抗インフルエンザ剤
【課題】インフルエンザウィルスの感染を効果的に予防若しくは治療し得る抗インフルエンザ剤及びこれを産業上有効活用することができる態様の組成物を提供する。
【解決手段】アガリクス茸の抽出物、より好適にはアガリクス茸の水抽出物を含水アルコールで分別処理して得られる不溶物がインフルエンザウィルスの感染に対して予防及び治療効果を奏する知見に基づく、前記抽出物を有効成分としてなる抗インフルエンザ剤。又、該抗インフルエンザ剤を配合してなる飲食品、医薬品、飼料及びペットフード。
【解決手段】アガリクス茸の抽出物、より好適にはアガリクス茸の水抽出物を含水アルコールで分別処理して得られる不溶物がインフルエンザウィルスの感染に対して予防及び治療効果を奏する知見に基づく、前記抽出物を有効成分としてなる抗インフルエンザ剤。又、該抗インフルエンザ剤を配合してなる飲食品、医薬品、飼料及びペットフード。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はウィルス特にインフルエンザウィルスの感染を予防及び／又は治療に関する。より詳細には、担子菌であるアガリクス茸の子実体又は菌糸体の抽出物を有効成分として含有してなる抗インフルエンザ剤、又、これを配合してなるインフルエンザウィルスの感染を予防し及び／又は該ウィルスの繁殖を抑制し及び／又は免疫を賦活するための組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウィルスは、オルトミクソウィルス科に分類され、Ａ、Ｂ及びＣ型に分類される。Ａ型とＢ型のウィルス表面にある糖蛋白は変異が大きく、インフルエンザの種類が多い要因となっている。特にＡ型インフルエンザウィルスは、抗原性が変異しやすいため、毎年インフルエンザウィルス感染を流行させる。インフルエンザウィルス感染は、免疫力の弱い幼児や高齢者のみならず健常な成人においても死に至らしめることもある。
【０００３】
インフルエンザウィルス感染の予防として、インフルエンザワクチンが広く用いられ、ワクチンを皮下注射や筋肉注射して、該ウィルスに対する免疫を事前に体内に確立し、感染を予防することが一般に行われている。又、特にＡ型、Ｂ型のインフルエンザの治療薬としてはノイラミニダーゼ阻害薬が用いられる。該ノイラミニダーゼ阻害薬は、体内でのインフルエンザウィルスの増殖過程において、感染細胞からのインフルエンザウィルスの放出に必要なノイラミニダーゼを抑制することによりインフルエンザウィルスの増殖を抑制する。（非特許文献１）
【０００４】
しかしながら、特にＡ型インフルエンザウィルスは、抗原性が変異しやすい性質のため、流行の抗原タイプの予測が困難であるのに加え、ワクチン製造に時間がかかるため、インフルエンザの流行時に有効なワクチンを十分に製造及び供給することが困難となるのが実情である。さらに、インフルエンザ治療薬であるノイラミニダーゼ阻害薬は、その有効性が認知されている一方で副作用や薬剤耐性変異の報告もある。（非特許文献２）
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】柏木征三郎ほか、「感染症学雑誌」、第７４巻、第１０４４頁〜第１０６１頁、２０００年
【非特許文献２】加地正英、「臨床と研究」、第８３巻、第１２号、第１７９４頁〜第１７９８頁、２００６年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
かかる現状に鑑み、本発明は、インフルエンザウィルスの感染を効果的に予防し、かつ感染後の治療にも効果を発揮し得る安全で簡便に使用可能な抗インフルエンザ剤を開発し、これを産業上有効利用できる態様の組成物として提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記課題を解決するための方策を鋭意検討した結果、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の抽出物がウィルス、特にインフルエンザウィルスの感染予防効果を奏することの知見を得、又、前記抽出物は、日常的に摂取しても副作用の問題を起こすことなく、かつ簡便に摂取可能であることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明の特徴は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤である。前記抗インフルエンザ剤は、望ましくは、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分を有効成分として含有してなるものである。又、前記抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸はアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）であることが好ましい。
【０００９】
本発明の他の特徴は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した前記抽出物と、スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用して含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤である。ここで、前記抽出物は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分を有効成分として含有してなるものが望ましく、アガリクス茸はアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）であることが好適である。又、スグリ属に属する植物はカシスであることが望ましく、スノキ属に属する植物はクランベリーであることが望ましい。
【００１０】
本発明の更に他の特徴は、前記いずれかの抗インフルエンザ剤を配合してなることを特徴とする飲食品、医薬品、飼料又はペットフードである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、アガリクス茸の抽出物を有効成分として含有してなる抗インフルエンザ剤が提供される。このインフルエンザ剤は、アガリクス茸としてアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）を用いるとき、アガリクス茸の抽出物として、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の熱水抽出物をエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液で処理して得られる、前記エタノール水溶液に不溶の成分を用いるとき、又、カシス果実抽出物やクランベリー果実抽出物を併用するときに、インフルエンザウィルスの感染を顕著に防止し、該感染後の免疫能を高め、死亡率を低減させ、治療に優れた効果を奏する。本発明の抗インフルエンザ剤は飲食品、医薬品、飼料、ペットフード等の用途に有効利用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明を詳細に説明する。まず、本発明の抗インフルエンザ剤は、アガリクス茸の子実体及び又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得られる抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とするものである。
【００１３】
本発明において、アガリクス茸とはハラタケ科ハラタケ属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）に属するキノコをいい、具体例としてハラタケ（Ａ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、カワリハラタケ（ブラジル原産のＡ．ｂｌａｚｅｉ、Ａ．ｂｌａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、北米原産のＡ．ｓｕｂｒｕｆｅｓｃｅｎｓ、欧州原産のＡ．ｒｕｆｏｔｅｇｕｌｉｓ等）、マッシュルーム（Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ）、シロオオハラタケ又はホースマッシュルーム（Ａ．ａｒｖｅｎｓｉｓ）、シロモリノカサ（Ａ．ｓｉｌｖｉｃｏｌａ）、ザラエノハラタケ（Ａ．ｓｕｂｒｕｔｉｌｅｓｃｅｎｓ）等を挙げることができる。これらの茸は、従来より食用に供せられ、その子実体が人工栽培されあるいは菌糸体が人工的に培養生産されて流通しているものも多く、容易に入手することが可能である。本発明ではアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａ．ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）、マッシュルーム又はハラタケを原料として使用することが望ましく、最も好適にはアガリクス ブラゼイ ムリルを用いる。
【００１４】
前記アガリクス茸の子実体は生あるいは乾燥物のいずれも原料として使用できるが、取り扱い上、保存性及び抽出効率等の点から乾燥物がよい。又、菌糸体は適当な炭素源と窒素源を含む培地を用いて種菌を培養して得られる生あるいは乾燥菌糸体を利用できるが、子実体同様に乾燥物を用いるのが簡便である。
【００１５】
