慢性炎症状態の治療
患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、慢性炎症状態の治療、および特に患者におけるこのような状態の影響を低減するまたはさもなければ寛解させる方法に関する。１つの特定の実施形態では、本発明は、関節炎、特に、多数の炎症性メディエーターの存在および可動関節の破壊を特徴とする慢性の炎症性疾患である関節リウマチの治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−３（ＩＬ−３）は、免疫系の一部として疾患に対する身体の自然応答を改善することができるサイトカインである。ＩＬ−３は、多分化能造血幹細胞（多能性）から骨髄系前駆細胞への分化を刺激するほか、骨髄細胞系列（赤血球、血小板、顆粒球、単球、および樹状細胞）における全ての細胞の増殖を刺激する。ＩＬ−３は活性化Ｔ細胞により分泌されて免疫応答における骨髄からのＴ細胞の増殖および分化を支持する。
【０００３】
ＩＬ−３は、インターロイキン−３受容体（ＩＬ−３Ｒ）として知られる特異的な細胞表面受容体への結合を通じて活性を発揮する。ＩＬ−３Ｒは、７０ｋＤａ ＩＬ−３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）および１２０〜１４０ｋＤａ ＩＬ−３Ｒベータ（ＣＤ１３１）から構成されたヘテロ二量体構造である。ＩＬ−３Ｒアルファ鎖（ＩＬ−３Ｒα）は極めて短い細胞内ドメインを有するが、ＩＬ−３Ｒベータ鎖（ＩＬ−３Ｒβ）は極めて大きな細胞質ドメインを有する。ＩＬ−３Ｒアルファは、比較的低い親和性でＩＬ−３に結合する。しかし、ＩＬ−３Ｒベータの存在下、ＩＬ−３ＲアルファはＩＬ−３に対しはるかに高い親和性を有する。ＩＬ−３結合後にシグナル伝達がどのように生じるかは明らかではないが、最近の研究はシグナル伝達が十二量体を含む高次複合体の形成を必要とすることを示唆している１。ＩＬ−３Ｒベータ鎖は、ＩＬ−５およびＧＭ−ＣＳＦの受容体にも共有される。ＩＬ−３受容体を発現することが知られる細胞には、造血前駆細胞、マスト細胞、好塩基球および血中単球のほか、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、マスト細胞、好酸球、巨核球、赤血球細胞、およびＣＤ５＋ Ｂ細胞亜集団を含むさまざまな造血細胞系列のより成熟した細胞が含まれる２。非造血細胞も、幾つかの内皮細胞、間質細胞、樹状細胞およびライディッヒ細胞を含め、受容体を発現することが示されている２，３。
【０００４】
ＩＬ−３は、免疫系と造血系の間の潜在的に重要な関連を提供する４。ＩＬ−３は、特に免疫反応中のマスト細胞および好塩基球の産生および機能にとって重要であると考えられる５。ＩＬ−３はまた、マクロファージ系列集団の増殖および活性化を促進することもでき６〜８、樹状細胞の発生を助けることもできる９。上述の通り、ＩＬ−３シグナル伝達は、共通する受容体ベータサブユニット（ＩＬ−３Ｒβ）および特異的リガンド結合アルファサブユニット（ＩＬ−３Ｒα）により媒介されるが、マウスではさらなるベータサブユニットがある１０。
【０００５】
関節リウマチ（ＲＡ）などの慢性炎症状態におけるＩＬ−３の役割に関しては、ほとんど分かっていない。ＩＬ−３ ｍＲＮＡは、ある研究ではＲＡ患者の滑膜で検出できなかったが１１、より後の研究では見出された１２。全員ではないが一部のＲＡ患者は、検出可能なＩＬ−３を循環中に有することが見出されており１３、ＩＬ−３遺伝子プロモーターにおける一塩基多型とＲＡの間に関連がある１４。しかし、ＩＬ−３レベルは、ラット関節炎モデルでの関節炎進行中に低下し１５、ＩＬ−３投与はマウス炎症性関節炎を阻害することが最近報告された１６。
【０００６】
本発明に至る研究において、本発明者らは、ＲＡなどの慢性炎症状態の影響は、ＩＬ−３とＩＬ−３Ｒの間のリガンド／受容体相互作用を遮断または妨げることにより阻害または低減され得ることを見出した。この知見は、ＩＬ−３投与が炎症性関節炎における炎症反応を減少させ、軟骨および骨量減少を間接的に抑止する潜在的可能性を有することを示唆する最近の報告１６を考えると、非常に驚きであり、予想外であった。
【０００７】
本明細書で言及された出版物の書誌詳細は、本明細書の最後に言及されている。
【０００８】
いずれかの先行出版物（またはこれから得られた情報）、または既知であるいずれかの事項への本明細書での言及は、その先行出版物（またはこれから得られた情報）または既知の事項が、本明細書が関連する当該分野における共通の一般的知識の一部を形成することの了承もしくは承認、またはいかなる形態の示唆としても受け取られず、受け取られるべきでない。
【０００９】
本明細書およびこれに続く特許請求の範囲を通じて、文脈が特に別途に必要としない限り、単語「含む（comprise）」、ならびに「含む（comprises）」および「含む（comprising）」などの変形形態は、述べられた整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の除外を意味しないと理解されよう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
１つの態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断もしくは阻害する薬剤の使用を提供する。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤を提供する。
【００１３】
本発明の他の態様では、薬剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に医薬組成物として製剤化されてもよく、あるいは薬剤は、患者における慢性炎症状態の治療方法に従って薬剤を使用するための説明書を場合により含むキットとして提供されてもよい。
【００１４】
慢性炎症状態は、例えば、関節炎、さらに特定すると、ＲＡなどの炎症性関節炎であってもよい。
【００１５】
好ましくは、薬剤は、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害するものである。好ましくはまた、患者はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】抗ＩＬ−３ ｍＡｂまたはＰＢＳ（対照）の投与を受けているマウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）進行（臨床スコア）を示す図である。結果は平均±ＳＥＭとして表されている。ｎ＝１０マウス治療群、ｎ＝６マウス対照群。
【図２】単球（ＰＢＭＣ由来のＣＤ１４＋）の細胞生存能に対するＩＬ−３シグナル伝達の影響を示す図である。単球は、６ｃｍ ＩＷＡＫＩ（低付着性）ＴＣ皿１枚あたり約１．８×１０６細胞の密度で播種され、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳおよび：ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）単独、ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）単独、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体において７日間培養した。ＩＬ−３Ｒ抗体は、いずれの場合も１μｇ／ｍｌで使用した。４日目に新たなＩＬ−３およびＩＬ−３Ｒ抗体を添加した。７日目に細胞を取り除き、カウントした。
【図３】ＩＬ−３が好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃを用量依存的に誘導することを示す図である。蕁麻疹患者（ＵＲＴ）および正常なドナー（ＮＯＲ）由来のＰＢＭＣを単離し、多クローン性ＩｇＥ、ＦＭＬＰ、ＦＭＬＰおよびＩＬ−３または漸増濃度のＩＬ−３により刺激した。ＣＤ２０３＋ｖｅ好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色および好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃに対する抗体による染色、次いでフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図４】抗ＩＬ−３Ｒ抗体がＩＬ−３誘導好塩基球活性化を遮断することを示す図である。正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、中和抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ＣＳＬ３６０）の存在下または非存在下、漸増濃度のＩＬ−３により刺激した。ＣＤ２０３＋ｖｅ好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色および好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃに対する抗体による染色、次いでフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図５】抗ＣＤ１２３モノクローナル抗体（ＣＳＬ３６２）が好塩基球を時間依存的に枯渇させることを示す図である。正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しでまたは枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２）と共にさまざまな時間（示されているような）にわたりインキュベートした。残存好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色およびフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図６】抗ＣＤ１２３ ｍＡｂが、２４時間以内に好塩基球を再現可能に枯渇させることを示す図である。３名の正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しでまたは枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２）と共に２４時間インキュベートした。残存好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色およびフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図７】抗ＣＤ１２３ ｍＡｂが、ＮＫ細胞を２４時間以内に活性化することを示す図である。３名の正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しで（実線）または枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２、点線）と共に２４時間インキュベートした。ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋ｖｅ細胞）の活性化は、ＣＤ１６ダウンレギュレーションにより判定した。ＰＢＭＣは、ＮＫ細胞を同定するために抗ＣＤ５６抗体により染色し、抗ＣＤ１６抗体により染色した。抗体無しの対照と比較したＣＤ１６染色の喪失は、フローサイトメトリーにより判定した。
【図８】抗ＩＬ−３Ｒα抗体のインビボでの投与による末梢血中のマウス好塩基球の枯渇を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、抗ＩＬ−３Ｒα抗体（１Ｃ２）、抗ＣＤ２００Ｒ３（Ｂａ１０３）またはアイソタイプ対照抗体マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）もしくはラットＩｇＧ２ｂ（ｒＩｇＧ２ｂ）を静脈内投与した。全ての抗体は、マウス１匹あたり１８μｇで注射した１Ｃ２を除いて、マウス１匹あたり３０μｇで注射した。末梢血細胞を抗体投与２４時間後に単離し、好塩基球を同定するためにＦｃεＲ１αおよびＣＤ４９ｂ発現について染色した。フローサイトメトリー分析からの代表的な染色プロフィールが示されている（ａ）。好塩基球集団が枠で囲まれている。マウス１匹あたりの好塩基球のパーセンテージはフローサイトメトリー分析から計算した。１群あたり３匹のマウスの平均（＋ＳＥＭ）が示されている（ｂ）。＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊：ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
１つの態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法を提供する。
【００１８】
好ましくは、薬剤は、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害するものである。
【００１９】
