心筋トロポニンＴ含有水溶液及びこの製造方法
【課題】心筋トロポニンＴ溶液を標準液とする場合、従来の凍結乾燥による方法では、保存安定性は良いが使用時に水を加えなければならないため操作が煩雑となり、結果として標準液中の抗原濃度に誤差を生じやすい。また、牛血清アルブミンや動物血清などのタンパク質を添加しても、溶液中での心筋トロポニンＴの安定性が悪く、長期間の保存安定性を確保することが困難である。
【解決手段】ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）。
【解決手段】ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心筋トロポニンＴ含有水溶液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
免疫測定を行う際には、抗原を含有した標準液をキャリブレーターとして用いるのが一般的である。通常、この標準液中に含まれる抗原は希薄であるため、抗原種によっては溶液中で著しく失活する場合がある。特に、ホルモンや酵素などの抗原溶液は失活が激しく、水溶液状のキャリブレーターとして用いるのには困難な場合が多い。このような場合には、凍結乾燥などの方法で水分を除去した形態で保存し、使用時に水を加えてこの個体を溶解する方法や、牛血清アルブミンや動物血清などのタンパク質を添加して水溶液中での安定性を確保する方策がとられてきた（非特許文献１、２）。
【非特許文献１】佐々木 實，免疫化学的同定法（第３版），東京化学同人，１９９３年
【非特許文献２】石川榮治，超高感度酵素免疫測定法，学会出版センター，１９９３年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら従来の凍結乾燥による方法では、保存安定性は良いが使用時に水を加えなければならないため操作が煩雑となり、結果として標準液中の抗原濃度に誤差を生じやすい。また、特に心筋トロポニンＴ溶液を標準液とする場合には、牛血清アルブミンや動物血清などのタンパク質を添加しても、溶液中での心筋トロポニンＴの安定性が悪く、長期間の保存安定性を確保することが困難である。すなわち本発明の目的は、安定した心筋トロポニンＴ含有水溶液を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
すなわち、本発明は、ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）及びこの製造方法である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は以下の効果を奏する。
（１）失活し易いヒト心筋トロポニンＴ抗原含有水溶液を、溶液状態で長期間安定して保存することができる。
（２）従来行われた凍結乾燥しなくとも安定性を長期間維持できるようになり、抗原を溶解するという煩雑な調製操作により生じる濃度の誤差がなくなり、測定精度と再現性が良い免疫測定ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
トロポニンＴは、心筋・骨格筋に存在する筋原繊維タンパクであるトロポニンのサブユニットの１つで、トロポミオシンとアクチンとの結合を調整することで、筋収縮調節作用に重要な役割を担っている。これらの成分は筋肉に損傷が無い場合は血中に出現しないため、血中に検出された場合は筋肉の損傷が存在していたと考えられる。従来の血清酵素は骨格筋の障害、筋肉運動でも血中に増加する。心筋トロポニンＴの測定は、心筋に特異的であり、心筋梗塞の診断の有力な指標となっている。
【０００７】
心筋トロポニンＴはヒトまたは動物起源のものであり、より詳細には、心臓起源のものである。
【０００８】
心筋トロポニンＴは、心臓の摩砕調製物の抽出物、または、予め精製された心筋トロポニンＴから得られる。製造コストの理由から心臓の粗抽出物から製造した心筋トロポニンＴの安定組成物が好ましい。
また、心筋トロポニンＴの安定組成物は、アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａmerican Ｈeart Ｊournal）、クリニカル・インベスティゲーションズ（Ｃlinical Ｉnvestigations）、１９８７年６月、第１１３巻、第６号「カルディアック−スペシフィック・トロポニン−Ｉ・ラジオイムノアッセイ・イン・ザ・ディアグノシス・オブ・アキュート・マイオカルディアル・インファークション（Ｃardiac-specific troponin-Ｉ radioimmunoassay in the diagnosis of acute myocardial infarction）」、第１３３４頁に開示された方法を用いて、ヒト由来又は動物由来の心臓から製造したものでもよい。
市販の心筋トロポニンＴとしては、ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ社製のものが挙げられる。
【０００９】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴ及び水を含んでなる。
【００１０】
水としては、特に限定されないが、不純物の観点から、脱イオン水が好ましい。
【００１１】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）中の心筋トロポニンＴの含有量は、特に限定されず任意の含有量でよいが、水溶液（Ｂ）中の心筋トロポニンＴの保存安定性の観点から、水溶液（Ａ）の重量を基準として、１０ｍｇ／ｇ以下が好ましく、血液中の心筋トロポニンＴを定量する際に必要な濃度域の観点から、１０ｐｇ／ｇ〜１μｇ／ｇがさらに好ましく、次にさらに好ましくは１０ｐｇ／ｇ〜１００ｎｇ／ｇ、特に好ましくは１０ｐｇ／ｇ〜２５ｎｇ／ｇである。
【００１２】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）中には、心筋トロポニンＴの容器への吸着等を防止させる目的で、タンパク質を含むことが好ましい。タンパク質は、例えば、ウシ血清アルブミンやそれ以外のタンパク質（ヒト血清アルブミン、ウシ胎仔血清、ウマ血清、ウシγグロブリン）が利用できる。
【００１３】
タンパク質を含む場合、（Ａ）中のタンパク質の含有量（重量％）は心筋トロポニンＴの安定性の観点から、（Ａ）の重量を基準として、０．１重量％〜５重量％が好ましく、さらに好ましくは０．３重量％〜３重量％、次にさらに好ましくは０．５重量％〜３重量％である。