本発明に係る抽出物は、前記アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒を用いて抽出処理することにより得ることができる。親水性溶媒の具体例として水、低級アルコール、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル等及びこれらの混合物を挙げることができるが、このうち水及び低級アルコールが好ましく、低級アルコールとしてはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の一価アルコールを好適に使用することができる。本発明に係るアガリクス茸抽出物を飲食品用途に供する場合は水及び／又はエタノールを用いることが望ましく、飼料や医薬品の用途に供する場合はこれ以外の溶媒を使用してもさしつかえない。親水性溶媒として含水アルコールを用いる際の含水率は、アルコールの種類や極性により異なるが、概ね５質量％以上である。含水率がこれを下回ると目的物の収量が減少し又は抗インフルエンザ作用が低下することがある。又、エタノール以外のアルコールを用いる場合、その炭素数が大きくなるほど含水率を高めるのがよい。この含水率のめやすは、メタノールのとき約４０質量％以下、エタノールのとき約６０質量％以下、イソプロパノールのとき約７０質量％以下、又、ブタノールのときは約８０質量％以下である。より望ましくは、例えば、含水エタノールの場合は、含水率が約３０質量％〜約６０質量％すなわちエタノール濃度が約４０質量％〜約７０質量％のエタノール水溶液である。
【００１６】
前記抽出処理は次のように行う。すなわち、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の生又は乾燥物を適宜に凍結破砕、裁断、衝撃破壊、酵素分解等の処理に供して破砕、細断あるいは粉砕し、この質量に対して前記親水性溶媒を１〜５０倍容量、より好ましくは２〜２０倍容量加え、常圧又は０．１〜５気圧、より好ましくは０．５〜３気圧の加圧下、約４０℃以上、より好ましくは８０〜９５℃に加熱して、適宜に撹拌しながら、約１０分〜２４時間、より好ましくは３０分〜５時間抽出処理する。このとき、前記条件の加圧下で処理を行えば、抽出物の増収メリットがある。抽出処理後、残渣を濾別して抽出液を得る。尚、この抽出残渣に前記親水性溶媒を加えて同様に処理して二次抽出液を得、該操作を数回程度繰り返してもよい。得られた抽出液を併せて濃縮し、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を施して本発明に係る抽出物を製造することができる。
【００１７】
本発明に係る抽出物は前述のように抽出処理して得ることができるが、抽出処理の望ましい手順の一例は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を先ず熱水（８０〜９５℃）抽出して熱水抽出物を得て、次いで該熱水抽出物を更にエタノール濃度が約６０質量％の含水エタノールで分別処理し、該含水エタノールに不溶分を採取する。この場合、例えば、熱水抽出物の質量に対して前記含水エタノールを２〜１０倍容量添加し、常圧下、常温〜沸点以下の温度で１０分〜１２時間、適宜に撹拌しつつ、生じた沈殿物を遠心分離等の処理に供して採取し、脱溶媒して本発明に係る抽出物を製造する。かかる手順により得られる抽出物は本発明の所望効果を顕著に奏するものである。
【００１８】
尚、前記抽出物は、活性炭、シリカゲル、オクタデシルシラン結合シリカゲル（ＯＤＳ）、活性アルミナ、ポリスチレン等の吸着剤、イオン交換樹脂等を用いて精製処理したり、デキストラン、アガロース等を用いて分画処理を施してもよい。これらの処理によって本発明の所望効果を更に高めることが可能となる。
【００１９】
かくして得られる抽出物は、これをそのまま又は公知の安定剤、賦形剤、結合剤等の添加物質とともに含有せしめて本発明の抗インフルエンザ剤とすることができる。添加物質としては本発明の趣旨に反しないものであれば差し支えなく、食品、医薬品、飼料、ペットフード等に使用されるデンプン、デキストリン、粉末セルロース、結晶セルロース、セルロース誘導体、ショ糖脂肪酸エステル、乳糖、アラビアガム、マンニトール、トレハロース、グルコース、ゼラチン、二酸化ケイ素等を単独で又は組み合わせて利用することが可能である。
【００２０】
次に、本発明の他の特徴である、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得られる抽出物と、スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用して含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤について説明する。この態様の抗インフルエンザ剤は前述のアガリクス茸抽出物と特定植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを組み合わせてなるものであり，本発明の所望効果をより一層顕著に奏する。
【００２１】
この態様の抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得る抽出物は前述したものと同じである。該抽出物と併用する特定植物はスグリ科スグリ属（Ｒｉｂｅｓ）に属するもの及び／又はツツジ科スノキ属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）に属するものが好ましい。本発明では、これらの属に属する植物を単独で又は組み合わせて使用することができ、各植物の乾燥粉末及び抽出物のいずれか一方又は両方を選択できる。使用部位は根、茎、葉、花、果実、植物体全体、種子、発芽物等のいずれでもよい。
【００２２】
スグリ属に属する植物としてクロスグリ、クロフサスグリ、ブラックカラント、カシス（Ｒ．ｎｉｇｒｕｍ）、フサスグリ、アカスグリ、アカフサスグリ（Ｒ．ｒｕｂｒｕｍ）、セイヨウスグリ、マルスグリ、オオスグリ（Ｒ．ｕｖａ−ｃｒｉｓｐａ）、トガスグリ（Ｒ．ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｅ）、アメリカスグリ（Ｒ．ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）等を例示することができ、カシスがより望ましい。又、スノキ属に属する植物としてクランベリー（Ｖ．ｏｘｙｃｏｃｃｕｓ）、アメリカンクランベリー、オオミツルコケモモ（Ｖ．ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）、コケモモ（Ｖ．ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ）、ビルベリー（Ｖ．ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、ブルーベリー（Ｖ．ｓｐ）、シャシャンボ（Ｖ．ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ）等を例示することができ、クランベリーがより望ましい。
【００２３】
これらの植物は、通常、その果実が食用に供せられており、本発明においても生のまま又は搾汁の形態で利用してもよいが、果実に限らず前記の各部位を乾燥及び粉砕処理した乾燥粉末、生、搾汁若しくは乾燥物を水、低級アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノール等）、アセトン等の親水性溶媒により前述のアガリクス茸の場合と同様に抽出処理した抽出物の形態にするのが簡便であり、好適である。尚、この抽出物は、活性炭、シリカゲル、オクタデシルシラン結合シリカゲル（ＯＤＳ）、活性アルミナ、ポリスチレン等の吸着剤、イオン交換樹脂等を用いて精製処理したり、デキストラン、アガロース等を用いて分画処理を施してもよい。これらの処理によって本発明の所望効果を更に高めることが可能となる。
【００２４】
本発明に係る抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸抽出物と前記特定植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用する場合の比率は、アガリクス茸抽出物１質量部に対して前記特定植物の加工物が約０．０５質量部〜約１．０質量部であり、より望ましくは約０．１質量部〜約０．８質量部であり、最も望ましくは約０．１質量部〜約０．５質量部である。前記特定植物の加工物が約０．０５質量部未満の場合はアガリクス茸抽出物単独のときと比較して本発明の所望効果が変わらず、一方、約１．０質量部を超える場合は更なる併用効果が期待できない。
【００２５】
本発明に係る抗インフルエンザ剤は、これ自体を飲食品、医薬品、化粧品、飼料、ペットフードその他産業分野の様々な製品とすることができ、あるいは該製品の配合原料の一部として使用する態様でも利用できる。とりわけ飲食品用途が好適である。これらの例を以下に述べるが、本発明はこの例示によって何ら制限を受けるものではない。
【００２６】
前記飲食品の具体例として、野菜ジュース、果汁飲料、清涼飲料、茶等の飲料類、スープ、ゼリー、プリン、ヨーグルト、ケーキプレミックス製品、菓子類、ふりかけ、味噌、醤油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、植物性クリーム、味噌、焼肉用たれや麺つゆ等の調味料、麺類、うどん、蕎麦、スパゲッティ、ハムやソーセージ等の畜肉魚肉加工食品、ハンバーグ、コロッケ、ふりかけ、佃煮、ジャム、牛乳、クリーム、バター、スプレッドやチーズ等の粉末状、固形状又は液状の乳製品、マーガリン、パン、ケーキ、クッキー、チョコレート、キャンディー、グミ、ガム等の各種一般加工食品や、粉末状、顆粒状、丸剤状、錠剤状、ソフトカプセル状、ハードカプセル状、ペースト状又は液体状の栄養補助食品、特定保健用食品、機能性食品、健康食品、濃厚流動食や嚥下障害用食品の治療食等を挙げることができる。
