幹細胞及び前駆細胞の分化のモジュレーション、アッセイ、並びにそれらの使用
【課題】 哺乳動物幹細胞又は前駆細胞の分化をモジュレートする方法を提供する。
【解決手段】 哺乳動物の幹細胞の分化をモジュレートする方法であって、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【解決手段】 哺乳動物の幹細胞の分化をモジュレートする方法であって、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の幹細胞の分化をモジュレートする方法であって、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項２】
前記幹細胞を造血細胞に分化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記幹細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、臍帯血幹細胞、末梢血幹細胞、及び骨髄幹細胞からなる群より選択されるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物がアミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンが、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、及び下記式の化合物：
【化１】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アミノ置換サリドマイドが、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−６−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、及び１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリンからなる群より選択されるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記接触ステップが個体内で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物の濃度が約０．００５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物のＣＤ３４＋若しくはＣＤ１３３＋前駆細胞の増殖又は分化をモジュレートする方法であって、増殖又は分化に適する条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で前記細胞を増殖又は分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項１２】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋前駆細胞及びＣＤ１３３＋前駆細胞からなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記前駆細胞をＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞に分化させる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物類似体がアミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、及び下記式の化合物：
【化２】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−６−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、及び１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリンからなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記接触ステップが個体内で行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記前駆細胞が前記個体に移植された細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記接触ステップが、対照と比較して分化又は増殖に検出可能な差異を生じるのに十分である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞が前記分化ステップの前に凍結保存し解凍したものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞の分化をモジュレートする方法であって、
（ａ）分化が起こり得る条件下で前記前駆細胞の集団を準備するステップ、
（ｂ）前記前駆細胞と、アミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである化合物とを接触させるステップ、
（ｃ）分化に適した条件下で前記前駆細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、前記前駆細胞が分化する期間の少なくとも一時期の間にわたり前記前駆細胞と接触させて配置される、分化ステップ、
を含む、上記方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）において、前記接触を培養第０日〜第６日の間の任意の時期に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞の培養開始時に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞を少なくとも２日間増殖させた後に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞を少なくとも６日間増殖させた後に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋前駆細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記前駆細胞を、
対照と比較してＣＤ１１ｃの発現が低減、
対照と比較してＣＤ３８の発現が低減、
対照と比較してＣＤ８０の発現が低減、
対照と比較してＣＤ８６の発現が低減、
対照と比較してＣＤ１ａの発現が低減、
対照と比較してＣＤ１４の発現が低減、
対照と比較してＣＤ５４ｂｒｉｇｈｔの発現が低減、
対照と比較してＨＬＡ−ＤＲの発現が低減、
対照と比較してＣＤ１５の発現が増大、
対照と比較してＣＤ３３の発現が増大、
対照と比較してＣＤ５４ｄｉｍの発現が増大、
対照と比較してＣＤ１３３の発現が増大、及び
上記マーカー特性のいずれかの組合せ、
からなる群より選択される細胞表面マーカー特性を示す細胞へと分化させるものであり、
ここで前記対照は、前記化合物の不在下で前記前駆細胞と同じ条件下で培養したＣＤ３４＋前駆細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記前駆細胞をＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞へと分化させる、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記サリドマイド類似体がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物被験体において前駆細胞集団を増殖させる方法であって、治療上有効な量のＣＤ３４＋前駆細胞とＴＮＦ−α活性を阻害する化合物とを前記哺乳動物被験体に投与するステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項３２】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を前記哺乳動物被験体中で分化させる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、赤血球を実質的に含まない細胞調製物の形態で前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、骨髄細胞、胎盤細胞、又は臍帯血細胞を含む細胞調製物の形態で前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、担体と共に前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−前駆細胞である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＣＤ３４＋細胞がＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋前駆細胞である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記前駆細胞が組み込まれている目的の遺伝物質を発現するものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
哺乳動物幹細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記幹細胞が、前記幹細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたりＴＮＦ−α活性を阻害する化合物と接触させたものであって、前記化合物は、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記医薬組成物。
