抗炎症用組成物及びその製造方法
【課題】安全、安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な炎症抑制作用を有する素材の提供。
【解決手段】青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物。
【解決手段】青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症用組成物、その製造方法、ならびに当該組成物を含有する医薬、化粧品、飲食品及び飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗炎症剤は、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、並びに花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の炎症症状の治療に有用である。医薬品としての抗炎症剤には、これまでステロイド性抗炎症薬、非ステロイド性抗炎症薬及び免疫抑制剤等が知られている。しかし、いずれも強い副作用があるため、医師の指導や管理の下での慎重な投与を要するという問題がある。
【０００３】
一方、これらの医薬品に代えて、抗炎症作用を示すいわゆる健康食品、例えば、保健機能食品等を摂取することによって炎症性疾患や炎症症状を改善しようとする試みも行われている。例えば、甜茶、グルコサミン、コンドロイチン、アスタキサンチン、カテキン等又はそれを添加した食品が挙げられる。しかし、これらの健康食品は、医薬品に比べて副作用は少ないものの、炎症の改善効果も弱いため十分な抗炎症効果があるとは言い難かった。
【０００４】
したがって、日常的に服用が可能で、しかも効果的に炎症性疾患や炎症症状を緩和できる抗炎症剤の開発が望まれている。
【０００５】
大豆は、豆腐、醤油、納豆等の原料としてよく知られており、大豆種子から機能性成分を得る試みが盛んに行われている。例えば、特許文献１には、スタキオースを有効成分とするアトピー性皮膚炎モデル動物の炎症症状を改善する抗アレルギー性組成物が開示されており、スタキオースは大豆種子から抽出できることが記載されている。しかし、大豆種子に含まれるスタキオースは極めて量が少なく、通常の抽出操作を行っただけでは十分な量を得ることができない。それ故、効果の認められる９８％以上の濃度に濃縮するには、クロマトグラフィー等の複雑な精製工程を行う必要があり、その結果、コストがかかり過ぎるという問題があった。また、スタキオースは難消化性であり、高濃度で摂取すると下痢等を発症する恐れがあるという問題もあった。
【０００６】
大豆は、その成熟種子の色から黄色の普通大豆、種子が緑色の青大豆、種子が黒色の黒大豆等に分類される。このうち、青大豆種子の生理活性効果については、特許文献２に、青大豆種子の溶媒抽出物はＩｇＥ低下作用や、Ｔｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１有意に改善する作用を有し、抗アレルギー剤として使用できることが記載されている。
一方、青大豆の抗炎症作用はこれまで知られていないのが実状であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開2003-321372号公報
【特許文献２】特開2010-53125号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、斯かる従来の実状に鑑み、安全、安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な炎症抑制作用を有し、種々の炎症性疾患、炎症症状の予防及び／又は改善に有効な天然由来の素材を開発し、提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、これを極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物が、優れた抗炎症作用を有することを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物を提供することにより、上記課題を解決したものである。
また本発明は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することを特徴とする、抗炎症用組成物の製造方法を提供することにより、上記課題を解決したものである。
さらに本発明は、上記抽出物を含有する医薬、化粧品、飲食品、及び飼料を提供することにより、上記課題を解決したものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、安全・安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な抗炎症作用を有し、種々の炎症性疾患、炎症症状の予防及び／又は改善に有効な抗炎症用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書において「青大豆」とは、完熟状態の種子において種皮及び／又は胚の全部又は一部が緑色を呈するダイズ（Glycine max）品種の総称である。青大豆としては、例えば、キヨミドリ、越後みどり（エチゴミドリ）、大袖振、音更大袖（振）、大袖の舞、早生緑、くらかけ、スズカリ、青丸くん、青目大豆、あきたみどり、秋試縁１号、岩手みどり、双青、青入道、黒神、あやみどり、信農青豆、秘伝、ひたし豆、天津青大豆、青仁大豆（Chinese green soybean）等の品種が含まれる。
