抗体組成物を生産する細胞
【課題】種々の疾患に有用な抗体依存性細胞障害活性の高い、抗体、抗体の断片、抗体のFc領域を有する融合タンパク質等の抗体組成物の製造に用いる細胞、該細胞を用いた抗体組成物の製造方法、抗体組成物、およびそれらの用途を提供する。
【解決手段】GDP−マンノース4,6−デヒドラターゼ、GDP−ケト−6−デオキシマンノース3,5−エピメラーゼ,4−レダクターゼ、GDP−ベータ−L−フコースピロフォスフォリラーゼから選ばれる細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に関与する酵素の活性が、遺伝子工学的手法により低下または欠失した細胞。
【解決手段】GDP−マンノース4,6−デヒドラターゼ、GDP−ケト−6−デオキシマンノース3,5−エピメラーゼ,4−レダクターゼ、GDP−ベータ−L−フコースピロフォスフォリラーゼから選ばれる細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に関与する酵素の活性が、遺伝子工学的手法により低下または欠失した細胞。
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【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞内糖ヌクレオチドGDP-フコースの合成に関与する酵素の活性またはN-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素の活性が遺伝子工学的な手法により、親株の酵素活性よりも低下または欠失した細胞。
【請求項2】
細胞が、動物細胞である、請求項1記載の細胞。
【請求項3】
細胞内糖ヌクレオチドGDP-フコースの合成に関与する酵素が、以下の(a)、(b) 及び (c)からなる群から選ばれる酵素である、請求項2記載の細胞。
(a)GDP−マンノース 4,6−デヒドラターゼ(GDP−mannose 4,6−dehydratase、GMD);
(b)GDP−ケト−6−デオキシマンノース 3,5−エピメラーゼ,4−レダクターゼ(GDP−keto−6−deoxymannose 3,5−epimerase, 4−reductase、Fx);
(c) GDP−ベータ−L−フコース ピロフォスフォリラーゼ(GDP−beta−L−fucose pyrophosphorylase、GFPP)。
【請求項4】
GMDが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号65で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号65で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGMD活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項5】
GMDが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号71で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号71で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつGMD活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号71で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつGMD活性を有する蛋白質。
【請求項6】
Fxが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号48で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号48で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつFxを有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項7】
Fxが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号72で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;(b) 配列番号72で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつFx活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号72で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつFx活性を有する蛋白質。
【請求項8】
GFPPが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号51で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号51で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGFPP活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項9】
GFPPが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号73で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号73で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつGFPP活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号73で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつGFPP活性を有する蛋白質。
【請求項10】
N-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα-1,6-フコシルトランスフェラーゼである、請求項1に記載の細胞。
【請求項11】
α-1,6-フコシルトランスフェラーゼが、以下の (a)、(b)、(c)及び(d)からなる群から選ばれるDNAがコードする蛋白質である、請求項10に記載の細胞。
(a) 配列番号1で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号2で表される塩基配列からなるDNA;
(c) 配列番号1で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA;
(d) 配列番号2で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項12】
α-1,6-フコシルトランスフェラーゼが、以下の (a)、(b)、(c)、(d)、(e)及び (f) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項10に記載の細胞。
(a) 配列番号23で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号24で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(c) 配列番号23で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(d) 配列番号24で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿
入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(e) 配列番号23で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(f) 配列番号24で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項13】
遺伝子工学的な手法が、以下の (a)、(b)、(c) 及び (d) からなる群から選ばれる手法である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の細胞。
(a) 酵素の遺伝子を標的とした遺伝子破壊の手法;
(b) 酵素の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法;
(c) 酵素についての突然変異を導入する手法;
(d) 酵素の遺伝子の転写又は翻訳を抑制する手法。
【請求項14】
細胞が、少なくともN-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性である、請求項1〜13のいずれか1項に記載の細胞。
【請求項15】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の細胞が、下記の (a)〜(i) からなる群から選ばれる細胞。
(a) チャイニーズハムスター卵巣組織由来CHO細胞;
(b) ラットミエローマ細胞株YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20細胞;
(c) マウスミエローマ細胞株NS0細胞;
(d) マウスミエローマ細胞株SP2/0-Ag14細胞;
(e) シリアンハムスター腎臓組織由来BHK細胞;
(f) 抗体を産生するハイブリドーマ細胞;
(g) ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞;
(h) 非ヒト胚性幹細胞;
(i) 非ヒト受精卵細胞。
【請求項16】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の細胞に、抗体分子をコードする遺伝子を導入した細胞。
【請求項17】
抗体分子のクラスがIgGである、請求項16記載の細胞。
【請求項18】
請求項16または17に記載の細胞を培地に培養し、培養物中に抗体組成物を生成蓄積させ、該培養物から抗体組成物を採取する工程を含む、抗体組成物の製造方法。
【請求項19】
親株から得られる抗体組成物よりも、抗体依存性細胞障害活性が高い抗体組成物を生産する、請求項18に記載の方法。
【請求項20】
請求項18または19に記載の方法を用いて製造される、抗体組成物。
【請求項1】