【請求項４０】
前記幹細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、臍帯血幹細胞、末梢血幹細胞、及び骨髄幹細胞からなる群より選択されるものである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記化合物が、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体、及び下記式の化合物：
【化３】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記化合物の濃度が約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記分化が造血細胞への分化である、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記造血細胞がＣＤ３４＋又はＣＤ３８＋造血細胞である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記造血細胞がＣＤ１１ｂ＋細胞である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
単離された臍帯血細胞と単離された白血球集団とを含む医薬組成物であって、前記白血球が、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない上記分化ステップと、それによって分化した前記白血球を単離するステップとを含む方法によって生成されるものである、上記医薬組成物。
【請求項４９】
前記化合物がイミド又はアミドである、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記分化ステップが細胞培養物において行われる、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記化合物の濃度が約０．００５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記幹細胞が前駆細胞である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記前駆細胞を特定の細胞系統にする（committed）、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記前駆細胞が造血前駆細胞である、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
培養されたＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記前駆細胞が、培養して最初の６日間以内に、前記前駆細胞の増殖及び分化を促進する条件下でＴＮＦ−α活性を阻害する化合物と接触させたものである、上記医薬組成物。
【請求項５７】
前記前駆細胞が培養して６日後に回収され凍結保存されたものである、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３４−又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３４＋細胞である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記化合物がサリドマイド又はサリドマイド類似体である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記化合物がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
哺乳動物幹細胞の移植方法であって、
（ａ）前記幹細胞とサリドマイド又はサリドマイド類似体とを接触させて、処理幹細胞を生成するステップであって、その接触が前記幹細胞の分化をモジュレートするのに十分である、上記ステップ、
（ｂ）前記処理幹細胞を個体に投与するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６２】
ステップ（ｂ）が、前記処理幹細胞と併せて未処理細胞を投与することを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記未処理細胞が、胚幹細胞、胎盤細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞、及び骨髄細胞からなる群より選択されるものである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記幹細胞が前記投与ステップの前に凍結保存し解凍されたものである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
哺乳動物前駆細胞の移植方法であって、
（ａ）前記前駆細胞とサリドマイド又はサリドマイド類似体とを接触させて、処理前駆細胞を生成するステップであって、その接触が前記前駆細胞の分化をモジュレートするのに十分である、上記ステップ、
（ｂ）前記処理前駆細胞を個体に投与するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６６】
ステップ（ｂ）が、前記処理前駆細胞と併せて未処理細胞を投与することを含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記未処理細胞が、胚幹細胞、胎盤細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞、及び骨髄細胞からなる群より選択されるものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記幹細胞が前記投与の前に凍結保存し解凍されたものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
ある症状に罹患している個体の治療方法であって、前記個体に、
（ａ）前記幹細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたる、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、ＴＮＦ−α活性を阻害する化合物、
（ｂ）前記化合物の存在下で分化させた幹細胞、及び
（ｃ）前記化合物の存在下で分化させた前駆細胞、
からなる群より選択される作用物質を投与するステップを含み、
前記作用物質が、前記症状を検出可能な程度に軽減又は改善するものである、上記方法。
【請求項７０】
前記症状が炎症である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
個体の治療方法であって、レシピエント哺乳動物被験体に治療上有効な量の白血球を投与するステップを含み、前記白血球が、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、分化ステップを含む方法によって生成されるものである、上記方法。
【請求項７２】
前記幹細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記幹細胞を、灌流を行った分娩後胎盤において分化させる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記白血球を、赤血球を実質的に含まない細胞調製物の形態で前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記白血球を、臍帯血細胞を含む細胞調製物の形態で前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
前記白血球細胞を担体と共に前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７７】
前記白血球を投与して、レシピエント哺乳動物被験体の欠陥を治療又は修復する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７８】
前記欠陥が造血細胞又は血球の増殖異常である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記造血細胞又は血球の増殖異常が好中球減少又は白血球減少である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記白血球を全身投与する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記白血球を静脈内投与する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記白血球が組み込まれている目的の遺伝物質を発現するものである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記白血球が同種異系である、請求項７１に記載の方法。
【請求項８４】
前記レシピエント哺乳動物被験体がヒトである、請求項７１に記載の方法。
【請求項８５】
ＣＤ３４＋前駆細胞から分化細胞を作製する方法であって、増殖及び分化を可能にする培地中で前記細胞を培養するステップ、並びに前記前駆細胞とＡｃｔｉｍｉｄ（商標）若しくはＲｅｖｉｍｉｄ（商標）とを接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項８６】