一般に、青大豆には、あきたみどりのように、種皮及び胚が緑色を呈する品種と、大袖振のように種皮のみが緑色を呈する品種が知られているが、本発明の青大豆は、いずれの品種であってもよい。好ましくは種皮及び胚が緑色を呈する品種である。また、青大豆であっても「臍」の色は、品種により黄、緑、暗褐色、黒と様々であるが、特に制限しない。
「完熟状態」とは、種子が発芽能力を有するまでに十分に成熟した状態をいう。一般に枝豆と称される未成熟な状態の大豆種子は、黄色大豆又は黒大豆であっても緑色を呈している。しかし、このような未成熟状態時のみに緑色を呈する品種は、本発明の青大豆には該当しない。また、ここでいう「緑色」とは、波長４９０ｎｍ〜５７０ｎｍの反射光に基づいてヒトの眼によって認識される色彩をいう。したがって、「緑色」とは、前記波長の範囲内であれば、その濃度を制限するものではなく、例えば、淡緑色、黄緑色、緑、青緑色、濃緑色及び黒緑色を包含する。
【００１３】
本明細書において、「種子」は種皮及び／又は胚を含み、胚は子葉及び胚軸を含む。
【００１４】
本明細書において、「抗炎症用組成物」とは、抗炎症作用を有する組成物あるいは抗炎症剤として使用することができる組成物をいう。
【００１５】
本明細書において、「炎症」とは、局所的な炎症及び全身的な炎症を含み、「炎症」の症状および状態としては、炎症の４大徴候である疼痛、発赤、熱感、腫脹；ならびにそれらによって誘発される様々な二次的症状、例えば、炎症性の皮膚炎、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、ならびに花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等を含む。
本発明の抗炎症用組成物は、これらの炎症の症状又は状態を予防、治療、改善又は緩和させることができる。
【００１６】
上記「抗炎症」作用とは、即時型アレルギー反応の抑制作用、すなわちＩＬ−４低下やＩＦＮγ亢進に起因するＴｈ２の偏向の抑制、又はＩｇＥ低下によるＩ型アレルギー反応の抑制作用、とは異なる作用である。よって、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される上記アレルギー性炎症疾患とは、好ましくは、Ｉ型アレルギー反応による疾患を除く、ＩＩ型〜Ｖ型アレルギー反応による疾患である。例えば、上記アレルギー性炎症疾患がアトピー性皮膚炎の場合、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される症状には、丘疹や色素沈着が含まれるが、ＩｇＥによって引き起こされる掻痒症状の改善は含まれない。また例えば、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される症状には、炎症の４大徴候である、疼痛、発赤、熱感、腫脹が含まれるが、ここには、ＩｇＥにより肥満細胞等から放出されたケミカルメディエイターによる血管透過性亢進によって引き起こされる浮腫は含まれない。
【００１７】
本発明の抗炎症用組成物は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する。本発明の抗炎症用組成物は、上記抽出物から実質的に構成されるものを含む。
【００１８】
上記青大豆種子は、任意の形態の青大豆種子であればよく、例えば、青大豆種子（好ましくは脱皮種子）そのもの；当該青大豆種子を切断、粉砕若しくは粉末化したもの；当該青大豆種子を乾燥したもの；当該青大豆種子を乾燥後粉砕若しくは粉末化したもの；当該青大豆種子を圧搾抽出した搾汁若しくはその残渣、等の形態であり得る。
上記青大豆種子をいずれの形態で用いるかは、所望の活性強度、コスト、品質、大豆としての風味の程度などをもとに選択すればよい。
【００１９】
上記加熱処理における加熱温度は室温を超える温度であり、６０℃〜１０５℃であればよく、好ましくは７０℃〜１００℃、さらに好ましくは７５℃〜９５℃である。加熱時間は１５分〜２４時間であればよく、好ましくは４５分〜１８時間、さらに好ましくは１．５時間〜１０時間である。加熱手段としては、一般的に使用される温度制御が可能なヒーターやオーブンを用いることができるが、特に限定されない。
【００２０】
上記加熱処理に用いる非極性溶媒としては、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、ベンゼン、トルエン、四塩化炭素、塩化メチレン等を挙げることができる。これらは、単独で用いてもよく、又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
上記加熱処理に使用される非極性溶媒の量は、特に限定されないが、例えば、生の青大豆種子に対する質量比として０．５〜２０倍、好ましくは１〜２０倍、より好ましくは２〜１０倍である。好ましくは、青大豆種子が非極性溶媒に完全に浸漬する量とする。
【００２１】
例えば、加熱処理は、粉砕した青大豆種子を上記非極性溶媒に完全に浸漬させ、これを上記の時間、上記温度に設定したヒーター等によって加熱することによって行うことができる。
【００２２】
次いで、上記加熱処理によって得られた加熱処理物を、加熱条件下で極性溶媒を用いた抽出処理に付す。好ましくは、上記加熱処理物からろ過等によって非極性溶媒を除去し、必要に応じて乾燥処理を行った後、残った残渣を上記抽出処理に付す。
抽出処理の方法は特に制限されないが、例えば、上記青大豆種子の加熱処理物、又はそれから非極性溶媒を除去して残った残渣を、減圧、常圧又は加圧下で溶媒中に加え、浸漬、振盪又は攪拌しながら抽出する方法、溶媒中で還流しながら抽出する方法等が挙げられる。
【００２３】
