成人Ｔ細胞白血病の急性転化を判定するための方法
【課題】くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者におけるＡＴＬの急性転化を判定するための方法及びキットを提供する。
【解決手段】くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者におけるＡＴＬの急性転化を判定するための方法；ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
【解決手段】くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者におけるＡＴＬの急性転化を判定するための方法；ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（以下、ＡＴＬと記す）患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者におけるＡＴＬの急性転化を判定するための方法や、この方法に用いるキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトＴリンパ球向性ウィルスは、レトロウィルスの１種であり、１型と２型の２つの型が存在する。このうち、１型、すなわち、ＨＴＬＶ−１は、日沼らによって成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫の原因ウィルスとして同定されている（非特許文献１、２、３参照）。
【０００３】
ヒトにおけるＨＴＬＶ−１感染は、主に母から子への垂直感染ならびに夫から妻への水平感染であるが、輸血による医原性感染も知られている。輸血による医原性感染は、１９８６年から開始された抗ＨＴＬＶ−１（または２）抗体を検査することにより防止されてきた。輸血による医原性感染の疫学的研究から、ＨＴＬＶ−１感染は血球細胞成分が介在していることが知られている。ＨＴＬＶ−１に感染すると、生体中に抗ＨＴＬＶ−１抗体が生成してくるので、抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定することにより、ＨＴＬＶ−１の感染を知ることができる。
【０００４】
抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定する方法としては、免疫学的手法を用いた測定方法が知られており、ゼラチン粒子凝集法（ＰＡ法）、蛍光抗体法（ＦＡ法）、間接蛍光抗体法（ＩＦ法）、酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ法）、ウェスタンブロット法（ＷＢ法）などが知られている。
【０００５】
しかしながら、単独の方法でのＨＴＬＶ−１感染の判定は確実ではなく、一次スクリーニングで陽性と判断された場合でも、ＦＡ法、ＷＢ法といった二次スクリーニングを行う必要がある。さらに当該被験者がＨＴＬＶ−１に感染しているという診断を最終的に下すためには、末梢血またはリンパ節細胞のリンパ球ゲノムにＨＴＬＶ−１プロウィルスＤＮＡが組み込まれていることをサザンブロット法あるいはＰＣＲ法を用いて遺伝子的に証明する必要がある。
【０００６】
ＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患としては、例えば血流内やリンパ器官内で発症する成人Ｔ細胞性白血病／リンパ腫、脊髄内で発症するＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＡＭ／ＴＳＰ）、眼球内で発症したブドウ膜炎（ＨＵ）等が知られている。
【０００７】
ＡＴＬは、ＨＴＬＶ−１の感染が原因となって起こる独立した疾患である。ＨＴＬＶ−１キャリア（ＨＴＬＶ−１に感染した者で、上記のＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患を発症していない者）は日本国内で１２０万人と推定されており、ＨＴＬＶ−１キャリアの１０００人に１人が感染から平均５０年後にＡＴＬを発症すると言われている。発症率は非常に低いがひとたび発症するときわめて短期間で重篤な結果もたらすと言われている。
【０００８】
ＡＴＬは、急性型、リンパ腫型、慢性型、くすぶり型の４種類の臨床病型に分類され、この臨床病型は化学療法を含めた治療方針の決定に広く使用されている。リンパ腫型や急性型はがん細胞の増殖が早く、急速に症状が出現するために予後（生存率）が悪いと言われており、早急な治療が必要となる。一方、くすぶり型は血液中のがん細胞の数が少なく症状をあまり伴わないため、無治療で長期間変わらず経過することが多い。慢性型は、血液中のがん細胞の増殖が早くなく症状もあまり伴わないため、無治療で経過を観察することが一般的に行われている。このように、急性型、リンパ腫型に比べると、慢性型やくすぶり型は生存率が高いと言われている。
【０００９】
しかしながら、慢性型やくすぶり型から、急性型やリンパ腫型の病状へと急性転化する場合があると言われている。くすぶり型ＡＴＬ、慢性型ＡＴＬ患者の長期追跡結果によるとくすぶり型ＡＴＬの３割は急性転化し、慢性型ＡＴＬの８割が経過中に急性転化していたと報告されている。急性転化した場合は、急性型やリンパ腫型と同様に、早急に治療を開始する必要がある。現在、血清中のＬＤＨ活性や可溶型インターロイキン−２受容体（以下、ｓＩＬ−２Ｒと記す）濃度、白血球数、末梢血ＡＴＬ細胞数、カルシウム濃度などを検査し、異常がみられた場合には、リンパ節腫脹の有無と数、皮膚病変の有無、肺病変の有無、肝脾腫の有無、その他の病変の有無、画像診断としてのＣＴ（Computed Tomography）検査ならびにガリウムシンチグラフィ検査あるいはＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）検査を行い、急性型やリンパ腫型への急性転化の確定診断を行っているが、急性転化を早期に予知することは困難である。
【００１０】
１９９０〜１９９５年の本邦全国ＡＴＬ実態調査によると、ＡＴＬ２１２３例中、急性型は１３２８例（６２．６％）、リンパ腫型は５０５例（２３．８％）、慢性型は１７６例（８．３％）、くすぶり型は１１４例（５．４％）であった。
【００１１】
ＡＴＬについては、化学療法のみの治療成績では完全寛解率は１６〜４１％、生存期間中央値は３〜１３ヵ月であり、その予後は極めて不良であることが報告されていたが、化学療法による着実な進歩が見られ、最近では生存期間中央値が１２ヶ月を越える治療法も報告されている。また、化学療法で十分な効果が期待できない場合は、骨髄移植（同種造血幹細胞移植）が積極的に行われるようになり、一部の患者では治癒も期待できるようになってきた（非特許文献４参照）。
【００１２】
ＡＴＬ発症を予測する方法がＪＳＰＦＡＤ(Joint Study of Predisposing Factors of ATL Development)により研究されているが、未だ有用な方法は報告されていない。
【００１３】
ｓＩＬ−２ＲはＡＴＬの病態モニタリングや予後予測の有用な指標として活用されており、ＡＴＬの発症予測因子として期待されている。しかしながら、ｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映すると同時に生体内における免疫反応の活性化も反映していることや、慢性関節リウマチや間質性肺炎、Ｃ型肝炎患者では、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が基準値を遙かに超えて数千Ｕ／ｍＬを示す事があることが報告されていることから、ＨＴＬＶ−１キャリアがこのような疾患に罹患していた場合、ＡＴＬの発症予測の指標としてｓＩＬ−２Ｒ濃度を用いることが適さない可能性がある。
【００１４】
ＬＤＨは、体内の組織中に広く分布し、嫌気的解糖系最終段階に働く酵素である。血清・血漿中のＬＤＨ活性は、急性肝炎、心筋梗塞、悪性貧血、白血病、悪性腫瘍などで上昇が見られることより、これらの疾患の診断および経過観察に有用である。ＡＴＬにおいて、ＬＤＨ活性は腫瘍量を反映し病勢とよく相関することから、診断基準の１つとして用いられている。
【００１５】
ＣＤ３０は、ＴＮＦＲスーパーファミリーに属する受容体で、ホジキン病細胞、ステルンベルグ−リード（Sternberg-Reed）細胞、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）細胞、ＡＴＬ細胞で発現していることが報告されている（非特許文献５、６参照）。その後、ＣＤ３０の細胞外部分が切断された可溶型ＣＤ３０（以下、ｓＣＤ３０と記す）が血中に存在すること事が報告されている。ＡＴＬ患者とＣＤ３０との関連については、健常人と比べＡＴＬ患者血液中のｓＣＤ３０量が多いこと、すでに増悪化した急性型ＡＴＬおよびリンパ腫型ＡＴＬにおいて、化学療法により寛解となるとｓＣＤ３０量が低下すること、寛解した後に再発した際にｓＣＤ３０量が増加することが報告されている（非特許文献７参照）。
【００１６】
【非特許文献１】Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America, 78, 6476. 1981
【非特許文献２】Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America, 79, 2031. 1982
【非特許文献３】Sciences, 219, 856. 1983
【非特許文献４】International journal of hematology, 69(3):203-5. 1999 Apr
【非特許文献５】Nature, 2;299(5878):65-7. 1982 Sep
【非特許文献６】Histopathology, 26(6):539-46. 1995 Jun
【非特許文献７】Cancer science, 96(11):810-5. 2005 Nov
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症の早期診断によるＨＴＬＶ−１キャリアのＱＯＬの向上、ＡＴＬ患者、特にくすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化の早期診断によるくすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者のＱＯＬの向上を指向し、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定する方法、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における治療時期決定のための優れた方法、並びにこれらの方法に用いるためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明者は、本課題の解決のために鋭意検討し、ＴＮＦスーパーファミリーに属する因子であるＣＤ３０を測定することにより、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、及びくすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の判定が可能となるという知見を見出し、さらに、ＣＤ３０と、ＩＬ−２Ｒ又はＬＤＨ活性とを測定することにより、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における治療時期を決定できる、という知見を見出し、本発明を完成させた。
【００１９】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１０］に関する。
［１］ ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型キャリアより採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該キャリアにおける成人Ｔ細胞白血病発症リスクを判定する方法。
［２］ 成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該患者における骨髄移植後の予後を判定する方法。
［３］ くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該患者における成人Ｔ細胞白血病の急性転化を判定する方法。
［４］ くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０と、インターロイキン−２受容体及び／又は乳酸脱水素酵素活性とを測定し、得られる測定値により、当該患者の急性転化後の治療方針を決定する方法。
［５］ ＣＤ３０が、可溶型である［１］〜［４］のいずれかに記載の方法。
［６］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型キャリアにおける成人Ｔ細胞白血病発症リスク判定用キット。
［７］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、成人Ｔ細胞白血病患者における骨髄移植後の予後判定用キット。
［８］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
［９］ ＣＤ３０測定用試薬と、インターロイキン−２受容体測定用試薬及び／又は乳酸脱水素酵素活性測定用試薬とを含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者の急性転化後の治療方針決定用キット。