【００２７】
これらの飲食品を製造するには、公知の原材料及び本発明に係る抗インフルエンザ剤を用い、あるいは公知の原材料の一部を本発明の抗インフルエンザ剤で置き換え、公知の方法によって製造すればよい。例えば、本発明に係る抗インフルエンザ剤と、必要に応じてグルコース（ブドウ糖）、デキストリン、乳糖、澱粉又はその加工物、セルロース粉末等の賦形剤、ビタミン類、ミネラル類、動植物や魚介類の油脂、たん白（動植物や酵母由来の蛋白質、その加水分解物等）、糖質、色素、香料、酸化防止剤、その他の食用添加物、各種栄養機能成分を含む粉末やエキス類等の食用素材とともに混合して粉末、顆粒、ペレット、錠剤等の形状に加工したり、常法により前記例の一般食品に加工処理したり、これらを混合した液状物をゼラチン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース等で被覆してカプセルを成形したり、飲料（ドリンク類）の形態に加工して、栄養補助食品や健康食品として利用することは好適である。とりわけ錠剤、カプセル剤やドリンク剤が望ましい。
【００２８】
本発明に係る抗インフルエンザ剤を飲食品に配合する場合の比率は、飲食品の形態、本発明に係る抗インフルエンザ剤中のアガリクス茸抽出物や併用する特定植物の種類、品質、性状、成分等の相違によるため一律には規定しがたいが、飲食品中のアガリクス茸抽出物含量が約０．０１質量％〜約９０質量％、より望ましくは約１質量％〜約５０質量％となるようにし、前記特定植物の加工物や他の原材料を適宜に併用して処方を設計し、常法に従い目的とする飲食品を調製すればよい。アガリクス茸抽出物の含量が約０．０１質量％を下回るような飲食品ではアガリクス茸抽出物による本発明の所望効果を期待するためには多量の当該飲食品を摂取しなければならず、又、アガリクス茸抽出物の特有の風味を考慮した飲食品の実用的な態様から、本発明に係る飲食品中の最多アガリクス茸抽出物含量は約９０質量％である。本発明に係る飲食品は、ヒトの場合１日あたりのアガリクス茸抽出物摂取量の目安を約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、望ましくは約３０ｍｇ〜約５００ｍｇ、さらに望ましくは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇとして、例えば、経口摂取、経管投与等の方法で体内に取り込むことができる。
【００２９】
本発明に係る抗インフルエンザ剤及び飲食品は、本発明の目的に沿って、日常の食生活において継続的に摂取することが望ましく、このような態様によって本発明の所望効果、とりわけ日常生活の中で暴露されるインフルエンザウィルスの感染を低減ないし抑制し、体内でのインフルエンザウィルスの増殖を予防することが可能となる。この観点から、本発明においては、本発明に係るアガリクス茸抽出物やこれと併用する前記特定植物の加工物（乾燥粉末及び／又は抽出物）を必ずしも同一組成物中に含有せしめる制限はなく、これらを別々に含む複数の組成物あるいは飲食品として調製し、該組成物あるいは飲食品をほぼ同時に経口摂取することは本発明の技術的範囲に属する。
【００３０】
本発明に係る抗インフルエンザ剤を配合した医薬品も可能である。前記のアガリクス茸抽出物に、本発明の趣旨に反しない公知の賦形剤や添加剤を必要に応じて加え、常法により加工して錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、アンプル剤、注射剤等の製剤となし、経口投与、経管投与あるいは皮内投与する。インフルエンザウィルスの感染の低減ないし抑制、感染して体内に侵入したウィルスの増殖の抑制、その他の疾患の予防等のために適用することができる。本発明に係るアガリクス茸抽出物の配合量は製剤の種類、形態、用法、用量等により一律に規定し難いが、概ね０．０１〜５０質量％である。経口投与する場合の摂取量の目安は、有効成分として前記アガリクス茸抽出物を、成人１日あたり約０．０１〜約１０ｇ、より好ましくは約０．１〜約５ｇである。該範囲より少ないと本発明の所望効果を奏することが難しく、多すぎても更なる効果を期待できない。
【実施例】
【００３１】
次に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。各例において、％、部及び比率はいずれも質量基準である。
【００３２】
（製造例１）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥子実体を約０．７ｃｍ角サイズに粗砕したもの３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水３Ｌを添加し、常圧下、９０℃で３時間抽出処理した後、減圧濾過して残渣を分離し第１抽出液を採取した。次いで、前記残渣にイオン交換水２．５Ｌを加えて同様に処理して第２抽出液を採取した。両抽出液を合わせて減圧濃縮及び凍結乾燥処理し、アガリクス茸抽出物（試料１）４０．５ｇを得た。
【００３３】
（製造例２）
製造例１において、常圧下を１．３気圧の加圧下に置き換えて同様に処理してアガリクス茸抽出物（試料２）８８．０ｇを得た。
【００３４】
（製造例３）
製造例２で得た試料２の一部５０ｇにエタノール濃度が６５％の含水エタノール４００ｍＬを加え、常圧下で一旦溶解後３０℃にて１時間静置し、生じた沈殿物を遠心分離して前記含水エタノールに可溶の画分と不溶の画分に分別した。含水エタノール可溶画分は、減圧濃縮及び凍結乾燥して前記含水エタノールに可溶のアガリクス茸抽出物（試料３）１７．４ｇを得た。又、含水エタノール不溶画分（沈殿物）は、加水後、減圧濃縮でアルコールを除去し凍結乾燥して前記含水エタノールに不溶のアガリクス茸抽出物（試料４）３２．１ｇを得た。
【００３５】
（製造例４）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥菌糸体３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水３Ｌを添加し、常圧下、９０℃で３時間抽出処理した後、精密濾過して残渣を分離し第１抽出液を採取した。次いで、前記残渣にイオン交換水２．５Ｌを加えて同様に処理して第２抽出液を採取した。両抽出液を合わせて減圧濃縮及び凍結乾燥し、アガリクス茸抽出物（試料５）１４３．２ｇを得た。
【００３６】
（製造例５）
製造例４で得た試料５の一部５０ｇにエタノール濃度が４０％の含水エタノール４００ｍＬを加え、常圧下で一旦溶解後３０℃にて１時間静置し、生じた沈殿物を遠心分離して採取した。この沈殿物に加水した後、減圧濃縮でアルコールを除去し更に乾燥処理して前記含水エタノールに不溶のアガリクス茸抽出物（試料６）３０．６ｇを得た。
【００３７】
（製造例６）
マッシュルームの生の子実体５００ｇを約０．５ｍｍ角サイズに細断してステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水１０Ｌを加え、常圧下、７０℃で１時間抽出処理した後、減圧濾過して残渣を分離した抽出液を得た。次いで、この抽出液に最終エタノール濃度が５０％になるようにエタノールを添加してゆるやかに攪拌し、常圧下、３０℃にて５時間静置後、生じた沈殿物を遠心分離して採取した。更に、この沈殿物に加水、減圧濃縮及び凍結乾燥して、前記エタノール不溶分からなるアガリクス茸抽出物（試料７）４０．５ｇを得た。
【００３８】
（製造例７）
カシスの果実部の圧搾液１Ｌにエタノール濃度が７０％の含水エタノール１０Ｌを加え、常圧下、４０〜５０℃で３０分間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してカシス抽出物（試料８）７．３ｇを得た。
【００３９】
（製造例８）
クランベリーの果実部の乾燥物１００ｇにエタノール濃度が７０％の含水エタノール１Ｌを加え加え、５０〜６０℃で２時間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してクランベリー抽出物（試料９）２１．６ｇを得た。
【００４０】
（製造例９）
コケモモの果実及び葉の乾燥混合物１００ｇにエタノール濃度が９０％の含水エタノール１Ｌを加え加え、５０〜６０℃で２時間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してコケモモ抽出物（試料１０）１５．０ｇを得た。
【００４１】
（比較製造例１）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥子実体を約０．７ｃｍ角サイズに粗砕したもの３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、ヘキサン３Ｌを添加し、常温常圧下で１時間抽出処理後、減圧濾過して抽出液と残渣に分離した。抽出液を脱溶媒及び乾燥処理してヘキサン抽出物（比較試料１）を得た。この抽出物の成分は遊離脂肪酸、エルゴステロール等の遊離ステロール及びその配糖体、リン脂質、セラミド等の脂質類がほとんどを占め、遊離脂肪酸はリノール酸が主成分であった。
【００４２】
（試験例１）「ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗インフルエンザ試験」