上記抽出処理における加熱条件の温度は室温を超える温度であり、６０℃〜１０５℃であればよく、好ましくは７０℃〜１００℃、さらに好ましくは７５℃〜９５℃である。使用できる加熱手段は、上記加熱処理の場合と同様である。抽出時間は１５分〜２４時間であればよく、好ましくは４５分〜１８時間、さらに好ましくは１．５時間〜１０時間である。
【００２４】
上記抽出処理に用いる極性溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数１〜４のアルコール、アセトニトリル、含水有機溶媒等が挙げられる。含水有機溶媒としては、水とアルコール類との混合溶媒が挙げられ、当該含水有機溶媒中の水の含有量は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下、より好ましくは４０体積％以下であるのが望ましい。上記極性溶媒のうち、水、炭素数１〜４のアルコール、それらの混合物が好ましく、エタノール、含水エタノールがより好ましい。上記極性溶媒は、単独で用いてもよく、又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
上記抽出処理に使用する極性溶媒の量は、特に限定されないが、青大豆種子の加熱処理物から非極性溶媒を除去して残った残渣の質量に対する質量比として、０．５〜２０倍、好ましくは１〜２０倍、より好ましくは２〜１０倍である。好ましくは、上記残渣が極性溶媒に完全に浸漬する量とする。
【００２５】
例えば、抽出処理は、上記青大豆種子の加熱処理物のろ過残渣を、上記極性溶媒に完全に浸漬させ、これを、上記の時間、上記温度に設定したヒーター等によって加熱して、さらに必要に応じて振盪又は攪拌することによって行うことができる。
【００２６】
上述の抽出処理によって得られた抽出物は、好ましくは、濾過又は遠心分離等にかけられ、残渣である固形成分を除去される。さらに必要に応じて、上記抽出物を濃縮あるいは凍結乾燥やスプレードライ等の方法により乾燥、粉末化するか、又はさらに液状、粉末状又はペースト状に調製してもよい。
【００２７】
以上の手順によって得られた抽出物は、本発明の抗炎症用組成物の有効成分として使用することができる。
青大豆等の大豆は、食品として長期間利用され、安全性が確認されている物質である。したがって、青大豆種子を原料とする抽出物を含有する本発明の組成物は、長期投与又は摂取しても副作用の心配がなく、健常者や成人だけでなく、小児、高齢者及び病弱者対しても、安全且つ継続的に投与し又は摂取させることができる。
したがって、上記抽出物は、ヒト又は動物用の医薬、化粧品、飲食品、飼料等として、あるいはそれらを製造するために有用である。
【００２８】
よって、本発明はまた、上記抽出物を含有する医薬、化粧品、飲食品、及び飼料を提供する。当該医薬、化粧品、飲食品、及び飼料は、抗炎症のため、例えば、疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善又は緩和、等のために使用することができる。
【００２９】
本発明の医薬は、上記抽出物を有効成分として含有する抗炎症剤、あるいは疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善若しくは緩和剤、等であり得る。
本発明の医薬の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤等の経口剤；吸入剤、坐剤等の経腸製剤；点滴剤；注射剤；外用剤；経皮、経粘膜、経鼻剤；吸入薬；貼布剤等が挙げられる。
なお、液剤、懸濁剤等の液体製剤は、服用直前に水または他の適当な媒体に溶解または懸濁する形であってもよく、また錠剤、顆粒剤の場合には周知の方法でその表面をコーティングされていてもよい。
【００３０】
本発明の化粧品は、上記抽出物を有効成分として含有する。当該化粧品の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧品が通常とり得る任意の形態が挙げられる。
【００３１】
本発明の医薬及び化粧品は、上記抽出物を単独で含有していてもよく、あるいは、各々、医薬として許容される担体及び化粧料として許容される担体を組み合わせて含有していてもよい。本発明の医薬及び化粧料は、上記抽出物に、慣用される担体、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、酸化防止剤、着色剤、アルコール、水、水溶性高分子、香料、甘味料、矯味剤、酸味料等を剤型に応じて配合し、常法に従って製造することができる。必要に応じてさらに、他の有効成分又は薬効成分を配合してもよい。
【００３２】
本発明の医薬及び化粧品における上記抽出物の含有量は、その剤型により異なるが、その乾燥質量を基準として、通常は、０.１〜９９質量％、好ましくは１〜８０質量％の範囲である。
【００３３】
本発明の飲食品又は飼料は、上記抽出物を有効成分として含有し、且つ抗炎症効果、あるいは疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善又は緩和、等の効果を企図して、その旨を表示した健康食品、機能性飲食品、特定保健用飲食品、病者用飲食品、家畜、競走馬、鑑賞動物等のための飼料、ペットフード等であり得る。
【００３４】
本発明の飲食品及び飼料の形態は特に制限されず、上記抽出物を配合できる全ての形態が含まれる。例えば当該形態としては、固形、半固形または液状であり得、あるいは、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ゲル、シロップ、経管経腸栄養用流動食等の各種形態が挙げられる。