［１０］ ＣＤ３０が、可溶型である［６］〜［９］のいずれかに記載のキット。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によると、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定することや、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者の急性転化後の治療方針を決定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明におけるＣＤ３０は、可溶型ＣＤ３０（ｓＣＤ３０）と非可溶型ＣＤ３０の両方を包含するが、可溶型ＣＤ３０（ｓＣＤ３０）が好ましい。また、本発明におけるＣＤ３０は、全長型のみならず一部が切れた断片型をも包含する。本発明におけるＩＬ−２Ｒは、可溶型ＩＬ−２Ｒ（ｓＩＬ−２Ｒ）と非可溶型ＩＬ−２Ｒの両方を含むが、可溶型ＩＬ−２Ｒ（ｓＩＬ−２Ｒ）が好ましい。
【００２２】
［ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク判定方法］
本発明において、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症の判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該生体試料中のＣＤ３０の濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値に照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該キャリアをＡＴＬ発症のリスクが高いと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該キャリアをＡＴＬ発症のリスクが低いと判定する工程。
【００２３】
ＨＴＬＶ−１キャリアとは、前記の通り、ＨＴＬＶ−１に感染しているがＡＴＬ等の疾患を発症していない者を指すが、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０の測定は、例えば後述のＣＤ３０測定方法により行うことができる。
【００２４】
上記基準値は、測定値の平均値±２ＳＤ（ＳＤ：標準偏差）で規定することが好ましい。ここで、測定値としては、健常人に対する測定値であっても、ＨＴＬＶ−１キャリアに対する測定値であってもよいが、測定によって決定されるＣＤ３０濃度は、測定に使用する試薬の種類や測定法等の測定条件により変わり得るので、基準値は、同一の測定条件下で、あらかじめ選択した母集団に対して行った測定により規定することが好ましい。ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクの予測に際して、母集団としては、ＡＴＬを発症していない健常人及び／又はＨＴＬＶ−１キャリアからなる集団であり、母集団の人数としては、通常１０名以上、好ましくは３０人以上、より好ましくは５０人以上である。
【００２５】
例えば、ＨＴＬＶに感染していない健常人３２名の血液中に含まれるｓＣＤ３０濃度を測定した際の平均値±ＳＤが３８．７±２８．０Ｕ／ｍＬである場合は、健常人のｓＣＤ３０濃度を規定する基準値としては、平均値＋２ＳＤである、９４．７Ｕ／ｍＬと規定することができる。
【００２６】
また、ＨＴＬＶ−１キャリアの血液中に含まれるｓＣＤ３０濃度を測定した際１７名の平均値±ＳＤが４０．２±２３．２Ｕ／ｍＬである場合は、ＨＴＬＶ−１キャリアのｓＣＤ３０濃度を規定する基準値としては、平均値＋２ＳＤである、８６．６Ｕ／ｍＬと規定することができる。
【００２７】
同様に、急性型ＡＴＬ６症例、リンパ腫型ＡＴＬ５症例、及び慢性型ＡＴＬ２症例の血清中のｓＣＤ３０濃度がそれぞれ、１９７７〜１４９００Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：５４０８±１０２９０）、４１５〜３７４８Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：３６２６±８４１８）、３１４〜３６９Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：３４１±７９）である場合は、ｓＣＤ３０の濃度が２７０Ｕ／ｍＬ以上であれば、ＡＴＬを発症していると判定でき、１００Ｕ／ｍＬ未満であればＡＴＬを発症していない、と判定できる。
【００２８】
ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクは、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０濃度から判定できるが、基準値からの割合によっても判定することができる。ＨＴＬＶ−１キャリアに対してＡＴＬ発症のリスクが高いと判定できる場合の基準値に対する割合は、１．１以上であり、好ましくは３以上であり、より好ましくは４以上である。また、ＨＴＬＶ−１キャリアに対してＡＴＬ発症のリスクが高いと判定できる場合のＣＤ３０濃度としては、１００Ｕ／ｍＬ以上であり、好ましくは２７０Ｕ／ｍＬ以上であり、より好ましくは３６０Ｕ／ｍＬ以上である。
【００２９】
このように、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０濃度が基準値よりも高濃度である場合に該キャリアがＡＴＬを発症するリスクが高いと判定することができる。また、基準値を適当に規定することにより、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと、リンパ腫型又は急性型ＡＴＬとを判別することもできる。当該判別は、例えば４００Ｕ／ｍＬを基準値として規定することにより行うことができる。
【００３０】
［ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後を判定する方法］
本発明において、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）急性型又はリンパ腫型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該生体試料中のＣＤ３０の濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を骨髄移植後の予後が不良と判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を骨髄移植後の予後が良好と判定する工程。
【００３１】
通常、骨髄移植は、移植に先立ち病態を安定化させるために、化学療法、またはＣＨＯＰ療法［（i）アドリアシン（ドキソルビシン、慣用名：アドリアマイシン、抗がん剤抗生物質）、(ii)エンドキサン（シクロホスファミド、アルキル化剤）、(iii)オンコビン（ビンクリスチン、植物アルカロイド）、(iv)プレドニゾロン（プレドニン、副腎皮質ホルモン剤）の４剤を組み合わせて治療を行う方法］等の治療を行って病態を安定させ、移植の数日前に抗がん剤や放射線による前処理により骨髄中の細胞を死滅させた後に行われる。
【００３２】
上記（３）において、骨髄移植後の予後を判定するための基準値は、骨髄移植後の予後が良好な患者と予後が不良な患者とを母集団として、各々の母集団のＣＤ３０濃度から適宜決めることができるが、通常、１５０〜２００Ｕ／ｍＬである。例えば、骨髄移植前の急性型又はリンパ腫型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度が４４２Ｕ／ｍＬ以上では、骨髄移植後の予後が不良と判定でき、１１１Ｕ／ｍＬ以下であれば、骨髄移植後の予後が良好と判定することができる。
【００３３】
［くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化を判定する方法］
慢性型ＡＴＬ、くすぶり型ＡＴＬは一般的に無治療で経過観察が行われるが、リンパ腫型や急性型に急性転化する。くすぶり型ＡＴＬ、慢性型ＡＴＬ患者の長期追跡結果によると、くすぶり型ＡＴＬの３割は急性転化し、慢性型ＡＴＬの８割が経過中に急性転化していたと報告されている。急性転化した場合は、急性型やリンパ腫型と同様に、早急に治療を開始する必要がある。
【００３４】
本発明において、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化の判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を急性転化が進行したと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を急性転化が進行していないと判定する工程。
【００３５】
くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化は基準値を基に判定することができ、該患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度そのものからも、該ＣＤ３０濃度の基準値に対する割合からも判定することができる。くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度の基準値に対する割合は、２．０倍以上、好ましくは３．０倍以上、より好ましくは４．０倍以上である。また、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度の基準値は、４００Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは６００Ｕ／ｍＬ以上、より好ましくは８００Ｕ／ｍＬ以上である。
【００３６】
［くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者が急性転化したときの治療方針を決定する方法］
本発明において、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における治療開始時期の決定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０と、ＩＬ−２Ｒ及び／又はＬＤＨ活性とを測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）でのＣＤ３０の測定値とから、当該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を急性転化したと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を急性転化していないと判定する工程；
（４）（３）で急性転化したと判定された患者について、（１）でのＩＬ−２Ｒの測定値の、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定されたときのＩＬ−２Ｒの測定値に対する割合（基準値）、及び／又は、（１）でのＬＤＨ活性の測定値の、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定されたときのＬＤＨ活性の測定値に対する割合（基準値）を算出する工程；及び
（５）（４）で算出された割合に基づいて、急性転化と判定された患者の急性転化後の治療方針を決定する工程。
【００３７】
上記（３）におけるＣＤ３０濃度に係る基準値は、前記くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化を判定する方法の基準値を用いることができる。また、（４）におけるＩＬ−２Ｒに係る基準値は、１．５以上であり、２．０以上が好ましく、３．０以上がより好ましい。また、ＬＤＨ活性に係る基準値は、１．５以上であり、２．０以上が好ましい。
【００３８】
上記（４）において、ＩＬ−２ＲまたはＬＤＨ活性に係る基準値を超えない場合は、弱めの治療を施せばよく、当該基準値を超える場合は強めの治療を施す必要がある。弱めの治療としては、３週間隔で投与するＣＯＰ療法、ＴＨＰ−ＣＨＯＰ療法［ＣＨＯＰ療法のアドリアマイシンをピラルビシンに置き換えた方法］等が挙げられ、強めの治療としては、２週間隔ＣＨＯＰ療法やＬＳＧ１５（Leukemia Study Group 15）療法等が挙げられる。
【００３９】
本発明において使用される試料は、被検者より採取された試料であって、ＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ及びＬＤＨ活性が測定され得る試料であれば特に制限はないが、血漿、血清等が好ましい。
【００４０】
本発明において、試料中のＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ及びＬＤＨ活性の測定は、例えば公知の方法およびキットを用いることにより行うことができる。
【００４１】
当該測定方法としては、生体試料中のＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ又はＬＤＨ活性を測定可能とする方法であれば特に制限はないが、例えば免疫学的測定法、酵素学的測定方法等が挙げられる。
【００４２】
免疫学的測定法としては、任意の公知の免疫学的測定方法があげられ、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、間接蛍光抗体法（Indirect Fluorescence assay）、発光免疫測定法（Luminescent immunoassay）、物理化学的測定法［比濁免疫測定法（ＴＩＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡＰＩＡ）、微粒子計数免疫凝集測定法（ＰＣＩＡ）］、ウェスタンブロッティング法等が挙げられるが、ＥＬＩＳＡ法が好ましく用いられる[単クローン抗体実験マニュアル（講談社サイエンティフィック、1987）、続生化学実験講座５免疫生化学研究法（東京化学同人、1986）]。
【００４３】
免疫学的測定法においては、サンドイッチ法、競合法等を用いることができ、また、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等も用いることができる。
【００４４】
酵素学的測定法としては、任意の公知の酵素学的測定方法があげられる。
