徐放性微粒子を製造する方法
【課題】徐放性微粒子を製造する方法
【解決手段】徐放性微粒子を製造する方法の様々な実施態様が記載される。一つの実施態様において、本方法は、ポリマー中の活性剤の分散相を形成し、分散相を連続相と混合して微粒子分散系を形成する工程を含む。本方法はさらに微粒子分散系に一定量の希釈組成物を添加する工程を含む。様々な量の希釈組成物を用いた徐放性微粒子を製造するための様々な実施態様が、特定の活性剤に関する徐放性微粒子の放出速度を変更することがここに見出される。
【解決手段】徐放性微粒子を製造する方法の様々な実施態様が記載される。一つの実施態様において、本方法は、ポリマー中の活性剤の分散相を形成し、分散相を連続相と混合して微粒子分散系を形成する工程を含む。本方法はさらに微粒子分散系に一定量の希釈組成物を添加する工程を含む。様々な量の希釈組成物を用いた徐放性微粒子を製造するための様々な実施態様が、特定の活性剤に関する徐放性微粒子の放出速度を変更することがここに見出される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
様々な天然及び合成ポリマー並びに樹脂から形成される微粒子及びミクロスフェア薬剤、診断試薬等の様々な活性剤の一般的な輸送手段となっている。分解可能な徐放性微粒子は、所謂“デポ”製剤における使用のために特に重要であり、長期にわたる活性剤の輸送が求められている。
【背景技術】
【０００２】
徐放性微粒子の処方の最適な組成は、特定期間、特定の状態を効果的に治療できる、治療量の生物学的活性剤の有効量を放出する必要がある。一般に、徐放性組成物は、活性剤が微粒子から患者の組織中に放出される速度などの放出プロファイルを有する。微粒子中に封入された特定の活性剤に対する放出速度のコントロールを可能にする形で、徐放性微粒子の放出プロファイルを変更することは、有益であり得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
ひとつの実施態様としては、ポリマーに溶解した活性剤で分散相を形成する工程；分散相を連続相と混合して、連続相中で懸濁された微粒子を有する微粒子分散系を形成する工程；そして、微粒子形成後に、微粒子分散系に希釈用組成物の一定量を添加する工程；を含む方法であって、ここで前記希釈用組成物量が、活性剤の放出速度（放出率）を変更するのに十分な量である、徐放性微粒子の形成する方法を包含するものである。
【０００４】
本発明の別の実施態様としては、活性剤とポリマーを用いて分散相を形成する工程；分散相と連続相を混合し、連続相中に懸濁された微粒子を有する微粒子分散系を形成する工程；そして、希釈用組成物を微粒子分散系に添加して、未処理の徐放性微粒子の放出速度とは異なる放出速度を有する徐放性微粒子を製造する工程；を含む方法であって、ここで前記希釈用組成物の体積は連続相の体積の少なくとも５０％である、徐放性微粒子を形成する方法を包含するものである。
【０００５】
さらに別の実施態様としては、ロイプロリドとポリマーを備える分散相を形成する工程を含む徐放性微粒子の放出速度をコントロールする方法を包含するものであって、前記ロイプロリドはポリマー中の溶解されているものである。本方法はさらにミキサー中で分散相を連続相と混合し、微粒子分散系を形成する工程；及び、微粒子形成後に微粒子分散系に希釈用組成物の一定量を添加する工程を含む。希釈用組成物量はまた、特定の活性剤の放出速度を変更させるのに十分であり得る。
【０００６】
別の実施態様は、変更された放出速度を有し、特定の活性剤とポリマーを備える分散相を有する徐放性組成物であって、前記分散相は連続相と組み合わせられて微粒子分散系を形成し、微粒子分散系は微粒子形成後に一定量の希釈用組成物に接触させられ、ここで前記希釈用組成物は、特定の薬剤の放出速度を変更させるための連続相を希釈するのに十分であるものである。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、本発明の方法の一態様の略図（配置図）である。
【図２】図２は、本発明の実施態様に従うところの、表３及び表４にて製造され記載された微粒子の、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）ラット試験における放出特性を示すグラフ図である。
【図３】図３は、本発明の実施態様に従うところの、表３及び表４にて製造され記載されたロイプロリド微粒子の、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）ラット試験における、放出特性を示すグラフ図である。
【図４】図４は、本発明の実施態様に従うところの、表５及び表６にて製造され記載された微粒子の、放出特性を示すグラフ図である。
【図５】図５は、本発明の実施態様に従うところの、表７及び表８にて製造され記載された微粒子の、放出特性を示すグラフ図である。
【図６】図６は、本発明の実施態様に従うところの、表５及び表６にて製造され記載された微粒子からの、生体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）の促進放出条件下での、酢酸ロイプロリドの放出を示すグラフ図である。
【図７】図７は、本発明の実施態様に従うところの、表７及び表８にて製造され記載された微粒子からの、生体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）の促進放出条件下での、酢酸ロイプロリドの放出速度（放出率）を示すグラフ図である。
【図８】図８は、本発明の実施態様に従うところの、表９及び表１０にて製造され記載された２種を与えられたラットにおける、血清ロイプロリド濃度レベルを示すグラフ図である。
【図９】図９は、本発明の実施態様に従うところの、表９及び表１０にて製造され記載された、ヒトにおける、血清ロイプロリド濃度レベルを示すグラフ図である。
【図１０】図１０は、本発明の実施態様に従うところの、表１１にて製造され記載された微粒子の、ラットにおける生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）オクトレオチド試験における、放出特性を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
ここに、ヒトを含む温血哺乳類における、徐放性微粒子に封入された生物学的活性剤の放出プロファイルを最適化する為の方法が開示される。また、形成後の微粒子を、添加した希釈用組成物で、連続・無菌工程の一環として処理することによる、微粒子からの生物学的活性剤の放出速度（放出率）を変化させる方法をも開示する。
【０００９】
図１に示すように、一つの実施態様は、徐放性微粒子からの活性剤の初期放出速度を最適化する方法１０を含む。この実施態様において、微粒子中の酢酸ロイプロリドの放出プロファイルは、形成したての微粒子が接触させられるところの溶媒の濃度を調整することによって、変更され得る。微粒子の放出プロファイルは、乾燥、加熱、又は水でもどす工程の間、残存溶媒不純物又は凝集問題を取り込み得るところの関連する工程なしに、微粒子が室温で水相にとどまる間に、変更し得る。
【００１０】
徐放性製品において、組成物からの初期放出される薬剤量は重要である。初期投与時に放出される薬剤、又は活性剤の量は、しばしば、初期バースト又は初期放出と呼ばれる。初期バースト又は初期放出の量は、特定の薬剤及びそれらの使用目的を検討し最適化するために重要である。
【００１１】
例えば、酢酸ロイプロリド、いわゆる“ロイプロリド”は、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の既知のアゴニスト類似物である生物学的な活性剤である。ＧｎＲＨは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の生産を促進（刺激）する。血流中に放出されると、これらホルモンは、男性においてはテストステロンを、女性においてはエストロゲンの生産を引き起こす。それ故、前立腺がん（ｐｒｏｓｔｒａｔｅ ｃａｎｃｅｒ）などの疾患において、生産されるテストストロンのレベルをコントールすることは、効果的な治療であることが知られており、ＧｎＲＨ、ＬＨ及びＦＳＨの生産を阻害する活性剤は有益であろう。実際には、生産されるテストストロンのレベルをコントロールすることは、去勢手術の必要性を制限し得る。
【００１２】
治療的適応において、ロイプロリドは下垂体前葉からＬＨ及びＦＳＨを初期に放出する
。しかしながら、連続使用すると、ロイプロリドは下垂体脱感作、そしてホルモン生産テストステロンの発現低下を引き起こす。ロイプロリドは治療で使用されると、初期上昇の後、２乃至４週間の間、血中性ホルモンレベルを抑制する。よって、ロイプロリドが有効となるために、輸送微粒子からの薬剤の非常に高い初期放出速度が望ましい。米国食品医薬品局によれば、より早い去勢を獲得するために、ロイプロリドに対する高い初期放出が求められる。ロイプロリドを用いた化学的去勢は、９５％の患者が２８日以内に５０ｎｇ／ｄＬ（０．５ｎｇ／ｍＬ）以下のテストステロンレベルを保有するもの、と定義される。
【００１３】
一方、別の活性剤であるオクトレオチドは、肢端（先端）肥大症の長期間の治療、並びに、悪性カルチノイド腫瘍、血管作動性腸管ペプチド腫瘍、フラッシング及び下痢の患者に使用されるソフトスタチン誘導体である。血清中のオクトレオチドは成長ホルモン（ＧＨ）、並びにインシュリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）をコントロールする。長期間の徐放性デポ製剤におけるオクトレオチドの使用の一般的な不利益は、高いピークレベルのオクトレオチドが、ある血漿濃度で有毒となり得ることである。より遅い初期バーストまたは放出速度が、この状況においては好ましい。
【００１４】
図１に示すように、ロイプロリド−含有微粒子製造のために連続工程１０が微粒子を製造するために適用される。連続工程１０は一般に分散相１２と連続相１４の混合を含む。分散相１２は、活性剤、ポリマー及び適当な溶媒を含む。連続相は、一般に、水溶液を含む。分散相１２及び連続相１４は、インラインミキサー１６中で混合され、微粒子分散系を形成する。微粒子分散系は、一般に、水溶液中に分散された形成したての微粒子を含み得る。
【００１５】
本出願の目的において、前立腺がんの治療のための徐放性微粒子の形態にあるロイプロリド製剤は、ポリマー状徐放性微粒子から放出される活性剤の一例として使用される。活性剤は小さなポリマー体へのカプセル化又は散在化が望まれている任意の薬剤にすることができることは、本開示の観点から当業者にとって明らかである。さらに、臨床的効果を改善するために放出速度が最適化され得る活性剤の例としては、ペプチド、ケトチフェン、チオリダジン、オランザピン、リスペリドン、オキシブチニン、オクトレオチド、ナルトレキソン、オルニチド、又は、Ｗｏｃ４Ｄ、ベータメゾン（ｂｅｔａｑｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、クロニジン、ベラパミル、又は、薬学的に可能なそれらの塩が挙げられる。特に興味深いのは、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ナファレリン、ヒストレリン、及びブセレリンなどの黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト（ＬＨ−ＲＨアゴニスト）である。また特に興味深いものは、ソマトスタチン類似体であって、例えば、オクトレオチド、ヒト、鮭及びウナギのカルシトニン、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、副甲状腺ホルモン及び関連するペプチド、インターフェロン、エリスロポエチン、ＧＭ−ＳＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、サイモシン、アンチトリプシン及び化学療法薬、局所投与の為の抗生物質及び鎮痛剤、並びに、放出速度の調整が徐放製剤の効果を増加し得る他の薬剤、である。
【００１６】
活性剤を分散相１２に組み込むために、少なくとも１つの溶媒に活性剤を溶解することが通常必要である。活性剤のための溶媒は、薬剤の性質に応じて勿論様々であり得る。活性剤を溶解するための分散相に使用され得る典型的な溶媒としては、但しこれらに限定されないが、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、塩化エチレン、四塩化炭素、クロロホルム、ジエチルエーテル及びメチルエチルエーテルなどの低級アルキルエステル、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、アセトン、酢酸エチル、メチルエチルケトン、酢酸、又はそれらの混合物が挙げられる。加えて、氷酢酸、乳酸等の酸、脂肪酸、又はアクリル酸が、ポリマー中への活性
剤の溶解とカプセル化を改善するのを促進するプロセスで使用される。与えられた系のための好適な溶媒の選択は、本開示を考慮して技術常識の範囲内事項である。
【００１７】
活性剤は、続いて、ポリマーと混合され、分散相１２を形成する。当業者に既知であり、一実施態様において有用である、ポリマーの例は、例えば米国特許第４，８１８，５４２号明細書、米国特許第４，７６７，６２８号明細書、米国特許第３，７７３，９１９号明細書、米国特許第３，７５５，５５８号明細書、米国特許第５，４０７，６０９号明細書に見出され、参照することにより本明細書に組み込まれる。与えられた系における特に好ましいポリマーの選択において、生分解性（例えば放出プロファイル）及び生体適合性といった所望の臨床的特徴を有する生成物を生産する目的のために、多数の因子が考慮される。一旦、ある当業者が、所望の臨床的特徴を提供するポリマー群を選択すると、続いて、該ポリマーは、製造工程を最適化することとなる望ましい特徴が評価される。例えば、ある場合には、微粒子の処理を促進する、薬物搭載量を増進する、分散相からの溶媒の除去を強化する、或いは、分散相から連続相への薬物の移動を抑制するという形で、活性剤と相互に作用するポリマーを選択することが可能である。
【００１８】
好適なポリマーの具体例は、乳酸のホモポリマー又は乳酸とグリコール酸のコポリマー、又は、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、“ＰＬＧＡ”ポリマーである。乳酸残基とグリコール酸残基の比率は様々であり、典型的には２５：７５乃至８５：１５の範囲であり、但し、高いラクチド含量は低い粘性及び高い溶解性につながるため、１０％のグリコリドであっても使用される。好ましいコポリマーは、少なくとも約５０％の乳酸残基を含み、例えば５０：５０、７５：２５、又は８５：１５ポリマーである。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）コポリマーは、多くの供給源から商業的に入手可能であり、そして、従来の合成ルートによって容易に製造される。ベーリンガー インゲルハイム社は、Ｒ２０２Ｈ、ＲＧ５０２、ＲＧ５０２Ｈ、ＲＧ５０３、ＲＧ５０３Ｈ、ＲＧ７５２、ＲＧ７５２Ｈ、ＲＧ７５６及びその他の称号にて好適なポリマーを製造している。Ｒ２０２Ｈ、ＲＧ７５２Ｈ又はＲＧ５０３ＨとのＬＨ−ＲＨ微粒子は、ある実施態様の分散相において使用され得る。与えられた系に対する好適なポリマーの選択は、本開示を考慮して当業者であれば明らかである。
【００１９】
好ましいポリマーの選択における一つの検討事項は、ポリマーの親水性／疎水性である。ポリマーと活性剤の双方が、疎水性又は親水性であり得る。可能であれば、親水性の活性剤と共に使用するために親水性ポリマーを選択すること、そして、疎水性活性剤とともに使用するために疎水性ポリマーを選択することが望ましい。好ましい微粒子において、薬剤とポリマーの親水性カルボキシル基との間のイオン相互作用は、薬物搭載量を増進するとみられている。しかしながら、一般に、親水性薬剤は水に溶解するものの、ポリマーと薬剤の間に親和性がない場合、又は、固化が十分に早くない場合、薬剤搭載量は減少し得る。疎水性ポリマーにおける親水性薬剤の使用もまた可能である。
【００２０】
特定のポリマーの選択において、系の残留溶媒へのポリマーの疎水性／親水性の影響もまた考慮する必要がある。親水性ポリマーは、親水性ペプチドといった親水性薬剤では、少ない残留溶媒を生じることが期待される。ロイプロリド微粒子の場合、薬剤は、分散相の液滴から疎水性溶媒を迅速にそして効率的に排除するのを補助する傾向を有する。加えて、より多量の薬剤搭載量は、より低い残留溶媒濃度と相互に関係がある傾向にあることが見出されている。よって、いくつかの系においては、親水性ポリマー内に親水性薬剤が内包されるとき、より少ない残留溶媒による間接的な利点が存在する。しかしながら、残留溶媒における親水性以外の他の影響因子が存在する場合、この効果は、非ペプチド薬剤に対して一様には適用できない。それにも関わらず、分散相の液滴からの溶媒の排除を増進する活性剤が、付随する薬剤損失なしに、優れた生産物を生産することを、理解すべきである。
【００２１】
別の検討事項は、ポリマーの分子量である。ポリマーの分子量は、放出速度、放出プロファイルなどの生成物の特徴に対して明らかに影響を及ぼすと同時に、微粒子の製造プロセスにも影響を与える。より高分子量のポリマーは、概してより粘性の高い分散相と関連し、大きな粒子をもたらすか、或いは、小さな粒子を得ることの難しさの増加をもたらし、そして、いくつかの例において、残留溶媒の増加をもたらす。一方、より低分子量のポリマーは、ポリマーがより溶解性である傾向のために、概してより遅い固化と関連する。好ましい系において、より多い残留溶媒、より高い薬剤搭載量及び増進された取り込み効率は、より高分子量ポリマーの使用に由来することが見出されている。本発明の工程のひとつの有利点は、優れた、小さい、少ない残留溶媒である微粒子を、高分子量ポリマーとともに形成し、そしてそれゆえに粘性の分散相を形成することとなる、その能力である。勿論、特定の選択はまた、所望の生成物の特徴に依存する。例えば、より高分子量で、体内でのより長い分解時間、そしてより長い薬剤放出持続時間である。
【００２２】