本試験において、インフルエンザウィルス株はインフルエンザウィルスＡ／ＮＷＳ／３３（Ｈ１Ｎ１）を用いた。又、細胞はＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ（ＭＤＣＫ）細胞を、細胞の培養には２％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）含有Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）培地を用いた。
４８穴プレートにＭＤＣＫ細胞を播き、２％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で培養した後、同培地に溶解した試料とウィルス液（０．２ＰＦＵ／Ｃｅｌｌ）を添加して室温で１時間放置した後、前記培養培地を除去し、さらに前記培地で３回洗浄して細胞に感染していないウィルスを除去した後、前記培地に溶解した試料を再度添加して３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培養終了後、−８０℃の冷凍庫へ移し、細胞を死滅させた後、ウィルス量をプラークアッセイ法で測定した。片対数グラフ上で５０％ウィルス増殖阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。この結果を表１に示す。同表において、ＩＣ５０の値が小さいものほど、インフルエンザウィルスの感染を阻害している効果が高いことを示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】
試料１〜試料１０はいずれもｉｎ ｖｉｔｒｏ試験でインフルエンザウィルスの感染を予防する効果があることを確認した。一方、比較試料１はインフルエンザウィルスの感染を阻害しなかった。
【００４５】
（試験例２）「ｉｎ ｖｉｖｏでの抗インフルエンザ試験」
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）に試料を２週間連続経口投与した後、Ａ型インフルエンザウィルス（Ｈ１／Ｎ１株）を７．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて経鼻感染させた（一次感染）。該感染３日後、血液を採取してリンパ球の幼弱化試験を行った。更に、マウスを屠殺して脾臓を摘出し、該脾臓から調製したリンパ球のＮＫ活性を測定した。
リンパ球幼若化試験は、回収した末梢血リンパ球を３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ存在下でフィトヘマグルチニンＰによる抗原刺激を行い９６時間培養した後の３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取込量を液体シンチレーションカウンターにて測定した。生理食塩水投与群を１００として増減の割合を求めた。又、ＮＫ活性は、マウスの脾臓より調製したリンパ球を、５１Ｃｒを標識したＹａｃ−１細胞を標的細胞として混合培養を行い、放出された５１Ｃｒ量を液体シンチレーションカウンターにて測定し、次式によりＮＫ活性を求めた。
％Ｌｙｓｉｓ＝１００×（（検体の５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ）−自然５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ））／（最大５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ）−自然５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ））
本試験の結果を表２にまとめた。
【００４６】
【表２】
【００４７】
ｉｎ ｖｉｖｏ試験でインフルエンザウィルス感染後の免疫細胞の分析を行ったところ、試料１〜試料７を投与したマウスの脾臓リンパ球のＮＫ活性が亢進していたことが明らかになった。更に末梢血リンパ球の抗原刺激下での幼弱化反応が高まっていたことを確認した。これらの結果から、試料１〜試料７を投与した群では、インフルエンザ投与後の免疫能が高まっており、インフルエンザ感染を予防する効果があったものと判断した。又、アガリクス茸抽出物（試料１、試料４、試料５、試料６）と果実抽出物（試料８、試料９）の併用で相乗効果が認められた。一方、比較試料１では効果が見られなかった。
【００４８】
（試験例３）「ｉｎ ｖｉｖｏでの抗インフルエンザ試験」
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）に試料を２週間連続経口投与した後、Ａ型インフルエンザウィルス（Ｈ１／Ｎ１株）を７．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて経鼻感染させた（一次感染）。インフルエンザウィルス感染後も引き続き試料の経口投与を試験期間中継続して行った。感染３週間後、９．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて再度前記インフルエンザウィルスを経鼻感染させた（二次感染）。二回目の感染後のマウスの生存数を観察した。試料は全て１００ｍｇ／ｋｇで経口投与した。本試験の結果を表３にまとめた。
【００４９】
【表３】
【００５０】
生理食塩水のみ投与した群のラットが４日後に全て死亡したのに比べ、試料１〜試料１０を投与した群では二次感染７日目でも生存が認められた。よってこれらはインフルエンザウィルスの感染を予防ないし治癒する効果があったものと推察される。又、試料８又は試料９の果実抽出物とアガリクス茸抽出物との組み合わせによる相乗的な併用効果が認められた。２種類のアガリクス茸抽出物の組み合わせは、それぞれが単独でも１００％の生存率を示したため、その併用効果は明確ではなかった。一方で比較試料１は、インフルエンザウィルスの感染を阻害しなかった。
【００５１】
（試作例１）
製造例３に記載の方法で調製したアガリクス茸の子実体の熱水抽出物の含水エタノール沈殿画分（試料４）：１７０部、ミツロウ：３０部及びコーン油：５０部を約５０℃に加熱混合して均質にした後、カプセル充填機に供して、常法により１粒あたり内容量が３００ｍｇのゼラチン被覆ソフトカプセル製剤を試作した。また、前記試料４を製造例１の方法で調製したアガリクス茸の熱水抽出物（試料１）に置き換えることを除き同様に処理してソフトカプセル製剤を試作した。これらのカプセル製剤は経口摂取できる栄養補助食品又は医薬品として利用できる。
【００５２】
（試作例２）
試作例１において、試料４：１７０部を試料４：１００部及び製造例８の方法で調製したクランベリーの含水エタノール抽出物（試料９）：７０部の混合物に置きかえて同様に処理して栄養補助食品を試作した。
【００５３】
（試作例３）
試作例１において、試料４：１７０部を製造例２の方法で調製したアガリクス茸の加圧熱水抽出物（試料２）：１３０部及び製造例７の方法で調製したカシスの抽出物（試料８）：４０部の混合物に置きかえて同様に処理して栄養補助食品を試作した。
【００５４】
（試作例４）
試料２：１００部、製造例５の方法で調製したアガリクス茸の菌糸体抽出物のエタノール沈殿画分（試料６）：３０部、化工デンプン（松谷化学工業（株）製、商品名：「パインフロー」）：７０部、リン酸三カルシウム（米山化学工業（株）製）：８５部、及びセルロース３５部を混合機に仕込み、１０分間攪拌混合した。この混合物を直打式打錠機に供して直径７ｍｍ、高さ４ｍｍ、重量１５０ｍｇ／個の素錠を作成し、ついでコーティング機でシェラック被膜を形成させて錠剤形状の経口摂取用組成物を試作した。
【００５５】
（試作例５）
市販のグレープジュース１０００部に製造例６の方法で調製したアガリクス茸の子実体抽出物のエタノール不溶画分（試料７）：１０部及び試料９：３部を加えて十分に混合し均質なグレープ風味飲料を試作した。これは冷蔵庫で１週間保存しても外観及び風味に異状及び違和感は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明に係るアガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の抽出物、及び、前記抽出物とカシス、クランベリー等の植物との組み合わせは、インフルエンザウィルスの感染及び／又は該感染後の生体内での増殖を顕著に抑制する。このため、これらを有効成分としてなる抗インフルエンザ剤は、これを経口摂取等することにより、インフルエンザウィルス感染の抑制ないし防止にとって有用であり、疾病の発生を予防及び／又は治療するための飲食品、医薬品、飼料、ペットフード等に有効利用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明はウィルス特にインフルエンザウィルスの感染を予防及び／又は治療に関する。より詳細には、担子菌であるアガリクス茸の子実体又は菌糸体の抽出物を有効成分として含有してなる抗インフルエンザ剤、又、これを配合してなるインフルエンザウィルスの感染を予防し及び／又は該ウィルスの繁殖を抑制し及び／又は免疫を賦活するための組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウィルスは、オルトミクソウィルス科に分類され、Ａ、Ｂ及びＣ型に分類される。Ａ型とＢ型のウィルス表面にある糖蛋白は変異が大きく、インフルエンザの種類が多い要因となっている。特にＡ型インフルエンザウィルスは、抗原性が変異しやすいため、毎年インフルエンザウィルス感染を流行させる。インフルエンザウィルス感染は、免疫力の弱い幼児や高齢者のみならず健常な成人においても死に至らしめることもある。
【０００３】