具体的な飲食品の形態の例としては、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、アルコール飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、カスタードクリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープ又はソース類、菓子（例えばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）等が挙げられる。
本発明の飼料は飲食品とほぼ同様の組成や形態で利用できることから、本明細書における飲食品に関する記載は、飼料についても同様に当てはめることが出来る。
【００３５】
上記飲食品及び飼料は、上記抽出物、ならびに飲食品や飼料の製造に用いられる他の飲食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（たとえば呈味成分、甘味料、有機酸等の酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）等を配合して、常法に従って製造することができる。あるいは、通常食されている飲食品又は飼料に上記抽出物を配合することにより、本発明に係る飲食品又は飼料を製造することができる。
【００３６】
本発明の飲食品及び飼料における上記抽出物の含有量は、食品の形態により異なるが、その乾燥質量を基準として、通常は、０.０１〜８０質量％、好ましくは０.１〜５０質量％、より好ましくは１〜５０質量％の範囲である。
【００３７】
上記医薬、化粧品、飲食品及び飼料は、上記抽出物の乾燥質量を基準として、成人１日当たり０.１〜１００ｇの範囲で投与又は摂取される。経口投与又は摂取の場合、一般的な１日当たりの投与量は、１〜５０ｇであるが、上記抽出物は安全性の高いものであるため、その量をさらに増やすこともできる。上記１日当たりの投与又は摂取量は、１回で投与又は摂取してもよいが、数回に分けて投与又は摂取してもよい。
上記１日当たりの量を適切に投与又は摂取できるよう、本発明の医薬の剤型若しくは投与レジメン、又は飲食品及び飼料の形態を、１日当たりの投与又は摂取量が管理できる形にすることが望ましい。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。
【００３９】
（実施例１）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、７５℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、さらに同量のヘキサンを用いて洗浄し、再度ろ過してヘキサンを除去した。得られたろ過残渣を、乾燥後に５倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で３時間振盪抽出を行った。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、本発明の組成物を得た。
【００４０】
（実施例２）
青大豆種子として青丸くんを用いた以外は、実施例１と同様にして、本発明の組成物を得た。
【００４１】
（比較例１）
抽出処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４２】
（比較例２）
加熱処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４３】
（比較例３）
加熱及び抽出処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４４】
（比較例４）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）の水を加え、９０℃で１時間加熱した。得られた加熱処理物を青大豆種子と水の混合状態のままスプレードライして乾燥し、組成物を得た。
【００４５】
（比較例５）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、１５℃で３時間加熱抽出した。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４６】
（比較例６）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で３時間加熱抽出した。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４７】
（比較例７）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、７５℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、残渣を乾燥して組成物を得た。
【００４８】
（比較例８）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、１０℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサン層をとり、さらに同量のヘキサンを用いてろ過残渣を洗浄し、再度ろ過してヘキサン層を得た。得られたヘキサン層を減圧下に溶媒を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４９】
（比較例９）
加熱処理を７５℃で行った以外は、比較例８と同様に処理し、組成物を得た。
【００５０】
（試験例１）
ＮＯ産生抑制作用
マクロファージをリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で活性化してＮＯ産生を増強させ、このＮＯ産生に対する上記で調製した組成物の作用を調べた。