さらに、適用される特定のポリマー濃度は、生成物の形態の観点だけでなく、製造の観点から、系に影響を与える。粘性の分散相は、固化のためのより少ない溶媒を除去する必要があるため、ポリマー濃度の増加は、より多い薬剤搭載量と関連する傾向がある。増加された固化速度は、より高い薬剤保有を引き起こす傾向がある。その上、粘性の分散相は、固化の間に、連続相へのより少ない薬剤拡散をもたらす。いくつかの系において、これはまたより多い残留溶媒をもたらす。好ましい実施態様において、分散相中のポリマー濃度は約５乃至４０％であり、そしてより好ましくは約８乃至約３０％である。
【００２３】
ポリマーのための溶媒は、ポリマーの性質、活性剤、毒性、系中の他の溶媒との相溶性、そしてさらに微粒子が適用される用途などの、多くの因子に応じて適切に選択される。よって、ポリマーの溶解に加えて、溶媒は、液滴を形成するために連続相と混和しないこと、最適な蒸発効率のための高い揮発性、そして望ましくは安全性の理由から不燃性でなければならない。好ましいポリ（乳酸）又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーのための好適な溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、酢酸エチル、置換されたピロリドンなどが挙げられる。場合によっては活性剤のための溶媒は、ポリマーのための溶媒と同じである。一部の薬剤、概して画像解析に使用される放射性無機塩などの診断薬は、有機溶媒に溶解しないか、ほんの少ししか溶解しない。これらの例において、微細なサブ−サブミクロンサイズの粉体が、ポリマー溶液に直接懸濁して、微粒子を形成する。薬物送達において、これを用いることはまれではあるが、診断薬では役立つことが証明されている。本発明のプロセスに従う他の有用な溶媒の選択は、本開示を考慮して、当技術範囲内にある。
【００２４】
この実施態様において、ロイプロリド含有ポリ（乳酸）又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）微粒子は、Ｒ２０２Ｈポリマーに、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸とともにロイプロリド活性剤を溶解して、分散相１２を形成することにより、製造される。
分散相は、実に、均質な溶液である。或いは、それぞれ個々の溶媒中にポリマーと活性剤の別々の溶液を準備し、そして続いて混合して分散相１２を形成する。場合によっては、活性剤及び／又はポリマーの性質の理由から、分散相１２は、エマルションとして形成せざるを得ない。例えば、所定のタンパク質性の薬剤が好適な活性剤の溶媒中に溶解された場合、得られた溶液は、特定のポリマー溶媒中のポリマー溶液とは、完全に混和しない。薬剤とポリマーが比較的均一に散在しているところの、比較的均質である分散相１２を提供するために、薬剤及び薬剤溶媒は、ポリマー及びポリマー溶媒と乳化し、分散相エマルションを形成し得る。分散相１２の連続相１４への導入において、水−油−水、又はＷ／Ｏ／Ｗエマルションが形成され得る。さらに別の系において、分散相１２は、ポリマー溶液中の活性剤の直接的な懸濁液の形成によって製造される。
【００２５】
下記に記載される本発明のプロセスに応じて、連続相１４中に分散された分散相１２の液滴又は内包物を有する微粒子分散系を形成するために、分散相１２は連続相１４と混合され得る。ここで使用する用語“分散された（ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ）”とは、広義において、連続相中に散在する分散相の不連続部位を意味するものと意図される。上記内包物は、概して、通常球状の液滴として生じるが、場合によっては、特定の乳化条件に応じて、不規則な内包物と成り得る。分散相１２が液滴又は内包物を形成するところの任意の適当な媒体が、特に望ましいとされる分散相１２溶媒のための最大溶媒シンクを提供するものと共に、連続相１４として使用され得る。
【００２６】
しばしば、連続相１４は、乳化工程を変更させ影響を与えるところの界面活性剤、安定剤、塩又はその他の添加剤をも含む。典型的な界面活性剤は、ドデシルスルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、スパン、ポリソルベート８０、トウィーン８０、プルロニクスなどが挙げられる。特定の安定剤としては、タルク、ＰＶＡ及びコロイダル水酸化マグネシウムが挙げられる。粘度ブースターとしては、ポリアクリルアミド、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロースなどが挙げられる。緩衝塩は薬剤安定剤として使用され、一般的な塩でさえも活性剤の連続相１４への移動の防止を促進するために使用される。連続相１４の塩の飽和に関連する一つの問題は、ＰＶＡ及びその他の安定剤が、連続相から固体物として沈殿する傾向を有し得ることである。そのような場合、微粒子安定剤が使用され得る。塩化ナトリウムや硫酸ナトリウムなどの適当な塩並びに他の添加剤は、本開示を考慮すると当業者に明白である。
【００２７】
ひとつの実施態様において、連続相１４は、１００−５０％の水を含む。水性の連続相１４は、安定剤を含み得る。好ましい安定剤は、約０．１％乃至約５．０％量のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である。より具体的には、ＰＶＡは約０．３５％量で存在し得る。連続相１４への使用のための適当な他の安定剤は、本開示を考慮すると、当業者に明白である。
【００２８】
特定のポリマー、溶媒及び連続相の選択は、無論、活性剤並びに所望の生成物の特徴に応じて様々である。一旦、臨床的適用、放出プロファイルなどの所望の生成物の特徴が確立されたとしても、それでもなお、製造プロセスを促進するためのポリマー、溶媒及び連続相の選択には多少の自由度が残されている。
【００２９】
分散相１２及び連続相１４が混合されるとすぐに、形成したての微粒子が、ミキサー１６から第一容器２０へ連続的に移動させられ得る。この実施態様において、微粒子は一般に十分に固体且つ濾過可能であり、それ故、米国特許第６，２７０，８０２号明細書及び米国特許第６，３６１，７９８号明細書に開示されるように、中空糸フィルタを使用する微粒子の連続処理に適する。この方法は、分散相と連続相の混合物が、別々の微粒子をすぐに形成しないような、一般的な微粒子形成方法とは区別される。
【００３０】
微粒子がさらなる形成手順を必要とする方法とは対象的に、この実施態様の微粒子は約２０秒以内に、より好ましくは約１０秒未満で、そしてより特に好ましくは約５秒未満で固化する。ロイプロリド−ポリマーの実施態様において、微粒子は、約３秒未満で固化する。本実施態様において、微粒子の固化は連続相への添加時に事実上一瞬であるにしても、形成された微粒子は、それにもかかわらず、更なる残留溶媒を連続相へ引き渡すことに影響を与えやすい。
【００３１】
薬剤搭載量は、好ましいロイプロリド／ポリマー微粒子の場合、総固形物をベースとして約１２％を目標とし、１０乃至２１％の範囲である。実際には、約９乃至１７、約１７％の薬剤搭載量が得られる。勿論、薬剤の性質、所望の放出プロファイル、ポリマーの性質、そして勿論処理方法全てが、所望のそして実際の薬剤搭載量に影響する。典型的なケ
ースにおいて、薬剤とポリマーの混合量をベースとして約５％乃至２０％の薬剤搭載量が望ましく、本発明のプロセスによって達成可能なものである。典型的なカプセル化効率は約７５％である。
【００３２】
有利なことに、一旦所望の薬剤搭載量を得ると、供給量、温度などのパラメーターが算出され、製造レベルのバッチ数を含むより大きなバッチ数のスケールアップは、単により長いプロセスを実施すれば良いだけのこととなる。所望の特徴を有する微粒子を大量に生産するのに、さらなる供給チューブ（管）、乳化剤、羽根車などのものを必要としない。加えて、本発明の連続プロセスの間に製造される微粒子は、プロセスの間にいつ製造されたかにかかわらず、サイズ分布、薬剤搭載量などが並外れて均一である。
【００３３】
ひとつの実施態様において、上述したように、微粒子形成の一般的プロセスは、微粒子の溶媒接触を変化させることによって、微粒子バッチの放出特性又は放出プロファイルが変化するように修正され得ることが見出されている。形成後のより低いレベルの溶媒接触は、形成したての微粒子に対して希釈組成物１８を加えることによって達成される。希釈組成物１８は、水又はポリビニルアルコール溶液であり得る。微粒子形成後の一定量の希釈組成物１８の添加は、驚くべきことに、形成したての微粒子の放出速度を変化させることが見出されている。
【００３４】
図１に示すように、微粒子が形成され、連続相に分散された後、希釈組成物１８が添加され得る。図１中、１８ａで示される希釈組成物は、第一容器２０に移送される時に、微粒子分散系に添加され得る。第一容器２０に移送される際の希釈組成物の微粒子分散系への添加は、第一容器２０に到達し、中空糸フィルタ２２を用いて濾過される前に、微粒子分散系と希釈組成物を完全に混合させることを可能にする。
【００３５】
代わりに、１８ｂに示すように、希釈組成物１８は、微粒子分散系の前に、又は、分散系と同時に、第一容器２０に移送され得る。一旦、第一容器に入ると、微粒子と希釈組成物の混合物は、連続的に撹拌され得る。
【００３６】
微粒子分散系に添加される希釈組成物１８の量は、哺乳類に注射するために、最終製剤の放出プロファイルを調整するのに十分であるべきである。希釈組成物１８は、微粒子中にカプセル化された活性剤の溶解性、微粒子の粒子サイズ、或いは各バッチにおける活性剤のカプセル化効率を逆向きに或いは大幅に変更すべきではない。添加される希釈組成物１８の所定量に対応した、所定の溶媒接触レベルは、所望の放出速度に対して計算される。その結果、特定の放出速度が希釈組成物１８の添加によって得られる。
【００３７】
ひとつの実施態様において、所望の放出プロファイルを備えるロイプロリド微粒子を得るために、連続相中の溶媒の規定濃度が５０００ｐｐｍ未満になるまで、希釈組成物１８を加える。規定量及び時間の希釈組成物１８の添加によって、放出プロファイルは、予想通りのそして制御可能な方法で、連続プロセスの一環として調整される。
【００３８】
形成された微粒子に対して添加する希釈組成物量は、連続相１４の元の体積の少なくとも約５０％であり得る。ひとつの実施態様において、水溶液中で溶媒への接触の減少は、形成されたロイプロリド微粒子の放出速度を増加させ得る。異なる活性剤の放出速度の制御は、しかしながら、所望の放出プロファイルを獲得するために異なるステップを必要とし得る。本プロセスは、異なる放出プロファイルを備える異なる活性剤の使用に適合するように、容易に調節可能である。
【００３９】
ミキサー１６からの微粒子分散系と希釈組成物１８を、第一容器２０で混合し、微粒子／希釈組成物混合物を、中空糸フィルタ２２にて濾過する。廃棄物を、ライン２２ａを介
して、分離された容器に廃棄すると同時に、微粒子を第一容器２０に戻す。微粒子が容器２０に戻されると、それらは新たな微粒子／希釈組成物混合物と連続的に混合され、フィルタを通して循環させられる。
【００４０】
必須組成物及び所定時間で処理された後、所望の放出速度を獲得した微粒子を、その後、幾らか残存する水溶液を除去するために濾過し、そして、プロセス副生成物を除去するために水で洗浄し得る。微粒子が形成されると、患者投与のためにそれらを準備するところの充填容器に対して、微粒子を準備するためになされ得る、多くの最終的な調整があることは、当業者に既に明らかである。
【００４１】
本発明による方法は、添付の図面を参照すると共に、以下の限定されない実施例によって例示される。
【実施例】
【００４２】
以下の実施例は、ここに主張する方法を実施し評価する方法を当業者に対して詳細な記載と共に説明するものであるが、発明者が自身の発明とみなしているところの範囲を制限することを意図するものではない。特に指定の無い限り、部は質量で、温度は℃である。
【００４３】
分子量は、重量平均分子量（Ｍｗ）又は数平均分子量（Ｍｎ）で示され、そして、ポリスチレン（ＰＣ）を分子量標準に用いたゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を用いて測定される。実施例１は、本方法の一態様を示す概略図を提供する。ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）、Ｒ２０２Ｈは、ベーリンガーインゲルハイム社から市販されている。
【００４４】
実施例１
酢酸ロイプロリド微粒子を、下記表１に記載されるように製造した。分散相及び連続相を混合し、約７Ｌの微粒子分散系を形成することにより、微粒子を形成した。概して、分散相は表１中に記載されたパラメーターによれば、酢酸ロイプロリド（Ｌ．Ａ．）、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）（Ｒ２０２Ｈ）及び溶媒 塩化クロリド（ＤＣＭ）、メタノール（ＭｅＯＨ）及び氷酢酸（Ａ．Ａｃｉｄ）の溶液であリ得る。Ｒ２０２Ｈは、温血動物及びヒトにおける生体内（ｉｎ−ｖｉｖｏ）研究に基づき、３乃至４ヶ月間、ロイプロリドの徐放性を提供する。連続相は、０．００３５ｇ／ｇポリビニルアルコール溶液を用いて製造した。
【００４５】
連続相及び分散相をインライン シルバーソン（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ）ミキサーに、それぞれ流速２Ｌ／分及び３８ｇ／分にて同時に添加した。ミキサー中の混合速度は７０００ｒｐｍであり、微粒子形成期間は３．５分であった。この微粒子分散系を、約４０Ｌの希釈相を含む容器に連続的に供給した。
【００４６】
希釈相もまた０．００３５ｇ／ｇポリビニルアルコール水溶液を含み得、但し希釈相は表１に示す溶媒が混合されていた。希釈相中の塩化メチレン量は、各バッチで様々であり、具体的には、微粒子バッチ：ＧＧ０９０３０３に対して約５０００ｐｐｍから、微粒子バッチ：ＧＧ０９１００３に対して約８５００ｐｐｍであった。反応容器において、希釈相入りの溶媒との溶媒接触に関する対応時間は、全ての４つ微粒子バッチに対して１００分間で一定であった。
【００４７】
溶媒接触後、希釈相に懸濁している微粒子を溶媒除去容器（ＳＲＶ）に移送した。全ての微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化にて周囲水洗浄、８０ＳＬＰＭのエアスウィ
ープ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変化にて温水洗浄
（３９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭでエアスウィープしながら、３０分間，１．５ 体積交換にて冷却した。洗浄プロセスの間、ヘッドスペース溶媒除去を助けるた
めにエアスウィープを導入した。微粒子をメンブレンフィルタで濾過し、真空下で凍結乾燥した。
【００４８】
表１は、活性剤、ポリマー及び分散相の製造に用いた溶媒の濃度、並びに、希釈相の調製に用いた各溶媒の濃度及び実際の量を示す。
【表１】
【００４９】
表２は、粒子サイズ、促進放出条件下での薬剤放出、並びに、生理学的な条件下での薬剤放出などの、表１の製造パラメーターにて製造した微粒子の特徴を示す。微粒子の薬剤搭載量は、微粒子中の活性剤の割合として記述される。これは、溶媒（例えばジメチルスルホキシド）中に微粒子を溶解し、微粒子溶液にホスフェートバッファーを添加することによって決定された。濾過された溶液は、その後、キャリブレーション基準を対照としてＨＰＬＣによって分析された。
【００５０】
粒子サイズ分布（Ｐａｒｔ．Ｓｉｚｅ Ｄｉｓｔ．）は、界面活性剤又は希釈剤を含有する水中で、微粒子懸濁液に関して決定された。これは、レーザー光散乱で決定された。粒子サイズ分布を体積分布（ＣＶＦ）で示した。
【００５１】
生理学的条件下（Ｄ．Ｒ．（Ｐｈｙｓ．））でのロイプロリドの放出速度を決定するために、薬剤放出速度の算出をリン酸バッファー溶液（ＰＢＳ）中で実施した。表１に示すように処方された微粒子を、温度３７℃で、スクリューキャップの付いたガラスチューブ中、ＰＢＳに懸濁させた。少なくとも８０％の放出媒体が、標本点において、新たな媒体と置換された。放出媒体についてＨＰＬＣを用いて薬剤濃度の測定を行い、放出率を算出した。
【００５２】
放出条件を適切に操作し、生体内で獲得される放出速度、或いはＰＢＳへの放出による放出速度を促進させた。ロイプロリド微粒子に対して、使用される放出媒体は、０．１Ｍクエン酸リン酸塩バッファーであり、温度は５５℃であった。１７０回転／分にて撹拌された、撹拌された水バッチ中で放出を実施した。試験品について各時間ポイントで放出された薬剤の測定を行い、促進条件下（Ｄ．Ｒ．（Ａｃｃ．））の放出速度を見出した。
【表２】
【００５３】
上述の製造ステップ及び表１に従い形成された微粒子において、同じような粒子サイズ分布及び薬剤搭載量がみられた。しかしながら塩化メチレン溶媒の最も高い接触レベルに接触させられた微粒子バッチは、若干減少した薬剤搭載量を示した。
【００５４】
より意味があることは、ロイプロリドの薬剤放出速度は、促進薬剤放出試験（５５℃クエン酸リン酸塩バッファー）並びに生理学的条件（リン酸塩バッファー溶液、ｐＨ７．４、３７℃）下の薬剤放出の双方とも、バッチによって様々であった。促進試験条件下での薬剤放出は、バッチによって放出速度の違いに関して素早い比較を提供した。生理学的条件下での薬剤放出を、臨床適用における徐放性製剤の実際の持続期間をシミュレートするために、最大６０日以上のより長い試験期間の間、実施した。最も高いレベルの溶媒（８５００ｐｐｍ）に接触したバッチＧＧ０９１００３の微粒子は、一貫して最も遅い放出速度を有していた。とくに、放出速度の違いは、初期の時点の間でより大きなものであった。一般に、酢酸ロイプロリドで形成され、より高い溶媒濃度に接触させられた微粒子バッチは、減少した放出速度を示した。よって、ロイプロリドを含有する微粒子の放出速度を増加させるためには、微粒子形成後に、溶媒接触を減少させることが望ましい。
【００５５】
実施例２