インフルエンザウィルス感染の予防として、インフルエンザワクチンが広く用いられ、ワクチンを皮下注射や筋肉注射して、該ウィルスに対する免疫を事前に体内に確立し、感染を予防することが一般に行われている。又、特にＡ型、Ｂ型のインフルエンザの治療薬としてはノイラミニダーゼ阻害薬が用いられる。該ノイラミニダーゼ阻害薬は、体内でのインフルエンザウィルスの増殖過程において、感染細胞からのインフルエンザウィルスの放出に必要なノイラミニダーゼを抑制することによりインフルエンザウィルスの増殖を抑制する。（非特許文献１）
【０００４】
しかしながら、特にＡ型インフルエンザウィルスは、抗原性が変異しやすい性質のため、流行の抗原タイプの予測が困難であるのに加え、ワクチン製造に時間がかかるため、インフルエンザの流行時に有効なワクチンを十分に製造及び供給することが困難となるのが実情である。さらに、インフルエンザ治療薬であるノイラミニダーゼ阻害薬は、その有効性が認知されている一方で副作用や薬剤耐性変異の報告もある。（非特許文献２）
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】柏木征三郎ほか、「感染症学雑誌」、第７４巻、第１０４４頁〜第１０６１頁、２０００年
【非特許文献２】加地正英、「臨床と研究」、第８３巻、第１２号、第１７９４頁〜第１７９８頁、２００６年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
かかる現状に鑑み、本発明は、インフルエンザウィルスの感染を効果的に予防し、かつ感染後の治療にも効果を発揮し得る安全で簡便に使用可能な抗インフルエンザ剤を開発し、これを産業上有効利用できる態様の組成物として提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記課題を解決するための方策を鋭意検討した結果、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の抽出物がウィルス、特にインフルエンザウィルスの感染予防効果を奏することの知見を得、又、前記抽出物は、日常的に摂取しても副作用の問題を起こすことなく、かつ簡便に摂取可能であることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明の特徴は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤である。前記抗インフルエンザ剤は、望ましくは、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分を有効成分として含有してなるものである。又、前記抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸はアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）であることが好ましい。
【０００９】
本発明の他の特徴は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した前記抽出物と、スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用して含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤である。ここで、前記抽出物は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分を有効成分として含有してなるものが望ましく、アガリクス茸はアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）であることが好適である。又、スグリ属に属する植物はカシスであることが望ましく、スノキ属に属する植物はクランベリーであることが望ましい。
【００１０】
本発明の更に他の特徴は、前記いずれかの抗インフルエンザ剤を配合してなることを特徴とする飲食品、医薬品、飼料又はペットフードである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、アガリクス茸の抽出物を有効成分として含有してなる抗インフルエンザ剤が提供される。このインフルエンザ剤は、アガリクス茸としてアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）を用いるとき、アガリクス茸の抽出物として、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の熱水抽出物をエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液で処理して得られる、前記エタノール水溶液に不溶の成分を用いるとき、又、カシス果実抽出物やクランベリー果実抽出物を併用するときに、インフルエンザウィルスの感染を顕著に防止し、該感染後の免疫能を高め、死亡率を低減させ、治療に優れた効果を奏する。本発明の抗インフルエンザ剤は飲食品、医薬品、飼料、ペットフード等の用途に有効利用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明を詳細に説明する。まず、本発明の抗インフルエンザ剤は、アガリクス茸の子実体及び又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得られる抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とするものである。
【００１３】
本発明において、アガリクス茸とはハラタケ科ハラタケ属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）に属するキノコをいい、具体例としてハラタケ（Ａ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、カワリハラタケ（ブラジル原産のＡ．ｂｌａｚｅｉ、Ａ．ｂｌａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、北米原産のＡ．ｓｕｂｒｕｆｅｓｃｅｎｓ、欧州原産のＡ．ｒｕｆｏｔｅｇｕｌｉｓ等）、マッシュルーム（Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ）、シロオオハラタケ又はホースマッシュルーム（Ａ．ａｒｖｅｎｓｉｓ）、シロモリノカサ（Ａ．ｓｉｌｖｉｃｏｌａ）、ザラエノハラタケ（Ａ．ｓｕｂｒｕｔｉｌｅｓｃｅｎｓ）等を挙げることができる。これらの茸は、従来より食用に供せられ、その子実体が人工栽培されあるいは菌糸体が人工的に培養生産されて流通しているものも多く、容易に入手することが可能である。本発明ではアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａ．ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）、マッシュルーム又はハラタケを原料として使用することが望ましく、最も好適にはアガリクス ブラゼイ ムリルを用いる。
【００１４】
前記アガリクス茸の子実体は生あるいは乾燥物のいずれも原料として使用できるが、取り扱い上、保存性及び抽出効率等の点から乾燥物がよい。又、菌糸体は適当な炭素源と窒素源を含む培地を用いて種菌を培養して得られる生あるいは乾燥菌糸体を利用できるが、子実体同様に乾燥物を用いるのが簡便である。
【００１５】
本発明に係る抽出物は、前記アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒を用いて抽出処理することにより得ることができる。親水性溶媒の具体例として水、低級アルコール、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル等及びこれらの混合物を挙げることができるが、このうち水及び低級アルコールが好ましく、低級アルコールとしてはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の一価アルコールを好適に使用することができる。本発明に係るアガリクス茸抽出物を飲食品用途に供する場合は水及び／又はエタノールを用いることが望ましく、飼料や医薬品の用途に供する場合はこれ以外の溶媒を使用してもさしつかえない。親水性溶媒として含水アルコールを用いる際の含水率は、アルコールの種類や極性により異なるが、概ね５質量％以上である。含水率がこれを下回ると目的物の収量が減少し又は抗インフルエンザ作用が低下することがある。又、エタノール以外のアルコールを用いる場合、その炭素数が大きくなるほど含水率を高めるのがよい。この含水率のめやすは、メタノールのとき約４０質量％以下、エタノールのとき約６０質量％以下、イソプロパノールのとき約７０質量％以下、又、ブタノールのときは約８０質量％以下である。より望ましくは、例えば、含水エタノールの場合は、含水率が約３０質量％〜約６０質量％すなわちエタノール濃度が約４０質量％〜約７０質量％のエタノール水溶液である。
【００１６】
前記抽出処理は次のように行う。すなわち、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の生又は乾燥物を適宜に凍結破砕、裁断、衝撃破壊、酵素分解等の処理に供して破砕、細断あるいは粉砕し、この質量に対して前記親水性溶媒を１〜５０倍容量、より好ましくは２〜２０倍容量加え、常圧又は０．１〜５気圧、より好ましくは０．５〜３気圧の加圧下、約４０℃以上、より好ましくは８０〜９５℃に加熱して、適宜に撹拌しながら、約１０分〜２４時間、より好ましくは３０分〜５時間抽出処理する。このとき、前記条件の加圧下で処理を行えば、抽出物の増収メリットがある。抽出処理後、残渣を濾別して抽出液を得る。尚、この抽出残渣に前記親水性溶媒を加えて同様に処理して二次抽出液を得、該操作を数回程度繰り返してもよい。得られた抽出液を併せて濃縮し、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を施して本発明に係る抽出物を製造することができる。