前記接触ステップを前記培養の初日に実施する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記接触ステップを前記培養の最初の６日間に少なくとも２回実施する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記接触ステップを前記培養初日よりも早期に実施しない、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記分化細胞が、樹状細胞、顆粒球、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋前駆細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記分化細胞を培養第６日に単離する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記分化細胞を培養第１２日に単離する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＣＤ３４＋細胞が前記培養ステップの前に他の血球から単離されたものである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記培地がさらにＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−αを含有する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）が０．１μＭ〜１０．０μＭの濃度で存在する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）が１．０μＭの濃度で存在する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
医薬組成物の製造方法であって、
（ａ）ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞とＴＮＦ−α活性を阻害する化合物とを接触させるステップであって、前記前駆細胞を、その増殖及び分化を可能にする培養条件下で６日間培養するものである、接触ステップ、
（ｂ）培養して６日後に前記細胞を回収するステップ、
（ｃ）前記細胞を薬学的に許容される担体中に配置するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項９８】
前記接触ステップを培養初日に実施する、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記接触ステップを、前記培養の６日間に少なくとも２回実施する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記化合物がサリドマイド又はサリドマイド類似体である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記化合物がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記前駆細胞が前記培養の前に他の血球から単離されたものである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０３】
前記培地がさらにＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−αを含有する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０４】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）が０．１μＭ〜１０．０μＭの濃度で存在する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）が１．０μＭの濃度で存在する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
前記細胞を前記回収ステップの後に凍結保存する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０７】
請求項９７に記載の方法によって製造された医薬組成物。
【請求項１】
哺乳動物の幹細胞の分化をモジュレートする方法であって、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項２】
前記幹細胞を造血細胞に分化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記幹細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、臍帯血幹細胞、末梢血幹細胞、及び骨髄幹細胞からなる群より選択されるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物がアミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンが、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、及び下記式の化合物：
【化１】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アミノ置換サリドマイドが、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−６−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、及び１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリンからなる群より選択されるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記接触ステップが個体内で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物の濃度が約０．００５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物のＣＤ３４＋若しくはＣＤ１３３＋前駆細胞の増殖又は分化をモジュレートする方法であって、増殖又は分化に適する条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で前記細胞を増殖又は分化させるステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項１２】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋前駆細胞及びＣＤ１３３＋前駆細胞からなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記前駆細胞をＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞に分化させる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物類似体がアミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体若しくはプロドラッグ、及び下記式の化合物：
【化２】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−６−アミノイソインドリン、１−オキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリン、１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−アミノイソインドリン、及び１，３−ジオキソ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−アミノイソインドリンからなる群より選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記接触ステップが個体内で行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記前駆細胞が前記個体に移植された細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記接触ステップが、対照と比較して分化又は増殖に検出可能な差異を生じるのに十分である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞が前記分化ステップの前に凍結保存し解凍したものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞の分化をモジュレートする方法であって、
（ａ）分化が起こり得る条件下で前記前駆細胞の集団を準備するステップ、
（ｂ）前記前駆細胞と、アミノ置換サリドマイド類似体又はアミノ置換イソインドリンである化合物とを接触させるステップ、
（ｃ）分化に適した条件下で前記前駆細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、前記前駆細胞が分化する期間の少なくとも一時期の間にわたり前記前駆細胞と接触させて配置される、分化ステップ、
を含む、上記方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）において、前記接触を培養第０日〜第６日の間の任意の時期に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞の培養開始時に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞を少なくとも２日間増殖させた後に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