本発明に従って治療され得る慢性炎症状態は、当業者によく知られており、特に関節炎、さらに特定すると成人および若年性ＲＡなどの炎症性関節炎を含む。他の適応症には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；クローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）；アテローム性動脈硬化；強皮症；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；シェーグレン症候群；通風；変形性関節炎；リウマチ性多発筋痛；強直性脊椎炎を含む血清陰性脊椎関節症；ライター病、乾癬性関節炎、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）；慢性ライム病関節炎；スティル病；慢性蕁麻疹；関節リウマチに関連したブドウ膜炎、ならびに皮膚筋炎、封入体筋炎、多発性筋炎、およびリンパ脈管筋腫症を含む、随意筋および他の筋肉の炎症をもたらす障害が含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
「治療」への本明細書での言及は、最も幅広い文脈において考えられるべきであり、治療処置および予防（prophylactic）または予防（preventative）対策の両方を含む。治療を必要とする患者には、慢性炎症状態に既に苦しんでいる者のほか、このような状態が予防されるべき者が含まれる。該状態から部分的または完全に回復した患者も、治療を必要とする場合がある。用語「治療」は、患者が完全回復まで治療されることを必ずしも意味しない。したがって、治療には、特定の慢性炎症状態の症状の低減または寛解のほか、特定の慢性炎症状態の発症、発達もしくは進行の停止もしくは少なくとも遅延、特定の慢性炎症状態の重症度の低減、または特定の慢性炎症状態の除去が含まれる。
【００２１】
本発明に従って投与される薬剤は、好ましくはＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害することにより、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象の活性化を遮断または阻害する。本明細書では、「患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する」への言及は、ＩＬ−３開始シグナル伝達のレベルの低下をもたらす任意の介入を包含する。このような介入には、例として、ＩＬ−３シグナル伝達事象の活性化を特異的に遮断または阻害する薬剤（例えばＩＬ−３、ＩＬ−３Ｒα、ＩＬ−３Ｒβを標的にする薬剤）の使用のほか、ＩＬ−３シグナル伝達することができる細胞を選択的に標的にすることにより細胞死を誘導することを目的とした薬剤（例えばＩＬ−３Ｒを標的にし、抗細胞部分を保有する薬剤）の使用が含まれる。
【００２２】
本発明の１つの実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子であってもよい。
【００２３】
本明細書では用語「抗原結合分子」は、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒトモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体を含むインタクトな免疫グロブリン、または免疫グロブリンの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む）および／もしくは可変ドメインを含むフラグメント（インタクトな免疫グロブリンと、免疫グロブリンの結合パートナー（例えば宿主タンパク質）への特異的結合について競合するもの）を指す。構造に関係なく、抗原結合フラグメントは、インタクトな免疫グロブリンにより認識される同じ抗原と結合する。抗原結合フラグメントは、合成的に、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断により産生することができ、あるいは抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術により遺伝子操作することができる。抗原結合分子およびそのフラグメントの産生方法は、当技術分野でよく知られており、例えば、本明細書に参照により組み込まれているAntibodies、A Laboratory Manual、E. HarlowおよびD. Lane編（1988年）、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、New Yorkに記載されている。
【００２４】
好ましくは、抗原結合分子はモノクローナル抗体である。
【００２５】
本発明のこの実施形態では、抗原結合分子は、修飾Ｆｃ領域、さらに特定すると、Ｆｃ受容体への増強された結合親和性、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの増強されたエフェクター機能を提供するために修飾されたＦｃ領域を含むことができる。抗体のＩｇＧクラスに関して、これらのエフェクター機能は、さまざまな免疫細胞上で発現されるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）と呼ばれる受容体のファミリーとのＦｃ領域の結合により支配される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらの細胞を結合抗原の部位に動員して、典型的にはシグナル伝達およびこれに続く免疫応答をもたらす。エフェクター機能を増強するために、特に「親」Ｆｃ領域と比べてＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を変化させるために、ＦｃγＲの抗体Ｆｃ領域への結合親和性を最適化する方法は、当業者によく知られており、例えば、国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号に記載されている。これらの方法には、関連するＦｃ受容体との相互作用を増強するための、ならびにＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを亢進する潜在的可能性を増加させるための抗体のＦｃ領域の修飾が含まれ得る。ＡＤＣＣ活性の増強はまた、ＩｇＧ１抗体にＦｃ領域の保存Ａｓｎ２９７で共有結合したオリゴ糖の修飾後にも記載されている。
【００２６】
本明細書では、抗原結合分子（例えば抗体または抗体フラグメント）、およびこの結合パートナー（例えば抗原）の相互作用に関する用語「選択的に結合する」は、相互作用が、結合パートナーにおける特定の構造（例えば抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。言い換えれば、抗体または抗体フラグメントは、結合パートナーが他の分子または生物の混合物中に存在する場合でも、結合パートナーを優先的に結合または認識する。
【００２７】
いかなる特定の理論に縛られることを望むものではないが、本発明のこの実施形態では、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合することにより、抗体または抗体フラグメントなどの抗原結合分子は、リガンド／受容体相互作用を遮断または阻害し、これによりＩＬ−３シグナル活性化を妨げると考えられる。
【００２８】
１つの実施形態では、抗原結合分子は、ＩＬ−３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）に選択的に結合するモノクローナル抗体であってもよい。従って、抗原結合分子は、白血病細胞系および初代細胞の両方のＩＬ−３媒介増殖および活性化を阻害することが以前に示されている、ＣＤ１２３に対して惹起されたモノクローナル抗体（ＭＡｂ）７Ｇ３であってもよい（Ｌｏｐｅｚに対する米国特許第６，１７７，６７８号参照）。あるいは、薬剤は、マウスモノクローナル抗体７Ｇ３の軽鎖可変（light variable）および重鎖可変（heavy variable）領域をヒトＩｇＧ１定常領域に移植して得られるキメラ抗体であるモノクローナル抗体ＣＳＬ３６０であってもよい（国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号参照）。７Ｇ３のように、ＣＳＬ３６０は、ＣＤ１２３（ヒトＩＬ−３Ｒα）に高い親和性で結合し、ＩＬ−３と受容体への結合において競合し、この生物学的活性を遮断する。ＣＳＬ３６０は、ヒト環境においてエフェクター活性を開始することができるであろうヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域により、ヒト治療剤としての潜在的有用性の利点も有する。さらに、ヒトにおいてＣＳＬ３６０は、マウス７Ｇ３等価物と比べてクリアランスの減少を示し免疫原性になりにくい可能性がある。この抗原結合分子のさらなる例には、７Ｇ３またはＣＳＬ３６０のヒト化抗体バリアント、完全ヒト抗ＣＤ１２３抗体、および例えば国際特許公開第ＷＯ２００９／０７０８４４号の実施例４に記載されているような増強されたエフェクター機能（ＡＤＣＣ活性など）を有する抗ＣＤ１２３抗体が含まれる。
【００２９】
本発明の別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３Ｒに結合するが、ＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないか、またはＩＬ−３シグナル活性化の減少を少なくとももたらすかのいずれかであるＩＬ−３ムテインであってもよい。一般に、これらの「ＩＬ−３ムテイン」には、１つまたは複数の隣接または非隣接アミノ酸残基の付加、欠失および／または置換によって異なる天然または人工変異体が含まれる。ＩＬ−３Ｒに結合するが、ＩＬ−３シグナル活性化の減少を示すＩＬ−３ムテインの例は、１６／８４Ｃ→Ａ変異体１７である。ＩＬ−３ムテインには、１つまたは複数の残基が、例えば、インビボでの半減期を増加するように修飾されている修飾ポリペプチドも含まれ得る。これは、ＰＥＧ群などの他のエレメントを付加することによって達成することができる。ポリペプチドのペグ化の方法は当技術分野でよく知られている。
【００３０】
本発明の別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である。このような可溶性受容体の例には、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合タンパク質が含まれる。
【００３１】
さらなる別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３シグナル伝達することができる細胞を標的にして細胞死を誘導することができる抗細胞部分を含んでもよい。幾つかの実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子にコンジュゲートした抗細胞部分を含むことができる。他の実施形態では薬剤は、ＩＬ−３ムテインにコンジュゲートした抗細胞部分を含むことができる。適切な抗細胞部分の例には、化学療法薬、放射性同位体または細胞毒素が含まれる。化学療法薬には、ステロイドなどのホルモン；シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサートまたはアミノプテリンなどの代謝拮抗剤；アントラサイクリン；マイトマイシンＣ；ビンカアルカロイド；デメコルシン；エトポシド；ミトラマイシン；カリケアマイシン、ＣＣ−１０６５およびその誘導体、またはクロラムブシルもしくはメルファランなどのアルキル化剤、凝固剤、サイトカイン、増殖因子、細菌内毒素もしくは細菌内毒素の脂質Ａ部分が含まれる。放射性同位体には、例えば、２１１アスタチン、２１２ビスマスおよび２１３ビスマスなどのα放射体のほか、例えば、１３１ヨウ素、９０イットリウム、１７７ルテチウム、１５３サマリウムおよび１０９パラジウムなどのβ放射体、ならびに例えば、１１１インジウムなどのオージェ放射体が含まれる。細胞毒素には、一般に、ほんの数例を述べるだけでも、Ａ鎖毒素、リボソーム不活化タンパク質、α−サルシン（a-sarcin）、アスペルギリン、レストリクトシン、リボヌクレアーゼ、ジフテリア毒素もしくは緑膿菌外毒素などの植物、真菌または細菌に由来する毒素のほか、例えば、カハラリドＦ、エクテナサイジン（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（商標））、またはバリオリンＢなど、海綿などの海洋生物に由来する細胞毒素が含まれる。
【００３２】
薬剤は、有効量で投与される。「有効量」は、少なくとも部分的には所望の応答を達成するのに、または進行を遅延もしくは阻害するのに、または治療される特定の状態の進行を完全に停止するのに必要な量を意味する。該量は、治療される個体の健康および身体状態、治療される個体の人種的背景、所望の保護の程度、組成物の処方、医学的状況の評価、ならびに他の関連する要因に応じて変わる。該量は、日常的な試行を通じて決定することができる比較的広範な範囲になると予想される。必要ならば、薬剤の投与は、１回または複数回繰り返してもよい。投与される実際の量は、治療されている状態の性質および薬剤が投与されている速度の両方により決定されるであろう。
【００３３】