【００１４】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）のｐＨは、６．０〜８．５であり、水溶液（Ｂ）中の心筋トロポニンＴの保存安定性の観点から、さらに好ましくは６．５〜８．０、次にさらに好ましくは６．５〜７．５である。ｐＨが６．０未満又は８．５を超えると心筋トロポニンＴ含有水溶液の安定性が悪くなる。
なお、ｐＨは、ＪＩＳ Ｋ０４００−１２−１０：２０００で測定できる（測定温度２５℃）。
【００１５】
上記の範囲に心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）のｐＨを調整するには、後述する緩衝剤を用いてｐＨを調整することで行える。
ｐＨの調整は、一般的な緩衝液の作製方法と同様に、緩衝剤の水溶液に無機アルカリの水酸化物を用いて行われる。無機アルカリの水酸化物としては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。
【００１６】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）は、ｐＨ調整の目的で、緩衝剤を含有してもよい。緩衝剤としては、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、Ｇｏｏｄ緩衝剤等が知られるがｐＨ６．０〜８．５の間に緩衝能をもつ緩衝剤が保存安定性の観点から好ましく、具体的にはリン酸緩衝剤及びＧｏｏｄ緩衝剤が好ましい。
【００１７】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴの安定化の目的で、さらに非イオン性界面活性剤を含有してもよい。
【００１８】
非イオン性界面活性剤としては、アルキレンオキサイド（以下、ＡＯと略す）付加型非イオン性界面活性剤及び多価アルコ−ル型非イオン性界面活性剤などが挙げられる。
【００１９】
ＡＯ付加型非イオン界面活性剤は、高級アルコ−ル、高級脂肪酸又はアルキルアミン等に直接ＡＯを付加させたもの、グリコ−ルにＡＯを付加させて得られるポリアルキレングリコ−ルに高級脂肪酸などを反応させたもの、あるいは、多価アルコ−ルに高級脂肪酸を反応して得られたエステル化物にＡＯを付加させたもの、高級脂肪酸アミドにＡＯを付加させたもの等が挙げられる。
【００２０】
ＡＯとしては、例えばエチレンオキサイド（以下、ＥＯと略す）、プロピレンオキサイド（以下、ＰＯと略す）及びブチレンオキサイド（以下、ＢＯと略す）が挙げられる。
これらのうち好ましいものは、ＥＯ及びＥＯとＰＯのランダムまたはブロック付加物である。
ＡＯの付加モル数としては１０〜５０モルが好ましく、該ＡＯのうち５０〜１００重量％がＥＯであるものが好ましい。
【００２１】
ＡＯ付加型非イオン界面活性剤の具体例としては、オキシアルキレンアルキルエ−テル（オクチルアルコールＥＯ付加物、ラウリルアルコールＥＯ付加物、ステアリルアルコールＥＯ付加物、オレイルアルコールＥＯ付加物、ラウリルアルコールＥＯ・ＰＯブロック付加物等）；ポリオキシアルキレン高級脂肪酸エステル（ステアリル酸ＥＯ付加物、ラウリル酸ＥＯ付加物等）；
ポリオキシアルキレン多価アルコ−ル高級脂肪酸エステル（ポリエチレングリコールのラウリン酸ジエステル、ポリエチレングリコールのオレイン酸ジエステル、ポリエチレングリコールのステアリン酸ジエステル等）；
ポリオキシアルキレンアルキルフェニルエ−テル（ノニルフェノールＥＯ付加物、ノニルフェノールＥＯ・ＰＯブロック付加物、オクチルフェノールＥＯ付加物、ビスフェノールＡ・ＥＯ付加物、ジノニルフェノールＥＯ付加物、スチレン化フェノールＥＯ付加物等）；ポリオキシアルキレンアルキルアミノエ−テル（ラウリルアミンＥＯ付加物，ステアリルアミンＥＯ付加物等）；ポリオキシアルキレンアルキルアルカノ−ルアミド（ヒドロキシエチルラウリン酸アミドのＥＯ付加物、ヒドロキシプロピルオレイン酸アミドのＥＯ付加物、ジヒドロキシエチルラウリン酸アミドのＥＯ付加物等）が挙げられる。
【００２２】
多価アルコ−ル型非イオン界面活性剤としては、多価アルコール脂肪酸エステル、多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物、多価アルコールアルキルエーテル、多価アルコールアルキルエーテルＡＯ付加物等が挙げられる。
【００２３】
多価アルコール脂肪酸エステルの具体例としては、ペンタエリスリトールモノラウレート、ペンタエリスリトールモノオレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンジラウレート、ソルビタンジオレート、ショ糖モノステアレート等が挙げられる。
多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物の具体例としては、エチレングリコールモノオレートＥＯ付加物、エチレングリコールモノステアレートＥＯ付加物、トリメチロールプロパンモノステアレートＥＯ・ＰＯランダム付加物、ソルビタンモノラウレートＥＯ付加物、ソルビタンモノステアレートＥＯ付加物、ソルビタンジステアレートＥＯ付加物、ソルビタンジラウレートＥＯ・ＰＯランダム付加物等が挙げられる。
多価アルコールアルキルエーテルの具体例としては、ペンタエリスリトールモノブチルエーテル、ペンタエリスリトールモノラウリルエーテル、ソルビタンモノメチルエーテル、ソルビタンモノステアリルエーテル、メチルグリコシド、ラウリルグリコシド等が挙げられる。
多価アルコールアルキルエーテルＡＯ付加物の具体例としては、ソルビタンモノステアリルエーテルＥＯ付加物、メチルグリコシドＥＯ・ＰＯランダム付加物、ラウリルグリコシドＥＯ付加物、ステアリルグリコシドＥＯ・ＰＯランダム付加物等が挙げられる
【００２４】
非イオン性界面活性剤は、１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２５】
非イオン性界面活性剤のうち、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物が好ましく、さらに好ましくはソルビタンオレイン酸モノエステルＥＯ付加物である。
【００２６】
非イオン性界面活性剤を含有する場合、非イオン性界面活性剤の濃度（重量％）は、水溶液（Ａ）の重量を基準として、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、０．１〜１が好ましく、さらに好ましくは０．１〜０．５、次に好ましくは０．１〜０．３である。
