抗体のヒト化
【課題】抗体の抗原に対する免疫特異性を保持したまま、抗体の免疫原性を弱めるための、抗体の再設計または改造方法を提供する。
【解決手段】フレームワーク領域のサブバンクから得られるフレームワーク領域にin frame融合した、ドナー抗体由来の相補性決定領域（CDR）を含んでなるコンビナトリアルライブラリーを合成することによって、抗原に免疫特異的な抗体を作製する方法。さらに、本方法によって作製された抗体。
【解決手段】フレームワーク領域のサブバンクから得られるフレームワーク領域にin frame融合した、ドナー抗体由来の相補性決定領域（CDR）を含んでなるコンビナトリアルライブラリーを合成することによって、抗原に免疫特異的な抗体を作製する方法。さらに、本方法によって作製された抗体。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖相補性決定領域（CDR）１をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、各重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項２】
ドナー軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、各軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項４】
ドナー抗体の重鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項５】
ドナー抗体の軽鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項３に記載の核酸配列。
【請求項６】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、各軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項７】
ドナー重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６に記載の核酸配列。
【請求項８】
ドナー抗体の軽鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項６に記載の核酸配列。
【請求項９】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の重鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項１０】
ドナー軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項９に記載の核酸。
【請求項１１】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項９に記載の核酸配列。
【請求項１２】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の軽鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項９に記載の核酸配列。
【請求項１３】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の軽鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項１４】
ドナー重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１３に記載の核酸。
【請求項１５】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項１３に記載の核酸配列。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の核酸配列を含むように遺伝子操作された細胞。
【請求項１７】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 重鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(c) 前記核酸配列を、ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を含有する細胞に導入すること、
(d) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項１８】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 軽鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(c) 前記核酸配列を、ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を含有する細胞に導入すること、
(d) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項１９】
(e) 前記抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体をスクリーニングすること、をさらに含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 軽鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) 重鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(c) ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(d) ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(e) 前記核酸配列を細胞に導入すること、
(f) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の方法により作製されたヒト化抗体。
【請求項２２】
請求項２１に記載のヒト化抗体および担体、希釈剤または賦形剤を含有する組成物。
【請求項２３】
ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む複数の核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記複数の核酸配列。
【請求項２４】
ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む複数の核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記複数の核酸配列。
【請求項１】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖相補性決定領域（CDR）１をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、各重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項２】
ドナー軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、各軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項４】
ドナー抗体の重鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項５】
ドナー抗体の軽鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項３に記載の核酸配列。
【請求項６】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、各軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項７】
ドナー重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６に記載の核酸配列。
【請求項８】
ドナー抗体の軽鎖可変領域に由来する１以上のCDRが、ドナー抗体の対応するCDRをコードする核酸配列に対して１以上の変異を含む、請求項６に記載の核酸配列。
【請求項９】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の重鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項１０】
ドナー軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項９に記載の核酸。
【請求項１１】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項９に記載の核酸配列。
【請求項１２】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の軽鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項９に記載の核酸配列。
【請求項１３】
ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、少なくとも１つのCDRはある抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体由来の軽鎖CDRのサブバンクから得られ、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記核酸配列。
【請求項１４】
ドナー重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１３に記載の核酸。
【請求項１５】
ヒト化重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列をさらに含み、前記ヒト化重鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、請求項１３に記載の核酸配列。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の核酸配列を含むように遺伝子操作された細胞。
【請求項１７】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 重鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(c) 前記核酸配列を、ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を含有する細胞に導入すること、
(d) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項１８】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 軽鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(c) 前記核酸配列を、ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を含有する細胞に導入すること、
(d) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項１９】
(e) 前記抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体をスクリーニングすること、をさらに含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
ある抗原と免疫特異的に結合するヒト化抗体を作製する方法であって、
(a) 軽鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(b) 重鎖フレームワーク領域のサブバンクを作製すること、
(c) ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(d) ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を合成すること、ただし、前記ヌクレオチド配列は、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されるものであり、その際、前記CDRは前記抗原と免疫特異的に結合するドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものであること、
(e) 前記核酸配列を細胞に導入すること、
(f) ヒト化重鎖可変領域とヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を発現させること、
を含んでなる上記方法。
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の方法により作製されたヒト化抗体。
【請求項２２】
請求項２１に記載のヒト化抗体および担体、希釈剤または賦形剤を含有する組成物。
【請求項２３】
ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む複数の核酸配列であって、前記ヒト化重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、重鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、重鎖CDR1をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、重鎖CDR2をコードする核酸配列、重鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、重鎖CDR3をコードする核酸配列、および重鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の重鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域はヒト重鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記複数の核酸配列。
【請求項２４】
ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む複数の核酸配列であって、前記ヒト化軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、軽鎖フレームワーク領域１をコードする核酸配列、軽鎖CDR1をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域２をコードする核酸配列、軽鎖CDR2をコードする核酸配列、軽鎖フレームワーク領域３をコードする核酸配列、軽鎖CDR3をコードする核酸配列、および軽鎖フレームワーク領域４をコードする核酸配列を一緒に融合することにより作製されたものであり、その際、前記CDRはドナー抗体の軽鎖可変領域に由来し、少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域はヒト軽鎖フレームワーク領域のサブバンクから得られるものである、上記複数の核酸配列。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１２−１１０３２５（Ｐ２０１２−１１０３２５Ａ）
【公開日】平成２４年６月１４日（２０１２．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２５５６７４（Ｐ２０１１−２５５６７４）
【出願日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【分割の表示】特願２００６−５２４０４６（Ｐ２００６−５２４０４６）の分割
【原出願日】平成１６年８月１８日（２００４．８．１８）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年６月１４日（２０１２．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１１月２４日（２０１１．１１．２４）
【分割の表示】特願２００６−５２４０４６（Ｐ２００６−５２４０４６）の分割
【原出願日】平成１６年８月１８日（２００４．８．１８）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
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