酢酸ロイプロリド微粒子を、下記表３に記載される通りに製造した。微粒子分散相バッチを、酢酸ロイプロリド（Ｌ．Ａ．）、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸からなる一貫した組成物を用いて調製した。２つの微粒子バッチ、０Ｃ３５４２及び０Ｈ８３４０は、１４ｋＤａの分子量を有するＲ２０２Ｈのポリマーロットを用いて、懸濁液中で、それぞれ０．７ｋｇ、０．４ｋｇの固体微粒子をもって製造した。３つの微粒子バッチ、０Ｄ４０２２、０Ｅ５１０３、及び０Ｓ１７２３を、１８ｋＤａの分子量を有するＲ２０２Ｈのポリマーロットを用いて、懸濁液中で、それぞれ０．１ｋｇ、０．４ｋｇ、０．４ｋｇをの固体微粒子をもって製造した。各バッチを、同様の連続相処方及び同様の製造パラメーターを用いて製造した。但し、微粒子形成時間は、バッチサイズを変化させることによって、即ち懸濁液中の微粒子が０．４ｋｇと対照的に０．７ｋｇ、並びに、それぞれのバッチの懸濁液を反応容器への分散相の流速を変化させることによって連続相を含む溶媒と接触させる時間を変化させることによって、様々であった。
【００５６】
具体的には、微粒子は、それぞれの分散相を、０．３５％のポリビニルアルコール水溶液の連続相に添加することによる水中油型プロセスによって形成した。インラインシルバーソンミキサーの混合速度は７０００ｒｐｍであった。微粒子が形成するまで、分散系の連続相の溶媒濃度は、およそ塩化メチレン ７２００ｐｐｍとメタノール １６００ｐｐｍであった。
【００５７】
インラインミキサー中で形成後に微粒子バッチを連続的に溶媒除去容器に移した。微粒子形成時間は、０．４Ｋｇバッチで約４０分であり、一方、微粒子形成時間は、０．７ｋｇバッチで約７０分であった。微粒子形成の２０分後、分散相を連続相と、所定の流速で混合し、溶媒除去容器は４０Ｌの懸濁液量に達した。溶媒除去容器中の懸濁液を、その後、中空糸メンブレンフィルタ（閉鎖系）を通して再循環させ、溶媒除去容器への懸濁液供給と同じ速度（２Ｌ／分）で透過物を除去した。よって連続相中の溶媒レベルは、０．４ｋｇバッチで４０分間、０．７ｋｇバッチで７０分間で一定に維持された。
【００５８】
微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化で周囲水洗浄、８０ＳＬＰＭのエアスウィー
プ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変化で温水洗浄（３
９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、３０分間、１．５ 体積交換で冷却した。洗浄プロセスの間、ヘッドスペース溶媒除去を助けるためにエ
アスウィープを導入した。
【表３】
【００５９】
表３の形成されたバッチの微粒子特性を下記表４に示す。
【表４】
【００６０】
微粒子サイズはバッチに関して同程度であった。実施例１に関して上述に記載されたように、薬剤放出特性を生理学的条件及び促進条件にて試験した。結果は、より長い溶媒接触期間、即ち、溶媒接触を増加させた微粒子ＯＣ３５４２及びＯＤ４０２２に関して減少した初期放出を示した。バッチＯＣ３５４２から、すなわち、低分子量ポリマー（Ｍｗ＝１４ｋＤａ）から製造された微粒子は、生理学的条件下及び促進条件下のいずれにおいても、殆どの区間にわたって、最も遅い放出速度を有した。よって、高い溶媒接触において、ポリマーの分子量が小さくなると、ロイプロリドの初期放出が低くなった。
【００６１】
表３及び表４に従って製造された微粒子を、ラットの体重１ｋｇあたり酢酸ロイプロリド９ｍｇの懸濁液として注射した。図２は、バッチ０Ｈ８３４０（４０分溶媒接触、１４ｋＤａ）とバッチ０Ｃ３５４２（７０分溶媒接触、１４ｋＤａ）の同様の投与量を受けたラットにおける、血清ロイプロリドを比較する。両物質とも、分子量１４ｋＤａを有するポリマーで製造されているものの、０Ｃ３５４２は、０．７ｋｇのバッチサイズで、７０分間の溶媒接触にて製造され、一方、０Ｈ８３４０は０．４ｋｇのバッチサイズで４０分間の溶媒接触で製造されている。この研究は、０Ｃ３５４２が微粒子からのより遅い初期の薬剤放出のために、血清中で、始めはより低い薬剤レベルを生ずることを示している。約三週間後の第二局面は同程度の薬剤レベルを生じさせた。これは、より長い溶媒接触を受け、より大きなバッチサイズを有するバッチ０Ｃ３５４２からの微粒子のより低い初期放出を確認するものである。
【００６２】
図３は、バッチ０Ｄ４０２２（７０分溶媒接触、１８ｋＤａ）とバッチ０Ｅ５１０３（４０分溶媒接触、１８ｋＤａ）の同様の投与量を受けたラットにおける血清ロイプロリドを比較する。両物質とも、分子量１８ｋＤａを有するポリマーで製造されているものの、０Ｄ４０２２は０．７ｋｇのバッチサイズで７０分間の溶媒接触にて製造され、一方、０Ｅ５１０３は０．４ｋｇのバッチサイズで４０分間の溶媒接触で製造されている。再度、より長い溶媒接触期間を有するバッチである０Ｄ４０２２は、血清中で始めはより少ない薬剤レベルを生じ、接触の初期段階でより遅い放出を確認した。
【００６３】
実施例３
ロイプロリド微粒子を、固有粘度０．２０６ｄｌ／ｇ、分子量１８ｋＤａを有するポリマーで製造した。微粒子バッチを、１０ｇスケールにて、連続処理手順を用いて製造した。分散相組成物、連続相組成物、分散相流速、連続相流速、及び１分あたりのミキサー回転数などの製造パラメーターを、全てのバッチで等しくなるように保った。
【００６４】
具体的には、水中油型プロセスを用いて、それぞれの分散相と連続相を混合することにより、微粒子を形成した。連続相は、０．３５の％ポリビニルアルコール水溶液から構成されていた。インラインシルバーソンミキサーの混合速度は７０００ｒｐｍであった。
【００６５】
微粒子分散系をミキサーから溶媒除去容器に移送した。各バッチにおいて、希釈組成物量を溶媒除去容器に添加した。各バッチにおける希釈組成物は水であった。分散系をインラインミキサーから溶媒除去容器へ移動させるのと同時に、希釈組成物を溶媒除去容器に添加した。具体的には、バッチＧＣ０７１３０４を増加される希釈組成物なしに製造し、バッチＧＣ０６０４０４は連続相の体積の５０％に相当する希釈組成物にて製造した。バッチＧＣ０６０４０４を、シルバーソンミキサーから、約２Ｋｇ／分の速度で移送し、懸濁液を室温水（２２乃至２５℃）で、約１ｋｇ／分の同時フローにて、希釈した。
【００６６】
バッチＧＣ０６０３０４に関して添加された希釈組成物は連続相の体積の約１００に％相当し、ここでバッチを２ｋｇ／分の速度でミキサーから移送し、希釈組成物を同時に２ｋｇ／分の速度で添加した。バッチＧＣ０６１１０４に関して２ｋｇ／分の懸濁液フローを使用しながら希釈組成物を４ｋｇ／分の速度で添加し、懸濁液の連続相の体積を約２００％増加させた。混合速度は、全ての試験において、７０００ｒｐｍで一定とした。
【００６７】
最後に、微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化で周囲水洗浄にて洗浄、８０ＳＬＰ
Ｍのエアスウィープ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変
化で温水洗浄（３９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、３０分間、１．５ 体積交換で冷却した。洗浄工程の間、ヘッドスペース溶媒除去を助
けるためにエアスウィープを導入した。微粒子をメンブレンフィルタで濾過し、真空下で凍結乾燥した。
【表５】
【００６８】
表５で製造した微粒子の特性を表６に示す。
【表６】
【００６９】
実施例１に関して上述されるように、薬剤放出粗特性を生理学的条件下並びに促進条件下で試験した。異なる組成物から製造した微粒子の薬剤カプセル化及び粒子サイズ特性は
同程度であった。ロイプロリドフリーベースのカプセル化効率は、８０乃至８２％の範囲であった。結果、薬剤カプセル化は、連続相部分に添加する量を０から２００％の範囲に増加させた希釈組成物を有する全てのバッチにおいて類似していることを示した。平均粒子サイズ（５０％体積分布下）は、２５乃至２９μｍにおよび、９０％体積分布では４７乃至５０μｍにおよんだ。一般に、薬剤カプセル化と粒子サイズ分布は、バッチ間で類似している。
【００７０】
生理学的条件下で測定された薬剤放出速度をリアルタイム薬剤放出速度（長期間）の指標として測定した。希釈組成物が増加し、そして連続相がさらに希釈されるにつれて、結果はより早い放出速度を示した。促進放出速度試験条件も連続相の希釈組成物が増加するにつれてわずかに高い初期放出速度を示した。例えば、連続相部分に、最も高い希釈組成物量と、最も低い溶媒濃度を有するバッチＧＣ０６１１０４は、全ての時間間隔にて、両放出条件下で最も早い放出を示した。バッチＧＣ０７１３０４は希釈組成物の増加をしていない。最も高い溶媒濃度を有する試料として、この試料は３日及びそれ以下の時間間隔に関して、生理学的条件下で、最も遅い放出速度を示した。従って微粒子形成後の溶媒接触の減少は、微粒子からのロイプロリドの放出速度を増加させる。
【００７１】
図４は、表５及び６に製造され記載されたバッチＧＣ０７１３０４、ＧＣ０６０３０４、及びＧＣ０６１１０４を含む、３７℃のリン酸バッファー溶液中のロイプロリド微粒子の放出特性を示すグラフ図である。図４は、異なる希釈組成物レベルにてバッチが製造されたとき、ＰＢＳ中で３７℃で放出されたロイプロリドの割合を表す３つのＳ−型カーブを示す。全３つのカーブの間に狭い分離が存在するが、図４は、２００％の最も多い希釈組成物の添加に対応するバッチＧＣ０６１１０４が、特に早い時間段階で、最も高いロイプロリド放出速度（放出率）を有することを示す。
【００７２】
図６は、表５及び６に製造され記載されたバッチＧＣ０７１３０４、ＧＣ０６０３０４、及びＧＣ０６１１０４を含む、５５℃のクエン酸リン酸バッファー溶液中の、促進放出条件下での酢酸ロイプロリド微粒子の放出特性を示すグラフ図である。微粒子バッチは促進放出試験条件によるロイプロリドの放出速度（放出率）を示すようにプロットされ、１時間ごとの時間間隔に対して記録した。最初のデータポイント（１時間及び５時間）に関して、バッチＧＣ０６１１０４がわずかに高い放出を有することを示した。
【００７３】
実施例４
微粒子バッチをロイプロリド及び固有粘度０．１５７ｄＬ／ｇ、分子量１１．５ｋＤａを有するＲ２０２Ｈを用いて製造した。バッチを、約１０ｇスケールで製造した。
【００７４】
表７はバッチの製造パラメーターを比較する。製造パラメーターは、添加した希釈組成物量を除いて、全てのバッチで類似している。
【表７】
【００７５】
表８は、０．１５７ＩＶポリマーを用い希釈組成物量を変化させ、表７に示すように製造された、微粒子バッチの特性を比べる。
【表８】
【００７６】
希釈組成物の連続相への添加なしに製造された微粒子は、比較的より低い放出速度を有
する。より低分子量のポリマーは、より高分子量のポリマーで製造された微粒子に比べて、溶媒接触並びに微粒子中の薬剤含量に対してより敏感である。粒子サイズ分布は３つのバッチに関して同程度であり、変化の度合は２３乃至２６μｍの範囲の平均粒子径（５０％体積分布下）と小さい。希釈組成物を含まないバッチＧＣ０７１４０４は、他の２つのバッチのものと比べて、より遅い初期放出を示した。早期放出におけるこの違いは、促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）放出にも反映される。
【００７７】
図５は０．１５７の固有粘度を有するポリマーで形成された微粒子に関するリン酸バッファー溶液中の薬剤放出速度（放出率）を比較する。０．１５７ＩＶポリマーで形成された微粒子は、希釈組成物を含まないバッチにおいて、より遅い初期放出を示した。１００及び２００％の希釈組成物添加のバッチに関して、０．１５７ＩＶポリマー微粒子はより高い放出速度を示した。希釈組成物の添加は、形成したての微粒子に対する溶媒接触レベルを最小限に抑え、低ＩＶポリマーに関する放出速度を増加させる。
【００７８】
図７は、表７に示す希釈組成物の様々な量を有する３つの試料のグラフ図であって、促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）条件下での１時間に対してプロットした放出された酢酸ロイプロリド割合のグラフ図である。増加させた希釈組成物を有するバッチは、生理学的条件下で最初の２週間、促進放出試験条件下で最初の５時間、より高い放出速度を有した。
【００７９】
実施例５
実施例５は、連続相への希釈組成物の添加／無添加での大規模微粒子バッチを詳述する。薬物動態（ＰＫ）及び有効性データ、そして３つのロイプロリド微粒子バッチ（０Ｅ５１０３、０Ｂ６３１５及び０Ａ０３０７）に関して、約０．２１ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＲ２０２Ｈポリマーを用いて製造した。バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７を、薬物動態及び有効性を目的として、ヒトへの２２．５ｍｇ投与量で試験した。薬物動態（ＰＫ）群の患者は血中（血清）ロイプロリドレベルとテストステロン抑制に関してモニターし、残りの患者を有効性（テストステロン抑制）のみモニターした。ロイプロリドを用いる化学的去勢を示すためには、９５％の患者が２８日間以内で５０ｎｇ／ｄＬ（０．５ｎｇ／ｍＬ）以下のテストステロンレベルを示す必要がある。
【００８０】
微粒子バッチ０Ｅ５１０３を、０．２０６ＩＶ（固有粘度）と分子量１８ｋＤａを有するＲ２０２Ｈを用い、希釈組成物の添加や希釈なしに製造した。このバッチの塩化メチレン接触は約７２００ｐｐｍであり、接触期間は約４０分間であった。微粒子バッチ０Ｂ６３１５を、０．２０６ＩＶ（固有粘度）と分子量約１８ｋＤａを有するポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）で製造した。連続相が溶媒除去容器にある間に、希釈組成物を連続相フローに対して水１５０％の添加により製造した。
【００８１】
微粒子バッチ０Ａ０３０７をバッチ０Ｂ６３１５と同様のＩＶ（固有粘度）と分子量を有するポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）を用いて製造した。連続相及び分散相エマルションがインラインミキサーを通って溶媒除去容器へ供給される間に、連続相フローに対して２００％の水を添加することにより希釈組成物を製造した。塩化メチレン溶媒レベルは、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）をもとにして、連続相中で約１５００ｐｐｍであった。表９は製造パラメーターを比較し、表１０は表９で製造した微粒子の特性を比較する。
【００８２】
特に、０Ａ０３０７に関するバッチサイズは約１Ｋｇスケールであり、反応容器中の微粒子形成時間は１００分間であった。バッチ０Ｅ５１０３は０．４ｋｇスケールのバッチサイズを有し、微粒子形成時間は４０分間であった。分散相に関する処方は３つのバッチに関して同様であり、０Ｅ５１０３バッチはわずかに増加した活性剤及びポリマー濃度と溶媒（メタノール）及び酢酸濃度が減少していた。
【表９】
【表１０】
【００８３】
促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）放出速度は、増加された希釈組成物が添加され、そしてそれ故、溶媒接触が減少した０Ｂ６３１５及び０Ａ０３０７が、希釈組成物が添加されていない０Ｅ５１０３と比較して、より高い初期放出を備える微粒子を製造したことを示した。図８は、バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７に関して、１ｋｇあたり２２．５ｍｇのロイプロリド投与量を与えたラットにおける、２週間の血清ロイプロリド濃度を比較する。もっとも低い溶媒接触であるバッチ０Ａ０３０７は、０Ｅ５１０３に比べて、より高い早期放出を有し、血清中でより高いロイプロリド濃度となった。
【００８４】
図９は、表９に従って製造したロイプロリド微粒子を投与したヒトにおける、血清ロイプロリド濃度レベル（ｎｇ／ｍｌ）のグラフ図である。微粒子バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７は表９に製造され記載された。表１０はヒトの血中（血清）ロイプロリド濃度の臨床データを示す。この試料の結果は、希釈組成物（０Ａ０３０７と）低ＤＣＭ接触である処方が、より早い放出の為に、最初の一ヶ月間、血中でより高いロイプロリドレベルを有することが示されている。このバッチは、ヒトの組織中において、ＧｎＲＨアゴニストとしてより効果的に作用し、テストステロンレベルの長期間の減少を獲得する。同じ投与量で０Ａ０３０７を投与された患者は、血液中のより低いロイプロリドレベルを有し、
薬剤は試験のより遅い段階（一ヶ月後）の間、より早い速度で放出された。
【００８５】
バッチ０Ｅ５１０３と０Ａ０３０７を比較した臨床試験を実施し、微粒子形成後に添加した希釈組成物の様々なレベルに対して、ロイプロリド微粒子投与後の患者のテストステロンレベルを比較した。理想的には９５％の患者が２８日間で５０ｎｇ／ｄＬより低いテストステロンレベルを獲得し維持することが望ましい。表１１は、２つのロイプロリド微粒子バッチの臨床試験結果を詳述する。
【表１１】
【００８６】
バッチ０Ｅ５１０３からの遅い初期放出によって、７９％の患者のみが２８日までに所望のレベルを獲得した。一方、２００％の希釈組成物を有するバッチ０Ａ０３０７を投与された患者は、２８日までに集団の９８％が所望のレベルを獲得した。この結果、前立腺がんなどの疾病にあり、より高いテストステロンレベルのために不快症状及び痛みを伴う患者をより効果的に治療可能であり、ロイプロリドのより高い初期放出速度を有する徐放性薬剤の投与によって、より早くかれらの痛みを減じることが可能であり
【００８７】
実施例６
実施例６に関するバッチを、固有粘度０．１８３ＩＶを有するＲ２０２Ｈを用いて約１０ｇスケールで製造した。表１２はバッチに関する製造パラメーターを比較する。分散相組成物及び連続相組成物は全てのバッチに関して同じとし、目的とする薬剤搭載量を全てのバッチに関して１６．５％Ｌ．Ａ．とした。連続相及び分散相に関する流速を同じ又は同程度とした。
【表１２】
【００８８】
表１３は、微粒子バッチの特性を比較する。
【表１３】
【００８９】
微粒子中の薬剤搭載量はバッチに関して同程度であった。粒子サイズは、バッチ間で、
小さく、典型的であり、変化を示した。平均粒子サイズ（５０％体積分布下）は２２乃至２８μｍに及び、９０％体積分布は４０乃至４６μｍに及んだ。一般に粒子サイズはバッチ間で大きな違いを示さず、明確な傾向はなかった。
【００９０】
