抗体精製
【課題】抗体及び少なくとも１つのＨＣＰを含む混合物から、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）が減少した抗体調製物を作製するための方法を提供する。
【解決手段】（ａ）平衡化緩衝液中の第一のイオン交換樹脂に混合物を適用すること；（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを樹脂から洗浄すること；及び（ｃ）第一の溶出液を形成させるために、溶出緩衝液で樹脂から抗体を溶出すること；を含む方法。
【解決手段】（ａ）平衡化緩衝液中の第一のイオン交換樹脂に混合物を適用すること；（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを樹脂から洗浄すること；及び（ｃ）第一の溶出液を形成させるために、溶出緩衝液で樹脂から抗体を溶出すること；を含む方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体及び少なくとも１つの宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を含む混合物から、ＨＣＰが減少した抗体調製物を作製する方法であり、ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の第一のイオン交換樹脂に混合物を適用すること（樹脂１リットル当り抗体３０グラム超が適用される。）；
（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを樹脂から洗浄すること；及び
（ｃ）第一の溶出液を形成させるために、溶出緩衝液で樹脂から抗体を溶出すること；
を含む方法。
【請求項２】
樹脂１リットル当り抗体約３５から７０ｇが適用される、請求項１の方法。
【請求項３】
樹脂１リットル当り抗体約７０ｇが適用される、請求項１の方法。
【請求項４】
抗体及び少なくとも１つのＨＣＰを含む混合物が、混合物を第一のイオン交換樹脂に適用する前に、プロテインＡ捕捉に供されない、請求項１の方法。
【請求項５】
複数の洗浄工程が少なくとも第一の洗浄と第二の洗浄を含み、第一の洗浄から第二の洗浄へ、伝導率の増加が存在する、請求項１の方法。
【請求項６】
第一の洗浄が平衡化緩衝液を用いて行われ、並びに第二の洗浄が溶出緩衝液及び水の混合物を用いて行われる、請求項５の方法。
【請求項７】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項６の方法。
【請求項８】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４５％の溶出緩衝液及び約５５％の水を含む、請求項７の方法。
【請求項９】
溶出緩衝液が２０ｍＭのリン酸ナトリウム及び１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項８の方法。
【請求項１０】
ｐＨ７で実施される、請求項１の方法。
【請求項１１】
約ｐＨ５と約ｐＨ７の間のｐＨで実施される、請求項１の方法。
【請求項１２】
ｐＨ５で実施される、請求項１の方法。
【請求項１３】
第一のイオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂である、請求項１の方法。
【請求項１４】
陽イオン交換樹脂がカラム中に形成され、並びに抗体及び少なくとも１つのＨＣＰを含む混合物がカラムに適用される、請求項１３の方法。
【請求項１５】
陽イオン交換樹脂が、スルホナート基に付着された、メタクリラートをベースとした合成ポリマー性樹脂を含む、請求項１４の方法。
【請求項１６】
第一の溶出液をウイルス不活化工程に供することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
ウイルスの不活化がｐＨウイルス不活化によって達成され、ウイルス的に不活化された調製物を形成する、請求項１６の方法。
【請求項１８】
ウイルス的に不活化された調製物が第二のイオン交換樹脂に適用され、ウイルス的に不活化された調製物を第二のイオン交換樹脂に適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度が、第二のイオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
第二のイオン交換樹脂のｐＨが約ｐＨ７．７から約ｐＨ８．３の範囲であり、及びウイルス的に不活化された調製物のｐＨが約ｐＨ７．７から約ｐＨ８．３の範囲にあるように調整される、請求項１８の方法。
【請求項２０】
第二のイオン交換樹脂のｐＨが約ｐＨ８．０であり、及びウイルス的に不活化された調製物のｐＨが約ｐＨ８．０であるように調整される、請求項１９の方法。
【請求項２１】
第二のイオン交換樹脂の伝導度が約３．５ｍＳ／ｃｍから約５．２ｍＳ／ｃｍの範囲であり、ウイルス的に不活化された調製物の伝導度が約３．５ｍＳ／ｃｍから約５．２ｍＳ／ｃｍの範囲にあるように調整される、請求項１８の方法。
【請求項２２】
第二のイオン交換樹脂の伝導度が約５．０ｍＳ／ｃｍであり、及びウイルス的に不活化された調製物の伝導度が約５．０ｍＳ／ｃｍであるように調整される、請求項２１の方法。
【請求項２３】
第二のイオン交換樹脂が陰イオン交換樹脂である、請求項１８の方法。
【請求項２４】
陰イオン交換樹脂がＱセファロース樹脂である、請求項２３の方法。
【請求項２５】
第二のイオン交換樹脂がカラム中に形成され、及び第一の貫流が得られるように、ウイルス的に不活化された調製物がカラムに適用される、請求項１８の方法。
【請求項２６】
第二の溶出液が得られるように、第一の貫流が疎水性相互作用カラムに適用される、請求項２５の方法。
【請求項２７】
疎水性相互作用カラムがフェニルセファロースカラムである、請求項２６の方法。
【請求項２８】
疎水性相互作用カラムに適用される第一の貫流が、疎水性相互作用カラム材料１リットル当り抗体約２０から約４０ｇを含む、請求項２６の方法。
【請求項２９】
疎水性相互作用カラムに適用される第一の貫流が、疎水性相互作用カラム材料１リットル当り抗体約３０から約３６ｇを含む、請求項２８の方法。
【請求項３０】
第二の溶出液が産物ピーク分画に供されない、請求項２６の方法。
【請求項３１】
ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の陽イオン交換樹脂に混合物を適用すること（陽イオン交換樹脂への適用前に、混合物はプロテインＡ捕捉に供せされておらず、及び樹脂１リットル当り抗体３０グラム超が適用される。）；
（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを陽イオン交換樹脂から洗浄すること；