【００４５】
ＣＤ３０測定用試薬を含有する本発明のキットは、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクの判定、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の予測に用いることができ、ＣＤ３０測定用試薬及びＩＬ−２Ｒ測定用試薬又はＬＤＨ活性測定用試薬を含有する本発明のキットは、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化後の治療方針の決定に用いることができる。
【００４６】
ＣＤ３０測定用試薬としては、ＣＤ３０に特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びＣＤ３０に特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるＣＤ３０の抗原決定部位と、第２の抗体におけるＣＤ３０の抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。標識化第２抗体における標識としては、例えば酵素や放射性物質等が挙げられる。酵素としては、例えばペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ等が挙げられる。放射性物質としては、例えば１２５Ｉ等が挙げられる。
【００４７】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば非共有結合、共有結合等が挙げられる。非共有結合としては、例えば物理吸着等が挙げられる。共有結合としては、例えば該抗体と固相との直接的な結合や、リンカー等を介した該抗体と固相との間接的な結合等が挙げられる。
【００４８】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ＣＤ３０の免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えばマイクロタイタープレートなどのポリスチレンプレート、ガラス製または合成樹脂製の粒子物（ビーズ）、ガラス製または合成樹脂製の球状物（ボール）、ラッテクス、磁性粒子、ニトロセルロース膜などの各種メンブレン、合成樹脂製の試験管などがあげられる。
【００４９】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のＣＤ３０と、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このＣＤ３０測定用試薬を用いることにより、試料中のＣＤ３０を測定することができる。試料中のＣＤ３０濃度は、例えば以下の工程を含む方法により決定することが出来る。
［１］固相上に結合した第１の抗体と試料中のＣＤ３０とを反応させて、固相上に第１の抗体−ＣＤ３０複合体を形成させる工程；
［２］工程［１］で生成した複合体と標識化第２抗体とを反応させて、固相上に第１の抗体−ＣＤ３０−標識化第２抗体複合体を形成させる工程；
［３］工程［２］での固相を洗浄し、未反応の物質を固相上から除去する工程；
［４］工程［３］の後、固相上に生成した第１の抗体−ＣＤ３０−標識化第２抗体複合体中の標識量を測定する工程；
［５］工程［４］での測定値と、予め作成したＣＤ３０濃度と標識量との関係を表す検量線とから、該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程。
【００５０】
尚、上記［１］工程と［２］工程との間に洗浄工程を挿入してもよい。
【００５１】
試料中のＣＤ３０濃度を決定するに際して使用する検量線は、既知濃度のＣＤ３０を用いて作成することができる。すなわち、既知濃度のＣＤ３０を含む試料を、例えば上記の測定法に供し、得られる情報量とＣＤ３０濃度とを関係付けることにより検量線を作成することができる。ここで、情報量としては、例えば吸光度、蛍光強度、発光強度、放射活性、濁度等が挙げられる。作成した検量線と測定値とから、測定に使用した試料中のＣＤ３０濃度を決定することができる。
【００５２】
検量線作成および試料中のＣＤ３０の測定においては、市販のＣＤ３０測定用キットを用いることもできる。市販のＣＤ３０測定用キットとしては、例えばhuman sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)等を挙げることができる。
【００５３】
本発明において、試料中のＩＬ−２Ｒは、ＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いて測定することができる。ＩＬ−２Ｒ測定用試薬としては、例えばＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるＩＬ−２Ｒの抗原決定部位と、第２の抗体におけるＩＬ−２Ｒの抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。
【００５４】
標識化第２抗体における標識としては、例えば前述の標識等が挙げられる。
【００５５】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば前述の結合等が挙げられる。
【００５６】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ＩＬ−２Ｒの免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えば前述の固相等が挙げられる。
【００５７】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のＩＬ−２Ｒと、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いることにより、試料中のＩＬ−２Ｒを測定することができる。試料中のＩＬ−２Ｒ濃度は、例えば上記のＣＤ３０濃度測定方法と同様の方法で測定することができる。
【００５８】
検量線作成および試料中のＩＬ−２Ｒの測定においては、市販のＩＬ−２Ｒ測定用キットを用いることもできる。市販のＩＬ−２Ｒ測定用キットとしては、例えばセルフリー(R)ＩＬ−２Ｒメデックス（協和メデックス株式会社製）等が挙げられる。
【００５９】
ＬＤＨ活性測定用試薬を用いたＬＤＨ活性の測定方法としては、ピルビン酸から乳酸への反応を利用したWroblewski-LaDue法や、Ｌ−乳酸からピルビン酸への反応を利用したＩＦＣＣ（国際臨床化学連合）勧告法やＪＳＣＣ（日本臨床化学会）常用基準法がある。ピルビン酸から乳酸への反応は、検体中のＬＤＨがＮＡＤＨ［ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（還元型）］の存在下でピルビン酸と反応し、乳酸とＮＡＤ＋［ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（酸化型）］へと変化することを利用し、このときのＮＡＤＨの減少速度を測定することでＬＤ活性を測定することができる。
【００６０】
Ｌ−乳酸からピルビン酸への反応は、検体中のＬＤＨがＮＡＤ＋の存在下で乳酸と反応し、ピルビン酸とＮＡＤＨへと変化することを利用し、このときのＮＡＤＨの増加速度を測定することでＬＤＨ活性を測定することができる。
【００６１】
検量線作成および試料中のＬＤＨ活性の測定においては、市販のＬＤＨ活性測定キットを用いることもできる。市販のＬＤＨ活性測定キットとしては、例えばデタミナー(R)ＬＤ（協和メデックス株式会社製）等が挙げられる。
【００６２】
このように、試料中のＣＤ３０を測定することにより、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の判定ができる。さらにくすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０と共に、ｓＩＬ−２Ｒ及び／又はまたはＬＤＨ活性を測定することにより、急性転化した患者に対する治療方針を決定することができる。このことは、ＣＤ３０が、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク判定用マーカー、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定用マーカー、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化判定用マーカーとして機能し得ることを意味する。
【００６３】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
本実施例においては、以下のメーカーの試薬類を使用した［human sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)］。
【実施例１】
【００６４】
ＨＴＬＶ−１キャリア１７症例のｓＣＤ３０濃度とｓＩＬ-２Ｒ濃度
インフォームドコンセントを得たＨＴＬＶ−１キャリア１７人（ＨＴＬＶ−１感染以外に疾患に罹患していない人）の血清中のｓＣＤ３０濃度を、ｓＣＤ３０測定用キット［human sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)］、および可溶性ＩＬ−２Ｒ測定キット[セルフリー(R)ＩＬ−２Ｒメデックス（協和メデックス社製）]を用いて測定した。また、１７名のｓＣＤ３０およびｓＩＬ−２Ｒの測定値が正規分布であることを確認した後、この群より平均値と標準偏差（ＳＤ）を算出した。その結果を表１に示す。
【００６５】
【表１】
【００６６】
ｓＣＤ３０測定キット[human sCD30 ELISA]の添付文書に記載された健常人のｓＣＤ３０基準値の上限（平均＋２ＳＤ）は、９４．７Ｕ／ｍＬ、可溶性ＩＬ−２Ｒの基準値は２２０〜５３０Ｕ／ｍＬ(株式会社エスアールエルの検査案内書を参照)であった。１７症例のｓＣＤ３０値はいずれも基準値である９４．７Ｕ／ｍＬ以下で、発症リスクが低いと判断される。一方、ＩＬ−２Ｒ値は、１７症例のうち６症例で基準値を超えていた。１７名のＨＴＬＶ−１キャリアはいずれもＡＴＬを発症していないが、ＩＬ−２Ｒ値を指標とした場合、基準値を超えている人がいる。
【００６７】
ＩＬ−２Ｒ濃度は、ＡＴＬを発症していないＨＴＬＶ−１キャリアであっても基準値を超えており、誤って発症のリスクが高いと判断してしまう恐れがある。一方、ｓＣＤ３０濃度は、１７症例における濃度がいずれも健常人の基準値以下でありＡＴＬ発症リスクが低いことを証明している。つまり、この結果は、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のｓＣＤ３０を測定することでＡＴＬ発症リスクを判定できることを示している。
【実施例２】
【００６８】
ＨＴＬＶ−１キャリアのＡＴＬ発症例および未発症例のモニター
ＨＴＬＶ−１キャリアの血液中のｓＣＤ３０濃度とｓＩＬ−２Ｒ濃度をモニターした結果を表２および図１に示す。日数とは、ｓＣＤ３０濃度及びｓＩＬ−２Ｒ濃度の追跡調査を始めた日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。
【００６９】
【表２】
【００７０】
３３６日目で、ＡＴＬを発症していないＨＴＬＶ−１キャリアの血液中のｓＣＤ３０濃度は、健常人基準値上限である９４．７Ｕ／ｍＬを越えていないことが分かる。
【実施例３】
【００７１】
急性型ＡＴＬ患者、リンパ腫型ＡＴＬ患者、慢性型ＡＴＬ患者の血清中のｓＣＤ３０濃度
インフォームドコンセントを得た、急性型ＡＴＬ７症例、リンパ腫型ＡＴＬ４症例、慢性型ＡＴＬ２症例の血清中のｓＣＤ３０濃度を、ｓＣＤ３０測定用キットを用いて測定し、その結果を表３に示した。
【００７２】
急性型７症例は１１５４〜１４９００Ｕ／ｍＬ、リンパ腫型は４１５〜９５３３Ｕ／ｍＬ、慢性型は３１４〜３６９Ｕ／ｍＬであった。実施例１で示したとおり、健常人のｓＣＤ３０基準値の上限（平均＋２ＳＤ）は、９４．７Ｕ／ｍＬ、ＨＴＬＶキャリアのｓＣＤ３０の上限（平均＋２ＳＤ）は、９７．７Ｕ／ｍＬであり、急性型、リンパ腫型及び慢性型ＡＴＬ患者のｓＣＤ３０濃度は何れも健常人及びＨＴＬＶキャリアのｓＣＤ３０濃度の上限を超えていた。
【００７３】
【表３】
【実施例４】
【００７４】
インフォームドコンセントを得たＡＴＬ患者４症例（患者Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｖ）について、骨髄移植前のｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定し、移植後の患者の状態を観察した。その結果を第４表〜第７表、および第２図〜第５図に示す。第４表〜第７表における移植後日数とは、移植日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。また、化学療法（先がダイヤ型の矢印）、ＣＨＯＰ療法（実線矢印）、前処理（点線矢印）が施された日を、図に矢印で示した。
【００７５】
【表４】
【００７６】
患者Ａ（表４、図２）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が７４１〜８０８Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植６日前に前処理が施され移植が行われた。その後、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度は落ち着いていたが、移植後５２日目にｓＩＬ−２Ｒ濃度が急激に上昇し、移植後９９日目に死亡した。
【００７７】
【表５】
【００７８】
患者Ｂ（表５、図３）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が２７８８Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後２０日目、ｓＩＬ−２Ｒ濃度、ｓＣＤ３０濃度はいずれも高値を示していた。移植後６４日目に死亡した。