好ましくは、患者はヒトであるが、本発明は、霊長類、家畜動物（例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ロバ）、実験室試験動物（例えばマウス、ウサギ、ラット、モルモット）、コンパニオン動物（例えばイヌ、ネコ）および捕獲野生動物を含む他の哺乳動物患者の治療および／または予防にまで及ぶ。
【００３４】
本発明によれば、薬剤は好ましくは、非経口投与経路により患者に投与される。非経口投与には、注射、点滴等による投与を含む、消化管を通じてではない（すなわち、腸内ではない）任意の投与経路が含まれる。注射による投与には、例として、静脈の中（静脈内）、動脈の中（動脈内）、筋肉の中（筋肉内）および皮膚の下（皮下）が含まれる。薬剤は、デポまたは徐放製剤として、例えば、皮下、皮内または筋肉内に、所望の薬理効果を得るのに十分である投与量で投与することもできる。
【００３５】
別の態様では、本発明は、患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断もしくは阻害する薬剤の使用を提供する。
【００３６】
さらに別の態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤を提供する。
【００３７】
本発明のこの態様では、上記のような薬剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に医薬組成物として製剤化することができる。
【００３８】
非経口投与に適切な組成物は、好都合には、レシピエントの血液と好ましくは等張である、有効成分の滅菌水性製剤を含む。この水性製剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて既知の方法により処方することができる。滅菌注射可能製剤はまた、例えばポリエチレングリコールおよび乳酸中の溶液のような無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能溶液または懸濁液であってもよい。使用することができる許容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液、適切な炭水化物（例えばスクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌した不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として好都合には使用される。この目的のため、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激不揮発性油を使用してもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製での使用が見出される。
【００３９】
このような治療組成物の処方は、当業者によく知られている。適切な薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤には、ありとあらゆる従来の溶媒、分散媒、充填剤、固体担体、水溶液、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野でよく知られており、例として、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Publishing Company、Pennsylvania、USAに記載されている。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるこの使用が企図される。補足的活性成分もまた、組成物に組み込むことができる。
【００４０】
本発明のさらなる態様では、（ｉ）上記のような薬剤、および場合により（ｉｉ）患者における慢性炎症状態の治療方法に従って薬剤を使用するための説明書を含むキットが提供される。
【００４１】
本発明は、以下の非限定的実施例によりさらに例示される。
【実施例１】
【００４２】
マウスＩＬ−３に対する中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の疾患進行に対する効果を、関節リウマチに関して最も幅広く使用されているマウスモデルであるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルで試験した。
【００４３】
オスＤＢＡ／１マウス（８〜１２週齢、１群あたり１０匹のマウス）を、０および２１日目にアジュバント中のＩＩ型コラーゲンで皮内免疫化した１８。
【００４４】
マウスは、四肢の発赤および腫脹について評価し、臨床スコアは肢ごとに、確立された採点システムを用いて以下のように割り当てた：０−正常；１−軽度の腫脹および／または紅斑；２−広範な腫脹および／または紅斑；３−重度の腫脹；４−重度の腫脹および／または硬直。関節炎の重症度は、全四肢について合計した平均臨床スコア（マウス１匹あたり範囲０〜１６）を単位として表される。
【００４５】
マウスは、２１、２３、２５、２８および３０日目に２５０μｇ抗ＩＬ−３ ｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）／マウスまたはＰＢＳで治療した。図１に見ることができるように、疾患重症度の抑制が抗ＩＬ−３治療群においてあった。
【００４６】
この実験は特に有望であり、この理由は、この特定の実験では極めて重度の疾患の極めて迅速な誘導があり、対照マウスではすぐにプラトーに達したためである。このプラトーは、通常、約１週間後に達する。
【００４７】
比較的急性のマウスＣＩＡに関する文献データは、中和抗ＩＬ−３ Ａｂは疾患誘導後すぐに必要とされ、疾患発症後遅延した場合は効果がないことを示している１９。これは、ＩＬ−３が炎症において標的にならないであろうことを必ずしも意味しない。われわれは、関節リウマチ（ＲＡ）などの疾患の促進に関与する背景にある炎症性／自己免疫事象、およびこれらの事象が動物モデルにおいていかに密接に反映されるかをまだ理解していない。ＲＡなどの慢性状態についてさえ、「急性発症」疾患を有する患者がいる。また、抗ＩＬ−３療法は、例えばＲＡにおいて依然として有益である可能性があり、この理由は、該疾患は再発することが多いので、この増悪を抑制する機会を提供するためである。一般的に使用される抗炎症性グルココルチコイドは、炎症性メディエーター遺伝子発現を転写レベルでダウンレギュレートすることによって作用する−抗炎症性グルココルチコイドは、刺激を誘発した後で添加された場合、代理炎症アッセイではインビトロで働かないと広く考えられていることも留意されたい。
【実施例２】
【００４８】
ＣＤ１４＋単球における炎症促進性サイトカインとしてのＩＬ−３シグナル伝達の役割を調査した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、赤十字ドナーバフィーパック（buffy pack）から単離した。ＣＤ１４＋単球は次いで、フローサイトメトリーにより評価した細胞の約８０％がＣＤ１４＋となるように、ネガティブ選択により精製した（ＭＡＣＳ分離）。単球を、６ｃｍ ＩＷＡＫＩ（低付着性）ＴＣ皿１枚あたり約１．８×１０６細胞の密度で播種し、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳおよび：ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）単独、ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体、ＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）単独、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体において７日間培養した。ＩＬ−３Ｒ抗体は、いずれの場合も１ｕｇ／ｍｌで使用した。４日目に新たなＩＬ−３およびＩＬ−３Ｒ抗体を添加した。７日目に細胞を取り除き、ＲＮＡ溶解緩衝液で溶解する前にカウントした。結果は、ＩＬ−３が、単球に生存促進性刺激を用量依存的に提供すること、およびこの効果は抗ＩＬ−３Ｒ抗体により克服されたことを示している（図２）。従って、ＣＤ１４＋単球においてＩＬ−３シグナル伝達を遮断または阻害することは、炎症の部位でのＣＤ１４＋単球の生存および蓄積を防ぎ、このため炎症を制御する手段を提供する。
【実施例３】
【００４９】
一般的に蕁麻疹（hives）として知られる蕁麻疹（urticaria）は、サイズが数センチメートルからほんの数ミリメートルまでに及ぶ反復する膨疹として現れる炎症状態である。一般に、膨疹はピンク色であり中心の色が薄く、ヒリヒリまたはチクチクする感覚を伴う場合がある。蕁麻疹は、何歳でも呈す可能性があり、集団の１％〜５％は、生涯におけるある時期に蕁麻疹を呈すであろう。慢性蕁麻疹は、重度のアトピー性皮膚炎、乾癬または座瘡を有する患者と類似して、生活の質に多大な影響を及ぼす。慢性蕁麻疹のほとんどのケースは、本来は突発性であるが、多くのケース（３５％〜５０％）で高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲ１）に対する自己抗体またはＩｇＥ自体が存在することが徐々に明らかになりつつあり、これは慢性蕁麻疹が自己免疫疾患であり得ることを示唆している。マスト細胞および好塩基球は、ＦｃεＲ１を発現する主な細胞型であり、蕁麻疹患者において自己抗体に応答する。活性化された場合、マスト細胞および好塩基球は、蕁麻疹の膨疹形成を促進する主なエフェクター分子である大量のヒスタミンを放出する。マスト細胞および好塩基球は両方ともＩＬ−３受容体を発現し、ＩＬ−３は、ＩｇＥおよびＣ５ａなどのトリガーに曝露された場合、増加されたレベルのヒスタミンなどのエフェクター分子を産生するようにこれらの細胞を刺激することができる。
【００５０】
７名の蕁麻疹患者試料および４名の正常なドナー試料由来のＰＢＭＣを分析した。ＩＬ−３は、ヒト好塩基球をエクスビボで活性化することができ（図３）、中和抗ＩＬ−３Ｒα抗体（ＣＳＬ３６０−国際特許公開第ＷＯ２００９／０７０８４４号参照）は、ＩＬ−３誘導ヒト好塩基球活性化を阻害することができる（図４）。ＡＤＣＣ最適化抗ＩＬ−３Ｒα抗体（ＣＳＬ３６２−国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号に記載されているような、ヒト化および親和性成熟抗ＣＤ１２３ ｍＡｂ １６８−２６のフコシル化（afucosylated）バリアント）は、ＰＢＭＣ由来のヒト好塩基球を時間依存的に枯渇させることができる（図５）。完全なまたは完全に近い好塩基球枯渇は、ＣＳＬ３６２添加の２４時間以内に３名の独立したドナーにおいて観察された（図６）。ＮＫ細胞活性化は、ＣＳＬ３６２の添加の２４時間以内に観察され、これは好塩基球の枯渇がＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣを介することを示唆している（図７）。
【実施例４】
【００５１】
この実施例は、抗ＩＬ−３Ｒ抗体が、インビボでの好塩基球の活性化の数およびレベルにも影響し得ることを示す。メスＢＡＬＢ／ｃマウス（１０〜１２週齢）を、抗ＩＬ３Ｒａ抗体１Ｃ２（実施例５参照）または対照マウスＩｇＧ２ａの尾静脈静脈内注射で治療した。ＣＤ２００Ｒ３に対して標的にし、マウス好塩基球を特異的に枯渇させることが示されている市販の抗体Ｂａ１０３２０、およびこの対照抗体ラットＩｇＧ２ｂを、対照として一緒に試験した。全ての抗体は、１８μｇで投与した１Ｃ２を例外として、２００μｌのＰＢＳ中３０μｇで注射した。１日後、末梢血および腹膜細胞を単離し、細胞の単一懸濁液を調製した。細胞は、非特異的結合を防ぐため抗ＦｃγＲＩＩ−ＩＩＩと共に前インキュベートした。細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＦｃεＲＩαモノクローナル抗体およびＰＥコンジュゲート抗ＣＤ４９ｂモノクローナル抗体で染色して好塩基球（ＦｃεＲＩα＋ ＣＤ４９ｂ＋）を同定した。ＦＩＴＣハムスターＩｇＧおよびＰＥラットＩｇＭを、それぞれＦｃεＲＩαおよびＣＤ４９ｂ抗体のアイソタイプ対照として使用した。残屑は、前方散乱（ＦＳＣ）対側方散乱（ＳＳＣ）を用いて除外（gated out）し、死細胞は、７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）染色により区別した。染色細胞を次いでＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析し、データはＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。
【００５２】
１８μｇ抗ＩＬ３Ｒα抗体１Ｃ２の単回静脈内注射は、アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ２ａ）治療マウスにおけるレベルの約２３％まで、末梢血中の好塩基球頻度の劇的な減少を誘導した（図８）。この枯渇効率は、３０μｇ Ｂａ１０３の投与からのものに匹敵した。好塩基球に対する効果とは違い、抗ＩＬ３ＲαまたはＢａ１０３抗体で治療したマウスでは腹膜マスト細胞の頻度に有意な減少は見られなかった（データ不図示）。マスト細胞に関するＢａ１０３抗体での観察は、Obataおよび同僚らによる研究と一致する２０。
【実施例５】