ＰＢＳ中、３７℃での薬剤放出は３ヶ月を超える薬剤放出が期待される。最少１ヶ月の初期放出をＰＢＳ中で追跡した。希釈組成物を含まないバッチ（ＧＣ０６１４０４）は、希釈組成物を用いて製造したバッチと比較してより低い初期放出を示した。５０，１００及び２００％の希釈組成物を有するバッチは、同程度のより早い放出速度を示した。
【００９１】
促進放出法もまた、希釈組成物で製造したバッチに関して、わずかにより高い初期放出（１時間及び５時間）を示した。様々な希釈物で製造されたバッチ間で、放出に関する違いはない。希釈物による初期放出（１及び５時間）の増加は５０％希釈で獲得した。さらなる希釈は目立つほど大きくは初期放出を改善しなかった。
【００９２】
実施例７
３つの微粒子バッチを、１００，２００及び３００％希釈組成物で、固有粘度０．２０６ＩＶのＲ２０２Ｈを用いて製造した。ＧＣ０７１２０４、ＧＣ０９０９０４、及びＧＣ０９１００４に関する製造パラメーターを表１４に示す。製造パラメーターは、意図的に変化させた希釈組成物を除いて、これらバッチに関して同様のものであった。
【表１４】
【００９３】
表１４で製造したバッチの特性を下記表１５に示す。最終微粒子は７１乃至７５％のカプセル化効率を有し、薬剤搭載量はバッチに関して同程度であった。１００及び２００％
希釈のバッチは同程度の粒子サイズを示した。わずかに早い放出速度（又は同程度の放出速度）が、より多い希釈物で製造したバッチに関して、より早い時点の間、ＰＢＳ中で観測された。促進放出が同程度の初期放出を示した。
【表１５】
【００９４】
実施例８
３つの微粒子バッチを、１００、２００及び３００％希釈組成物にて、０．１５７ＩＶ固有粘度を有するＲ２０２Ｈを用い、そしてＬ．Ａ．目的投与量１９％にて製造した。製造パラメーターを表１６に示す。製造パラメーターは、意図的に変化させた希釈組成物以外は、バッチに関して同程度であった。
【表１６】
【００９５】
表１７は上記に製造された微粒子バッチの特性を示す。最終バッチは６９乃至７３％のカプセル化効率を有する微粒子を有していた。薬剤搭載量はおよそ１４％で、バッチに関して同程度であった。微粒子サイズはバッチに関して同程度であった。薬剤放出速度はＰＢＳ中で全てのバッチに関して同程度であり、促進放出がわずかに高い初期放出を示した。
【表１７】
【００９６】
実施例９は様々な溶媒接触のオクトレオチド微粒子を比較する。オクトレオチド含有ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）微粒子を、ロイプロリド微粒子の製造手順と類
似の手法で製造した。ＰＬＧＡ（８５：１５ ＰＬＧＡ、Ａｌｋｅｒｍｅｓ社）、オクトレオチド、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸を含む分散相を、米国特許第５，９４５，１２６号明細書に例示されるような修正シルバーソンインラインミキサーの分散相注入チューブを介して、１分あたり約１８ｍＬで供給した。分散系におけるオクトレオチドの目標搭載量は１０％であった。０．３５％ポリビニルアルコール水溶液の連続相を、毎分２Ｌにて、インラインシルバーソンの連続相注入ポートを介して供給した。シルバーソンの回転速度は５５００ｒｐｍであった。詳細な製造パラメータを下記表１８に示す。製造された約２Ｌの懸濁液を、その後一定に撹拌しながら、１５Ｌの連続相に接触させた。この１５Ｌの連続相は、それぞれ２０００、４０００又は６０００ｐｐｍの塩化メチレンを含んでいた。形成したての微粒子を、洗浄前に、１００分間、接触させた。コントロールバッチは溶媒接触をせずに直接洗浄した。
【表１８】
【００９７】
促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）試験を実施し、各バッチの微粒子を比較した。試験は、ｐＨ４．０、６０℃で酢酸バッファー溶液中で実施した。放出速度をもまた生理学的条件下、３７℃で、１日間、バッチに関して算出した。
【表１９】
【００９８】
表１９に示すように、より多い量の溶媒に接触した微粒子は、初期の時点において、放出媒体中でより高い初期放出を示した。インシュリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）がより早い放出速度に対応してあまりにも急激に減少し得るように、より高い初期バーストは安全性の懸念を引き起こし得る。徐放性微粒子処方におけるオクトレオチドに関するより低い初期放出速度が最適であろう。ロイプロリドとは異なり、オクトレオチド微粒子に関して、減少した溶媒接触の処方を用いることによって、放出速度が減少される。
【００９９】
図１０は、ラットにおけるオクトレオチドの生体内研究において、表１８に従って製造された微粒子の放出特性のグラフ図である。ラットはオクトレオチド微粒子バッチ５ｍｇの投与量を与えられた。ＧＪ０３０８０４は連続相中で増加した溶媒に接触しておらず、より高濃度の塩化メチレンで製造されたバッチと比較して、より低い初期バースト放出を示した。より高い溶媒接触がより高いバースト放出速度を引き起こすため、より低いバーストの微粒子は好ましい速度に応じて、水希釈によって製造され得ることが推測される。
【０１００】
実施例１０
実施例１０は、希釈組成物が添加／無添加で、微粒子のバッチサイズが様々であってあるときの、微粒子のロイプロリドの薬剤放出速度の効果を比較する。まずバッチＧＣ０７１３０４、０Ｅ５１０３及び０Ｄ４０２２を連続相への希釈組成物の添加なしに、様々なバッチサイズで製造した。表２０に示すように、８ｇバッチであるＧＣ０７１３０４を、分子量１８ｋＤａのＲ２０２Ｈ、酢酸ロイプロリド、塩化メチレン及びメタノールを含む分散相２９ｇを用いて製造した。ＧＣ０７１３０４の連続相は、１．５Ｌの０．３５％ポリビニルアルコール水溶液を含んでいた。分散相に関して３０−３５ｇ／分、連続相に関して２Ｌ／分の流速にて、微粒子形成を５０秒以内で完了した。バッチをインラインミキサーにて７０００ｒｐｍで一定に撹拌し、周囲水中及び３９℃水中、およそ１０ 体積変
化にて洗浄した。
【０１０１】
バッチ０Ｅ５１０３を上述と同じ製造パラメーターを用い、但しバッチサイズを４００ｇに増加させた。微粒子形成時間は４０分間であった。バッチサイズを７００ｇに増加させたバッチ０Ｄ４０２２を上述と同じ製造パラメーターを用いて製造した。微粒子形成時間は７０分間であった。後述の２つのバッチに使用した分散相及び連続相の量は、検討されたバッチサイズを製造するために、比例して調整した。
【０１０２】
下記表２０に示すように、３つのバッチを０．２０６ＩＶ（固有粘度）ポリマーを用いて製造した。表２１に、バッチの特性を比較する。
【表２０】
【０１０３】
表２０で形成された微粒子の特性を表２１に示す。
【表２１】
【０１０４】
生理学的条件下で試験された放出速度は、ｐＨ７．４、３７℃でＰＢＳに対して接触させられた。５０秒という最も早い微粒子形成時間と、対応する最も短い溶媒接触時間で製造された８ｇバッチは、４００ｇバッチ及び７００ｇバッチと比較して、最も早い初期放出を有した。最も長い溶媒接触時間（微粒子形成時間：７０分間）の最大の７００ｇバッチは、最も遅い初期放出を有していた。よって、生理学的条件及び促進条件下で、バッチサイズの増加、又はバッチのスケールアップは、全ての他の因子がほぼ同じである、薬剤の放出速度に反転効果を与える。
【０１０５】
表２２に詳述されるように、微粒子を１０，１００及び１０００ｇのスケールバッチで製造した。１００ｇスケールでは試料の再現性を示すために３つのバッチを製造した。
バッチは、分散相に関して０．１８３ＩＶ（固有粘度）、分子量１４ｋＤａを有するＲ２０２Ｈポリマー、ロイプロリド、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ及び氷酢酸を用いて、連続相に関して水とポリビニルアルコールを用いて製造した。また、約１５００、±５００ｍｌの希釈組成物を連続相に加えた。具体的には希釈組成物、或いは水を、微粒子形成時に溶媒除去容器に対して２乃至４Ｌ／分で連続的に添加した。製造パラメーターはバッチに関して同じであり、微粒子製造時間は、１０ｇバッチで１分間、１００ｇバッチで１０分間、１０００ｇバッチで１００分間であった。１００ｇスケールにて再現性を示すために３つのバッチを製造した。
【表２２】
【表２３】
【０１０６】
薬剤カプセル化効率は１０、１００及び１０００ｇバッチで７５乃至７９％の範囲の値で同程度である。薬剤搭載量は１２．８乃至１３．７％と正常変動である。粒子サイズの結果は同程度のサイズ分布データを示す。薬剤放出速度は１０，１００及び１０００ｇバッチで類似している。１０、１００及び１０００ｇで製造したバッチは全て非常に低い残存溶媒を示した。よって、連続相に希釈組成物を添加することによって、上記測定された放出プロファイルに関しては、バッチサイズは小さなファクターになる。連続相の溶媒レベルが閾値下に減少すると、希釈組成物の添加なしに製造されたバッチがそうであったように、微粒子の放出特性はバッチサイズに依存しない。
【０１０７】
実施例１１
実施例１１は、希釈組成物を用いて製造されたリスペリドン微粒子の放出プロファイルを詳述する。まず、微粒子を生体適合性及び生体分解性ポリマーとして、２７．５ｇのポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、すなわちラクチド：グリコリド比が８５：１５であり、固有粘度が０．６１ｇ／ｄＬであるＰＬＧＡを用いて製造した。バッチを２７
．５ｇのリスペリドンを用いて製造した。リスペリドン及びポリマーを２２０ｇのジクロロメタンに溶解した。ポリマー、生物学的活性剤及び溶媒のこの混合有機溶液が分散相を構成した。別に、連続相を供給するために、８７．５ｇのポリビニルアルコール及び６９ｇのリン酸二ナトリウム七水和物を２５ｋｇの精製水中に溶解した。分散相及び連続相を同時に、それぞれ３８．５ｍｌ／分及び４０００ｍＬ／分で、シルバーソンインラインミキサーに注入し、約５分間４０００ｒｐｍで混合した。
【０１０８】
分散相を連続相と混合する際、得られた混合物をシルバーソンミキサーにてリスペリドン搭載ＰＬＧＡ微粒子に固化させた。リスペリドン微粒子懸濁液を、希釈組成物を微粒子分散液に室温で添加するところの溶媒除去容器（ＳＲＶに）排出し、希釈組成物をおよそ５分間、流速２０００ｍＬ／分で加えた。ＳＲＶ中で、室温及び３３−３７℃の水で微粒子を洗浄し、有機溶媒を除去した。洗浄及び溶媒除去後、微粒子を濾過にて回収し、凍結乾燥した。微粒子は、微粒子１ｇあたり０．３９ｇのリスペリドンの薬剤搭載量を有すると決定された。ＰＬＧＡ微粒子のリスペリドン搭載効率は７７．５％であった。微粒子の放出特性を評価した。ｐＨ７バッファー中２４時間以内で、１％未満の薬剤の初期放出が検出された。
【０１０９】
実施例１２
実施例１２は水希釈なしに微粒子にカプセル化されたリスペリドンの放出プロファイルを詳述する。微粒子を２７．５ｇのポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、すなわち、固有粘度０．６１ｇ／ｄＬ、ラクチド：グリコリド比＝８５：１５のＰＬＧＡを用いて製造した。リスペリドン２７．５ｇを分散相としての役割を果たす有機溶液の一部としてのジクロロメタン２２０ｇに溶解した。別に、ポリビニルアルコール８７．５ｇ、リン酸二ナトリウム七水和物６９ｇを精製水２５ｋｇに溶解することで連続相を調製した。分散相と連続相を、それぞれ３８．５ｍｌ／分、４０００ｍＬ／分にて同時にシルバーソンインラインミキサーに注入した。混合懸濁液を４０００ｒｐｍで混合した。分散相を連続相と混合し、得られた混合物をシルバーソンミキサーでリスペリドン搭載ＰＬＧＡ微粒子に固化させた。リスペリドン微粒子懸濁液を溶媒除去容器（ＳＲＶ）に排出した。この実施例では希釈組成物を用いなかった。ＳＲＶ中で、室温及び３３−３７℃水で微粒子を洗浄し有機溶媒を除去した。洗浄及び溶媒除去工程後、微粒子を濾過にて回収し、凍結乾燥した。微粒子は、微粒子１ｇあたりリスペリドン０．３３ｇの含量を有すると決定された。ＰＬＧＡ中のリスペリドン搭載効率は６６．２％であった。後の放出プロファイル試験で、およそ８０−８２％のリスペリドンがｐＨ７バッファー中２４時間以内で微粒子から放出された。
【表２４】
【０１１０】
希釈組成物の添加なしに製造されたバッチに関して、微粒子からの放出速度（放出率）はリスペリドン８０−８２％であった。２０００ｍｌ／分で希釈組成物にて希釈したバッチは、初期投与において放出速度（放出率）が１％未満であった。
【符号の説明】
【０１１１】
１０・・・連続工程
１２・・・分散相
１４・・・連続相
１６・・・インラインミキサー
１８・・・希釈組成物
１８ａ・・・希釈組成物
１８ｂ・・・希釈組成物
２０・・・第一容器
２２・・・中空糸フィルタ
２２ａ・・・ライン
【先行技術文献】
【特許文献】
【０１１２】
【特許文献１】米国特許第４，８１８，５４２号明細書
【特許文献２】米国特許第４，７６７，６２８号明細書
【特許文献３】米国特許第３，７７３，９１９号明細書
【特許文献４】米国特許第３，７５５，５５８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，４０７，６０９号明細書
【特許文献６】米国特許第６，２７０，８０２号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３６１，７９８号明細書
【特許文献８】米国特許第５，９４５，１２６号明細書
【技術分野】
【０００１】
様々な天然及び合成ポリマー並びに樹脂から形成される微粒子及びミクロスフェア薬剤、診断試薬等の様々な活性剤の一般的な輸送手段となっている。分解可能な徐放性微粒子は、所謂“デポ”製剤における使用のために特に重要であり、長期にわたる活性剤の輸送が求められている。
【背景技術】
【０００２】
徐放性微粒子の処方の最適な組成は、特定期間、特定の状態を効果的に治療できる、治療量の生物学的活性剤の有効量を放出する必要がある。一般に、徐放性組成物は、活性剤が微粒子から患者の組織中に放出される速度などの放出プロファイルを有する。微粒子中に封入された特定の活性剤に対する放出速度のコントロールを可能にする形で、徐放性微粒子の放出プロファイルを変更することは、有益であり得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
ひとつの実施態様としては、ポリマーに溶解した活性剤で分散相を形成する工程；分散相を連続相と混合して、連続相中で懸濁された微粒子を有する微粒子分散系を形成する工程；そして、微粒子形成後に、微粒子分散系に希釈用組成物の一定量を添加する工程；を含む方法であって、ここで前記希釈用組成物量が、活性剤の放出速度（放出率）を変更するのに十分な量である、徐放性微粒子の形成する方法を包含するものである。
【０００４】
本発明の別の実施態様としては、活性剤とポリマーを用いて分散相を形成する工程；分散相と連続相を混合し、連続相中に懸濁された微粒子を有する微粒子分散系を形成する工程；そして、希釈用組成物を微粒子分散系に添加して、未処理の徐放性微粒子の放出速度とは異なる放出速度を有する徐放性微粒子を製造する工程；を含む方法であって、ここで前記希釈用組成物の体積は連続相の体積の少なくとも５０％である、徐放性微粒子を形成する方法を包含するものである。
【０００５】
さらに別の実施態様としては、ロイプロリドとポリマーを備える分散相を形成する工程を含む徐放性微粒子の放出速度をコントロールする方法を包含するものであって、前記ロイプロリドはポリマー中の溶解されているものである。本方法はさらにミキサー中で分散相を連続相と混合し、微粒子分散系を形成する工程；及び、微粒子形成後に微粒子分散系に希釈用組成物の一定量を添加する工程を含む。希釈用組成物量はまた、特定の活性剤の放出速度を変更させるのに十分であり得る。
【０００６】
別の実施態様は、変更された放出速度を有し、特定の活性剤とポリマーを備える分散相を有する徐放性組成物であって、前記分散相は連続相と組み合わせられて微粒子分散系を形成し、微粒子分散系は微粒子形成後に一定量の希釈用組成物に接触させられ、ここで前記希釈用組成物は、特定の薬剤の放出速度を変更させるための連続相を希釈するのに十分であるものである。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、本発明の方法の一態様の略図（配置図）である。
【図２】図２は、本発明の実施態様に従うところの、表３及び表４にて製造され記載された微粒子の、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）ラット試験における放出特性を示すグラフ図である。
【図３】図３は、本発明の実施態様に従うところの、表３及び表４にて製造され記載されたロイプロリド微粒子の、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）ラット試験における、放出特性を示すグラフ図である。
【図４】図４は、本発明の実施態様に従うところの、表５及び表６にて製造され記載された微粒子の、放出特性を示すグラフ図である。
【図５】図５は、本発明の実施態様に従うところの、表７及び表８にて製造され記載された微粒子の、放出特性を示すグラフ図である。
【図６】図６は、本発明の実施態様に従うところの、表５及び表６にて製造され記載された微粒子からの、生体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）の促進放出条件下での、酢酸ロイプロリドの放出を示すグラフ図である。
【図７】図７は、本発明の実施態様に従うところの、表７及び表８にて製造され記載された微粒子からの、生体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）の促進放出条件下での、酢酸ロイプロリドの放出速度（放出率）を示すグラフ図である。
【図８】図８は、本発明の実施態様に従うところの、表９及び表１０にて製造され記載された２種を与えられたラットにおける、血清ロイプロリド濃度レベルを示すグラフ図である。
【図９】図９は、本発明の実施態様に従うところの、表９及び表１０にて製造され記載された、ヒトにおける、血清ロイプロリド濃度レベルを示すグラフ図である。
【図１０】図１０は、本発明の実施態様に従うところの、表１１にて製造され記載された微粒子の、ラットにおける生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）オクトレオチド試験における、放出特性を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