【００７９】
【表６】
【００８０】
患者Ｅ（表６、図４）は、移植１１７日前、９７日前、７６日前に化学療法を、移植５０日前にＣＨＯＰ療法を行った。前処置直前のｓＣＤ３０濃度は２３８４Ｕ／ｍＬと基準値をはるかに超える値を示した。移植８日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後３２日目に死亡した。
【００８１】
【表７】
【００８２】
患者Ｖ（表７、図５）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が９３２Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後４１日目以降、ｓＩＬ−２Ｒ濃度、ｓＣＤ３０濃度はいずれも高値を示していた。移植後５８日目に死亡した。
【００８３】
【表８】
【００８４】
患者Ｗ（表８、図６）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が４４２Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後５６日目に死亡した。
【００８５】
【表９】
【００８６】
患者ＡＦ（表９、図７）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が７２０Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植５日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後１４日目に死亡した。
【００８７】
【表１０】
【００８８】
患者Ｇ（表１０、図８）は、化学治療中のｓＣＤ３０濃度が１１１Ｕ／ｍＬと健常人の基準値の上限付近の値となっていた。移植４日前に前処理が施され、骨髄移植が行われた。移植後１９０日目まで、ｓＣＤ３０濃度は２００Ｕ／ｍＬ以下で落ち着いており、容態も安定していた。移植後４４２日目現在も容態は安定しており、生存している。ｓＩＬ−２Ｒは移植後に免疫反応の影響を受けるため２１２５Ｕ／ｍＬと高値であった。
【００８９】
これらの結果をまとめると、骨髄移植前（前処置直前）にｓＣＤ３０濃度を測定し、２００Ｕ／ｍＬ以上であれば、骨髄移植後の予後は不良となり、２００Ｕ／ｍＬ以下であれば骨髄移植後の予後が良好であると判定することができる。すなわち、骨髄移植前にｓＣＤ３０濃度を測定することで、骨髄移植後の予後を判定することができる。
【００９０】
ｓＩＬ−２Ｒは、ＡＴＬにおいて病態を把握する指標として用いられている。しかしながら、ｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映すると同時に、生体内における免疫反応の活性化も反映しているため、ＡＴＬやリンパ腫特異的な指標とはならない。また、慢性関節リウマチや間質性肺炎、Ｃ型肝炎患者では、ｓＩＬ−２Ｒ値が基準値を遙かに超えて数千Ｕ／ｍＬを示す事があることが報告されている。このため、骨髄移植前のｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定することで、誤って予後が悪いと判断してしまう恐れがある。よって、ｓＩＬ-２Ｒ濃度を測定するのと同時にｓＣＤ３０濃度を測定することで、ｓＩＬ−２Ｒ濃度を単独で測定するよりも優れた予後判定ができる。
【実施例５】
【００９１】
慢性型ＡＴＬから急性転化した患者の血液中ｓＣＤ３０濃度の経時的変化
インフォームドコンセントを得た慢性型ＡＴＬ患者２症例（患者ＡＩ、ＢＡ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定し、患者の状態を観察した。その結果を第１１表〜第１２表、および第９図〜第１０図に示す。第１１表〜第１２表における日数とは、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の観察を開始した日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。また、第１１表〜第１２表における上昇率とは、慢性型ＡＴＬ患者のｓＣＤ３０濃度を観察し始めた日（０日）のｓＣＤ３０濃度を基準として、それぞれの日数における濃度との比を示している。
【００９２】
【表１１】
【００９３】
患者ＢＡ（表１１、図９）は、慢性型ＡＴＬ患者で、５７日目に急性型ＡＴＬと診断された症例であった。
【００９４】
外来受診で、ｓＣＤ３０濃度を観察し始めて２１日目にＬＤＨが２８０ＩＵ／Ｌと高値を示したため２７日目より入院した。同日（２７日目）の血液検査の結果増悪傾向を示さず、頚部リンパ節腫脹も自然に縮小していたため、２８日目に退院した。５６日目（ｓＣＤ３０は未測定）にＬＤＨが４５０ＩＵ／Ｌと急上昇しため翌５７日目に入院し急性型ＡＴＬと診断された（急性転化）。
【００９５】
ｓＣＤ３０の濃度観測開始後５８日目から１回目の化学療法、７１日目から２回目の化学療法、８４日目より３回目の化学療法を実施した。３回目の化学療法後にＬＤＨの上昇がみられたため１１７日目から４回目の化学療法が実施され軽快したため退院した（寛解はしていない）。その後、通院治療が施され、ＡＴＬ細胞も減少しているが完全寛解には至っていない。
【００９６】
ｓＣＤ３０の濃度観測開始当日（０日目）のｓＣＤ３０が３６９Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒが３７５６Ｕ／ｍＬとＨＴＬＶ−１キャリアの基準値より高い値を示したが、急性型やリンパ腫型のような高値を示していなかった（表３参照）。４２日目で８０７Ｕ／ｍＬ、４９日目で１０４８Ｕ／ｍＬまで上昇し、急性型ＡＴＬと診断された直後の５８日目では１５５４Ｕ／ｍＬとなった。また、慢性型ＡＴＬのｓＣＤ３０濃度の基準値（平均＋２ＳＤ、表３参照）を基準とした上昇率を観察すると、ｓＣＤ３０濃度の上昇率は４２日目で１．９３倍、４９日目で２．５０倍まで上昇し、急性転化が確認された直後の５８日目では３．７１倍まで上昇した。一方、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度やＬＤＨ活性の上昇も見られたが、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が４２日目で１．５０倍、４９日目で１．６６倍、ＬＤＨ活性が４２日目で１．２２倍、４９日目で１．３６倍であった。既存マーカーであるｓＩＬ−２ＲやＬＤＨ活性に比べてｓＣＤ３０濃度の上昇率は高かった。また、治療を開始した５８日目のＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率は、それぞれ３．１３倍、２．２７倍であった。患者ＢＡは、完全に寛解には至っていないが、ＡＴＬ細胞が減少し慢性型ＡＴＬとなった。
【００９７】
【表１２】
【００９８】
患者ＡＩ（表１２、図１０）は、慢性型ＡＴＬ患者で、１８９日目にリンパ腫型ＡＴＬと診断された症例であった。
【００９９】
担当医による詳細な情報は以下の通りである。
ｓＣＤ３０測定の観察を始める９８日前、胸部異常陰影、末梢血中のＡＴＬ細胞を認め受診を開始した。胸腔鏡下右肺部分切除術の施行後から末梢血中にＡＴＬ細胞が増加し慢性型ＡＴＬと診断された。その後、１６８日目に胸部レントゲンの異常に気づき１６９日目に入院した（この時点で、ＬＤＨの上昇はみられず）。１８９日目に、胸部ＣＴ検査の結果、縦郭と右肺門部のリンパ節腫脹が認められリンパ腫型ＡＴＬと診断された（急性転化）。おそらく１６８〜１８９日目で急性転化したと推測された。
【０１００】
ＬＳＧ(Leukemia Study Group)１５のプロトコールに従い、１９８日目、２３３日目、２８６日目に、３回の化学療法を行った。同時に肺病変が消失した。３５７日目に完全寛解した。
【０１０１】
ｓＣＤ３０測定の観察を始めた当日（０日目）のｓＣＤ３０濃度が３１４Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２６９１Ｕ／ｍＬとＨＴＬＶキャリアの基準値より高い値を示したが、急性型やリンパ腫型のような高値を示していなかった（表３参照）。９１日目で６１３Ｕ／ｍＬ、１２６日目で７３５Ｕ／ｍＬ、１６８日目で１９８３Ｕ／ｍＬ、１８０日目に２８３１Ｕ／ｍＬ、急性転化が確認された直前の１８７日目では３５６９Ｕ／ｍＬまで上昇した。また、０日目のｓＣＤ３０濃度を基準とした場合の上昇率を観察すると、ｓＣＤ３０濃度の上昇率は１２６日目で１．７５倍、１６８日目で４．７３倍まで上昇した。一方、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度やＬＤＨ活性の上昇はほとんど見られず、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が１２６日目で０．９７倍、１６８日目で１．１６倍、ＬＤＨ活性が１２６日目で０．８３倍、１６８日目で０．９２倍であった。ｓＣＤ３０濃度の急激な上昇を確認したことにより確定診断が行われ、リンパ腫型ＡＴＬに急性転化していることが確認された。また、治療を開始する直前の１９７日目のＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率は、それぞれ１．５２倍、１．５４倍であった。３回の化学療法で患者ＡＩの肺病変が完全に消失し、３５７日目に完全寛解した。
【０１０２】
急性転化した２症例の治療効果を比べてみると、患者ＡＩが完全寛解に至ったのに対し、患者ＢＡは完全寛解には至らなかった。両症例の違いを比較してみると、症例ＡＩではＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇が起こらないうちに治療を開始しているのに対し、症例ＢＡでは、ＬＤＨ活性の上昇率が２．２７倍、ｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が３．１３倍になったときに治療を開始している。ＬＤＨやｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映している診断マーカーであるので、腫瘍細胞数が少ない段階で治療を開始した症例ＡＩの方が治療の効果が出たと判断される。つまり、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が低い症例の方が、上昇率が高い症例に比べて、同じ化学療法を施行した場合、高い治療効果を期待することができる。また、急性転化が予測され、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率に応じて治療の強弱を選択することもできる。すなわち、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が低いときには弱めの治療でも効果が期待できるが、上昇率が高いときには強めの治療を施す必要がある。このように、ｓＣＤ３０濃度により急性転化が判定できた段階で、ＬＤＨ活性とｓＩＬ−２Ｒ濃度を観察することで、治療法や治療の開始時期などの治療方針を決定することが出来る。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
本発明により、ＨＴＬＶ−１キャリアやＡＴＬ患者のＱＯＬ向上に有用な、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定する方法、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化後の治療方針を決定する方法、並びにこれらの方法に用いるキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】ＨＴＬＶ−１キャリア（キャリアＭ）の血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図２】ＡＴＬ患者Ａの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図３】ＡＴＬ患者Ｂの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図４】ＡＴＬ患者Ｅの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図５】ＡＴＬ患者Ｖの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図６】ＡＴＬ患者Ｗの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図７】ＡＴＬ患者ＡＦの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図８】ＡＴＬ患者Ｇの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図９】慢性型ＡＴＬ患者（患者ＢＡ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率を経時的に示した図である。
【図１０】慢性型ＡＴＬ患者（患者ＡＩ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率を経時的に示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（以下、ＡＴＬと記す）患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者におけるＡＴＬの急性転化を判定するための方法や、この方法に用いるキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトＴリンパ球向性ウィルスは、レトロウィルスの１種であり、１型と２型の２つの型が存在する。このうち、１型、すなわち、ＨＴＬＶ−１は、日沼らによって成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫の原因ウィルスとして同定されている（非特許文献１、２、３参照）。