（ｃ）溶出緩衝液で陽イオン交換樹脂から抗体を溶出して、第一の溶出液を形成させること；
（ｄ）第一の溶出液をウイルス不活化工程に供すること；
（ｅ）ウイルス的に不活化された調製物を陰イオン交換樹脂に適用して、第一の貫流を得ること；並びに
（ｆ）第二の溶出液が得られるように、第一の貫流を疎水性相互作用カラムに適用すること；
を含む、請求項１の方法。
【請求項３２】
陽イオン交換樹脂がｐＨ７であり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５ｇが適用される、請求項３１の方法。
【請求項３３】
陽イオン交換樹脂がｐＨ５であり、及び樹脂１リットル当り抗体約７０ｇが適用される、請求項３１の方法。
【請求項３４】
複数の洗浄工程が、平衡化緩衝液を用いる第一の洗浄、並びに溶出緩衝液及び水の混合物を用いる第二の洗浄で樹脂を洗浄することを含む、請求項３１の方法。
【請求項３５】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項３４の方法。
【請求項３６】
陰イオン交換樹脂へウイルス的に不活化された調製物を適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度が、陰イオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される、請求項３１の方法。
【請求項３７】
第一の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、混合物より約９０から約１００倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項３８】
第一の貫流が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の溶出液より約８４０から約８５０倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項３９】
第二の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の貫流より約３から約５倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項４０】
ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の陽イオン交換樹脂に混合物を適用すること（陽イオン交換樹脂はｐＨ７であり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５グラムが適用され、又は陽イオン交換樹脂はｐＨ５からｐＨ７の範囲のｐＨであり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５から約７０ｇが適用され、又は陽イオン交換樹脂はｐＨ５であり、及び樹脂１リットル当り抗体約７０グラムが適用される。）；
（ｂ）平衡化緩衝液を用いる第一の洗浄並びに溶出緩衝液及び水の混合物を用いる第二の洗浄を含む洗浄工程で、陽イオン交換樹脂からＨＣＰを洗浄すること；
（ｃ）溶出緩衝液で陽イオン交換樹脂から抗体を溶出して第一の溶出液を形成させること；
（ｄ）第一の溶出液をウイルス不活化工程に供すること（ウイルスの不活化はｐＨウイルス不活化によって達成され、ウイルス的に不活化された調製物を形成する。）；
（ｅ）ウイルス的に不活化された調製物を陰イオンイオン交換樹脂に適用すること（第一の貫流が得られるように、ウイルス的に不活化された調製物を陰イオン交換樹脂に適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度は陰イオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される。）；
（ｆ）第二の溶出液が得られるように、第一の貫流を疎水性相互作用カラムに適用すること；
を含む、請求項１の方法。
【請求項４１】
陽イオン交換樹脂に適用する前に、抗体混合物が、プロテインＡ捕捉に供されない、請求項４０の方法。
【請求項４２】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項４０の方法。
【請求項４３】
第一の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、混合物より約９０から約１００倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４４】
第一の貫流が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の溶出液より約８４０から約８５０倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４５】
第二の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の貫流より約３から約５倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４６】
プロカテプシンＬが減少した抗体調製物が得られるように、ＨＣＰがプロカテプシンＬを含む、請求項１から４５の何れか一項の方法。
【請求項４７】
第一の溶出液が、カテプシンＬ速度論(ｋｉｎｅｔｉｃ)アッセイによって測定された場合に、約２５から約６０ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項４８】
カテプシンＬ速度論アッセイによって測定された場合に、第一の貫流が、約０．４から約４ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項４９】
カテプシンＬ速度論アッセイによって測定された場合に、第二の溶出液が、約０．５から約１．５ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項５０】
プロカテプシンＬのレベルが再現可能に低い、請求項４６から４９の何れか一項の方法。
【請求項５１】
抗体が抗腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）抗体又はその抗原結合部分である、請求項１から４５の何れか一項の方法。
【請求項５２】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がヒト化抗体、キメラ抗体又は多価抗体である、請求項５１の方法。
【請求項５３】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がインフリキシマブ又はゴリムマブである、請求項５１の方法。
