプチドの例
【００９０】
【表６−１】
【００９１】
【表６−２】
表６のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
６）中心に芳香族アミノ酸又はヒスチジンにより分離された芳香族アミノ酸を有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは分子の中心に露出したπ電子を特徴とし、これは粒子の水和を可能にし、そしてペプチド粒子が前炎症性の酸化された脂質、例えば脂肪酸のヒドロペルオキシド及びｓｎ−２位にアラキドン酸の酸化生成物を含有するリン脂質を捕獲することができるようにする。
【００９２】
特定の実施形態においては、これらのペプチドは最低４アミノ酸及び最高約１０アミノ酸よりなり、好ましくは（必須ではない）アミノ酸の１つ以上がアミノ酸のＤ型立体異性体であり、末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性ブロッキング基を担持しているために疎水性である（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ群などによりブロックされている）。酸性又は塩基性のアミノ酸を中心に有する替わりに、これらのペプチドは一般的に中心に芳香族アミノ酸を有するか、又は、ペプチドの中心のヒスチジンにより分離された芳香族アミノ酸を有する。
【００９３】
本発明の特定の好ましいペプチドは、限定しないが表７に示すペプチドである。
【００９４】
表７．中心の芳香族アミノ酸又はヒスチジン１つ以上により分離された芳香族アミノ酸又は芳香族ドメインを有するペプチドの例
【００９５】
【表７】
表７のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
７）トリペプチド及びテトラペプチドの総括
明確化のために、本発明の多くのトリペプチド及びテトラペプチドを下記の表８において全般的に総括する。
【００９６】
表８．本発明の特定のペプチドの全般的構造
【００９７】
【表８】
より長いペプチドが所望である場合は、Ｘ２及びＸ３は個々のアミノ酸ではなくドメイン（例えば特定の型のアミノ酸２つ以上の領域）を指すことができる。表８は例示であり限定するものではない。本明細書に示した教示を用いて他の適当なペプチドを容易に識別できる。
８）対のアミノ酸及びジペプチド
特定の実施形態においては、本発明は特定の対のアミノ酸が、相互に組み合わせて投与された場合、又は、連結してジペプチドを形成した場合に、本明細書に記載した特性１つ以上を有するという発見に関する。即ち、特定の理論に制約されないが、アミノ酸の対を本明細書に記載する通り相互に組み合わせて投与した場合に、それらはインビボのミセル形成に関与するか、それを誘導すると考えられる。
【００９８】
本明細書に記載した他の小型ペプチドと同様、ペプチドの対はインビボで会合し、そして酢酸エチル中の高い溶解度（例えば約４ｍｇ／ｍｌ超）、ｐＨ７．０の水性緩衝液中の溶解性を包含する物理的特性を示すと考えられる。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で接触させると、アミノ酸の対は約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約３８ｎｍの嚢胞構造の形成を誘導するかそれに関与すると考えられる。
【００９９】
更に又、アミノ酸の対は以下の生理学的に関連性のある特性の１つ以上を示すことができると考えられる。
１．それらは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とし；
２．それらは動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減し；
３．それらは前βＨＤＬの形成及びサイクリングを刺激し；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させ；そして／又は、
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増大させる。
【０１００】
アミノ酸の対は、別個のアミノ酸として投与する（逐次的又は同時に、例えば組み合わせの製剤として）か、又は、直接又はリンカー（例えばＰＥＧリンカー、炭素リンカー、分枝鎖リンカー、直鎖リンカー、複素環リンカー、誘導体化された脂質から形成したリンカー等）を介して共有結合することができる。特定の実施形態においては、アミノ酸の対をペプチド結合を介して共有結合し、ジペプチドを形成する。種々の実施形態において、ジペプチドは典型的には各々が結合した保護基を有する２アミノ酸を含むが、本発明はアミノ酸僅か１つが保護基１つ以上を担持するジペプチドも意図する。
【０１０１】
アミノ酸の対は典型的には各アミノ酸が少なくとも１つの保護基（例えば本明細書に記載した疎水性保護基）に結合しているアミノ酸を含む。アミノ酸はＤ又はＬ型であることができる。特定の実施形態においては、対を含むアミノ酸が相互に結合していない場合に各アミノ酸は２保護基を担持する（例えば表９の分子１及び２）。
【０１０２】
表９．本発明の代表的アミノ酸対
【０１０３】
【表９】
＊これは典型的には第２のアミノ酸と連携して投与される。＊＊特定の実施形態においては、これらのジペプチドは相互に連携して投与される。＊＊＊特定の実施形態においては、このペプチドは単独か又は本明細書に記載した他のペプチドと組み合わせて投与される。
【０１０４】
アミノ酸の適当な対は、保護されたアミノ酸の対及び／又はジペプチドを準備し、次に本明細書に記載した物理的及び／又は生理学的特性の１つ以上についてアミノ酸対／ジペプチドをスクリーニングすることにより容易に発見することができる。特定の実施形態においては、本発明はアスパラギン酸及びフェニルアラニンを含むアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。特定の実施形態においては、本発明は一方のアミノ酸が（−）−Ｎ−［（トランス−４−イソプロピルシクロヘキサン）カルボニル］−Ｄ−フェニルアラニン（ナテグリニド）であるアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。
【０１０５】
特定の実施形態においては、対を含むアミノ酸は、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸等）、塩基性アミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン等）及び非極性アミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン等）よりなる群から独立して選択される。特定の実施形態においては、第１のアミノ酸が酸性又は塩基性である場合に、第２のアミノ酸は非極性であり、そして第２のアミノ酸が酸性又は塩基性である場合に、第１のアミノ酸は非極性である。特定の実施形態においては、第１のアミノ酸が酸性である場合に、第２のアミノ酸は塩基性、或いはその逆となる（例えば表１０参照）。
【０１０６】
同様の組み合わせはジペプチドの対を投与することによっても得られる。即ち、例えば特定の実施形態においては、表９の分子３及び４は相互に連携させて投与する。
【０１０７】
表１０．特定の一般化したアミノ酸対／ジペプチド
【０１０８】
【表１０】
これらのアミノ酸対／ジペプチドは例示を意図しており、限定するものではない。本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なアミノ酸対／ジペプチドは容易に決定できる。
Ｄ）アポ−Ｊ（Ｇ＊ペプチド）
特定の実施形態において、アポＪの両親媒性ヘリカルドメインを模倣しているペプチドがアテローム性動脈硬化症及び／又は本明細書に記載した他の病的状態の症状１つ以上を緩解することができることは本発明の発見であった。アポリポ蛋白Ｊは球状蛋白様、又は、Ｇ＊両親媒性ヘリカルドメインと称される広範な非極性の面を有する。クラスＧの両親媒性ヘリックスは球状蛋白において存在し、そしてこのためグラスＧと命名されている。両親媒性ヘリックスのこのクラスは極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布と狭小な非極性の面を特徴としている。狭小な非極性の面の為に、このクラスはリン脂質とは容易に会合しない。両親媒性ヘリックスのＧ＊はＧ両親媒性ヘリックスと同様であるが同一ではない特性を有している。クラスＧの両親媒性ヘリックスと同様、クラスＧ＊のペプチドは極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を有している。しかしながら、狭小な非極性の面を有するクラスＧの両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスはこのクラスをリン脂質に容易に結合可能とする広範な非極性の面を有し、そしてクラスは両親媒性ヘリックスのクラスＧと区別するためにＧ＊と称されている。
【０１０９】
多くの適当なＧ＊両親媒性ペプチドが同時係争中の２００２年４月５日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／１２０，５０８、２００３年４月１日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／５２０，２０７及び２００３年４月１日出願のＰＣＴ／ＵＳ０３／０９９８８に記載されている。更に又、アポＪのＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明の種々の適当なペプチドを表１１に記載する。
【０１１０】
表１１．アポＪのＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明で使用するための好ましいペプチド
【０１１１】
【表１１】
しかしながら本発明のペプチドはアポＪのＧ＊変異体に限定されない。一般的に、本質的に如何なる他の蛋白、好ましくはアポ蛋白に由来するＧ＊ドメインも適している。そのような蛋白の特定の適性については、例えば本明細書の実施例に記載するもののような保護活性（例えば酸化からＬＤＬを保護する等）に関する試験を用いて容易に測定できる。一部の特に好ましい蛋白は例えばアポＡＩ、アポＡＩＶ、アポＥ、アポＣＩＩ、アポＣＩＩＩ等を包含する（ただし、これらに限定されない）蛋白のＧ＊両親媒性ヘリカルドメイン又はその変異体（例えば保存的置換等）を包含する。
【０１１２】
アポＪ以外のアポ蛋白に関連するＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する特定の好ましいペプチドを表１２に示す。
【０１１３】
表１２．アポＪ以外のアポ蛋白に関連するＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明において使用するためのペプチド
【０１１４】
【表１２】
別の代表的Ｇ＊ペプチドを表１３に示す。
【０１１５】
表１３．別の代表的Ｇ＊ペプチド
【０１１６】
【表１３−１】
【０１１７】
【表１３−２】
【０１１８】
【表１３−３】
【０１１９】
【表１３−４】
【０１２０】
【表１３−５】
【０１２１】
【表１３−６】
他の限定しない適当なペプチドを表１４に示す。
【０１２２】
表１４．向上した疎水性相を有する代表的ペプチド
【０１２３】
【表１４】
本明細書に記載したペプチド（Ｖ２Ｗ３Ａ５Ｆ１０、１７−Ｄ−４Ｆ；Ｖ２Ｗ３Ｆ１０−Ｄ−４Ｆ；Ｗ３−Ｄ−４Ｆ）は元のＤ−４Ｆよりも強力である場合がある。
【０１２４】
更に別の適当なペプチドの限定しない例は、Ｐ１−ジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐ２（配列番号６０４）及びＰ１−ジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐ２を包含し、ここでＰ１及びＰ２は本明細書に記載したもののような保護基である。特定の実施形態においては、これらのペプチドは例えばＢｏｃジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）及びＢｏｃジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（ＯｔＢｕ）を包含するがこれらに限定されない。
【０１２５】
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは少なくとも１つのＤアミノ酸及び／又は少なくとも１つ又は２つの末端保護基を含むアミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号６０５）を含むかこれよりなるペプチドを包含する。特定の実施形態においては、本発明は炎症状態の症状１つ以上を緩解するＡペプチドを包含し、ここでペプチドは約３〜約１０アミノ酸の長さの範囲であり；芳香族又は疎水性アミノ酸と交互する酸性又は塩基性のアミノ酸を配列が含むようにアミノ酸配列を含んでおり；疎水性末端アミノ酸又は疎水性保護基を担持する末端アミノ酸を含み；全Ｌ型アミノ酸を含む配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号６０６）ではなく；ここでペプチドは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換、及び／又は、抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とする。
【０１２６】
本明細書の表に記載したペプチドが全てではない、本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なペプチドが日常的に作成できる（例えば保存的又は半保存的な置換（例えばＤをＥで置き換える）、伸長、欠失等）。即ち、例えば、１つの実施形態は配列番号４４４〜４７２により示されるペプチドの何れかの１つ以上のトランケーションを利用している。
【０１２７】
より長いペプチドも適している。そのようなより長いペプチドは完全にクラスＧ又はＧ＊の両親媒性ヘリックスを形成してよく、又は、クラスＧ両親媒性ヘリックスがペプチドのドメイン１つ以上を形成することができる。更に、本発明はペプチドの多量体型も意図している。即ち、例えば本明細書の表に示したペプチドを共にカップリングすることができる（直接又は介在アミノ酸１つ以上を有するリンカー（例えば炭素リンカー又はアミノ酸１つ以上）を介して）。適当なリンカーはプロリン（−Ｐｒｏ−）、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ３（配列番号６０７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号６０８）等を包含するがこれらに限定されない。即ち、本発明の１つの例示される多量体ペプチドは（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐ−（ｄ−Ｊ３３６）（即ちＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ２、配列番号６０９）である。
【０１２８】
本発明は又１つ以上のＧ又はＧ＊両親媒性ヘリックスドメイン及び１つ以上のクラスＡ両親媒性ヘリックスを含む「ハイブリッド」ペプチドの使用も意図する。適当なクラスＡの両親媒性ヘリックスペプチドはＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３に記載されている。即ち、例示すれば、１つのこのような「ハイブリッド」ペプチドは（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐｒｏ−（４Ｆ）（即ちＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ２、配列番号６１０）等である。
【０１２９】
本明細書に記載した教示を使用することにより、当業者は、例示した両親媒性ヘリカルペプチドを日常的に修飾することにより本発明の他の適当なアポＪ変異体及び／又は両親媒性Ｇ及び／又はＡヘリカルペプチドを製造することができる。例えば日常的な保存的又は半保存的な置換（例えばＥとＤ）を既存のアミノ酸から行うことができる。得られるペプチドの脂質親和性に対する種々の置換の影響はＰａｌｇｕｎａｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ＆Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １６：３２８−３３８に記載されているコンピューター処理法を用いて予測することができる。ペプチドはクラスのヘリックス構造が温存される限り長鎖化又は短鎖化することができる。更に又、置換を行うことにより得られるペプチドを対象動物種により内因的に生産されるペプチドとより近似するものとすることができる。
【０１３０】
好ましい実施形態においては本発明のペプチドは天然に存在するアミノ酸又は天然に存在するアミノ酸のＤ型を利用しているが、天然に存在するものではないアミノ酸（例えばメチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、ノルロイシン、イプシロンアミノカプロン酸、４−アミノブタン酸、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、８−アミノカプリル酸、４−アミノ酪酸、Ｌｙｓ（Ｎ（イプシロン）トリフルオロアセチル）、α−アミノイソ酪酸など）による置換もまた意図している。
【０１３１】
新しいペプチドはコンピューター処理法を用いて設計及び／又は評価できる。両親媒性ヘリカルドメインを発見して分類するためのコンピュータープログラムは当該分野で良く知られており、多くはＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８９−２９６により記載されている。このようなプログラムの例は、限定しないがヘリカルホイールプログラム（ＷＨＥＥＬ又はＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットプログラム（ＨＥＬＮＥＴ、ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリカルホイールの追加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯ又はＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットの追加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）等が包含される。
Ｅ）ブロッキング基及びＤ残基
本明細書に記載した種々のペプチド及び／又はアミノ酸対は保護基を有さないものを示したが、特定の実施形態においては（例えば経口投与用）、それらは１、２、３、４又はそれ以上の保護基を担持することができる。保護基はペプチドのＣ及び／又はＮ末端に、及び／又は、ペプチドを含む内部の残基１つ以上にカップリングすることができる（例えば構成アミノ酸のＲ基の１つ以上をブロックすることができる）。即ち、例えば、特定の実施形態においては、本明細書に記載したペプチドの何れも、例えばアミノ末端を保護するアセチル基及び／又はカルボキシル末端を保護するアミド基を担持することができる。そのような二重保護ペプチドの一例はＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ２（ブロッキング基を有する配列番号４４４）であり、これらの保護基の何れか又は両方は排除及び／又は本明細書に記載する他の保護基で置換されていることができる。
【０１３２】
特定の理論に制約されないが、特に本発明の対象となるペプチドのアミノ及び／又はカルボキシ末端のブロックは経口送達を大きく向上させ、そして血清中半減期を顕著に延長することは本発明の発見である。
【０１３３】
多数の種類の保護基がこの目的の為に適している。このような基には例えばアセチル、アミド及びアルキル基が包含され、アセチル及びアルキル基がＮ末端保護には特に適しており、そしてアミド基がカルボキシル末端保護には好ましいがこれらに限定されない。特定の特に好ましい実施形態においては、保護基は脂肪酸中のもののようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基はアミド、エステル及びエーテル形成保護基を包含する。１つの好ましい実施形態においては、アセチル基を用いてアミノ末端を保護し、そしてアミド基を用いてカルボキシル末端を保護する。これらのブロッキング基はペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の好ましいブロッキング基は種々の長さのアルキル基、例えば式：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−を有する基を包含し、式中、ｎは約１〜約２０、好ましくは約１〜約１６又は１８、より好ましくは約３〜約１３、そして最も好ましくは約３〜約１０である。
【０１３４】
特定の特に好ましい実施形態において、保護基は脂肪酸中のもののようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基はアミド、エステル及びエーテル形成保護基を包含する。１つの好ましい実施形態においては、アセチル基を用いてアミノ末端を保護し、そしてアミド基を用いてカルボキシル末端を保護する。これらのブロッキング基はペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の好ましいブロッキング基は種々の長さのアルキル基、例えば式：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−を有する基を包含し、式中、ｎは約３〜約２０、好ましくは約３〜約１６、より好ましくは約３〜約１３、そして最も好ましくは約３〜約１０である。
【０１３５】
他の保護基は、例えば、Ｆｍｏｃ、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジアキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）及びトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）を包含するがこれらに限定されない。
【０１３６】
保護／ブロッキング基は、本発明のペプチドを含む適切な残基にこのような基をカップリングする方法と同様、当該分野で良く知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ参照）。１つの好ましい実施形態においては、例えばアセチル化は、無水酢酸を用いて樹脂上にペプチドがある合成の間に達成される。アミドの保護は合成のための適切な樹脂の選択により達成できる。実施例に記載したペプチドの合成の間、ｒｉｎｋアミド樹脂を使用する。合成終了後、Ａｓｐ及びＧｌｕのような酸性二官能性アミノ酸及び塩基性アミノ酸Ｌｙｓ、Ｔｙｒのヒドロキシル上の半永久保護基は全て同時に除去される。酸処理によりこのような樹脂から遊離するペプチドは、アセチルとして保護されたＮ末端及びＮＨ２として保護されたカルボキシルと共に、そして、他の保護基の全てが同時に除去された状態で生じる。
【０１３７】
特定の特に好ましい実施形態においては、ペプチドは本明細書に記載する通り１つ以上のＤ型（ｌｅｖｏではなくｄｅｘｔｒｏ）のアミノ酸を含む。特定の実施形態においては、少なくとも２エナンチオマーアミノ酸、より好ましくは少なくとも４エナンチオマーアミノ酸及び最も好ましくは少なくとも８又は１０エナンチオマーアミノ酸が「Ｄ」型アミノ酸である。特定の実施形態においては、本明細書に記載したペプチドの１つおき、又はむしろ各々全てのアミノ酸（例えば各々全てのエナンチオマーアミノ酸）がＤ型アミノ酸である。
【０１３８】
特定の実施形態においては、エナンチオマーアミノ酸の少なくとも５０％が「Ｄ」型であり、より好ましくはエナンチオマーアミノ酸の少なくとも８０％が「Ｄ」型であり、最も好ましくはエナンチオマーアミノ酸の少なくとも９０％が「Ｄ」型である。
Ｆ）ペプチド模倣物
本明細書に記載したペプチドに加えて、ペプチド模倣物もまた意図している。ペプチド類縁体は鋳型ペプチドと類似した特性を有する非ペプチド薬剤として製薬業において一般的に使用されている。これらの型の非ペプチド化合物は「ペプチド模倣物」称されており（Ｆａｕｃｈｅｒｅ（１９８６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９；Ｖｅｂｅｒ ａｎｄ Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ（１９８５）ＴＩＮＳ ｐ．３９２；及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９）と称され、コンピューター処理による分子モデリングを用いて通常は開発されている。治療上有用なペプチドと構造的に同様のペプチド模倣物を用いて同等の治療又は予防効果をもたらしてよい。
【０１３９】
一般的に、ペプチド模倣物はパラダイムポリペプチド（例えば表１に示す配列番号５）と構造的に同様であるが、当該分野で知られ、そして以下の参考文献、すなわち、Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）ｐ．２６７，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，；Ｓａｔｏｌａ（１９８３）Ｖｅｇａ Ｄａｔａ１（３）Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ．（一般的検討）；Ｍｏｒｌｅｙ（１９８０）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ｐｐ．４６３−４６８（一般的検討）；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．（１９７９）Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔ Ｒｅｓ １４：１７７−１８５（−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−）；Ｓｐａｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ２Ｓ−）；Ｈａｎｎ，（１９８２）Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｐｅｒｋｉｎ ＴｒａｎｓＩ３０７−３１４（−ＣＨ−ＣＨ−、シス及びトランス）；Ａｌｍｑｕｉｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（−ＣＯＣＨ２−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２３：２５３３（−ＣＯＣＨ２−）；Ｓｚｅｌｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｐｐｌｎ．ＥＰ４５６６５（１９８２）ＣＡ：９７：３９４０５（１９８２）（ −ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；Ｈｏｌｌａｄａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２４：４４０１−４４０４（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；及びＨｒｕｂｙ（１９８２）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，３１：１８９−１９９（−ＣＨ２−Ｓ−））に記載された方法により−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ−等よりなる群から選択される連結により場合により置き換えられたペプチド結合１つ以上を有している。
【０１４０】
１つの特に好ましい非ペプチド連結は−ＣＨ２ＮＨ−である。このようなペプチド模倣物はポリペプチドの実施形態を超えた顕著な利点を有する場合があり、例えばより経済的な製造、より高い化学的安定性、増強された薬理学的特性（半減期、吸収、力価、薬効等）、低減した抗原性等が挙げられる。
【０１４１】
更に又、コンセンサス配列又は実質的に同一のコンセンサス配列の変形を含む本明細書に記載したペプチド又は制約されたペプチド（環化ペプチドを包含する）の環状変異は知られた方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ（１９９２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７）；例えばペプチドを環化する分子内ジスルフィド結合を形成することができる内部システイン残基を添加することにより形成してよい。
Ｇ）小型有機分子
特定の実施形態においては、本発明の活性剤は小型有機分子、例えば２００４年８月１１日に出願の同時係争中の出願ＵＳＳＮ６０／６００，９２５に記載されているものを包含する。種々の実施形態において、小型有機分子は同時係争中の出願である２００３年８月２６日出願のＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び８月１１日出願のＵＳＳＮ６０／４９４，４４９に記載されているテトラ及びペンタペプチドと同様であり、そして、特定の場合においては、それらのミメティックである。
【０１４２】
本発明の小型有機分子は典型的には約９００ダルトン未満の分子量を有する。典型的には、分子は酢酸エチルに高度に可溶（例えば約４ｍｇ／ｍｌ以上）であり、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液中にも可溶である。
【０１４３】
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で本発明の小型有機分子と接触させると、典型的には約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子が形成される。更に又、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層が形成される場合が多い。約３８ｎｍの嚢胞構造も形成される場合が多い。更に又本発明の分子を哺乳動物に投与すると、それらはＨＤＬをより抗炎症性とし、そしてアテローム性動脈硬化症及び／又は炎症性応答を特徴とする他の状態の症状１つ以上を緩解する。
【０１４４】
即ち、特定の実施形態においては、小型有機分子は哺乳動物における炎症性応答を特徴とする病的状態（例えばアテローム性動脈硬化症）の症状１つ以上を緩解するものであり、ここで小分子は、約４ｍｇ／ｍｌ超の濃度で酢酸エチルに可溶であり、ｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、及び、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成し、そして、約９００ダルトン未満の分子量を有する。
【０１４５】
特定の実施形態においては、分子は下記式：
【０１４６】