【０００３】
ヒトにおけるＨＴＬＶ−１感染は、主に母から子への垂直感染ならびに夫から妻への水平感染であるが、輸血による医原性感染も知られている。輸血による医原性感染は、１９８６年から開始された抗ＨＴＬＶ−１（または２）抗体を検査することにより防止されてきた。輸血による医原性感染の疫学的研究から、ＨＴＬＶ−１感染は血球細胞成分が介在していることが知られている。ＨＴＬＶ−１に感染すると、生体中に抗ＨＴＬＶ−１抗体が生成してくるので、抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定することにより、ＨＴＬＶ−１の感染を知ることができる。
【０００４】
抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定する方法としては、免疫学的手法を用いた測定方法が知られており、ゼラチン粒子凝集法（ＰＡ法）、蛍光抗体法（ＦＡ法）、間接蛍光抗体法（ＩＦ法）、酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ法）、ウェスタンブロット法（ＷＢ法）などが知られている。
【０００５】
しかしながら、単独の方法でのＨＴＬＶ−１感染の判定は確実ではなく、一次スクリーニングで陽性と判断された場合でも、ＦＡ法、ＷＢ法といった二次スクリーニングを行う必要がある。さらに当該被験者がＨＴＬＶ−１に感染しているという診断を最終的に下すためには、末梢血またはリンパ節細胞のリンパ球ゲノムにＨＴＬＶ−１プロウィルスＤＮＡが組み込まれていることをサザンブロット法あるいはＰＣＲ法を用いて遺伝子的に証明する必要がある。
【０００６】
ＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患としては、例えば血流内やリンパ器官内で発症する成人Ｔ細胞性白血病／リンパ腫、脊髄内で発症するＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＡＭ／ＴＳＰ）、眼球内で発症したブドウ膜炎（ＨＵ）等が知られている。
【０００７】
ＡＴＬは、ＨＴＬＶ−１の感染が原因となって起こる独立した疾患である。ＨＴＬＶ−１キャリア（ＨＴＬＶ−１に感染した者で、上記のＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患を発症していない者）は日本国内で１２０万人と推定されており、ＨＴＬＶ−１キャリアの１０００人に１人が感染から平均５０年後にＡＴＬを発症すると言われている。発症率は非常に低いがひとたび発症するときわめて短期間で重篤な結果もたらすと言われている。
【０００８】
ＡＴＬは、急性型、リンパ腫型、慢性型、くすぶり型の４種類の臨床病型に分類され、この臨床病型は化学療法を含めた治療方針の決定に広く使用されている。リンパ腫型や急性型はがん細胞の増殖が早く、急速に症状が出現するために予後（生存率）が悪いと言われており、早急な治療が必要となる。一方、くすぶり型は血液中のがん細胞の数が少なく症状をあまり伴わないため、無治療で長期間変わらず経過することが多い。慢性型は、血液中のがん細胞の増殖が早くなく症状もあまり伴わないため、無治療で経過を観察することが一般的に行われている。このように、急性型、リンパ腫型に比べると、慢性型やくすぶり型は生存率が高いと言われている。
【０００９】
しかしながら、慢性型やくすぶり型から、急性型やリンパ腫型の病状へと急性転化する場合があると言われている。くすぶり型ＡＴＬ、慢性型ＡＴＬ患者の長期追跡結果によるとくすぶり型ＡＴＬの３割は急性転化し、慢性型ＡＴＬの８割が経過中に急性転化していたと報告されている。急性転化した場合は、急性型やリンパ腫型と同様に、早急に治療を開始する必要がある。現在、血清中のＬＤＨ活性や可溶型インターロイキン−２受容体（以下、ｓＩＬ−２Ｒと記す）濃度、白血球数、末梢血ＡＴＬ細胞数、カルシウム濃度などを検査し、異常がみられた場合には、リンパ節腫脹の有無と数、皮膚病変の有無、肺病変の有無、肝脾腫の有無、その他の病変の有無、画像診断としてのＣＴ（Computed Tomography）検査ならびにガリウムシンチグラフィ検査あるいはＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）検査を行い、急性型やリンパ腫型への急性転化の確定診断を行っているが、急性転化を早期に予知することは困難である。
【００１０】
１９９０〜１９９５年の本邦全国ＡＴＬ実態調査によると、ＡＴＬ２１２３例中、急性型は１３２８例（６２．６％）、リンパ腫型は５０５例（２３．８％）、慢性型は１７６例（８．３％）、くすぶり型は１１４例（５．４％）であった。
【００１１】
ＡＴＬについては、化学療法のみの治療成績では完全寛解率は１６〜４１％、生存期間中央値は３〜１３ヵ月であり、その予後は極めて不良であることが報告されていたが、化学療法による着実な進歩が見られ、最近では生存期間中央値が１２ヶ月を越える治療法も報告されている。また、化学療法で十分な効果が期待できない場合は、骨髄移植（同種造血幹細胞移植）が積極的に行われるようになり、一部の患者では治癒も期待できるようになってきた（非特許文献４参照）。
【００１２】
ＡＴＬ発症を予測する方法がＪＳＰＦＡＤ(Joint Study of Predisposing Factors of ATL Development)により研究されているが、未だ有用な方法は報告されていない。
【００１３】
ｓＩＬ−２ＲはＡＴＬの病態モニタリングや予後予測の有用な指標として活用されており、ＡＴＬの発症予測因子として期待されている。しかしながら、ｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映すると同時に生体内における免疫反応の活性化も反映していることや、慢性関節リウマチや間質性肺炎、Ｃ型肝炎患者では、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が基準値を遙かに超えて数千Ｕ／ｍＬを示す事があることが報告されていることから、ＨＴＬＶ−１キャリアがこのような疾患に罹患していた場合、ＡＴＬの発症予測の指標としてｓＩＬ−２Ｒ濃度を用いることが適さない可能性がある。
【００１４】
ＬＤＨは、体内の組織中に広く分布し、嫌気的解糖系最終段階に働く酵素である。血清・血漿中のＬＤＨ活性は、急性肝炎、心筋梗塞、悪性貧血、白血病、悪性腫瘍などで上昇が見られることより、これらの疾患の診断および経過観察に有用である。ＡＴＬにおいて、ＬＤＨ活性は腫瘍量を反映し病勢とよく相関することから、診断基準の１つとして用いられている。
【００１５】
ＣＤ３０は、ＴＮＦＲスーパーファミリーに属する受容体で、ホジキン病細胞、ステルンベルグ−リード（Sternberg-Reed）細胞、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）細胞、ＡＴＬ細胞で発現していることが報告されている（非特許文献５、６参照）。その後、ＣＤ３０の細胞外部分が切断された可溶型ＣＤ３０（以下、ｓＣＤ３０と記す）が血中に存在すること事が報告されている。ＡＴＬ患者とＣＤ３０との関連については、健常人と比べＡＴＬ患者血液中のｓＣＤ３０量が多いこと、すでに増悪化した急性型ＡＴＬおよびリンパ腫型ＡＴＬにおいて、化学療法により寛解となるとｓＣＤ３０量が低下すること、寛解した後に再発した際にｓＣＤ３０量が増加することが報告されている（非特許文献７参照）。
【００１６】
【非特許文献１】Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America, 78, 6476. 1981
【非特許文献２】Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America, 79, 2031. 1982
【非特許文献３】Sciences, 219, 856. 1983
【非特許文献４】International journal of hematology, 69(3):203-5. 1999 Apr
【非特許文献５】Nature, 2;299(5878):65-7. 1982 Sep
【非特許文献６】Histopathology, 26(6):539-46. 1995 Jun
【非特許文献７】Cancer science, 96(11):810-5. 2005 Nov
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症の早期診断によるＨＴＬＶ−１キャリアのＱＯＬの向上、ＡＴＬ患者、特にくすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化の早期診断によるくすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者のＱＯＬの向上を指向し、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定する方法、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における治療時期決定のための優れた方法、並びにこれらの方法に用いるためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明者は、本課題の解決のために鋭意検討し、ＴＮＦスーパーファミリーに属する因子であるＣＤ３０を測定することにより、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、及びくすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の判定が可能となるという知見を見出し、さらに、ＣＤ３０と、ＩＬ−２Ｒ又はＬＤＨ活性とを測定することにより、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における治療時期を決定できる、という知見を見出し、本発明を完成させた。
【００１９】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１０］に関する。
［１］ ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型キャリアより採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該キャリアにおける成人Ｔ細胞白血病発症リスクを判定する方法。
［２］ 成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該患者における骨髄移植後の予後を判定する方法。
［３］ くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定し、得られる測定値により、当該患者における成人Ｔ細胞白血病の急性転化を判定する方法。
［４］ くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０と、インターロイキン−２受容体及び／又は乳酸脱水素酵素活性とを測定し、得られる測定値により、当該患者の急性転化後の治療方針を決定する方法。
［５］ ＣＤ３０が、可溶型である［１］〜［４］のいずれかに記載の方法。
［６］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型キャリアにおける成人Ｔ細胞白血病発症リスク判定用キット。
［７］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、成人Ｔ細胞白血病患者における骨髄移植後の予後判定用キット。
［８］ ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
［９］ ＣＤ３０測定用試薬と、インターロイキン−２受容体測定用試薬及び／又は乳酸脱水素酵素活性測定用試薬とを含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者の急性転化後の治療方針決定用キット。
［１０］ ＣＤ３０が、可溶型である［６］〜［９］のいずれかに記載のキット。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によると、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定することや、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者の急性転化後の治療方針を決定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明におけるＣＤ３０は、可溶型ＣＤ３０（ｓＣＤ３０）と非可溶型ＣＤ３０の両方を包含するが、可溶型ＣＤ３０（ｓＣＤ３０）が好ましい。また、本発明におけるＣＤ３０は、全長型のみならず一部が切れた断片型をも包含する。本発明におけるＩＬ−２Ｒは、可溶型ＩＬ−２Ｒ（ｓＩＬ−２Ｒ）と非可溶型ＩＬ−２Ｒの両方を含むが、可溶型ＩＬ−２Ｒ（ｓＩＬ−２Ｒ）が好ましい。
【００２２】
［ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク判定方法］
本発明において、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症の判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該生体試料中のＣＤ３０の濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値に照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該キャリアをＡＴＬ発症のリスクが高いと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該キャリアをＡＴＬ発症のリスクが低いと判定する工程。