ステップ（ｂ）において、前記接触を前記前駆細胞を少なくとも６日間増殖させた後に実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋前駆細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記前駆細胞を、
対照と比較してＣＤ１１ｃの発現が低減、
対照と比較してＣＤ３８の発現が低減、
対照と比較してＣＤ８０の発現が低減、
対照と比較してＣＤ８６の発現が低減、
対照と比較してＣＤ１ａの発現が低減、
対照と比較してＣＤ１４の発現が低減、
対照と比較してＣＤ５４ｂｒｉｇｈｔの発現が低減、
対照と比較してＨＬＡ−ＤＲの発現が低減、
対照と比較してＣＤ１５の発現が増大、
対照と比較してＣＤ３３の発現が増大、
対照と比較してＣＤ５４ｄｉｍの発現が増大、
対照と比較してＣＤ１３３の発現が増大、及び
上記マーカー特性のいずれかの組合せ、
からなる群より選択される細胞表面マーカー特性を示す細胞へと分化させるものであり、
ここで前記対照は、前記化合物の不在下で前記前駆細胞と同じ条件下で培養したＣＤ３４＋前駆細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記前駆細胞をＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞へと分化させる、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記サリドマイド類似体がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物被験体において前駆細胞集団を増殖させる方法であって、治療上有効な量のＣＤ３４＋前駆細胞とＴＮＦ−α活性を阻害する化合物とを前記哺乳動物被験体に投与するステップを含み、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記方法。
【請求項３２】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を前記哺乳動物被験体中で分化させる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、赤血球を実質的に含まない細胞調製物の形態で前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、骨髄細胞、胎盤細胞、又は臍帯血細胞を含む細胞調製物の形態で前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞を、担体と共に前記哺乳動物被験体に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−前駆細胞である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＣＤ３４＋細胞がＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋前駆細胞である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記前駆細胞が組み込まれている目的の遺伝物質を発現するものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
哺乳動物幹細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記幹細胞が、前記幹細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたりＴＮＦ−α活性を阻害する化合物と接触させたものであって、前記化合物は、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、上記医薬組成物。
【請求項４０】
前記幹細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、臍帯血幹細胞、末梢血幹細胞、及び骨髄幹細胞からなる群より選択されるものである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記化合物が、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）の類似体、Ｒｅｖｉｍｉｄ（商標）の類似体、及び下記式の化合物：
【化３】
〔式中、Ｘ及びＹの一方がＣ＝Ｏであり、Ｘ及びＹの他方がＣ＝Ｏ又はＣＨ２である。〕
からなる群より選択されるものである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記化合物の濃度が約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記分化が造血細胞への分化である、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記造血細胞がＣＤ３４＋又はＣＤ３８＋造血細胞である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記造血細胞がＣＤ１１ｂ＋細胞である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
単離された臍帯血細胞と単離された白血球集団とを含む医薬組成物であって、前記白血球が、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない上記分化ステップと、それによって分化した前記白血球を単離するステップとを含む方法によって生成されるものである、上記医薬組成物。
【請求項４９】
前記化合物がイミド又はアミドである、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記分化ステップが細胞培養物において行われる、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記化合物の濃度が約０．００５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記幹細胞が前駆細胞である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記前駆細胞を特定の細胞系統にする（committed）、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記前駆細胞が造血前駆細胞である、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
培養されたＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記前駆細胞が、培養して最初の６日間以内に、前記前駆細胞の増殖及び分化を促進する条件下でＴＮＦ−α活性を阻害する化合物と接触させたものである、上記医薬組成物。
【請求項５７】
前記前駆細胞が培養して６日後に回収され凍結保存されたものである、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３４−又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３４＋細胞である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記化合物がサリドマイド又はサリドマイド類似体である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記化合物がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
哺乳動物幹細胞の移植方法であって、
（ａ）前記幹細胞とサリドマイド又はサリドマイド類似体とを接触させて、処理幹細胞を生成するステップであって、その接触が前記幹細胞の分化をモジュレートするのに十分である、上記ステップ、
（ｂ）前記処理幹細胞を個体に投与するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６２】
ステップ（ｂ）が、前記処理幹細胞と併せて未処理細胞を投与することを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記未処理細胞が、胚幹細胞、胎盤細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞、及び骨髄細胞からなる群より選択されるものである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記幹細胞が前記投与ステップの前に凍結保存し解凍されたものである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
哺乳動物前駆細胞の移植方法であって、
（ａ）前記前駆細胞とサリドマイド又はサリドマイド類似体とを接触させて、処理前駆細胞を生成するステップであって、その接触が前記前駆細胞の分化をモジュレートするのに十分である、上記ステップ、
（ｂ）前記処理前駆細胞を個体に投与するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６６】
ステップ（ｂ）が、前記処理前駆細胞と併せて未処理細胞を投与することを含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記未処理細胞が、胚幹細胞、胎盤細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞、及び骨髄細胞からなる群より選択されるものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記幹細胞が前記投与の前に凍結保存し解凍されたものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
