抗ウイルス剤
【課題】 効果が高い猫白血病ウイルス感染症改善剤および効果が高い猫白血病ウイルス感染症予防剤を提供する。
【解決手段】 キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤であり、前記酸性キシロオリゴ糖が、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、かつ、平均重合度が２．０〜１５.０であるのが好ましく、前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であるのが好ましい。
【解決手段】 キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤であり、前記酸性キシロオリゴ糖が、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、かつ、平均重合度が２．０〜１５.０であるのが好ましく、前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であるのが好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペット用の抗ウイルス剤に関し、さらには、猫の白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する抗ウイルス剤、並びに予防効果を有する抗ウイルス剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
猫は代表的なペットとして、犬と共にコンパニオンアニマルとも呼ばれており、ブリーディングも盛んに行われている。特に、子猫や若い猫において問題となっているのが、猫白血病ウイルス（ＦｅＬＶ：ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）による感染症であり、国内の猫全体の感染率は２０〜３０％である。ＦｅＬＶはレトロウイルス科に属するＲＮＡウイルスであり、猫の唾液を感染源として、濃密な接触のある母子間や猫同士の喧嘩による噛み傷から猫白血病ウイルス感染症を発症させる。ＦｅＬＶは万病の元と言われており、猫に感染すると、血液を造る骨髄に侵入して造血に影響を与える。すなわち、正常な赤血球が順調に造られなければ貧血に、異常な白血球が増えれば白血病に、正常な白血球が破壊されれば細菌感染に対して無防備になり免疫不全と同様に多くの感染症になる。また、異常なリンパ球が増えれば悪性腫瘍であるリンパ腫になる。急性期の症状としては元気食欲消失・発熱・下痢及び貧血であり、生後間もなくＦｅＬＶに感染した場合の致死率はほぼ１００％とされている。感染１〜２年後の慢性期にはさまざまな細菌感染症やリンパ腫を発症し、放置すれば１〜２ヶ月で死に至る。
【０００３】
ＦｅＬＶの感染は動物病院で採血し、簡易検査キットを用いて確認することが出来るが、現状ではＦｅＬＶ自体を直接的に陰転化させる方法はない。猫白血病ウイルス感染症に対しては何れも対症療法であるが、急性期の場合は猫用インターフェロンを投与して免疫力を高めることで自然治癒を目指し、慢性期の代表疾患のリンパ腫に対しては抗がん剤投与で延命を図る等の治療法がある。なお、猫用インターフェロンは注射製剤であるが、投与間隔が週に１〜数回であり、オーナーへの負担が大きい。また、ワクチンの接種も有効であるが、１００％の予防効果は期待出来ない。
従って、猫白血病ウイルス感染症の適切な治療法もしくは予防法、すなわちＦｅＬＶに対する抗ウイルス剤が求められている。特に、ブリーディングの場では急性期の子猫や若い猫に対して救命効果と即効性のある薬剤または予防効果がある薬剤が、動物病院ではＦｅＬＶの陰転化をもたらすような薬剤が必要とされている。なお、猫は嗜好性が強い為、日常的に容易に投与可能な予防剤が好ましい。
【０００４】
キシロオリゴ糖入りのペットフードとしては、本出願人らの提案が知られているが、酸性キシロオリゴ糖の抗ウイルス効果については記載されていない（特許文献１参照）。
また、酸性キシロオリゴ糖の生理作用に関する提案は、例えば、酸性キシロオリゴ糖組成物を含有する腸内環境改善剤（特許文献２参照）、酸性キシロオリゴ糖を含有するヒスタミン遊離抑制剤（特許文献３参照）等の提案がなされているが、抗ウイルス効果としての報告はない。
【０００５】
ハタケシメジエキスはハタケシメジ子実体から抽出したエキスであり、抗腫瘍作用（非特許文献１参照）、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用（非特許文献２参照）、コレステロール低下作用（非特許文献３参照）、血糖値低下作用（非特許文献４参照）等が開示されている。また、イヌや猫に対する皮膚脂漏症改善作用（非特許文献５参照）も報告されているが、猫白血病ウイルス感染症改善剤あるいは予防剤としての提案はなされていない。
【特許文献１】特開２００２−３６９６５８号公報
【特許文献２】特開２００４−１８２６０９号公報
【特許文献３】特開２００４−０５９４８１号公報
【非特許文献１】Journal of Bioscience and Bioengineering Vol90 No1 p98-104 2000年
【非特許文献２】日本食品科学工学会誌 第48巻 第1号 p58-63 2001年
【非特許文献３】日本食品科学工学会誌 第48巻 第7号 p520-525 2001年
【非特許文献４】Biol. Pharm. Bull. Vol25 No9 p1234-1237 2002年
【非特許文献５】小動物臨床 第21巻 第6号 p457-462 2002年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、猫の白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する抗ウイルス剤、もしくは優れた予防効果を有する予防剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは前記課題を解決する為、鋭意研究した結果、以下の（１）〜（８）に記載される各本発明を発明するに至った。
（１） キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（２） 酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である（１）に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（３） 酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記（１）又は（２）に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（４） ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である（１）〜（３）のいずれかに記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（５） キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（６） 酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である（５）に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（７） 酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である（５）又は（６）に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（８） ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である（５）〜（７）のいずれかに記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、猫白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する薬剤を、また、優れた予防効果を有する薬剤を提供することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明の構成について詳述する。