【００２７】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴ及び水、並びに必要により緩衝剤、タンパク質、非イオン性界面活性剤を混合することで容易に得られる。その他の成分として生理学的な血清環境を提供するために食塩や防腐剤（アジ化ナトリウム等）を添加しても良い。
【００２８】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、水溶液（Ａ）を加熱処理して得られる。
【００２９】
加熱処理としては、３０℃〜５０℃の温度で７２時間〜２４０時間加熱する必要がある。心筋トロポニンＴの安定性の観点から、温度としては３２℃〜４５℃が好ましく、さらに好ましくは３５℃〜４２℃、次にさらに好ましくは３８℃〜４２℃である。また、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、時間としては９６時間〜２２０時間が好ましく、さらに好ましくは１２０時間〜２００時間で、次にさらに好ましいのは１５０時間〜１８０時間である。
３０℃未満の処理温度では、熱処理効果が小さく水溶液（Ｂ）の安定性が損なわれ、また、５０℃を越える処理温度では、心筋トロポニンＴが変性してしまう。同様に７２時間未満の処理時間では、熱処理効果が小さく水溶液（Ｂ）の安定性が損なわれ、また、２４０時間を超える処理時間では、心筋トロポニンＴが変性してしまう。
【００３０】
加熱する装置としては、上記処理温度及び時間に設定できるものであれば特に限定されない。具体的にはインキュベーター等が挙げられる。
【００３１】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）の、心筋トロポニンT含有量、ｐＨについては、水溶液（Ａ）と同様であり、好ましいものも同様である。
また、心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、必要により、さらにタンパク質、緩衝剤、非イオン性界面活性剤を含有してもよく、これらについては、水溶液（Ａ）と同様であり、好ましいものも同様である。
水溶液（Ｂ）に、必要によりさらに、心筋トロポニンＴ、タンパク質、緩衝剤、非イオン性界面活性剤等を添加する場合、加熱処理した（Ａ）とこれらを混合することで容易に混合できる。
【００３２】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、保存安定性の観点から、２~１０℃で保存するのが好ましい。
【００３３】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、臨床検査の分野において酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に用いることができる。特に、心筋トロポニンＴを含有した溶液中の心筋トロポニンＴの失活を防止し、安定して保存することができることから、標準液として好適に使用できる。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により、本発明を更に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３５】
＜実施例１＞
脱イオン水１０ｍLにリン酸二水素カリウム８μｇ、リン酸水素二ナトリウム５０μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。その後、溶液の一部をサンプリングし、後述の方法で発光量（初期発光量）の測定を行なった。また、残りの溶液を４０℃のインキュベータで１６８時間熱処理を行って、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（１）を得た。この水溶液（１）について、後述の方法で発光量（熱処理後発光量）の測定を行なった。この得られた水溶液（１）を４℃で２ヶ月間保存した後、後述の方法で発光量（２ヶ月後発光量）を測定した。
【００３６】
＜実施例２＞
実施例１において、ウシ血清アルブミン、非イオン性界面活性剤Ｔｗｅｅｎ８０を加えない以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（２）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３７】
＜実施例３＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から５０℃に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（３）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３８】
＜実施例４＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から３０℃に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（４）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３９】
＜実施例５＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から２４０時間に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（５）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４０】
＜実施例６＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から７２時間に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（６）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４１】
＜実施例７＞
脱イオン水１０ｍLにＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｍｅｓｉｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）１２０μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して、熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、本発明の心筋トロポニンＴ含有水量液（７）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００４２】
＜実施例８＞