【００５３】
１）マウスＩＬ３受容体特異的モノクローナル抗体の生成
マウスＩＬ−３Ｒアルファ（ｍＩＬ３Ｒα）を特異的に認識した抗体配列を、糸状バクテリオファージＭ１３（Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．）の表面でｇＩＩＩタンパク質に融合したＦａｂフラグメントとして発現されるヒト抗体配列のライブラリーから単離した。抗ｍＩＬ３Ｒαファージディスプレイ抗体フラグメントは、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃフラグメント）の残基１００〜３３０に短いポリペプチドリンカー（配列：ＩＥＧＲＩＤ）により融合したｍＩＬ３Ｒαのアミノ酸１７〜３３１から成る市販の精製組換え融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．による供給）と共に、ファージライブラリーをインキュベートすることによって単離した。特異的に結合したファージを濃縮し、標準的方法を用いて個々のクローンとして単離した。個々のクローンは、もともとの標的（ｍＩＬ３Ｒα−Ｆｃ融合）、およびＣ末端ヘキサヒスチジンタグ（ｍｓＩＬ−３Ｒ−６Ｈｉｓ）を有する残基１〜３３１として発現されるｍＩＬ３Ｒαの細胞外ドメインの両方に対する特異的結合について試験した。これらの標的に結合したが対照タンパク質に結合しなかったファージクローンを、さらなる分析のため選択した。固有のクローンを、コードされた抗体の両方のポリペプチド鎖のＤＮＡ配列決定により同定し、ｍＩＬ−３Ｒ−６Ｈｉｓに対するこれらのクローンの結合親和性を競合ＥＬＩＳＡにより定量化した。許容可能な親和性を有するクローンを、さらなる分析のための再操作（re-engineering）およびキメラ抗体（ヒト可変領域およびマウスＩｇＧ２ａ／カッパ定常領域）としての発現のために選択した。
【００５４】
２）一過性発現のための哺乳動物発現ベクター構築
ｍＩＬ３Ｒα特異的抗体の重鎖および軽鎖可変領域を、標準的な分子生物学技術を用いてファージミドベクターからＰＣＲ増幅した。重鎖可変領域は、次いで、マウスＩｇＧ２ａ定常領域および末端終止コドンを含むように修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に基づく、哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ｍＩｇＧ２ａにクローン化した。軽鎖可変領域は、マウスカッパ定常領域を含むように修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクターに基づく、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ｍκにクローン化した。発現ベクターは、コザック翻訳開始配列、ＡＴＧ開始コドンおよび適切なシグナルペプチドも含有した。
【００５５】
３）細胞培養
無血清懸濁液適応２９３−Ｔ細胞をＧｅｎｅｃｈｏｉｃｅ Ｉｎｃ．から得た。細胞は、ペニシリン／ストレプトマイシン／ファンギゾン試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養した。トランスフェクション前に細胞を、８％ＣＯ２の雰囲気で加湿インキュベーター中、３７℃で維持した。
【００５６】
４）一過性トランスフェクション
２９３−Ｔ細胞を用いた抗ｍＩＬ３Ｒα発現プラスミドの一過性トランスフェクションは、２９３フェクチントランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて製造者の指示に従い行った。軽鎖および重鎖発現ベクターを組み合わせ、２９３−Ｔ細胞にコトランスフェクトした。細胞（１０００ｍｌ）に、１×１０６生細胞／ｍｌの最終濃度でトランスフェクトし、２／１０ Ｗａｖｅ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒシステム２／１０または２０／５０（Ｗａｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において８％ＣＯ２の雰囲気で、３７℃、５日間、Ｃｅｌｌｂａｇ ２Ｌ（Ｗａｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中でインキュベートした。培養条件は、８°の角度で１分あたり３５振動（rock）であった。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、０．１％ｖ／ｖの最終濃度まで、トランスフェクション４時間後に添加した。トランスフェクション２４時間後、細胞培養物に、０．５％ｖ／ｖの最終濃度までＴｒｙｐｔｏｎｅ Ｎ１（Ｏｒｇａｎｏｔｅｃｈｎｉｅ、フランス）を補充した。細胞培養上清を２５００ｒｐｍでの遠心分離により回収し、次いで精製前に０．４５μＭフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ）に通した。
【００５７】
５）タンパク質発現の分析
５日後、２０μｌの培養上清を４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気泳動し、抗体をクマシーブルー試薬による染色により可視化した。
【００５８】
６）抗体精製
抗ｍＩＬ３Ｒα抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂（５ｍｌ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）が３０ｍｌ Ｐｏｌｙ−Ｐｒｅｐ空カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ）にパックされたプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、４℃で精製した。樹脂を、１０カラム容量のパイロジェンフリーのＧＩＢＣＯ蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で最初に洗浄して貯蔵エタノールを除去し、次いで５カラム容量のパイロジェンフリーリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で平衡化した。濾過した馴化細胞培養培地（１Ｌ）を、重力送りにより樹脂に添加した。樹脂を、次いで５カラム容量のパイロジェンフリーのＰＢＳで洗浄して非特異的タンパク質を除去した。結合抗体を２カラム容量の０．１Ｍグリシン ｐＨ２．８（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で、０．２カラム容量の２Ｍ トリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）を含有する画分に溶出して低ｐＨを中和した。溶出された抗体は、５Ｌ ＰＢＳに対して１２ｍｌ Ｓｌｉｄｅ−Ａ−ＬｙｚｅｒカセットＭＷカットオフ３．５ｋＤ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＩＬ）中、４℃で１８時間透析した。抗体濃度は、Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）分光光度計を用いて２８０ｎｍでの吸光度を測定して判定した。抗体の純度は、ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより分析した。ＳＤＳ-ＰＡＧＥでは、還元試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）中２μｇタンパク質をＮｏｖｅｘ １０〜２０％トリスグリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）に添加し、１５０Ｖの定電圧を、トリスグリシンＳＤＳランニング緩衝液によりＸＣｅｌｌ ＳｕｒｅＬｏｃｋ Ｍｉｎｉ-Ｃｅｌｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）に９０分間適用した後、製造者の指示に従って、クマシー染色を使用して可視化した。
【００５９】
（参考文献）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、慢性炎症状態の治療、および特に患者におけるこのような状態の影響を低減するまたはさもなければ寛解させる方法に関する。１つの特定の実施形態では、本発明は、関節炎、特に、多数の炎症性メディエーターの存在および可動関節の破壊を特徴とする慢性の炎症性疾患である関節リウマチの治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−３（ＩＬ−３）は、免疫系の一部として疾患に対する身体の自然応答を改善することができるサイトカインである。ＩＬ−３は、多分化能造血幹細胞（多能性）から骨髄系前駆細胞への分化を刺激するほか、骨髄細胞系列（赤血球、血小板、顆粒球、単球、および樹状細胞）における全ての細胞の増殖を刺激する。ＩＬ−３は活性化Ｔ細胞により分泌されて免疫応答における骨髄からのＴ細胞の増殖および分化を支持する。
【０００３】
ＩＬ−３は、インターロイキン−３受容体（ＩＬ−３Ｒ）として知られる特異的な細胞表面受容体への結合を通じて活性を発揮する。ＩＬ−３Ｒは、７０ｋＤａ ＩＬ−３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）および１２０〜１４０ｋＤａ ＩＬ−３Ｒベータ（ＣＤ１３１）から構成されたヘテロ二量体構造である。ＩＬ−３Ｒアルファ鎖（ＩＬ−３Ｒα）は極めて短い細胞内ドメインを有するが、ＩＬ−３Ｒベータ鎖（ＩＬ−３Ｒβ）は極めて大きな細胞質ドメインを有する。ＩＬ−３Ｒアルファは、比較的低い親和性でＩＬ−３に結合する。しかし、ＩＬ−３Ｒベータの存在下、ＩＬ−３ＲアルファはＩＬ−３に対しはるかに高い親和性を有する。ＩＬ−３結合後にシグナル伝達がどのように生じるかは明らかではないが、最近の研究はシグナル伝達が十二量体を含む高次複合体の形成を必要とすることを示唆している１。ＩＬ−３Ｒベータ鎖は、ＩＬ−５およびＧＭ−ＣＳＦの受容体にも共有される。ＩＬ−３受容体を発現することが知られる細胞には、造血前駆細胞、マスト細胞、好塩基球および血中単球のほか、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、マスト細胞、好酸球、巨核球、赤血球細胞、およびＣＤ５＋ Ｂ細胞亜集団を含むさまざまな造血細胞系列のより成熟した細胞が含まれる２。非造血細胞も、幾つかの内皮細胞、間質細胞、樹状細胞およびライディッヒ細胞を含め、受容体を発現することが示されている２，３。
【０００４】
ＩＬ−３は、免疫系と造血系の間の潜在的に重要な関連を提供する４。ＩＬ−３は、特に免疫反応中のマスト細胞および好塩基球の産生および機能にとって重要であると考えられる５。ＩＬ−３はまた、マクロファージ系列集団の増殖および活性化を促進することもでき６〜８、樹状細胞の発生を助けることもできる９。上述の通り、ＩＬ−３シグナル伝達は、共通する受容体ベータサブユニット（ＩＬ−３Ｒβ）および特異的リガンド結合アルファサブユニット（ＩＬ−３Ｒα）により媒介されるが、マウスではさらなるベータサブユニットがある１０。
【０００５】
関節リウマチ（ＲＡ）などの慢性炎症状態におけるＩＬ−３の役割に関しては、ほとんど分かっていない。ＩＬ−３ ｍＲＮＡは、ある研究ではＲＡ患者の滑膜で検出できなかったが１１、より後の研究では見出された１２。全員ではないが一部のＲＡ患者は、検出可能なＩＬ−３を循環中に有することが見出されており１３、ＩＬ−３遺伝子プロモーターにおける一塩基多型とＲＡの間に関連がある１４。しかし、ＩＬ−３レベルは、ラット関節炎モデルでの関節炎進行中に低下し１５、ＩＬ−３投与はマウス炎症性関節炎を阻害することが最近報告された１６。
【０００６】
本発明に至る研究において、本発明者らは、ＲＡなどの慢性炎症状態の影響は、ＩＬ−３とＩＬ−３Ｒの間のリガンド／受容体相互作用を遮断または妨げることにより阻害または低減され得ることを見出した。この知見は、ＩＬ−３投与が炎症性関節炎における炎症反応を減少させ、軟骨および骨量減少を間接的に抑止する潜在的可能性を有することを示唆する最近の報告１６を考えると、非常に驚きであり、予想外であった。
【０００７】
本明細書で言及された出版物の書誌詳細は、本明細書の最後に言及されている。
【０００８】
いずれかの先行出版物（またはこれから得られた情報）、または既知であるいずれかの事項への本明細書での言及は、その先行出版物（またはこれから得られた情報）または既知の事項が、本明細書が関連する当該分野における共通の一般的知識の一部を形成することの了承もしくは承認、またはいかなる形態の示唆としても受け取られず、受け取られるべきでない。
【０００９】
本明細書およびこれに続く特許請求の範囲を通じて、文脈が特に別途に必要としない限り、単語「含む（comprise）」、ならびに「含む（comprises）」および「含む（comprising）」などの変形形態は、述べられた整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の除外を意味しないと理解されよう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