【請求項５４】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がヒト抗体である、請求項５１の方法。
【請求項５５】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分が、１×１０−８Ｍ又はそれ以下のＫｄ及び１×１０−３ｓ−１又はそれ以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し（何れも、表面プラズモン共鳴によって測定される。）、並びに、標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて、１×１０−７Ｍ又はそれ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５６】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分が、以下の特性
ａ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、１×１０−３ｓ−１又はそれ以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離する；
ｂ）配列番号３のアミノ酸配列又は位置１、４、５、７若しくは８において、単一のアラニン置換によって配列番号３から修飾されたアミノ酸配列又は位置１、３、４、６、７、８及び／又は９における１個から５個の保存的アミノ酸置換によって配列番号３から修飾されたアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有する；
ｃ）配列番号４のアミノ酸配列又は位置２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１において、単一のアラニン置換によって配列番号４から修飾されたアミノ酸配列又は位置２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２における１個から５個の保存的アミノ酸置換によって配列番号４から修飾されたアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインを有する、
を有する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５７】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分が、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５８】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分がアダリムマブである、請求項５４の方法。
【請求項５９】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合にＨＣＰが実質的に存在しない抗体調製物。
【請求項６０】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、ＨＣＰが減少した抗体調製物及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６１】
ＨＣＰが減少した抗体（ＨＣＰのレベルは、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体の１ｍｇ当りＨＣＰの約７０ｎｇ以下を含む。）及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６２】
ＨＣＰのレベルが、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体１ｍｇ当りＨＣＰ約１３ｎｇ以下を含む、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
ＨＣＰのレベルが、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体の１ｍｇ当りＨＣＰの約５ｎｇ以下を含む、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
ＨＣＰＥＬＩＳＡアッセイによって測定された場合にＨＣＰの検出可能なレベルを有さない、抗体を含む組成物。
【請求項６５】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、プロカテプシンＬが実質的に存在しない抗体調製物。
【請求項６６】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、プロカテプシンＬが減少した抗体調製物及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６７】
抗体プロカテプシン−Ｌが減少した抗体及び医薬として許容される担体を含み、プロカテプシン−Ｌのレベルが約３．０ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体のカテプシン活性以下である、医薬組成物。
【請求項６８】
抗体が抗腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）抗体又はその抗原結合部分である、請求項５９から６７の何れか一項に記載の組成物又は調製物。
【請求項６９】
請求項６８に記載の組成物又は調製物をヒト対象に投与することを含む、ＴＮＦα活性が有害である疾患を治療する方法。
【請求項７０】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約７０ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７１】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約１３ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７２】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約５ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７３】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤が、約３．０ＲＦＵ／秒／ｍｇアダリムマブのカテプシンＬ活性によって示されるレベルを上回らないプロカテプシンＬのレベルを含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項１】