ＲＡＷ２６４．７細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社）は１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地で継代維持した。ＲＡＷ２６４．７細胞を２×１０5細胞／ｍＬ（１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地）に調整した細胞浮遊液を、１ｍＬずつ２４ウェルプレートに播種し、２４時間予備培養した。次いで、培地を５００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと実施例１〜２及び比較例１〜９の組成物のいずれかとを含む１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地に交換し、１８時間培養した。コントロールとして、ＬＰＳのみで上記組成物を含まない培地に交換し、同じ時間培養した。培養終了後、培地中に放出されたＮＯをＮＯ2イオンに誘導して定量を行った。
ＮＯ2イオンの定量は、測定キット（Griess Reagent System：Promega社）を用いて、操作説明書に従って行った。結果は、下記式によってコントロールを１００とする、ＮＯ産生量の相対値として計算した。なお、各組成物は、ＤＭＳＯに溶解して０．２体積％で培地に添加し、最終濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬとした。
１００−｛（サンプルのＮＯ産生量／コントロールのＮＯ産生量）×１００｝
結果を表１に示す。本発明の組成物は顕著なＮＯ産生抑制効果を示した。
【００５１】
【表１】
【００５２】
（調製例１）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、２５℃で１時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、さらに同量のヘキサンを用いて洗浄し、再度ろ過してヘキサンを除去した。得られたろ過残渣を乾燥後に５倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で１時間振盪抽出を行った。抽出後、ろ過して残渣を除き、溶媒を除き、乾燥して、本発明の組成物を得た。
【００５３】
（調製例２）
加熱処理を５５℃で行った以外は、調製例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００５４】
（調製例３）
加熱処理を６５℃で行った以外は、調製例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００５５】
（試験例２）
試験例１と同様にして、調製例１〜３の組成物のＮＯ産生抑制作用を測定した。その結果を表２に示す。
【００５６】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症用組成物、その製造方法、ならびに当該組成物を含有する医薬、化粧品、飲食品及び飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗炎症剤は、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、並びに花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の炎症症状の治療に有用である。医薬品としての抗炎症剤には、これまでステロイド性抗炎症薬、非ステロイド性抗炎症薬及び免疫抑制剤等が知られている。しかし、いずれも強い副作用があるため、医師の指導や管理の下での慎重な投与を要するという問題がある。
【０００３】
一方、これらの医薬品に代えて、抗炎症作用を示すいわゆる健康食品、例えば、保健機能食品等を摂取することによって炎症性疾患や炎症症状を改善しようとする試みも行われている。例えば、甜茶、グルコサミン、コンドロイチン、アスタキサンチン、カテキン等又はそれを添加した食品が挙げられる。しかし、これらの健康食品は、医薬品に比べて副作用は少ないものの、炎症の改善効果も弱いため十分な抗炎症効果があるとは言い難かった。
【０００４】
したがって、日常的に服用が可能で、しかも効果的に炎症性疾患や炎症症状を緩和できる抗炎症剤の開発が望まれている。
【０００５】
大豆は、豆腐、醤油、納豆等の原料としてよく知られており、大豆種子から機能性成分を得る試みが盛んに行われている。例えば、特許文献１には、スタキオースを有効成分とするアトピー性皮膚炎モデル動物の炎症症状を改善する抗アレルギー性組成物が開示されており、スタキオースは大豆種子から抽出できることが記載されている。しかし、大豆種子に含まれるスタキオースは極めて量が少なく、通常の抽出操作を行っただけでは十分な量を得ることができない。それ故、効果の認められる９８％以上の濃度に濃縮するには、クロマトグラフィー等の複雑な精製工程を行う必要があり、その結果、コストがかかり過ぎるという問題があった。また、スタキオースは難消化性であり、高濃度で摂取すると下痢等を発症する恐れがあるという問題もあった。
【０００６】
大豆は、その成熟種子の色から黄色の普通大豆、種子が緑色の青大豆、種子が黒色の黒大豆等に分類される。このうち、青大豆種子の生理活性効果については、特許文献２に、青大豆種子の溶媒抽出物はＩｇＥ低下作用や、Ｔｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１有意に改善する作用を有し、抗アレルギー剤として使用できることが記載されている。
一方、青大豆の抗炎症作用はこれまで知られていないのが実状であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開2003-321372号公報