１つの態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断もしくは阻害する薬剤の使用を提供する。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤を提供する。
【００１３】
本発明の他の態様では、薬剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に医薬組成物として製剤化されてもよく、あるいは薬剤は、患者における慢性炎症状態の治療方法に従って薬剤を使用するための説明書を場合により含むキットとして提供されてもよい。
【００１４】
慢性炎症状態は、例えば、関節炎、さらに特定すると、ＲＡなどの炎症性関節炎であってもよい。
【００１５】
好ましくは、薬剤は、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害するものである。好ましくはまた、患者はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】抗ＩＬ−３ ｍＡｂまたはＰＢＳ（対照）の投与を受けているマウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）進行（臨床スコア）を示す図である。結果は平均±ＳＥＭとして表されている。ｎ＝１０マウス治療群、ｎ＝６マウス対照群。
【図２】単球（ＰＢＭＣ由来のＣＤ１４＋）の細胞生存能に対するＩＬ−３シグナル伝達の影響を示す図である。単球は、６ｃｍ ＩＷＡＫＩ（低付着性）ＴＣ皿１枚あたり約１．８×１０６細胞の密度で播種され、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳおよび：ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）単独、ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）単独、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体において７日間培養した。ＩＬ−３Ｒ抗体は、いずれの場合も１μｇ／ｍｌで使用した。４日目に新たなＩＬ−３およびＩＬ−３Ｒ抗体を添加した。７日目に細胞を取り除き、カウントした。
【図３】ＩＬ−３が好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃを用量依存的に誘導することを示す図である。蕁麻疹患者（ＵＲＴ）および正常なドナー（ＮＯＲ）由来のＰＢＭＣを単離し、多クローン性ＩｇＥ、ＦＭＬＰ、ＦＭＬＰおよびＩＬ−３または漸増濃度のＩＬ−３により刺激した。ＣＤ２０３＋ｖｅ好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色および好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃに対する抗体による染色、次いでフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図４】抗ＩＬ−３Ｒ抗体がＩＬ−３誘導好塩基球活性化を遮断することを示す図である。正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、中和抗ＩＬ−３Ｒ抗体（ＣＳＬ３６０）の存在下または非存在下、漸増濃度のＩＬ−３により刺激した。ＣＤ２０３＋ｖｅ好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色および好塩基球活性化マーカーＣＤ２０３ｃに対する抗体による染色、次いでフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図５】抗ＣＤ１２３モノクローナル抗体（ＣＳＬ３６２）が好塩基球を時間依存的に枯渇させることを示す図である。正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しでまたは枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２）と共にさまざまな時間（示されているような）にわたりインキュベートした。残存好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色およびフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図６】抗ＣＤ１２３ ｍＡｂが、２４時間以内に好塩基球を再現可能に枯渇させることを示す図である。３名の正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しでまたは枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２）と共に２４時間インキュベートした。残存好塩基球のパーセンテージは、好塩基球を同定するための抗体カクテルによる染色およびフローサイトメトリーによる分析後に計算した。
【図７】抗ＣＤ１２３ ｍＡｂが、ＮＫ細胞を２４時間以内に活性化することを示す図である。３名の正常なドナー由来のＰＢＭＣを単離し、抗体無しで（実線）または枯渇抗ＣＤ１２３抗体（ＣＳＬ３６２、点線）と共に２４時間インキュベートした。ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋ｖｅ細胞）の活性化は、ＣＤ１６ダウンレギュレーションにより判定した。ＰＢＭＣは、ＮＫ細胞を同定するために抗ＣＤ５６抗体により染色し、抗ＣＤ１６抗体により染色した。抗体無しの対照と比較したＣＤ１６染色の喪失は、フローサイトメトリーにより判定した。
【図８】抗ＩＬ−３Ｒα抗体のインビボでの投与による末梢血中のマウス好塩基球の枯渇を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、抗ＩＬ−３Ｒα抗体（１Ｃ２）、抗ＣＤ２００Ｒ３（Ｂａ１０３）またはアイソタイプ対照抗体マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）もしくはラットＩｇＧ２ｂ（ｒＩｇＧ２ｂ）を静脈内投与した。全ての抗体は、マウス１匹あたり１８μｇで注射した１Ｃ２を除いて、マウス１匹あたり３０μｇで注射した。末梢血細胞を抗体投与２４時間後に単離し、好塩基球を同定するためにＦｃεＲ１αおよびＣＤ４９ｂ発現について染色した。フローサイトメトリー分析からの代表的な染色プロフィールが示されている（ａ）。好塩基球集団が枠で囲まれている。マウス１匹あたりの好塩基球のパーセンテージはフローサイトメトリー分析から計算した。１群あたり３匹のマウスの平均（＋ＳＥＭ）が示されている（ｂ）。＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊：ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
１つの態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法を提供する。
【００１８】
好ましくは、薬剤は、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害するものである。
【００１９】
本発明に従って治療され得る慢性炎症状態は、当業者によく知られており、特に関節炎、さらに特定すると成人および若年性ＲＡなどの炎症性関節炎を含む。他の適応症には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；クローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）；アテローム性動脈硬化；強皮症；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；シェーグレン症候群；通風；変形性関節炎；リウマチ性多発筋痛；強直性脊椎炎を含む血清陰性脊椎関節症；ライター病、乾癬性関節炎、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）；慢性ライム病関節炎；スティル病；慢性蕁麻疹；関節リウマチに関連したブドウ膜炎、ならびに皮膚筋炎、封入体筋炎、多発性筋炎、およびリンパ脈管筋腫症を含む、随意筋および他の筋肉の炎症をもたらす障害が含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
「治療」への本明細書での言及は、最も幅広い文脈において考えられるべきであり、治療処置および予防（prophylactic）または予防（preventative）対策の両方を含む。治療を必要とする患者には、慢性炎症状態に既に苦しんでいる者のほか、このような状態が予防されるべき者が含まれる。該状態から部分的または完全に回復した患者も、治療を必要とする場合がある。用語「治療」は、患者が完全回復まで治療されることを必ずしも意味しない。したがって、治療には、特定の慢性炎症状態の症状の低減または寛解のほか、特定の慢性炎症状態の発症、発達もしくは進行の停止もしくは少なくとも遅延、特定の慢性炎症状態の重症度の低減、または特定の慢性炎症状態の除去が含まれる。
【００２１】
本発明に従って投与される薬剤は、好ましくはＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害することにより、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象の活性化を遮断または阻害する。本明細書では、「患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する」への言及は、ＩＬ−３開始シグナル伝達のレベルの低下をもたらす任意の介入を包含する。このような介入には、例として、ＩＬ−３シグナル伝達事象の活性化を特異的に遮断または阻害する薬剤（例えばＩＬ−３、ＩＬ−３Ｒα、ＩＬ−３Ｒβを標的にする薬剤）の使用のほか、ＩＬ−３シグナル伝達することができる細胞を選択的に標的にすることにより細胞死を誘導することを目的とした薬剤（例えばＩＬ−３Ｒを標的にし、抗細胞部分を保有する薬剤）の使用が含まれる。
【００２２】
本発明の１つの実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子であってもよい。
【００２３】
本明細書では用語「抗原結合分子」は、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒトモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体を含むインタクトな免疫グロブリン、または免疫グロブリンの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む）および／もしくは可変ドメインを含むフラグメント（インタクトな免疫グロブリンと、免疫グロブリンの結合パートナー（例えば宿主タンパク質）への特異的結合について競合するもの）を指す。構造に関係なく、抗原結合フラグメントは、インタクトな免疫グロブリンにより認識される同じ抗原と結合する。抗原結合フラグメントは、合成的に、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断により産生することができ、あるいは抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術により遺伝子操作することができる。抗原結合分子およびそのフラグメントの産生方法は、当技術分野でよく知られており、例えば、本明細書に参照により組み込まれているAntibodies、A Laboratory Manual、E. HarlowおよびD. Lane編（1988年）、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、New Yorkに記載されている。
【００２４】
好ましくは、抗原結合分子はモノクローナル抗体である。
【００２５】
本発明のこの実施形態では、抗原結合分子は、修飾Ｆｃ領域、さらに特定すると、Ｆｃ受容体への増強された結合親和性、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの増強されたエフェクター機能を提供するために修飾されたＦｃ領域を含むことができる。抗体のＩｇＧクラスに関して、これらのエフェクター機能は、さまざまな免疫細胞上で発現されるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）と呼ばれる受容体のファミリーとのＦｃ領域の結合により支配される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらの細胞を結合抗原の部位に動員して、典型的にはシグナル伝達およびこれに続く免疫応答をもたらす。エフェクター機能を増強するために、特に「親」Ｆｃ領域と比べてＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を変化させるために、ＦｃγＲの抗体Ｆｃ領域への結合親和性を最適化する方法は、当業者によく知られており、例えば、国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号に記載されている。これらの方法には、関連するＦｃ受容体との相互作用を増強するための、ならびにＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを亢進する潜在的可能性を増加させるための抗体のＦｃ領域の修飾が含まれ得る。ＡＤＣＣ活性の増強はまた、ＩｇＧ１抗体にＦｃ領域の保存Ａｓｎ２９７で共有結合したオリゴ糖の修飾後にも記載されている。