細胞内糖ヌクレオチドGDP-フコースの合成に関与する酵素の活性またはN-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素の活性が遺伝子工学的な手法により、親株の酵素活性よりも低下または欠失した細胞。
【請求項2】
細胞が、動物細胞である、請求項1記載の細胞。
【請求項3】
細胞内糖ヌクレオチドGDP-フコースの合成に関与する酵素が、以下の(a)、(b) 及び (c)からなる群から選ばれる酵素である、請求項2記載の細胞。
(a)GDP−マンノース 4,6−デヒドラターゼ(GDP−mannose 4,6−dehydratase、GMD);
(b)GDP−ケト−6−デオキシマンノース 3,5−エピメラーゼ,4−レダクターゼ(GDP−keto−6−deoxymannose 3,5−epimerase, 4−reductase、Fx);
(c) GDP−ベータ−L−フコース ピロフォスフォリラーゼ(GDP−beta−L−fucose pyrophosphorylase、GFPP)。
【請求項4】
GMDが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号65で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号65で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGMD活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項5】
GMDが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号71で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号71で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつGMD活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号71で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつGMD活性を有する蛋白質。
【請求項6】
Fxが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号48で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号48で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつFxを有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項7】
Fxが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号72で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;(b) 配列番号72で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつFx活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号72で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつFx活性を有する蛋白質。
【請求項8】
GFPPが、以下の (a) または (b) であるDNAがコードする蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号51で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号51で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGFPP活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項9】
GFPPが、以下の (a)、(b) 及び (c) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項3に記載の細胞。
(a) 配列番号73で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号73で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつGFPP活性を有する蛋白質;
(c) 配列番号73で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつGFPP活性を有する蛋白質。
【請求項10】
N-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα-1,6-フコシルトランスフェラーゼである、請求項1に記載の細胞。
【請求項11】
α-1,6-フコシルトランスフェラーゼが、以下の (a)、(b)、(c)及び(d)からなる群から選ばれるDNAがコードする蛋白質である、請求項10に記載の細胞。
(a) 配列番号1で表される塩基配列からなるDNA;
(b) 配列番号2で表される塩基配列からなるDNA;
(c) 配列番号1で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA;
(d) 配列番号2で表される塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA。
【請求項12】
α-1,6-フコシルトランスフェラーゼが、以下の (a)、(b)、(c)、(d)、(e)及び (f) からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項10に記載の細胞。
(a) 配列番号23で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(b) 配列番号24で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質;
(c) 配列番号23で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(d) 配列番号24で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換、挿
入および/または付加されたアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(e) 配列番号23で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質;
(f) 配列番号24で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項13】
遺伝子工学的な手法が、以下の (a)、(b)、(c) 及び (d) からなる群から選ばれる手法である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の細胞。
(a) 酵素の遺伝子を標的とした遺伝子破壊の手法;
(b) 酵素の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法;
(c) 酵素についての突然変異を導入する手法;
(d) 酵素の遺伝子の転写又は翻訳を抑制する手法。
【請求項14】
細胞が、少なくともN-グリコシド結合糖鎖還元末端のN-アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性である、請求項1〜13のいずれか1項に記載の細胞。
【請求項15】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の細胞が、下記の (a)〜(i) からなる群から選ばれる細胞。
(a) チャイニーズハムスター卵巣組織由来CHO細胞;
(b) ラットミエローマ細胞株YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20細胞;
(c) マウスミエローマ細胞株NS0細胞;
(d) マウスミエローマ細胞株SP2/0-Ag14細胞;
(e) シリアンハムスター腎臓組織由来BHK細胞;
(f) 抗体を産生するハイブリドーマ細胞;
(g) ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞;
(h) 非ヒト胚性幹細胞;
(i) 非ヒト受精卵細胞。
【請求項16】
請求項1〜15のいずれか1項に記載の細胞に、抗体分子をコードする遺伝子を導入した細胞。
【請求項17】
抗体分子のクラスがIgGである、請求項16記載の細胞。
【請求項18】
請求項16または17に記載の細胞を培地に培養し、培養物中に抗体組成物を生成蓄積させ、該培養物から抗体組成物を採取する工程を含む、抗体組成物の製造方法。
【請求項19】
親株から得られる抗体組成物よりも、抗体依存性細胞障害活性が高い抗体組成物を生産する、請求項18に記載の方法。
【請求項20】
請求項18または19に記載の方法を用いて製造される、抗体組成物。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【図47】
【図48】
【図49】
【図50】
【図51】
【図52】
【図53】
【図54】
【図55】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【図47】
【図48】
【図49】
【図50】
【図51】
【図52】
【図53】
【図54】
【図55】
【公開番号】特開2009−142288(P2009−142288A)
【公開日】平成21年7月2日(2009.7.2)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2009−27509(P2009−27509)
【出願日】平成21年2月9日(2009.2.9)
【分割の表示】特願2002−534508(P2002−534508)の分割
【原出願日】平成13年10月5日(2001.10.5)
【出願人】(000001029)協和発酵キリン株式会社 (276)
【Fターム(参考)】
【公開日】平成21年7月2日(2009.7.2)
【国際特許分類】
【出願日】平成21年2月9日(2009.2.9)
【分割の表示】特願2002−534508(P2002−534508)の分割
【原出願日】平成13年10月5日(2001.10.5)
【出願人】(000001029)協和発酵キリン株式会社 (276)
【Fターム(参考)】
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