【００２３】
ＨＴＬＶ−１キャリアとは、前記の通り、ＨＴＬＶ−１に感染しているがＡＴＬ等の疾患を発症していない者を指すが、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０の測定は、例えば後述のＣＤ３０測定方法により行うことができる。
【００２４】
上記基準値は、測定値の平均値±２ＳＤ（ＳＤ：標準偏差）で規定することが好ましい。ここで、測定値としては、健常人に対する測定値であっても、ＨＴＬＶ−１キャリアに対する測定値であってもよいが、測定によって決定されるＣＤ３０濃度は、測定に使用する試薬の種類や測定法等の測定条件により変わり得るので、基準値は、同一の測定条件下で、あらかじめ選択した母集団に対して行った測定により規定することが好ましい。ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクの予測に際して、母集団としては、ＡＴＬを発症していない健常人及び／又はＨＴＬＶ−１キャリアからなる集団であり、母集団の人数としては、通常１０名以上、好ましくは３０人以上、より好ましくは５０人以上である。
【００２５】
例えば、ＨＴＬＶに感染していない健常人３２名の血液中に含まれるｓＣＤ３０濃度を測定した際の平均値±ＳＤが３８．７±２８．０Ｕ／ｍＬである場合は、健常人のｓＣＤ３０濃度を規定する基準値としては、平均値＋２ＳＤである、９４．７Ｕ／ｍＬと規定することができる。
【００２６】
また、ＨＴＬＶ−１キャリアの血液中に含まれるｓＣＤ３０濃度を測定した際１７名の平均値±ＳＤが４０．２±２３．２Ｕ／ｍＬである場合は、ＨＴＬＶ−１キャリアのｓＣＤ３０濃度を規定する基準値としては、平均値＋２ＳＤである、８６．６Ｕ／ｍＬと規定することができる。
【００２７】
同様に、急性型ＡＴＬ６症例、リンパ腫型ＡＴＬ５症例、及び慢性型ＡＴＬ２症例の血清中のｓＣＤ３０濃度がそれぞれ、１９７７〜１４９００Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：５４０８±１０２９０）、４１５〜３７４８Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：３６２６±８４１８）、３１４〜３６９Ｕ／ｍＬ（平均±２ＳＤ：３４１±７９）である場合は、ｓＣＤ３０の濃度が２７０Ｕ／ｍＬ以上であれば、ＡＴＬを発症していると判定でき、１００Ｕ／ｍＬ未満であればＡＴＬを発症していない、と判定できる。
【００２８】
ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクは、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０濃度から判定できるが、基準値からの割合によっても判定することができる。ＨＴＬＶ−１キャリアに対してＡＴＬ発症のリスクが高いと判定できる場合の基準値に対する割合は、１．１以上であり、好ましくは３以上であり、より好ましくは４以上である。また、ＨＴＬＶ−１キャリアに対してＡＴＬ発症のリスクが高いと判定できる場合のＣＤ３０濃度としては、１００Ｕ／ｍＬ以上であり、好ましくは２７０Ｕ／ｍＬ以上であり、より好ましくは３６０Ｕ／ｍＬ以上である。
【００２９】
このように、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のＣＤ３０濃度が基準値よりも高濃度である場合に該キャリアがＡＴＬを発症するリスクが高いと判定することができる。また、基準値を適当に規定することにより、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと、リンパ腫型又は急性型ＡＴＬとを判別することもできる。当該判別は、例えば４００Ｕ／ｍＬを基準値として規定することにより行うことができる。
【００３０】
［ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後を判定する方法］
本発明において、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）急性型又はリンパ腫型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該生体試料中のＣＤ３０の濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を骨髄移植後の予後が不良と判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を骨髄移植後の予後が良好と判定する工程。
【００３１】
通常、骨髄移植は、移植に先立ち病態を安定化させるために、化学療法、またはＣＨＯＰ療法［（i）アドリアシン（ドキソルビシン、慣用名：アドリアマイシン、抗がん剤抗生物質）、(ii)エンドキサン（シクロホスファミド、アルキル化剤）、(iii)オンコビン（ビンクリスチン、植物アルカロイド）、(iv)プレドニゾロン（プレドニン、副腎皮質ホルモン剤）の４剤を組み合わせて治療を行う方法］等の治療を行って病態を安定させ、移植の数日前に抗がん剤や放射線による前処理により骨髄中の細胞を死滅させた後に行われる。
【００３２】
上記（３）において、骨髄移植後の予後を判定するための基準値は、骨髄移植後の予後が良好な患者と予後が不良な患者とを母集団として、各々の母集団のＣＤ３０濃度から適宜決めることができるが、通常、１５０〜２００Ｕ／ｍＬである。例えば、骨髄移植前の急性型又はリンパ腫型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度が４４２Ｕ／ｍＬ以上では、骨髄移植後の予後が不良と判定でき、１１１Ｕ／ｍＬ以下であれば、骨髄移植後の予後が良好と判定することができる。
【００３３】
［くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化を判定する方法］
慢性型ＡＴＬ、くすぶり型ＡＴＬは一般的に無治療で経過観察が行われるが、リンパ腫型や急性型に急性転化する。くすぶり型ＡＴＬ、慢性型ＡＴＬ患者の長期追跡結果によると、くすぶり型ＡＴＬの３割は急性転化し、慢性型ＡＴＬの８割が経過中に急性転化していたと報告されている。急性転化した場合は、急性型やリンパ腫型と同様に、早急に治療を開始する必要がある。
【００３４】
本発明において、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化の判定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０を測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）での測定値とから、当該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を急性転化が進行したと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を急性転化が進行していないと判定する工程。
【００３５】
くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化は基準値を基に判定することができ、該患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度そのものからも、該ＣＤ３０濃度の基準値に対する割合からも判定することができる。くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度の基準値に対する割合は、２．０倍以上、好ましくは３．０倍以上、より好ましくは４．０倍以上である。また、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０濃度の基準値は、４００Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは６００Ｕ／ｍＬ以上、より好ましくは８００Ｕ／ｍＬ以上である。
【００３６】
［くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者が急性転化したときの治療方針を決定する方法］
本発明において、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における治療開始時期の決定は、例えば以下の工程を含有する方法により行うことが出来る。
（１）くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定された患者より採取された試料を用いて、当該試料中のＣＤ３０と、ＩＬ−２Ｒ及び／又はＬＤＨ活性とを測定する工程；
（２）予め作成したＣＤ３０濃度と情報量との関係を表す検量線と、（１）でのＣＤ３０の測定値とから、当該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程；
（３）（２）で決定した当該試料中のＣＤ３０濃度を基準値と照らし合わせて、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも高い場合、当該患者を急性転化したと判定し、ＣＤ３０濃度が当該基準値よりも低い場合、当該患者を急性転化していないと判定する工程；
（４）（３）で急性転化したと判定された患者について、（１）でのＩＬ−２Ｒの測定値の、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定されたときのＩＬ−２Ｒの測定値に対する割合（基準値）、及び／又は、（１）でのＬＤＨ活性の測定値の、くすぶり型又は慢性型ＡＴＬと判定されたときのＬＤＨ活性の測定値に対する割合（基準値）を算出する工程；及び
（５）（４）で算出された割合に基づいて、急性転化と判定された患者の急性転化後の治療方針を決定する工程。
【００３７】
上記（３）におけるＣＤ３０濃度に係る基準値は、前記くすぶり型又は慢性型ＡＴＬ患者における急性転化を判定する方法の基準値を用いることができる。また、（４）におけるＩＬ−２Ｒに係る基準値は、１．５以上であり、２．０以上が好ましく、３．０以上がより好ましい。また、ＬＤＨ活性に係る基準値は、１．５以上であり、２．０以上が好ましい。
【００３８】
上記（４）において、ＩＬ−２ＲまたはＬＤＨ活性に係る基準値を超えない場合は、弱めの治療を施せばよく、当該基準値を超える場合は強めの治療を施す必要がある。弱めの治療としては、３週間隔で投与するＣＯＰ療法、ＴＨＰ−ＣＨＯＰ療法［ＣＨＯＰ療法のアドリアマイシンをピラルビシンに置き換えた方法］等が挙げられ、強めの治療としては、２週間隔ＣＨＯＰ療法やＬＳＧ１５（Leukemia Study Group 15）療法等が挙げられる。
【００３９】
本発明において使用される試料は、被検者より採取された試料であって、ＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ及びＬＤＨ活性が測定され得る試料であれば特に制限はないが、血漿、血清等が好ましい。
【００４０】
本発明において、試料中のＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ及びＬＤＨ活性の測定は、例えば公知の方法およびキットを用いることにより行うことができる。
【００４１】
当該測定方法としては、生体試料中のＣＤ３０、ＩＬ−２Ｒ又はＬＤＨ活性を測定可能とする方法であれば特に制限はないが、例えば免疫学的測定法、酵素学的測定方法等が挙げられる。
【００４２】
免疫学的測定法としては、任意の公知の免疫学的測定方法があげられ、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、間接蛍光抗体法（Indirect Fluorescence assay）、発光免疫測定法（Luminescent immunoassay）、物理化学的測定法［比濁免疫測定法（ＴＩＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡＰＩＡ）、微粒子計数免疫凝集測定法（ＰＣＩＡ）］、ウェスタンブロッティング法等が挙げられるが、ＥＬＩＳＡ法が好ましく用いられる[単クローン抗体実験マニュアル（講談社サイエンティフィック、1987）、続生化学実験講座５免疫生化学研究法（東京化学同人、1986）]。
【００４３】
免疫学的測定法においては、サンドイッチ法、競合法等を用いることができ、また、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等も用いることができる。
【００４４】
酵素学的測定法としては、任意の公知の酵素学的測定方法があげられる。
【００４５】
ＣＤ３０測定用試薬を含有する本発明のキットは、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスクの判定、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の予測に用いることができ、ＣＤ３０測定用試薬及びＩＬ−２Ｒ測定用試薬又はＬＤＨ活性測定用試薬を含有する本発明のキットは、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化後の治療方針の決定に用いることができる。
【００４６】
ＣＤ３０測定用試薬としては、ＣＤ３０に特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びＣＤ３０に特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるＣＤ３０の抗原決定部位と、第２の抗体におけるＣＤ３０の抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。標識化第２抗体における標識としては、例えば酵素や放射性物質等が挙げられる。酵素としては、例えばペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ等が挙げられる。放射性物質としては、例えば１２５Ｉ等が挙げられる。