【００２６】
本明細書では、抗原結合分子（例えば抗体または抗体フラグメント）、およびこの結合パートナー（例えば抗原）の相互作用に関する用語「選択的に結合する」は、相互作用が、結合パートナーにおける特定の構造（例えば抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。言い換えれば、抗体または抗体フラグメントは、結合パートナーが他の分子または生物の混合物中に存在する場合でも、結合パートナーを優先的に結合または認識する。
【００２７】
いかなる特定の理論に縛られることを望むものではないが、本発明のこの実施形態では、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合することにより、抗体または抗体フラグメントなどの抗原結合分子は、リガンド／受容体相互作用を遮断または阻害し、これによりＩＬ−３シグナル活性化を妨げると考えられる。
【００２８】
１つの実施形態では、抗原結合分子は、ＩＬ−３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）に選択的に結合するモノクローナル抗体であってもよい。従って、抗原結合分子は、白血病細胞系および初代細胞の両方のＩＬ−３媒介増殖および活性化を阻害することが以前に示されている、ＣＤ１２３に対して惹起されたモノクローナル抗体（ＭＡｂ）７Ｇ３であってもよい（Ｌｏｐｅｚに対する米国特許第６，１７７，６７８号参照）。あるいは、薬剤は、マウスモノクローナル抗体７Ｇ３の軽鎖可変（light variable）および重鎖可変（heavy variable）領域をヒトＩｇＧ１定常領域に移植して得られるキメラ抗体であるモノクローナル抗体ＣＳＬ３６０であってもよい（国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号参照）。７Ｇ３のように、ＣＳＬ３６０は、ＣＤ１２３（ヒトＩＬ−３Ｒα）に高い親和性で結合し、ＩＬ−３と受容体への結合において競合し、この生物学的活性を遮断する。ＣＳＬ３６０は、ヒト環境においてエフェクター活性を開始することができるであろうヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域により、ヒト治療剤としての潜在的有用性の利点も有する。さらに、ヒトにおいてＣＳＬ３６０は、マウス７Ｇ３等価物と比べてクリアランスの減少を示し免疫原性になりにくい可能性がある。この抗原結合分子のさらなる例には、７Ｇ３またはＣＳＬ３６０のヒト化抗体バリアント、完全ヒト抗ＣＤ１２３抗体、および例えば国際特許公開第ＷＯ２００９／０７０８４４号の実施例４に記載されているような増強されたエフェクター機能（ＡＤＣＣ活性など）を有する抗ＣＤ１２３抗体が含まれる。
【００２９】
本発明の別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３Ｒに結合するが、ＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないか、またはＩＬ−３シグナル活性化の減少を少なくとももたらすかのいずれかであるＩＬ−３ムテインであってもよい。一般に、これらの「ＩＬ−３ムテイン」には、１つまたは複数の隣接または非隣接アミノ酸残基の付加、欠失および／または置換によって異なる天然または人工変異体が含まれる。ＩＬ−３Ｒに結合するが、ＩＬ−３シグナル活性化の減少を示すＩＬ−３ムテインの例は、１６／８４Ｃ→Ａ変異体１７である。ＩＬ−３ムテインには、１つまたは複数の残基が、例えば、インビボでの半減期を増加するように修飾されている修飾ポリペプチドも含まれ得る。これは、ＰＥＧ群などの他のエレメントを付加することによって達成することができる。ポリペプチドのペグ化の方法は当技術分野でよく知られている。
【００３０】
本発明の別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である。このような可溶性受容体の例には、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合タンパク質が含まれる。
【００３１】
さらなる別の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３シグナル伝達することができる細胞を標的にして細胞死を誘導することができる抗細胞部分を含んでもよい。幾つかの実施形態では、薬剤は、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子にコンジュゲートした抗細胞部分を含むことができる。他の実施形態では薬剤は、ＩＬ−３ムテインにコンジュゲートした抗細胞部分を含むことができる。適切な抗細胞部分の例には、化学療法薬、放射性同位体または細胞毒素が含まれる。化学療法薬には、ステロイドなどのホルモン；シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサートまたはアミノプテリンなどの代謝拮抗剤；アントラサイクリン；マイトマイシンＣ；ビンカアルカロイド；デメコルシン；エトポシド；ミトラマイシン；カリケアマイシン、ＣＣ−１０６５およびその誘導体、またはクロラムブシルもしくはメルファランなどのアルキル化剤、凝固剤、サイトカイン、増殖因子、細菌内毒素もしくは細菌内毒素の脂質Ａ部分が含まれる。放射性同位体には、例えば、２１１アスタチン、２１２ビスマスおよび２１３ビスマスなどのα放射体のほか、例えば、１３１ヨウ素、９０イットリウム、１７７ルテチウム、１５３サマリウムおよび１０９パラジウムなどのβ放射体、ならびに例えば、１１１インジウムなどのオージェ放射体が含まれる。細胞毒素には、一般に、ほんの数例を述べるだけでも、Ａ鎖毒素、リボソーム不活化タンパク質、α−サルシン（a-sarcin）、アスペルギリン、レストリクトシン、リボヌクレアーゼ、ジフテリア毒素もしくは緑膿菌外毒素などの植物、真菌または細菌に由来する毒素のほか、例えば、カハラリドＦ、エクテナサイジン（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（商標））、またはバリオリンＢなど、海綿などの海洋生物に由来する細胞毒素が含まれる。
【００３２】
薬剤は、有効量で投与される。「有効量」は、少なくとも部分的には所望の応答を達成するのに、または進行を遅延もしくは阻害するのに、または治療される特定の状態の進行を完全に停止するのに必要な量を意味する。該量は、治療される個体の健康および身体状態、治療される個体の人種的背景、所望の保護の程度、組成物の処方、医学的状況の評価、ならびに他の関連する要因に応じて変わる。該量は、日常的な試行を通じて決定することができる比較的広範な範囲になると予想される。必要ならば、薬剤の投与は、１回または複数回繰り返してもよい。投与される実際の量は、治療されている状態の性質および薬剤が投与されている速度の両方により決定されるであろう。
【００３３】
好ましくは、患者はヒトであるが、本発明は、霊長類、家畜動物（例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ロバ）、実験室試験動物（例えばマウス、ウサギ、ラット、モルモット）、コンパニオン動物（例えばイヌ、ネコ）および捕獲野生動物を含む他の哺乳動物患者の治療および／または予防にまで及ぶ。
【００３４】
本発明によれば、薬剤は好ましくは、非経口投与経路により患者に投与される。非経口投与には、注射、点滴等による投与を含む、消化管を通じてではない（すなわち、腸内ではない）任意の投与経路が含まれる。注射による投与には、例として、静脈の中（静脈内）、動脈の中（動脈内）、筋肉の中（筋肉内）および皮膚の下（皮下）が含まれる。薬剤は、デポまたは徐放製剤として、例えば、皮下、皮内または筋肉内に、所望の薬理効果を得るのに十分である投与量で投与することもできる。
【００３５】
別の態様では、本発明は、患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断もしくは阻害する薬剤の使用を提供する。
【００３６】
さらに別の態様では、本発明は、患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤を提供する。
【００３７】
本発明のこの態様では、上記のような薬剤は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に医薬組成物として製剤化することができる。
【００３８】
非経口投与に適切な組成物は、好都合には、レシピエントの血液と好ましくは等張である、有効成分の滅菌水性製剤を含む。この水性製剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて既知の方法により処方することができる。滅菌注射可能製剤はまた、例えばポリエチレングリコールおよび乳酸中の溶液のような無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能溶液または懸濁液であってもよい。使用することができる許容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液、適切な炭水化物（例えばスクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌した不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として好都合には使用される。この目的のため、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激不揮発性油を使用してもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製での使用が見出される。
【００３９】
このような治療組成物の処方は、当業者によく知られている。適切な薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤には、ありとあらゆる従来の溶媒、分散媒、充填剤、固体担体、水溶液、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野でよく知られており、例として、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Publishing Company、Pennsylvania、USAに記載されている。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるこの使用が企図される。補足的活性成分もまた、組成物に組み込むことができる。
【００４０】
本発明のさらなる態様では、（ｉ）上記のような薬剤、および場合により（ｉｉ）患者における慢性炎症状態の治療方法に従って薬剤を使用するための説明書を含むキットが提供される。
【００４１】
本発明は、以下の非限定的実施例によりさらに例示される。
【実施例１】
【００４２】
マウスＩＬ−３に対する中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の疾患進行に対する効果を、関節リウマチに関して最も幅広く使用されているマウスモデルであるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルで試験した。
【００４３】
オスＤＢＡ／１マウス（８〜１２週齢、１群あたり１０匹のマウス）を、０および２１日目にアジュバント中のＩＩ型コラーゲンで皮内免疫化した１８。
【００４４】
マウスは、四肢の発赤および腫脹について評価し、臨床スコアは肢ごとに、確立された採点システムを用いて以下のように割り当てた：０−正常；１−軽度の腫脹および／または紅斑；２−広範な腫脹および／または紅斑；３−重度の腫脹；４−重度の腫脹および／または硬直。関節炎の重症度は、全四肢について合計した平均臨床スコア（マウス１匹あたり範囲０〜１６）を単位として表される。
【００４５】
マウスは、２１、２３、２５、２８および３０日目に２５０μｇ抗ＩＬ−３ ｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）／マウスまたはＰＢＳで治療した。図１に見ることができるように、疾患重症度の抑制が抗ＩＬ−３治療群においてあった。
【００４６】
この実験は特に有望であり、この理由は、この特定の実験では極めて重度の疾患の極めて迅速な誘導があり、対照マウスではすぐにプラトーに達したためである。このプラトーは、通常、約１週間後に達する。
【００４７】