本発明のキシロオリゴ糖とは、キシロースの２量体であるキシロビオース、３量体であるキシロトリオース、あるいは４量体〜２０量体程度のキシロースの重合体を言う。本発明における酸性キシロオリゴ糖とは、キシロオリゴ糖１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を有するものを言う。
また、キシロースの重合度が異なる酸性キシロオリゴ糖の混合組成物であっても良い。一般的には、天然物から製造するために、このような組成物として得られることが多い。以下、主として酸性キシロオリゴ糖組成物について説明する。
【００１０】
酸性キシロオリゴ糖組成物の重合度は、正規分布又はその他の分布をとる。平均重合度としては、２．０〜１５.０であるのが好ましく、なかでも、２．０〜１１．０であるのが好ましい。キシロース鎖長の上限と下限との差は２０以下が好ましく、１０以下がより好ましい。ウロン酸は、天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸又はデルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては、特に限定されないが、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸が好ましい。
【００１１】
上記のような酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることが出来れば、その製法は、特に限定されないが、（１）木材からキシランを抽出し、それを酵素的に分解する方法（セルラーゼ研究会発行、セルラーゼ研究会報第１６巻、２００１年６月１４日発行、ｐ１７−２６）と、（２）リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られたキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有する酸性キシロオリゴ糖を分離する方法と、を挙げることが出来る。特に、（２）の方法が、５〜１０量体の比較的重合度の高いものを大量、かつ、安価に製造することが出来る点で好ましい。以下に、（２）の方法の概要を示す。
【００１２】
酸性キシロオリゴ糖組成物は、化学パルプ由来のリグノセルロース材料を原料とし、加水分解工程、濃縮工程、希酸処理工程、精製工程を経て得ることが出来る。加水分解工程では、希酸処理、高温高圧の水蒸気（蒸煮・爆砕）処理又はヘミセルラーゼ等による酵素分解処理によって、リグノセルロース中のキシランを選択的に加水分解し、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体として得る。濃縮工程では逆浸透膜等により、キシロオリゴ糖−リグニン様物質複合体が濃縮され、低重合度のキシロオリゴ糖や低分子の夾雑物などを除去することが出来る。濃縮工程は逆浸透膜を用いることが好ましいが、限外濾過膜、塩析又は透析なども使用可能である。得られた濃縮液の希酸処理工程により、複合体からリグニン様物質が遊離し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖とを含む希酸処理液を得ることが出来る。この時、複合体から切り離されたリグニン様物質は酸性下で縮合して沈殿するので、セラミックフィルターや濾紙などを用いて、濾過等して除去することが出来る。希酸処理工程では、酸による加水分解を用いることが好ましいが、リグニン分解酵素などによる酵素分解なども用いることが出来る。
【００１３】
精製工程は、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程からなる。一部のリグニン様物質は、可溶性高分子として溶液中に残存するが、限外濾過工程で除去される。着色物質等の夾雑物は、活性炭を用いた脱色工程によってそのほとんどが取り除かれる。限外濾過工程では、限外濾過膜を用いることが好ましいが、逆浸透膜、塩析又は透析などを用いることが出来る。こうして得られた糖液中には、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖とが溶解している。この糖液を、イオン交換樹脂を用いた吸着工程に導入して、目的の酸性キシロオリゴ糖のみを取り出すことが出来る。以下、糖液を吸着工程に導入して酸性キシロオリゴ糖を精製する概要について説明する。
【００１４】
糖液をまず強陽イオン交換樹脂にて処理し、糖液中の金属イオンを除去する。ついで、強陰イオン交換樹脂を用いて糖液中の硫酸イオンなどを除去する。この工程では、硫酸イオンの除去と同時に弱酸である有機酸の一部と着色成分の除去も同時に行われる。強陰イオン交換樹脂で処理された糖液は、もう一度、強陽イオン交換樹脂で処理し、更に、金属イオンを除去する。最後に弱陰イオン交換樹脂で処理し、酸性キシロオリゴ糖を樹脂に吸着させる。
樹脂に吸着した酸性キシロオリゴ糖を、金属塩の低濃度水溶液によって溶出することにより、夾雑物を含まない酸性キシロオリゴ糖溶液を得ることが出来る。金属塩としては、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ又はＭｇＣｌ２等を挙げることが出来る。得られた溶液を、例えば、スプレードライ処理や凍結乾燥処理により、白色の酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末を得ることが出来る。
【００１５】
化学パルプ由来のリグノセルロースを原料とし、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体とした酸性キシロオリゴ糖組成物の上記製造法のメリットは、経済的である点と、キシロースの平均重合度の高い酸性キシロオリゴ糖組成物が容易に得られる点とにある。キシロースの平均重合度は、例えば、希酸処理条件を調節するか、再度ヘミセルラーゼで処理することによって変えることが可能である。また、弱陰イオン交換樹脂溶出時に用いる溶出液の塩濃度を変化させることによって、１分子あたりに結合するウロン酸残基の数が異なる酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも出来る。さらに、適当なキシラナーゼ又はヘミセルラーゼを作用させることによってウロン酸結合部位が末端に限定された酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも可能である。
【００１６】
以下、本発明において使用するハタケシメジエキスについて概説する。ハタケシメジ（Lyophyllum decastes Sing.）とは、ホンシメジと同じキシメジ科シメジ属に属する美味しい食用キノコである。自然界では、秋に林内や畑地において株状に生え、４〜９ｃｍの褐色から灰褐色のまんじゅう形の傘をつける。近年、人工栽培技術が確立され、食用きのことして販売されている。
【００１７】
ハタケシメジエキスに関しては、シイタケと同等以上の抗腫瘍活性が良く知られており、その活性本体はβ-1,6分岐を持つβ-1,3グルカンならびにβ-1,3分岐を持つ酸性β-1,6グルカンであることが明らかになっている。ハタケシメジエキスの製法は、得られるエキスが前記β-グルカンを含有すれば特に限定されない。例えば、前記ハタケシメジの子実体または培養菌糸を原料として、熱水で抽出したエキスを濃縮して得ることが出来る。具体的には、ハタケシメジ子実体にイオン交換水を加え、一昼夜加熱抽出、固液分離、抽出液の濃縮後、スプレードライすることでハタケシメジエキスが粉末として得ることが出来る(特開2003-34647）。
【００１８】