【化３】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は独立して選択される疎水性保護基であり；Ｒ１及びＲ４は独立して選択されるアミノ酸Ｒ基であり；ｎ、ｉ、ｘ、ｙおよびｚは独立してゼロ又は１であるが、ｎ及びｘが両方ともゼロである場合はＲ１は疎水性基であり、そしてｙ及びｉが両方ともゼロである場合はＲ４は疎水性基であり；Ｒ２及びＲ３はｐＨ７．０で酸性又は塩基性であるが、Ｒ２が酸性である場合はＲ３は塩基性であり、そしてＲ２が塩基性である場合はＲ３は酸性であり；そしてＲ５は存在する場合は芳香族基、脂肪族基、正荷電基又は負荷電基よりなる群から選択される］を有する。特定の実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は−（ＣＨ２）ｊ−ＣＯＯＨ、ただしｊ＝１、２、３又は４であるもの、及び／又は、−（ＣＨ２）ｊ−ＮＨ２、ただしｊ＝１、２、３、４又は５であるもの、又は、−（ＣＨ２）ｊ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、ただしｊ＝１、２、３又は４であるものである。特定の実施形態においては、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５は、存在する場合は、アミノ酸Ｒ基である。即ち、例えば、種々の実施形態において、Ｒ２及びＲ３は独立してアスパラギン酸Ｒ基、グルタミン酸Ｒ基、リジンＲ基、ヒスチジンＲ基又はアルギニンＲ基である（例えば表１に示す通り）。
【０１４７】
特定の実施形態においてはＲ１はＬｙｓＲ基、ＴｒｐＲ基、ＰｈｅＲ基、ＬｅｕＲ基、ＯｒｎＲ基、又は、ノルＬｅｕＲ基よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、Ｒ４はＳｅｒＲ基、ＴｈｒＲ基、ＩｌｅＲ基、ＬｅｕＲ基、ノルＬｅｕＲ基、ＰｈｅＲ基又はＴｙｒＲ基よりなる群から選択される。
【０１４８】
種々の実施形態において、ｘは１であり、そしてＲ５は芳香族基（例えばＴｒｐＲ基）である。
【０１４９】
種々の実施形態において、ｎ、ｘ、ｙおよびｉのうち少なくとも１つは１であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は存在する場合は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、３〜２０炭素のアルキル基、ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、−４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基及びトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、Ｐ１が存在する場合及び／又はＰ２が存在する場合、これらは独立してＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−及びニコチニル等よりなる群から選択され、及び／又はＰ３が存在する場合及び／又はＰ４が存在する場合、これらは独立してｔＢｕ及びＯｔＢｕよりなる群から選択される。
【０１５０】
多くの保護基（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４）を上記に示したが、このリストは例示であり、限定するものではない。本明細書に記載した教示を鑑みれば、多くの他の保護／ブロッキング基は当該分野で知られたものである。そのようなブロッキング基は消化を最低限にするため（例えば経口薬剤送達用）、及び／又は取り込み／生体利用性を増大させるため（例えば経鼻送達、吸入療法、直腸投与における粘膜表面通過）、及び／又は、血清中／血漿中の半減期を延長するために選択することができる。特定の実施形態においては、保護基は賦形剤として、又は、賦形剤の成分として提供することができる。
【０１５１】
特定の実施形態においては、ｚはゼロであり、そして分子は下記式：
【０１５２】
【化４】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎ、ｘ、ｙおよびｉは上記した通りである］を有する。
【０１５３】
特定の実施形態においては、ｚはゼロであり、そして分子は下記式：
【０１５４】
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は上記した通りである］を有する。
【０１５５】
特定の実施形態においては、分子は下記式：
【０１５６】
【化６】
を有する。
【０１５７】
特定の実施形態においては、本発明は本明細書に記載する物理的及び／又は機能的特性の１つ以上を有し、そして、下記式：
【０１５８】
【化７】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４は独立して選択された上記の疎水性保護基であり、ｎ、ｘ及びｙは独立してゼロ又は１であり；ｊ、ｋ及びｌは独立してゼロ、１、２、３、４又は５であり；そしてＲ２及びＲ３はｐＨ７．０で酸性又は塩基性の基であるが、Ｒ２が酸性である場合はＲ３は塩基性であり、そしてＲ２が塩基性である場合はＲ３は酸性である］を有する小型分子を意図している。特定の好ましい実施形態においては、小型分子は水に可溶であり；そして小型分子は約９００ダルトン未満の分子量を有する。特定の実施形態においては、ｎ、ｘ、ｙ、ｊおよびｌは１であり；そしてｋは４である。
【０１５９】
特定の実施形態においては、Ｐ１及び／又はＰ２は芳香族保護基である。特定の実施形態においては、Ｒ２及びＲ３はアミノ酸Ｒ基、例えば上記したものである。種々の実施形態において、ｎ、ｘ及びｙの少なくとも１つは１であり、そしてＰ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４が存在する場合にはそれらは独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、３〜２０炭素のアルキル基、ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、−４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタよりなる群から選択される、上記したような保護基である。
ＩＩ．活性剤の機能試験
本発明の方法で用いるための特定の活性剤は、種々の式（例えば上記式Ｉ）により、及び／又は特定の配列により、本明細書において記載している。特定の実施形態においては、本発明の好ましい活性剤は以下の機能的特性の１つ以上により特徴付けられる。
１．それらは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とし；
２．それらは動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減し；
３．それらは前βＨＤＬの形成及びサイクリングを刺激し；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させ；そして／又は、
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増大させる。
【０１６０】
本明細書に開示した特定の薬剤及び／又は本明細書に記載した種々の式に相当する薬剤は所望によりこれらの活性の１つ以上に関して容易に試験することができる。
【０１６１】
これらの機能的特性の各々に関するスクリーニングの方法は当該分野で良く知られている。特に、単球化学走性活性、ＨＤＬコレステロール及びＨＤＬＨＤＬパラオキソナーゼ活性に関する試験はＰＣＴ／ＵＳ０１／２６４９７（ＷＯ２００２／１５９２３）に説明されている。
ＩＩＩ．ペプチドの製造
本明細書において使用するペプチドは、標準的な化学ペプチド合成手法を用いながら化学合成することができ、或いは、特にペプチドが「Ｄ」型アミノ酸残基を含まない場合は組み換え発現することができる。特定の実施形態においては、「Ｄ」アミノ酸残基を含むペプチドであっても組み換え発現される。ポリペプチドを組み換え発現する場合は、アミノ酸の１つ以上がＤ型でのみ生物に提供される環境において宿主生物（例えば細菌、植物、カビの細胞等）を培養する。このような系において組み換え発現されたペプチドはこのようなＤ型アミノ酸を取り込むことになる。
【０１６２】
好ましい実施形態においては、ペプチドは当該分野で知られた多くの液体又は固相のペプチド合成手法のいずれかにより化学合成する。配列のＣ末端アミノ酸を不溶性の支持体に結合させ、その後、配列内の残余のアミノ酸の逐次的付加を行う固相合成が本発明のポリペプチドの化学合成のための好ましい方法である。固相合成の手法は当該分野で良く知られており、例えばＢａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｐｐ．３−２４８，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｐａｒｔ Ａ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５６及びＳｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩに記載されている。
【０１６３】
特定の実施形態においては、ペプチドは固相としてベンズヒドリルアミン樹脂（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＮＨ２０．５９ｍｍｏｌ／ｇ樹脂）を用いた固相ペプチド合成操作法により合成する。ＣＯＯＨ末端アミノ酸（例えばｔ−ブチルカルボニル−Ｐｈｅ）を４−（オキシメチル）フェナセチル基を介して固相に結合させる。これは従来のベンジルエステル連結部よりも安定な連結部であるが、得られるペプチドはなお水素化により切断することができる。水素ドナーとしてギ酸を使用する転移水素化をこの目的の為に使用する。ペプチド合成及び合成されたペプチドの分析の為に使用される詳細なプロトコルはＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０（１６）：１０２４８−１０２２５に付随するミニプリント補遺に記載されている。
【０１６４】
ペプチド、特にＤ型アミノ酸を含むペプチドの化学合成においては、合成は通常は所望の完全長産物に加えて多数のトランケーションされたペプチドを生成する。精製過程（例えばＨＰＬＣ）は典型的にはかなりの量の完全長産物の損失をもたらす。
【０１６５】
Ｄペプチド（例えばＤ−４）の合成においては、最も長い形態を精製する場合の損失を防止するために、混合物を透析して使用し、これにより最終ＨＰＬＣ精製を排除することができることは本発明の発見である。このような混合物は高度に精製された産物の力価の約５０％を損失する（例えば蛋白産物の重量当たり）が、混合物は約６倍多いペプチドを含有し、高い総活性を有する。
ＩＶ．医薬品製剤
本発明の方法を実施するために、本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）１つ以上を例えば小動脈機能障害を有するか、小動脈機能障害の危険性を有する（例えば脳又は腎臓において）と診断された固体に投与する。薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）は「ネイティブ」の形態において、又は、所望により、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体等の形態で投与することができるが、但し、塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は誘導体は薬理学的に適当であること、即ち本発明の方法において有効であることが必要である。活性剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は他の誘導体は合成有機化学の当業者の知る、そして例えばＭａｒｃｈ（１９９２）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ； Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ Ｅｄ．Ｎ．Ｙ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載されている標準的操作法を用いて製造してよい。
【０１６６】
例えば、酸付加塩は典型的には適当な酸との反応を行う従来の方法を用いて遊離の塩基から製造する。一般的に、薬剤の塩基形態をメタノール又はエタノールのような極性有機溶媒に溶解し、そして酸をそれに添加する。形成した塩は沈殿するか、又は、より低極性の溶媒の添加により溶液外に移行する。酸付加塩の製造のための適当な酸は有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイヒ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等、並びに、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の両方を包含する。酸付加塩は適当な塩基による処理により遊離の塩基に再変換してよい。本明細書における活性剤の特に好ましい酸付加塩はハロゲン化物の塩、例えば塩酸又はシュウ酸を用いて製造してよいものである。逆に、薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物）の塩基性の塩の調製物は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミン等のような製薬上許容しうる塩基を用いながら同様の態様において製造される。特に好ましい塩基性の塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、及び銅塩を包含する。
【０１６７】
エステルの製造では典型的には、薬剤の分子構造内に存在する場合のあるヒドロキシル及び／又はカルボキシル基への官能性付与を行う。エステルは典型的には遊離のアルコール基のアシル置換誘導体、即ち、Ｒがアルキル、そして好ましくは低級アルキルである式ＲＣＯＯＨのカルボン酸から誘導された部分である。エステルは所望により従来の水素化分解又は加水分解の操作法を用いて遊離の酸に再変換できる。
【０１６８】
アミド及びプロドラッグはまた当該分野で知られた、又は関連する文献に記載されている手法を用いて製造してよい。例えば、アミドはエステルから、適当なアミン反応体を用いて製造してよく、又は、アンモニア又は低級アルキルアミンとの反応により無水物又は酸クロリドから製造してよい。プロドラッグは典型的には個体の代謝系により修飾されるまでは治療上不活性である化合物をもたらす部分の共有結合により製造される。
【０１６９】
本発明の発見した薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）は、アテローム性動脈硬化症及び／又はその症状の予防及び／又は治療の処置の為の非経口、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、経口、経鼻（又は他の吸入）、直腸又は例えばエアロゾルによるか経皮的な患部（ｌｏｃａｌ）への投与に有用である。医薬組成物は投与方法に応じて種々の単位剤型において投与できる。適当な単位剤型は、例えば、粉末、錠剤、丸薬、カプセル、ロゼンジ、坐剤、パッチ、鼻用スプレー、注射剤、インプラント用持続放出製剤、脂質複合体等を包含するがこれらに限定されない。
【０１７０】
本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、及び／又は脂質）は典型的には製薬上許容しうる担体（賦形剤）と組み合わせることにより医薬組成物を形成する。製薬上許容しうる担体は例えば組成物を安定化させるか、活性剤の吸収を増大又は低減する作用を有する生理学的に許容される化合物１つ以上を含有できる。生理学的に許容される化合物は、例えば、炭水化物、例えばグルコース、スクロース又はデキストラン、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又はグルタチオン、キレート形成剤、低分子量蛋白、保護及び取り込み増強剤、例えば脂質、活性剤のクリアランス又は加水分解を低減する組成物、又は賦形剤又は他の安定化剤及び／又は緩衝剤を包含する。
【０１７１】
他の生理学的に許容される化合物は、水和剤、乳化剤、分散剤、又は、微生物の生育又は作用を防止するために特に有用である保存料を包含する。種々の保存料が良く知られており、例えばフェノール及びアスコルビン酸を包含する。当業者の知る通り、製薬上許容しうる担体、例えば生理学的に許容される化合物の選択は、例えば活性剤の投与経路及び活性剤の特定の物理化学的特性に応じて変動する。
【０１７２】
賦形剤は好ましくは滅菌され、一般的には望ましくない物質を含有しない。これらの組成物は従来のよく知られた滅菌手法により滅菌してよい。
【０１７３】
治療用途においては、本発明の組成物はアテローム性動脈硬化症の症状１つ以上に罹患しているか、又は、アテローム性動脈硬化症の危険性のある患者に対し、疾患及び／又はその合併症を治癒、又は少なくとも部分的に防止又は停止するために十分な量において投与する。これを達成するために十分な量は「治療有効用量」と定義される。この用途に有効な量は疾患の重症度及び患者の全身状態により変動する。組成物の単回又は複数回の投与は患者により必要とされる、そして耐容性を示される用量及び頻度に応じて投与してよい。いずれの場合も組成物は患者を効果的に治療（症状１つ以上を緩解）するために本発明の製剤の活性剤の十分な量を提供しなければならない。
【０１７４】
薬剤の濃度は広範に変動することができ、液量、粘度、体重等に主に基づきながら、そして選択された投与の特定の様式及び患者の必要性に従って選択することになる。しかしながら濃度は典型的には約０．１又は１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、そして場合により更に高用量の範囲に亘る用量を提供するように選択される。典型的な用量は約３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約３．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約７．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の実施形態においては、用量は約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の実施形態においては用量は約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲であり、一日２回経口投与される。当然ながらこのような用量は特定の対象又は対象グループにおける治療計画を最適化するように変動してよい。
【０１７５】
特定の実施形態においては、本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物及び／又は脂質）は、当該分野で良く知られている標準的方法に従って、経口（例えば錠剤による）によるか、又は注射剤として投与される。他の好ましい実施形態においては、薬剤は従来の経皮薬物送達系、即ち経皮「パッチ」を用いて皮膚を介して送達してもよく、そのような場合、活性剤は典型的には皮膚に固着すべき薬物送達装置として機能する積層構造内に含有される。このような構造において、薬剤組成物は典型的には上面の裏打ち層の下敷きとなる層、即ち「リザーバ」内に含有される。当然ながらこの関係において「リザーバ」という用語は皮膚の表面への送達のために究極的に使用可能である「活性成分」のある量を指す。即ち、例えば、「リザーバ」はパッチの裏打ち層の上の接着剤の内部、又は、当該分野で知られた種々のマトリックス製剤の何れかの内部にある活性成分を包含してよい。パッチは単一のリザーバを含有するか、又は複数のリザーバを含有してよい。
【０１７６】
１つの実施形態において、リザーバは薬物送達の間に皮膚に系を固着する機能を有する製薬上許容しうる接着剤の重合体マトリックスを含む。適当な皮膚接着剤の例はポリエチレン、ポリシロキサン、ポリイソブチレン、ポリアクリレート、ポリウレタン等を包含するがこれらに限定されない。或いは、薬剤含有リザーバ及び皮膚接着剤は別個の異なる層として存在し、接着剤は、この場合上記した重合体マトリックスであってよいリザーバの下敷となるか、又は液体又はヒドロゲルのリザーバであってもよく、又は、他の形態であってもよい。装置の最上面となるこれらの積層物の裏打ち層は好ましくは「パッチ」の基本的構造要素として機能し、そして装置にその可撓性の大部分を付与する。裏打ち層の為に選択される材料は好ましくは活性成分及び存在する如何なる他の物質に対しても実質的に非透過性である。
【０１７７】
局所薬物送達のための他の好ましい製剤は軟膏及びクリームを包含するがこれらに限定されない。軟膏は半固体の調製品であり、典型的にはワセリン又は他の石油誘導物を基剤とする。選択された活性剤を含有するクリームは、典型的には粘稠な液体又は半固体の乳液、頻繁には水中油又は油中水のいずれかである。クリーム基剤は典型的には水洗浄可能であり、そして油相、乳化剤及び水相を含有する。油相は「内部」相と称される場合もあり、一般的にワセリン及び脂肪アルコール、例えばセチル又はステアリルアルコールを含み；水相は通常は油相よりも大きい体積を有し、湿潤剤を含有するが、これらは必須ではない。クリーム製剤中の乳化剤は一般的にノニオン性、アニオン性、カチオン性又は両性の界面活性剤である。使用される特定の軟膏又はクリーム基剤は当業者の知る通り最適な薬物送達をもたらすものである。他の担体又はベヒクルの場合と同様、軟膏基剤は不活性で安定であり、非刺激性及び非感作性でなければならない。
【０１７８】
典型的なペプチド製剤とは異なり、Ｄ型アミノ酸を含む本発明のペプチドは経口でも胃酸等による蛋白分解に対する保護を行うことなく投与できる。しかしなお、特定の実施形態においては、ペプチドの送達は保護賦形剤の使用により増強できる。これは典型的にはポリペプチドを組成物と複合体化することによりこれを酸及び酵素の加水分解に対して抵抗性とするか、又は、リポソームのような適切に抵抗性である担体中にポリペプチドをパッケージングすることにより達成される。経口送達のためにポリペプチドを保護する手段は当該分野で良く知られている（例えば治療薬の経口送達のための脂質組成物を記載している米国特許５，３９１，３７７を参照）。
【０１７９】
上昇した血清中半減期は持続放出蛋白「パッケージング」系の使用により維持することができる。このような持続放出系は当該分野で良く知られている。１つの好ましい実施形態においては、蛋白及びペプチドのためのＰｒｏＬｅａｓｅ生体分解性微小球送達系（Ｔｒａｃｙ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１４：１０８；Ｊｏｈｎｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，（１９９６），Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２：７９５；Ｈｅｒｂｅｒｔ ｅｔ ａ．（１９９８），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１５，３５７）、他剤を伴うか伴うことなく乾燥製剤として調製できる重合体マトリックス中に蛋白を含有する生体分解性の重合体微小球よりなる乾燥粉末が挙げられる。
【０１８０】
ＰｒｏＬｅａｓｅ微小球の製造プロセスは蛋白の一体性を維持しながら高い蛋白カプセル化効率を達成するように特に設計されている。プロセスは（ｉ）安定化賦形剤と共に薬剤の溶液を噴霧凍結乾燥することにより塊状蛋白から凍結乾燥蛋白粒子を製造すること、（ｉｉ）薬剤−重合体懸濁液を製造した後に超音波処理又はホモゲナイズにより薬剤の粒径を低減すること、（ｉｉｉ）液体窒素中に霧状化することにより凍結した薬剤−重合体微小球を製造すること、（ｉｖ）エタノールで重合体溶媒を抽出すること、及び、（ｖ）濾過及び真空乾燥により最終乾燥粉末産品を製造すること、よりなる。得られた粉末は蛋白の固体形態を含有しており、これは多孔性の重合体粒子内に均質固定的に分散されている。プロセスにおいて最も一般的に使用されている重合体である（ラクチド／グリコリド）共重合体（ＰＬＧ）は生体適合性及び生体分解性の双方である。
【０１８１】
カプセル化は低温（例えば−４０℃）で達成できる。カプセル化の間、蛋白は水の非存在下に固体状態に維持され、これにより蛋白の水誘導コンホーメーション変動を最小限にし、反応体として水を包含する蛋白分解反応を防止し、そして、蛋白が分解を起こすような有機−水性の界面を回避する。好ましいプロセスは大部分の蛋白が不溶性であることにより高いカプセル化効率（例えば９５％超）を与える溶媒を使用する。
【０１８２】
別の実施形態においては、溶液の成分１つ以上は希釈用の例えば保存容器中（例えば予め計量された容量の）の、又は、ある容量の水への添加する可溶性カプセル中の「濃縮物」として提供することができる。
【０１８３】
上記した製剤及び投与方法は例示を意図しており限定するものではない。当然ながら、本明細書に記載した教示を用いながら他の適当な製剤及び投与様式を容易に考案することができる。
Ｖ．小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態の治療のためのキット
別の実施形態において、本発明は小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする病的状態の症状１つ以上の緩解のため、又は、そのような状態の危険性のある対象（ヒト又は動物）の予防的処置のためのキットを提供する。キットは好ましくは本明細書に記載した活性剤１つ以上を含有する容器を含む。活性剤は単位剤型（例えば坐剤、錠剤、カプレット、パッチ等）において提供することができ、及び／又は場合により製薬上許容しうる賦形剤１つ以上と組み合わせてよい。
【０１８４】
キットは場合により更に目的の状態／病的状態の治療において使用される他剤１つ以上を含むことができる。このような薬剤は例えばベータブロッカー、血管拡張剤、アスピリン、スタチン類、ＡＣＥ阻害剤又はＡＣＥ受容体阻害剤（ＡＲＢ）等、例えば上記したものを包含するがこれらに限定されない。
【０１８５】
更に又、キットは場合により本発明の方法の実施又は「治療薬」又は「予防薬」の使用のための指示（即ちプロトコル）を示すラベル及び／又は説明書を包含する。好ましい説明書類は、小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態に伴う１つ以上を緩解するため、及び／又は、そのような状態の危険性のある個体においてそのような症状の１つ以上の発症又は増大を防止するための本発明の薬剤１つ以上の使用を説明する。説明書類は又場合により好ましい用量／治療用法、禁忌等を教示してもよい。
【０１８６】
説明書類は典型的には書面又は印刷された書類であるが、そのように限定されない。このような説明を格納し、それらをエンドユーザーに連絡することができる如何なる媒体も本発明は意図している。そのような媒体は例えば電子格納媒体（例えば磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えばＣＤＲＯＭ）等を包含する。このような媒体はそのような説明書類を与えるインターネットサイトのアドレスを包含してよい。
【実施例】
【０１８７】
以下の実施例は説明のために提示しており、請求項の本発明を限定するものではない。実施例１
図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃに示す通り、野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有している。低脂肪飼料食餌で飼育した場合ＬＤＬ受容体ヌルマウスは野生型マウスの血漿中ＬＤＬの二倍を示している。しかしながら、飼料飼育の場合はアテローム性動脈硬化症は殆ど観察されないが、後に示す図からわかる通りアテローム性動脈硬化症は最小限であったとしても脳の小動脈は顕著に肥厚化している。やはり後に示す図からわかる通り高脂肪高コレステロール（Ｗｅｓｔｅｒｎ）食餌で飼育した場合、これらのマウスはその脳小動脈に追加的な肥厚化を生じさせている。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育した場合、これらのマウスはまた広範なアテローム性動脈硬化症を発症している。
【０１８８】
最近の報告によれば、ＬＤＬＲ−／−マウスは海馬における低減したシナプス密度に関連する空間記憶障害を有する（Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ １６：２１２−２１９の例えば図２参照）。
【０１８９】
図２に示す通り、Ｄ−４Ｆと共に（３００μｇ／ｍｌで飲料水に加えて）６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬＲ−／−マウスはＴ迷路試験において自発的交替の数が顕著に向上したのに対し、同じ濃度の対照ペプチド（スクランブルドＤ−４Ｆ）を添加したものは向上しなかった。
【０１９０】
対照ペプチドと比較してＤ−４Ｆを投与したマウスに関する図２に示す結果は、ＬＤＬＲ−／−マウスを野生型マウス（ＬＤＬＲ＋／＋）と比較したＭｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（上出）の図２に示すものと顕著な同様性を示しており、経口Ｄ−４ＦがＬＤＬＲ−／−マウスにおける異常を逆行させたことを示唆している。Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．の図のデータは「パーセント交替」として示されている。本明細書の図２におけるデータは「自発的交替の数」について示されている。後に示す図３からわかる通り、スクランブルドＤ−４Ｆと比較した場合のＤ−４Ｆによるデータは「パーセント交替」として表示した場合には同様となっている。
【０１９１】
対照ペプチドスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）と比較した場合のＤ−４Ｆ投与によるＴ迷路試験における改善の別の兆候は図４のデータから得られる。
【０１９２】
Ｄ−４Ｆの注射が顔面動脈の血管反応性を改善したという報告がある（Ｏｕ Ｚ．Ｏｕ
Ｊ，Ａｃｋｅｒｍａｎ ＡＷ ｅｔ ａｌ．Ｌ−４Ｆ， ａｎ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−Ｉ ｍｉｍｅｔｉｃ，ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｒｅａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（アポリポ蛋白ミメティックのＬ−４Ｆは低密度リポ蛋白投与内皮細胞における酸化窒素及びスーパーオキシドのアニオンバランスを回復させる），Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ；１０７：１５２０−１５２４；Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０７：２３３７−２３４１）。これらの出版された試験においては、マウスの顔面動脈が使用されている。この動脈は約２５０μＭの内径を有する。
【０１９３】