比較的急性のマウスＣＩＡに関する文献データは、中和抗ＩＬ−３ Ａｂは疾患誘導後すぐに必要とされ、疾患発症後遅延した場合は効果がないことを示している１９。これは、ＩＬ−３が炎症において標的にならないであろうことを必ずしも意味しない。われわれは、関節リウマチ（ＲＡ）などの疾患の促進に関与する背景にある炎症性／自己免疫事象、およびこれらの事象が動物モデルにおいていかに密接に反映されるかをまだ理解していない。ＲＡなどの慢性状態についてさえ、「急性発症」疾患を有する患者がいる。また、抗ＩＬ−３療法は、例えばＲＡにおいて依然として有益である可能性があり、この理由は、該疾患は再発することが多いので、この増悪を抑制する機会を提供するためである。一般的に使用される抗炎症性グルココルチコイドは、炎症性メディエーター遺伝子発現を転写レベルでダウンレギュレートすることによって作用する−抗炎症性グルココルチコイドは、刺激を誘発した後で添加された場合、代理炎症アッセイではインビトロで働かないと広く考えられていることも留意されたい。
【実施例２】
【００４８】
ＣＤ１４＋単球における炎症促進性サイトカインとしてのＩＬ−３シグナル伝達の役割を調査した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、赤十字ドナーバフィーパック（buffy pack）から単離した。ＣＤ１４＋単球は次いで、フローサイトメトリーにより評価した細胞の約８０％がＣＤ１４＋となるように、ネガティブ選択により精製した（ＭＡＣＳ分離）。単球を、６ｃｍ ＩＷＡＫＩ（低付着性）ＴＣ皿１枚あたり約１．８×１０６細胞の密度で播種し、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳおよび：ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）単独、ＩＬ−３（３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体、ＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）単独、またはＩＬ−３（０．３ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−３Ｒ抗体において７日間培養した。ＩＬ−３Ｒ抗体は、いずれの場合も１ｕｇ／ｍｌで使用した。４日目に新たなＩＬ−３およびＩＬ−３Ｒ抗体を添加した。７日目に細胞を取り除き、ＲＮＡ溶解緩衝液で溶解する前にカウントした。結果は、ＩＬ−３が、単球に生存促進性刺激を用量依存的に提供すること、およびこの効果は抗ＩＬ−３Ｒ抗体により克服されたことを示している（図２）。従って、ＣＤ１４＋単球においてＩＬ−３シグナル伝達を遮断または阻害することは、炎症の部位でのＣＤ１４＋単球の生存および蓄積を防ぎ、このため炎症を制御する手段を提供する。
【実施例３】
【００４９】
一般的に蕁麻疹（hives）として知られる蕁麻疹（urticaria）は、サイズが数センチメートルからほんの数ミリメートルまでに及ぶ反復する膨疹として現れる炎症状態である。一般に、膨疹はピンク色であり中心の色が薄く、ヒリヒリまたはチクチクする感覚を伴う場合がある。蕁麻疹は、何歳でも呈す可能性があり、集団の１％〜５％は、生涯におけるある時期に蕁麻疹を呈すであろう。慢性蕁麻疹は、重度のアトピー性皮膚炎、乾癬または座瘡を有する患者と類似して、生活の質に多大な影響を及ぼす。慢性蕁麻疹のほとんどのケースは、本来は突発性であるが、多くのケース（３５％〜５０％）で高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲ１）に対する自己抗体またはＩｇＥ自体が存在することが徐々に明らかになりつつあり、これは慢性蕁麻疹が自己免疫疾患であり得ることを示唆している。マスト細胞および好塩基球は、ＦｃεＲ１を発現する主な細胞型であり、蕁麻疹患者において自己抗体に応答する。活性化された場合、マスト細胞および好塩基球は、蕁麻疹の膨疹形成を促進する主なエフェクター分子である大量のヒスタミンを放出する。マスト細胞および好塩基球は両方ともＩＬ−３受容体を発現し、ＩＬ−３は、ＩｇＥおよびＣ５ａなどのトリガーに曝露された場合、増加されたレベルのヒスタミンなどのエフェクター分子を産生するようにこれらの細胞を刺激することができる。
【００５０】
７名の蕁麻疹患者試料および４名の正常なドナー試料由来のＰＢＭＣを分析した。ＩＬ−３は、ヒト好塩基球をエクスビボで活性化することができ（図３）、中和抗ＩＬ−３Ｒα抗体（ＣＳＬ３６０−国際特許公開第ＷＯ２００９／０７０８４４号参照）は、ＩＬ−３誘導ヒト好塩基球活性化を阻害することができる（図４）。ＡＤＣＣ最適化抗ＩＬ−３Ｒα抗体（ＣＳＬ３６２−国際特許公開第ＷＯ ２００９／０７０８４４号に記載されているような、ヒト化および親和性成熟抗ＣＤ１２３ ｍＡｂ １６８−２６のフコシル化（afucosylated）バリアント）は、ＰＢＭＣ由来のヒト好塩基球を時間依存的に枯渇させることができる（図５）。完全なまたは完全に近い好塩基球枯渇は、ＣＳＬ３６２添加の２４時間以内に３名の独立したドナーにおいて観察された（図６）。ＮＫ細胞活性化は、ＣＳＬ３６２の添加の２４時間以内に観察され、これは好塩基球の枯渇がＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣを介することを示唆している（図７）。
【実施例４】
【００５１】
この実施例は、抗ＩＬ−３Ｒ抗体が、インビボでの好塩基球の活性化の数およびレベルにも影響し得ることを示す。メスＢＡＬＢ／ｃマウス（１０〜１２週齢）を、抗ＩＬ３Ｒａ抗体１Ｃ２（実施例５参照）または対照マウスＩｇＧ２ａの尾静脈静脈内注射で治療した。ＣＤ２００Ｒ３に対して標的にし、マウス好塩基球を特異的に枯渇させることが示されている市販の抗体Ｂａ１０３２０、およびこの対照抗体ラットＩｇＧ２ｂを、対照として一緒に試験した。全ての抗体は、１８μｇで投与した１Ｃ２を例外として、２００μｌのＰＢＳ中３０μｇで注射した。１日後、末梢血および腹膜細胞を単離し、細胞の単一懸濁液を調製した。細胞は、非特異的結合を防ぐため抗ＦｃγＲＩＩ−ＩＩＩと共に前インキュベートした。細胞を、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＦｃεＲＩαモノクローナル抗体およびＰＥコンジュゲート抗ＣＤ４９ｂモノクローナル抗体で染色して好塩基球（ＦｃεＲＩα＋ ＣＤ４９ｂ＋）を同定した。ＦＩＴＣハムスターＩｇＧおよびＰＥラットＩｇＭを、それぞれＦｃεＲＩαおよびＣＤ４９ｂ抗体のアイソタイプ対照として使用した。残屑は、前方散乱（ＦＳＣ）対側方散乱（ＳＳＣ）を用いて除外（gated out）し、死細胞は、７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）染色により区別した。染色細胞を次いでＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析し、データはＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。
【００５２】
１８μｇ抗ＩＬ３Ｒα抗体１Ｃ２の単回静脈内注射は、アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ２ａ）治療マウスにおけるレベルの約２３％まで、末梢血中の好塩基球頻度の劇的な減少を誘導した（図８）。この枯渇効率は、３０μｇ Ｂａ１０３の投与からのものに匹敵した。好塩基球に対する効果とは違い、抗ＩＬ３ＲαまたはＢａ１０３抗体で治療したマウスでは腹膜マスト細胞の頻度に有意な減少は見られなかった（データ不図示）。マスト細胞に関するＢａ１０３抗体での観察は、Obataおよび同僚らによる研究と一致する２０。
【実施例５】
【００５３】
１）マウスＩＬ３受容体特異的モノクローナル抗体の生成
マウスＩＬ−３Ｒアルファ（ｍＩＬ３Ｒα）を特異的に認識した抗体配列を、糸状バクテリオファージＭ１３（Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．）の表面でｇＩＩＩタンパク質に融合したＦａｂフラグメントとして発現されるヒト抗体配列のライブラリーから単離した。抗ｍＩＬ３Ｒαファージディスプレイ抗体フラグメントは、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃフラグメント）の残基１００〜３３０に短いポリペプチドリンカー（配列：ＩＥＧＲＩＤ）により融合したｍＩＬ３Ｒαのアミノ酸１７〜３３１から成る市販の精製組換え融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．による供給）と共に、ファージライブラリーをインキュベートすることによって単離した。特異的に結合したファージを濃縮し、標準的方法を用いて個々のクローンとして単離した。個々のクローンは、もともとの標的（ｍＩＬ３Ｒα−Ｆｃ融合）、およびＣ末端ヘキサヒスチジンタグ（ｍｓＩＬ−３Ｒ−６Ｈｉｓ）を有する残基１〜３３１として発現されるｍＩＬ３Ｒαの細胞外ドメインの両方に対する特異的結合について試験した。これらの標的に結合したが対照タンパク質に結合しなかったファージクローンを、さらなる分析のため選択した。固有のクローンを、コードされた抗体の両方のポリペプチド鎖のＤＮＡ配列決定により同定し、ｍＩＬ−３Ｒ−６Ｈｉｓに対するこれらのクローンの結合親和性を競合ＥＬＩＳＡにより定量化した。許容可能な親和性を有するクローンを、さらなる分析のための再操作（re-engineering）およびキメラ抗体（ヒト可変領域およびマウスＩｇＧ２ａ／カッパ定常領域）としての発現のために選択した。
【００５４】
２）一過性発現のための哺乳動物発現ベクター構築
ｍＩＬ３Ｒα特異的抗体の重鎖および軽鎖可変領域を、標準的な分子生物学技術を用いてファージミドベクターからＰＣＲ増幅した。重鎖可変領域は、次いで、マウスＩｇＧ２ａ定常領域および末端終止コドンを含むように修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に基づく、哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ｍＩｇＧ２ａにクローン化した。軽鎖可変領域は、マウスカッパ定常領域を含むように修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクターに基づく、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ｍκにクローン化した。発現ベクターは、コザック翻訳開始配列、ＡＴＧ開始コドンおよび適切なシグナルペプチドも含有した。
【００５５】
３）細胞培養
無血清懸濁液適応２９３−Ｔ細胞をＧｅｎｅｃｈｏｉｃｅ Ｉｎｃ．から得た。細胞は、ペニシリン／ストレプトマイシン／ファンギゾン試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養した。トランスフェクション前に細胞を、８％ＣＯ２の雰囲気で加湿インキュベーター中、３７℃で維持した。
【００５６】
４）一過性トランスフェクション
２９３−Ｔ細胞を用いた抗ｍＩＬ３Ｒα発現プラスミドの一過性トランスフェクションは、２９３フェクチントランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて製造者の指示に従い行った。軽鎖および重鎖発現ベクターを組み合わせ、２９３−Ｔ細胞にコトランスフェクトした。細胞（１０００ｍｌ）に、１×１０６生細胞／ｍｌの最終濃度でトランスフェクトし、２／１０ Ｗａｖｅ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒシステム２／１０または２０／５０（Ｗａｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において８％ＣＯ２の雰囲気で、３７℃、５日間、Ｃｅｌｌｂａｇ ２Ｌ（Ｗａｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中でインキュベートした。培養条件は、８°の角度で１分あたり３５振動（rock）であった。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、０．１％ｖ／ｖの最終濃度まで、トランスフェクション４時間後に添加した。トランスフェクション２４時間後、細胞培養物に、０．５％ｖ／ｖの最終濃度までＴｒｙｐｔｏｎｅ Ｎ１（Ｏｒｇａｎｏｔｅｃｈｎｉｅ、フランス）を補充した。細胞培養上清を２５００ｒｐｍでの遠心分離により回収し、次いで精製前に０．４５μＭフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ）に通した。
【００５７】
５）タンパク質発現の分析
５日後、２０μｌの培養上清を４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気泳動し、抗体をクマシーブルー試薬による染色により可視化した。
【００５８】
６）抗体精製