ここに、ヒトを含む温血哺乳類における、徐放性微粒子に封入された生物学的活性剤の放出プロファイルを最適化する為の方法が開示される。また、形成後の微粒子を、添加した希釈用組成物で、連続・無菌工程の一環として処理することによる、微粒子からの生物学的活性剤の放出速度（放出率）を変化させる方法をも開示する。
【０００９】
図１に示すように、一つの実施態様は、徐放性微粒子からの活性剤の初期放出速度を最適化する方法１０を含む。この実施態様において、微粒子中の酢酸ロイプロリドの放出プロファイルは、形成したての微粒子が接触させられるところの溶媒の濃度を調整することによって、変更され得る。微粒子の放出プロファイルは、乾燥、加熱、又は水でもどす工程の間、残存溶媒不純物又は凝集問題を取り込み得るところの関連する工程なしに、微粒子が室温で水相にとどまる間に、変更し得る。
【００１０】
徐放性製品において、組成物からの初期放出される薬剤量は重要である。初期投与時に放出される薬剤、又は活性剤の量は、しばしば、初期バースト又は初期放出と呼ばれる。初期バースト又は初期放出の量は、特定の薬剤及びそれらの使用目的を検討し最適化するために重要である。
【００１１】
例えば、酢酸ロイプロリド、いわゆる“ロイプロリド”は、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の既知のアゴニスト類似物である生物学的な活性剤である。ＧｎＲＨは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の生産を促進（刺激）する。血流中に放出されると、これらホルモンは、男性においてはテストステロンを、女性においてはエストロゲンの生産を引き起こす。それ故、前立腺がん（ｐｒｏｓｔｒａｔｅ ｃａｎｃｅｒ）などの疾患において、生産されるテストストロンのレベルをコントールすることは、効果的な治療であることが知られており、ＧｎＲＨ、ＬＨ及びＦＳＨの生産を阻害する活性剤は有益であろう。実際には、生産されるテストストロンのレベルをコントロールすることは、去勢手術の必要性を制限し得る。
【００１２】
治療的適応において、ロイプロリドは下垂体前葉からＬＨ及びＦＳＨを初期に放出する
。しかしながら、連続使用すると、ロイプロリドは下垂体脱感作、そしてホルモン生産テストステロンの発現低下を引き起こす。ロイプロリドは治療で使用されると、初期上昇の後、２乃至４週間の間、血中性ホルモンレベルを抑制する。よって、ロイプロリドが有効となるために、輸送微粒子からの薬剤の非常に高い初期放出速度が望ましい。米国食品医薬品局によれば、より早い去勢を獲得するために、ロイプロリドに対する高い初期放出が求められる。ロイプロリドを用いた化学的去勢は、９５％の患者が２８日以内に５０ｎｇ／ｄＬ（０．５ｎｇ／ｍＬ）以下のテストステロンレベルを保有するもの、と定義される。
【００１３】
一方、別の活性剤であるオクトレオチドは、肢端（先端）肥大症の長期間の治療、並びに、悪性カルチノイド腫瘍、血管作動性腸管ペプチド腫瘍、フラッシング及び下痢の患者に使用されるソフトスタチン誘導体である。血清中のオクトレオチドは成長ホルモン（ＧＨ）、並びにインシュリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）をコントロールする。長期間の徐放性デポ製剤におけるオクトレオチドの使用の一般的な不利益は、高いピークレベルのオクトレオチドが、ある血漿濃度で有毒となり得ることである。より遅い初期バーストまたは放出速度が、この状況においては好ましい。
【００１４】
図１に示すように、ロイプロリド−含有微粒子製造のために連続工程１０が微粒子を製造するために適用される。連続工程１０は一般に分散相１２と連続相１４の混合を含む。分散相１２は、活性剤、ポリマー及び適当な溶媒を含む。連続相は、一般に、水溶液を含む。分散相１２及び連続相１４は、インラインミキサー１６中で混合され、微粒子分散系を形成する。微粒子分散系は、一般に、水溶液中に分散された形成したての微粒子を含み得る。
【００１５】
本出願の目的において、前立腺がんの治療のための徐放性微粒子の形態にあるロイプロリド製剤は、ポリマー状徐放性微粒子から放出される活性剤の一例として使用される。活性剤は小さなポリマー体へのカプセル化又は散在化が望まれている任意の薬剤にすることができることは、本開示の観点から当業者にとって明らかである。さらに、臨床的効果を改善するために放出速度が最適化され得る活性剤の例としては、ペプチド、ケトチフェン、チオリダジン、オランザピン、リスペリドン、オキシブチニン、オクトレオチド、ナルトレキソン、オルニチド、又は、Ｗｏｃ４Ｄ、ベータメゾン（ｂｅｔａｑｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、デキサメタゾン、クロニジン、ベラパミル、又は、薬学的に可能なそれらの塩が挙げられる。特に興味深いのは、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ナファレリン、ヒストレリン、及びブセレリンなどの黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト（ＬＨ−ＲＨアゴニスト）である。また特に興味深いものは、ソマトスタチン類似体であって、例えば、オクトレオチド、ヒト、鮭及びウナギのカルシトニン、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、副甲状腺ホルモン及び関連するペプチド、インターフェロン、エリスロポエチン、ＧＭ−ＳＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、サイモシン、アンチトリプシン及び化学療法薬、局所投与の為の抗生物質及び鎮痛剤、並びに、放出速度の調整が徐放製剤の効果を増加し得る他の薬剤、である。
【００１６】
活性剤を分散相１２に組み込むために、少なくとも１つの溶媒に活性剤を溶解することが通常必要である。活性剤のための溶媒は、薬剤の性質に応じて勿論様々であり得る。活性剤を溶解するための分散相に使用され得る典型的な溶媒としては、但しこれらに限定されないが、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、塩化エチレン、四塩化炭素、クロロホルム、ジエチルエーテル及びメチルエチルエーテルなどの低級アルキルエステル、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、アセトン、酢酸エチル、メチルエチルケトン、酢酸、又はそれらの混合物が挙げられる。加えて、氷酢酸、乳酸等の酸、脂肪酸、又はアクリル酸が、ポリマー中への活性
剤の溶解とカプセル化を改善するのを促進するプロセスで使用される。与えられた系のための好適な溶媒の選択は、本開示を考慮して技術常識の範囲内事項である。
【００１７】
活性剤は、続いて、ポリマーと混合され、分散相１２を形成する。当業者に既知であり、一実施態様において有用である、ポリマーの例は、例えば米国特許第４，８１８，５４２号明細書、米国特許第４，７６７，６２８号明細書、米国特許第３，７７３，９１９号明細書、米国特許第３，７５５，５５８号明細書、米国特許第５，４０７，６０９号明細書に見出され、参照することにより本明細書に組み込まれる。与えられた系における特に好ましいポリマーの選択において、生分解性（例えば放出プロファイル）及び生体適合性といった所望の臨床的特徴を有する生成物を生産する目的のために、多数の因子が考慮される。一旦、ある当業者が、所望の臨床的特徴を提供するポリマー群を選択すると、続いて、該ポリマーは、製造工程を最適化することとなる望ましい特徴が評価される。例えば、ある場合には、微粒子の処理を促進する、薬物搭載量を増進する、分散相からの溶媒の除去を強化する、或いは、分散相から連続相への薬物の移動を抑制するという形で、活性剤と相互に作用するポリマーを選択することが可能である。
【００１８】
好適なポリマーの具体例は、乳酸のホモポリマー又は乳酸とグリコール酸のコポリマー、又は、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、“ＰＬＧＡ”ポリマーである。乳酸残基とグリコール酸残基の比率は様々であり、典型的には２５：７５乃至８５：１５の範囲であり、但し、高いラクチド含量は低い粘性及び高い溶解性につながるため、１０％のグリコリドであっても使用される。好ましいコポリマーは、少なくとも約５０％の乳酸残基を含み、例えば５０：５０、７５：２５、又は８５：１５ポリマーである。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）コポリマーは、多くの供給源から商業的に入手可能であり、そして、従来の合成ルートによって容易に製造される。ベーリンガー インゲルハイム社は、Ｒ２０２Ｈ、ＲＧ５０２、ＲＧ５０２Ｈ、ＲＧ５０３、ＲＧ５０３Ｈ、ＲＧ７５２、ＲＧ７５２Ｈ、ＲＧ７５６及びその他の称号にて好適なポリマーを製造している。Ｒ２０２Ｈ、ＲＧ７５２Ｈ又はＲＧ５０３ＨとのＬＨ−ＲＨ微粒子は、ある実施態様の分散相において使用され得る。与えられた系に対する好適なポリマーの選択は、本開示を考慮して当業者であれば明らかである。
【００１９】
好ましいポリマーの選択における一つの検討事項は、ポリマーの親水性／疎水性である。ポリマーと活性剤の双方が、疎水性又は親水性であり得る。可能であれば、親水性の活性剤と共に使用するために親水性ポリマーを選択すること、そして、疎水性活性剤とともに使用するために疎水性ポリマーを選択することが望ましい。好ましい微粒子において、薬剤とポリマーの親水性カルボキシル基との間のイオン相互作用は、薬物搭載量を増進するとみられている。しかしながら、一般に、親水性薬剤は水に溶解するものの、ポリマーと薬剤の間に親和性がない場合、又は、固化が十分に早くない場合、薬剤搭載量は減少し得る。疎水性ポリマーにおける親水性薬剤の使用もまた可能である。
【００２０】
特定のポリマーの選択において、系の残留溶媒へのポリマーの疎水性／親水性の影響もまた考慮する必要がある。親水性ポリマーは、親水性ペプチドといった親水性薬剤では、少ない残留溶媒を生じることが期待される。ロイプロリド微粒子の場合、薬剤は、分散相の液滴から疎水性溶媒を迅速にそして効率的に排除するのを補助する傾向を有する。加えて、より多量の薬剤搭載量は、より低い残留溶媒濃度と相互に関係がある傾向にあることが見出されている。よって、いくつかの系においては、親水性ポリマー内に親水性薬剤が内包されるとき、より少ない残留溶媒による間接的な利点が存在する。しかしながら、残留溶媒における親水性以外の他の影響因子が存在する場合、この効果は、非ペプチド薬剤に対して一様には適用できない。それにも関わらず、分散相の液滴からの溶媒の排除を増進する活性剤が、付随する薬剤損失なしに、優れた生産物を生産することを、理解すべきである。
【００２１】
別の検討事項は、ポリマーの分子量である。ポリマーの分子量は、放出速度、放出プロファイルなどの生成物の特徴に対して明らかに影響を及ぼすと同時に、微粒子の製造プロセスにも影響を与える。より高分子量のポリマーは、概してより粘性の高い分散相と関連し、大きな粒子をもたらすか、或いは、小さな粒子を得ることの難しさの増加をもたらし、そして、いくつかの例において、残留溶媒の増加をもたらす。一方、より低分子量のポリマーは、ポリマーがより溶解性である傾向のために、概してより遅い固化と関連する。好ましい系において、より多い残留溶媒、より高い薬剤搭載量及び増進された取り込み効率は、より高分子量ポリマーの使用に由来することが見出されている。本発明の工程のひとつの有利点は、優れた、小さい、少ない残留溶媒である微粒子を、高分子量ポリマーとともに形成し、そしてそれゆえに粘性の分散相を形成することとなる、その能力である。勿論、特定の選択はまた、所望の生成物の特徴に依存する。例えば、より高分子量で、体内でのより長い分解時間、そしてより長い薬剤放出持続時間である。
【００２２】
さらに、適用される特定のポリマー濃度は、生成物の形態の観点だけでなく、製造の観点から、系に影響を与える。粘性の分散相は、固化のためのより少ない溶媒を除去する必要があるため、ポリマー濃度の増加は、より多い薬剤搭載量と関連する傾向がある。増加された固化速度は、より高い薬剤保有を引き起こす傾向がある。その上、粘性の分散相は、固化の間に、連続相へのより少ない薬剤拡散をもたらす。いくつかの系において、これはまたより多い残留溶媒をもたらす。好ましい実施態様において、分散相中のポリマー濃度は約５乃至４０％であり、そしてより好ましくは約８乃至約３０％である。
【００２３】
ポリマーのための溶媒は、ポリマーの性質、活性剤、毒性、系中の他の溶媒との相溶性、そしてさらに微粒子が適用される用途などの、多くの因子に応じて適切に選択される。よって、ポリマーの溶解に加えて、溶媒は、液滴を形成するために連続相と混和しないこと、最適な蒸発効率のための高い揮発性、そして望ましくは安全性の理由から不燃性でなければならない。好ましいポリ（乳酸）又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーのための好適な溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、酢酸エチル、置換されたピロリドンなどが挙げられる。場合によっては活性剤のための溶媒は、ポリマーのための溶媒と同じである。一部の薬剤、概して画像解析に使用される放射性無機塩などの診断薬は、有機溶媒に溶解しないか、ほんの少ししか溶解しない。これらの例において、微細なサブ−サブミクロンサイズの粉体が、ポリマー溶液に直接懸濁して、微粒子を形成する。薬物送達において、これを用いることはまれではあるが、診断薬では役立つことが証明されている。本発明のプロセスに従う他の有用な溶媒の選択は、本開示を考慮して、当技術範囲内にある。
【００２４】
この実施態様において、ロイプロリド含有ポリ（乳酸）又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）微粒子は、Ｒ２０２Ｈポリマーに、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸とともにロイプロリド活性剤を溶解して、分散相１２を形成することにより、製造される。
分散相は、実に、均質な溶液である。或いは、それぞれ個々の溶媒中にポリマーと活性剤の別々の溶液を準備し、そして続いて混合して分散相１２を形成する。場合によっては、活性剤及び／又はポリマーの性質の理由から、分散相１２は、エマルションとして形成せざるを得ない。例えば、所定のタンパク質性の薬剤が好適な活性剤の溶媒中に溶解された場合、得られた溶液は、特定のポリマー溶媒中のポリマー溶液とは、完全に混和しない。薬剤とポリマーが比較的均一に散在しているところの、比較的均質である分散相１２を提供するために、薬剤及び薬剤溶媒は、ポリマー及びポリマー溶媒と乳化し、分散相エマルションを形成し得る。分散相１２の連続相１４への導入において、水−油−水、又はＷ／Ｏ／Ｗエマルションが形成され得る。さらに別の系において、分散相１２は、ポリマー溶液中の活性剤の直接的な懸濁液の形成によって製造される。
【００２５】
下記に記載される本発明のプロセスに応じて、連続相１４中に分散された分散相１２の液滴又は内包物を有する微粒子分散系を形成するために、分散相１２は連続相１４と混合され得る。ここで使用する用語“分散された（ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ）”とは、広義において、連続相中に散在する分散相の不連続部位を意味するものと意図される。上記内包物は、概して、通常球状の液滴として生じるが、場合によっては、特定の乳化条件に応じて、不規則な内包物と成り得る。分散相１２が液滴又は内包物を形成するところの任意の適当な媒体が、特に望ましいとされる分散相１２溶媒のための最大溶媒シンクを提供するものと共に、連続相１４として使用され得る。
【００２６】
しばしば、連続相１４は、乳化工程を変更させ影響を与えるところの界面活性剤、安定剤、塩又はその他の添加剤をも含む。典型的な界面活性剤は、ドデシルスルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、スパン、ポリソルベート８０、トウィーン８０、プルロニクスなどが挙げられる。特定の安定剤としては、タルク、ＰＶＡ及びコロイダル水酸化マグネシウムが挙げられる。粘度ブースターとしては、ポリアクリルアミド、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロースなどが挙げられる。緩衝塩は薬剤安定剤として使用され、一般的な塩でさえも活性剤の連続相１４への移動の防止を促進するために使用される。連続相１４の塩の飽和に関連する一つの問題は、ＰＶＡ及びその他の安定剤が、連続相から固体物として沈殿する傾向を有し得ることである。そのような場合、微粒子安定剤が使用され得る。塩化ナトリウムや硫酸ナトリウムなどの適当な塩並びに他の添加剤は、本開示を考慮すると当業者に明白である。
【００２７】
ひとつの実施態様において、連続相１４は、１００−５０％の水を含む。水性の連続相１４は、安定剤を含み得る。好ましい安定剤は、約０．１％乃至約５．０％量のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である。より具体的には、ＰＶＡは約０．３５％量で存在し得る。連続相１４への使用のための適当な他の安定剤は、本開示を考慮すると、当業者に明白である。
【００２８】
特定のポリマー、溶媒及び連続相の選択は、無論、活性剤並びに所望の生成物の特徴に応じて様々である。一旦、臨床的適用、放出プロファイルなどの所望の生成物の特徴が確立されたとしても、それでもなお、製造プロセスを促進するためのポリマー、溶媒及び連続相の選択には多少の自由度が残されている。
【００２９】
分散相１２及び連続相１４が混合されるとすぐに、形成したての微粒子が、ミキサー１６から第一容器２０へ連続的に移動させられ得る。この実施態様において、微粒子は一般に十分に固体且つ濾過可能であり、それ故、米国特許第６，２７０，８０２号明細書及び米国特許第６，３６１，７９８号明細書に開示されるように、中空糸フィルタを使用する微粒子の連続処理に適する。この方法は、分散相と連続相の混合物が、別々の微粒子をすぐに形成しないような、一般的な微粒子形成方法とは区別される。