本発明の適用の別の例は後に示す図５に記載するデータから生じるものであり、これはＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育しているＬＤＬ受容体ヌルマウスにＤＭＰＣを経口投与することは、大豆レシチンを投与するよりも顕著に良好にその顔面動脈の血管反応性を改善したことを示している。
【０１９４】
８週齢の雌性ＬＤＬ受容体ヌルマウスをＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育して飲料水単独（対照、ｎ＝６）を与えるか、又は、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育して１ｍｇ／ｍｌのダイズレシチン（ｎ＝６）又はＤＭＰＣ（ｎ＝６）を添加した飲料水を与えた。６週間後、顔面動脈の下顎下の切片を切開し、予め収縮させた２ｍｍ動脈輪のパーセント弛緩を０．０１〜１０μＭの範囲の濃度のアセチルコリン（内皮依存性弛緩剤）添加への応答において測定した。弛緩の特異性は３００μＭＬ−ＮＡＭＥ（酸化窒素シンターゼ阻害剤）及びナトリウムニトロプルシド（内皮非依存性酸化窒素ドナー）の添加により確認した。Ｌ−ＮＡＭＥの添加を行った群（アセチルコリンにより惹起される血管弛緩を抑制した）とナトリウムニトロプルシド又はパパベリン（最大拡張をもたらした）の間には差は無かった。これらの添加を行わない場合は、対照群におけるアセチルコリン血管弛緩において顕著な抑制が観察された。大豆レシチン群には弛緩改善の傾向が観察されたが、統計学的有意差には至らなかった。ＤＭＰＣを投与したマウスには血管弛緩において有意な改善が観察された（１μＭアセチルコリンでｐ＜０．０１；１０μＭアセチルコリンでｐ＜０．００１）。５０％血管拡張をもたらすアセチルコリン濃度の対数（ＬｏｇＥＣ５０、ｍＭ単位）は対照群で０．４７３であり、大豆レシチン投与群で０．０５７、そしてＤＭＰＣ投与群で０．００６であった。
【０１９５】
本発明者等は以前にアポＥヌルマウスへのＤＭＰＣ投与が血漿中アポＡ−Ｉ濃度及びＨＤＬ−コレステロールの上昇を誘発し、炎症性脂質の封鎖／除去／破壊、及び、前炎症性から抗炎症性へのＨＤＬの変換をもたらし、このマウスモデルにおいてアテローム性動脈硬化症の防止及び退行の両方があったことを発表している（Ｎａｖａｂ Ｍ，Ｈａｍａ Ｓ，Ｈｏｕｇｈ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｏｒａｌ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ（ＤＭＰＣ） ｒａｉｓｅｓ ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｅｖｅｌｓ， ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅｄｕｃｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅ−ｎｕｌｌ ｍｉｃｅ（経口合成リン脂質（ＤＭＰＣ）はアポリポ蛋白Ｅヌルマウスにおいて高密度リポ蛋白コレステロール濃度を上昇させ、高密度リポ蛋白機能を向上させ、そしてアテローム性動脈硬化症を顕著に低減する）．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００３；１０８：１７３５−１７３９）。
【０１９６】
即ち、本発明者等は炎症性脂質を封鎖／除去／破壊する２種の異なる薬剤（Ｄ−４Ｆ及びＤＭＰＣ）、即ちアポＡ−Ｉ及びＨＤＬコレステロールを増大させる１つの経口ペプチド及び１つの経口リン脂質は両方とも、小動脈、顔面動脈において測定した場合に小動脈機能を改善している。本発明の新しい発見は小型の動脈、即ち小動脈さえよりも小型の血管の構造及び機能を改善するための方法に関する。これらの小動脈は究極的には脳及び腎臓のような多様な組織の灌流を担っている。本明細書に示したデータ及び未公開のデータによれば、本発明者等は、本発明は炎症性脂質を封鎖／除去／破壊し、そして前炎症性高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）から抗炎症性に変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とする薬剤を投与することによる小動脈の構造および機能を改善するための一般的方法を与えると考える。これらの薬剤はクラスＡ両親媒性ヘリックスを含有するペプチド、Ｇ＊両親媒性ヘリックスを含有するペプチド、短鎖のペプチド又は非ペプチドであって分子量が９００ダルトン未満であり、酢酸エチルに少なくとも４ｍｇ／ｍｌの溶解度を有し、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、そして水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、そして、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成するもの；及びｓｎ−１及びｓｎ−２位が同一であり少なくとも３炭素原子を含有する経口用合成リン脂質を包含する。
実施例２
Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいてアポＡ−ＩミメティックペプチドＤ−４Ｆは脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善する。
要旨
直径１０〜１００μｍの脳小動脈の壁厚を飼料又はＷｅｓｔｅｒｎ食餌の単独又はＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆ添加で飼育した野生型及びＬＤＬ受容体ヌルＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定した。空間記憶はＴ迷路連続交替作業を用いて測定した。飼料の場合は、ＬＤＬ受容体ヌルマウスの脳小動脈壁厚は野生型と比較して増大し、そしてＷｅｓｔｅｒｎ食餌の場合は更に増大した（ｐ＜０．００１）。増大した脳小動脈壁厚は平滑筋αアクチン含有量の増大に部分的には起因しており、そしてＤ−４Ｆ投与により低減したがスクランブルドＤ−４Ｆではそうではなかった。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を添加することによりＴ迷路における遂行能力は有意に悪化（ｐ＜０．０５）し、スクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆを用いた場合に改善した（ｐ＜０．０５）。遂行能力及び小動脈壁厚における変化は血漿中脂質及び小動脈管腔直径とは無関係であった。
Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＤ−４Ｆの投与は血漿中脂質及び小動脈管腔直径とは無関係に脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善した。
材料及び方法
材料
Ｄ−４Ｆ及びスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｄ−４Ｆと同じＤ型アミノ酸を有するが、脂質結合の為に必要なヘリカルコンホーメーションをペプチドが達成できないように配列において操作されたペプチド）は前述の通り合成した（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５：２９０−２９２；Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５）。全ての他の試薬は以前に報告されている入手元から得た（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．，２５：１−７）。
マウス及び組織学的検討
雌性の野生型及びＬＤＬ受容体ヌルＣ５７ＢＬ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｕｒ，ＭＥ）から入手した。マウスは飼料食餌（Ｒａｌｓｔｏｎ Ｐｕｒｉｎａ）で飼育した後にＷｅｓｔｅｒｎ食餌（Ｔａｋｌａｄ／Ｈａｒｌａｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ，食餌Ｎｏ．８８１３７；４２％脂肪、０．１５％コレステロール、ｗ／ｗ）を投与した。脳小動脈の検討の為に、マウスを筋肉内ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）及びアセプロマジン（２．５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、Ｆｅｒｎａｇｕｔ等 （Ｆｅｒｎａｇｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１１４：１００５−１０１７；Ｆｅｒｎａｇｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１８５：４７−６２） の記載に従ってヘパリン（１０Ｕ／ｍｌ）を含有するリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）２５ｍｌ、次いでＰＢＳｐＨ７．４中の４％パラホルムアルデヒド１００ｍｌで左心室から心臓を灌流した。脳を迅速に取り出し、４℃で４％ＰＦＡ中２４時間保存した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１０％スクロースに移し、溶液の底部に沈降するまで放置した。脳の右半分をＯＣＴ（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ；Ｍｉｌｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．Ｅｌｋｈａｒｔ ＩＮ）中に包埋し、−４０℃でイソペンタン中凍結し、−２０℃の低温恒温槽内の切片化に付すまでは−８０℃で保存した。凍結した脳は伏在する白質が含まれるように冠状切断して８μｍ切片とし、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色して平滑筋αアクチンを調べた（Ｓｅｒｏｔｅｃ，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）。各脳の左半分はパラフィン包埋し、冠状切断して６μｍ厚の切片とし、Ｈ＆Ｅ染色した。ＵＣＬＡのＡｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅは全試験を認可した。
形態学的検討及び関連する統計学的方法
形態学的検討を行うことにより拡張して垂直に切断した全ての小動脈の血管壁厚を測定した。４０ｘの顕微鏡対物レンズを用いながら、切片化した血管をＳＰＯＴイメージソフトウエアを用いて撮影し、内径及び外径の３測定を各々につき行い、平均した。血管サイズの範囲は１０〜１６０μｍであり、壁と管腔の比の比較は、１０〜２０μｍ、２１〜２５μｍ、５１〜１００μｍ及び＞１００μｍの内径を有する動脈について別個に行った。各直径群から最低１０動脈を各脳の皮質領域及び深部白質領域において調べ、壁厚及び壁と管腔の比を測定した。各血管の免疫反応性中膜と内径の比は平滑筋αアクチンについて免疫染色した切片において評価した。全ての測定は１人の検査者により４０ｘレンズを装着したＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨ−２顕微鏡を用いて単一の焦点面において実施し、投与に関して盲検とした２観察者により反復した。観察者間の変動は、３検査者に壁厚及び管腔直径について同じ２０小動脈を測定させ、そして壁と管腔の比を計算させることにより調べた。変動係数は１４±１％であることがわかった。全てのデータはＩｎＳｔａｔ及びＰｒｉｓｍソフトウエア（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて計算した。異なる群の平均間の差の統計学的有意性は対応のないスチューデントのｔ検定又は一元配置ＡＮＯＶＡを用いて実施した。種々の群の複数の比較はＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較試験を用いて実施した。５％の確率水準（ｐ＜０．０５）を有意とみなした。
挙動試験及び関連する統計学的方法
Ｔ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）試験は午前９時〜午後４時に毎日実施し、投与群を知らない１人の検査者により実施した。マウスは挙動試験の２時間前に試験室に送ることにより、部屋の迷路外の視覚的手がかりに慣れさせた。本発明者等の試験において使用したＴ迷路の装置はＧｅｒｌａｉ等の記載（Ｇｅｒｌａｉ（１９９８）Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９５：９１−１０１）のものと同一とし、黒色アクリル底部を有する透明アクリル壁部より構成されるものとした。スタート及びゴールのアームの寸法は長さ７５ｃｍ、幅１２ｃｍ及び高さ２０ｃｍとした。迷路にはマニュアル遠隔制御により操作できる３つの取り外し可能なギロチンドアを装着した。試験室は天井及び床のライトにより照明し、ファンにより一定のバックグラウンドノイズを与えた。Ｔ迷路は黒色カーテンにより検査者から分離し、迷路内のマウスの運動はＴＶモニターにより観察し、ビデオ録画した。各個体マウス後にＴ迷路はＷｉｎｄｅｘスプレーで慎重に清浄化し、ペーパータオルで乾燥した。Ｔ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）はマウスの取り扱いを制限し、その探索挙動が未撹乱で実施できるようにする。本試験で使用した操作法はＧｅｒｌａｉ等の記載（Ｇｅｒｌａｉ ｅｔ ａｌ．（前出））したものと同一であり、１強制及び１４自由選択の試行よりなるものとした。マウスにより行われた連続選択を測定し、１４自由選択試行の間の交替率を計算した（０％−交替無し、１００％−各試行ごとに交替、５０％−無作為選択）。１５試行を完了するために必要な時間（秒）を記録して分析した。Ｔ−ＣＡＴ試験はビデオトラッキングシステム（ＳＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により連続的に登録し、コンピューターに格納した。統計学的作業はＳｔａｔＶｉｅｗソフトウエア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を用いて実施した。
その他の操作法 血漿中リポ蛋白及び脂質の濃度は前述の通り測定した（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５；Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．，２５：１−７）。
結果
脳小動脈壁厚はＬＤＬ受容体ヌルマウスで増大し、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加により更に増大する
図６に示す通り、飼料食餌で飼育した場合には小動脈壁厚は野生型マウスと比較してＬＤＬ受容体ヌルマウスで高値であり、そして６週間のＷｅｓｔｅｒｎ食餌後には小動脈壁厚はＬＤＬ受容体ヌルマウスで更に増大した。
脳小動脈壁厚はＤ−４Ｆ投与により低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは低減しなかった
図７Ａ〜７Ｃは６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスの飲料水にＤ−４Ｆを３００μｇ／ｍＬ添加することにより、飲料水にスクランブルドＤ−４Ｆの同じ濃度を添加した場合と比較して、低減した脳小動脈壁厚となったことを示している。図７ＤはＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスの間で脳小動脈管腔直径には差が無いことを示している。一部の検査者は小動脈壁厚の最も信頼性の高い測定は各小動脈の壁厚をその小動脈の管腔直径で割ることにより得られることを論じている（Ｍｕｌｖａｎｙ（１９９９）Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４１：９−１３）。図７Ｅ〜７Ｇは壁と管腔直径の比はスクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆを投与したマウスにおいて有意に低値であったことを示している。血漿中総コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール又はトリグリセリドの濃度においては、スクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆをマウスに投与した場合に有意差は無かった。総コレステロール濃度はＤ−４Ｆ投与マウスで１，０７６±７５（平均±ＳＥＭ）であったのに対しスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスでは９７０±６１ｍｇ／ｄＬであった。ＬＤＬ及びＨＤＬコレステロールの濃度はＤ−４Ｆ投与マウスでそれぞれ９２４±７６及び８６±６ｍｇ／ｄＬであったのに対しスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスではそれぞれ８３４±６３及び７９±５ｍｇ／ｄＬであった。トリグリセリドはＤ−４Ｆ及びスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスではそれぞれ３３０±２５及び２８８±２５ｍｇ／ｄＬであった。
脳小動脈壁の肥厚化は部分的には平滑筋αアクチン含有量の増大に起因する
図８Ａに示す通りＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＷｅｓｔｅｒｎ食餌の投与は、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えたＬＤＬ受容体ヌルマウスへの脳小動脈の壁における平滑筋αアクチンの量の有意な増大をもたらした。図８ＢはＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスに由来する平滑筋細胞αアクチンについて染色した代表的な脳小動脈を示す。図８Ｃ〜８ＥはＤ−４Ｆのマウスへの投与がスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスと比較して脳小動脈壁平滑筋細胞αアクチンを有意に低減したことを定量的に示している。
ＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＷｅｓｔｅｒｎ食餌の供給は空間記憶の障害をもたらし、これはＤ−４Ｆの投与により有意に改善されたがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なる結果であった
図９Ａ〜９Ｄは図３Ａに記載したＬＤＬ受容体ヌルマウスをＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育した場合、Ｔ−ＣＡＴで測定したところ、それらは空間記憶障害を有していたことを示している。図９Ｅ〜９Ｇは図７及び８Ｂ〜８Ｅに記載のマウスの経口Ｄ−４Ｆ投与がＴ−ＣＡＴで測定した場合に遂行能力の顕著な改善をもたらしたことを示している（スクランブルドＤ−４Ｆでは異なる結果）。スクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスは１５試行を完了するまでＤ−４Ｆ投与マウスより長時間を要した（それぞれ５７９±２３秒と５４８±３７秒）が、この差は統計学的有意差には至らなかった。しかしなお、図９Ｅ〜９Ｇに示すデータはＤ−４Ｆ投与による改善を明らかに示している。
考察
本実施例に示したデータ及び以前に公開されたもの８，１０はＬＤＬの濃度がマウスの動脈ツリーの全ての分枝部に影響することを示唆している。飼料食餌ではＬＤＬ受容体ヌルマウスは管腔直径１５〜４０μｍの脳小動脈において顕著に増大した小動脈壁厚を有していた（図６Ａ）。僅か６週間のＷｅｓｔｅｒｎ食餌の後には、野生型マウスと比較してこれらのＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいて脳小動脈の壁厚の顕著な増大が観察された（図６Ａ〜６Ｃ）。
【０１９７】
Ｈｅｉｓｔａｄ等（Ｈｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２６：５０９−５１３）はアテローム性動脈硬化症及び高血圧血管の相違点と類似点を強調している。この研究者等は「アテローム性動脈硬化症及び高血圧の両方における血管構造の変化は血管壁の肥厚化及び血管の『リモデリング』を特徴とする」という観察結果を示している。リモデリングはアテローム性動脈硬化血管の管腔の大きさを温存する傾向を有し、そして高血圧血管においてより小さい管腔をもたらす。図７Ｄに示す通り、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌（６週間給餌）により誘導されたＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける脳小動脈の肥厚化は管腔直径の変化とは無関係である可能性があると考えられる。本発明者等はこれらのマウスにおいて血圧を測定しておらず、より長い曝露時間により管腔直径が改変されるかどうか本発明者等には不明である。しかしながら、僅か６週間の期間内において、脳小動脈の壁と管腔の比は、平滑筋細胞αアクチン含有量により測定したところ、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えた場合には顕著に増大している（図８Ａ）。
【０１９８】
反応性酸素物質種がリッチ化されたＬＤＬが血管平滑筋の細胞成長を刺激することは以前より知られている（Ｇｏｒｏｇ（１９９７）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１２９：１−７）。更に又、シスタチオニンαシンターゼの欠損により増大した酸化ストレスを有するマウスはその脳小動脈の増大した平滑筋含有量を伴った脳血管の肥大を示すことが報告されている（Ｂａｕｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒ Ｒｅｓ，９１：９３１−９３７）。血漿中脂質濃度を変化させることなくマウスにおいてＬＤＬ脂質ヒドロパーオキシドを低減することが知られている（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５）１経口Ｄ−４Ｆの投与は、血漿中脂質を変化させること無くリポ蛋白の脂質ヒドロパーオキシドを低減することにより脳小動脈平滑筋αアクチンの増大（図８Ｂ〜８Ｅ）を緩解するかもしれないと推測され得る。
【０１９９】
Ｍｕｌｄｅｒ等（Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ １６：２１２−２１９）は、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスは飼料食餌で飼育した野生型マウスと比較して空間記憶障害を有することを最初に報告している。これらの研究者等は異常がアポＥヌルマウスにおいて報告されたもの（Ｋｒｕｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｅｒｕｏ Ｒｅｐｏｒｔ，８：２５０５−２５１０；Ｏｉｔｚｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，７５２：１８９−１９６；Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，７８８：１５１−１５９；Ｖｅｉｎｂｅｒｇｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９１：４０１−４０３；Ｋｒｚｙｗｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９２：１２７３−１２８６；Ｒａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ ４０４：３５２−３５４）と同様であり、そして脳の細胞にリポ蛋白の構成成分を提供することができないことにより誘導された脳細胞における原発性の異常に起因していると結論している。図９に示したデータと図６〜８におけるものを総括すれば、別の仮説が示唆される。原発性の異常はＨｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２６：５０９−５１３により記載された「シック血管症候群」に部分的又は完全に起因しており、脳細胞にリポ蛋白構成成分を送達できないことによるものではないと考えられる。この仮説を裏付けるものは高脂血症の悪化を伴った機能不全の悪化である（図９Ａ〜９Ｄ）。原発の不全がＬＤＬ受容体の非存在による脳細胞に送達されるリポ蛋白構成成分の欠如によるものであるとすれば、非受容体媒介経路による脳細胞へのリポ蛋白の送達も同様に高脂血症の増大に伴って増大することから、血漿中リポ蛋白濃度の上昇を伴った機能の改善が期待され得る。図９に示される機能的異常に関わる血管の根拠を更に裏付けるものは、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌により悪化（図６及び８Ａ）し、そして経口Ｄ−４Ｆにより改善された（スクランブルドＤ−４Ｆでは改善されない）（図７及び８Ｂ〜８Ｅ）小動脈における機能的異常と構造的変化の間の相関である。本発明者等は、これらのマウスにおいて脳小動脈の血管反応性は測定しなかった。しかしながらＰｒｉｔｃｈａｒｄ等はＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける顔面動脈（直径約２４０μｍ）の血管反応性はＷｅｓｔｅｒｎ食餌により重度に障害を受け、４Ｆ投与により劇的に改善したことを観察している（Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０７：２３３７−２３４１；Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ９７：１１９０−１１９７）。Ｈｅｉｓｔａｄ等（Ｈｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３９（Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．８）：Ｈ５３９−Ｈ５４４）はアテローム形成性の食餌を与えることにより高コレステロール血症としたサルにおいて高炭酸ガスに対する最大脳血管拡張応答が障害を受けたが、低効力の血管拡張剤の刺激の間は高炭酸ガスに対する自己調節応答が温存されたことを報告している。興味深いことに、サルを退行性の食餌で飼育し、最大血管拡張に付したところ、脳血管床の応答性は顕著に改善されている（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８３）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７１：１０４−１１３）。
【０２００】
興味深いことに、皮質下のアテローム性動脈硬化性の脳症の血管病（ビンスヴァンガー病）に罹患したヒトにおいて、直径１００μｍ未満の脳血管における平滑筋αアクチンの増大が観察されている（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｓｔｒｏｋｅ，３１：１８３８−１８４２）。「シック血管症候群」がヒトの痴呆症において以前より認識されているよりも広範な役割を果たしていること、及び、Ｄ−４ＦのようなアポＡ−Ｉミメティックペプチドの使用がそのような疾患で有益な作用を有することが推測され得る。
【０２０１】
本明細書に記載した実施例及び実施形態は説明を目的としているのみであり、そして、それを鑑みながら種々の改変又は変更が当業者には示唆されるが、それらは本明細書の精神及び範囲及び添付請求項の範囲に包含されることが理解される。本明細書において引用した全ての公開物、特許及び特許出願は全ての目的の為に参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００４年１２月６日に出願された、ＵＳＳＮ６０／６３４，３１８号に対する優先権を主張する。ＵＳＳＮ６０／６３４，３１８号は、全ての目的のために、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（連邦支援研究開発下に行われた発明の権利に関する陳述）
本研究は米国国立衛生研究所のＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ Ｂｌｏｏｄ Ｌｕｎｇ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの認可番号ＨＬ３０５６８により部分的に支援されている。アメリカ合衆国政府は本発明における特定の権利を有してよい。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は血管医学の分野に関する。特に本発明は小血管の構造及び機能を改善させ、そしてそれにより循環障害に関連する病的状態を緩解する新しい方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
本明細書に記載する小動脈は２００μＭ未満の直径（灌流固定化後、又はインビボ）を有する動脈循環（静脈循環に対する）における血管である。高血圧、加齢、くも膜下出血、多発性梗塞痴呆、アルツハイマー病及び慢性腎臓病並びに他の状態に関連する小動脈の変化に関して広範な文献が存在する。種々の病理学的状態は正常な血管反応性の損失を伴うこれらの小動脈の肥厚化をもたらす場合がある。
【０００５】
血圧低下への正常な応答は抵抗を低減し、そして前方への流動を維持するための血管拡張である。血圧の低下に直面して小動脈を拡張することができないことは、標的臓器への血流の低下をもたらす。標的臓器が脳である場合は、前方への血流の低下は関与する小動脈の領域の梗塞をもたらす場合がある。
【０００６】
小動脈は大変小型のため、それらは通常は脳の小領域に対して機能しており、従って梗塞は小さく「物忘れ（ｓｅｎｉｏｒ ｍｏｍｅｎｔ）」として知覚されるのみである。しかしながら、本発明者等は長年に亘るこのような一連の傷害の蓄積が顕著な終末器損傷をもたらすと考える。
【０００７】
このような終末器損傷の防止のための主要な治療法は血圧の制御及び血漿中グルコース及び脂質の濃度の制御を包含する。小型〜大型の動脈の構造及び機能を改善するための特定の薬剤（例えばスタチン類）の使用は知られており、これらの薬剤がコレステロールを低下させ動脈への炎症細胞浸潤を低減する能力に関連していると推定されている（例えば、非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０９（２１Ｓｕｐｐｌ１）：ＩＩ１８−２６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。
【００１０】