脱イオン水１０ｍLにリン酸二水素カリウム３２μｇ、リン酸水素二ナトリウム１７μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して、熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、本発明の心筋トロポニンＴ含有水量液（８）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００４３】
＜実施例９＞
実施例１において、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを０．０１ｇに変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（９）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４４】
＜実施例１０＞
実施例１において、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを０．１ｇに変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（１０）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４５】
＜比較例１＞
実施例１と同様にして、熱処理前の溶液を得、これを比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ１）とした。この（Ｒ１）の一部をサンプリングし、後述の方法で発光量（初期発光量）の測定を行なった。また、残りの（Ｒ１）を４℃で２ヶ月間保存した後、後述の方法で発光量（２ヶ月後発光量）を測定した。
【００４６】
＜比較例２＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から５５℃に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ２）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４７】
＜比較例３＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から２５℃に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ３）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４８】
＜比較例４＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から３００時間に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ４）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４９】
＜比較例５＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から４８時間に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ５）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００５０】
＜比較例６＞
脱イオン水１０ｍLに炭酸二ナトリウム３μｇ、炭酸水素ナトリウム１５μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、比較の心筋トロポニンＴ含有水量液（Ｒ６）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００５１】
＜比較例７＞
脱イオン水１０ｍLに酢酸ナトリウム３０μｇ、酢酸３μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、比較の心筋トロポニンＴ含有水量液（Ｒ６）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００５２】
＜発光量の測定＞
実施例及び比較例の心筋トロポニンＴ溶液の発光量は、以下の測定方法により測定し、発光量を求めた。
測定はエクルーシス試薬トロポニンＴIIIを用いて、ＥＣＬｕｓｙｓ２０１０（Ｒｏｃｈｅ（株）社製）にて行なった。
【００５３】
実施例及び比較例で得られた初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量を表１に示す。また、実施例及び比較例で得られた熱処理前の溶液のｐＨを合わせて記載した。
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、比較用の水溶液に比べて、熱処理の効果で初期発光量に比べて熱処理後発光量が大きく増大した。また、約２ヶ月後でも発光量が十分あり、安定であった。
【００５４】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は以下の効果を奏する。
（１）心筋トロポニンＴを、溶液状態で長期間安定して保存することができる。
（２）従来行われた凍結乾燥しなくとも安定性を長期間維持できるようになり、抗原を溶解するという煩雑な調製操作により生じる濃度の誤差がなくなり、測定精度と再現性が良い免疫測定ができる。
よって、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、臨床検査の分野において酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に用いることができる。特に、抗原を含有した溶液中の抗原の失活を防止し、安定して保存することができることから、標準液として好適に使用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心筋トロポニンＴ含有水溶液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
免疫測定を行う際には、抗原を含有した標準液をキャリブレーターとして用いるのが一般的である。通常、この標準液中に含まれる抗原は希薄であるため、抗原種によっては溶液中で著しく失活する場合がある。特に、ホルモンや酵素などの抗原溶液は失活が激しく、水溶液状のキャリブレーターとして用いるのには困難な場合が多い。このような場合には、凍結乾燥などの方法で水分を除去した形態で保存し、使用時に水を加えてこの個体を溶解する方法や、牛血清アルブミンや動物血清などのタンパク質を添加して水溶液中での安定性を確保する方策がとられてきた（非特許文献１、２）。