【特許文献２】特開2010-53125号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、斯かる従来の実状に鑑み、安全、安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な炎症抑制作用を有し、種々の炎症性疾患、炎症症状の予防及び／又は改善に有効な天然由来の素材を開発し、提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、これを極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物が、優れた抗炎症作用を有することを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物を提供することにより、上記課題を解決したものである。
また本発明は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することを特徴とする、抗炎症用組成物の製造方法を提供することにより、上記課題を解決したものである。
さらに本発明は、上記抽出物を含有する医薬、化粧品、飲食品、及び飼料を提供することにより、上記課題を解決したものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、安全・安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な抗炎症作用を有し、種々の炎症性疾患、炎症症状の予防及び／又は改善に有効な抗炎症用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書において「青大豆」とは、完熟状態の種子において種皮及び／又は胚の全部又は一部が緑色を呈するダイズ（Glycine max）品種の総称である。青大豆としては、例えば、キヨミドリ、越後みどり（エチゴミドリ）、大袖振、音更大袖（振）、大袖の舞、早生緑、くらかけ、スズカリ、青丸くん、青目大豆、あきたみどり、秋試縁１号、岩手みどり、双青、青入道、黒神、あやみどり、信農青豆、秘伝、ひたし豆、天津青大豆、青仁大豆（Chinese green soybean）等の品種が含まれる。
一般に、青大豆には、あきたみどりのように、種皮及び胚が緑色を呈する品種と、大袖振のように種皮のみが緑色を呈する品種が知られているが、本発明の青大豆は、いずれの品種であってもよい。好ましくは種皮及び胚が緑色を呈する品種である。また、青大豆であっても「臍」の色は、品種により黄、緑、暗褐色、黒と様々であるが、特に制限しない。
「完熟状態」とは、種子が発芽能力を有するまでに十分に成熟した状態をいう。一般に枝豆と称される未成熟な状態の大豆種子は、黄色大豆又は黒大豆であっても緑色を呈している。しかし、このような未成熟状態時のみに緑色を呈する品種は、本発明の青大豆には該当しない。また、ここでいう「緑色」とは、波長４９０ｎｍ〜５７０ｎｍの反射光に基づいてヒトの眼によって認識される色彩をいう。したがって、「緑色」とは、前記波長の範囲内であれば、その濃度を制限するものではなく、例えば、淡緑色、黄緑色、緑、青緑色、濃緑色及び黒緑色を包含する。
【００１３】
本明細書において、「種子」は種皮及び／又は胚を含み、胚は子葉及び胚軸を含む。
【００１４】
本明細書において、「抗炎症用組成物」とは、抗炎症作用を有する組成物あるいは抗炎症剤として使用することができる組成物をいう。
【００１５】
本明細書において、「炎症」とは、局所的な炎症及び全身的な炎症を含み、「炎症」の症状および状態としては、炎症の４大徴候である疼痛、発赤、熱感、腫脹；ならびにそれらによって誘発される様々な二次的症状、例えば、炎症性の皮膚炎、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、ならびに花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等を含む。
本発明の抗炎症用組成物は、これらの炎症の症状又は状態を予防、治療、改善又は緩和させることができる。
【００１６】
上記「抗炎症」作用とは、即時型アレルギー反応の抑制作用、すなわちＩＬ−４低下やＩＦＮγ亢進に起因するＴｈ２の偏向の抑制、又はＩｇＥ低下によるＩ型アレルギー反応の抑制作用、とは異なる作用である。よって、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される上記アレルギー性炎症疾患とは、好ましくは、Ｉ型アレルギー反応による疾患を除く、ＩＩ型〜Ｖ型アレルギー反応による疾患である。例えば、上記アレルギー性炎症疾患がアトピー性皮膚炎の場合、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される症状には、丘疹や色素沈着が含まれるが、ＩｇＥによって引き起こされる掻痒症状の改善は含まれない。また例えば、本発明の抗炎症用組成物によって予防、治療、改善又は緩和される症状には、炎症の４大徴候である、疼痛、発赤、熱感、腫脹が含まれるが、ここには、ＩｇＥにより肥満細胞等から放出されたケミカルメディエイターによる血管透過性亢進によって引き起こされる浮腫は含まれない。
【００１７】
本発明の抗炎症用組成物は、青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する。本発明の抗炎症用組成物は、上記抽出物から実質的に構成されるものを含む。
【００１８】
上記青大豆種子は、任意の形態の青大豆種子であればよく、例えば、青大豆種子（好ましくは脱皮種子）そのもの；当該青大豆種子を切断、粉砕若しくは粉末化したもの；当該青大豆種子を乾燥したもの；当該青大豆種子を乾燥後粉砕若しくは粉末化したもの；当該青大豆種子を圧搾抽出した搾汁若しくはその残渣、等の形態であり得る。