上記の酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを適当な比率で混合して得られた混合剤を、本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤として使用することが出来る。酸性キシロオリゴ糖組成物粉末のハタケシメジエキス粉末に対する混合比率は１〜１０倍が好ましく、１〜３倍がより好ましい。本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤における酸性キロオリゴ糖及びハタケシメジエキスの含有率としては、０．０１％以上（以下全て質量％）であれば使用することが出来るが、１０％以上がより好ましい。また、酸性キシロオリゴ糖組成物とハタケシメジエキスにそれぞれデキストリン等を加えて調製した粉末剤を、ペットフード上に別々に降り掛けることで両粉末剤の混合剤として用いることも出来る。更には、両粉末剤を水に溶いたものを混合剤として用いることも出来る。
【００１９】
酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを配合した猫白血病ウイルス感染症改善剤は、直接的に摂取することもでき、飲料や食品に添加したりして間接的に摂取することも出来る。また、本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、粉体化することもでき、打錠して錠剤化することも出来る。
本発明に於ける酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを配合した猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、猫やイヌ用のペットフードや機能性食品、家畜用飼料として用いることが出来る。また、他の食品、経腸栄養剤、他の栄養成分と混合して用いることが出来る。これらの場合、いずれも、食品・飼料中に本猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤を０．1〜２０質量％含有するように配合する。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は、これにより限定されるものではない。また、本実施例では断りのない限り、「％」は、「質量％」を示す。
まず、各測定法の概要、本発明で有効成分として含有させた酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ１０）及びハタケシメジエキスの調製例を示す。
＜測定法の概要＞
(１) 全糖量の定量
全糖量は、検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、フェノール硫酸法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(２) 還元糖量の定量
還元糖量は、検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、ソモジ−ネルソン法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(３) ウロン酸量の定量
ウロン酸量は、検量線をＤ−グルクロン酸（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、カルバゾール硫酸法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(４) 平均重合度の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離して不溶物を除去し、上清液を得た。この上清液の全糖量を還元糖量（共にキシロース換算）で割って平均重合度を求めた。
(５) 酸性キシロオリゴ糖の分析方法
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ（ダイオネクス（株）社製、分析用カラム：Ｃａｒｂｏ Ｐａｃ ＰＡ−１０）を用いて分析した。分離溶媒には１００ｍＭのＮａＯＨ水溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを５００ｍＭとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒：溶出溶媒＝１０：０〜４：６となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
(６) オリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離して不溶物を除去し、上清液を得た。この上清液のウロン酸量（Ｄ−グルクロン酸換算）を還元糖量（キシロース換算）で割ってオリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
(７) 酵素力価の定義
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定には、カバキシラン（シグマ（株）社製）を用いた。酵素力価の定義は、キシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をＤＮＳ法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）を用いて測定し、１分間に１マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を１ユニットとした。
【００２１】
＜調製例１：酸性キシロオリゴ糖＞
混合広葉樹チップ（国内産広葉樹７０％、ユーカリ３０％）を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー（カッパー価９.６、パルプ粘度２５.１ｃｐｓ）を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度１０％、ｐＨ８に調製したパルプスラリーを用いて、以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
バチルスｓｐ.Ｓ−２１１３株（独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株ＦＥＲＭ ＢＰ−５２６４）の生産するキシラナーゼを１単位／パルプｇとなるように添加した後、６０℃で１２０分間処理した。その後、濾過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液１０５０Ｌを得た。
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に導入した。濃縮工程では、逆浸透膜（日東電工（株）製、ＲＯ ＮＴＲ−７４１０）を用いて濃縮液（４０倍濃縮）を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のｐＨを３.５に調整した後、１２１℃で６０分間加熱処理し、リグニンなどの高分子夾雑物の沈殿を形成させ、この沈殿をセラミックフィルター濾過で取り除いて、希酸処理溶液を得た。
精製工程では、希酸処理溶液を限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に導入した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜（オスモニクス社製、分画分子量８０００）で濾過処理した後、濾液を活性炭（７７０ｇ、和光純薬工業（株）製）処理及びセラミックフィルター濾過処理した。吸着工程では、精製工程で得られた脱色処理液を強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）、強陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＡ４０８）、強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）各１００ｋｇを充填したカラムに順次導入した後、弱陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＷＡ３０）１００ｋｇを充填したカラムに導入した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムに７５ｍＭのＮａＣｌ水溶液を導入して、弱陰イオン交換樹脂に吸着した酸性キシロオリゴ糖を溶出させ、溶出液を得た。得られた溶出液をスプレードライ処理して、酸性キシロオリゴ糖の白色粉末（全糖量３５３ｇ、回収率１３.１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖をＵＸ１０とする。前述の測定方法により、ＵＸ１０は平均重合度１０.３、キシロース鎖長の上限と下限との差は１０、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００２２】