【００３０】
微粒子がさらなる形成手順を必要とする方法とは対象的に、この実施態様の微粒子は約２０秒以内に、より好ましくは約１０秒未満で、そしてより特に好ましくは約５秒未満で固化する。ロイプロリド−ポリマーの実施態様において、微粒子は、約３秒未満で固化する。本実施態様において、微粒子の固化は連続相への添加時に事実上一瞬であるにしても、形成された微粒子は、それにもかかわらず、更なる残留溶媒を連続相へ引き渡すことに影響を与えやすい。
【００３１】
薬剤搭載量は、好ましいロイプロリド／ポリマー微粒子の場合、総固形物をベースとして約１２％を目標とし、１０乃至２１％の範囲である。実際には、約９乃至１７、約１７％の薬剤搭載量が得られる。勿論、薬剤の性質、所望の放出プロファイル、ポリマーの性質、そして勿論処理方法全てが、所望のそして実際の薬剤搭載量に影響する。典型的なケ
ースにおいて、薬剤とポリマーの混合量をベースとして約５％乃至２０％の薬剤搭載量が望ましく、本発明のプロセスによって達成可能なものである。典型的なカプセル化効率は約７５％である。
【００３２】
有利なことに、一旦所望の薬剤搭載量を得ると、供給量、温度などのパラメーターが算出され、製造レベルのバッチ数を含むより大きなバッチ数のスケールアップは、単により長いプロセスを実施すれば良いだけのこととなる。所望の特徴を有する微粒子を大量に生産するのに、さらなる供給チューブ（管）、乳化剤、羽根車などのものを必要としない。加えて、本発明の連続プロセスの間に製造される微粒子は、プロセスの間にいつ製造されたかにかかわらず、サイズ分布、薬剤搭載量などが並外れて均一である。
【００３３】
ひとつの実施態様において、上述したように、微粒子形成の一般的プロセスは、微粒子の溶媒接触を変化させることによって、微粒子バッチの放出特性又は放出プロファイルが変化するように修正され得ることが見出されている。形成後のより低いレベルの溶媒接触は、形成したての微粒子に対して希釈組成物１８を加えることによって達成される。希釈組成物１８は、水又はポリビニルアルコール溶液であり得る。微粒子形成後の一定量の希釈組成物１８の添加は、驚くべきことに、形成したての微粒子の放出速度を変化させることが見出されている。
【００３４】
図１に示すように、微粒子が形成され、連続相に分散された後、希釈組成物１８が添加され得る。図１中、１８ａで示される希釈組成物は、第一容器２０に移送される時に、微粒子分散系に添加され得る。第一容器２０に移送される際の希釈組成物の微粒子分散系への添加は、第一容器２０に到達し、中空糸フィルタ２２を用いて濾過される前に、微粒子分散系と希釈組成物を完全に混合させることを可能にする。
【００３５】
代わりに、１８ｂに示すように、希釈組成物１８は、微粒子分散系の前に、又は、分散系と同時に、第一容器２０に移送され得る。一旦、第一容器に入ると、微粒子と希釈組成物の混合物は、連続的に撹拌され得る。
【００３６】
微粒子分散系に添加される希釈組成物１８の量は、哺乳類に注射するために、最終製剤の放出プロファイルを調整するのに十分であるべきである。希釈組成物１８は、微粒子中にカプセル化された活性剤の溶解性、微粒子の粒子サイズ、或いは各バッチにおける活性剤のカプセル化効率を逆向きに或いは大幅に変更すべきではない。添加される希釈組成物１８の所定量に対応した、所定の溶媒接触レベルは、所望の放出速度に対して計算される。その結果、特定の放出速度が希釈組成物１８の添加によって得られる。
【００３７】
ひとつの実施態様において、所望の放出プロファイルを備えるロイプロリド微粒子を得るために、連続相中の溶媒の規定濃度が５０００ｐｐｍ未満になるまで、希釈組成物１８を加える。規定量及び時間の希釈組成物１８の添加によって、放出プロファイルは、予想通りのそして制御可能な方法で、連続プロセスの一環として調整される。
【００３８】
形成された微粒子に対して添加する希釈組成物量は、連続相１４の元の体積の少なくとも約５０％であり得る。ひとつの実施態様において、水溶液中で溶媒への接触の減少は、形成されたロイプロリド微粒子の放出速度を増加させ得る。異なる活性剤の放出速度の制御は、しかしながら、所望の放出プロファイルを獲得するために異なるステップを必要とし得る。本プロセスは、異なる放出プロファイルを備える異なる活性剤の使用に適合するように、容易に調節可能である。
【００３９】
ミキサー１６からの微粒子分散系と希釈組成物１８を、第一容器２０で混合し、微粒子／希釈組成物混合物を、中空糸フィルタ２２にて濾過する。廃棄物を、ライン２２ａを介
して、分離された容器に廃棄すると同時に、微粒子を第一容器２０に戻す。微粒子が容器２０に戻されると、それらは新たな微粒子／希釈組成物混合物と連続的に混合され、フィルタを通して循環させられる。
【００４０】
必須組成物及び所定時間で処理された後、所望の放出速度を獲得した微粒子を、その後、幾らか残存する水溶液を除去するために濾過し、そして、プロセス副生成物を除去するために水で洗浄し得る。微粒子が形成されると、患者投与のためにそれらを準備するところの充填容器に対して、微粒子を準備するためになされ得る、多くの最終的な調整があることは、当業者に既に明らかである。
【００４１】
本発明による方法は、添付の図面を参照すると共に、以下の限定されない実施例によって例示される。
【実施例】
【００４２】
以下の実施例は、ここに主張する方法を実施し評価する方法を当業者に対して詳細な記載と共に説明するものであるが、発明者が自身の発明とみなしているところの範囲を制限することを意図するものではない。特に指定の無い限り、部は質量で、温度は℃である。
【００４３】
分子量は、重量平均分子量（Ｍｗ）又は数平均分子量（Ｍｎ）で示され、そして、ポリスチレン（ＰＣ）を分子量標準に用いたゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を用いて測定される。実施例１は、本方法の一態様を示す概略図を提供する。ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）、Ｒ２０２Ｈは、ベーリンガーインゲルハイム社から市販されている。
【００４４】
実施例１
酢酸ロイプロリド微粒子を、下記表１に記載されるように製造した。分散相及び連続相を混合し、約７Ｌの微粒子分散系を形成することにより、微粒子を形成した。概して、分散相は表１中に記載されたパラメーターによれば、酢酸ロイプロリド（Ｌ．Ａ．）、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）（Ｒ２０２Ｈ）及び溶媒 塩化クロリド（ＤＣＭ）、メタノール（ＭｅＯＨ）及び氷酢酸（Ａ．Ａｃｉｄ）の溶液であリ得る。Ｒ２０２Ｈは、温血動物及びヒトにおける生体内（ｉｎ−ｖｉｖｏ）研究に基づき、３乃至４ヶ月間、ロイプロリドの徐放性を提供する。連続相は、０．００３５ｇ／ｇポリビニルアルコール溶液を用いて製造した。
【００４５】
連続相及び分散相をインライン シルバーソン（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ）ミキサーに、それぞれ流速２Ｌ／分及び３８ｇ／分にて同時に添加した。ミキサー中の混合速度は７０００ｒｐｍであり、微粒子形成期間は３．５分であった。この微粒子分散系を、約４０Ｌの希釈相を含む容器に連続的に供給した。
【００４６】
希釈相もまた０．００３５ｇ／ｇポリビニルアルコール水溶液を含み得、但し希釈相は表１に示す溶媒が混合されていた。希釈相中の塩化メチレン量は、各バッチで様々であり、具体的には、微粒子バッチ：ＧＧ０９０３０３に対して約５０００ｐｐｍから、微粒子バッチ：ＧＧ０９１００３に対して約８５００ｐｐｍであった。反応容器において、希釈相入りの溶媒との溶媒接触に関する対応時間は、全ての４つ微粒子バッチに対して１００分間で一定であった。
【００４７】
溶媒接触後、希釈相に懸濁している微粒子を溶媒除去容器（ＳＲＶ）に移送した。全ての微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化にて周囲水洗浄、８０ＳＬＰＭのエアスウィ
ープ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変化にて温水洗浄
（３９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭでエアスウィープしながら、３０分間，１．５ 体積交換にて冷却した。洗浄プロセスの間、ヘッドスペース溶媒除去を助けるた
めにエアスウィープを導入した。微粒子をメンブレンフィルタで濾過し、真空下で凍結乾燥した。
【００４８】
表１は、活性剤、ポリマー及び分散相の製造に用いた溶媒の濃度、並びに、希釈相の調製に用いた各溶媒の濃度及び実際の量を示す。
【表１】
【００４９】
表２は、粒子サイズ、促進放出条件下での薬剤放出、並びに、生理学的な条件下での薬剤放出などの、表１の製造パラメーターにて製造した微粒子の特徴を示す。微粒子の薬剤搭載量は、微粒子中の活性剤の割合として記述される。これは、溶媒（例えばジメチルスルホキシド）中に微粒子を溶解し、微粒子溶液にホスフェートバッファーを添加することによって決定された。濾過された溶液は、その後、キャリブレーション基準を対照としてＨＰＬＣによって分析された。
【００５０】
粒子サイズ分布（Ｐａｒｔ．Ｓｉｚｅ Ｄｉｓｔ．）は、界面活性剤又は希釈剤を含有する水中で、微粒子懸濁液に関して決定された。これは、レーザー光散乱で決定された。粒子サイズ分布を体積分布（ＣＶＦ）で示した。
【００５１】
生理学的条件下（Ｄ．Ｒ．（Ｐｈｙｓ．））でのロイプロリドの放出速度を決定するために、薬剤放出速度の算出をリン酸バッファー溶液（ＰＢＳ）中で実施した。表１に示すように処方された微粒子を、温度３７℃で、スクリューキャップの付いたガラスチューブ中、ＰＢＳに懸濁させた。少なくとも８０％の放出媒体が、標本点において、新たな媒体と置換された。放出媒体についてＨＰＬＣを用いて薬剤濃度の測定を行い、放出率を算出した。
【００５２】
放出条件を適切に操作し、生体内で獲得される放出速度、或いはＰＢＳへの放出による放出速度を促進させた。ロイプロリド微粒子に対して、使用される放出媒体は、０．１Ｍクエン酸リン酸塩バッファーであり、温度は５５℃であった。１７０回転／分にて撹拌された、撹拌された水バッチ中で放出を実施した。試験品について各時間ポイントで放出された薬剤の測定を行い、促進条件下（Ｄ．Ｒ．（Ａｃｃ．））の放出速度を見出した。
【表２】
【００５３】
上述の製造ステップ及び表１に従い形成された微粒子において、同じような粒子サイズ分布及び薬剤搭載量がみられた。しかしながら塩化メチレン溶媒の最も高い接触レベルに接触させられた微粒子バッチは、若干減少した薬剤搭載量を示した。
【００５４】
より意味があることは、ロイプロリドの薬剤放出速度は、促進薬剤放出試験（５５℃クエン酸リン酸塩バッファー）並びに生理学的条件（リン酸塩バッファー溶液、ｐＨ７．４、３７℃）下の薬剤放出の双方とも、バッチによって様々であった。促進試験条件下での薬剤放出は、バッチによって放出速度の違いに関して素早い比較を提供した。生理学的条件下での薬剤放出を、臨床適用における徐放性製剤の実際の持続期間をシミュレートするために、最大６０日以上のより長い試験期間の間、実施した。最も高いレベルの溶媒（８５００ｐｐｍ）に接触したバッチＧＧ０９１００３の微粒子は、一貫して最も遅い放出速度を有していた。とくに、放出速度の違いは、初期の時点の間でより大きなものであった。一般に、酢酸ロイプロリドで形成され、より高い溶媒濃度に接触させられた微粒子バッチは、減少した放出速度を示した。よって、ロイプロリドを含有する微粒子の放出速度を増加させるためには、微粒子形成後に、溶媒接触を減少させることが望ましい。
【００５５】
実施例２
酢酸ロイプロリド微粒子を、下記表３に記載される通りに製造した。微粒子分散相バッチを、酢酸ロイプロリド（Ｌ．Ａ．）、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸からなる一貫した組成物を用いて調製した。２つの微粒子バッチ、０Ｃ３５４２及び０Ｈ８３４０は、１４ｋＤａの分子量を有するＲ２０２Ｈのポリマーロットを用いて、懸濁液中で、それぞれ０．７ｋｇ、０．４ｋｇの固体微粒子をもって製造した。３つの微粒子バッチ、０Ｄ４０２２、０Ｅ５１０３、及び０Ｓ１７２３を、１８ｋＤａの分子量を有するＲ２０２Ｈのポリマーロットを用いて、懸濁液中で、それぞれ０．１ｋｇ、０．４ｋｇ、０．４ｋｇをの固体微粒子をもって製造した。各バッチを、同様の連続相処方及び同様の製造パラメーターを用いて製造した。但し、微粒子形成時間は、バッチサイズを変化させることによって、即ち懸濁液中の微粒子が０．４ｋｇと対照的に０．７ｋｇ、並びに、それぞれのバッチの懸濁液を反応容器への分散相の流速を変化させることによって連続相を含む溶媒と接触させる時間を変化させることによって、様々であった。
【００５６】
具体的には、微粒子は、それぞれの分散相を、０．３５％のポリビニルアルコール水溶液の連続相に添加することによる水中油型プロセスによって形成した。インラインシルバーソンミキサーの混合速度は７０００ｒｐｍであった。微粒子が形成するまで、分散系の連続相の溶媒濃度は、およそ塩化メチレン ７２００ｐｐｍとメタノール １６００ｐｐｍであった。
【００５７】
インラインミキサー中で形成後に微粒子バッチを連続的に溶媒除去容器に移した。微粒子形成時間は、０．４Ｋｇバッチで約４０分であり、一方、微粒子形成時間は、０．７ｋｇバッチで約７０分であった。微粒子形成の２０分後、分散相を連続相と、所定の流速で混合し、溶媒除去容器は４０Ｌの懸濁液量に達した。溶媒除去容器中の懸濁液を、その後、中空糸メンブレンフィルタ（閉鎖系）を通して再循環させ、溶媒除去容器への懸濁液供給と同じ速度（２Ｌ／分）で透過物を除去した。よって連続相中の溶媒レベルは、０．４ｋｇバッチで４０分間、０．７ｋｇバッチで７０分間で一定に維持された。
【００５８】
微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化で周囲水洗浄、８０ＳＬＰＭのエアスウィー
プ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変化で温水洗浄（３
９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、３０分間、１．５ 体積交換で冷却した。洗浄プロセスの間、ヘッドスペース溶媒除去を助けるためにエ
アスウィープを導入した。
【表３】
【００５９】
表３の形成されたバッチの微粒子特性を下記表４に示す。
【表４】
【００６０】
微粒子サイズはバッチに関して同程度であった。実施例１に関して上述に記載されたように、薬剤放出特性を生理学的条件及び促進条件にて試験した。結果は、より長い溶媒接触期間、即ち、溶媒接触を増加させた微粒子ＯＣ３５４２及びＯＤ４０２２に関して減少した初期放出を示した。バッチＯＣ３５４２から、すなわち、低分子量ポリマー（Ｍｗ＝１４ｋＤａ）から製造された微粒子は、生理学的条件下及び促進条件下のいずれにおいても、殆どの区間にわたって、最も遅い放出速度を有した。よって、高い溶媒接触において、ポリマーの分子量が小さくなると、ロイプロリドの初期放出が低くなった。
【００６１】
表３及び表４に従って製造された微粒子を、ラットの体重１ｋｇあたり酢酸ロイプロリド９ｍｇの懸濁液として注射した。図２は、バッチ０Ｈ８３４０（４０分溶媒接触、１４ｋＤａ）とバッチ０Ｃ３５４２（７０分溶媒接触、１４ｋＤａ）の同様の投与量を受けたラットにおける、血清ロイプロリドを比較する。両物質とも、分子量１４ｋＤａを有するポリマーで製造されているものの、０Ｃ３５４２は、０．７ｋｇのバッチサイズで、７０分間の溶媒接触にて製造され、一方、０Ｈ８３４０は０．４ｋｇのバッチサイズで４０分間の溶媒接触で製造されている。この研究は、０Ｃ３５４２が微粒子からのより遅い初期の薬剤放出のために、血清中で、始めはより低い薬剤レベルを生ずることを示している。約三週間後の第二局面は同程度の薬剤レベルを生じさせた。これは、より長い溶媒接触を受け、より大きなバッチサイズを有するバッチ０Ｃ３５４２からの微粒子のより低い初期放出を確認するものである。
【００６２】
図３は、バッチ０Ｄ４０２２（７０分溶媒接触、１８ｋＤａ）とバッチ０Ｅ５１０３（４０分溶媒接触、１８ｋＤａ）の同様の投与量を受けたラットにおける血清ロイプロリドを比較する。両物質とも、分子量１８ｋＤａを有するポリマーで製造されているものの、０Ｄ４０２２は０．７ｋｇのバッチサイズで７０分間の溶媒接触にて製造され、一方、０Ｅ５１０３は０．４ｋｇのバッチサイズで４０分間の溶媒接触で製造されている。再度、より長い溶媒接触期間を有するバッチである０Ｄ４０２２は、血清中で始めはより少ない薬剤レベルを生じ、接触の初期段階でより遅い放出を確認した。
【００６３】
実施例３
ロイプロリド微粒子を、固有粘度０．２０６ｄｌ／ｇ、分子量１８ｋＤａを有するポリマーで製造した。微粒子バッチを、１０ｇスケールにて、連続処理手順を用いて製造した。分散相組成物、連続相組成物、分散相流速、連続相流速、及び１分あたりのミキサー回転数などの製造パラメーターを、全てのバッチで等しくなるように保った。
【００６４】
具体的には、水中油型プロセスを用いて、それぞれの分散相と連続相を混合することにより、微粒子を形成した。連続相は、０．３５の％ポリビニルアルコール水溶液から構成されていた。インラインシルバーソンミキサーの混合速度は７０００ｒｐｍであった。
【００６５】
微粒子分散系をミキサーから溶媒除去容器に移送した。各バッチにおいて、希釈組成物量を溶媒除去容器に添加した。各バッチにおける希釈組成物は水であった。分散系をインラインミキサーから溶媒除去容器へ移動させるのと同時に、希釈組成物を溶媒除去容器に添加した。具体的には、バッチＧＣ０７１３０４を増加される希釈組成物なしに製造し、バッチＧＣ０６０４０４は連続相の体積の５０％に相当する希釈組成物にて製造した。バッチＧＣ０６０４０４を、シルバーソンミキサーから、約２Ｋｇ／分の速度で移送し、懸濁液を室温水（２２乃至２５℃）で、約１ｋｇ／分の同時フローにて、希釈した。
【００６６】