即ち、特定の実施形態においては、本発明は小動脈の構造及び／又は機能を改善させる方法を提供する。方法は典型的には、小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において本明細書に典型的に記載した活性剤１つ以上をそれを必要とする哺乳動物に投与することを包含する。種々の実施形態において、小動脈は腎臓及び／又は脳及び／又は肺胞内の小動脈である。哺乳動物はヒト、例えばそのような治療又は予防を必要としている患者、又は非ヒトであることができる。即ち医療用及び獣医科用の用途が考えられる。種々の実施形態において、哺乳動物は記憶力損失又は学習力障害及び／又は腎機能障害及び／又は肺胞（肺）機能障害を有すると診断されたヒトである。特定の実施形態においては、哺乳動物はアテローム性動脈硬化症及び／又は関連の病的状態を有するかその危険性があると診断されていない、及び／又は、アテローム性動脈硬化症及び／又は関連する病的状態に関わる治療を受けていないヒトである。種々の実施形態において、活性剤（例えばペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質）は単位用量製剤である。種々の実施形態において、活性剤は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される。種々の実施形態において、投与の方法は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路によるものである。特定の実施形態においては、活性剤はＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ、環状変異Ｄ４Ｆ、環状変異Ｌ４Ｆ、環状変異リバースＬ４Ｆ、環状変異リバースＤ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される。種々の実施形態において、活性剤は製薬上許容しうる賦形剤との組み合わせにおいて提供される。
【００１１】
特定の実施形態においては、本発明は構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療における使用のための本明細書に記載した活性剤を提供する。更に又、構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療における使用のための医薬の製造のための本明細書に記載した活性剤の使用が提供される。
【００１２】
更に又、異常な小動脈の構造又は機能を特徴とする状態の治療のためのキットが提供される。キットは典型的には本明細書に記載した活性剤を含有する容器１つ以上、及び、異常な小動脈の構造又は機能を特徴とする状態の治療における活性剤の使用を教示する説明書を含む。種々の実施形態において、活性剤（例えばペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質）は単位用量製剤である。種々の実施形態において、活性剤は経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される。特定の実施形態においては、活性剤はＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ、環状変異Ｄ４Ｆ、環状変異Ｌ４Ｆ、環状変異リバースＬ４Ｆ、環状変異リバースＤ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される。種々の実施形態において、活性剤は製薬上許容しうる賦形剤との組み合わせにおいて提供される。
定義
「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」という用語は、単離されたポリペプチドに言及している場合は、そのネイティブの状態において存在する場合に通常それに付随している成分を実質的又は本質的に含有しない物質を指す。核酸及び／又はポリペプチドに関しては、用語は、天然においてそれに典型的にフランキングしている配列にもはやフランキングされていない核酸又はポリペプチドを指す。化学的に合成されたポリペプチドは、それがネイティブの状態で（例えば血液、血清中において）存在しないため「単離された」ものである。特定の実施形態においては、「単離された」という用語はポリペプチドが天然に存在しない場合を指す。
【００１３】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「蛋白」という用語はアミノ酸残基の重合体を指すために本明細書においては互換的に使用する。用語はアミノ酸残基１つ以上が相当する天然に存在するアミノ酸の人工的化学的類縁体であるアミノ酸重合体、並びに、天然に存在するアミノ酸重合体に適用する。
【００１４】
「両親媒性ヘリックスペプチド」という用語は少なくとも１つの両親媒性ヘリックス（両親媒性ヘリックスドメイン）を含むペプチドを指す。本発明の特定の両親媒性ヘリックスペプチドは両親媒性ヘリックス２つ以上（例えば３、４、５等）を含むことができる。
【００１５】
「クラスＡ両親媒性ヘリックス」という用語は、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の隔離をもたらすα−ヘリックスを形成する蛋白構造を指す（例えばＳｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：１０３−１１７参照）。
【００１６】
「アポリポ蛋白Ｊ（ａｐｏＪ）」は種々の名称、例えばクラステリン、ＴＲＰＭ２、ＧＰ８０及びＳＰ４０，４０により知られている（Ｆｒｉｔｚ（１９９５）Ｐｐ１１２， Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ：Ｒｏｌｅ ｉｎ Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ（Ｈａｒｍｏｎｙ ＪＡＫ Ｅｄ．），Ｒ．Ｇ．Ｌａｎｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ，ＴＸ）。これは当初はヘテロ２量体糖蛋白及び培養ラットセルトーリ細胞の分泌蛋白の成分として説明されていた（Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ；２７：２３３２４０）。翻訳産物はジスルフィド結合した３４ｋＤａのαサブユニット及び４７ｋＤａのβサブユニットへの細胞内切断を起こす一本鎖前駆体蛋白である（Ｃｏｌｌａｒｄ ａｎｄ
Ｇｒｉｓｗｏｌｄ（１８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６：３２９７−３３０３）。これは細胞傷害、脂質輸送、アポトーシスに関連しており、そして細胞傷害又は細胞死により生じる細胞破砕物のクリアランスに関与している。クラステリンは脂質、ペプチド及び蛋白及び疎水性プローブ１−アニリノ−８−ナフタレンスルホネートを含む種々の分子に高い親和性で結合することがわかっている（Ｂａｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４０：１１８２８−１１８４０）。
【００１７】
クラスＧの両親媒性ヘリックスは球状蛋白中に存在し、そしてそのためクラスＧと称されている。このクラスの両親媒性ヘリックスの特徴は、それが狭小な非極性面と共に極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を保有している点である。狭小な非極性の面の為に、このクラスはリン脂質とは容易に会合しない（Ｓｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．８：１０３−１１７；Ｅｒｒａｔｕｍ（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．９：７９参照）。数個の交換可能なアポリポ蛋白はＧ両親媒性ヘリックスと同様であるが同一ではない特性を有している。クラスＧの両親媒性ヘリックスと同様、この別のクラスは極性の面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を有している。しかしながら、狭小な非極性の面を有するクラスＧの両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスは広大な非極性の面を有しており、これによりこのクラスはリン脂質と容易に結合することができ、クラスはこれを両親媒性ヘリックスのクラスＧと区別するためにＧ＊と命名されている（Ｓｅｇｒｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３：１４１−１６６；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｐ．１０９−１４２， Ｔｈｅ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｈｅｌｉｘ， Ｅｓｐａｎｄ，Ｒ．Ｍ．Ｅｄ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ参照）。両親媒性ヘリックスドメインを識別して分類するコンピュータープログラムがＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８７−２９６に記載されており、そして例えばヘリカルホイールプログラム（ＷＨＥＥＬＰＰＡＲＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットプログラム（ＨＥＬＮＥＴ、ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリカルホイールの追加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯ又はＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットの追加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）等が包含される。
【００１８】
「緩解する」という用語は「アテローム性動脈硬化症の症状１つ以上を緩解すること」に関して使用する場合は、アテローム性動脈硬化症及び／又は関連する病的状態の症状の特徴１つ以上の低減、防止又は排除を指す。このような低減は、例えば、酸化リン脂質の低減又は排除、アテローム性動脈硬化プラークの形成及び破壊の低減、心臓発作、アンギナ又は卒中のような臨床事象の低減、高血圧の低減、炎症性蛋白生合成の低減、血漿中コレステロールの低減等を包含する。
【００１９】
「エナンチオマーアミノ酸」という用語は相互に重ね合わせることができない鏡像である少なくとも２つの形態において存在できるアミノ酸を指す。大部分のアミノ酸（グリシンを除く）はエナンチオマー性であり、いわゆるＬ型（Ｌアミノ酸）又はＤ型（Ｄアミノ酸）として存在する。大部分の天然に存在するアミノ酸は「Ｌ」アミノ酸である。「Ｄアミノ酸」及び「Ｌアミノ酸」という用語は、面−偏光の回転の特定の方向よりはむしろアミノ酸の絶対的配置を指すために使用する。その使用法は当業者の知る標準的な使用法と合致する。アミノ酸は本明細書においては、標準的な１文字又は３文字のコード、例えばＨａｎｄｂｏｏｋ Ｏｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＤｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎにおけるＳｔａｎｄａｒｄ ＳＴ．２５に示されているものを用いて標記する。
【００２０】
「保護基」という用語は、アミノ酸の官能基（例えば側鎖、αアミノ基、αカルボキシル基等）に結合するとその官能基の性質をブロック又はマスクする化学基を指す。好ましいアミノ末端保護基は例えばアセチル又はアミノ基である。他のアミノ末端保護基は例えば脂肪酸の場合のようなアルキル鎖、プロペニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。好ましいカルボキシ末端保護基は例えばアミド又はエステルを形成する基を包含するがこれらに限定されない。
【００２１】
「酸化剤による酸化からリン脂質を保護する」という表現は、そのリン脂質が酸化剤（例えば過酸化水素、１３−（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５−（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、ＨＥＴＥ等）と接触した場合にリン脂質の酸化の速度（又は生成した酸化リン脂質の量）を低減する化合物の能力を指す。
【００２２】
「低密度リポ蛋白」又は「ＬＤＬ」という用語は当業者の通常の使用法に従って定義される。一般的に、ＬＤＬは超遠心分離で単離した場合に密度範囲ｄ＝１．０１９〜ｄ＝１．０６３に存在する脂質−蛋白複合体を指す。
【００２３】
「高密度リポ蛋白」又は「ＨＤＬ」という用語は当業者の通常の使用法に従って定義される。一般的に、ＨＤＬは超遠心分離で単離した場合に密度範囲ｄ＝１．０６３〜ｄ＝１．２１に存在する脂質−蛋白複合体を指す。
【００２４】
「グループＩのＨＤＬ」という用語は酸化脂質（例えば低密度リポ蛋白の場合）を低減するか、又は、酸化剤による酸化から酸化した脂質を保護する高密度リポ蛋白又はその成分（例えばａｐｏＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ等）を指す。
【００２５】
「グループＩＩのＨＤＬ」という用語は脂質を酸化から保護する、又は、酸化された脂質を修復（例えば還元）する場合に、低減された活性又は無活性を示すＨＤＬを指す。
【００２６】
「ＨＤＬ成分」という用語は高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）を含む成分（例えば分子）を指す。酸化から脂質を保護するか、修復する（例えば酸化された脂質を還元する）ＨＤＬの試験はまたそのような活性を示すＨＤＬの成分（例えばａｐｏＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ等）に関する試験を包含する。
【００２７】
「ヒトアポＡ−Ｉペプチド」という用語は完全長ヒトアポＡ−Ｉペプチドを指すか、又は、クラスＡの両親媒性ヘリックスを含むそのフラグメント又はドメインを指す。
【００２８】
「単球反応」とは本明細書においては、アテローム性動脈硬化プラークの形成に関連する「炎症応答」に特徴的な単球活性を指す。単球反応は血管壁の細胞（例えば血管内皮の細胞）への単球の接着、及び／又は、内皮下の空間への化学走性、及び／又は、マクロファージへの単球の分化を特徴とする。
【００２９】
「無変化」という用語は、酸化リン脂質の量に言及している場合は、検出可能な変化が無いこと、より好ましくは統計学的に有意な変化がないこと（例えば少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９８％又は９９％の信頼水準において）を指す。検出可能な変化の非存在はまた、酸化されたリン脂質の濃度が変化するが、本明細書に記載した蛋白の非存在下、又は他の陽性又は陰性の対照を比較対照とした場合ほどではない試験結果を指す場合もある。
【００３０】
以下の略記を本明細書においては使用する。ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＯＶＰＣ：１−パルミトイル−２−（５−オキソバレリル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＧＰＣ：１−パルミトイル−２−グルタリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＥＩＰＣ：１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシイソプロスタンＥ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＣｈＣ１８：２：コレステリルリノレエート；ＣｈＣ１８：２−ＯＯＨ：コレステリルリノレエートヒドロパーオキシド；ＤＭＰＣ：１，２−ジテトラデカノイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ホスホコリン；ＰＯＮ：パラオキソナーゼ；ＨＰＦ：標準化高電力場；ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＢＬ／６：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ；Ｃ３Ｈ：Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ。
【００３１】
「保存的置換」という用語は分子の活性（特異性（例えばリポ蛋白に対する））又は結合親和性（例えば脂質又はリポ蛋白に対する）を実質的に改変しないアミノ酸置換を反映した蛋白又はペプチドを指す。典型的には、保存的アミノ酸置換は、１つのアミノ酸の、同様の化学特性（例えば電荷又は疎水性）を有する別のアミノ酸との置換を包含する。以下の６つのグループは、相互に典型的な保存的置換であるアミノ酸を各々が含んでいる。１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；及び６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。
【００３２】
「同一」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関する場合、後述する配列比較アルゴリズムの１つを用いて、又は目視的検査により測定した場合に、最大の相応となるように対比整列させれば、同じであるか、又は同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドの特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。本発明のペプチドに関しては、配列の同一性はペプチドの完全長に亘り決定される。
【００３３】
配列比較のためには、典型的には１つの配列が比較対照配列として機能し、それに対して被験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合は、被験及び比較対照の配列をコンピューターに入力し、必要に応じてサブ配列の座標を指定し、そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターを指定する。次に配列比較アルゴリズムが指定されたプログラムパラメーターに基づいて比較対照配列と相対比較した場合の被験配列に関するパーセント配列同一性を計算する。
【００３４】
比較のための配列の最適アライメントは例えばＳｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所ホモロジーアルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４の同様性検索方法により、これらのアルゴリズムのコンピューター処理により（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、又は、目視的検査により実施することができる（例えば一般的には上出Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．参照）。
【００３５】
有用なアルゴリズムの１例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰはプログレッシブペアワイズアライメントを用いて関連する配列のグループから多重配列アライメントを作成することにより関連性及びパーセント配列同一性を示す。更にアライメントを作成するために使用したクラスタリングの関連性を示すツリー又は樹状図をプロットする。ＰＩＬＥＵＰはＦｅｎｇ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０のプログレッシブアライメント法の単純化を使用している。使用する方法はＨｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ５：１５１−１５３により記載された方法と同様である。プログラムは３００配列までをアラインすることができ、それぞれが５０００ヌクレオチド又はアミノ酸の最大長である。多重アライメントの操作法は２つの最も似ている配列のペアワイズなアライメントから開始され、２つのアラインされた配列のクラスターを形成する。その後このクラスターを次に最も関連している配列又はアラインされた配列のクラスターにアラインする。配列の２つのクラスターは２つの個々の配列のペアワイズなアライメントの単純な延長によりアラインされる。最終アライメントはプログレッシブペアワイズアライメントのシリーズにより達成される。プログラムは特定の配列及び配列比較の領域に関するそのアミノ酸又はヌクレオチド座標を指定することにより、そして、プログラムパラメーターを指定することにより実行される。例えば比較対照配列を他の被験配列と比較することにより、以下のパラメーター、即ち、デフォルトギャップウエイト（３．００）、デフォルトギャップ長ウエイト（０．１０）及びウエイト付けされた最終ギャップを用いながらパーセント配列同一性の関連性を決定することができる。
【００３６】
パーセント配列同一性及び配列同様性を調べるために適しているアルゴリズムの別の例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウエアはＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）より入手可能である。このアルゴリズムでは先ず、質問配列における長さＷの短いワードを識別することにより高スコア配列ペア（ＨＳＰ）を発見し、これはデータベース配列内の同じ長さのワードとアラインした場合にマッチするか、又はある正の値を有する閾値評点Ｔを満足するものである。Ｔは近隣ワード評点閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，上出）。これらの初期の近隣ワードのヒットはそれらを含有するより長いＨＳＰを発見するための検索を開始するための根源となる。次にワードヒットを累積アライメント評点が増大できる限り各配列に沿って両方向に延長する。累積評点はヌクレオチド配列の場合はパラメーターＭ（マッチする残基のペアに対するリワード評点；常時＞０）及びＮ（ミスマッチ残基に対するペナルティー評点；常時＜０）を用いて計算する。アミノ酸配列の場合は、採点マトリックスを用いて累積評点を計算する。各方向のワードヒットの延長を停止する時は、累積アライメント評点がその最大達成値から量Ｘだけ低下するか；１つ以上の負の評点の残基のアライメントの累積により累積評点が０以下となるか；又は何れかの配列の末端に到達した時である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ及びＸはアライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＩＮプログラム（ヌクレオチド配列の場合）はデフォルト値として１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４及び両方の鎖の比較を使用している。アミノ酸配列の場合は、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルト値として３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２採点マトリックスを使用している（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５参照）。
【００３７】
パーセント配列同一性を計算するほかに、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列の間の同様性の統計学的分析を実施する（例えばＫａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３−５７８７参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより与えられる同様性の１つの尺度は最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列の間のマッチが偶然起こる確率の指標を与えるものである。例えば、被験核酸の比較対照核酸との比較において最小合計確率が約０．１未満である場合、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合に、核酸は比較対照配列と同様とみなされる。
【００３８】
「環状変異した蛋白」とは、蛋白の天然／本来の末端が連結され、そして形成された環状蛋白が別の点で開裂することにより新しいＣ及びＮ末端が形成されているものである。環状変異蛋白は末端の実際の連結及び別の点における開裂により必ずしも形成される必要はなく、むしろ環状変異した変異体と同一の配列を有するように新規に合成／発現されてもよい。２つの蛋白は、第１の蛋白のＣ末端部分におけるフラグメントが第２の蛋白のＮ末端部分におけるフラグメントとマッチし、そして第１の蛋白のＮ末端部分におけるフラグメントが第２の蛋白のＣ末端部分のフラグメントとマッチする場合に、環状変異（ＣＰ）により関連付けられる。環状変異を発見する方法は当該分野で知られている（例えばＵｌｉｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１５（１１）：９３０−９３６参照）。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
小動脈の構造及び／又は機能を改善させる方法であって、該方法が下記工程：
小動脈の構造又は機能を改善させるために十分な用量において１つ以上の表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載した小有機分子をそれを必要とする哺乳動物に投与すること、
を含む、方法。
（項目２）
前記小動脈が腎臓における小動脈である、項目１記載の方法。
（項目３）
前記小動脈が脳における小動脈である、項目１記載の方法。
（項目４）
前記哺乳動物がヒトである、項目１記載の方法。
（項目５）
前記哺乳動物が記憶力損失又は学習力障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目６）
前記哺乳動物が腎機能障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目７）
前記哺乳動物が肺胞機能障害を有すると診断されたヒトである、項目１記載の方法。
（項目８）
前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症を有するかその危険性があると診断されていないヒトである、項目１記載の方法。
（項目９）
前記ペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質が単位用量製剤中にある、項目１記載の方法。
（項目１０）
活性剤が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される、項目１記載の方法。
（項目１１）
前記投与が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による、項目１記載の方法。
（項目１２）
前記活性剤がＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目１３）
前記活性剤が製薬上許容しうる賦形剤と組み合わせて提供される、項目１記載の方法。
（項目１４）
前記活性剤が単位用量製剤において提供される、項目１記載の方法。
（項目１５）
構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療において使用するための表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子。
（項目１６）
構造又は機能の障害を有する小動脈の予防又は治療のための医薬の製造のための、表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子の使用。
（項目１７）
異常な小動脈の構造及び／又は機能を特徴とする状態の治療のためのキットであって、該キットが下記成分：
表１〜１４に記載の活性剤及び／又は本明細書に記載の小有機分子１つ以上を含有する容器；及び、
異常な小動脈の構造及び／又は機能を特徴とする状態の治療における活性剤の使用を教示する説明書；
を含む、キット。
（項目１８）
前記ペプチド及び／又はペプチド模倣物及び／又は脂質が単位用量製剤中にある、項目１７記載のキット。
（項目１９）
活性剤が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による投与の為に製剤される、項目１７記載のキット。
（項目２０）
前記投与が経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射及び血管内注射、皮下注射、経皮投与及び筋肉内注射よりなる群から選択される経路による、項目１７記載のキット。
（項目２１）
前記活性剤がＤ４Ｆ、Ｌ４Ｆ、リバースＤ４Ｆ、リバースＬ４Ｆ及びＤＭＰＣよりなる群から選択される、項目１７記載のキット。
（項目２２）
前記活性剤が製薬上許容しうる賦形剤と組み合わせて提供される、項目１７記載のキット。
（項目２３）
前記活性剤が単位用量製剤において提供される、項目１７記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ａ：小型小動脈（１５〜４０μｍ直径）の壁厚。
【図１Ｂ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ｂ：中型小動脈（４１〜８０μｍ直径）の壁厚。
【図１Ｃ】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有することを示している。図１Ｃ：大型小動脈（８１〜１６０μｍ直径）の壁厚。
【図２】図２はＤ４Ｆ及び「スクランブルド」Ｄ４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育するＬＤＲ−／−マウスにおけるＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）の結果を示す。
【図３】図３はパーセント交替として標示したＤ４Ｆ及びスクランブルド（ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育するＬＤＲ−／−マウスにおけるＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）の結果を示す。
【図４】図４はＤ４Ｆの投与によるＴ迷路試験における改善を示す。