＜調製例２：ハタケシメジエキス＞
ハタケシメジエキスは以下のように調製した。乾燥させたハタケシメジ子実体約５０ｋｇに５ｋＬのイオン交換水を加えて、一昼夜加熱抽出後、固液分離、抽出液を濃縮した。得られた濃縮液に３３％（質量％）のデキストリンを添加し、スプレードライヤーで粉末化することで、２０ｋｇのハタケシメジエキスを得た。
【００２３】
＜調製例３：酸性キシロオリゴ糖粉末剤＞
調製例１で得たＵＸ１０粉末にデキストリンを加え、酸性キシロオリゴ糖粉末剤を数百包作製した。酸性キシロオリゴ糖粉末剤１包（１０００ｍｇ）の組成は、酸性キシロオリゴ糖２５０ｍｇ及びデキストリン７５０ｍｇとした。
【００２４】
＜調製例４：ハタケシメジエキス粉末剤＞
調製例２で得たハタケシメジエキスにプルランを加え、ハタケシメジエキス粉末剤を数百包作製した。ハタケシメジエキス粉末剤１包（３１７ｍｇ）の組成は、ハタケシメジエキス１６０ｍｇ、デキストリン８０ｍｇ及びプルラン７７ｍｇとした。
【００２５】
次に、調製例３及び調製例４で得られた酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤を用いて行った猫白血病ウイルス感染症の改善試験の概要と結果を、実施例及び比較例に示す。
【００２６】
＜実施例１、比較例１及び比較例２＞
酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスの併用による抗ウイルス効果を確認する為に、獣医師により猫白血病ウイルス感染症と診断された猫への投与試験を実施した。以下にその概要を示す。
元気食欲がなく、血液検査においてＦｅＬＶ検査キット（商品名：チェックマンＦｅＬＶ、共立製薬（株）製）で陽性、貧血を示すＰＣＶ値（ヘマトクリット値）の低下及びウイルス感染症を示すＷＢＣ値（総白血球数）の低下を確認した猫８匹を３群に分けて試験に用いた。まず、実施例１（４匹）は、酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤をそれぞれ１日当り４包及び２包投与した。また、比較例（各２匹）としては、それぞれ１日当り、酸性キシロオリゴ糖粉末剤４包（比較例１）またはハタケシメジエキス粉末剤２包（比較例２）を投与した。なお、各粉末剤の猫に対する嗜好性は良好であり、ペットフードの上に降り掛けることで容易に投与することが出来た。粉末剤の投与開始後４日目と１０日目に、獣医師により経過観察を行い、元気及び食欲等のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ：生活の質）に対する所見（「著明改善（劇的に改善）」、「改善（明らかに改善）」、「やや改善（何らかの改善）」、「不変」、「悪化」）をもとに猫白血病ウイルス感染症の改善状況を診断した（表１）。
【００２７】
【表１】
【００２８】
＜実施例２及び実施例３＞
実施例１の症例１及び２の２匹の猫については、粉末剤投与期間中（６０日間）、定期的に血液の生化学的検査を行った（表２及び表３）。ＰＣＶ値（ヘマトクリット値、実施例２）及びＷＢＣ値（総白血球数、実施例３）の増加は、それぞれ貧血及びウイルス感染症の改善を示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】
＜実施例４＞
また、実施例１の症例１及び２の２匹の猫においては、上記記載のＦｅＬＶ検査キットによるウイルス検査を粉末剤投与最終日（６０日目）に実施した結果、何れも陰性であった。
【００３２】
酸性キシロオリゴ糖粉末及びハタケシメジエキス粉末の併用により、猫白血病ウイルス感染症は数日で改善した。特に、実施例１の症例１及び症例２の猫はＰＣＶ値及びＷＢＣ値の改善だけでなく、ＦｅＬＶの陰転化まで確認された。なお、この２例は、猫用インターフェロン（商品名：インターキャット、東レ（株）製）の投与による治療では全くＱＯＬの改善が見られなかった症例であった。
【００３３】
次に、調製例３及び調製例４で得られた酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤を用いて行った猫白血病ウイルス感染症の予防試験の概要と結果を、実施例及び比較例に示す。
【００３４】
＜実施例５、比較例３及び比較例４＞
３匹の親猫から同時期に生まれた子猫計８匹をそれぞれの親猫と同居させ、３群で５ヶ月間、試験を行った（実施例５：子猫４匹、比較例３及び４：各子猫２匹）。実施例５は生後３日目からほぼ連日、一日当り酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤各１包を水に溶いてスポイドで投与した。比較例（各子猫２匹）としては、それぞれ１日当り、酸性キシロオリゴ糖粉末剤１包（比較例３）またはハタケシメジエキス粉末剤１包（比較例４）を実施例５と同様に投与した。投与期間中、１ヶ月目と５ヶ月目にＦｅＬＶ検査キット（商品名：チェックマンＦｅＬＶ、共立製薬（株）製）でＦｅＬＶの感染状況を調べた。なお、親猫３匹は何れも１ヶ月目と５ヶ月目において、ＦｅＬＶ陽性であった。結果を表４に示す。
【００３５】
【表４】
【００３６】
酸性キシロオリゴ糖粉末及びハタケシメジエキス粉末の併用により、猫白血病ウイルス感染症は予防出来ることが分かった。しかし、酸性キシロオリゴ糖粉末またはハタケシメジエキス粉末単独では、予防効果は見られなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明で得られる酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを含有した猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、優れた薬理活性及び即効性または予防製を有しており、動物用の食品や医薬品として用いることが可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペット用の抗ウイルス剤に関し、さらには、猫の白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する抗ウイルス剤、並びに予防効果を有する抗ウイルス剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
猫は代表的なペットとして、犬と共にコンパニオンアニマルとも呼ばれており、ブリーディングも盛んに行われている。特に、子猫や若い猫において問題となっているのが、猫白血病ウイルス（ＦｅＬＶ：ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）による感染症であり、国内の猫全体の感染率は２０〜３０％である。ＦｅＬＶはレトロウイルス科に属するＲＮＡウイルスであり、猫の唾液を感染源として、濃密な接触のある母子間や猫同士の喧嘩による噛み傷から猫白血病ウイルス感染症を発症させる。ＦｅＬＶは万病の元と言われており、猫に感染すると、血液を造る骨髄に侵入して造血に影響を与える。すなわち、正常な赤血球が順調に造られなければ貧血に、異常な白血球が増えれば白血病に、正常な白血球が破壊されれば細菌感染に対して無防備になり免疫不全と同様に多くの感染症になる。また、異常なリンパ球が増えれば悪性腫瘍であるリンパ腫になる。急性期の症状としては元気食欲消失・発熱・下痢及び貧血であり、生後間もなくＦｅＬＶに感染した場合の致死率はほぼ１００％とされている。感染１〜２年後の慢性期にはさまざまな細菌感染症やリンパ腫を発症し、放置すれば１〜２ヶ月で死に至る。
【０００３】