【非特許文献１】佐々木 實，免疫化学的同定法（第３版），東京化学同人，１９９３年
【非特許文献２】石川榮治，超高感度酵素免疫測定法，学会出版センター，１９９３年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら従来の凍結乾燥による方法では、保存安定性は良いが使用時に水を加えなければならないため操作が煩雑となり、結果として標準液中の抗原濃度に誤差を生じやすい。また、特に心筋トロポニンＴ溶液を標準液とする場合には、牛血清アルブミンや動物血清などのタンパク質を添加しても、溶液中での心筋トロポニンＴの安定性が悪く、長期間の保存安定性を確保することが困難である。すなわち本発明の目的は、安定した心筋トロポニンＴ含有水溶液を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
すなわち、本発明は、ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）及びこの製造方法である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は以下の効果を奏する。
（１）失活し易いヒト心筋トロポニンＴ抗原含有水溶液を、溶液状態で長期間安定して保存することができる。
（２）従来行われた凍結乾燥しなくとも安定性を長期間維持できるようになり、抗原を溶解するという煩雑な調製操作により生じる濃度の誤差がなくなり、測定精度と再現性が良い免疫測定ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
トロポニンＴは、心筋・骨格筋に存在する筋原繊維タンパクであるトロポニンのサブユニットの１つで、トロポミオシンとアクチンとの結合を調整することで、筋収縮調節作用に重要な役割を担っている。これらの成分は筋肉に損傷が無い場合は血中に出現しないため、血中に検出された場合は筋肉の損傷が存在していたと考えられる。従来の血清酵素は骨格筋の障害、筋肉運動でも血中に増加する。心筋トロポニンＴの測定は、心筋に特異的であり、心筋梗塞の診断の有力な指標となっている。
【０００７】
心筋トロポニンＴはヒトまたは動物起源のものであり、より詳細には、心臓起源のものである。
【０００８】
心筋トロポニンＴは、心臓の摩砕調製物の抽出物、または、予め精製された心筋トロポニンＴから得られる。製造コストの理由から心臓の粗抽出物から製造した心筋トロポニンＴの安定組成物が好ましい。
また、心筋トロポニンＴの安定組成物は、アメリカン・ハート・ジャーナル（Ａmerican Ｈeart Ｊournal）、クリニカル・インベスティゲーションズ（Ｃlinical Ｉnvestigations）、１９８７年６月、第１１３巻、第６号「カルディアック−スペシフィック・トロポニン−Ｉ・ラジオイムノアッセイ・イン・ザ・ディアグノシス・オブ・アキュート・マイオカルディアル・インファークション（Ｃardiac-specific troponin-Ｉ radioimmunoassay in the diagnosis of acute myocardial infarction）」、第１３３４頁に開示された方法を用いて、ヒト由来又は動物由来の心臓から製造したものでもよい。
市販の心筋トロポニンＴとしては、ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ社製のものが挙げられる。
【０００９】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴ及び水を含んでなる。
【００１０】
水としては、特に限定されないが、不純物の観点から、脱イオン水が好ましい。
【００１１】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）中の心筋トロポニンＴの含有量は、特に限定されず任意の含有量でよいが、水溶液（Ｂ）中の心筋トロポニンＴの保存安定性の観点から、水溶液（Ａ）の重量を基準として、１０ｍｇ／ｇ以下が好ましく、血液中の心筋トロポニンＴを定量する際に必要な濃度域の観点から、１０ｐｇ／ｇ〜１μｇ／ｇがさらに好ましく、次にさらに好ましくは１０ｐｇ／ｇ〜１００ｎｇ／ｇ、特に好ましくは１０ｐｇ／ｇ〜２５ｎｇ／ｇである。
【００１２】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）中には、心筋トロポニンＴの容器への吸着等を防止させる目的で、タンパク質を含むことが好ましい。タンパク質は、例えば、ウシ血清アルブミンやそれ以外のタンパク質（ヒト血清アルブミン、ウシ胎仔血清、ウマ血清、ウシγグロブリン）が利用できる。
【００１３】
タンパク質を含む場合、（Ａ）中のタンパク質の含有量（重量％）は心筋トロポニンＴの安定性の観点から、（Ａ）の重量を基準として、０．１重量％〜５重量％が好ましく、さらに好ましくは０．３重量％〜３重量％、次にさらに好ましくは０．５重量％〜３重量％である。
【００１４】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）のｐＨは、６．０〜８．５であり、水溶液（Ｂ）中の心筋トロポニンＴの保存安定性の観点から、さらに好ましくは６．５〜８．０、次にさらに好ましくは６．５〜７．５である。ｐＨが６．０未満又は８．５を超えると心筋トロポニンＴ含有水溶液の安定性が悪くなる。
なお、ｐＨは、ＪＩＳ Ｋ０４００−１２−１０：２０００で測定できる（測定温度２５℃）。
【００１５】
上記の範囲に心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）のｐＨを調整するには、後述する緩衝剤を用いてｐＨを調整することで行える。
ｐＨの調整は、一般的な緩衝液の作製方法と同様に、緩衝剤の水溶液に無機アルカリの水酸化物を用いて行われる。無機アルカリの水酸化物としては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。
【００１６】
心筋トロポニンTを含む水溶液（Ａ）は、ｐＨ調整の目的で、緩衝剤を含有してもよい。緩衝剤としては、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、Ｇｏｏｄ緩衝剤等が知られるがｐＨ６．０〜８．５の間に緩衝能をもつ緩衝剤が保存安定性の観点から好ましく、具体的にはリン酸緩衝剤及びＧｏｏｄ緩衝剤が好ましい。