抗体及び少なくとも１つの宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を含む混合物から、ＨＣＰが減少した抗体調製物を作製する方法であり、ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の第一のイオン交換樹脂に混合物を適用すること（樹脂１リットル当り抗体３０グラム超が適用される。）；
（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを樹脂から洗浄すること；及び
（ｃ）第一の溶出液を形成させるために、溶出緩衝液で樹脂から抗体を溶出すること；
を含む方法。
【請求項２】
樹脂１リットル当り抗体約３５から７０ｇが適用される、請求項１の方法。
【請求項３】
樹脂１リットル当り抗体約７０ｇが適用される、請求項１の方法。
【請求項４】
抗体及び少なくとも１つのＨＣＰを含む混合物が、混合物を第一のイオン交換樹脂に適用する前に、プロテインＡ捕捉に供されない、請求項１の方法。
【請求項５】
複数の洗浄工程が少なくとも第一の洗浄と第二の洗浄を含み、第一の洗浄から第二の洗浄へ、伝導率の増加が存在する、請求項１の方法。
【請求項６】
第一の洗浄が平衡化緩衝液を用いて行われ、並びに第二の洗浄が溶出緩衝液及び水の混合物を用いて行われる、請求項５の方法。
【請求項７】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項６の方法。
【請求項８】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４５％の溶出緩衝液及び約５５％の水を含む、請求項７の方法。
【請求項９】
溶出緩衝液が２０ｍＭのリン酸ナトリウム及び１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項８の方法。
【請求項１０】
ｐＨ７で実施される、請求項１の方法。
【請求項１１】
約ｐＨ５と約ｐＨ７の間のｐＨで実施される、請求項１の方法。
【請求項１２】
ｐＨ５で実施される、請求項１の方法。
【請求項１３】
第一のイオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂である、請求項１の方法。
【請求項１４】
陽イオン交換樹脂がカラム中に形成され、並びに抗体及び少なくとも１つのＨＣＰを含む混合物がカラムに適用される、請求項１３の方法。
【請求項１５】
陽イオン交換樹脂が、スルホナート基に付着された、メタクリラートをベースとした合成ポリマー性樹脂を含む、請求項１４の方法。
【請求項１６】
第一の溶出液をウイルス不活化工程に供することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
ウイルスの不活化がｐＨウイルス不活化によって達成され、ウイルス的に不活化された調製物を形成する、請求項１６の方法。
【請求項１８】
ウイルス的に不活化された調製物が第二のイオン交換樹脂に適用され、ウイルス的に不活化された調製物を第二のイオン交換樹脂に適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度が、第二のイオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
第二のイオン交換樹脂のｐＨが約ｐＨ７．７から約ｐＨ８．３の範囲であり、及びウイルス的に不活化された調製物のｐＨが約ｐＨ７．７から約ｐＨ８．３の範囲にあるように調整される、請求項１８の方法。
【請求項２０】
第二のイオン交換樹脂のｐＨが約ｐＨ８．０であり、及びウイルス的に不活化された調製物のｐＨが約ｐＨ８．０であるように調整される、請求項１９の方法。
【請求項２１】
第二のイオン交換樹脂の伝導度が約３．５ｍＳ／ｃｍから約５．２ｍＳ／ｃｍの範囲であり、ウイルス的に不活化された調製物の伝導度が約３．５ｍＳ／ｃｍから約５．２ｍＳ／ｃｍの範囲にあるように調整される、請求項１８の方法。
【請求項２２】
第二のイオン交換樹脂の伝導度が約５．０ｍＳ／ｃｍであり、及びウイルス的に不活化された調製物の伝導度が約５．０ｍＳ／ｃｍであるように調整される、請求項２１の方法。
【請求項２３】
第二のイオン交換樹脂が陰イオン交換樹脂である、請求項１８の方法。
【請求項２４】
陰イオン交換樹脂がＱセファロース樹脂である、請求項２３の方法。
【請求項２５】
第二のイオン交換樹脂がカラム中に形成され、及び第一の貫流が得られるように、ウイルス的に不活化された調製物がカラムに適用される、請求項１８の方法。
【請求項２６】
第二の溶出液が得られるように、第一の貫流が疎水性相互作用カラムに適用される、請求項２５の方法。
【請求項２７】
疎水性相互作用カラムがフェニルセファロースカラムである、請求項２６の方法。
【請求項２８】
疎水性相互作用カラムに適用される第一の貫流が、疎水性相互作用カラム材料１リットル当り抗体約２０から約４０ｇを含む、請求項２６の方法。
【請求項２９】
疎水性相互作用カラムに適用される第一の貫流が、疎水性相互作用カラム材料１リットル当り抗体約３０から約３６ｇを含む、請求項２８の方法。
【請求項３０】
第二の溶出液が産物ピーク分画に供されない、請求項２６の方法。
【請求項３１】
ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の陽イオン交換樹脂に混合物を適用すること（陽イオン交換樹脂への適用前に、混合物はプロテインＡ捕捉に供せされておらず、及び樹脂１リットル当り抗体３０グラム超が適用される。）；
（ｂ）複数の洗浄工程でＨＣＰを陽イオン交換樹脂から洗浄すること；
（ｃ）溶出緩衝液で陽イオン交換樹脂から抗体を溶出して、第一の溶出液を形成させること；
（ｄ）第一の溶出液をウイルス不活化工程に供すること；
（ｅ）ウイルス的に不活化された調製物を陰イオン交換樹脂に適用して、第一の貫流を得ること；並びに
（ｆ）第二の溶出液が得られるように、第一の貫流を疎水性相互作用カラムに適用すること；
を含む、請求項１の方法。
【請求項３２】
陽イオン交換樹脂がｐＨ７であり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５ｇが適用される、請求項３１の方法。
【請求項３３】
陽イオン交換樹脂がｐＨ５であり、及び樹脂１リットル当り抗体約７０ｇが適用される、請求項３１の方法。
【請求項３４】
複数の洗浄工程が、平衡化緩衝液を用いる第一の洗浄、並びに溶出緩衝液及び水の混合物を用いる第二の洗浄で樹脂を洗浄することを含む、請求項３１の方法。
【請求項３５】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項３４の方法。
【請求項３６】