【００４７】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば非共有結合、共有結合等が挙げられる。非共有結合としては、例えば物理吸着等が挙げられる。共有結合としては、例えば該抗体と固相との直接的な結合や、リンカー等を介した該抗体と固相との間接的な結合等が挙げられる。
【００４８】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ＣＤ３０の免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えばマイクロタイタープレートなどのポリスチレンプレート、ガラス製または合成樹脂製の粒子物（ビーズ）、ガラス製または合成樹脂製の球状物（ボール）、ラッテクス、磁性粒子、ニトロセルロース膜などの各種メンブレン、合成樹脂製の試験管などがあげられる。
【００４９】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のＣＤ３０と、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このＣＤ３０測定用試薬を用いることにより、試料中のＣＤ３０を測定することができる。試料中のＣＤ３０濃度は、例えば以下の工程を含む方法により決定することが出来る。
［１］固相上に結合した第１の抗体と試料中のＣＤ３０とを反応させて、固相上に第１の抗体−ＣＤ３０複合体を形成させる工程；
［２］工程［１］で生成した複合体と標識化第２抗体とを反応させて、固相上に第１の抗体−ＣＤ３０−標識化第２抗体複合体を形成させる工程；
［３］工程［２］での固相を洗浄し、未反応の物質を固相上から除去する工程；
［４］工程［３］の後、固相上に生成した第１の抗体−ＣＤ３０−標識化第２抗体複合体中の標識量を測定する工程；
［５］工程［４］での測定値と、予め作成したＣＤ３０濃度と標識量との関係を表す検量線とから、該試料中のＣＤ３０濃度を決定する工程。
【００５０】
尚、上記［１］工程と［２］工程との間に洗浄工程を挿入してもよい。
【００５１】
試料中のＣＤ３０濃度を決定するに際して使用する検量線は、既知濃度のＣＤ３０を用いて作成することができる。すなわち、既知濃度のＣＤ３０を含む試料を、例えば上記の測定法に供し、得られる情報量とＣＤ３０濃度とを関係付けることにより検量線を作成することができる。ここで、情報量としては、例えば吸光度、蛍光強度、発光強度、放射活性、濁度等が挙げられる。作成した検量線と測定値とから、測定に使用した試料中のＣＤ３０濃度を決定することができる。
【００５２】
検量線作成および試料中のＣＤ３０の測定においては、市販のＣＤ３０測定用キットを用いることもできる。市販のＣＤ３０測定用キットとしては、例えばhuman sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)等を挙げることができる。
【００５３】
本発明において、試料中のＩＬ−２Ｒは、ＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いて測定することができる。ＩＬ−２Ｒ測定用試薬としては、例えばＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるＩＬ−２Ｒの抗原決定部位と、第２の抗体におけるＩＬ−２Ｒの抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。
【００５４】
標識化第２抗体における標識としては、例えば前述の標識等が挙げられる。
【００５５】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば前述の結合等が挙げられる。
【００５６】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ＩＬ−２Ｒの免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えば前述の固相等が挙げられる。
【００５７】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のＩＬ−２Ｒと、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いることにより、試料中のＩＬ−２Ｒを測定することができる。試料中のＩＬ−２Ｒ濃度は、例えば上記のＣＤ３０濃度測定方法と同様の方法で測定することができる。
【００５８】
検量線作成および試料中のＩＬ−２Ｒの測定においては、市販のＩＬ−２Ｒ測定用キットを用いることもできる。市販のＩＬ−２Ｒ測定用キットとしては、例えばセルフリー(R)ＩＬ−２Ｒメデックス（協和メデックス株式会社製）等が挙げられる。
【００５９】
ＬＤＨ活性測定用試薬を用いたＬＤＨ活性の測定方法としては、ピルビン酸から乳酸への反応を利用したWroblewski-LaDue法や、Ｌ−乳酸からピルビン酸への反応を利用したＩＦＣＣ（国際臨床化学連合）勧告法やＪＳＣＣ（日本臨床化学会）常用基準法がある。ピルビン酸から乳酸への反応は、検体中のＬＤＨがＮＡＤＨ［ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（還元型）］の存在下でピルビン酸と反応し、乳酸とＮＡＤ＋［ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（酸化型）］へと変化することを利用し、このときのＮＡＤＨの減少速度を測定することでＬＤ活性を測定することができる。
【００６０】
Ｌ−乳酸からピルビン酸への反応は、検体中のＬＤＨがＮＡＤ＋の存在下で乳酸と反応し、ピルビン酸とＮＡＤＨへと変化することを利用し、このときのＮＡＤＨの増加速度を測定することでＬＤＨ活性を測定することができる。
【００６１】
検量線作成および試料中のＬＤＨ活性の測定においては、市販のＬＤＨ活性測定キットを用いることもできる。市販のＬＤＨ活性測定キットとしては、例えばデタミナー(R)ＬＤ（協和メデックス株式会社製）等が挙げられる。
【００６２】
このように、試料中のＣＤ３０を測定することにより、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化の判定ができる。さらにくすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のＣＤ３０と共に、ｓＩＬ−２Ｒ及び／又はまたはＬＤＨ活性を測定することにより、急性転化した患者に対する治療方針を決定することができる。このことは、ＣＤ３０が、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク判定用マーカー、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後判定用マーカー、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化判定用マーカーとして機能し得ることを意味する。
【００６３】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
本実施例においては、以下のメーカーの試薬類を使用した［human sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)］。
【実施例１】
【００６４】
ＨＴＬＶ−１キャリア１７症例のｓＣＤ３０濃度とｓＩＬ-２Ｒ濃度
インフォームドコンセントを得たＨＴＬＶ−１キャリア１７人（ＨＴＬＶ−１感染以外に疾患に罹患していない人）の血清中のｓＣＤ３０濃度を、ｓＣＤ３０測定用キット［human sCD30 ELISA(Bender MedSystems社製)］、および可溶性ＩＬ−２Ｒ測定キット[セルフリー(R)ＩＬ−２Ｒメデックス（協和メデックス社製）]を用いて測定した。また、１７名のｓＣＤ３０およびｓＩＬ−２Ｒの測定値が正規分布であることを確認した後、この群より平均値と標準偏差（ＳＤ）を算出した。その結果を表１に示す。
【００６５】
【表１】
【００６６】
ｓＣＤ３０測定キット[human sCD30 ELISA]の添付文書に記載された健常人のｓＣＤ３０基準値の上限（平均＋２ＳＤ）は、９４．７Ｕ／ｍＬ、可溶性ＩＬ−２Ｒの基準値は２２０〜５３０Ｕ／ｍＬ(株式会社エスアールエルの検査案内書を参照)であった。１７症例のｓＣＤ３０値はいずれも基準値である９４．７Ｕ／ｍＬ以下で、発症リスクが低いと判断される。一方、ＩＬ−２Ｒ値は、１７症例のうち６症例で基準値を超えていた。１７名のＨＴＬＶ−１キャリアはいずれもＡＴＬを発症していないが、ＩＬ−２Ｒ値を指標とした場合、基準値を超えている人がいる。
【００６７】
ＩＬ−２Ｒ濃度は、ＡＴＬを発症していないＨＴＬＶ−１キャリアであっても基準値を超えており、誤って発症のリスクが高いと判断してしまう恐れがある。一方、ｓＣＤ３０濃度は、１７症例における濃度がいずれも健常人の基準値以下でありＡＴＬ発症リスクが低いことを証明している。つまり、この結果は、ＨＴＬＶ−１キャリアより採取された試料中のｓＣＤ３０を測定することでＡＴＬ発症リスクを判定できることを示している。
【実施例２】
【００６８】
ＨＴＬＶ−１キャリアのＡＴＬ発症例および未発症例のモニター
ＨＴＬＶ−１キャリアの血液中のｓＣＤ３０濃度とｓＩＬ−２Ｒ濃度をモニターした結果を表２および図１に示す。日数とは、ｓＣＤ３０濃度及びｓＩＬ−２Ｒ濃度の追跡調査を始めた日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。
【００６９】
【表２】
【００７０】
３３６日目で、ＡＴＬを発症していないＨＴＬＶ−１キャリアの血液中のｓＣＤ３０濃度は、健常人基準値上限である９４．７Ｕ／ｍＬを越えていないことが分かる。
【実施例３】
【００７１】
急性型ＡＴＬ患者、リンパ腫型ＡＴＬ患者、慢性型ＡＴＬ患者の血清中のｓＣＤ３０濃度
インフォームドコンセントを得た、急性型ＡＴＬ７症例、リンパ腫型ＡＴＬ４症例、慢性型ＡＴＬ２症例の血清中のｓＣＤ３０濃度を、ｓＣＤ３０測定用キットを用いて測定し、その結果を表３に示した。
【００７２】
急性型７症例は１１５４〜１４９００Ｕ／ｍＬ、リンパ腫型は４１５〜９５３３Ｕ／ｍＬ、慢性型は３１４〜３６９Ｕ／ｍＬであった。実施例１で示したとおり、健常人のｓＣＤ３０基準値の上限（平均＋２ＳＤ）は、９４．７Ｕ／ｍＬ、ＨＴＬＶキャリアのｓＣＤ３０の上限（平均＋２ＳＤ）は、９７．７Ｕ／ｍＬであり、急性型、リンパ腫型及び慢性型ＡＴＬ患者のｓＣＤ３０濃度は何れも健常人及びＨＴＬＶキャリアのｓＣＤ３０濃度の上限を超えていた。
【００７３】
【表３】
【実施例４】
【００７４】
インフォームドコンセントを得たＡＴＬ患者４症例（患者Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｖ）について、骨髄移植前のｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定し、移植後の患者の状態を観察した。その結果を第４表〜第７表、および第２図〜第５図に示す。第４表〜第７表における移植後日数とは、移植日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。また、化学療法（先がダイヤ型の矢印）、ＣＨＯＰ療法（実線矢印）、前処理（点線矢印）が施された日を、図に矢印で示した。
【００７５】
【表４】
【００７６】
患者Ａ（表４、図２）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が７４１〜８０８Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植６日前に前処理が施され移植が行われた。その後、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度は落ち着いていたが、移植後５２日目にｓＩＬ−２Ｒ濃度が急激に上昇し、移植後９９日目に死亡した。
【００７７】
【表５】
【００７８】
患者Ｂ（表５、図３）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が２７８８Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後２０日目、ｓＩＬ−２Ｒ濃度、ｓＣＤ３０濃度はいずれも高値を示していた。移植後６４日目に死亡した。
【００７９】
【表６】
【００８０】
患者Ｅ（表６、図４）は、移植１１７日前、９７日前、７６日前に化学療法を、移植５０日前にＣＨＯＰ療法を行った。前処置直前のｓＣＤ３０濃度は２３８４Ｕ／ｍＬと基準値をはるかに超える値を示した。移植８日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後３２日目に死亡した。
【００８１】
【表７】
【００８２】
患者Ｖ（表７、図５）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が９３２Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後４１日目以降、ｓＩＬ−２Ｒ濃度、ｓＣＤ３０濃度はいずれも高値を示していた。移植後５８日目に死亡した。
【００８３】
【表８】
【００８４】
患者Ｗ（表８、図６）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が４４２Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植７日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後５６日目に死亡した。
【００８５】
【表９】
【００８６】