【００１７】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴの安定化の目的で、さらに非イオン性界面活性剤を含有してもよい。
【００１８】
非イオン性界面活性剤としては、アルキレンオキサイド（以下、ＡＯと略す）付加型非イオン性界面活性剤及び多価アルコ−ル型非イオン性界面活性剤などが挙げられる。
【００１９】
ＡＯ付加型非イオン界面活性剤は、高級アルコ−ル、高級脂肪酸又はアルキルアミン等に直接ＡＯを付加させたもの、グリコ−ルにＡＯを付加させて得られるポリアルキレングリコ−ルに高級脂肪酸などを反応させたもの、あるいは、多価アルコ−ルに高級脂肪酸を反応して得られたエステル化物にＡＯを付加させたもの、高級脂肪酸アミドにＡＯを付加させたもの等が挙げられる。
【００２０】
ＡＯとしては、例えばエチレンオキサイド（以下、ＥＯと略す）、プロピレンオキサイド（以下、ＰＯと略す）及びブチレンオキサイド（以下、ＢＯと略す）が挙げられる。
これらのうち好ましいものは、ＥＯ及びＥＯとＰＯのランダムまたはブロック付加物である。
ＡＯの付加モル数としては１０〜５０モルが好ましく、該ＡＯのうち５０〜１００重量％がＥＯであるものが好ましい。
【００２１】
ＡＯ付加型非イオン界面活性剤の具体例としては、オキシアルキレンアルキルエ−テル（オクチルアルコールＥＯ付加物、ラウリルアルコールＥＯ付加物、ステアリルアルコールＥＯ付加物、オレイルアルコールＥＯ付加物、ラウリルアルコールＥＯ・ＰＯブロック付加物等）；ポリオキシアルキレン高級脂肪酸エステル（ステアリル酸ＥＯ付加物、ラウリル酸ＥＯ付加物等）；
ポリオキシアルキレン多価アルコ−ル高級脂肪酸エステル（ポリエチレングリコールのラウリン酸ジエステル、ポリエチレングリコールのオレイン酸ジエステル、ポリエチレングリコールのステアリン酸ジエステル等）；
ポリオキシアルキレンアルキルフェニルエ−テル（ノニルフェノールＥＯ付加物、ノニルフェノールＥＯ・ＰＯブロック付加物、オクチルフェノールＥＯ付加物、ビスフェノールＡ・ＥＯ付加物、ジノニルフェノールＥＯ付加物、スチレン化フェノールＥＯ付加物等）；ポリオキシアルキレンアルキルアミノエ−テル（ラウリルアミンＥＯ付加物，ステアリルアミンＥＯ付加物等）；ポリオキシアルキレンアルキルアルカノ−ルアミド（ヒドロキシエチルラウリン酸アミドのＥＯ付加物、ヒドロキシプロピルオレイン酸アミドのＥＯ付加物、ジヒドロキシエチルラウリン酸アミドのＥＯ付加物等）が挙げられる。
【００２２】
多価アルコ−ル型非イオン界面活性剤としては、多価アルコール脂肪酸エステル、多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物、多価アルコールアルキルエーテル、多価アルコールアルキルエーテルＡＯ付加物等が挙げられる。
【００２３】
多価アルコール脂肪酸エステルの具体例としては、ペンタエリスリトールモノラウレート、ペンタエリスリトールモノオレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンジラウレート、ソルビタンジオレート、ショ糖モノステアレート等が挙げられる。
多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物の具体例としては、エチレングリコールモノオレートＥＯ付加物、エチレングリコールモノステアレートＥＯ付加物、トリメチロールプロパンモノステアレートＥＯ・ＰＯランダム付加物、ソルビタンモノラウレートＥＯ付加物、ソルビタンモノステアレートＥＯ付加物、ソルビタンジステアレートＥＯ付加物、ソルビタンジラウレートＥＯ・ＰＯランダム付加物等が挙げられる。
多価アルコールアルキルエーテルの具体例としては、ペンタエリスリトールモノブチルエーテル、ペンタエリスリトールモノラウリルエーテル、ソルビタンモノメチルエーテル、ソルビタンモノステアリルエーテル、メチルグリコシド、ラウリルグリコシド等が挙げられる。
多価アルコールアルキルエーテルＡＯ付加物の具体例としては、ソルビタンモノステアリルエーテルＥＯ付加物、メチルグリコシドＥＯ・ＰＯランダム付加物、ラウリルグリコシドＥＯ付加物、ステアリルグリコシドＥＯ・ＰＯランダム付加物等が挙げられる
【００２４】
非イオン性界面活性剤は、１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２５】
非イオン性界面活性剤のうち、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、多価アルコール脂肪酸エステルＡＯ付加物が好ましく、さらに好ましくはソルビタンオレイン酸モノエステルＥＯ付加物である。
【００２６】
非イオン性界面活性剤を含有する場合、非イオン性界面活性剤の濃度（重量％）は、水溶液（Ａ）の重量を基準として、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、０．１〜１が好ましく、さらに好ましくは０．１〜０．５、次に好ましくは０．１〜０．３である。
【００２７】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）は、心筋トロポニンＴ及び水、並びに必要により緩衝剤、タンパク質、非イオン性界面活性剤を混合することで容易に得られる。その他の成分として生理学的な血清環境を提供するために食塩や防腐剤（アジ化ナトリウム等）を添加しても良い。
【００２８】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、水溶液（Ａ）を加熱処理して得られる。
【００２９】
加熱処理としては、３０℃〜５０℃の温度で７２時間〜２４０時間加熱する必要がある。心筋トロポニンＴの安定性の観点から、温度としては３２℃〜４５℃が好ましく、さらに好ましくは３５℃〜４２℃、次にさらに好ましくは３８℃〜４２℃である。また、心筋トロポニンＴの安定性の観点から、時間としては９６時間〜２２０時間が好ましく、さらに好ましくは１２０時間〜２００時間で、次にさらに好ましいのは１５０時間〜１８０時間である。
３０℃未満の処理温度では、熱処理効果が小さく水溶液（Ｂ）の安定性が損なわれ、また、５０℃を越える処理温度では、心筋トロポニンＴが変性してしまう。同様に７２時間未満の処理時間では、熱処理効果が小さく水溶液（Ｂ）の安定性が損なわれ、また、２４０時間を超える処理時間では、心筋トロポニンＴが変性してしまう。
【００３０】
加熱する装置としては、上記処理温度及び時間に設定できるものであれば特に限定されない。具体的にはインキュベーター等が挙げられる。