ＦｅＬＶの感染は動物病院で採血し、簡易検査キットを用いて確認することが出来るが、現状ではＦｅＬＶ自体を直接的に陰転化させる方法はない。猫白血病ウイルス感染症に対しては何れも対症療法であるが、急性期の場合は猫用インターフェロンを投与して免疫力を高めることで自然治癒を目指し、慢性期の代表疾患のリンパ腫に対しては抗がん剤投与で延命を図る等の治療法がある。なお、猫用インターフェロンは注射製剤であるが、投与間隔が週に１〜数回であり、オーナーへの負担が大きい。また、ワクチンの接種も有効であるが、１００％の予防効果は期待出来ない。
従って、猫白血病ウイルス感染症の適切な治療法もしくは予防法、すなわちＦｅＬＶに対する抗ウイルス剤が求められている。特に、ブリーディングの場では急性期の子猫や若い猫に対して救命効果と即効性のある薬剤または予防効果がある薬剤が、動物病院ではＦｅＬＶの陰転化をもたらすような薬剤が必要とされている。なお、猫は嗜好性が強い為、日常的に容易に投与可能な予防剤が好ましい。
【０００４】
キシロオリゴ糖入りのペットフードとしては、本出願人らの提案が知られているが、酸性キシロオリゴ糖の抗ウイルス効果については記載されていない（特許文献１参照）。
また、酸性キシロオリゴ糖の生理作用に関する提案は、例えば、酸性キシロオリゴ糖組成物を含有する腸内環境改善剤（特許文献２参照）、酸性キシロオリゴ糖を含有するヒスタミン遊離抑制剤（特許文献３参照）等の提案がなされているが、抗ウイルス効果としての報告はない。
【０００５】
ハタケシメジエキスはハタケシメジ子実体から抽出したエキスであり、抗腫瘍作用（非特許文献１参照）、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用（非特許文献２参照）、コレステロール低下作用（非特許文献３参照）、血糖値低下作用（非特許文献４参照）等が開示されている。また、イヌや猫に対する皮膚脂漏症改善作用（非特許文献５参照）も報告されているが、猫白血病ウイルス感染症改善剤あるいは予防剤としての提案はなされていない。
【特許文献１】特開２００２−３６９６５８号公報
【特許文献２】特開２００４−１８２６０９号公報
【特許文献３】特開２００４−０５９４８１号公報
【非特許文献１】Journal of Bioscience and Bioengineering Vol90 No1 p98-104 2000年
【非特許文献２】日本食品科学工学会誌 第48巻 第1号 p58-63 2001年
【非特許文献３】日本食品科学工学会誌 第48巻 第7号 p520-525 2001年
【非特許文献４】Biol. Pharm. Bull. Vol25 No9 p1234-1237 2002年
【非特許文献５】小動物臨床 第21巻 第6号 p457-462 2002年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、猫の白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する抗ウイルス剤、もしくは優れた予防効果を有する予防剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは前記課題を解決する為、鋭意研究した結果、以下の（１）〜（８）に記載される各本発明を発明するに至った。
（１） キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（２） 酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である（１）に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（３） 酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記（１）又は（２）に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（４） ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である（１）〜（３）のいずれかに記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
（５） キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（６） 酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である（５）に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（７） 酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である（５）又は（６）に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
（８） ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である（５）〜（７）のいずれかに記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、猫白血病ウイルス感染症に対して優れた改善効果と即効性を有する薬剤を、また、優れた予防効果を有する薬剤を提供することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明の構成について詳述する。
本発明のキシロオリゴ糖とは、キシロースの２量体であるキシロビオース、３量体であるキシロトリオース、あるいは４量体〜２０量体程度のキシロースの重合体を言う。本発明における酸性キシロオリゴ糖とは、キシロオリゴ糖１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を有するものを言う。
また、キシロースの重合度が異なる酸性キシロオリゴ糖の混合組成物であっても良い。一般的には、天然物から製造するために、このような組成物として得られることが多い。以下、主として酸性キシロオリゴ糖組成物について説明する。
【００１０】
酸性キシロオリゴ糖組成物の重合度は、正規分布又はその他の分布をとる。平均重合度としては、２．０〜１５.０であるのが好ましく、なかでも、２．０〜１１．０であるのが好ましい。キシロース鎖長の上限と下限との差は２０以下が好ましく、１０以下がより好ましい。ウロン酸は、天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸又はデルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては、特に限定されないが、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸が好ましい。
【００１１】
上記のような酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることが出来れば、その製法は、特に限定されないが、（１）木材からキシランを抽出し、それを酵素的に分解する方法（セルラーゼ研究会発行、セルラーゼ研究会報第１６巻、２００１年６月１４日発行、ｐ１７−２６）と、（２）リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られたキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有する酸性キシロオリゴ糖を分離する方法と、を挙げることが出来る。特に、（２）の方法が、５〜１０量体の比較的重合度の高いものを大量、かつ、安価に製造することが出来る点で好ましい。以下に、（２）の方法の概要を示す。
【００１２】