ある症状に罹患している個体の治療方法であって、前記個体に、
（ａ）前記幹細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたる、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、ＴＮＦ−α活性を阻害する化合物、
（ｂ）前記化合物の存在下で分化させた幹細胞、及び
（ｃ）前記化合物の存在下で分化させた前駆細胞、
からなる群より選択される作用物質を投与するステップを含み、
前記作用物質が、前記症状を検出可能な程度に軽減又は改善するものである、上記方法。
【請求項７０】
前記症状が炎症である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
個体の治療方法であって、レシピエント哺乳動物被験体に治療上有効な量の白血球を投与するステップを含み、前記白血球が、適切な条件下及びＴＮＦ−α活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップであって、前記化合物が、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、オリゴヌクレオチド、又は核酸ではない、分化ステップを含む方法によって生成されるものである、上記方法。
【請求項７２】
前記幹細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記幹細胞を、灌流を行った分娩後胎盤において分化させる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記白血球を、赤血球を実質的に含まない細胞調製物の形態で前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記白血球を、臍帯血細胞を含む細胞調製物の形態で前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７６】
前記白血球細胞を担体と共に前記個体に投与する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７７】
前記白血球を投与して、レシピエント哺乳動物被験体の欠陥を治療又は修復する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７８】
前記欠陥が造血細胞又は血球の増殖異常である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記造血細胞又は血球の増殖異常が好中球減少又は白血球減少である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記白血球を全身投与する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記白血球を静脈内投与する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記白血球が組み込まれている目的の遺伝物質を発現するものである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記白血球が同種異系である、請求項７１に記載の方法。
【請求項８４】
前記レシピエント哺乳動物被験体がヒトである、請求項７１に記載の方法。
【請求項８５】
ＣＤ３４＋前駆細胞から分化細胞を作製する方法であって、増殖及び分化を可能にする培地中で前記細胞を培養するステップ、並びに前記前駆細胞とＡｃｔｉｍｉｄ（商標）若しくはＲｅｖｉｍｉｄ（商標）とを接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項８６】
前記接触ステップを前記培養の初日に実施する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記接触ステップを前記培養の最初の６日間に少なくとも２回実施する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記接触ステップを前記培養初日よりも早期に実施しない、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記分化細胞が、樹状細胞、顆粒球、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３＋又はＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＣＤ３３−細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＣＤ３４＋前駆細胞がＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋前駆細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記分化細胞を培養第６日に単離する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記分化細胞を培養第１２日に単離する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＣＤ３４＋細胞が前記培養ステップの前に他の血球から単離されたものである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記培地がさらにＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−αを含有する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）が０．１μＭ〜１０．０μＭの濃度で存在する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）が１．０μＭの濃度で存在する、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
医薬組成物の製造方法であって、
（ａ）ＣＤ３４＋又はＣＤ１３３＋前駆細胞とＴＮＦ−α活性を阻害する化合物とを接触させるステップであって、前記前駆細胞を、その増殖及び分化を可能にする培養条件下で６日間培養するものである、接触ステップ、
（ｂ）培養して６日後に前記細胞を回収するステップ、
（ｃ）前記細胞を薬学的に許容される担体中に配置するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項９８】
前記接触ステップを培養初日に実施する、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記接触ステップを、前記培養の６日間に少なくとも２回実施する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記化合物がサリドマイド又はサリドマイド類似体である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記化合物がＡｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記前駆細胞が前記培養の前に他の血球から単離されたものである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０３】
前記培地がさらにＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−αを含有する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０４】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）が０．１μＭ〜１０．０μＭの濃度で存在する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記Ａｃｔｉｍｉｄ（商標）又はＲｅｖｉｍｉｄ（商標）が１．０μＭの濃度で存在する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
前記細胞を前記回収ステップの後に凍結保存する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０７】
請求項９７に記載の方法によって製造された医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【公開番号】特開２０１３−５３１５６（Ｐ２０１３−５３１５６Ａ）
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２６６２４９（Ｐ２０１２−２６６２４９）
【出願日】平成２４年１２月５日（２０１２．１２．５）
【分割の表示】特願２００９−１７５０５１（Ｐ２００９−１７５０５１）の分割
【原出願日】平成１５年４月１３日（２００３．４．１３）
【出願人】（５０００２６９３５）セルジーン コーポレイション (41)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年１２月５日（２０１２．１２．５）
【分割の表示】特願２００９−１７５０５１（Ｐ２００９−１７５０５１）の分割
【原出願日】平成１５年４月１３日（２００３．４．１３）
【出願人】（５０００２６９３５）セルジーン コーポレイション (41)
【Ｆターム（参考）】
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