【００３１】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）の、心筋トロポニンT含有量、ｐＨについては、水溶液（Ａ）と同様であり、好ましいものも同様である。
また、心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、必要により、さらにタンパク質、緩衝剤、非イオン性界面活性剤を含有してもよく、これらについては、水溶液（Ａ）と同様であり、好ましいものも同様である。
水溶液（Ｂ）に、必要によりさらに、心筋トロポニンＴ、タンパク質、緩衝剤、非イオン性界面活性剤等を添加する場合、加熱処理した（Ａ）とこれらを混合することで容易に混合できる。
【００３２】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）は、保存安定性の観点から、２~１０℃で保存するのが好ましい。
【００３３】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、臨床検査の分野において酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に用いることができる。特に、心筋トロポニンＴを含有した溶液中の心筋トロポニンＴの失活を防止し、安定して保存することができることから、標準液として好適に使用できる。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により、本発明を更に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３５】
＜実施例１＞
脱イオン水１０ｍLにリン酸二水素カリウム８μｇ、リン酸水素二ナトリウム５０μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。その後、溶液の一部をサンプリングし、後述の方法で発光量（初期発光量）の測定を行なった。また、残りの溶液を４０℃のインキュベータで１６８時間熱処理を行って、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（１）を得た。この水溶液（１）について、後述の方法で発光量（熱処理後発光量）の測定を行なった。この得られた水溶液（１）を４℃で２ヶ月間保存した後、後述の方法で発光量（２ヶ月後発光量）を測定した。
【００３６】
＜実施例２＞
実施例１において、ウシ血清アルブミン、非イオン性界面活性剤Ｔｗｅｅｎ８０を加えない以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（２）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３７】
＜実施例３＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から５０℃に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（３）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３８】
＜実施例４＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から３０℃に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（４）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００３９】
＜実施例５＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から２４０時間に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（５）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４０】
＜実施例６＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から７２時間に変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（６）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４１】
＜実施例７＞
脱イオン水１０ｍLにＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｍｅｓｉｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）１２０μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して、熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、本発明の心筋トロポニンＴ含有水量液（７）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００４２】
＜実施例８＞
脱イオン水１０ｍLにリン酸二水素カリウム３２μｇ、リン酸水素二ナトリウム１７μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して、熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、本発明の心筋トロポニンＴ含有水量液（８）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００４３】
＜実施例９＞
実施例１において、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを０．０１ｇに変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（９）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４４】
＜実施例１０＞
実施例１において、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを０．１ｇに変更した以外は実施例１と同様にして、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液（１０）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４５】
＜比較例１＞