上記青大豆種子をいずれの形態で用いるかは、所望の活性強度、コスト、品質、大豆としての風味の程度などをもとに選択すればよい。
【００１９】
上記加熱処理における加熱温度は室温を超える温度であり、６０℃〜１０５℃であればよく、好ましくは７０℃〜１００℃、さらに好ましくは７５℃〜９５℃である。加熱時間は１５分〜２４時間であればよく、好ましくは４５分〜１８時間、さらに好ましくは１．５時間〜１０時間である。加熱手段としては、一般的に使用される温度制御が可能なヒーターやオーブンを用いることができるが、特に限定されない。
【００２０】
上記加熱処理に用いる非極性溶媒としては、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、ベンゼン、トルエン、四塩化炭素、塩化メチレン等を挙げることができる。これらは、単独で用いてもよく、又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
上記加熱処理に使用される非極性溶媒の量は、特に限定されないが、例えば、生の青大豆種子に対する質量比として０．５〜２０倍、好ましくは１〜２０倍、より好ましくは２〜１０倍である。好ましくは、青大豆種子が非極性溶媒に完全に浸漬する量とする。
【００２１】
例えば、加熱処理は、粉砕した青大豆種子を上記非極性溶媒に完全に浸漬させ、これを上記の時間、上記温度に設定したヒーター等によって加熱することによって行うことができる。
【００２２】
次いで、上記加熱処理によって得られた加熱処理物を、加熱条件下で極性溶媒を用いた抽出処理に付す。好ましくは、上記加熱処理物からろ過等によって非極性溶媒を除去し、必要に応じて乾燥処理を行った後、残った残渣を上記抽出処理に付す。
抽出処理の方法は特に制限されないが、例えば、上記青大豆種子の加熱処理物、又はそれから非極性溶媒を除去して残った残渣を、減圧、常圧又は加圧下で溶媒中に加え、浸漬、振盪又は攪拌しながら抽出する方法、溶媒中で還流しながら抽出する方法等が挙げられる。
【００２３】
上記抽出処理における加熱条件の温度は室温を超える温度であり、６０℃〜１０５℃であればよく、好ましくは７０℃〜１００℃、さらに好ましくは７５℃〜９５℃である。使用できる加熱手段は、上記加熱処理の場合と同様である。抽出時間は１５分〜２４時間であればよく、好ましくは４５分〜１８時間、さらに好ましくは１．５時間〜１０時間である。
【００２４】
上記抽出処理に用いる極性溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数１〜４のアルコール、アセトニトリル、含水有機溶媒等が挙げられる。含水有機溶媒としては、水とアルコール類との混合溶媒が挙げられ、当該含水有機溶媒中の水の含有量は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下、より好ましくは４０体積％以下であるのが望ましい。上記極性溶媒のうち、水、炭素数１〜４のアルコール、それらの混合物が好ましく、エタノール、含水エタノールがより好ましい。上記極性溶媒は、単独で用いてもよく、又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
上記抽出処理に使用する極性溶媒の量は、特に限定されないが、青大豆種子の加熱処理物から非極性溶媒を除去して残った残渣の質量に対する質量比として、０．５〜２０倍、好ましくは１〜２０倍、より好ましくは２〜１０倍である。好ましくは、上記残渣が極性溶媒に完全に浸漬する量とする。
【００２５】
例えば、抽出処理は、上記青大豆種子の加熱処理物のろ過残渣を、上記極性溶媒に完全に浸漬させ、これを、上記の時間、上記温度に設定したヒーター等によって加熱して、さらに必要に応じて振盪又は攪拌することによって行うことができる。
【００２６】
上述の抽出処理によって得られた抽出物は、好ましくは、濾過又は遠心分離等にかけられ、残渣である固形成分を除去される。さらに必要に応じて、上記抽出物を濃縮あるいは凍結乾燥やスプレードライ等の方法により乾燥、粉末化するか、又はさらに液状、粉末状又はペースト状に調製してもよい。
【００２７】
以上の手順によって得られた抽出物は、本発明の抗炎症用組成物の有効成分として使用することができる。
青大豆等の大豆は、食品として長期間利用され、安全性が確認されている物質である。したがって、青大豆種子を原料とする抽出物を含有する本発明の組成物は、長期投与又は摂取しても副作用の心配がなく、健常者や成人だけでなく、小児、高齢者及び病弱者対しても、安全且つ継続的に投与し又は摂取させることができる。
したがって、上記抽出物は、ヒト又は動物用の医薬、化粧品、飲食品、飼料等として、あるいはそれらを製造するために有用である。
【００２８】
よって、本発明はまた、上記抽出物を含有する医薬、化粧品、飲食品、及び飼料を提供する。当該医薬、化粧品、飲食品、及び飼料は、抗炎症のため、例えば、疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善又は緩和、等のために使用することができる。
【００２９】
本発明の医薬は、上記抽出物を有効成分として含有する抗炎症剤、あるいは疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善若しくは緩和剤、等であり得る。
本発明の医薬の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤等の経口剤；吸入剤、坐剤等の経腸製剤；点滴剤；注射剤；外用剤；経皮、経粘膜、経鼻剤；吸入薬；貼布剤等が挙げられる。