【００１７】
本発明に係る抽出物は前述のように抽出処理して得ることができるが、抽出処理の望ましい手順の一例は、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を先ず熱水（８０〜９５℃）抽出して熱水抽出物を得て、次いで該熱水抽出物を更にエタノール濃度が約６０質量％の含水エタノールで分別処理し、該含水エタノールに不溶分を採取する。この場合、例えば、熱水抽出物の質量に対して前記含水エタノールを２〜１０倍容量添加し、常圧下、常温〜沸点以下の温度で１０分〜１２時間、適宜に撹拌しつつ、生じた沈殿物を遠心分離等の処理に供して採取し、脱溶媒して本発明に係る抽出物を製造する。かかる手順により得られる抽出物は本発明の所望効果を顕著に奏するものである。
【００１８】
尚、前記抽出物は、活性炭、シリカゲル、オクタデシルシラン結合シリカゲル（ＯＤＳ）、活性アルミナ、ポリスチレン等の吸着剤、イオン交換樹脂等を用いて精製処理したり、デキストラン、アガロース等を用いて分画処理を施してもよい。これらの処理によって本発明の所望効果を更に高めることが可能となる。
【００１９】
かくして得られる抽出物は、これをそのまま又は公知の安定剤、賦形剤、結合剤等の添加物質とともに含有せしめて本発明の抗インフルエンザ剤とすることができる。添加物質としては本発明の趣旨に反しないものであれば差し支えなく、食品、医薬品、飼料、ペットフード等に使用されるデンプン、デキストリン、粉末セルロース、結晶セルロース、セルロース誘導体、ショ糖脂肪酸エステル、乳糖、アラビアガム、マンニトール、トレハロース、グルコース、ゼラチン、二酸化ケイ素等を単独で又は組み合わせて利用することが可能である。
【００２０】
次に、本発明の他の特徴である、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得られる抽出物と、スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用して含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤について説明する。この態様の抗インフルエンザ剤は前述のアガリクス茸抽出物と特定植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを組み合わせてなるものであり，本発明の所望効果をより一層顕著に奏する。
【００２１】
この態様の抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理して得る抽出物は前述したものと同じである。該抽出物と併用する特定植物はスグリ科スグリ属（Ｒｉｂｅｓ）に属するもの及び／又はツツジ科スノキ属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）に属するものが好ましい。本発明では、これらの属に属する植物を単独で又は組み合わせて使用することができ、各植物の乾燥粉末及び抽出物のいずれか一方又は両方を選択できる。使用部位は根、茎、葉、花、果実、植物体全体、種子、発芽物等のいずれでもよい。
【００２２】
スグリ属に属する植物としてクロスグリ、クロフサスグリ、ブラックカラント、カシス（Ｒ．ｎｉｇｒｕｍ）、フサスグリ、アカスグリ、アカフサスグリ（Ｒ．ｒｕｂｒｕｍ）、セイヨウスグリ、マルスグリ、オオスグリ（Ｒ．ｕｖａ−ｃｒｉｓｐａ）、トガスグリ（Ｒ．ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｅ）、アメリカスグリ（Ｒ．ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）等を例示することができ、カシスがより望ましい。又、スノキ属に属する植物としてクランベリー（Ｖ．ｏｘｙｃｏｃｃｕｓ）、アメリカンクランベリー、オオミツルコケモモ（Ｖ．ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）、コケモモ（Ｖ．ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ）、ビルベリー（Ｖ．ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、ブルーベリー（Ｖ．ｓｐ）、シャシャンボ（Ｖ．ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ）等を例示することができ、クランベリーがより望ましい。
【００２３】
これらの植物は、通常、その果実が食用に供せられており、本発明においても生のまま又は搾汁の形態で利用してもよいが、果実に限らず前記の各部位を乾燥及び粉砕処理した乾燥粉末、生、搾汁若しくは乾燥物を水、低級アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノール等）、アセトン等の親水性溶媒により前述のアガリクス茸の場合と同様に抽出処理した抽出物の形態にするのが簡便であり、好適である。尚、この抽出物は、活性炭、シリカゲル、オクタデシルシラン結合シリカゲル（ＯＤＳ）、活性アルミナ、ポリスチレン等の吸着剤、イオン交換樹脂等を用いて精製処理したり、デキストラン、アガロース等を用いて分画処理を施してもよい。これらの処理によって本発明の所望効果を更に高めることが可能となる。
【００２４】
本発明に係る抗インフルエンザ剤において、アガリクス茸抽出物と前記特定植物の乾燥粉末及び／又は抽出物とを併用する場合の比率は、アガリクス茸抽出物１質量部に対して前記特定植物の加工物が約０．０５質量部〜約１．０質量部であり、より望ましくは約０．１質量部〜約０．８質量部であり、最も望ましくは約０．１質量部〜約０．５質量部である。前記特定植物の加工物が約０．０５質量部未満の場合はアガリクス茸抽出物単独のときと比較して本発明の所望効果が変わらず、一方、約１．０質量部を超える場合は更なる併用効果が期待できない。
【００２５】
本発明に係る抗インフルエンザ剤は、これ自体を飲食品、医薬品、化粧品、飼料、ペットフードその他産業分野の様々な製品とすることができ、あるいは該製品の配合原料の一部として使用する態様でも利用できる。とりわけ飲食品用途が好適である。これらの例を以下に述べるが、本発明はこの例示によって何ら制限を受けるものではない。
【００２６】
前記飲食品の具体例として、野菜ジュース、果汁飲料、清涼飲料、茶等の飲料類、スープ、ゼリー、プリン、ヨーグルト、ケーキプレミックス製品、菓子類、ふりかけ、味噌、醤油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、植物性クリーム、味噌、焼肉用たれや麺つゆ等の調味料、麺類、うどん、蕎麦、スパゲッティ、ハムやソーセージ等の畜肉魚肉加工食品、ハンバーグ、コロッケ、ふりかけ、佃煮、ジャム、牛乳、クリーム、バター、スプレッドやチーズ等の粉末状、固形状又は液状の乳製品、マーガリン、パン、ケーキ、クッキー、チョコレート、キャンディー、グミ、ガム等の各種一般加工食品や、粉末状、顆粒状、丸剤状、錠剤状、ソフトカプセル状、ハードカプセル状、ペースト状又は液体状の栄養補助食品、特定保健用食品、機能性食品、健康食品、濃厚流動食や嚥下障害用食品の治療食等を挙げることができる。
【００２７】
これらの飲食品を製造するには、公知の原材料及び本発明に係る抗インフルエンザ剤を用い、あるいは公知の原材料の一部を本発明の抗インフルエンザ剤で置き換え、公知の方法によって製造すればよい。例えば、本発明に係る抗インフルエンザ剤と、必要に応じてグルコース（ブドウ糖）、デキストリン、乳糖、澱粉又はその加工物、セルロース粉末等の賦形剤、ビタミン類、ミネラル類、動植物や魚介類の油脂、たん白（動植物や酵母由来の蛋白質、その加水分解物等）、糖質、色素、香料、酸化防止剤、その他の食用添加物、各種栄養機能成分を含む粉末やエキス類等の食用素材とともに混合して粉末、顆粒、ペレット、錠剤等の形状に加工したり、常法により前記例の一般食品に加工処理したり、これらを混合した液状物をゼラチン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース等で被覆してカプセルを成形したり、飲料（ドリンク類）の形態に加工して、栄養補助食品や健康食品として利用することは好適である。とりわけ錠剤、カプセル剤やドリンク剤が望ましい。
【００２８】
本発明に係る抗インフルエンザ剤を飲食品に配合する場合の比率は、飲食品の形態、本発明に係る抗インフルエンザ剤中のアガリクス茸抽出物や併用する特定植物の種類、品質、性状、成分等の相違によるため一律には規定しがたいが、飲食品中のアガリクス茸抽出物含量が約０．０１質量％〜約９０質量％、より望ましくは約１質量％〜約５０質量％となるようにし、前記特定植物の加工物や他の原材料を適宜に併用して処方を設計し、常法に従い目的とする飲食品を調製すればよい。アガリクス茸抽出物の含量が約０．０１質量％を下回るような飲食品ではアガリクス茸抽出物による本発明の所望効果を期待するためには多量の当該飲食品を摂取しなければならず、又、アガリクス茸抽出物の特有の風味を考慮した飲食品の実用的な態様から、本発明に係る飲食品中の最多アガリクス茸抽出物含量は約９０質量％である。本発明に係る飲食品は、ヒトの場合１日あたりのアガリクス茸抽出物摂取量の目安を約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、望ましくは約３０ｍｇ〜約５００ｍｇ、さらに望ましくは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇとして、例えば、経口摂取、経管投与等の方法で体内に取り込むことができる。