【図５】図５はＷｅｓｔｅｒｎ試料で飼育するＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける血管反応性を経口ＤＭＰＣが改善することを示している。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ａは直径１５〜４０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ｂは直径４１〜８０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは平均±ＳＥＭを示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図６Ｃ】図６Ａ〜６Ｃは飼料飼育野生型マウス（ｎ＝４）と比較して飼料飼育ＬＤＬ受容体ヌルマウス（ｎ＝４）において脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が増大すること、及び、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加（ｎ＝４）により更に増大することを示している。図６Ｃは直径８１〜１６０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは平均±ＳＥＭを示す。ＷＴ、野生型マウス；ＬＤＬ−／−Ｃｈｏｗ、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス；ＬＤＬ−／−Ｗｅｓｔｅｒｎ、６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食事で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウス。
【図７−１】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ａは直径１０〜２０μｍの管腔を有する小動脈に関する壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−２】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｂは直径２１〜５０μｍの管腔を有する小動脈に関する血管壁厚を示す。図７Ｃは直径５１〜１００μｍの小動脈に関する血管壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−３】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｄはマウスに関する小動脈管腔直径を示す。図７Ｅは直径１０〜２０μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図７−４】図７Ａ〜７ＧはＤ−４Ｆを投与したＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいては脳小動脈壁厚（Ｈ＆Ｅ切片で測定）が低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示す。ＬＤＬ受容体ヌルマウスに６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与え、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでＤ−４Ｆを投与（ｎ＝１５）するか、又は、飲料水中に３００μｇ／ｍｌでスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）を投与（ｎ＝１５）した。図７Ｆは直径２１〜５０μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。図７Ｇは直径５１〜１００μｍの小動脈に関する管腔直径で割った壁厚を示す。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図８−１】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ａ：ＬＤＬ受容体ヌルマウスに飼料（ｎ＝１０）又はＷｅｓｔｅｒｎ食餌（ＷＤ）（ｎ＝１０）を６週間与え、その脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色し、壁と管腔の比を各小動脈について計算した。示した数値は各群１０匹のマウスの平均±ＳＥＭである。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｂ：平滑筋αアクチンに関して染色した脳小動脈の例。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図８−２】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｃ：図７のマウスの直径１０〜２０μｍの管腔を有する小動脈の壁と管腔の比。図８Ｄ：図７のマウスの直径２１〜５０μｍの管腔を有する小動脈の壁と管腔の比。
【図８−３】図８Ａ〜８Ｅは脳小動脈平滑筋αアクチンはＬＤＬ受容体ヌルマウスにＷｅｓｔｅｒｎ食餌を与えることにより増大し、Ｄ−４Ｆ投与により低減したが、スクランブルドＤ−４Ｆでは異なっていたことを示している。図８Ｂ〜８Ｅ。図７及び本図のパネルＡに記載したマウスの脳小動脈を平滑筋αアクチンに関して染色した。図８Ｂ：平滑筋αアクチンに関して染色した脳小動脈の例。図８Ｅ：図７のマウスの直径５１〜１００μｍの小動脈の壁と管腔の比。棒グラフは各群１５匹のマウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図９−１】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ａ：自発的交替の数を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【図９−２】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｂ：パーセント自発的交替を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｃ：５０％無作為選択と異なる自発的交替率を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【図９−３】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｄ：試行を完了するまでの時間を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｅ〜９Ｇ：図７及び８Ｂ−８Ｅに記載したマウスを上記した空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。
【図９−４】図９Ａ〜９Ｇは食餌及び投与の関数としてのＴ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）におけるＬＤＬ受容体ヌルマウスの遂行能力を示す。図９Ａ〜９Ｄ：図８Ａに記載したマウスを空間記憶遂行能力に関してＴ−ＣＡＴにより試験した。図９Ｆ：パーセント自発的交替を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。図９Ｇ：５０％無作為選択と異なる自発的交替率を測定した。データは各群１０匹のマウスの１５試行の平均±ＳＥＭである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は最も小型の動脈（即ち小動脈）よりさえも小型の血管が肥厚化し、機能不全となり、そして脳及び腎臓のように多様な組織に対し終末器損傷をもたらすという予測されなかった発見に関する。本発明は小動脈の構造及び機能を改善させ、そして、脳及び腎臓のような終末器の機能を温存するための方法を提供する。
【００４１】
本発明者等が大型動脈において研究した異常が小型動脈及び更にはより小型の動脈、即ち小動脈にも拡張されるかどうかを検討した。小動脈は直径が約２００μ未満、より典型的には約１００μｍ未満である血管である。本発明者等は又、アポＡ−Ｉミメティックペプチド（Ｄ−４Ｆ）の有利な作用が大型動脈（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５：２９０−２９２；Ｖａｎ Ｌｅｎｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０６：１１２７−１１３２）及び小型動脈（Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０７：２３３７−２３４１）の両方において観察されるならば、その有利な作用は小動脈にもみられる、という仮説を立てた。本明細書において本発明者等は、直径１０〜１００μｍの範囲の脳の小動脈の壁は野生型と比較してＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいて肥厚すること、肥厚化はＷｅｓｔｅｒｎ食餌により悪化し、そしてＴ迷路連続交替作業における遂行能力の低下を伴うことを報告する。脳小動脈壁厚の増大は部分的には脳小動脈平滑筋αアクチン含量の増大に起因しており、Ｄ−４Ｆ投与により顕著に改善した。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えたＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＤ−４Ｆの投与は血漿中脂質及び小動脈管腔直径に関わらず脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善すると考えられる。
【００４２】
従って、Ｄ−４Ｆ、Ｌ−４Ｆ及びペプチドとして本明細書に記載する他の活性剤の使用は小動脈の構造及び／又は機能を改善するため、及び、小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態の症状１つ以上を緩解するために有効である。このような状態は、例えば、神経学的機能障害（例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、加齢による記憶力損失、卒中関連記憶力損失、Ｂｅｎｓｗａｎｇｅｒ病等）、腎臓機能障害、肺胞機能障害等を包含する。
【００４３】
即ち一部の実施形態においては、本発明は、炎症性脂質を封鎖、及び／又は、除去、及び／又は破壊し、そして前炎症性高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）を抗炎症性に変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とする薬剤１つ以上を投与することにより小動脈の構造及び機能を改善するための新しい方法を提供する。これらの活性剤はクラスＡの両親媒性ヘリックスを含有する特定のペプチド（例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許６，６６４，２３０、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２／１５９２３及びＷＯ２００４／０３４９７７及び同時係争中の出願ＵＳＳＮ：０９／８９６，８４１、１０／１８７，２１５、１０／２７３，３８６及び１０／４２３，８３０参照）、Ｇ＊両親媒性ヘリックスを含有するペプチド（参照により全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０８６，３２６及び同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ１０／１２０，５０８参照）、短鎖のペプチド又は非ペプチドであって分子量が９００ダルトン未満であり、酢酸エチルに少なくとも４ｍｇ／ｍｌの溶解度を有し、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、そして水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、そして、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成するもの（例えば参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６２８８、同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び１０／９１３，８００及び同時係争中の米国出願ＵＳＳＮ６０／６００，９２５をそれぞれ参照）；及びｓｎ−１及びｓｎ−２位が同一であり少なくとも３炭素原子を含有する経口用合成リン脂質（例えば参照により本明細書に組み込まれる同時係争中の米国出願０９／５３９，５６９及び０９／９９４，２２７及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６８参照）を包含する。
【００４４】
特定の実施形態においては本発明は本明細書に記載した活性剤（ペプチド、ペプチド模倣物、脂質、小型有機分子等）１つ以上を哺乳動物（例えばヒト）に投与することにより実施される。活性剤は好ましくは小動脈、好ましくは約２００μｍ未満の直径を有する、より好ましくは約１６０μｍ未満の直径を有する、更に好ましくは約８０μｍ未満の直径を有する、そして最も好ましくは約５０μｍ又は４０μｍ未満の直径を有する小動脈の構造及び／又は機能を改善するために十分な用量又は用法において投与する。
Ｉ．活性剤
広範な種類の活性剤が上記した適応症の１つ以上の治療の為に適している。これらの薬剤の例は限定しないが、クラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド、非極性面に芳香族又は脂肪族の残基を有するアポＡ−ＩのクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド模倣物、小型ペプチド、例えばペンタペプチド、テトラペプチド、トリペプチド、ジペプチド及びアミノ酸の対、Ａｐｏ−Ｊ（Ｇ＊ペプチド）及びペプチド模倣物、例えば上記したものを包含する。
Ａ）クラスＡ両親媒性ヘリカルペプチド
特定の実施形態においては、本発明の方法において使用するための活性剤はクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド、例えば米国特許６，６６４，２３０及びＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３及びＷＯ２００４／０３４９７７に記載されているものを包含する。クラスＡの両親媒性へリックス（「クラスＡペプチド」）を含むペプチドは、アテローム性動脈硬化症の症状１つ以上を緩解することができることに加えて、本明細書に記載する他の適応症の１つ以上の治療においても有用であることがわかった。
【００４５】
クラスＡペプチドは極性及び非極性の残基の隔離をもたらすことにより極性及び非極性の面を形成し、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする、α−ヘリックスの形成を特徴とする（例えばＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：６２６−６６８参照）。アポＡ−Ｉの第４番目のエクソンは３．６６７残基／ターンに折り畳まれるとクラスＡの両親媒性ヘリカル構造をもたらすことが知られている。
【００４６】
１つのクラスＡペプチドは１８Ａと標記され（例えばＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：６２６−６６８参照）、本明細書に記載する通り修飾することにより、経口投与可能でアテローム性動脈硬化症及び／又は本明細書に記載する他の適応症の症状１つ以上を抑制又は予防する場合に高度に有効なペプチドを生成した。特定の理論に制約されないが、本発明のペプチドはＬＤＬの酸化を低減するシード分子をピックアップすることによりインビボで機能すると考えられる。
【００４７】
１８Ａの疎水性の面の上のＰｈｅ残基の数を増大させると、理論的には、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ＆Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１６：３２８−３３８に記載されている計算で求めた場合の脂質の親和性を増大させることになる。理論的には、Ｐｈｅによる１８Ａの非極性面における残基の系統的置換は６ペプチドを与えることになる。追加の２、３及び４Ｐｈｅを有するペプチドはそれぞれ１３，１４及び１５単位の理論的脂質親和性（λ）値を有することになる。しかしながら、追加のＰｈｅが４から５に増大するとλ値は４単位の飛躍的増大を示す（１９λ単位になる）。６又は７Ｐｈｅに増大すると増大はそれほど劇的ではなくなる（それぞれ２０及び２１λ単位）。
【００４８】
これらのクラスＡペプチドの多くが作成されており、例えば４Ｆ、Ｄ４Ｆ、５Ｆ及びＤ５Ｆ等と標記されるペプチドが包含される。種々のクラスＡペプチドがアテローム性動脈硬化症に罹患しやすいマウスにおける患部の形成を抑制している。更に又、ペプチドは本明細書に記載した種々の病的状態の症状の１つ以上を緩和することにおいて、変動性ではあるが有意な程度の薬効を示している。このようなペプチドの多数を表１に示す。
【００４９】
表１．本発明において使用するための例示されるクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチド
【００５０】
【表１−１】
【００５１】
【表１−２】
【００５２】
【表１−３】
【００５３】
【表１−４】
特定の好ましい実施形態においては、ペプチドは４Ｆの変異を包含する（（表１の配列番号５、Ｌ−４Ｆとしても知られており、全ての残基がＬ型アミノ酸である）又は残基１つ以上がＤ型アミノ酸であるＤ−４Ｆ）。本明細書に記載したペプチドの何れかにおいて、Ｃ末端及び／又はＮ末端及び／又は内部の残基を本明細書に記載するブロッキング基１つ以上でブロックすることができる。
【００５４】
アミノ末端を保護するアセチル基又はＮ−メチルアントラニリル基、及び、カルボキシ末端を保護するアミド基を有する種々のペプチドを表１に示したが、これらの保護基の何れも排除及び／又は本明細書に記載する別の保護基で置き換えてよい。特に好ましい実施形態においては、ペプチドは本明細書に記載したＤ型アミノ酸１つ以上を含む。特定の実施形態においては、表１のペプチドの各アミノ酸（例えば各エナンチオマーアミノ酸）はＤ型アミノ酸である。
【００５５】
表１が全てを完全に包含するわけではない。本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なクラスＡの両親媒性ヘリカルペプチドが日常的に作成できる（例えば保存的又は半保存的な置換（例えばＤをＥで置き換える）、伸長、欠失等）。即ち、例えば、１つの実施形態は本明細書に示したペプチドの何れかの１つ以上のトランケーションを利用している（例えば表１において配列番号２〜２０及び３９により識別されるペプチド）。即ち、例えば、配列番号２１はＤアミノ酸１つ以上を含む１８ＡのＣ末端に由来する１４アミノ酸を含むペプチドを示しており、配列番号２２〜３８は他のトランケーションを示す。
【００５６】
より長いペプチドも適している。そのようなより長いペプチドは完全にクラスＡの両親媒性ヘリックスを形成してよく、又は、クラスＡ両親媒性ヘリックスがペプチドのドメイン１つ以上を形成することができる。更に、本発明はペプチドの多量体型も意図している（例えばコンカタマー）。即ち、例えば本明細書に示したペプチドを共にカップリングすることができる（直接又は介在アミノ酸１つ以上を有するリンカー（例えば炭素リンカー又はアミノ酸１つ以上）を介して）。例示される重合体ペプチドは、Ｄアミノ酸１つ以上、より好ましくは何れのアミノ酸においても本明細書に記載するＤアミノ酸及び／又は一端又は両端が保護されているものを含む特定の実施形態においては、１８Ａ−Ｐｒｏ−１８Ａ及び配列番号７８〜８５のペプチドを包含する。
【００５７】
当然ながら、本明細書に例示したペプチド配列のほかに、本発明は又これらのペプチドの各々のレトロ及びレトロインベルソの形態も意図している。レトロ型においては、配列の方向が逆転する。インバース型においては、構成成分のアミノ酸のキラル性が逆転する（即ち、Ｌ型アミノ酸はＤ型アミノ酸になり、Ｄ型アミノ酸はＬ型アミノ酸になる）。レトロインベルソ型においては、アミノ酸の順番とキラル性の両方が逆転する。即ち、例えばアミノ末端がアスパルテート（Ｄ）にありカルボキシ末端がフェニルアラニン（Ｆ）にあるＤ４Ｆペプチドのレトロ型（ＤＷＦＫＡＦＹＤＫＶＡＥＫＦＫＥＡＦ、配列番号５）は同じ配列を有するが、アミノ末端はフェニルアラニンにあり、カルボキシ末端はアスパルテートにある（即ちＦＡＥＫＦＫＥＡＶＫＤＹＦＡＫＦＷＤ、配列番号４４４）。Ｄ４Ｆペプチドが全てのＤ型アミノ酸を含む場合は、レトロインベルソ型は上記した配列（配列番号４４４）を有し全てのＬ型アミノ酸を含むことになる。即ち、例えば、４Ｆ及びＲｅｖ−４Ｆは、正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の同一の隔離を有する相互の鏡像となる。アミノ酸の同じ重合体のこれらの鏡像は正荷電残基が極性−非極性界面に位置し、負荷電残基が極性面の中心に位置するようにする極性及び非極性の面の隔離という点において同一である。レトロ及びレトロインベルソ型のペプチドの考察は例えばＣｈｏｒｅｖ ａｎｄ Ｇｏｏｄｍａｎ，（１９９５）ＴｉｂＴｅｃｈ，１３：４３９−４４５を参照できる。
【００５８】
配列に言及し、方向を標示しない場合は、配列はアミノからカルボキシの方向のアミノ酸配列、レトロ型（即ちカルボキシからアミノの方向のアミノ酸配列）、Ｌ型アミノ酸がＤ型アミノ酸と置き換えられている、又はＤ型アミノ酸がＬ型アミノ酸と置き換えられているレトロ型、及び、順番が逆転にし、アミノ酸キラル性も逆転しているレトロインベルソ型を示すものとして捉えることができる。
【００５９】
当然ながら、本明細書に標示するペプチド配列に加えて、本発明はそのようなペプチドの環状変異（ＣＰ）及び／又はそのようなペプチドのレトロ、インベルソ又はレトロインベルソ型の環状変異も意図している。ペプチドの環状変異は元のペプチドのアミノ及びカルボキシル末端を連結し、そしてこのようにして形成された環状ペプチドを開裂して新しいアミノ及びカルボキシ末端を形成することにより生成されるものと同一なアミノ酸配列を有するペプチドである。
Ｂ）非極性面に芳香族又は脂肪族の残基を有するアポＡ−Ｉの他のクラスＡ両親媒性ヘリカルペプチド模倣物
特定の実施形態においては、本発明はまた修飾されたクラスＡの両親媒性ヘリックスペプチドを提供する。特定の好ましいペプチドは非極性面、例えば３ＦＣπ（４Ｆに存在）の中心に芳香族残基１つ以上を取り込んでいるか、又は、非極性面、例えば３ＦＩπに脂肪族残基１つ以上を有し、例えば表２を参照できる。特定の理論に制約されないが、本発明者等はペプチドの非極性面３ＦＣπ上の中心の芳香族残基は、非極性面の中心のπ電子の存在の為に、水分子をペプチド−脂質複合体の疎水性脂質のアルキル鎖の近傍まで浸透させ、次にこれがそれらを細胞表面から遮蔽している反応性酸素物質種（例えば脂質のヒドロパーオキシド）の進入を可能にすると考える。同様に本発明者等はまた、非極性面、例えば３ＦＩπの中心に脂肪族残基を有するペプチドは同様に機能するが、３ＦＣπほど有効ではないと考える。
【００６０】
好ましいペプチドは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、又は抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とし、及び／又は、Ｄ４Ｆ又は表１に示す他のペプチドと同等以上の動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減する。
【００６１】
表２．特定の好ましいペプチドの例
【００６２】
【表２】
Ｃ）より小型のペプチド
好ましくは（必須ではない）アミノ酸のＤ型立体異性体であるアミノ酸１つ以上を有し、そして、脂質蛋白相互作用を可能にする疎水性ドメイン及びある程度の水溶性を可能にする親水性ドメインを保有している最低３アミノ酸よりなる特定の小型ペプチドもまた顕著な抗炎症特性を有し、そして本明細書に記載した病的状態１つ以上の治療において有用であることもまた意外な発見であった。「小型ペプチド」は典型的には２アミノ酸〜約１５アミノ酸、より好ましくは約３アミノ酸〜約１０又は１１アミノ酸、そして最も好ましくは約４〜約８又は１０アミノ酸の長さの範囲にある。種々の実施形態において、ペプチドは典型的には疎水性の末端アミノ酸、又は、疎水性の「保護基」１つ以上の結合により疎水性とされた末端アミノ酸を有することを特徴とする。種々の「小型ペプチド」が同時係争中の２００３年８月２６日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び２００４年８月６日出願のＵＳＳＮ１０／９１３，８００及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６２８８に記載されている。
【００６３】
特定の実施形態においては、ペプチドは下記式Ｉ：
【００６４】
【化１】
［式中、ｎは０又は１であり、Ｘ１は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は、疎水性の保護基を担持しており、Ｘ４は疎水性アミノ酸であるか、及び／又は、疎水性の保護基を担持しており、そしてｎが０である場合は、Ｘ２は酸性又は塩基性のアミノ酸であり；ｎが１である場合は、Ｘ２及びＸ３は独立して酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であるが、ここでＸ２が酸性アミノ酸である場合は；Ｘ３は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であり；Ｘ２が塩基性アミノ酸である場合は；Ｘ３は酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸又は芳香族アミノ酸であり；そしてＸ２が脂肪族又は芳香族アミノ酸である場合は、Ｘ３は酸性アミノ酸又は塩基性アミノ酸である］により特徴付けることができる。
【００６５】
より長いペプチド（例えば１０、１１又は１５アミノ酸まで）もまた本発明の範囲内に意図される。典型的には、より短いペプチド（例えば式Ｉのペプチド）が酸性、塩基性、脂肪族又は芳香族のアミノ酸により特徴付けられる場合は、より長いペプチドはその型のアミノ酸２つ以上を含む酸性、塩基性、脂肪族又は芳香族のドメインにより特徴づけられる。
１）活性小型ペプチドの機能的特性
本発明の小型ペプチド（例えば１０アミノ酸未満、好ましくは８アミノ酸未満、より好ましくは約３〜約５又は６アミノ酸）がＨＤＬをより抗炎症性にし、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症及び／又は炎症応答を特徴とする他の病的状態を緩解する能力を多くの物理的特性が予測していることは本発明の意外な発見であった。物理的特性は酢酸エチル中の高い溶解度（例えば約４ｍｇ／ｍｌ超）及びｐＨ７．０の水性緩衝液中の溶解性を包含する。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で接触させると、特に有効な小型ペプチドは約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約３８ｎｍの嚢胞構造の形成を誘導するかそれに関与する。特定の好ましい実施形態においては、小型ペプチドは約９００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００６６】
即ち、特定の実施形態においては、本発明は本明細書に記載する適応症／病的状態、例えば炎症状態の症状１つ以上を緩解する小型ペプチドを意図しており、その場合、ペプチドは約３〜約８アミノ酸、好ましくは約３〜約６又は７アミノ酸、より好ましくは約３〜約５アミノ酸の長さの範囲であり；約４ｍｇ／ｍｌ超の濃度で酢酸エチルに可溶であり；ｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり；水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成し；約９００ダルトン未満の分子量を有し；前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、又は抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とし；そして特にＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ及びＳｅｒが全てＬ型アミノ酸であるアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号２３５）を有さない。特定の実施形態においては、これらの小型ペプチドは酸化剤による酸化からリン脂質を保護する。
【００６７】
これらの小型ペプチドはそのように限定されるわけではないが、特定の実施形態においては、これらの小型ペプチドは以下に記載する小型ペプチドを包含することができる。
２）トリペプチド
本明細書に記載した望ましい特性（例えば前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換する能力、動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減する能力、前ベータＨＤＬを増大させる能力等）を示す特定のトリペプチド（３アミノ酸ペプチド）を合成できることがわかった。特定の実施形態においては、ペプチドは下記式ＩＩ：
【００６８】
【化２】
［式中、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である］として示されるＮがゼロである式Ｉにより特徴付けられる。特定の実施形態においては、Ｘ２アミノ酸は酸性（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等）又は塩基性（例えばヒスチジン、アルギニン、リジン等）である。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか、又は１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を包含してよい。
【００６９】
本発明の特定の好ましいトリペプチドは表３に示すペプチドを包含するがこれらに限定されない。
【００７０】
表３．疎水性のブロッキング基及び酸性、塩基性又はヒスチジン中心アミノ酸を担持した特定の好ましいトリペプチドの例
【００７１】
【表３−１】
【００７２】
【表３−２】
【００７３】
【表３−３】
【００７４】
【表３−４】
表３のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
３）中央の酸性及び塩基性のアミノ酸を有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性アミノ酸及び酸性アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン及び／又は酸性ドメインをより長い分子中に含む。
【００７５】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性でありＸ３が塩基性であるか、又は、Ｘ２が塩基性でありＸ３が酸性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。
【００７６】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表４に示すペプチドである。
【００７７】
表４．中央の酸性及び塩基性のアミノ酸を有する小型ペプチドの代表例
【００７８】
【表４−１】
【００７９】
【表４−２】
【００８０】
【表４−３】
【００８１】
【表４−４】
【００８２】
【表４−５】