陰イオン交換樹脂へウイルス的に不活化された調製物を適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度が、陰イオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される、請求項３１の方法。
【請求項３７】
第一の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、混合物より約９０から約１００倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項３８】
第一の貫流が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の溶出液より約８４０から約８５０倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項３９】
第二の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の貫流より約３から約５倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項３１の方法。
【請求項４０】
ＨＣＰが減少した抗体調製物が得られるように、
（ａ）平衡化緩衝液中の陽イオン交換樹脂に混合物を適用すること（陽イオン交換樹脂はｐＨ７であり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５グラムが適用され、又は陽イオン交換樹脂はｐＨ５からｐＨ７の範囲のｐＨであり、及び樹脂１リットル当り抗体約３５から約７０ｇが適用され、又は陽イオン交換樹脂はｐＨ５であり、及び樹脂１リットル当り抗体約７０グラムが適用される。）；
（ｂ）平衡化緩衝液を用いる第一の洗浄並びに溶出緩衝液及び水の混合物を用いる第二の洗浄を含む洗浄工程で、陽イオン交換樹脂からＨＣＰを洗浄すること；
（ｃ）溶出緩衝液で陽イオン交換樹脂から抗体を溶出して第一の溶出液を形成させること；
（ｄ）第一の溶出液をウイルス不活化工程に供すること（ウイルスの不活化はｐＨウイルス不活化によって達成され、ウイルス的に不活化された調製物を形成する。）；
（ｅ）ウイルス的に不活化された調製物を陰イオンイオン交換樹脂に適用すること（第一の貫流が得られるように、ウイルス的に不活化された調製物を陰イオン交換樹脂に適用する前に、ウイルス的に不活化された調製物のｐＨ及び伝導度は陰イオン交換樹脂のｐＨ及び伝導度と実質的に同様であるように調整される。）；
（ｆ）第二の溶出液が得られるように、第一の貫流を疎水性相互作用カラムに適用すること；
を含む、請求項１の方法。
【請求項４１】
陽イオン交換樹脂に適用する前に、抗体混合物が、プロテインＡ捕捉に供されない、請求項４０の方法。
【請求項４２】
溶出緩衝液及び水の混合物が約４０から５０％の溶出緩衝液及び約５０から６０％の水を含む、請求項４０の方法。
【請求項４３】
第一の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、混合物より約９０から約１００倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４４】
第一の貫流が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の溶出液より約８４０から約８５０倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４５】
第二の溶出液が、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、第一の貫流より約３から約５倍の範囲少ないＨＣＰを含む、請求項４０の方法。
【請求項４６】
プロカテプシンＬが減少した抗体調製物が得られるように、ＨＣＰがプロカテプシンＬを含む、請求項１から４５の何れか一項の方法。
【請求項４７】
第一の溶出液が、カテプシンＬ速度論(ｋｉｎｅｔｉｃ)アッセイによって測定された場合に、約２５から約６０ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項４８】
カテプシンＬ速度論アッセイによって測定された場合に、第一の貫流が、約０．４から約４ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項４９】
カテプシンＬ速度論アッセイによって測定された場合に、第二の溶出液が、約０．５から約１．５ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体の範囲のカテプシンＬ活性を含む、請求項４６の方法。
【請求項５０】
プロカテプシンＬのレベルが再現可能に低い、請求項４６から４９の何れか一項の方法。
【請求項５１】
抗体が抗腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）抗体又はその抗原結合部分である、請求項１から４５の何れか一項の方法。
【請求項５２】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がヒト化抗体、キメラ抗体又は多価抗体である、請求項５１の方法。
【請求項５３】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がインフリキシマブ又はゴリムマブである、請求項５１の方法。
【請求項５４】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分がヒト抗体である、請求項５１の方法。
【請求項５５】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分が、１×１０−８Ｍ又はそれ以下のＫｄ及び１×１０−３ｓ−１又はそれ以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し（何れも、表面プラズモン共鳴によって測定される。）、並びに、標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて、１×１０−７Ｍ又はそれ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５６】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗体結合部分が、以下の特性
ａ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、１×１０−３ｓ−１又はそれ以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離する；