酸性キシロオリゴ糖組成物は、化学パルプ由来のリグノセルロース材料を原料とし、加水分解工程、濃縮工程、希酸処理工程、精製工程を経て得ることが出来る。加水分解工程では、希酸処理、高温高圧の水蒸気（蒸煮・爆砕）処理又はヘミセルラーゼ等による酵素分解処理によって、リグノセルロース中のキシランを選択的に加水分解し、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体として得る。濃縮工程では逆浸透膜等により、キシロオリゴ糖−リグニン様物質複合体が濃縮され、低重合度のキシロオリゴ糖や低分子の夾雑物などを除去することが出来る。濃縮工程は逆浸透膜を用いることが好ましいが、限外濾過膜、塩析又は透析なども使用可能である。得られた濃縮液の希酸処理工程により、複合体からリグニン様物質が遊離し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖とを含む希酸処理液を得ることが出来る。この時、複合体から切り離されたリグニン様物質は酸性下で縮合して沈殿するので、セラミックフィルターや濾紙などを用いて、濾過等して除去することが出来る。希酸処理工程では、酸による加水分解を用いることが好ましいが、リグニン分解酵素などによる酵素分解なども用いることが出来る。
【００１３】
精製工程は、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程からなる。一部のリグニン様物質は、可溶性高分子として溶液中に残存するが、限外濾過工程で除去される。着色物質等の夾雑物は、活性炭を用いた脱色工程によってそのほとんどが取り除かれる。限外濾過工程では、限外濾過膜を用いることが好ましいが、逆浸透膜、塩析又は透析などを用いることが出来る。こうして得られた糖液中には、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖とが溶解している。この糖液を、イオン交換樹脂を用いた吸着工程に導入して、目的の酸性キシロオリゴ糖のみを取り出すことが出来る。以下、糖液を吸着工程に導入して酸性キシロオリゴ糖を精製する概要について説明する。
【００１４】
糖液をまず強陽イオン交換樹脂にて処理し、糖液中の金属イオンを除去する。ついで、強陰イオン交換樹脂を用いて糖液中の硫酸イオンなどを除去する。この工程では、硫酸イオンの除去と同時に弱酸である有機酸の一部と着色成分の除去も同時に行われる。強陰イオン交換樹脂で処理された糖液は、もう一度、強陽イオン交換樹脂で処理し、更に、金属イオンを除去する。最後に弱陰イオン交換樹脂で処理し、酸性キシロオリゴ糖を樹脂に吸着させる。
樹脂に吸着した酸性キシロオリゴ糖を、金属塩の低濃度水溶液によって溶出することにより、夾雑物を含まない酸性キシロオリゴ糖溶液を得ることが出来る。金属塩としては、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ又はＭｇＣｌ２等を挙げることが出来る。得られた溶液を、例えば、スプレードライ処理や凍結乾燥処理により、白色の酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末を得ることが出来る。
【００１５】
化学パルプ由来のリグノセルロースを原料とし、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体とした酸性キシロオリゴ糖組成物の上記製造法のメリットは、経済的である点と、キシロースの平均重合度の高い酸性キシロオリゴ糖組成物が容易に得られる点とにある。キシロースの平均重合度は、例えば、希酸処理条件を調節するか、再度ヘミセルラーゼで処理することによって変えることが可能である。また、弱陰イオン交換樹脂溶出時に用いる溶出液の塩濃度を変化させることによって、１分子あたりに結合するウロン酸残基の数が異なる酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも出来る。さらに、適当なキシラナーゼ又はヘミセルラーゼを作用させることによってウロン酸結合部位が末端に限定された酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも可能である。
【００１６】
以下、本発明において使用するハタケシメジエキスについて概説する。ハタケシメジ（Lyophyllum decastes Sing.）とは、ホンシメジと同じキシメジ科シメジ属に属する美味しい食用キノコである。自然界では、秋に林内や畑地において株状に生え、４〜９ｃｍの褐色から灰褐色のまんじゅう形の傘をつける。近年、人工栽培技術が確立され、食用きのことして販売されている。
【００１７】
ハタケシメジエキスに関しては、シイタケと同等以上の抗腫瘍活性が良く知られており、その活性本体はβ-1,6分岐を持つβ-1,3グルカンならびにβ-1,3分岐を持つ酸性β-1,6グルカンであることが明らかになっている。ハタケシメジエキスの製法は、得られるエキスが前記β-グルカンを含有すれば特に限定されない。例えば、前記ハタケシメジの子実体または培養菌糸を原料として、熱水で抽出したエキスを濃縮して得ることが出来る。具体的には、ハタケシメジ子実体にイオン交換水を加え、一昼夜加熱抽出、固液分離、抽出液の濃縮後、スプレードライすることでハタケシメジエキスが粉末として得ることが出来る(特開2003-34647）。
【００１８】
上記の酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを適当な比率で混合して得られた混合剤を、本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤として使用することが出来る。酸性キシロオリゴ糖組成物粉末のハタケシメジエキス粉末に対する混合比率は１〜１０倍が好ましく、１〜３倍がより好ましい。本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤における酸性キロオリゴ糖及びハタケシメジエキスの含有率としては、０．０１％以上（以下全て質量％）であれば使用することが出来るが、１０％以上がより好ましい。また、酸性キシロオリゴ糖組成物とハタケシメジエキスにそれぞれデキストリン等を加えて調製した粉末剤を、ペットフード上に別々に降り掛けることで両粉末剤の混合剤として用いることも出来る。更には、両粉末剤を水に溶いたものを混合剤として用いることも出来る。
【００１９】
酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを配合した猫白血病ウイルス感染症改善剤は、直接的に摂取することもでき、飲料や食品に添加したりして間接的に摂取することも出来る。また、本発明の猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、粉体化することもでき、打錠して錠剤化することも出来る。
本発明に於ける酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを配合した猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、猫やイヌ用のペットフードや機能性食品、家畜用飼料として用いることが出来る。また、他の食品、経腸栄養剤、他の栄養成分と混合して用いることが出来る。これらの場合、いずれも、食品・飼料中に本猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤を０．1〜２０質量％含有するように配合する。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は、これにより限定されるものではない。また、本実施例では断りのない限り、「％」は、「質量％」を示す。
まず、各測定法の概要、本発明で有効成分として含有させた酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ１０）及びハタケシメジエキスの調製例を示す。
＜測定法の概要＞
(１) 全糖量の定量
全糖量は、検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、フェノール硫酸法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(２) 還元糖量の定量
還元糖量は、検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、ソモジ−ネルソン法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(３) ウロン酸量の定量