【００２９】
本発明に係る抗インフルエンザ剤及び飲食品は、本発明の目的に沿って、日常の食生活において継続的に摂取することが望ましく、このような態様によって本発明の所望効果、とりわけ日常生活の中で暴露されるインフルエンザウィルスの感染を低減ないし抑制し、体内でのインフルエンザウィルスの増殖を予防することが可能となる。この観点から、本発明においては、本発明に係るアガリクス茸抽出物やこれと併用する前記特定植物の加工物（乾燥粉末及び／又は抽出物）を必ずしも同一組成物中に含有せしめる制限はなく、これらを別々に含む複数の組成物あるいは飲食品として調製し、該組成物あるいは飲食品をほぼ同時に経口摂取することは本発明の技術的範囲に属する。
【００３０】
本発明に係る抗インフルエンザ剤を配合した医薬品も可能である。前記のアガリクス茸抽出物に、本発明の趣旨に反しない公知の賦形剤や添加剤を必要に応じて加え、常法により加工して錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、アンプル剤、注射剤等の製剤となし、経口投与、経管投与あるいは皮内投与する。インフルエンザウィルスの感染の低減ないし抑制、感染して体内に侵入したウィルスの増殖の抑制、その他の疾患の予防等のために適用することができる。本発明に係るアガリクス茸抽出物の配合量は製剤の種類、形態、用法、用量等により一律に規定し難いが、概ね０．０１〜５０質量％である。経口投与する場合の摂取量の目安は、有効成分として前記アガリクス茸抽出物を、成人１日あたり約０．０１〜約１０ｇ、より好ましくは約０．１〜約５ｇである。該範囲より少ないと本発明の所望効果を奏することが難しく、多すぎても更なる効果を期待できない。
【実施例】
【００３１】
次に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。各例において、％、部及び比率はいずれも質量基準である。
【００３２】
（製造例１）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥子実体を約０．７ｃｍ角サイズに粗砕したもの３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水３Ｌを添加し、常圧下、９０℃で３時間抽出処理した後、減圧濾過して残渣を分離し第１抽出液を採取した。次いで、前記残渣にイオン交換水２．５Ｌを加えて同様に処理して第２抽出液を採取した。両抽出液を合わせて減圧濃縮及び凍結乾燥処理し、アガリクス茸抽出物（試料１）４０．５ｇを得た。
【００３３】
（製造例２）
製造例１において、常圧下を１．３気圧の加圧下に置き換えて同様に処理してアガリクス茸抽出物（試料２）８８．０ｇを得た。
【００３４】
（製造例３）
製造例２で得た試料２の一部５０ｇにエタノール濃度が６５％の含水エタノール４００ｍＬを加え、常圧下で一旦溶解後３０℃にて１時間静置し、生じた沈殿物を遠心分離して前記含水エタノールに可溶の画分と不溶の画分に分別した。含水エタノール可溶画分は、減圧濃縮及び凍結乾燥して前記含水エタノールに可溶のアガリクス茸抽出物（試料３）１７．４ｇを得た。又、含水エタノール不溶画分（沈殿物）は、加水後、減圧濃縮でアルコールを除去し凍結乾燥して前記含水エタノールに不溶のアガリクス茸抽出物（試料４）３２．１ｇを得た。
【００３５】
（製造例４）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥菌糸体３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水３Ｌを添加し、常圧下、９０℃で３時間抽出処理した後、精密濾過して残渣を分離し第１抽出液を採取した。次いで、前記残渣にイオン交換水２．５Ｌを加えて同様に処理して第２抽出液を採取した。両抽出液を合わせて減圧濃縮及び凍結乾燥し、アガリクス茸抽出物（試料５）１４３．２ｇを得た。
【００３６】
（製造例５）
製造例４で得た試料５の一部５０ｇにエタノール濃度が４０％の含水エタノール４００ｍＬを加え、常圧下で一旦溶解後３０℃にて１時間静置し、生じた沈殿物を遠心分離して採取した。この沈殿物に加水した後、減圧濃縮でアルコールを除去し更に乾燥処理して前記含水エタノールに不溶のアガリクス茸抽出物（試料６）３０．６ｇを得た。
【００３７】
（製造例６）
マッシュルームの生の子実体５００ｇを約０．５ｍｍ角サイズに細断してステンレス製耐圧釜に仕込み、イオン交換水１０Ｌを加え、常圧下、７０℃で１時間抽出処理した後、減圧濾過して残渣を分離した抽出液を得た。次いで、この抽出液に最終エタノール濃度が５０％になるようにエタノールを添加してゆるやかに攪拌し、常圧下、３０℃にて５時間静置後、生じた沈殿物を遠心分離して採取した。更に、この沈殿物に加水、減圧濃縮及び凍結乾燥して、前記エタノール不溶分からなるアガリクス茸抽出物（試料７）４０．５ｇを得た。
【００３８】
（製造例７）
カシスの果実部の圧搾液１Ｌにエタノール濃度が７０％の含水エタノール１０Ｌを加え、常圧下、４０〜５０℃で３０分間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してカシス抽出物（試料８）７．３ｇを得た。
【００３９】
（製造例８）
クランベリーの果実部の乾燥物１００ｇにエタノール濃度が７０％の含水エタノール１Ｌを加え加え、５０〜６０℃で２時間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してクランベリー抽出物（試料９）２１．６ｇを得た。
【００４０】
（製造例９）
コケモモの果実及び葉の乾燥混合物１００ｇにエタノール濃度が９０％の含水エタノール１Ｌを加え加え、５０〜６０℃で２時間抽出処理し、残渣除去、濃縮及び乾燥処理してコケモモ抽出物（試料１０）１５．０ｇを得た。
【００４１】
（比較製造例１）
アガリクス ブラゼイ ムリルの乾燥子実体を約０．７ｃｍ角サイズに粗砕したもの３００ｇをステンレス製耐圧釜に仕込み、ヘキサン３Ｌを添加し、常温常圧下で１時間抽出処理後、減圧濾過して抽出液と残渣に分離した。抽出液を脱溶媒及び乾燥処理してヘキサン抽出物（比較試料１）を得た。この抽出物の成分は遊離脂肪酸、エルゴステロール等の遊離ステロール及びその配糖体、リン脂質、セラミド等の脂質類がほとんどを占め、遊離脂肪酸はリノール酸が主成分であった。
【００４２】
（試験例１）「ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗インフルエンザ試験」
本試験において、インフルエンザウィルス株はインフルエンザウィルスＡ／ＮＷＳ／３３（Ｈ１Ｎ１）を用いた。又、細胞はＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ（ＭＤＣＫ）細胞を、細胞の培養には２％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）含有Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）培地を用いた。
４８穴プレートにＭＤＣＫ細胞を播き、２％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で培養した後、同培地に溶解した試料とウィルス液（０．２ＰＦＵ／Ｃｅｌｌ）を添加して室温で１時間放置した後、前記培養培地を除去し、さらに前記培地で３回洗浄して細胞に感染していないウィルスを除去した後、前記培地に溶解した試料を再度添加して３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培養終了後、−８０℃の冷凍庫へ移し、細胞を死滅させた後、ウィルス量をプラークアッセイ法で測定した。片対数グラフ上で５０％ウィルス増殖阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。この結果を表１に示す。同表において、ＩＣ５０の値が小さいものほど、インフルエンザウィルスの感染を阻害している効果が高いことを示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】
試料１〜試料１０はいずれもｉｎ ｖｉｔｒｏ試験でインフルエンザウィルスの感染を予防する効果があることを確認した。一方、比較試料１はインフルエンザウィルスの感染を阻害しなかった。
【００４５】
（試験例２）「ｉｎ ｖｉｖｏでの抗インフルエンザ試験」
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）に試料を２週間連続経口投与した後、Ａ型インフルエンザウィルス（Ｈ１／Ｎ１株）を７．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて経鼻感染させた（一次感染）。該感染３日後、血液を採取してリンパ球の幼弱化試験を行った。更に、マウスを屠殺して脾臓を摘出し、該脾臓から調製したリンパ球のＮＫ活性を測定した。