ｂ）配列番号３のアミノ酸配列又は位置１、４、５、７若しくは８において、単一のアラニン置換によって配列番号３から修飾されたアミノ酸配列又は位置１、３、４、６、７、８及び／又は９における１個から５個の保存的アミノ酸置換によって配列番号３から修飾されたアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有する；
ｃ）配列番号４のアミノ酸配列又は位置２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１において、単一のアラニン置換によって配列番号４から修飾されたアミノ酸配列又は位置２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２における１個から５個の保存的アミノ酸置換によって配列番号４から修飾されたアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインを有する、
を有する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５７】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分が、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する単離されたヒト抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５８】
抗ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分がアダリムマブである、請求項５４の方法。
【請求項５９】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合にＨＣＰが実質的に存在しない抗体調製物。
【請求項６０】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、ＨＣＰが減少した抗体調製物及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６１】
ＨＣＰが減少した抗体（ＨＣＰのレベルは、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体の１ｍｇ当りＨＣＰの約７０ｎｇ以下を含む。）及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６２】
ＨＣＰのレベルが、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体１ｍｇ当りＨＣＰ約１３ｎｇ以下を含む、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
ＨＣＰのレベルが、ＨＣＰＥＬＩＳＡによって測定された場合に、抗体の１ｍｇ当りＨＣＰの約５ｎｇ以下を含む、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
ＨＣＰＥＬＩＳＡアッセイによって測定された場合にＨＣＰの検出可能なレベルを有さない、抗体を含む組成物。
【請求項６５】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、プロカテプシンＬが実質的に存在しない抗体調製物。
【請求項６６】
請求項１から４５の何れか一項の方法を用いて作製された、プロカテプシンＬが減少した抗体調製物及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６７】
抗体プロカテプシン−Ｌが減少した抗体及び医薬として許容される担体を含み、プロカテプシン−Ｌのレベルが約３．０ＲＦＵ／秒／ｍｇ抗体のカテプシン活性以下である、医薬組成物。
【請求項６８】
抗体が抗腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）抗体又はその抗原結合部分である、請求項５９から６７の何れか一項に記載の組成物又は調製物。
【請求項６９】
請求項６８に記載の組成物又は調製物をヒト対象に投与することを含む、ＴＮＦα活性が有害である疾患を治療する方法。
【請求項７０】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約７０ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７１】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約１３ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７２】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤がアダリムマブの１ｍｇ当りＨＣＰの約５ｎｇ以下を含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【請求項７３】
包装材料と、アダリムマブと、及びアダリムマブ製剤が、約３．０ＲＦＵ／秒／ｍｇアダリムマブのカテプシンＬ活性によって示されるレベルを上回らないプロカテプシンＬのレベルを含むことを示す、包装材料内に含有されるラベル又は添付文書とを含む製品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１３−７９２４４（Ｐ２０１３−７９２４４Ａ）
【公開日】平成２５年５月２日（２０１３．５．２）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２５５４７４（Ｐ２０１２−２５５４７４）
【出願日】平成２４年１１月２１日（２０１２．１１．２１）
【分割の表示】特願２００９−５０４２７２（Ｐ２００９−５０４２７２）の分割
【原出願日】平成１９年４月４日（２００７．４．４）
【出願人】（５０３４４８５７２）アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド (30)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年５月２日（２０１３．５．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２５５４７４（Ｐ２０１２−２５５４７４）
【出願日】平成２４年１１月２１日（２０１２．１１．２１）
【分割の表示】特願２００９−５０４２７２（Ｐ２００９−５０４２７２）の分割
【原出願日】平成１９年４月４日（２００７．４．４）
【出願人】（５０３４４８５７２）アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド (30)
【Ｆターム（参考）】
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