ウロン酸量は、検量線をＤ−グルクロン酸（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、カルバゾール硫酸法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）にて定量した。
(４) 平均重合度の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離して不溶物を除去し、上清液を得た。この上清液の全糖量を還元糖量（共にキシロース換算）で割って平均重合度を求めた。
(５) 酸性キシロオリゴ糖の分析方法
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ（ダイオネクス（株）社製、分析用カラム：Ｃａｒｂｏ Ｐａｃ ＰＡ−１０）を用いて分析した。分離溶媒には１００ｍＭのＮａＯＨ水溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを５００ｍＭとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒：溶出溶媒＝１０：０〜４：６となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
(６) オリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離して不溶物を除去し、上清液を得た。この上清液のウロン酸量（Ｄ−グルクロン酸換算）を還元糖量（キシロース換算）で割ってオリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
(７) 酵素力価の定義
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定には、カバキシラン（シグマ（株）社製）を用いた。酵素力価の定義は、キシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をＤＮＳ法（「還元糖の定量法」、学会出版センター発行）を用いて測定し、１分間に１マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を１ユニットとした。
【００２１】
＜調製例１：酸性キシロオリゴ糖＞
混合広葉樹チップ（国内産広葉樹７０％、ユーカリ３０％）を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー（カッパー価９.６、パルプ粘度２５.１ｃｐｓ）を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度１０％、ｐＨ８に調製したパルプスラリーを用いて、以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
バチルスｓｐ.Ｓ−２１１３株（独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株ＦＥＲＭ ＢＰ−５２６４）の生産するキシラナーゼを１単位／パルプｇとなるように添加した後、６０℃で１２０分間処理した。その後、濾過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液１０５０Ｌを得た。
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に導入した。濃縮工程では、逆浸透膜（日東電工（株）製、ＲＯ ＮＴＲ−７４１０）を用いて濃縮液（４０倍濃縮）を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のｐＨを３.５に調整した後、１２１℃で６０分間加熱処理し、リグニンなどの高分子夾雑物の沈殿を形成させ、この沈殿をセラミックフィルター濾過で取り除いて、希酸処理溶液を得た。
精製工程では、希酸処理溶液を限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に導入した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜（オスモニクス社製、分画分子量８０００）で濾過処理した後、濾液を活性炭（７７０ｇ、和光純薬工業（株）製）処理及びセラミックフィルター濾過処理した。吸着工程では、精製工程で得られた脱色処理液を強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）、強陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＡ４０８）、強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）各１００ｋｇを充填したカラムに順次導入した後、弱陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＷＡ３０）１００ｋｇを充填したカラムに導入した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムに７５ｍＭのＮａＣｌ水溶液を導入して、弱陰イオン交換樹脂に吸着した酸性キシロオリゴ糖を溶出させ、溶出液を得た。得られた溶出液をスプレードライ処理して、酸性キシロオリゴ糖の白色粉末（全糖量３５３ｇ、回収率１３.１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖をＵＸ１０とする。前述の測定方法により、ＵＸ１０は平均重合度１０.３、キシロース鎖長の上限と下限との差は１０、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００２２】
＜調製例２：ハタケシメジエキス＞
ハタケシメジエキスは以下のように調製した。乾燥させたハタケシメジ子実体約５０ｋｇに５ｋＬのイオン交換水を加えて、一昼夜加熱抽出後、固液分離、抽出液を濃縮した。得られた濃縮液に３３％（質量％）のデキストリンを添加し、スプレードライヤーで粉末化することで、２０ｋｇのハタケシメジエキスを得た。
【００２３】
＜調製例３：酸性キシロオリゴ糖粉末剤＞
調製例１で得たＵＸ１０粉末にデキストリンを加え、酸性キシロオリゴ糖粉末剤を数百包作製した。酸性キシロオリゴ糖粉末剤１包（１０００ｍｇ）の組成は、酸性キシロオリゴ糖２５０ｍｇ及びデキストリン７５０ｍｇとした。
【００２４】
＜調製例４：ハタケシメジエキス粉末剤＞
調製例２で得たハタケシメジエキスにプルランを加え、ハタケシメジエキス粉末剤を数百包作製した。ハタケシメジエキス粉末剤１包（３１７ｍｇ）の組成は、ハタケシメジエキス１６０ｍｇ、デキストリン８０ｍｇ及びプルラン７７ｍｇとした。
【００２５】
次に、調製例３及び調製例４で得られた酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤を用いて行った猫白血病ウイルス感染症の改善試験の概要と結果を、実施例及び比較例に示す。
【００２６】
＜実施例１、比較例１及び比較例２＞
酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスの併用による抗ウイルス効果を確認する為に、獣医師により猫白血病ウイルス感染症と診断された猫への投与試験を実施した。以下にその概要を示す。
元気食欲がなく、血液検査においてＦｅＬＶ検査キット（商品名：チェックマンＦｅＬＶ、共立製薬（株）製）で陽性、貧血を示すＰＣＶ値（ヘマトクリット値）の低下及びウイルス感染症を示すＷＢＣ値（総白血球数）の低下を確認した猫８匹を３群に分けて試験に用いた。まず、実施例１（４匹）は、酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤をそれぞれ１日当り４包及び２包投与した。また、比較例（各２匹）としては、それぞれ１日当り、酸性キシロオリゴ糖粉末剤４包（比較例１）またはハタケシメジエキス粉末剤２包（比較例２）を投与した。なお、各粉末剤の猫に対する嗜好性は良好であり、ペットフードの上に降り掛けることで容易に投与することが出来た。粉末剤の投与開始後４日目と１０日目に、獣医師により経過観察を行い、元気及び食欲等のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ：生活の質）に対する所見（「著明改善（劇的に改善）」、「改善（明らかに改善）」、「やや改善（何らかの改善）」、「不変」、「悪化」）をもとに猫白血病ウイルス感染症の改善状況を診断した（表１）。