バッチＧＣ０６０３０４に関して添加された希釈組成物は連続相の体積の約１００に％相当し、ここでバッチを２ｋｇ／分の速度でミキサーから移送し、希釈組成物を同時に２ｋｇ／分の速度で添加した。バッチＧＣ０６１１０４に関して２ｋｇ／分の懸濁液フローを使用しながら希釈組成物を４ｋｇ／分の速度で添加し、懸濁液の連続相の体積を約２００％増加させた。混合速度は、全ての試験において、７０００ｒｐｍで一定とした。
【００６７】
最後に、微粒子バッチを、４０分間、２ 体積変化で周囲水洗浄にて洗浄、８０ＳＬＰ
Ｍのエアスウィープ；８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、１００分間、５ 体積変
化で温水洗浄（３９℃）を用いて洗浄し；そして８０ＳＬＰＭのエアスウィープしながら、３０分間、１．５ 体積交換で冷却した。洗浄工程の間、ヘッドスペース溶媒除去を助
けるためにエアスウィープを導入した。微粒子をメンブレンフィルタで濾過し、真空下で凍結乾燥した。
【表５】
【００６８】
表５で製造した微粒子の特性を表６に示す。
【表６】
【００６９】
実施例１に関して上述されるように、薬剤放出粗特性を生理学的条件下並びに促進条件下で試験した。異なる組成物から製造した微粒子の薬剤カプセル化及び粒子サイズ特性は
同程度であった。ロイプロリドフリーベースのカプセル化効率は、８０乃至８２％の範囲であった。結果、薬剤カプセル化は、連続相部分に添加する量を０から２００％の範囲に増加させた希釈組成物を有する全てのバッチにおいて類似していることを示した。平均粒子サイズ（５０％体積分布下）は、２５乃至２９μｍにおよび、９０％体積分布では４７乃至５０μｍにおよんだ。一般に、薬剤カプセル化と粒子サイズ分布は、バッチ間で類似している。
【００７０】
生理学的条件下で測定された薬剤放出速度をリアルタイム薬剤放出速度（長期間）の指標として測定した。希釈組成物が増加し、そして連続相がさらに希釈されるにつれて、結果はより早い放出速度を示した。促進放出速度試験条件も連続相の希釈組成物が増加するにつれてわずかに高い初期放出速度を示した。例えば、連続相部分に、最も高い希釈組成物量と、最も低い溶媒濃度を有するバッチＧＣ０６１１０４は、全ての時間間隔にて、両放出条件下で最も早い放出を示した。バッチＧＣ０７１３０４は希釈組成物の増加をしていない。最も高い溶媒濃度を有する試料として、この試料は３日及びそれ以下の時間間隔に関して、生理学的条件下で、最も遅い放出速度を示した。従って微粒子形成後の溶媒接触の減少は、微粒子からのロイプロリドの放出速度を増加させる。
【００７１】
図４は、表５及び６に製造され記載されたバッチＧＣ０７１３０４、ＧＣ０６０３０４、及びＧＣ０６１１０４を含む、３７℃のリン酸バッファー溶液中のロイプロリド微粒子の放出特性を示すグラフ図である。図４は、異なる希釈組成物レベルにてバッチが製造されたとき、ＰＢＳ中で３７℃で放出されたロイプロリドの割合を表す３つのＳ−型カーブを示す。全３つのカーブの間に狭い分離が存在するが、図４は、２００％の最も多い希釈組成物の添加に対応するバッチＧＣ０６１１０４が、特に早い時間段階で、最も高いロイプロリド放出速度（放出率）を有することを示す。
【００７２】
図６は、表５及び６に製造され記載されたバッチＧＣ０７１３０４、ＧＣ０６０３０４、及びＧＣ０６１１０４を含む、５５℃のクエン酸リン酸バッファー溶液中の、促進放出条件下での酢酸ロイプロリド微粒子の放出特性を示すグラフ図である。微粒子バッチは促進放出試験条件によるロイプロリドの放出速度（放出率）を示すようにプロットされ、１時間ごとの時間間隔に対して記録した。最初のデータポイント（１時間及び５時間）に関して、バッチＧＣ０６１１０４がわずかに高い放出を有することを示した。
【００７３】
実施例４
微粒子バッチをロイプロリド及び固有粘度０．１５７ｄＬ／ｇ、分子量１１．５ｋＤａを有するＲ２０２Ｈを用いて製造した。バッチを、約１０ｇスケールで製造した。
【００７４】
表７はバッチの製造パラメーターを比較する。製造パラメーターは、添加した希釈組成物量を除いて、全てのバッチで類似している。
【表７】
【００７５】
表８は、０．１５７ＩＶポリマーを用い希釈組成物量を変化させ、表７に示すように製造された、微粒子バッチの特性を比べる。
【表８】
【００７６】
希釈組成物の連続相への添加なしに製造された微粒子は、比較的より低い放出速度を有
する。より低分子量のポリマーは、より高分子量のポリマーで製造された微粒子に比べて、溶媒接触並びに微粒子中の薬剤含量に対してより敏感である。粒子サイズ分布は３つのバッチに関して同程度であり、変化の度合は２３乃至２６μｍの範囲の平均粒子径（５０％体積分布下）と小さい。希釈組成物を含まないバッチＧＣ０７１４０４は、他の２つのバッチのものと比べて、より遅い初期放出を示した。早期放出におけるこの違いは、促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）放出にも反映される。
【００７７】
図５は０．１５７の固有粘度を有するポリマーで形成された微粒子に関するリン酸バッファー溶液中の薬剤放出速度（放出率）を比較する。０．１５７ＩＶポリマーで形成された微粒子は、希釈組成物を含まないバッチにおいて、より遅い初期放出を示した。１００及び２００％の希釈組成物添加のバッチに関して、０．１５７ＩＶポリマー微粒子はより高い放出速度を示した。希釈組成物の添加は、形成したての微粒子に対する溶媒接触レベルを最小限に抑え、低ＩＶポリマーに関する放出速度を増加させる。
【００７８】
図７は、表７に示す希釈組成物の様々な量を有する３つの試料のグラフ図であって、促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）条件下での１時間に対してプロットした放出された酢酸ロイプロリド割合のグラフ図である。増加させた希釈組成物を有するバッチは、生理学的条件下で最初の２週間、促進放出試験条件下で最初の５時間、より高い放出速度を有した。
【００７９】
実施例５
実施例５は、連続相への希釈組成物の添加／無添加での大規模微粒子バッチを詳述する。薬物動態（ＰＫ）及び有効性データ、そして３つのロイプロリド微粒子バッチ（０Ｅ５１０３、０Ｂ６３１５及び０Ａ０３０７）に関して、約０．２１ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＲ２０２Ｈポリマーを用いて製造した。バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７を、薬物動態及び有効性を目的として、ヒトへの２２．５ｍｇ投与量で試験した。薬物動態（ＰＫ）群の患者は血中（血清）ロイプロリドレベルとテストステロン抑制に関してモニターし、残りの患者を有効性（テストステロン抑制）のみモニターした。ロイプロリドを用いる化学的去勢を示すためには、９５％の患者が２８日間以内で５０ｎｇ／ｄＬ（０．５ｎｇ／ｍＬ）以下のテストステロンレベルを示す必要がある。
【００８０】
微粒子バッチ０Ｅ５１０３を、０．２０６ＩＶ（固有粘度）と分子量１８ｋＤａを有するＲ２０２Ｈを用い、希釈組成物の添加や希釈なしに製造した。このバッチの塩化メチレン接触は約７２００ｐｐｍであり、接触期間は約４０分間であった。微粒子バッチ０Ｂ６３１５を、０．２０６ＩＶ（固有粘度）と分子量約１８ｋＤａを有するポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）で製造した。連続相が溶媒除去容器にある間に、希釈組成物を連続相フローに対して水１５０％の添加により製造した。
【００８１】
微粒子バッチ０Ａ０３０７をバッチ０Ｂ６３１５と同様のＩＶ（固有粘度）と分子量を有するポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）を用いて製造した。連続相及び分散相エマルションがインラインミキサーを通って溶媒除去容器へ供給される間に、連続相フローに対して２００％の水を添加することにより希釈組成物を製造した。塩化メチレン溶媒レベルは、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）をもとにして、連続相中で約１５００ｐｐｍであった。表９は製造パラメーターを比較し、表１０は表９で製造した微粒子の特性を比較する。
【００８２】
特に、０Ａ０３０７に関するバッチサイズは約１Ｋｇスケールであり、反応容器中の微粒子形成時間は１００分間であった。バッチ０Ｅ５１０３は０．４ｋｇスケールのバッチサイズを有し、微粒子形成時間は４０分間であった。分散相に関する処方は３つのバッチに関して同様であり、０Ｅ５１０３バッチはわずかに増加した活性剤及びポリマー濃度と溶媒（メタノール）及び酢酸濃度が減少していた。
【表９】
【表１０】
【００８３】
促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）放出速度は、増加された希釈組成物が添加され、そしてそれ故、溶媒接触が減少した０Ｂ６３１５及び０Ａ０３０７が、希釈組成物が添加されていない０Ｅ５１０３と比較して、より高い初期放出を備える微粒子を製造したことを示した。図８は、バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７に関して、１ｋｇあたり２２．５ｍｇのロイプロリド投与量を与えたラットにおける、２週間の血清ロイプロリド濃度を比較する。もっとも低い溶媒接触であるバッチ０Ａ０３０７は、０Ｅ５１０３に比べて、より高い早期放出を有し、血清中でより高いロイプロリド濃度となった。
【００８４】
図９は、表９に従って製造したロイプロリド微粒子を投与したヒトにおける、血清ロイプロリド濃度レベル（ｎｇ／ｍｌ）のグラフ図である。微粒子バッチ０Ｅ５１０３及び０Ａ０３０７は表９に製造され記載された。表１０はヒトの血中（血清）ロイプロリド濃度の臨床データを示す。この試料の結果は、希釈組成物（０Ａ０３０７と）低ＤＣＭ接触である処方が、より早い放出の為に、最初の一ヶ月間、血中でより高いロイプロリドレベルを有することが示されている。このバッチは、ヒトの組織中において、ＧｎＲＨアゴニストとしてより効果的に作用し、テストステロンレベルの長期間の減少を獲得する。同じ投与量で０Ａ０３０７を投与された患者は、血液中のより低いロイプロリドレベルを有し、
薬剤は試験のより遅い段階（一ヶ月後）の間、より早い速度で放出された。
【００８５】
バッチ０Ｅ５１０３と０Ａ０３０７を比較した臨床試験を実施し、微粒子形成後に添加した希釈組成物の様々なレベルに対して、ロイプロリド微粒子投与後の患者のテストステロンレベルを比較した。理想的には９５％の患者が２８日間で５０ｎｇ／ｄＬより低いテストステロンレベルを獲得し維持することが望ましい。表１１は、２つのロイプロリド微粒子バッチの臨床試験結果を詳述する。
【表１１】
【００８６】
バッチ０Ｅ５１０３からの遅い初期放出によって、７９％の患者のみが２８日までに所望のレベルを獲得した。一方、２００％の希釈組成物を有するバッチ０Ａ０３０７を投与された患者は、２８日までに集団の９８％が所望のレベルを獲得した。この結果、前立腺がんなどの疾病にあり、より高いテストステロンレベルのために不快症状及び痛みを伴う患者をより効果的に治療可能であり、ロイプロリドのより高い初期放出速度を有する徐放性薬剤の投与によって、より早くかれらの痛みを減じることが可能であり
【００８７】
実施例６
実施例６に関するバッチを、固有粘度０．１８３ＩＶを有するＲ２０２Ｈを用いて約１０ｇスケールで製造した。表１２はバッチに関する製造パラメーターを比較する。分散相組成物及び連続相組成物は全てのバッチに関して同じとし、目的とする薬剤搭載量を全てのバッチに関して１６．５％Ｌ．Ａ．とした。連続相及び分散相に関する流速を同じ又は同程度とした。
【表１２】
【００８８】
表１３は、微粒子バッチの特性を比較する。
【表１３】
【００８９】
微粒子中の薬剤搭載量はバッチに関して同程度であった。粒子サイズは、バッチ間で、
小さく、典型的であり、変化を示した。平均粒子サイズ（５０％体積分布下）は２２乃至２８μｍに及び、９０％体積分布は４０乃至４６μｍに及んだ。一般に粒子サイズはバッチ間で大きな違いを示さず、明確な傾向はなかった。
【００９０】
ＰＢＳ中、３７℃での薬剤放出は３ヶ月を超える薬剤放出が期待される。最少１ヶ月の初期放出をＰＢＳ中で追跡した。希釈組成物を含まないバッチ（ＧＣ０６１４０４）は、希釈組成物を用いて製造したバッチと比較してより低い初期放出を示した。５０，１００及び２００％の希釈組成物を有するバッチは、同程度のより早い放出速度を示した。
【００９１】
促進放出法もまた、希釈組成物で製造したバッチに関して、わずかにより高い初期放出（１時間及び５時間）を示した。様々な希釈物で製造されたバッチ間で、放出に関する違いはない。希釈物による初期放出（１及び５時間）の増加は５０％希釈で獲得した。さらなる希釈は目立つほど大きくは初期放出を改善しなかった。
【００９２】
実施例７
３つの微粒子バッチを、１００，２００及び３００％希釈組成物で、固有粘度０．２０６ＩＶのＲ２０２Ｈを用いて製造した。ＧＣ０７１２０４、ＧＣ０９０９０４、及びＧＣ０９１００４に関する製造パラメーターを表１４に示す。製造パラメーターは、意図的に変化させた希釈組成物を除いて、これらバッチに関して同様のものであった。
【表１４】
【００９３】
表１４で製造したバッチの特性を下記表１５に示す。最終微粒子は７１乃至７５％のカプセル化効率を有し、薬剤搭載量はバッチに関して同程度であった。１００及び２００％
希釈のバッチは同程度の粒子サイズを示した。わずかに早い放出速度（又は同程度の放出速度）が、より多い希釈物で製造したバッチに関して、より早い時点の間、ＰＢＳ中で観測された。促進放出が同程度の初期放出を示した。
【表１５】
【００９４】
実施例８
３つの微粒子バッチを、１００、２００及び３００％希釈組成物にて、０．１５７ＩＶ固有粘度を有するＲ２０２Ｈを用い、そしてＬ．Ａ．目的投与量１９％にて製造した。製造パラメーターを表１６に示す。製造パラメーターは、意図的に変化させた希釈組成物以外は、バッチに関して同程度であった。
【表１６】
【００９５】
表１７は上記に製造された微粒子バッチの特性を示す。最終バッチは６９乃至７３％のカプセル化効率を有する微粒子を有していた。薬剤搭載量はおよそ１４％で、バッチに関して同程度であった。微粒子サイズはバッチに関して同程度であった。薬剤放出速度はＰＢＳ中で全てのバッチに関して同程度であり、促進放出がわずかに高い初期放出を示した。
【表１７】
【００９６】
実施例９は様々な溶媒接触のオクトレオチド微粒子を比較する。オクトレオチド含有ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）微粒子を、ロイプロリド微粒子の製造手順と類
似の手法で製造した。ＰＬＧＡ（８５：１５ ＰＬＧＡ、Ａｌｋｅｒｍｅｓ社）、オクトレオチド、塩化メチレン、メタノール及び氷酢酸を含む分散相を、米国特許第５，９４５，１２６号明細書に例示されるような修正シルバーソンインラインミキサーの分散相注入チューブを介して、１分あたり約１８ｍＬで供給した。分散系におけるオクトレオチドの目標搭載量は１０％であった。０．３５％ポリビニルアルコール水溶液の連続相を、毎分２Ｌにて、インラインシルバーソンの連続相注入ポートを介して供給した。シルバーソンの回転速度は５５００ｒｐｍであった。詳細な製造パラメータを下記表１８に示す。製造された約２Ｌの懸濁液を、その後一定に撹拌しながら、１５Ｌの連続相に接触させた。この１５Ｌの連続相は、それぞれ２０００、４０００又は６０００ｐｐｍの塩化メチレンを含んでいた。形成したての微粒子を、洗浄前に、１００分間、接触させた。コントロールバッチは溶媒接触をせずに直接洗浄した。
【表１８】
【００９７】
促進体外（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）試験を実施し、各バッチの微粒子を比較した。試験は、ｐＨ４．０、６０℃で酢酸バッファー溶液中で実施した。放出速度をもまた生理学的条件下、３７℃で、１日間、バッチに関して算出した。
【表１９】
【００９８】
表１９に示すように、より多い量の溶媒に接触した微粒子は、初期の時点において、放出媒体中でより高い初期放出を示した。インシュリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）がより早い放出速度に対応してあまりにも急激に減少し得るように、より高い初期バーストは安全性の懸念を引き起こし得る。徐放性微粒子処方におけるオクトレオチドに関するより低い初期放出速度が最適であろう。ロイプロリドとは異なり、オクトレオチド微粒子に関して、減少した溶媒接触の処方を用いることによって、放出速度が減少される。
【００９９】
図１０は、ラットにおけるオクトレオチドの生体内研究において、表１８に従って製造された微粒子の放出特性のグラフ図である。ラットはオクトレオチド微粒子バッチ５ｍｇの投与量を与えられた。ＧＪ０３０８０４は連続相中で増加した溶媒に接触しておらず、より高濃度の塩化メチレンで製造されたバッチと比較して、より低い初期バースト放出を示した。より高い溶媒接触がより高いバースト放出速度を引き起こすため、より低いバーストの微粒子は好ましい速度に応じて、水希釈によって製造され得ることが推測される。
【０１００】
実施例１０
実施例１０は、希釈組成物が添加／無添加で、微粒子のバッチサイズが様々であってあるときの、微粒子のロイプロリドの薬剤放出速度の効果を比較する。まずバッチＧＣ０７１３０４、０Ｅ５１０３及び０Ｄ４０２２を連続相への希釈組成物の添加なしに、様々なバッチサイズで製造した。表２０に示すように、８ｇバッチであるＧＣ０７１３０４を、分子量１８ｋＤａのＲ２０２Ｈ、酢酸ロイプロリド、塩化メチレン及びメタノールを含む分散相２９ｇを用いて製造した。ＧＣ０７１３０４の連続相は、１．５Ｌの０．３５％ポリビニルアルコール水溶液を含んでいた。分散相に関して３０−３５ｇ／分、連続相に関して２Ｌ／分の流速にて、微粒子形成を５０秒以内で完了した。バッチをインラインミキサーにて７０００ｒｐｍで一定に撹拌し、周囲水中及び３９℃水中、およそ１０ 体積変
化にて洗浄した。
【０１０１】
バッチ０Ｅ５１０３を上述と同じ製造パラメーターを用い、但しバッチサイズを４００ｇに増加させた。微粒子形成時間は４０分間であった。バッチサイズを７００ｇに増加させたバッチ０Ｄ４０２２を上述と同じ製造パラメーターを用いて製造した。微粒子形成時間は７０分間であった。後述の２つのバッチに使用した分散相及び連続相の量は、検討されたバッチサイズを製造するために、比例して調整した。
【０１０２】