実施例１と同様にして、熱処理前の溶液を得、これを比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ１）とした。この（Ｒ１）の一部をサンプリングし、後述の方法で発光量（初期発光量）の測定を行なった。また、残りの（Ｒ１）を４℃で２ヶ月間保存した後、後述の方法で発光量（２ヶ月後発光量）を測定した。
【００４６】
＜比較例２＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から５５℃に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ２）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４７】
＜比較例３＞
実施例１において、熱処理の温度を４０℃から２５℃に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ３）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４８】
＜比較例４＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から３００時間に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ４）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００４９】
＜比較例５＞
実施例１において、熱処理の時間を１６８時間から４８時間に変更した以外は実施例１と同様にして、比較の心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｒ５）を得た。同様に発光量の測定を行なった。
【００５０】
＜比較例６＞
脱イオン水１０ｍLに炭酸二ナトリウム３μｇ、炭酸水素ナトリウム１５μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、比較の心筋トロポニンＴ含有水量液（Ｒ６）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００５１】
＜比較例７＞
脱イオン水１０ｍLに酢酸ナトリウム３０μｇ、酢酸３μｇ、塩化ナトリウム０．８５ｇ及び１０重量％のアジ化ナトリウム水溶液０．５ｇを加えて攪拌を行なった。さらにウシ血清アルブミン０．１ｇ及び非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０）０．０３ｇを加えてよく攪拌した。その後心筋トロポニンＴを１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して熱処理前の溶液を得た。この溶液を使用して、実施例１と同様に熱処理を行い、比較の心筋トロポニンＴ含有水量液（Ｒ６）を得た。また、実施例１と同様に初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量の測定を行なった。
【００５２】
＜発光量の測定＞
実施例及び比較例の心筋トロポニンＴ溶液の発光量は、以下の測定方法により測定し、発光量を求めた。
測定はエクルーシス試薬トロポニンＴIIIを用いて、ＥＣＬｕｓｙｓ２０１０（Ｒｏｃｈｅ（株）社製）にて行なった。
【００５３】
実施例及び比較例で得られた初期発光量、熱処理後発光量、２ヶ月後発光量を表１に示す。また、実施例及び比較例で得られた熱処理前の溶液のｐＨを合わせて記載した。
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、比較用の水溶液に比べて、熱処理の効果で初期発光量に比べて熱処理後発光量が大きく増大した。また、約２ヶ月後でも発光量が十分あり、安定であった。
【００５４】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は以下の効果を奏する。
（１）心筋トロポニンＴを、溶液状態で長期間安定して保存することができる。
（２）従来行われた凍結乾燥しなくとも安定性を長期間維持できるようになり、抗原を溶解するという煩雑な調製操作により生じる濃度の誤差がなくなり、測定精度と再現性が良い免疫測定ができる。
よって、本発明の心筋トロポニンＴ含有水溶液は、臨床検査の分野において酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に用いることができる。特に、抗原を含有した溶液中の抗原の失活を防止し、安定して保存することができることから、標準液として好適に使用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）。
【請求項２】
水溶液（Ａ）が、さらにウシ血清アルブミン及び緩衝剤を含有してなる請求項１に記載の心筋トロポニンＴ含有水溶液。
【請求項３】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）が、（Ａ）の重量を基準として、非イオン性界面活性剤を０．１重量％〜１重量％含む請求項１又は２に記載の心筋トロポニンＴ含有水溶液。
【請求項４】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理することを特徴とする心筋トロポニンＴ含有水溶液（B）の製造方法。
【請求項１】
ｐＨが６．０〜８．５である心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理して得られる心筋トロポニンＴ含有水溶液（Ｂ）。
【請求項２】
水溶液（Ａ）が、さらにウシ血清アルブミン及び緩衝剤を含有してなる請求項１に記載の心筋トロポニンＴ含有水溶液。
【請求項３】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）が、（Ａ）の重量を基準として、非イオン性界面活性剤を０．１重量％〜１重量％含む請求項１又は２に記載の心筋トロポニンＴ含有水溶液。
【請求項４】
心筋トロポニンＴを含む水溶液（Ａ）を３０℃〜５０℃で７２時間〜２４０時間加熱処理することを特徴とする心筋トロポニンＴ含有水溶液（B）の製造方法。
【公開番号】特開２００９−２３４９８８（Ｐ２００９−２３４９８８Ａ）
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−８３２３７（Ｐ２００８−８３２３７）
【出願日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
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