【００２７】
【表１】
【００２８】
＜実施例２及び実施例３＞
実施例１の症例１及び２の２匹の猫については、粉末剤投与期間中（６０日間）、定期的に血液の生化学的検査を行った（表２及び表３）。ＰＣＶ値（ヘマトクリット値、実施例２）及びＷＢＣ値（総白血球数、実施例３）の増加は、それぞれ貧血及びウイルス感染症の改善を示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】
＜実施例４＞
また、実施例１の症例１及び２の２匹の猫においては、上記記載のＦｅＬＶ検査キットによるウイルス検査を粉末剤投与最終日（６０日目）に実施した結果、何れも陰性であった。
【００３２】
酸性キシロオリゴ糖粉末及びハタケシメジエキス粉末の併用により、猫白血病ウイルス感染症は数日で改善した。特に、実施例１の症例１及び症例２の猫はＰＣＶ値及びＷＢＣ値の改善だけでなく、ＦｅＬＶの陰転化まで確認された。なお、この２例は、猫用インターフェロン（商品名：インターキャット、東レ（株）製）の投与による治療では全くＱＯＬの改善が見られなかった症例であった。
【００３３】
次に、調製例３及び調製例４で得られた酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤を用いて行った猫白血病ウイルス感染症の予防試験の概要と結果を、実施例及び比較例に示す。
【００３４】
＜実施例５、比較例３及び比較例４＞
３匹の親猫から同時期に生まれた子猫計８匹をそれぞれの親猫と同居させ、３群で５ヶ月間、試験を行った（実施例５：子猫４匹、比較例３及び４：各子猫２匹）。実施例５は生後３日目からほぼ連日、一日当り酸性キシロオリゴ糖粉末剤及びハタケシメジエキス粉末剤各１包を水に溶いてスポイドで投与した。比較例（各子猫２匹）としては、それぞれ１日当り、酸性キシロオリゴ糖粉末剤１包（比較例３）またはハタケシメジエキス粉末剤１包（比較例４）を実施例５と同様に投与した。投与期間中、１ヶ月目と５ヶ月目にＦｅＬＶ検査キット（商品名：チェックマンＦｅＬＶ、共立製薬（株）製）でＦｅＬＶの感染状況を調べた。なお、親猫３匹は何れも１ヶ月目と５ヶ月目において、ＦｅＬＶ陽性であった。結果を表４に示す。
【００３５】
【表４】
【００３６】
酸性キシロオリゴ糖粉末及びハタケシメジエキス粉末の併用により、猫白血病ウイルス感染症は予防出来ることが分かった。しかし、酸性キシロオリゴ糖粉末またはハタケシメジエキス粉末単独では、予防効果は見られなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明で得られる酸性キシロオリゴ糖組成物及びハタケシメジエキスを含有した猫白血病ウイルス感染症改善剤または予防剤は、優れた薬理活性及び即効性または予防製を有しており、動物用の食品や医薬品として用いることが可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項２】
前記酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である前記請求項１に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項３】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記請求項１又は２に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項４】
ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である請求項１〜３のいずれか１項に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項５】
キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項６】
前記酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である前記請求項５に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項７】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記請求項５又は６に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項８】
ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である請求項５〜７のいずれか１項に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項１】
キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項２】
前記酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である前記請求項１に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項３】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記請求項１又は２に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項４】
ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である請求項１〜３のいずれか１項に記載の猫白血病ウイルス感染症改善剤。
【請求項５】
キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖及びハタケシメジエキスを有効成分として含有することを特徴とする猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項６】
前記酸性キシロオリゴ糖がキシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５.０である前記請求項５に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項７】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで、該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記請求項５又は６に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【請求項８】
ウロン酸が、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸である請求項５〜７のいずれか１項に記載の猫白血病ウイルス感染症予防剤。
【公開番号】特開２００８−１８４４３８（Ｐ２００８−１８４４３８Ａ）
【公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２０１８１（Ｐ２００７−２０１８１）
【出願日】平成１９年１月３０日（２００７．１．３０）
【出願人】（０００１２２２９８）王子製紙株式会社 (2,055)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年８月１４日（２００８．８．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１月３０日（２００７．１．３０）
【出願人】（０００１２２２９８）王子製紙株式会社 (2,055)
【Ｆターム（参考）】
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