下記表２０に示すように、３つのバッチを０．２０６ＩＶ（固有粘度）ポリマーを用いて製造した。表２１に、バッチの特性を比較する。
【表２０】
【０１０３】
表２０で形成された微粒子の特性を表２１に示す。
【表２１】
【０１０４】
生理学的条件下で試験された放出速度は、ｐＨ７．４、３７℃でＰＢＳに対して接触させられた。５０秒という最も早い微粒子形成時間と、対応する最も短い溶媒接触時間で製造された８ｇバッチは、４００ｇバッチ及び７００ｇバッチと比較して、最も早い初期放出を有した。最も長い溶媒接触時間（微粒子形成時間：７０分間）の最大の７００ｇバッチは、最も遅い初期放出を有していた。よって、生理学的条件及び促進条件下で、バッチサイズの増加、又はバッチのスケールアップは、全ての他の因子がほぼ同じである、薬剤の放出速度に反転効果を与える。
【０１０５】
表２２に詳述されるように、微粒子を１０，１００及び１０００ｇのスケールバッチで製造した。１００ｇスケールでは試料の再現性を示すために３つのバッチを製造した。
バッチは、分散相に関して０．１８３ＩＶ（固有粘度）、分子量１４ｋＤａを有するＲ２０２Ｈポリマー、ロイプロリド、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ及び氷酢酸を用いて、連続相に関して水とポリビニルアルコールを用いて製造した。また、約１５００、±５００ｍｌの希釈組成物を連続相に加えた。具体的には希釈組成物、或いは水を、微粒子形成時に溶媒除去容器に対して２乃至４Ｌ／分で連続的に添加した。製造パラメーターはバッチに関して同じであり、微粒子製造時間は、１０ｇバッチで１分間、１００ｇバッチで１０分間、１０００ｇバッチで１００分間であった。１００ｇスケールにて再現性を示すために３つのバッチを製造した。
【表２２】
【表２３】
【０１０６】
薬剤カプセル化効率は１０、１００及び１０００ｇバッチで７５乃至７９％の範囲の値で同程度である。薬剤搭載量は１２．８乃至１３．７％と正常変動である。粒子サイズの結果は同程度のサイズ分布データを示す。薬剤放出速度は１０，１００及び１０００ｇバッチで類似している。１０、１００及び１０００ｇで製造したバッチは全て非常に低い残存溶媒を示した。よって、連続相に希釈組成物を添加することによって、上記測定された放出プロファイルに関しては、バッチサイズは小さなファクターになる。連続相の溶媒レベルが閾値下に減少すると、希釈組成物の添加なしに製造されたバッチがそうであったように、微粒子の放出特性はバッチサイズに依存しない。
【０１０７】
実施例１１
実施例１１は、希釈組成物を用いて製造されたリスペリドン微粒子の放出プロファイルを詳述する。まず、微粒子を生体適合性及び生体分解性ポリマーとして、２７．５ｇのポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、すなわちラクチド：グリコリド比が８５：１５であり、固有粘度が０．６１ｇ／ｄＬであるＰＬＧＡを用いて製造した。バッチを２７
．５ｇのリスペリドンを用いて製造した。リスペリドン及びポリマーを２２０ｇのジクロロメタンに溶解した。ポリマー、生物学的活性剤及び溶媒のこの混合有機溶液が分散相を構成した。別に、連続相を供給するために、８７．５ｇのポリビニルアルコール及び６９ｇのリン酸二ナトリウム七水和物を２５ｋｇの精製水中に溶解した。分散相及び連続相を同時に、それぞれ３８．５ｍｌ／分及び４０００ｍＬ／分で、シルバーソンインラインミキサーに注入し、約５分間４０００ｒｐｍで混合した。
【０１０８】
分散相を連続相と混合する際、得られた混合物をシルバーソンミキサーにてリスペリドン搭載ＰＬＧＡ微粒子に固化させた。リスペリドン微粒子懸濁液を、希釈組成物を微粒子分散液に室温で添加するところの溶媒除去容器（ＳＲＶに）排出し、希釈組成物をおよそ５分間、流速２０００ｍＬ／分で加えた。ＳＲＶ中で、室温及び３３−３７℃の水で微粒子を洗浄し、有機溶媒を除去した。洗浄及び溶媒除去後、微粒子を濾過にて回収し、凍結乾燥した。微粒子は、微粒子１ｇあたり０．３９ｇのリスペリドンの薬剤搭載量を有すると決定された。ＰＬＧＡ微粒子のリスペリドン搭載効率は７７．５％であった。微粒子の放出特性を評価した。ｐＨ７バッファー中２４時間以内で、１％未満の薬剤の初期放出が検出された。
【０１０９】
実施例１２
実施例１２は水希釈なしに微粒子にカプセル化されたリスペリドンの放出プロファイルを詳述する。微粒子を２７．５ｇのポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、すなわち、固有粘度０．６１ｇ／ｄＬ、ラクチド：グリコリド比＝８５：１５のＰＬＧＡを用いて製造した。リスペリドン２７．５ｇを分散相としての役割を果たす有機溶液の一部としてのジクロロメタン２２０ｇに溶解した。別に、ポリビニルアルコール８７．５ｇ、リン酸二ナトリウム七水和物６９ｇを精製水２５ｋｇに溶解することで連続相を調製した。分散相と連続相を、それぞれ３８．５ｍｌ／分、４０００ｍＬ／分にて同時にシルバーソンインラインミキサーに注入した。混合懸濁液を４０００ｒｐｍで混合した。分散相を連続相と混合し、得られた混合物をシルバーソンミキサーでリスペリドン搭載ＰＬＧＡ微粒子に固化させた。リスペリドン微粒子懸濁液を溶媒除去容器（ＳＲＶ）に排出した。この実施例では希釈組成物を用いなかった。ＳＲＶ中で、室温及び３３−３７℃水で微粒子を洗浄し有機溶媒を除去した。洗浄及び溶媒除去工程後、微粒子を濾過にて回収し、凍結乾燥した。微粒子は、微粒子１ｇあたりリスペリドン０．３３ｇの含量を有すると決定された。ＰＬＧＡ中のリスペリドン搭載効率は６６．２％であった。後の放出プロファイル試験で、およそ８０−８２％のリスペリドンがｐＨ７バッファー中２４時間以内で微粒子から放出された。
【表２４】
【０１１０】
希釈組成物の添加なしに製造されたバッチに関して、微粒子からの放出速度（放出率）はリスペリドン８０−８２％であった。２０００ｍｌ／分で希釈組成物にて希釈したバッチは、初期投与において放出速度（放出率）が１％未満であった。
【符号の説明】
【０１１１】
１０・・・連続工程
１２・・・分散相
１４・・・連続相
１６・・・インラインミキサー
１８・・・希釈組成物
１８ａ・・・希釈組成物
１８ｂ・・・希釈組成物
２０・・・第一容器
２２・・・中空糸フィルタ
２２ａ・・・ライン
【先行技術文献】
【特許文献】
【０１１２】
【特許文献１】米国特許第４，８１８，５４２号明細書
【特許文献２】米国特許第４，７６７，６２８号明細書
【特許文献３】米国特許第３，７７３，９１９号明細書
【特許文献４】米国特許第３，７５５，５５８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，４０７，６０９号明細書
【特許文献６】米国特許第６，２７０，８０２号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３６１，７９８号明細書
【特許文献８】米国特許第５，９４５，１２６号明細書
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変更された放出速度を有する徐放性組成物であって：
特定の活性剤及びポリマーを含む分散相を含み、前記分散相は連続相と組み合わせられて微粒子分散系を形成し、前記微粒子分散系は、微粒子が形成された後に一定量の希釈用組成物と接触させられており；前記希釈組成物は、特定の活性剤の放出速度を変更させる連続相を希釈するのに十分であるところの、組成物。
【請求項２】
前記希釈用組成物は、徐放性組成物のバッチサイズの増加の悪影響をなくすところの連続相を希釈するのに十分である、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項３】
前記希釈用組成物は、形成したての微粒子に添加され、その後第一容器に移し替えられる、
請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項４】
前記希釈用組成物は、微粒子が第一容器に移し替えられた後に微粒子分散系に添加される、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項５】
請求項１記載の徐放性組成物を形成する方法であって、
ポリマーに溶解した特定の活性剤を含む分散相を形成する工程；
分散相を連続相と共に混合して、連続相中に懸濁している微粒子を含む微粒子分散系を形成させる工程；
一定量の希釈用組成物を、微粒子が形成された後に、微粒子分散系へ添加する工程を含み；
添加された希釈用組成物量が、特定の活性剤の放出速度を変更させるために十分な量である、方法。
【請求項６】
前記方法が、さらに、希釈用組成物を第一容器に添加するのと同時に、ミキサーから第一容器に微粒子分散系を移送する工程を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記希釈用組成物が水であり、前記水は連続相の少なくとも５０％乃至約３００％量で、微粒子分散系に加えられる、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記希釈用組成物及び前記微粒子分散系が、第一容器に同時に移送される、請求項５記載の方法。
【請求項９】
請求項１記載の徐放性組成物を形成する方法であって、
特定の活性剤及びポリマーを含む分散相を形成する工程；
分散相と連続相を混合して、連続相中に懸濁された微粒子を含む微粒子分散系を形成する工程；そして
微粒子分散系に希釈用組成物を添加して、未処理の徐放性微粒子の放出速度とは異なる放出速度を有する徐放性組微粒子を製造する工程を含み；
希釈用組成物の体積が、連続相の体積の少なくとも５０％である、方法。
【請求項１０】
前記特定の活性剤がロイプロリドであり、前記ロイプロリドがポリマー中に溶解されており、かつ前記希釈用組成物の体積が連続相の体積の少なくとも２００％である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記特定の活性剤がオクトレオチドであり、前記希釈用組成物の体積が連続相の体積の少なくとも１００％である、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記特定の活性剤がリスペリドンである、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
前記連続相が溶媒を含み、そして溶媒が約５０００ｐｐｍ未満の溶媒濃度になるまで、前記希釈用組成物が連続相の部分に添加される、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
本方法が連続的に実施される、請求項９記載の方法。
【請求項１５】
分散相が連続相と混合された後、微粒子が約２乃至約３０秒で形成され、そして、微粒子が一定期間希釈用組成物に接触させられる、請求項９記載の方法。
【請求項１６】
希釈用組成物が、徐放性組成物のバッチサイズの増加の悪影響をなくすところの連続相を希釈するのに十分である、請求項９記載の方法。
【請求項１７】
請求項１記載の徐放性組成物の放出速度をコントロールする方法であって、
特定の活性剤とポリマーを含む分散相を形成する工程、ここで前記特定の活性剤は、ロイプロリドであり、該ロイプロリドがポリマー中に溶解されてなり；
ミキサー中で分散相を連続相と混合し、微粒子分散系を形成する工程；
微粒子の形成後に、一定量の希釈用組成物を微粒子分散系に添加する工程を含み；そして希釈用組成物量がロイプロリドの放出速度を変更させるのに十分な量である、方法。
【請求項１８】
連続相が溶媒を含み、添加された希釈用組成物量が、連続相中の溶媒を約５０００ｐｐｍ未満に希釈するのに十分な量である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
微粒子分散系が第一容器に移送される前に、定められた期間の間、ミキサー中で保持される、請求項１７記載の方法。
【請求項１】
変更された放出速度を有する徐放性組成物であって：
特定の活性剤及びポリマーを含む分散相を含み、前記分散相は連続相と組み合わせられて微粒子分散系を形成し、前記微粒子分散系は、微粒子が形成された後に一定量の希釈用組成物と接触させられており；前記希釈組成物は、特定の活性剤の放出速度を変更させる連続相を希釈するのに十分であるところの、組成物。
【請求項２】
前記希釈用組成物は、徐放性組成物のバッチサイズの増加の悪影響をなくすところの連続相を希釈するのに十分である、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項３】
前記希釈用組成物は、形成したての微粒子に添加され、その後第一容器に移し替えられる、
請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項４】
前記希釈用組成物は、微粒子が第一容器に移し替えられた後に微粒子分散系に添加される、請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項５】
請求項１記載の徐放性組成物を形成する方法であって、
ポリマーに溶解した特定の活性剤を含む分散相を形成する工程；
分散相を連続相と共に混合して、連続相中に懸濁している微粒子を含む微粒子分散系を形成させる工程；
一定量の希釈用組成物を、微粒子が形成された後に、微粒子分散系へ添加する工程を含み；
添加された希釈用組成物量が、特定の活性剤の放出速度を変更させるために十分な量である、方法。
【請求項６】
前記方法が、さらに、希釈用組成物を第一容器に添加するのと同時に、ミキサーから第一容器に微粒子分散系を移送する工程を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記希釈用組成物が水であり、前記水は連続相の少なくとも５０％乃至約３００％量で、微粒子分散系に加えられる、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記希釈用組成物及び前記微粒子分散系が、第一容器に同時に移送される、請求項５記載の方法。
【請求項９】
請求項１記載の徐放性組成物を形成する方法であって、
特定の活性剤及びポリマーを含む分散相を形成する工程；
分散相と連続相を混合して、連続相中に懸濁された微粒子を含む微粒子分散系を形成する工程；そして
微粒子分散系に希釈用組成物を添加して、未処理の徐放性微粒子の放出速度とは異なる放出速度を有する徐放性組微粒子を製造する工程を含み；
希釈用組成物の体積が、連続相の体積の少なくとも５０％である、方法。
【請求項１０】
前記特定の活性剤がロイプロリドであり、前記ロイプロリドがポリマー中に溶解されており、かつ前記希釈用組成物の体積が連続相の体積の少なくとも２００％である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記特定の活性剤がオクトレオチドであり、前記希釈用組成物の体積が連続相の体積の少なくとも１００％である、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記特定の活性剤がリスペリドンである、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
前記連続相が溶媒を含み、そして溶媒が約５０００ｐｐｍ未満の溶媒濃度になるまで、前記希釈用組成物が連続相の部分に添加される、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
本方法が連続的に実施される、請求項９記載の方法。
【請求項１５】
分散相が連続相と混合された後、微粒子が約２乃至約３０秒で形成され、そして、微粒子が一定期間希釈用組成物に接触させられる、請求項９記載の方法。
【請求項１６】
希釈用組成物が、徐放性組成物のバッチサイズの増加の悪影響をなくすところの連続相を希釈するのに十分である、請求項９記載の方法。
【請求項１７】
請求項１記載の徐放性組成物の放出速度をコントロールする方法であって、
特定の活性剤とポリマーを含む分散相を形成する工程、ここで前記特定の活性剤は、ロイプロリドであり、該ロイプロリドがポリマー中に溶解されてなり；
ミキサー中で分散相を連続相と混合し、微粒子分散系を形成する工程；
微粒子の形成後に、一定量の希釈用組成物を微粒子分散系に添加する工程を含み；そして希釈用組成物量がロイプロリドの放出速度を変更させるのに十分な量である、方法。
【請求項１８】
連続相が溶媒を含み、添加された希釈用組成物量が、連続相中の溶媒を約５０００ｐｐｍ未満に希釈するのに十分な量である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
微粒子分散系が第一容器に移送される前に、定められた期間の間、ミキサー中で保持される、請求項１７記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１２−５１１００３（Ｐ２０１２−５１１００３Ａ）
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３９６３２（Ｐ２０１１−５３９６３２）
【出願日】平成２１年１２月１日（２００９．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６６２１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６５５１３
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５１１１３５８３５）オークウッド ラボラトリーズ，エル．エル．シー． (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１日（２００９．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６６２１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６５５１３
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５１１１３５８３５）オークウッド ラボラトリーズ，エル．エル．シー． (1)
【Ｆターム（参考）】
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