表４のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
４）中央の脂肪族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性又は酸性のアミノ酸及び脂肪族アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン又は酸性ドメイン及び脂肪族ドメインをより長い分子中に含む。
【００８３】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性又は塩基性でありＸ３が脂肪族であるか、又は、Ｘ２が脂肪族でありＸ３が酸性又は塩基性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。
【００８４】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表５に示すペプチドである。
【００８５】
表５．中央の脂肪族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する特定の好ましいペプチドの例
【００８６】
【表５】
表５のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
５）中央の芳香族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明の「小型」ペプチドは４アミノ酸〜約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性保護基を担持しているために典型的には疎水性であり、末端アミノ酸（Ｘ１及びＸ４）は、疎水性側鎖により、又は、側鎖又はＣ及び／又はＮ末端が疎水性の保護基１つ以上によりブロックされている（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ等によりブロックされている）ため疎水性である。典型的には、ペプチドの中央部分は塩基性又は酸性のアミノ酸及び芳香族アミノ酸（例えば４量体として）又は塩基性のドメイン又は酸性ドメイン及び芳香族ドメインをより長い分子中に含む。
【００８７】
これらの４量体はＸ１及びＸ４が疎水性であり、及び／又は、本明細書に記載した疎水性保護基を担持しており、そしてＸ２が酸性又は塩基性でありＸ３が芳香族であるか、又は、Ｘ２が芳香族でありＸ３が酸性又は塩基性である式Ｉにより示すことができる。ペプチドは全てＬ型アミノ酸であるか１つ以上又は全てのＤ型アミノ酸を含むことができる。５量体はＸ５が表６に示すように挿入され、そして、Ｘ５が典型的には芳香族アミノ酸である式Ｉの僅少な修飾により表すことができる。
【００８８】
本発明の特定の好ましいものは、限定しないが表６に示すペプチドである。
【００８９】
表６．中央の芳香族アミノ酸と共に中央部に酸性又は塩基性のアミノ酸の何れかを有する特定の好ましいペプチドの例
【００９０】
【表６−１】
【００９１】
【表６−２】
表６のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
６）中心に芳香族アミノ酸又はヒスチジンにより分離された芳香族アミノ酸を有する小型ペプチド
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは分子の中心に露出したπ電子を特徴とし、これは粒子の水和を可能にし、そしてペプチド粒子が前炎症性の酸化された脂質、例えば脂肪酸のヒドロペルオキシド及びｓｎ−２位にアラキドン酸の酸化生成物を含有するリン脂質を捕獲することができるようにする。
【００９２】
特定の実施形態においては、これらのペプチドは最低４アミノ酸及び最高約１０アミノ酸よりなり、好ましくは（必須ではない）アミノ酸の１つ以上がアミノ酸のＤ型立体異性体であり、末端アミノ酸は疎水性側鎖のため、又は、末端アミノ酸が１つ以上の疎水性ブロッキング基を担持しているために疎水性である（例えばＮ−末端はＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル等によりブロックされており、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ群などによりブロックされている）。酸性又は塩基性のアミノ酸を中心に有する替わりに、これらのペプチドは一般的に中心に芳香族アミノ酸を有するか、又は、ペプチドの中心のヒスチジンにより分離された芳香族アミノ酸を有する。
【００９３】
本発明の特定の好ましいペプチドは、限定しないが表７に示すペプチドである。
【００９４】
表７．中心の芳香族アミノ酸又はヒスチジン１つ以上により分離された芳香族アミノ酸又は芳香族ドメインを有するペプチドの例
【００９５】
【表７】
表７のペプチドは特定の保護基を有するものを示したが、これらの基は本明細書に記載する別の保護基により置換されてもよく、及び／又は、示した保護基の１つ以上が除去され得る。
７）トリペプチド及びテトラペプチドの総括
明確化のために、本発明の多くのトリペプチド及びテトラペプチドを下記の表８において全般的に総括する。
【００９６】
表８．本発明の特定のペプチドの全般的構造
【００９７】
【表８】
より長いペプチドが所望である場合は、Ｘ２及びＸ３は個々のアミノ酸ではなくドメイン（例えば特定の型のアミノ酸２つ以上の領域）を指すことができる。表８は例示であり限定するものではない。本明細書に示した教示を用いて他の適当なペプチドを容易に識別できる。
８）対のアミノ酸及びジペプチド
特定の実施形態においては、本発明は特定の対のアミノ酸が、相互に組み合わせて投与された場合、又は、連結してジペプチドを形成した場合に、本明細書に記載した特性１つ以上を有するという発見に関する。即ち、特定の理論に制約されないが、アミノ酸の対を本明細書に記載する通り相互に組み合わせて投与した場合に、それらはインビボのミセル形成に関与するか、それを誘導すると考えられる。
【００９８】
本明細書に記載した他の小型ペプチドと同様、ペプチドの対はインビボで会合し、そして酢酸エチル中の高い溶解度（例えば約４ｍｇ／ｍｌ超）、ｐＨ７．０の水性緩衝液中の溶解性を包含する物理的特性を示すと考えられる。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で接触させると、アミノ酸の対は約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層の形成を誘導するかそれに関与し、及び／又は、約３８ｎｍの嚢胞構造の形成を誘導するかそれに関与すると考えられる。
【００９９】
更に又、アミノ酸の対は以下の生理学的に関連性のある特性の１つ以上を示すことができると考えられる。
１．それらは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とし；
２．それらは動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減し；
３．それらは前βＨＤＬの形成及びサイクリングを刺激し；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させ；そして／又は、
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増大させる。
【０１００】
アミノ酸の対は、別個のアミノ酸として投与する（逐次的又は同時に、例えば組み合わせの製剤として）か、又は、直接又はリンカー（例えばＰＥＧリンカー、炭素リンカー、分枝鎖リンカー、直鎖リンカー、複素環リンカー、誘導体化された脂質から形成したリンカー等）を介して共有結合することができる。特定の実施形態においては、アミノ酸の対をペプチド結合を介して共有結合し、ジペプチドを形成する。種々の実施形態において、ジペプチドは典型的には各々が結合した保護基を有する２アミノ酸を含むが、本発明はアミノ酸僅か１つが保護基１つ以上を担持するジペプチドも意図する。
【０１０１】
アミノ酸の対は典型的には各アミノ酸が少なくとも１つの保護基（例えば本明細書に記載した疎水性保護基）に結合しているアミノ酸を含む。アミノ酸はＤ又はＬ型であることができる。特定の実施形態においては、対を含むアミノ酸が相互に結合していない場合に各アミノ酸は２保護基を担持する（例えば表９の分子１及び２）。
【０１０２】
表９．本発明の代表的アミノ酸対
【０１０３】
【表９】
＊これは典型的には第２のアミノ酸と連携して投与される。＊＊特定の実施形態においては、これらのジペプチドは相互に連携して投与される。＊＊＊特定の実施形態においては、このペプチドは単独か又は本明細書に記載した他のペプチドと組み合わせて投与される。
【０１０４】
アミノ酸の適当な対は、保護されたアミノ酸の対及び／又はジペプチドを準備し、次に本明細書に記載した物理的及び／又は生理学的特性の１つ以上についてアミノ酸対／ジペプチドをスクリーニングすることにより容易に発見することができる。特定の実施形態においては、本発明はアスパラギン酸及びフェニルアラニンを含むアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。特定の実施形態においては、本発明は一方のアミノ酸が（−）−Ｎ−［（トランス−４−イソプロピルシクロヘキサン）カルボニル］−Ｄ−フェニルアラニン（ナテグリニド）であるアミノ酸対及び／又はジペプチドを除外する。
【０１０５】
特定の実施形態においては、対を含むアミノ酸は、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸等）、塩基性アミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン等）及び非極性アミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン等）よりなる群から独立して選択される。特定の実施形態においては、第１のアミノ酸が酸性又は塩基性である場合に、第２のアミノ酸は非極性であり、そして第２のアミノ酸が酸性又は塩基性である場合に、第１のアミノ酸は非極性である。特定の実施形態においては、第１のアミノ酸が酸性である場合に、第２のアミノ酸は塩基性、或いはその逆となる（例えば表１０参照）。
【０１０６】
同様の組み合わせはジペプチドの対を投与することによっても得られる。即ち、例えば特定の実施形態においては、表９の分子３及び４は相互に連携させて投与する。
【０１０７】
表１０．特定の一般化したアミノ酸対／ジペプチド
【０１０８】
【表１０】
これらのアミノ酸対／ジペプチドは例示を意図しており、限定するものではない。本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なアミノ酸対／ジペプチドは容易に決定できる。
Ｄ）アポ−Ｊ（Ｇ＊ペプチド）
特定の実施形態において、アポＪの両親媒性ヘリカルドメインを模倣しているペプチドがアテローム性動脈硬化症及び／又は本明細書に記載した他の病的状態の症状１つ以上を緩解することができることは本発明の発見であった。アポリポ蛋白Ｊは球状蛋白様、又は、Ｇ＊両親媒性ヘリカルドメインと称される広範な非極性の面を有する。クラスＧの両親媒性ヘリックスは球状蛋白において存在し、そしてこのためグラスＧと命名されている。両親媒性ヘリックスのこのクラスは極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布と狭小な非極性の面を特徴としている。狭小な非極性の面の為に、このクラスはリン脂質とは容易に会合しない。両親媒性ヘリックスのＧ＊はＧ両親媒性ヘリックスと同様であるが同一ではない特性を有している。クラスＧの両親媒性ヘリックスと同様、クラスＧ＊のペプチドは極性面上の正荷電及び負荷電の残基のランダムな分布を有している。しかしながら、狭小な非極性の面を有するクラスＧの両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスはこのクラスをリン脂質に容易に結合可能とする広範な非極性の面を有し、そしてクラスは両親媒性ヘリックスのクラスＧと区別するためにＧ＊と称されている。
【０１０９】
多くの適当なＧ＊両親媒性ペプチドが同時係争中の２００２年４月５日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／１２０，５０８、２００３年４月１日出願の米国出願ＵＳＳＮ１０／５２０，２０７及び２００３年４月１日出願のＰＣＴ／ＵＳ０３／０９９８８に記載されている。更に又、アポＪのＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明の種々の適当なペプチドを表１１に記載する。
【０１１０】
表１１．アポＪのＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明で使用するための好ましいペプチド
【０１１１】
【表１１】
しかしながら本発明のペプチドはアポＪのＧ＊変異体に限定されない。一般的に、本質的に如何なる他の蛋白、好ましくはアポ蛋白に由来するＧ＊ドメインも適している。そのような蛋白の特定の適性については、例えば本明細書の実施例に記載するもののような保護活性（例えば酸化からＬＤＬを保護する等）に関する試験を用いて容易に測定できる。一部の特に好ましい蛋白は例えばアポＡＩ、アポＡＩＶ、アポＥ、アポＣＩＩ、アポＣＩＩＩ等を包含する（ただし、これらに限定されない）蛋白のＧ＊両親媒性ヘリカルドメイン又はその変異体（例えば保存的置換等）を包含する。
【０１１２】
アポＪ以外のアポ蛋白に関連するＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する特定の好ましいペプチドを表１２に示す。
【０１１３】
表１２．アポＪ以外のアポ蛋白に関連するＧ＊両親媒性ヘリカルドメインに関連する本発明において使用するためのペプチド
【０１１４】
【表１２】
別の代表的Ｇ＊ペプチドを表１３に示す。
【０１１５】
表１３．別の代表的Ｇ＊ペプチド
【０１１６】
【表１３−１】
【０１１７】
【表１３−２】
【０１１８】
【表１３−３】
【０１１９】
【表１３−４】
【０１２０】
【表１３−５】
【０１２１】
【表１３−６】
他の限定しない適当なペプチドを表１４に示す。
【０１２２】
表１４．向上した疎水性相を有する代表的ペプチド
【０１２３】
【表１４】
本明細書に記載したペプチド（Ｖ２Ｗ３Ａ５Ｆ１０、１７−Ｄ−４Ｆ；Ｖ２Ｗ３Ｆ１０−Ｄ−４Ｆ；Ｗ３−Ｄ−４Ｆ）は元のＤ−４Ｆよりも強力である場合がある。
【０１２４】
更に別の適当なペプチドの限定しない例は、Ｐ１−ジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐ２（配列番号６０４）及びＰ１−ジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐ２を包含し、ここでＰ１及びＰ２は本明細書に記載したもののような保護基である。特定の実施形態においては、これらのペプチドは例えばＢｏｃジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）及びＢｏｃジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（ＯｔＢｕ）を包含するがこれらに限定されない。
【０１２５】
特定の実施形態においては、本発明のペプチドは少なくとも１つのＤアミノ酸及び／又は少なくとも１つ又は２つの末端保護基を含むアミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号６０５）を含むかこれよりなるペプチドを包含する。特定の実施形態においては、本発明は炎症状態の症状１つ以上を緩解するＡペプチドを包含し、ここでペプチドは約３〜約１０アミノ酸の長さの範囲であり；芳香族又は疎水性アミノ酸と交互する酸性又は塩基性のアミノ酸を配列が含むようにアミノ酸配列を含んでおり；疎水性末端アミノ酸又は疎水性保護基を担持する末端アミノ酸を含み；全Ｌ型アミノ酸を含む配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号６０６）ではなく；ここでペプチドは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換、及び／又は、抗炎症性ＨＤＬを更に抗炎症性とする。
【０１２６】
本明細書の表に記載したペプチドが全てではない、本明細書に記載した教示を使用することにより、他の適当なペプチドが日常的に作成できる（例えば保存的又は半保存的な置換（例えばＤをＥで置き換える）、伸長、欠失等）。即ち、例えば、１つの実施形態は配列番号４４４〜４７２により示されるペプチドの何れかの１つ以上のトランケーションを利用している。
【０１２７】
より長いペプチドも適している。そのようなより長いペプチドは完全にクラスＧ又はＧ＊の両親媒性ヘリックスを形成してよく、又は、クラスＧ両親媒性ヘリックスがペプチドのドメイン１つ以上を形成することができる。更に、本発明はペプチドの多量体型も意図している。即ち、例えば本明細書の表に示したペプチドを共にカップリングすることができる（直接又は介在アミノ酸１つ以上を有するリンカー（例えば炭素リンカー又はアミノ酸１つ以上）を介して）。適当なリンカーはプロリン（−Ｐｒｏ−）、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ３（配列番号６０７）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号６０８）等を包含するがこれらに限定されない。即ち、本発明の１つの例示される多量体ペプチドは（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐ−（ｄ−Ｊ３３６）（即ちＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ２、配列番号６０９）である。
【０１２８】
本発明は又１つ以上のＧ又はＧ＊両親媒性ヘリックスドメイン及び１つ以上のクラスＡ両親媒性ヘリックスを含む「ハイブリッド」ペプチドの使用も意図する。適当なクラスＡの両親媒性ヘリックスペプチドはＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３に記載されている。即ち、例示すれば、１つのこのような「ハイブリッド」ペプチドは（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐｒｏ−（４Ｆ）（即ちＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ２、配列番号６１０）等である。
【０１２９】
本明細書に記載した教示を使用することにより、当業者は、例示した両親媒性ヘリカルペプチドを日常的に修飾することにより本発明の他の適当なアポＪ変異体及び／又は両親媒性Ｇ及び／又はＡヘリカルペプチドを製造することができる。例えば日常的な保存的又は半保存的な置換（例えばＥとＤ）を既存のアミノ酸から行うことができる。得られるペプチドの脂質親和性に対する種々の置換の影響はＰａｌｇｕｎａｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ＆Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １６：３２８−３３８に記載されているコンピューター処理法を用いて予測することができる。ペプチドはクラスのヘリックス構造が温存される限り長鎖化又は短鎖化することができる。更に又、置換を行うことにより得られるペプチドを対象動物種により内因的に生産されるペプチドとより近似するものとすることができる。
【０１３０】
好ましい実施形態においては本発明のペプチドは天然に存在するアミノ酸又は天然に存在するアミノ酸のＤ型を利用しているが、天然に存在するものではないアミノ酸（例えばメチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、ノルロイシン、イプシロンアミノカプロン酸、４−アミノブタン酸、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、８−アミノカプリル酸、４−アミノ酪酸、Ｌｙｓ（Ｎ（イプシロン）トリフルオロアセチル）、α−アミノイソ酪酸など）による置換もまた意図している。
【０１３１】
新しいペプチドはコンピューター処理法を用いて設計及び／又は評価できる。両親媒性ヘリカルドメインを発見して分類するためのコンピュータープログラムは当該分野で良く知られており、多くはＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８９−２９６により記載されている。このようなプログラムの例は、限定しないがヘリカルホイールプログラム（ＷＨＥＥＬ又はＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットプログラム（ＨＥＬＮＥＴ、ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリカルホイールの追加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯ又はＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリカルネットの追加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）等が包含される。
Ｅ）ブロッキング基及びＤ残基
本明細書に記載した種々のペプチド及び／又はアミノ酸対は保護基を有さないものを示したが、特定の実施形態においては（例えば経口投与用）、それらは１、２、３、４又はそれ以上の保護基を担持することができる。保護基はペプチドのＣ及び／又はＮ末端に、及び／又は、ペプチドを含む内部の残基１つ以上にカップリングすることができる（例えば構成アミノ酸のＲ基の１つ以上をブロックすることができる）。即ち、例えば、特定の実施形態においては、本明細書に記載したペプチドの何れも、例えばアミノ末端を保護するアセチル基及び／又はカルボキシル末端を保護するアミド基を担持することができる。そのような二重保護ペプチドの一例はＡｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ２（ブロッキング基を有する配列番号４４４）であり、これらの保護基の何れか又は両方は排除及び／又は本明細書に記載する他の保護基で置換されていることができる。
【０１３２】
特定の理論に制約されないが、特に本発明の対象となるペプチドのアミノ及び／又はカルボキシ末端のブロックは経口送達を大きく向上させ、そして血清中半減期を顕著に延長することは本発明の発見である。
【０１３３】
多数の種類の保護基がこの目的の為に適している。このような基には例えばアセチル、アミド及びアルキル基が包含され、アセチル及びアルキル基がＮ末端保護には特に適しており、そしてアミド基がカルボキシル末端保護には好ましいがこれらに限定されない。特定の特に好ましい実施形態においては、保護基は脂肪酸中のもののようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基はアミド、エステル及びエーテル形成保護基を包含する。１つの好ましい実施形態においては、アセチル基を用いてアミノ末端を保護し、そしてアミド基を用いてカルボキシル末端を保護する。これらのブロッキング基はペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の好ましいブロッキング基は種々の長さのアルキル基、例えば式：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−を有する基を包含し、式中、ｎは約１〜約２０、好ましくは約１〜約１６又は１８、より好ましくは約３〜約１３、そして最も好ましくは約３〜約１０である。
【０１３４】
特定の特に好ましい実施形態において、保護基は脂肪酸中のもののようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル等を包含するがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基はアミド、エステル及びエーテル形成保護基を包含する。１つの好ましい実施形態においては、アセチル基を用いてアミノ末端を保護し、そしてアミド基を用いてカルボキシル末端を保護する。これらのブロッキング基はペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の好ましいブロッキング基は種々の長さのアルキル基、例えば式：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−を有する基を包含し、式中、ｎは約３〜約２０、好ましくは約３〜約１６、より好ましくは約３〜約１３、そして最も好ましくは約３〜約１０である。
【０１３５】
他の保護基は、例えば、Ｆｍｏｃ、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジアキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）及びトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）を包含するがこれらに限定されない。
【０１３６】
保護／ブロッキング基は、本発明のペプチドを含む適切な残基にこのような基をカップリングする方法と同様、当該分野で良く知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ参照）。１つの好ましい実施形態においては、例えばアセチル化は、無水酢酸を用いて樹脂上にペプチドがある合成の間に達成される。アミドの保護は合成のための適切な樹脂の選択により達成できる。実施例に記載したペプチドの合成の間、ｒｉｎｋアミド樹脂を使用する。合成終了後、Ａｓｐ及びＧｌｕのような酸性二官能性アミノ酸及び塩基性アミノ酸Ｌｙｓ、Ｔｙｒのヒドロキシル上の半永久保護基は全て同時に除去される。酸処理によりこのような樹脂から遊離するペプチドは、アセチルとして保護されたＮ末端及びＮＨ２として保護されたカルボキシルと共に、そして、他の保護基の全てが同時に除去された状態で生じる。
【０１３７】
特定の特に好ましい実施形態においては、ペプチドは本明細書に記載する通り１つ以上のＤ型（ｌｅｖｏではなくｄｅｘｔｒｏ）のアミノ酸を含む。特定の実施形態においては、少なくとも２エナンチオマーアミノ酸、より好ましくは少なくとも４エナンチオマーアミノ酸及び最も好ましくは少なくとも８又は１０エナンチオマーアミノ酸が「Ｄ」型アミノ酸である。特定の実施形態においては、本明細書に記載したペプチドの１つおき、又はむしろ各々全てのアミノ酸（例えば各々全てのエナンチオマーアミノ酸）がＤ型アミノ酸である。
【０１３８】
特定の実施形態においては、エナンチオマーアミノ酸の少なくとも５０％が「Ｄ」型であり、より好ましくはエナンチオマーアミノ酸の少なくとも８０％が「Ｄ」型であり、最も好ましくはエナンチオマーアミノ酸の少なくとも９０％が「Ｄ」型である。
Ｆ）ペプチド模倣物
本明細書に記載したペプチドに加えて、ペプチド模倣物もまた意図している。ペプチド類縁体は鋳型ペプチドと類似した特性を有する非ペプチド薬剤として製薬業において一般的に使用されている。これらの型の非ペプチド化合物は「ペプチド模倣物」称されており（Ｆａｕｃｈｅｒｅ（１９８６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９；Ｖｅｂｅｒ ａｎｄ Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ（１９８５）ＴＩＮＳ ｐ．３９２；及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９）と称され、コンピューター処理による分子モデリングを用いて通常は開発されている。治療上有用なペプチドと構造的に同様のペプチド模倣物を用いて同等の治療又は予防効果をもたらしてよい。
【０１３９】
一般的に、ペプチド模倣物はパラダイムポリペプチド（例えば表１に示す配列番号５）と構造的に同様であるが、当該分野で知られ、そして以下の参考文献、すなわち、Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）ｐ．２６７，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，；Ｓａｔｏｌａ（１９８３）Ｖｅｇａ Ｄａｔａ１（３）Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ．（一般的検討）；Ｍｏｒｌｅｙ（１９８０）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ｐｐ．４６３−４６８（一般的検討）；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．（１９７９）Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔ Ｒｅｓ １４：１７７−１８５（−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−）；Ｓｐａｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ２Ｓ−）；Ｈａｎｎ，（１９８２）Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｐｅｒｋｉｎ ＴｒａｎｓＩ３０７−３１４（−ＣＨ−ＣＨ−、シス及びトランス）；Ａｌｍｑｕｉｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（−ＣＯＣＨ２−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２３：２５３３（−ＣＯＣＨ２−）；Ｓｚｅｌｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｐｐｌｎ．ＥＰ４５６６５（１９８２）ＣＡ：９７：３９４０５（１９８２）（ −ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；Ｈｏｌｌａｄａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２４：４４０１−４４０４（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；及びＨｒｕｂｙ（１９８２）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，３１：１８９−１９９（−ＣＨ２−Ｓ−））に記載された方法により−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ−等よりなる群から選択される連結により場合により置き換えられたペプチド結合１つ以上を有している。
【０１４０】
１つの特に好ましい非ペプチド連結は−ＣＨ２ＮＨ−である。このようなペプチド模倣物はポリペプチドの実施形態を超えた顕著な利点を有する場合があり、例えばより経済的な製造、より高い化学的安定性、増強された薬理学的特性（半減期、吸収、力価、薬効等）、低減した抗原性等が挙げられる。
【０１４１】