抗ｍＩＬ３Ｒα抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂（５ｍｌ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）が３０ｍｌ Ｐｏｌｙ−Ｐｒｅｐ空カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ）にパックされたプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、４℃で精製した。樹脂を、１０カラム容量のパイロジェンフリーのＧＩＢＣＯ蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で最初に洗浄して貯蔵エタノールを除去し、次いで５カラム容量のパイロジェンフリーリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で平衡化した。濾過した馴化細胞培養培地（１Ｌ）を、重力送りにより樹脂に添加した。樹脂を、次いで５カラム容量のパイロジェンフリーのＰＢＳで洗浄して非特異的タンパク質を除去した。結合抗体を２カラム容量の０．１Ｍグリシン ｐＨ２．８（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で、０．２カラム容量の２Ｍ トリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）を含有する画分に溶出して低ｐＨを中和した。溶出された抗体は、５Ｌ ＰＢＳに対して１２ｍｌ Ｓｌｉｄｅ−Ａ−ＬｙｚｅｒカセットＭＷカットオフ３．５ｋＤ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＩＬ）中、４℃で１８時間透析した。抗体濃度は、Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）分光光度計を用いて２８０ｎｍでの吸光度を測定して判定した。抗体の純度は、ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより分析した。ＳＤＳ-ＰＡＧＥでは、還元試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）中２μｇタンパク質をＮｏｖｅｘ １０〜２０％トリスグリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）に添加し、１５０Ｖの定電圧を、トリスグリシンＳＤＳランニング緩衝液によりＸＣｅｌｌ ＳｕｒｅＬｏｃｋ Ｍｉｎｉ-Ｃｅｌｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）に９０分間適用した後、製造者の指示に従って、クマシー染色を使用して可視化した。
【００５９】
（参考文献）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法。
【請求項２】
薬剤が、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
薬剤が、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
薬剤が抗細胞部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
薬剤が、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
慢性炎症状態が関節炎、特に炎症性関節炎である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
慢性炎症状態が関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
患者がヒトである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の使用。
【請求項１６】
薬剤が、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
薬剤が、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
薬剤が抗細胞部分を含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項２２】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項２４】
薬剤が、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項２５】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤。
【請求項２７】
患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項２８】
ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項２９】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項２８に記載の薬剤。
【請求項３０】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の薬剤。
【請求項３１】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の薬剤。
【請求項３２】
抗細胞部分を含む、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３３】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項３２に記載の薬剤。
【請求項３４】
ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項３５】
ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項３６】
ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項３５に記載の薬剤。
【請求項３７】
請求項２６から３６のいずれか一項に記載の薬剤を、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に含む医薬組成物。
【請求項３８】
（ｉ）請求項２６から３６のいずれか一項に記載の薬剤、および場合により（ｉｉ）患者における慢性炎症状態の治療方法に従って前記薬剤を使用するための説明書を含むキット。
【請求項１】
患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の患者への投与を含む、患者における慢性炎症状態の治療方法。
【請求項２】
薬剤が、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
薬剤が、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
薬剤が抗細胞部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
薬剤が、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
慢性炎症状態が関節炎、特に炎症性関節炎である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
慢性炎症状態が関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
患者がヒトである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
患者における慢性炎症状態の治療における、または患者における慢性炎症状態を治療する医薬品の製造における、ＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する薬剤の使用。
【請求項１６】
薬剤が、患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
薬剤が、ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
薬剤が抗細胞部分を含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項２２】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項２４】
薬剤が、ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項２５】
薬剤が、ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
患者におけるＩＬ−３シグナル伝達事象を遮断または阻害する、患者における慢性炎症状態を治療する薬剤。
【請求項２７】
患者におけるＩＬ−３／ＩＬ−３ＲまたはＩＬ−３／ＩＬ−３Ｒアルファ相互作用を遮断または阻害する、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項２８】
ＩＬ−３、またはＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−３ＲアルファもしくはＩＬ−３Ｒベータに選択的に結合する抗原結合分子である、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項２９】
抗原結合分子が、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントおよび／もしくは可変ドメインを含むそのフラグメントである、請求項２８に記載の薬剤。
【請求項３０】
抗原結合分子が、ＩＬ−３に選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の薬剤。
【請求項３１】
抗原結合分子が、ＩＬ−３Ｒアルファに選択的に結合するモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の薬剤。
【請求項３２】
抗細胞部分を含む、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３３】
抗細胞部分が、α放射体、特に２１１アスタチン、β放射体、特に１３１ヨウ素、およびオージェ放射体から選択される放射性同位体である、請求項３２に記載の薬剤。
【請求項３４】
ＩＬ−３Ｒに結合するがＩＬ−３シグナル活性化を引き起こさないＩＬ−３ムテインである、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項３５】
ＩＬ−３に結合することができる可溶性受容体である、請求項２６または請求項２７に記載の薬剤。
【請求項３６】
ＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分、またはＩＬ−３Ｒベータの細胞外部分に融合したＩＬ−３Ｒアルファの細胞外部分を含む融合ポリペプチドである、請求項３５に記載の薬剤。
【請求項３７】
請求項２６から３６のいずれか一項に記載の薬剤を、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤および／または希釈剤と一緒に含む医薬組成物。
【請求項３８】
（ｉ）請求項２６から３６のいずれか一項に記載の薬剤、および場合により（ｉｉ）患者における慢性炎症状態の治療方法に従って前記薬剤を使用するための説明書を含むキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２０１３−５１９６８９（Ｐ２０１３−５１９６８９Ａ）
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５５３１４５（Ｐ２０１２−５５３１４５）
【出願日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／０００１７８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９４０６８
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５０００２１４１３）シーエスエル、リミテッド (28)
【出願人】（３０４０５４５０７）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年５月３０日（２０１３．５．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／０００１７８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９４０６８
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５０００２１４１３）シーエスエル、リミテッド (28)
【出願人】（３０４０５４５０７）ザ ユニバーシティー オブ メルボルン (4)
【Ｆターム（参考）】
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