リンパ球幼若化試験は、回収した末梢血リンパ球を３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ存在下でフィトヘマグルチニンＰによる抗原刺激を行い９６時間培養した後の３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取込量を液体シンチレーションカウンターにて測定した。生理食塩水投与群を１００として増減の割合を求めた。又、ＮＫ活性は、マウスの脾臓より調製したリンパ球を、５１Ｃｒを標識したＹａｃ−１細胞を標的細胞として混合培養を行い、放出された５１Ｃｒ量を液体シンチレーションカウンターにて測定し、次式によりＮＫ活性を求めた。
％Ｌｙｓｉｓ＝１００×（（検体の５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ）−自然５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ））／（最大５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ）−自然５１Ｃｒ遊離値（ｃｐｍ））
本試験の結果を表２にまとめた。
【００４６】
【表２】
【００４７】
ｉｎ ｖｉｖｏ試験でインフルエンザウィルス感染後の免疫細胞の分析を行ったところ、試料１〜試料７を投与したマウスの脾臓リンパ球のＮＫ活性が亢進していたことが明らかになった。更に末梢血リンパ球の抗原刺激下での幼弱化反応が高まっていたことを確認した。これらの結果から、試料１〜試料７を投与した群では、インフルエンザ投与後の免疫能が高まっており、インフルエンザ感染を予防する効果があったものと判断した。又、アガリクス茸抽出物（試料１、試料４、試料５、試料６）と果実抽出物（試料８、試料９）の併用で相乗効果が認められた。一方、比較試料１では効果が見られなかった。
【００４８】
（試験例３）「ｉｎ ｖｉｖｏでの抗インフルエンザ試験」
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）に試料を２週間連続経口投与した後、Ａ型インフルエンザウィルス（Ｈ１／Ｎ１株）を７．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて経鼻感染させた（一次感染）。インフルエンザウィルス感染後も引き続き試料の経口投与を試験期間中継続して行った。感染３週間後、９．５（ｌｏｇ）ＴＣＩＤ５０にて再度前記インフルエンザウィルスを経鼻感染させた（二次感染）。二回目の感染後のマウスの生存数を観察した。試料は全て１００ｍｇ／ｋｇで経口投与した。本試験の結果を表３にまとめた。
【００４９】
【表３】
【００５０】
生理食塩水のみ投与した群のラットが４日後に全て死亡したのに比べ、試料１〜試料１０を投与した群では二次感染７日目でも生存が認められた。よってこれらはインフルエンザウィルスの感染を予防ないし治癒する効果があったものと推察される。又、試料８又は試料９の果実抽出物とアガリクス茸抽出物との組み合わせによる相乗的な併用効果が認められた。２種類のアガリクス茸抽出物の組み合わせは、それぞれが単独でも１００％の生存率を示したため、その併用効果は明確ではなかった。一方で比較試料１は、インフルエンザウィルスの感染を阻害しなかった。
【００５１】
（試作例１）
製造例３に記載の方法で調製したアガリクス茸の子実体の熱水抽出物の含水エタノール沈殿画分（試料４）：１７０部、ミツロウ：３０部及びコーン油：５０部を約５０℃に加熱混合して均質にした後、カプセル充填機に供して、常法により１粒あたり内容量が３００ｍｇのゼラチン被覆ソフトカプセル製剤を試作した。また、前記試料４を製造例１の方法で調製したアガリクス茸の熱水抽出物（試料１）に置き換えることを除き同様に処理してソフトカプセル製剤を試作した。これらのカプセル製剤は経口摂取できる栄養補助食品又は医薬品として利用できる。
【００５２】
（試作例２）
試作例１において、試料４：１７０部を試料４：１００部及び製造例８の方法で調製したクランベリーの含水エタノール抽出物（試料９）：７０部の混合物に置きかえて同様に処理して栄養補助食品を試作した。
【００５３】
（試作例３）
試作例１において、試料４：１７０部を製造例２の方法で調製したアガリクス茸の加圧熱水抽出物（試料２）：１３０部及び製造例７の方法で調製したカシスの抽出物（試料８）：４０部の混合物に置きかえて同様に処理して栄養補助食品を試作した。
【００５４】
（試作例４）
試料２：１００部、製造例５の方法で調製したアガリクス茸の菌糸体抽出物のエタノール沈殿画分（試料６）：３０部、化工デンプン（松谷化学工業（株）製、商品名：「パインフロー」）：７０部、リン酸三カルシウム（米山化学工業（株）製）：８５部、及びセルロース３５部を混合機に仕込み、１０分間攪拌混合した。この混合物を直打式打錠機に供して直径７ｍｍ、高さ４ｍｍ、重量１５０ｍｇ／個の素錠を作成し、ついでコーティング機でシェラック被膜を形成させて錠剤形状の経口摂取用組成物を試作した。
【００５５】
（試作例５）
市販のグレープジュース１０００部に製造例６の方法で調製したアガリクス茸の子実体抽出物のエタノール不溶画分（試料７）：１０部及び試料９：３部を加えて十分に混合し均質なグレープ風味飲料を試作した。これは冷蔵庫で１週間保存しても外観及び風味に異状及び違和感は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明に係るアガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体の抽出物、及び、前記抽出物とカシス、クランベリー等の植物との組み合わせは、インフルエンザウィルスの感染及び／又は該感染後の生体内での増殖を顕著に抑制する。このため、これらを有効成分としてなる抗インフルエンザ剤は、これを経口摂取等することにより、インフルエンザウィルス感染の抑制ないし防止にとって有用であり、疾病の発生を予防及び／又は治療するための飲食品、医薬品、飼料、ペットフード等に有効利用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤。
【請求項２】
抽出物がアガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分である請求項１に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項３】
アガリクス茸がアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）である請求項１又は２に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項４】
スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物を併用するものである請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項５】
スグリ属に属する植物がカシスであり、スノキ属に属する植物がクランベリーである請求項４に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗インフルエンザ剤を配合してなることを特徴とする飲食品、医薬品、飼料又はペットフード。
【請求項１】
アガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を親水性溶媒で抽出処理した抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とする抗インフルエンザ剤。
【請求項２】
抽出物がアガリクス茸の子実体及び／又は菌糸体を熱水抽出処理して得た熱水抽出物をさらにエタノール濃度が４０％以上かつ７０％以下のエタノール水溶液を用いて抽出処理して得られる、該エタノール水溶液に不溶の成分である請求項１に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項３】
アガリクス茸がアガリクス ブラゼイ ムリル（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｉｌｌ）である請求項１又は２に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項４】
スグリ属及びスノキ属からなる群から選択される１種又は２種の属に属する植物の乾燥粉末及び／又は抽出物を併用するものである請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項５】
スグリ属に属する植物がカシスであり、スノキ属に属する植物がクランベリーである請求項４に記載の抗インフルエンザ剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗インフルエンザ剤を配合してなることを特徴とする飲食品、医薬品、飼料又はペットフード。
【公開番号】特開２０１１−１６８５７２（Ｐ２０１１−１６８５７２Ａ）
【公開日】平成２３年９月１日（２０１１．９．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３７３２（Ｐ２０１０−５３７３２）
【出願日】平成２２年２月１９日（２０１０．２．１９）
【出願人】（５０００８１９９０）ビーエイチエヌ株式会社 (35)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年９月１日（２０１１．９．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月１９日（２０１０．２．１９）
【出願人】（５０００８１９９０）ビーエイチエヌ株式会社 (35)
【Ｆターム（参考）】
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