更に又、コンセンサス配列又は実質的に同一のコンセンサス配列の変形を含む本明細書に記載したペプチド又は制約されたペプチド（環化ペプチドを包含する）の環状変異は知られた方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ（１９９２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７）；例えばペプチドを環化する分子内ジスルフィド結合を形成することができる内部システイン残基を添加することにより形成してよい。
Ｇ）小型有機分子
特定の実施形態においては、本発明の活性剤は小型有機分子、例えば２００４年８月１１日に出願の同時係争中の出願ＵＳＳＮ６０／６００，９２５に記載されているものを包含する。種々の実施形態において、小型有機分子は同時係争中の出願である２００３年８月２６日出願のＵＳＳＮ１０／６４９，３７８及び８月１１日出願のＵＳＳＮ６０／４９４，４４９に記載されているテトラ及びペンタペプチドと同様であり、そして、特定の場合においては、それらのミメティックである。
【０１４２】
本発明の小型有機分子は典型的には約９００ダルトン未満の分子量を有する。典型的には、分子は酢酸エチルに高度に可溶（例えば約４ｍｇ／ｍｌ以上）であり、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液中にも可溶である。
【０１４３】
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を水性環境中で本発明の小型有機分子と接触させると、典型的には約７．５ｍｍ（±０．１ｍｍ）の直径を有する粒子が形成される。更に又、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層が形成される場合が多い。約３８ｎｍの嚢胞構造も形成される場合が多い。更に又本発明の分子を哺乳動物に投与すると、それらはＨＤＬをより抗炎症性とし、そしてアテローム性動脈硬化症及び／又は炎症性応答を特徴とする他の状態の症状１つ以上を緩解する。
【０１４４】
即ち、特定の実施形態においては、小型有機分子は哺乳動物における炎症性応答を特徴とする病的状態（例えばアテローム性動脈硬化症）の症状１つ以上を緩解するものであり、ここで小分子は、約４ｍｇ／ｍｌ超の濃度で酢酸エチルに可溶であり、ｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、及び、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成し、そして、約９００ダルトン未満の分子量を有する。
【０１４５】
特定の実施形態においては、分子は下記式：
【０１４６】
【化３】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は独立して選択される疎水性保護基であり；Ｒ１及びＲ４は独立して選択されるアミノ酸Ｒ基であり；ｎ、ｉ、ｘ、ｙおよびｚは独立してゼロ又は１であるが、ｎ及びｘが両方ともゼロである場合はＲ１は疎水性基であり、そしてｙ及びｉが両方ともゼロである場合はＲ４は疎水性基であり；Ｒ２及びＲ３はｐＨ７．０で酸性又は塩基性であるが、Ｒ２が酸性である場合はＲ３は塩基性であり、そしてＲ２が塩基性である場合はＲ３は酸性であり；そしてＲ５は存在する場合は芳香族基、脂肪族基、正荷電基又は負荷電基よりなる群から選択される］を有する。特定の実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は−（ＣＨ２）ｊ−ＣＯＯＨ、ただしｊ＝１、２、３又は４であるもの、及び／又は、−（ＣＨ２）ｊ−ＮＨ２、ただしｊ＝１、２、３、４又は５であるもの、又は、−（ＣＨ２）ｊ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、ただしｊ＝１、２、３又は４であるものである。特定の実施形態においては、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５は、存在する場合は、アミノ酸Ｒ基である。即ち、例えば、種々の実施形態において、Ｒ２及びＲ３は独立してアスパラギン酸Ｒ基、グルタミン酸Ｒ基、リジンＲ基、ヒスチジンＲ基又はアルギニンＲ基である（例えば表１に示す通り）。
【０１４７】
特定の実施形態においてはＲ１はＬｙｓＲ基、ＴｒｐＲ基、ＰｈｅＲ基、ＬｅｕＲ基、ＯｒｎＲ基、又は、ノルＬｅｕＲ基よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、Ｒ４はＳｅｒＲ基、ＴｈｒＲ基、ＩｌｅＲ基、ＬｅｕＲ基、ノルＬｅｕＲ基、ＰｈｅＲ基又はＴｙｒＲ基よりなる群から選択される。
【０１４８】
種々の実施形態において、ｘは１であり、そしてＲ５は芳香族基（例えばＴｒｐＲ基）である。
【０１４９】
種々の実施形態において、ｎ、ｘ、ｙおよびｉのうち少なくとも１つは１であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は存在する場合は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、３〜２０炭素のアルキル基、ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、−４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基及びトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）よりなる群から選択される。特定の実施形態においては、Ｐ１が存在する場合及び／又はＰ２が存在する場合、これらは独立してＢｏｃ−、Ｆｍｏｃ−及びニコチニル等よりなる群から選択され、及び／又はＰ３が存在する場合及び／又はＰ４が存在する場合、これらは独立してｔＢｕ及びＯｔＢｕよりなる群から選択される。
【０１５０】
多くの保護基（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４）を上記に示したが、このリストは例示であり、限定するものではない。本明細書に記載した教示を鑑みれば、多くの他の保護／ブロッキング基は当該分野で知られたものである。そのようなブロッキング基は消化を最低限にするため（例えば経口薬剤送達用）、及び／又は取り込み／生体利用性を増大させるため（例えば経鼻送達、吸入療法、直腸投与における粘膜表面通過）、及び／又は、血清中／血漿中の半減期を延長するために選択することができる。特定の実施形態においては、保護基は賦形剤として、又は、賦形剤の成分として提供することができる。
【０１５１】
特定の実施形態においては、ｚはゼロであり、そして分子は下記式：
【０１５２】
【化４】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎ、ｘ、ｙおよびｉは上記した通りである］を有する。
【０１５３】
特定の実施形態においては、ｚはゼロであり、そして分子は下記式：
【０１５４】
【化５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は上記した通りである］を有する。
【０１５５】
特定の実施形態においては、分子は下記式：
【０１５６】
【化６】
を有する。
【０１５７】
特定の実施形態においては、本発明は本明細書に記載する物理的及び／又は機能的特性の１つ以上を有し、そして、下記式：
【０１５８】
【化７】
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４は独立して選択された上記の疎水性保護基であり、ｎ、ｘ及びｙは独立してゼロ又は１であり；ｊ、ｋ及びｌは独立してゼロ、１、２、３、４又は５であり；そしてＲ２及びＲ３はｐＨ７．０で酸性又は塩基性の基であるが、Ｒ２が酸性である場合はＲ３は塩基性であり、そしてＲ２が塩基性である場合はＲ３は酸性である］を有する小型分子を意図している。特定の好ましい実施形態においては、小型分子は水に可溶であり；そして小型分子は約９００ダルトン未満の分子量を有する。特定の実施形態においては、ｎ、ｘ、ｙ、ｊおよびｌは１であり；そしてｋは４である。
【０１５９】
特定の実施形態においては、Ｐ１及び／又はＰ２は芳香族保護基である。特定の実施形態においては、Ｒ２及びＲ３はアミノ酸Ｒ基、例えば上記したものである。種々の実施形態において、ｎ、ｘ及びｙの少なくとも１つは１であり、そしてＰ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４が存在する場合にはそれらは独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、３〜２０炭素のアルキル基、ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレンカルボキシル基、９−フルオレノン−１−カルボキシル基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、−４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタよりなる群から選択される、上記したような保護基である。
ＩＩ．活性剤の機能試験
本発明の方法で用いるための特定の活性剤は、種々の式（例えば上記式Ｉ）により、及び／又は特定の配列により、本明細書において記載している。特定の実施形態においては、本発明の好ましい活性剤は以下の機能的特性の１つ以上により特徴付けられる。
１．それらは前炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とし；
２．それらは動脈壁細胞により発生されたＬＤＬ誘導単球化学走性活性を低減し；
３．それらは前βＨＤＬの形成及びサイクリングを刺激し；
４．それらはＨＤＬコレステロールを上昇させ；そして／又は、
５．それらはＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増大させる。
【０１６０】
本明細書に開示した特定の薬剤及び／又は本明細書に記載した種々の式に相当する薬剤は所望によりこれらの活性の１つ以上に関して容易に試験することができる。
【０１６１】
これらの機能的特性の各々に関するスクリーニングの方法は当該分野で良く知られている。特に、単球化学走性活性、ＨＤＬコレステロール及びＨＤＬＨＤＬパラオキソナーゼ活性に関する試験はＰＣＴ／ＵＳ０１／２６４９７（ＷＯ２００２／１５９２３）に説明されている。
ＩＩＩ．ペプチドの製造
本明細書において使用するペプチドは、標準的な化学ペプチド合成手法を用いながら化学合成することができ、或いは、特にペプチドが「Ｄ」型アミノ酸残基を含まない場合は組み換え発現することができる。特定の実施形態においては、「Ｄ」アミノ酸残基を含むペプチドであっても組み換え発現される。ポリペプチドを組み換え発現する場合は、アミノ酸の１つ以上がＤ型でのみ生物に提供される環境において宿主生物（例えば細菌、植物、カビの細胞等）を培養する。このような系において組み換え発現されたペプチドはこのようなＤ型アミノ酸を取り込むことになる。
【０１６２】
好ましい実施形態においては、ペプチドは当該分野で知られた多くの液体又は固相のペプチド合成手法のいずれかにより化学合成する。配列のＣ末端アミノ酸を不溶性の支持体に結合させ、その後、配列内の残余のアミノ酸の逐次的付加を行う固相合成が本発明のポリペプチドの化学合成のための好ましい方法である。固相合成の手法は当該分野で良く知られており、例えばＢａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｐｐ．３−２４８，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｐａｒｔ Ａ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５６及びＳｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩに記載されている。
【０１６３】
特定の実施形態においては、ペプチドは固相としてベンズヒドリルアミン樹脂（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＮＨ２０．５９ｍｍｏｌ／ｇ樹脂）を用いた固相ペプチド合成操作法により合成する。ＣＯＯＨ末端アミノ酸（例えばｔ−ブチルカルボニル−Ｐｈｅ）を４−（オキシメチル）フェナセチル基を介して固相に結合させる。これは従来のベンジルエステル連結部よりも安定な連結部であるが、得られるペプチドはなお水素化により切断することができる。水素ドナーとしてギ酸を使用する転移水素化をこの目的の為に使用する。ペプチド合成及び合成されたペプチドの分析の為に使用される詳細なプロトコルはＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０（１６）：１０２４８−１０２２５に付随するミニプリント補遺に記載されている。
【０１６４】
ペプチド、特にＤ型アミノ酸を含むペプチドの化学合成においては、合成は通常は所望の完全長産物に加えて多数のトランケーションされたペプチドを生成する。精製過程（例えばＨＰＬＣ）は典型的にはかなりの量の完全長産物の損失をもたらす。
【０１６５】
Ｄペプチド（例えばＤ−４）の合成においては、最も長い形態を精製する場合の損失を防止するために、混合物を透析して使用し、これにより最終ＨＰＬＣ精製を排除することができることは本発明の発見である。このような混合物は高度に精製された産物の力価の約５０％を損失する（例えば蛋白産物の重量当たり）が、混合物は約６倍多いペプチドを含有し、高い総活性を有する。
ＩＶ．医薬品製剤
本発明の方法を実施するために、本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）１つ以上を例えば小動脈機能障害を有するか、小動脈機能障害の危険性を有する（例えば脳又は腎臓において）と診断された固体に投与する。薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）は「ネイティブ」の形態において、又は、所望により、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体等の形態で投与することができるが、但し、塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は誘導体は薬理学的に適当であること、即ち本発明の方法において有効であることが必要である。活性剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグ又は他の誘導体は合成有機化学の当業者の知る、そして例えばＭａｒｃｈ（１９９２）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ； Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ Ｅｄ．Ｎ．Ｙ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載されている標準的操作法を用いて製造してよい。
【０１６６】
例えば、酸付加塩は典型的には適当な酸との反応を行う従来の方法を用いて遊離の塩基から製造する。一般的に、薬剤の塩基形態をメタノール又はエタノールのような極性有機溶媒に溶解し、そして酸をそれに添加する。形成した塩は沈殿するか、又は、より低極性の溶媒の添加により溶液外に移行する。酸付加塩の製造のための適当な酸は有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイヒ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等、並びに、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の両方を包含する。酸付加塩は適当な塩基による処理により遊離の塩基に再変換してよい。本明細書における活性剤の特に好ましい酸付加塩はハロゲン化物の塩、例えば塩酸又はシュウ酸を用いて製造してよいものである。逆に、薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物）の塩基性の塩の調製物は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミン等のような製薬上許容しうる塩基を用いながら同様の態様において製造される。特に好ましい塩基性の塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、及び銅塩を包含する。
【０１６７】
エステルの製造では典型的には、薬剤の分子構造内に存在する場合のあるヒドロキシル及び／又はカルボキシル基への官能性付与を行う。エステルは典型的には遊離のアルコール基のアシル置換誘導体、即ち、Ｒがアルキル、そして好ましくは低級アルキルである式ＲＣＯＯＨのカルボン酸から誘導された部分である。エステルは所望により従来の水素化分解又は加水分解の操作法を用いて遊離の酸に再変換できる。
【０１６８】
アミド及びプロドラッグはまた当該分野で知られた、又は関連する文献に記載されている手法を用いて製造してよい。例えば、アミドはエステルから、適当なアミン反応体を用いて製造してよく、又は、アンモニア又は低級アルキルアミンとの反応により無水物又は酸クロリドから製造してよい。プロドラッグは典型的には個体の代謝系により修飾されるまでは治療上不活性である化合物をもたらす部分の共有結合により製造される。
【０１６９】
本発明の発見した薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、脂質）は、アテローム性動脈硬化症及び／又はその症状の予防及び／又は治療の処置の為の非経口、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、経口、経鼻（又は他の吸入）、直腸又は例えばエアロゾルによるか経皮的な患部（ｌｏｃａｌ）への投与に有用である。医薬組成物は投与方法に応じて種々の単位剤型において投与できる。適当な単位剤型は、例えば、粉末、錠剤、丸薬、カプセル、ロゼンジ、坐剤、パッチ、鼻用スプレー、注射剤、インプラント用持続放出製剤、脂質複合体等を包含するがこれらに限定されない。
【０１７０】
本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物、及び／又は脂質）は典型的には製薬上許容しうる担体（賦形剤）と組み合わせることにより医薬組成物を形成する。製薬上許容しうる担体は例えば組成物を安定化させるか、活性剤の吸収を増大又は低減する作用を有する生理学的に許容される化合物１つ以上を含有できる。生理学的に許容される化合物は、例えば、炭水化物、例えばグルコース、スクロース又はデキストラン、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又はグルタチオン、キレート形成剤、低分子量蛋白、保護及び取り込み増強剤、例えば脂質、活性剤のクリアランス又は加水分解を低減する組成物、又は賦形剤又は他の安定化剤及び／又は緩衝剤を包含する。
【０１７１】
他の生理学的に許容される化合物は、水和剤、乳化剤、分散剤、又は、微生物の生育又は作用を防止するために特に有用である保存料を包含する。種々の保存料が良く知られており、例えばフェノール及びアスコルビン酸を包含する。当業者の知る通り、製薬上許容しうる担体、例えば生理学的に許容される化合物の選択は、例えば活性剤の投与経路及び活性剤の特定の物理化学的特性に応じて変動する。
【０１７２】
賦形剤は好ましくは滅菌され、一般的には望ましくない物質を含有しない。これらの組成物は従来のよく知られた滅菌手法により滅菌してよい。
【０１７３】
治療用途においては、本発明の組成物はアテローム性動脈硬化症の症状１つ以上に罹患しているか、又は、アテローム性動脈硬化症の危険性のある患者に対し、疾患及び／又はその合併症を治癒、又は少なくとも部分的に防止又は停止するために十分な量において投与する。これを達成するために十分な量は「治療有効用量」と定義される。この用途に有効な量は疾患の重症度及び患者の全身状態により変動する。組成物の単回又は複数回の投与は患者により必要とされる、そして耐容性を示される用量及び頻度に応じて投与してよい。いずれの場合も組成物は患者を効果的に治療（症状１つ以上を緩解）するために本発明の製剤の活性剤の十分な量を提供しなければならない。
【０１７４】
薬剤の濃度は広範に変動することができ、液量、粘度、体重等に主に基づきながら、そして選択された投与の特定の様式及び患者の必要性に従って選択することになる。しかしながら濃度は典型的には約０．１又は１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、そして場合により更に高用量の範囲に亘る用量を提供するように選択される。典型的な用量は約３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約３．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約７．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の実施形態においては、用量は約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の実施形態においては用量は約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲であり、一日２回経口投与される。当然ながらこのような用量は特定の対象又は対象グループにおける治療計画を最適化するように変動してよい。
【０１７５】
特定の実施形態においては、本発明の薬剤（例えばペプチド、ペプチド模倣物及び／又は脂質）は、当該分野で良く知られている標準的方法に従って、経口（例えば錠剤による）によるか、又は注射剤として投与される。他の好ましい実施形態においては、薬剤は従来の経皮薬物送達系、即ち経皮「パッチ」を用いて皮膚を介して送達してもよく、そのような場合、活性剤は典型的には皮膚に固着すべき薬物送達装置として機能する積層構造内に含有される。このような構造において、薬剤組成物は典型的には上面の裏打ち層の下敷きとなる層、即ち「リザーバ」内に含有される。当然ながらこの関係において「リザーバ」という用語は皮膚の表面への送達のために究極的に使用可能である「活性成分」のある量を指す。即ち、例えば、「リザーバ」はパッチの裏打ち層の上の接着剤の内部、又は、当該分野で知られた種々のマトリックス製剤の何れかの内部にある活性成分を包含してよい。パッチは単一のリザーバを含有するか、又は複数のリザーバを含有してよい。
【０１７６】
１つの実施形態において、リザーバは薬物送達の間に皮膚に系を固着する機能を有する製薬上許容しうる接着剤の重合体マトリックスを含む。適当な皮膚接着剤の例はポリエチレン、ポリシロキサン、ポリイソブチレン、ポリアクリレート、ポリウレタン等を包含するがこれらに限定されない。或いは、薬剤含有リザーバ及び皮膚接着剤は別個の異なる層として存在し、接着剤は、この場合上記した重合体マトリックスであってよいリザーバの下敷となるか、又は液体又はヒドロゲルのリザーバであってもよく、又は、他の形態であってもよい。装置の最上面となるこれらの積層物の裏打ち層は好ましくは「パッチ」の基本的構造要素として機能し、そして装置にその可撓性の大部分を付与する。裏打ち層の為に選択される材料は好ましくは活性成分及び存在する如何なる他の物質に対しても実質的に非透過性である。
【０１７７】
局所薬物送達のための他の好ましい製剤は軟膏及びクリームを包含するがこれらに限定されない。軟膏は半固体の調製品であり、典型的にはワセリン又は他の石油誘導物を基剤とする。選択された活性剤を含有するクリームは、典型的には粘稠な液体又は半固体の乳液、頻繁には水中油又は油中水のいずれかである。クリーム基剤は典型的には水洗浄可能であり、そして油相、乳化剤及び水相を含有する。油相は「内部」相と称される場合もあり、一般的にワセリン及び脂肪アルコール、例えばセチル又はステアリルアルコールを含み；水相は通常は油相よりも大きい体積を有し、湿潤剤を含有するが、これらは必須ではない。クリーム製剤中の乳化剤は一般的にノニオン性、アニオン性、カチオン性又は両性の界面活性剤である。使用される特定の軟膏又はクリーム基剤は当業者の知る通り最適な薬物送達をもたらすものである。他の担体又はベヒクルの場合と同様、軟膏基剤は不活性で安定であり、非刺激性及び非感作性でなければならない。
【０１７８】
典型的なペプチド製剤とは異なり、Ｄ型アミノ酸を含む本発明のペプチドは経口でも胃酸等による蛋白分解に対する保護を行うことなく投与できる。しかしなお、特定の実施形態においては、ペプチドの送達は保護賦形剤の使用により増強できる。これは典型的にはポリペプチドを組成物と複合体化することによりこれを酸及び酵素の加水分解に対して抵抗性とするか、又は、リポソームのような適切に抵抗性である担体中にポリペプチドをパッケージングすることにより達成される。経口送達のためにポリペプチドを保護する手段は当該分野で良く知られている（例えば治療薬の経口送達のための脂質組成物を記載している米国特許５，３９１，３７７を参照）。
【０１７９】
上昇した血清中半減期は持続放出蛋白「パッケージング」系の使用により維持することができる。このような持続放出系は当該分野で良く知られている。１つの好ましい実施形態においては、蛋白及びペプチドのためのＰｒｏＬｅａｓｅ生体分解性微小球送達系（Ｔｒａｃｙ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１４：１０８；Ｊｏｈｎｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，（１９９６），Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２：７９５；Ｈｅｒｂｅｒｔ ｅｔ ａ．（１９９８），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１５，３５７）、他剤を伴うか伴うことなく乾燥製剤として調製できる重合体マトリックス中に蛋白を含有する生体分解性の重合体微小球よりなる乾燥粉末が挙げられる。
【０１８０】
ＰｒｏＬｅａｓｅ微小球の製造プロセスは蛋白の一体性を維持しながら高い蛋白カプセル化効率を達成するように特に設計されている。プロセスは（ｉ）安定化賦形剤と共に薬剤の溶液を噴霧凍結乾燥することにより塊状蛋白から凍結乾燥蛋白粒子を製造すること、（ｉｉ）薬剤−重合体懸濁液を製造した後に超音波処理又はホモゲナイズにより薬剤の粒径を低減すること、（ｉｉｉ）液体窒素中に霧状化することにより凍結した薬剤−重合体微小球を製造すること、（ｉｖ）エタノールで重合体溶媒を抽出すること、及び、（ｖ）濾過及び真空乾燥により最終乾燥粉末産品を製造すること、よりなる。得られた粉末は蛋白の固体形態を含有しており、これは多孔性の重合体粒子内に均質固定的に分散されている。プロセスにおいて最も一般的に使用されている重合体である（ラクチド／グリコリド）共重合体（ＰＬＧ）は生体適合性及び生体分解性の双方である。
【０１８１】
カプセル化は低温（例えば−４０℃）で達成できる。カプセル化の間、蛋白は水の非存在下に固体状態に維持され、これにより蛋白の水誘導コンホーメーション変動を最小限にし、反応体として水を包含する蛋白分解反応を防止し、そして、蛋白が分解を起こすような有機−水性の界面を回避する。好ましいプロセスは大部分の蛋白が不溶性であることにより高いカプセル化効率（例えば９５％超）を与える溶媒を使用する。
【０１８２】
別の実施形態においては、溶液の成分１つ以上は希釈用の例えば保存容器中（例えば予め計量された容量の）の、又は、ある容量の水への添加する可溶性カプセル中の「濃縮物」として提供することができる。
【０１８３】
上記した製剤及び投与方法は例示を意図しており限定するものではない。当然ながら、本明細書に記載した教示を用いながら他の適当な製剤及び投与様式を容易に考案することができる。
Ｖ．小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態の治療のためのキット
別の実施形態において、本発明は小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする病的状態の症状１つ以上の緩解のため、又は、そのような状態の危険性のある対象（ヒト又は動物）の予防的処置のためのキットを提供する。キットは好ましくは本明細書に記載した活性剤１つ以上を含有する容器を含む。活性剤は単位剤型（例えば坐剤、錠剤、カプレット、パッチ等）において提供することができ、及び／又は場合により製薬上許容しうる賦形剤１つ以上と組み合わせてよい。
【０１８４】
キットは場合により更に目的の状態／病的状態の治療において使用される他剤１つ以上を含むことができる。このような薬剤は例えばベータブロッカー、血管拡張剤、アスピリン、スタチン類、ＡＣＥ阻害剤又はＡＣＥ受容体阻害剤（ＡＲＢ）等、例えば上記したものを包含するがこれらに限定されない。
【０１８５】
更に又、キットは場合により本発明の方法の実施又は「治療薬」又は「予防薬」の使用のための指示（即ちプロトコル）を示すラベル及び／又は説明書を包含する。好ましい説明書類は、小動脈の構造及び／又は機能の障害を特徴とする状態に伴う１つ以上を緩解するため、及び／又は、そのような状態の危険性のある個体においてそのような症状の１つ以上の発症又は増大を防止するための本発明の薬剤１つ以上の使用を説明する。説明書類は又場合により好ましい用量／治療用法、禁忌等を教示してもよい。
【０１８６】
説明書類は典型的には書面又は印刷された書類であるが、そのように限定されない。このような説明を格納し、それらをエンドユーザーに連絡することができる如何なる媒体も本発明は意図している。そのような媒体は例えば電子格納媒体（例えば磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えばＣＤＲＯＭ）等を包含する。このような媒体はそのような説明書類を与えるインターネットサイトのアドレスを包含してよい。
【実施例】
【０１８７】
以下の実施例は説明のために提示しており、請求項の本発明を限定するものではない。実施例１
図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃに示す通り、野生型マウス（ＷＴ）と比較した場合にＬＤＬ受容体を有さないマウス（ＬＤＬＲ−／−）は肥厚した脳小動脈を有している。低脂肪飼料食餌で飼育した場合ＬＤＬ受容体ヌルマウスは野生型マウスの血漿中ＬＤＬの二倍を示している。しかしながら、飼料飼育の場合はアテローム性動脈硬化症は殆ど観察されないが、後に示す図からわかる通りアテローム性動脈硬化症は最小限であったとしても脳の小動脈は顕著に肥厚化している。やはり後に示す図からわかる通り高脂肪高コレステロール（Ｗｅｓｔｅｒｎ）食餌で飼育した場合、これらのマウスはその脳小動脈に追加的な肥厚化を生じさせている。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育した場合、これらのマウスはまた広範なアテローム性動脈硬化症を発症している。
【０１８８】
最近の報告によれば、ＬＤＬＲ−／−マウスは海馬における低減したシナプス密度に関連する空間記憶障害を有する（Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ １６：２１２−２１９の例えば図２参照）。
【０１８９】
図２に示す通り、Ｄ−４Ｆと共に（３００μｇ／ｍｌで飲料水に加えて）６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬＲ−／−マウスはＴ迷路試験において自発的交替の数が顕著に向上したのに対し、同じ濃度の対照ペプチド（スクランブルドＤ−４Ｆ）を添加したものは向上しなかった。