患者ＡＦ（表９、図７）は、化学療法中のｓＣＤ３０濃度が７２０Ｕ／ｍＬと基準値よりもはるかに高い値を示した。移植５日前に前処置が施され、骨髄移植が行われた。移植後１４日目に死亡した。
【００８７】
【表１０】
【００８８】
患者Ｇ（表１０、図８）は、化学治療中のｓＣＤ３０濃度が１１１Ｕ／ｍＬと健常人の基準値の上限付近の値となっていた。移植４日前に前処理が施され、骨髄移植が行われた。移植後１９０日目まで、ｓＣＤ３０濃度は２００Ｕ／ｍＬ以下で落ち着いており、容態も安定していた。移植後４４２日目現在も容態は安定しており、生存している。ｓＩＬ−２Ｒは移植後に免疫反応の影響を受けるため２１２５Ｕ／ｍＬと高値であった。
【００８９】
これらの結果をまとめると、骨髄移植前（前処置直前）にｓＣＤ３０濃度を測定し、２００Ｕ／ｍＬ以上であれば、骨髄移植後の予後は不良となり、２００Ｕ／ｍＬ以下であれば骨髄移植後の予後が良好であると判定することができる。すなわち、骨髄移植前にｓＣＤ３０濃度を測定することで、骨髄移植後の予後を判定することができる。
【００９０】
ｓＩＬ−２Ｒは、ＡＴＬにおいて病態を把握する指標として用いられている。しかしながら、ｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映すると同時に、生体内における免疫反応の活性化も反映しているため、ＡＴＬやリンパ腫特異的な指標とはならない。また、慢性関節リウマチや間質性肺炎、Ｃ型肝炎患者では、ｓＩＬ−２Ｒ値が基準値を遙かに超えて数千Ｕ／ｍＬを示す事があることが報告されている。このため、骨髄移植前のｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定することで、誤って予後が悪いと判断してしまう恐れがある。よって、ｓＩＬ-２Ｒ濃度を測定するのと同時にｓＣＤ３０濃度を測定することで、ｓＩＬ−２Ｒ濃度を単独で測定するよりも優れた予後判定ができる。
【実施例５】
【００９１】
慢性型ＡＴＬから急性転化した患者の血液中ｓＣＤ３０濃度の経時的変化
インフォームドコンセントを得た慢性型ＡＴＬ患者２症例（患者ＡＩ、ＢＡ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度を測定し、患者の状態を観察した。その結果を第１１表〜第１２表、および第９図〜第１０図に示す。第１１表〜第１２表における日数とは、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の観察を開始した日を基準（０日）とした時の相対的な日数を示す。また、第１１表〜第１２表における上昇率とは、慢性型ＡＴＬ患者のｓＣＤ３０濃度を観察し始めた日（０日）のｓＣＤ３０濃度を基準として、それぞれの日数における濃度との比を示している。
【００９２】
【表１１】
【００９３】
患者ＢＡ（表１１、図９）は、慢性型ＡＴＬ患者で、５７日目に急性型ＡＴＬと診断された症例であった。
【００９４】
外来受診で、ｓＣＤ３０濃度を観察し始めて２１日目にＬＤＨが２８０ＩＵ／Ｌと高値を示したため２７日目より入院した。同日（２７日目）の血液検査の結果増悪傾向を示さず、頚部リンパ節腫脹も自然に縮小していたため、２８日目に退院した。５６日目（ｓＣＤ３０は未測定）にＬＤＨが４５０ＩＵ／Ｌと急上昇しため翌５７日目に入院し急性型ＡＴＬと診断された（急性転化）。
【００９５】
ｓＣＤ３０の濃度観測開始後５８日目から１回目の化学療法、７１日目から２回目の化学療法、８４日目より３回目の化学療法を実施した。３回目の化学療法後にＬＤＨの上昇がみられたため１１７日目から４回目の化学療法が実施され軽快したため退院した（寛解はしていない）。その後、通院治療が施され、ＡＴＬ細胞も減少しているが完全寛解には至っていない。
【００９６】
ｓＣＤ３０の濃度観測開始当日（０日目）のｓＣＤ３０が３６９Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒが３７５６Ｕ／ｍＬとＨＴＬＶ−１キャリアの基準値より高い値を示したが、急性型やリンパ腫型のような高値を示していなかった（表３参照）。４２日目で８０７Ｕ／ｍＬ、４９日目で１０４８Ｕ／ｍＬまで上昇し、急性型ＡＴＬと診断された直後の５８日目では１５５４Ｕ／ｍＬとなった。また、慢性型ＡＴＬのｓＣＤ３０濃度の基準値（平均＋２ＳＤ、表３参照）を基準とした上昇率を観察すると、ｓＣＤ３０濃度の上昇率は４２日目で１．９３倍、４９日目で２．５０倍まで上昇し、急性転化が確認された直後の５８日目では３．７１倍まで上昇した。一方、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度やＬＤＨ活性の上昇も見られたが、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が４２日目で１．５０倍、４９日目で１．６６倍、ＬＤＨ活性が４２日目で１．２２倍、４９日目で１．３６倍であった。既存マーカーであるｓＩＬ−２ＲやＬＤＨ活性に比べてｓＣＤ３０濃度の上昇率は高かった。また、治療を開始した５８日目のＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率は、それぞれ３．１３倍、２．２７倍であった。患者ＢＡは、完全に寛解には至っていないが、ＡＴＬ細胞が減少し慢性型ＡＴＬとなった。
【００９７】
【表１２】
【００９８】
患者ＡＩ（表１２、図１０）は、慢性型ＡＴＬ患者で、１８９日目にリンパ腫型ＡＴＬと診断された症例であった。
【００９９】
担当医による詳細な情報は以下の通りである。
ｓＣＤ３０測定の観察を始める９８日前、胸部異常陰影、末梢血中のＡＴＬ細胞を認め受診を開始した。胸腔鏡下右肺部分切除術の施行後から末梢血中にＡＴＬ細胞が増加し慢性型ＡＴＬと診断された。その後、１６８日目に胸部レントゲンの異常に気づき１６９日目に入院した（この時点で、ＬＤＨの上昇はみられず）。１８９日目に、胸部ＣＴ検査の結果、縦郭と右肺門部のリンパ節腫脹が認められリンパ腫型ＡＴＬと診断された（急性転化）。おそらく１６８〜１８９日目で急性転化したと推測された。
【０１００】
ＬＳＧ(Leukemia Study Group)１５のプロトコールに従い、１９８日目、２３３日目、２８６日目に、３回の化学療法を行った。同時に肺病変が消失した。３５７日目に完全寛解した。
【０１０１】
ｓＣＤ３０測定の観察を始めた当日（０日目）のｓＣＤ３０濃度が３１４Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２６９１Ｕ／ｍＬとＨＴＬＶキャリアの基準値より高い値を示したが、急性型やリンパ腫型のような高値を示していなかった（表３参照）。９１日目で６１３Ｕ／ｍＬ、１２６日目で７３５Ｕ／ｍＬ、１６８日目で１９８３Ｕ／ｍＬ、１８０日目に２８３１Ｕ／ｍＬ、急性転化が確認された直前の１８７日目では３５６９Ｕ／ｍＬまで上昇した。また、０日目のｓＣＤ３０濃度を基準とした場合の上昇率を観察すると、ｓＣＤ３０濃度の上昇率は１２６日目で１．７５倍、１６８日目で４．７３倍まで上昇した。一方、既存マーカーであるｓＩＬ−２Ｒ濃度やＬＤＨ活性の上昇はほとんど見られず、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が１２６日目で０．９７倍、１６８日目で１．１６倍、ＬＤＨ活性が１２６日目で０．８３倍、１６８日目で０．９２倍であった。ｓＣＤ３０濃度の急激な上昇を確認したことにより確定診断が行われ、リンパ腫型ＡＴＬに急性転化していることが確認された。また、治療を開始する直前の１９７日目のＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率は、それぞれ１．５２倍、１．５４倍であった。３回の化学療法で患者ＡＩの肺病変が完全に消失し、３５７日目に完全寛解した。
【０１０２】
急性転化した２症例の治療効果を比べてみると、患者ＡＩが完全寛解に至ったのに対し、患者ＢＡは完全寛解には至らなかった。両症例の違いを比較してみると、症例ＡＩではＬＤＨ活性およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇が起こらないうちに治療を開始しているのに対し、症例ＢＡでは、ＬＤＨ活性の上昇率が２．２７倍、ｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が３．１３倍になったときに治療を開始している。ＬＤＨやｓＩＬ−２Ｒは腫瘍細胞数を反映している診断マーカーであるので、腫瘍細胞数が少ない段階で治療を開始した症例ＡＩの方が治療の効果が出たと判断される。つまり、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が低い症例の方が、上昇率が高い症例に比べて、同じ化学療法を施行した場合、高い治療効果を期待することができる。また、急性転化が予測され、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率に応じて治療の強弱を選択することもできる。すなわち、ＬＤＨ活性やｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率が低いときには弱めの治療でも効果が期待できるが、上昇率が高いときには強めの治療を施す必要がある。このように、ｓＣＤ３０濃度により急性転化が判定できた段階で、ＬＤＨ活性とｓＩＬ−２Ｒ濃度を観察することで、治療法や治療の開始時期などの治療方針を決定することが出来る。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
本発明により、ＨＴＬＶ−１キャリアやＡＴＬ患者のＱＯＬ向上に有用な、ＨＴＬＶ−１キャリアにおけるＡＴＬ発症リスク、ＡＴＬ患者における骨髄移植後の予後、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者におけるＡＴＬの急性転化を判定する方法、及び、くすぶり型又は慢性型のＡＴＬ患者における急性転化後の治療方針を決定する方法、並びにこれらの方法に用いるキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】ＨＴＬＶ−１キャリア（キャリアＭ）の血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図２】ＡＴＬ患者Ａの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図３】ＡＴＬ患者Ｂの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図４】ＡＴＬ患者Ｅの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図５】ＡＴＬ患者Ｖの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図６】ＡＴＬ患者Ｗの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図７】ＡＴＬ患者ＡＦの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図８】ＡＴＬ患者Ｇの血清中ｓＩＬ−２Ｒ濃度、およびｓＣＤ３０濃度を経時的に示した図である。
【図９】慢性型ＡＴＬ患者（患者ＢＡ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率を経時的に示した図である。
【図１０】慢性型ＡＴＬ患者（患者ＡＩ）について、血液中のＬＤＨ活性、ｓＣＤ３０濃度およびｓＩＬ−２Ｒ濃度の上昇率を経時的に示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者における成人Ｔ細胞白血病の急性転化を判定するための方法。
【請求項２】
ＣＤ３０が、可溶型である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
【請求項４】
ＣＤ３０が、可溶型である請求項３に記載のキット。
【請求項１】
くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中のＣＤ３０を測定することを含む、当該患者における成人Ｔ細胞白血病の急性転化を判定するための方法。
【請求項２】
ＣＤ３０が、可溶型である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、くすぶり型又は慢性型の成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者におけるＡＴＬの急性転化判定用キット。
【請求項４】
ＣＤ３０が、可溶型である請求項３に記載のキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２０１３−８３６７０（Ｐ２０１３−８３６７０Ａ）
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１３−１３２０６（Ｐ２０１３−１３２０６）
【出願日】平成２５年１月２８日（２０１３．１．２８）
【分割の表示】特願２００８−１１６１４４（Ｐ２００８−１１６１４４）の分割
【原出願日】平成２０年４月２５日（２００８．４．２５）
【出願人】（５０４１３６９９３）独立行政法人国立病院機構 (37)
【出願人】（０００１６２４７８）協和メデックス株式会社 (42)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２５年１月２８日（２０１３．１．２８）
【分割の表示】特願２００８−１１６１４４（Ｐ２００８−１１６１４４）の分割
【原出願日】平成２０年４月２５日（２００８．４．２５）
【出願人】（５０４１３６９９３）独立行政法人国立病院機構 (37)
【出願人】（０００１６２４７８）協和メデックス株式会社 (42)
【Ｆターム（参考）】
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