抗体ライブラリーの細胞提示
本発明は、細胞中で発現された場合、細胞膜上に提示される抗体または抗体フラグメントのライブラリーをコードするウイルスベクターに関する。本発明は、前記ウイルスベクター核酸を含む細胞、および所望の特性を有する抗体または抗体フラグメントについて前記ライブラリーをスクリーニングする方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表面上に抗体またはそのフラグメントを提示した細胞のライブラリーを作製する方法であって、
a. 細胞集団を、細胞膜の細胞外表面上に提示される組換え抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むベクターのライブラリーに感染させること、および
b. 細胞表面上での該抗体またはそのフラグメントの発現を可能にする条件下で、該細胞集団を培養すること、
を含む前記方法。
【請求項２】
前記抗体またはそのフラグメントが、細胞表面に対して該抗体を標的化するアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列が抗体の重鎖または軽鎖のC末端に融合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アミノ酸配列が、膜貫通ドメインまたはGPIアンカーシグナル配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ベクターが、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体またはそのフラグメントが、IgA、IgE、IgM、IgD、IgYおよびIgGからなる群より選択される免疫グロブリン型のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体またはそのフラグメントが、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体またはそのフラグメントがFc領域を含み、該Fc領域が天然のFc領域であるか、または少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入もしくはその組合せを含むFc領域である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体またはそのフラグメントが、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、または重鎖および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
所望の特性を有する抗体またはそのフラグメントを単離する方法であって、請求項１に記載の方法によって作製された細胞のライブラリーを選択にかけることによって、所望の特性を有する抗体またはそのフラグメントを発現する少なくとも1種の細胞を単離することを含む、前記方法。
【請求項１１】
単離された細胞からポリヌクレオチドを単離する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞のライブラリーを標識された試薬と共にインキュベートし、該標識された試薬の結合に基づいて、該細胞のライブラリーを選別することにより、選択を行う、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
標識された試薬が、抗原またはエフェクター分子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記所望の特性が、特定の抗原への結合である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記所望の特性が、エフェクター分子への結合である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
細胞表面上に抗体またはそのフラグメントを提示させる方法であって、
a. 該抗体の重鎖もしくは軽鎖のC末端に融合された、細胞表面に対して該抗体を標的化するアミノ酸配列を含む組換え抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むベクターに、細胞を感染させること；および
b. 細胞表面上での該抗体またはそのフラグメントの発現を可能にする条件下で、該細胞集団を培養すること、
を含む前記方法。
【請求項１７】
W277T、K246R/L251E/T260R、InR234/235、InV235/236、InR236/237、InR237/238、InV238/239、InN238/239、InL238/239、InE238/239、InG238/239、InS239/240、InG240/241、InE240/241、InG240/241/I198T、InL238/239/P238Q、InE238/239/V348A、InS239/240/V266A、InR237/238/G236Aからなる群より選択される、少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入またはその組合せを含む、エフェクター分子に対する親和性が低下した変異体Fc領域を含む抗体またはそのフラグメント。
【請求項１８】
エフェクター分子が、C1q、FcγRIIIAからなる群より選択される、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１９】
前記抗体が、低下したエフェクター機能を有する、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２０】
前記エフェクター機能が、ADCCである、請求項１９に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１】
細胞表面上に抗体またはそのフラグメントを提示した細胞のライブラリーを作製する方法であって、
a. 細胞集団を、細胞膜の細胞外表面上に提示される組換え抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むベクターのライブラリーに感染させること、および
b. 細胞表面上での該抗体またはそのフラグメントの発現を可能にする条件下で、該細胞集団を培養すること、
を含む前記方法。
【請求項２】
前記抗体またはそのフラグメントが、細胞表面に対して該抗体を標的化するアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列が抗体の重鎖または軽鎖のC末端に融合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アミノ酸配列が、膜貫通ドメインまたはGPIアンカーシグナル配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ベクターが、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体またはそのフラグメントが、IgA、IgE、IgM、IgD、IgYおよびIgGからなる群より選択される免疫グロブリン型のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体またはそのフラグメントが、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体またはそのフラグメントがFc領域を含み、該Fc領域が天然のFc領域であるか、または少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入もしくはその組合せを含むFc領域である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体またはそのフラグメントが、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、または重鎖および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
所望の特性を有する抗体またはそのフラグメントを単離する方法であって、請求項１に記載の方法によって作製された細胞のライブラリーを選択にかけることによって、所望の特性を有する抗体またはそのフラグメントを発現する少なくとも1種の細胞を単離することを含む、前記方法。
【請求項１１】
単離された細胞からポリヌクレオチドを単離する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞のライブラリーを標識された試薬と共にインキュベートし、該標識された試薬の結合に基づいて、該細胞のライブラリーを選別することにより、選択を行う、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
標識された試薬が、抗原またはエフェクター分子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記所望の特性が、特定の抗原への結合である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記所望の特性が、エフェクター分子への結合である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
細胞表面上に抗体またはそのフラグメントを提示させる方法であって、
a. 該抗体の重鎖もしくは軽鎖のC末端に融合された、細胞表面に対して該抗体を標的化するアミノ酸配列を含む組換え抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むベクターに、細胞を感染させること；および
b. 細胞表面上での該抗体またはそのフラグメントの発現を可能にする条件下で、該細胞集団を培養すること、
を含む前記方法。
【請求項１７】
W277T、K246R/L251E/T260R、InR234/235、InV235/236、InR236/237、InR237/238、InV238/239、InN238/239、InL238/239、InE238/239、InG238/239、InS239/240、InG240/241、InE240/241、InG240/241/I198T、InL238/239/P238Q、InE238/239/V348A、InS239/240/V266A、InR237/238/G236Aからなる群より選択される、少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入またはその組合せを含む、エフェクター分子に対する親和性が低下した変異体Fc領域を含む抗体またはそのフラグメント。
【請求項１８】
エフェクター分子が、C1q、FcγRIIIAからなる群より選択される、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１９】
前記抗体が、低下したエフェクター機能を有する、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２０】
前記エフェクター機能が、ADCCである、請求項１９に記載の抗体またはそのフラグメント。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２００９−５１１０６７（Ｐ２００９−５１１０６７Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３５７７０（Ｐ２００８−５３５７７０）
【出願日】平成１８年１０月１３日（２００６．１０．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４０３６６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４７５７８
【国際公開日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月１３日（２００６．１０．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４０３６６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４７５７８
【国際公開日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
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