【０１９０】
対照ペプチドと比較してＤ−４Ｆを投与したマウスに関する図２に示す結果は、ＬＤＬＲ−／−マウスを野生型マウス（ＬＤＬＲ＋／＋）と比較したＭｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（上出）の図２に示すものと顕著な同様性を示しており、経口Ｄ−４ＦがＬＤＬＲ−／−マウスにおける異常を逆行させたことを示唆している。Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．の図のデータは「パーセント交替」として示されている。本明細書の図２におけるデータは「自発的交替の数」について示されている。後に示す図３からわかる通り、スクランブルドＤ−４Ｆと比較した場合のＤ−４Ｆによるデータは「パーセント交替」として表示した場合には同様となっている。
【０１９１】
対照ペプチドスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｓｃ Ｄ−４Ｆ）と比較した場合のＤ−４Ｆ投与によるＴ迷路試験における改善の別の兆候は図４のデータから得られる。
【０１９２】
Ｄ−４Ｆの注射が顔面動脈の血管反応性を改善したという報告がある（Ｏｕ Ｚ．Ｏｕ
Ｊ，Ａｃｋｅｒｍａｎ ＡＷ ｅｔ ａｌ．Ｌ−４Ｆ， ａｎ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−Ｉ ｍｉｍｅｔｉｃ，ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｒｅａｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（アポリポ蛋白ミメティックのＬ−４Ｆは低密度リポ蛋白投与内皮細胞における酸化窒素及びスーパーオキシドのアニオンバランスを回復させる），Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ；１０７：１５２０−１５２４；Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０７：２３３７−２３４１）。これらの出版された試験においては、マウスの顔面動脈が使用されている。この動脈は約２５０μＭの内径を有する。
【０１９３】
本発明の適用の別の例は後に示す図５に記載するデータから生じるものであり、これはＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育しているＬＤＬ受容体ヌルマウスにＤＭＰＣを経口投与することは、大豆レシチンを投与するよりも顕著に良好にその顔面動脈の血管反応性を改善したことを示している。
【０１９４】
８週齢の雌性ＬＤＬ受容体ヌルマウスをＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育して飲料水単独（対照、ｎ＝６）を与えるか、又は、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育して１ｍｇ／ｍｌのダイズレシチン（ｎ＝６）又はＤＭＰＣ（ｎ＝６）を添加した飲料水を与えた。６週間後、顔面動脈の下顎下の切片を切開し、予め収縮させた２ｍｍ動脈輪のパーセント弛緩を０．０１〜１０μＭの範囲の濃度のアセチルコリン（内皮依存性弛緩剤）添加への応答において測定した。弛緩の特異性は３００μＭＬ−ＮＡＭＥ（酸化窒素シンターゼ阻害剤）及びナトリウムニトロプルシド（内皮非依存性酸化窒素ドナー）の添加により確認した。Ｌ−ＮＡＭＥの添加を行った群（アセチルコリンにより惹起される血管弛緩を抑制した）とナトリウムニトロプルシド又はパパベリン（最大拡張をもたらした）の間には差は無かった。これらの添加を行わない場合は、対照群におけるアセチルコリン血管弛緩において顕著な抑制が観察された。大豆レシチン群には弛緩改善の傾向が観察されたが、統計学的有意差には至らなかった。ＤＭＰＣを投与したマウスには血管弛緩において有意な改善が観察された（１μＭアセチルコリンでｐ＜０．０１；１０μＭアセチルコリンでｐ＜０．００１）。５０％血管拡張をもたらすアセチルコリン濃度の対数（ＬｏｇＥＣ５０、ｍＭ単位）は対照群で０．４７３であり、大豆レシチン投与群で０．０５７、そしてＤＭＰＣ投与群で０．００６であった。
【０１９５】
本発明者等は以前にアポＥヌルマウスへのＤＭＰＣ投与が血漿中アポＡ−Ｉ濃度及びＨＤＬ−コレステロールの上昇を誘発し、炎症性脂質の封鎖／除去／破壊、及び、前炎症性から抗炎症性へのＨＤＬの変換をもたらし、このマウスモデルにおいてアテローム性動脈硬化症の防止及び退行の両方があったことを発表している（Ｎａｖａｂ Ｍ，Ｈａｍａ Ｓ，Ｈｏｕｇｈ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｏｒａｌ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ（ＤＭＰＣ） ｒａｉｓｅｓ ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｅｖｅｌｓ， ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅｄｕｃｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅ−ｎｕｌｌ ｍｉｃｅ（経口合成リン脂質（ＤＭＰＣ）はアポリポ蛋白Ｅヌルマウスにおいて高密度リポ蛋白コレステロール濃度を上昇させ、高密度リポ蛋白機能を向上させ、そしてアテローム性動脈硬化症を顕著に低減する）．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００３；１０８：１７３５−１７３９）。
【０１９６】
即ち、本発明者等は炎症性脂質を封鎖／除去／破壊する２種の異なる薬剤（Ｄ−４Ｆ及びＤＭＰＣ）、即ちアポＡ−Ｉ及びＨＤＬコレステロールを増大させる１つの経口ペプチド及び１つの経口リン脂質は両方とも、小動脈、顔面動脈において測定した場合に小動脈機能を改善している。本発明の新しい発見は小型の動脈、即ち小動脈さえよりも小型の血管の構造及び機能を改善するための方法に関する。これらの小動脈は究極的には脳及び腎臓のような多様な組織の灌流を担っている。本明細書に示したデータ及び未公開のデータによれば、本発明者等は、本発明は炎症性脂質を封鎖／除去／破壊し、そして前炎症性高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）から抗炎症性に変換するか、抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性とする薬剤を投与することによる小動脈の構造および機能を改善するための一般的方法を与えると考える。これらの薬剤はクラスＡ両親媒性ヘリックスを含有するペプチド、Ｇ＊両親媒性ヘリックスを含有するペプチド、短鎖のペプチド又は非ペプチドであって分子量が９００ダルトン未満であり、酢酸エチルに少なくとも４ｍｇ／ｍｌの溶解度を有し、そしてｐＨ７．０の水性緩衝液に可溶であり、そして水性環境中でリン脂質に接触すると直径約７．５ｎｍの粒子を形成し、そして、約２ｎｍの積層物中の二層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二層寸法を有する積層二層を形成するもの；及びｓｎ−１及びｓｎ−２位が同一であり少なくとも３炭素原子を含有する経口用合成リン脂質を包含する。
実施例２
Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいてアポＡ−ＩミメティックペプチドＤ−４Ｆは脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善する。
要旨
直径１０〜１００μｍの脳小動脈の壁厚を飼料又はＷｅｓｔｅｒｎ食餌の単独又はＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆ添加で飼育した野生型及びＬＤＬ受容体ヌルＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定した。空間記憶はＴ迷路連続交替作業を用いて測定した。飼料の場合は、ＬＤＬ受容体ヌルマウスの脳小動脈壁厚は野生型と比較して増大し、そしてＷｅｓｔｅｒｎ食餌の場合は更に増大した（ｐ＜０．００１）。増大した脳小動脈壁厚は平滑筋αアクチン含有量の増大に部分的には起因しており、そしてＤ−４Ｆ投与により低減したがスクランブルドＤ−４Ｆではそうではなかった。Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を添加することによりＴ迷路における遂行能力は有意に悪化（ｐ＜０．０５）し、スクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆを用いた場合に改善した（ｐ＜０．０５）。遂行能力及び小動脈壁厚における変化は血漿中脂質及び小動脈管腔直径とは無関係であった。
Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＤ−４Ｆの投与は血漿中脂質及び小動脈管腔直径とは無関係に脳小動脈壁厚を低減し、そして空間記憶を改善した。
材料及び方法
材料
Ｄ−４Ｆ及びスクランブルドＤ−４Ｆ（Ｄ−４Ｆと同じＤ型アミノ酸を有するが、脂質結合の為に必要なヘリカルコンホーメーションをペプチドが達成できないように配列において操作されたペプチド）は前述の通り合成した（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５：２９０−２９２；Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５）。全ての他の試薬は以前に報告されている入手元から得た（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．，２５：１−７）。
マウス及び組織学的検討
雌性の野生型及びＬＤＬ受容体ヌルＣ５７ＢＬ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｕｒ，ＭＥ）から入手した。マウスは飼料食餌（Ｒａｌｓｔｏｎ Ｐｕｒｉｎａ）で飼育した後にＷｅｓｔｅｒｎ食餌（Ｔａｋｌａｄ／Ｈａｒｌａｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ，食餌Ｎｏ．８８１３７；４２％脂肪、０．１５％コレステロール、ｗ／ｗ）を投与した。脳小動脈の検討の為に、マウスを筋肉内ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）及びアセプロマジン（２．５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、Ｆｅｒｎａｇｕｔ等 （Ｆｅｒｎａｇｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１１４：１００５−１０１７；Ｆｅｒｎａｇｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１８５：４７−６２） の記載に従ってヘパリン（１０Ｕ／ｍｌ）を含有するリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）２５ｍｌ、次いでＰＢＳｐＨ７．４中の４％パラホルムアルデヒド１００ｍｌで左心室から心臓を灌流した。脳を迅速に取り出し、４℃で４％ＰＦＡ中２４時間保存した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１０％スクロースに移し、溶液の底部に沈降するまで放置した。脳の右半分をＯＣＴ（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ；Ｍｉｌｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．Ｅｌｋｈａｒｔ ＩＮ）中に包埋し、−４０℃でイソペンタン中凍結し、−２０℃の低温恒温槽内の切片化に付すまでは−８０℃で保存した。凍結した脳は伏在する白質が含まれるように冠状切断して８μｍ切片とし、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色して平滑筋αアクチンを調べた（Ｓｅｒｏｔｅｃ，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）。各脳の左半分はパラフィン包埋し、冠状切断して６μｍ厚の切片とし、Ｈ＆Ｅ染色した。ＵＣＬＡのＡｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅは全試験を認可した。
形態学的検討及び関連する統計学的方法
形態学的検討を行うことにより拡張して垂直に切断した全ての小動脈の血管壁厚を測定した。４０ｘの顕微鏡対物レンズを用いながら、切片化した血管をＳＰＯＴイメージソフトウエアを用いて撮影し、内径及び外径の３測定を各々につき行い、平均した。血管サイズの範囲は１０〜１６０μｍであり、壁と管腔の比の比較は、１０〜２０μｍ、２１〜２５μｍ、５１〜１００μｍ及び＞１００μｍの内径を有する動脈について別個に行った。各直径群から最低１０動脈を各脳の皮質領域及び深部白質領域において調べ、壁厚及び壁と管腔の比を測定した。各血管の免疫反応性中膜と内径の比は平滑筋αアクチンについて免疫染色した切片において評価した。全ての測定は１人の検査者により４０ｘレンズを装着したＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨ−２顕微鏡を用いて単一の焦点面において実施し、投与に関して盲検とした２観察者により反復した。観察者間の変動は、３検査者に壁厚及び管腔直径について同じ２０小動脈を測定させ、そして壁と管腔の比を計算させることにより調べた。変動係数は１４±１％であることがわかった。全てのデータはＩｎＳｔａｔ及びＰｒｉｓｍソフトウエア（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて計算した。異なる群の平均間の差の統計学的有意性は対応のないスチューデントのｔ検定又は一元配置ＡＮＯＶＡを用いて実施した。種々の群の複数の比較はＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較試験を用いて実施した。５％の確率水準（ｐ＜０．０５）を有意とみなした。
挙動試験及び関連する統計学的方法
Ｔ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）試験は午前９時〜午後４時に毎日実施し、投与群を知らない１人の検査者により実施した。マウスは挙動試験の２時間前に試験室に送ることにより、部屋の迷路外の視覚的手がかりに慣れさせた。本発明者等の試験において使用したＴ迷路の装置はＧｅｒｌａｉ等の記載（Ｇｅｒｌａｉ（１９９８）Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９５：９１−１０１）のものと同一とし、黒色アクリル底部を有する透明アクリル壁部より構成されるものとした。スタート及びゴールのアームの寸法は長さ７５ｃｍ、幅１２ｃｍ及び高さ２０ｃｍとした。迷路にはマニュアル遠隔制御により操作できる３つの取り外し可能なギロチンドアを装着した。試験室は天井及び床のライトにより照明し、ファンにより一定のバックグラウンドノイズを与えた。Ｔ迷路は黒色カーテンにより検査者から分離し、迷路内のマウスの運動はＴＶモニターにより観察し、ビデオ録画した。各個体マウス後にＴ迷路はＷｉｎｄｅｘスプレーで慎重に清浄化し、ペーパータオルで乾燥した。Ｔ迷路連続交替作業（Ｔ−ＣＡＴ）はマウスの取り扱いを制限し、その探索挙動が未撹乱で実施できるようにする。本試験で使用した操作法はＧｅｒｌａｉ等の記載（Ｇｅｒｌａｉ ｅｔ ａｌ．（前出））したものと同一であり、１強制及び１４自由選択の試行よりなるものとした。マウスにより行われた連続選択を測定し、１４自由選択試行の間の交替率を計算した（０％−交替無し、１００％−各試行ごとに交替、５０％−無作為選択）。１５試行を完了するために必要な時間（秒）を記録して分析した。Ｔ−ＣＡＴ試験はビデオトラッキングシステム（ＳＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により連続的に登録し、コンピューターに格納した。統計学的作業はＳｔａｔＶｉｅｗソフトウエア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を用いて実施した。
その他の操作法 血漿中リポ蛋白及び脂質の濃度は前述の通り測定した（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５；Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．，２５：１−７）。
結果
脳小動脈壁厚はＬＤＬ受容体ヌルマウスで増大し、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌の添加により更に増大する
図６に示す通り、飼料食餌で飼育した場合には小動脈壁厚は野生型マウスと比較してＬＤＬ受容体ヌルマウスで高値であり、そして６週間のＷｅｓｔｅｒｎ食餌後には小動脈壁厚はＬＤＬ受容体ヌルマウスで更に増大した。
脳小動脈壁厚はＤ−４Ｆ投与により低減したがスクランブルドＤ−４Ｆでは低減しなかった
図７Ａ〜７Ｃは６週間Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスの飲料水にＤ−４Ｆを３００μｇ／ｍＬ添加することにより、飲料水にスクランブルドＤ−４Ｆの同じ濃度を添加した場合と比較して、低減した脳小動脈壁厚となったことを示している。図７ＤはＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスの間で脳小動脈管腔直径には差が無いことを示している。一部の検査者は小動脈壁厚の最も信頼性の高い測定は各小動脈の壁厚をその小動脈の管腔直径で割ることにより得られることを論じている（Ｍｕｌｖａｎｙ（１９９９）Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４１：９−１３）。図７Ｅ〜７Ｇは壁と管腔直径の比はスクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆを投与したマウスにおいて有意に低値であったことを示している。血漿中総コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール又はトリグリセリドの濃度においては、スクランブルドＤ−４Ｆと比較してＤ−４Ｆをマウスに投与した場合に有意差は無かった。総コレステロール濃度はＤ−４Ｆ投与マウスで１，０７６±７５（平均±ＳＥＭ）であったのに対しスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスでは９７０±６１ｍｇ／ｄＬであった。ＬＤＬ及びＨＤＬコレステロールの濃度はＤ−４Ｆ投与マウスでそれぞれ９２４±７６及び８６±６ｍｇ／ｄＬであったのに対しスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスではそれぞれ８３４±６３及び７９±５ｍｇ／ｄＬであった。トリグリセリドはＤ−４Ｆ及びスクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスではそれぞれ３３０±２５及び２８８±２５ｍｇ／ｄＬであった。
脳小動脈壁の肥厚化は部分的には平滑筋αアクチン含有量の増大に起因する
図８Ａに示す通りＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＷｅｓｔｅｒｎ食餌の投与は、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えたＬＤＬ受容体ヌルマウスへの脳小動脈の壁における平滑筋αアクチンの量の有意な増大をもたらした。図８ＢはＤ−４Ｆ又はスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスに由来する平滑筋細胞αアクチンについて染色した代表的な脳小動脈を示す。図８Ｃ〜８ＥはＤ−４Ｆのマウスへの投与がスクランブルドＤ−４Ｆを投与したマウスと比較して脳小動脈壁平滑筋細胞αアクチンを有意に低減したことを定量的に示している。
ＬＤＬ受容体ヌルマウスへのＷｅｓｔｅｒｎ食餌の供給は空間記憶の障害をもたらし、これはＤ−４Ｆの投与により有意に改善されたがスクランブルドＤ−４Ｆでは異なる結果であった
図９Ａ〜９Ｄは図３Ａに記載したＬＤＬ受容体ヌルマウスをＷｅｓｔｅｒｎ食餌で飼育した場合、Ｔ−ＣＡＴで測定したところ、それらは空間記憶障害を有していたことを示している。図９Ｅ〜９Ｇは図７及び８Ｂ〜８Ｅに記載のマウスの経口Ｄ−４Ｆ投与がＴ−ＣＡＴで測定した場合に遂行能力の顕著な改善をもたらしたことを示している（スクランブルドＤ−４Ｆでは異なる結果）。スクランブルドＤ−４Ｆ投与マウスは１５試行を完了するまでＤ−４Ｆ投与マウスより長時間を要した（それぞれ５７９±２３秒と５４８±３７秒）が、この差は統計学的有意差には至らなかった。しかしなお、図９Ｅ〜９Ｇに示すデータはＤ−４Ｆ投与による改善を明らかに示している。
考察
本実施例に示したデータ及び以前に公開されたもの８，１０はＬＤＬの濃度がマウスの動脈ツリーの全ての分枝部に影響することを示唆している。飼料食餌ではＬＤＬ受容体ヌルマウスは管腔直径１５〜４０μｍの脳小動脈において顕著に増大した小動脈壁厚を有していた（図６Ａ）。僅か６週間のＷｅｓｔｅｒｎ食餌の後には、野生型マウスと比較してこれらのＬＤＬ受容体ヌルマウスにおいて脳小動脈の壁厚の顕著な増大が観察された（図６Ａ〜６Ｃ）。
【０１９７】
Ｈｅｉｓｔａｄ等（Ｈｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２６：５０９−５１３）はアテローム性動脈硬化症及び高血圧血管の相違点と類似点を強調している。この研究者等は「アテローム性動脈硬化症及び高血圧の両方における血管構造の変化は血管壁の肥厚化及び血管の『リモデリング』を特徴とする」という観察結果を示している。リモデリングはアテローム性動脈硬化血管の管腔の大きさを温存する傾向を有し、そして高血圧血管においてより小さい管腔をもたらす。図７Ｄに示す通り、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌（６週間給餌）により誘導されたＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける脳小動脈の肥厚化は管腔直径の変化とは無関係である可能性があると考えられる。本発明者等はこれらのマウスにおいて血圧を測定しておらず、より長い曝露時間により管腔直径が改変されるかどうか本発明者等には不明である。しかしながら、僅か６週間の期間内において、脳小動脈の壁と管腔の比は、平滑筋細胞αアクチン含有量により測定したところ、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌を与えた場合には顕著に増大している（図８Ａ）。
【０１９８】
反応性酸素物質種がリッチ化されたＬＤＬが血管平滑筋の細胞成長を刺激することは以前より知られている（Ｇｏｒｏｇ（１９９７）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１２９：１−７）。更に又、シスタチオニンαシンターゼの欠損により増大した酸化ストレスを有するマウスはその脳小動脈の増大した平滑筋含有量を伴った脳血管の肥大を示すことが報告されている（Ｂａｕｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｉｒ Ｒｅｓ，９１：９３１−９３７）。血漿中脂質濃度を変化させることなくマウスにおいてＬＤＬ脂質ヒドロパーオキシドを低減することが知られている（Ｎａｖａｂ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０９：ｒ１２０−ｒ１２５）１経口Ｄ−４Ｆの投与は、血漿中脂質を変化させること無くリポ蛋白の脂質ヒドロパーオキシドを低減することにより脳小動脈平滑筋αアクチンの増大（図８Ｂ〜８Ｅ）を緩解するかもしれないと推測され得る。
【０１９９】
Ｍｕｌｄｅｒ等（Ｍｕｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ １６：２１２−２１９）は、飼料食餌で飼育したＬＤＬ受容体ヌルマウスは飼料食餌で飼育した野生型マウスと比較して空間記憶障害を有することを最初に報告している。これらの研究者等は異常がアポＥヌルマウスにおいて報告されたもの（Ｋｒｕｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｅｒｕｏ Ｒｅｐｏｒｔ，８：２５０５−２５１０；Ｏｉｔｚｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，７５２：１８９−１９６；Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，７８８：１５１−１５９；Ｖｅｉｎｂｅｒｇｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９１：４０１−４０３；Ｋｒｚｙｗｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９２：１２７３−１２８６；Ｒａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ ４０４：３５２−３５４）と同様であり、そして脳の細胞にリポ蛋白の構成成分を提供することができないことにより誘導された脳細胞における原発性の異常に起因していると結論している。図９に示したデータと図６〜８におけるものを総括すれば、別の仮説が示唆される。原発性の異常はＨｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２６：５０９−５１３により記載された「シック血管症候群」に部分的又は完全に起因しており、脳細胞にリポ蛋白構成成分を送達できないことによるものではないと考えられる。この仮説を裏付けるものは高脂血症の悪化を伴った機能不全の悪化である（図９Ａ〜９Ｄ）。原発の不全がＬＤＬ受容体の非存在による脳細胞に送達されるリポ蛋白構成成分の欠如によるものであるとすれば、非受容体媒介経路による脳細胞へのリポ蛋白の送達も同様に高脂血症の増大に伴って増大することから、血漿中リポ蛋白濃度の上昇を伴った機能の改善が期待され得る。図９に示される機能的異常に関わる血管の根拠を更に裏付けるものは、Ｗｅｓｔｅｒｎ食餌により悪化（図６及び８Ａ）し、そして経口Ｄ−４Ｆにより改善された（スクランブルドＤ−４Ｆでは改善されない）（図７及び８Ｂ〜８Ｅ）小動脈における機能的異常と構造的変化の間の相関である。本発明者等は、これらのマウスにおいて脳小動脈の血管反応性は測定しなかった。しかしながらＰｒｉｔｃｈａｒｄ等はＬＤＬ受容体ヌルマウスにおける顔面動脈（直径約２４０μｍ）の血管反応性はＷｅｓｔｅｒｎ食餌により重度に障害を受け、４Ｆ投与により劇的に改善したことを観察している（Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０７：２３３７−２３４１；Ｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ９７：１１９０−１１９７）。Ｈｅｉｓｔａｄ等（Ｈｅｉｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３９（Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．８）：Ｈ５３９−Ｈ５４４）はアテローム形成性の食餌を与えることにより高コレステロール血症としたサルにおいて高炭酸ガスに対する最大脳血管拡張応答が障害を受けたが、低効力の血管拡張剤の刺激の間は高炭酸ガスに対する自己調節応答が温存されたことを報告している。興味深いことに、サルを退行性の食餌で飼育し、最大血管拡張に付したところ、脳血管床の応答性は顕著に改善されている（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８３）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７１：１０４−１１３）。
【０２００】
興味深いことに、皮質下のアテローム性動脈硬化性の脳症の血管病（ビンスヴァンガー病）に罹患したヒトにおいて、直径１００μｍ未満の脳血管における平滑筋αアクチンの増大が観察されている（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｓｔｒｏｋｅ，３１：１８３８−１８４２）。「シック血管症候群」がヒトの痴呆症において以前より認識されているよりも広範な役割を果たしていること、及び、Ｄ−４ＦのようなアポＡ−Ｉミメティックペプチドの使用がそのような疾患で有益な作用を有することが推測され得る。
【０２０１】
本明細書に記載した実施例及び実施形態は説明を目的としているのみであり、そして、それを鑑みながら種々の改変又は変更が当業者には示唆されるが、それらは本明細書の精神及び範囲及び添付請求項の範囲に包含されることが理解される。本明細書において引用した全ての公開物、特許及び特許出願は全ての目的の為に参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【図８−１】
【図８−２】
【図８−３】
【図９−１】
【図９−２】
【図９−３】
【図９−４】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図６Ｃ】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【図８−１】
【図８−２】
【図８−３】
【図９−１】
【図９−２】
【図９−３】
【図９−４】
【公開番号】特開２０１２−８２２３２（Ｐ２０１２−８２２３２Ａ）
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１５７８４（Ｐ２０１２−１５７８４）
【出願日】平成２４年１月２７日（２０１２．１．２７）
【分割の表示】特願２００７−５４４６３４（Ｐ２００７−５４４６３４）の分割
【原出願日】平成１７年１２月６日（２００５．１２．６）
【出願人】（５９２１３０６９９）ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア (364)
【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１５７８４（Ｐ２０１２−１５７８４）
【出願日】平成２４年１月２７日（２０１２．１．２７）
【分割の表示】特願２００７−５４４６３４（Ｐ２００７−５４４６３４）の分割
【原出願日】平成１７年１２月６日（２００５．１２．６）
【出願人】（５９２１３０６９９）ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア (364)
【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ
【Ｆターム（参考）】
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