なお、液剤、懸濁剤等の液体製剤は、服用直前に水または他の適当な媒体に溶解または懸濁する形であってもよく、また錠剤、顆粒剤の場合には周知の方法でその表面をコーティングされていてもよい。
【００３０】
本発明の化粧品は、上記抽出物を有効成分として含有する。当該化粧品の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧品が通常とり得る任意の形態が挙げられる。
【００３１】
本発明の医薬及び化粧品は、上記抽出物を単独で含有していてもよく、あるいは、各々、医薬として許容される担体及び化粧料として許容される担体を組み合わせて含有していてもよい。本発明の医薬及び化粧料は、上記抽出物に、慣用される担体、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、酸化防止剤、着色剤、アルコール、水、水溶性高分子、香料、甘味料、矯味剤、酸味料等を剤型に応じて配合し、常法に従って製造することができる。必要に応じてさらに、他の有効成分又は薬効成分を配合してもよい。
【００３２】
本発明の医薬及び化粧品における上記抽出物の含有量は、その剤型により異なるが、その乾燥質量を基準として、通常は、０.１〜９９質量％、好ましくは１〜８０質量％の範囲である。
【００３３】
本発明の飲食品又は飼料は、上記抽出物を有効成分として含有し、且つ抗炎症効果、あるいは疼痛；発赤；熱感；腫脹；炎症性の皮膚炎；胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患；関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎；アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患における炎症症状、等の炎症の症状又は状態の予防、治療、改善又は緩和、等の効果を企図して、その旨を表示した健康食品、機能性飲食品、特定保健用飲食品、病者用飲食品、家畜、競走馬、鑑賞動物等のための飼料、ペットフード等であり得る。
【００３４】
本発明の飲食品及び飼料の形態は特に制限されず、上記抽出物を配合できる全ての形態が含まれる。例えば当該形態としては、固形、半固形または液状であり得、あるいは、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ゲル、シロップ、経管経腸栄養用流動食等の各種形態が挙げられる。
具体的な飲食品の形態の例としては、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、アルコール飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、カスタードクリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープ又はソース類、菓子（例えばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）等が挙げられる。
本発明の飼料は飲食品とほぼ同様の組成や形態で利用できることから、本明細書における飲食品に関する記載は、飼料についても同様に当てはめることが出来る。
【００３５】
上記飲食品及び飼料は、上記抽出物、ならびに飲食品や飼料の製造に用いられる他の飲食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（たとえば呈味成分、甘味料、有機酸等の酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）等を配合して、常法に従って製造することができる。あるいは、通常食されている飲食品又は飼料に上記抽出物を配合することにより、本発明に係る飲食品又は飼料を製造することができる。
【００３６】
本発明の飲食品及び飼料における上記抽出物の含有量は、食品の形態により異なるが、その乾燥質量を基準として、通常は、０.０１〜８０質量％、好ましくは０.１〜５０質量％、より好ましくは１〜５０質量％の範囲である。
【００３７】
上記医薬、化粧品、飲食品及び飼料は、上記抽出物の乾燥質量を基準として、成人１日当たり０.１〜１００ｇの範囲で投与又は摂取される。経口投与又は摂取の場合、一般的な１日当たりの投与量は、１〜５０ｇであるが、上記抽出物は安全性の高いものであるため、その量をさらに増やすこともできる。上記１日当たりの投与又は摂取量は、１回で投与又は摂取してもよいが、数回に分けて投与又は摂取してもよい。
上記１日当たりの量を適切に投与又は摂取できるよう、本発明の医薬の剤型若しくは投与レジメン、又は飲食品及び飼料の形態を、１日当たりの投与又は摂取量が管理できる形にすることが望ましい。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。
【００３９】
（実施例１）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、７５℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、さらに同量のヘキサンを用いて洗浄し、再度ろ過してヘキサンを除去した。得られたろ過残渣を、乾燥後に５倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で３時間振盪抽出を行った。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、本発明の組成物を得た。
【００４０】
（実施例２）
青大豆種子として青丸くんを用いた以外は、実施例１と同様にして、本発明の組成物を得た。
【００４１】
（比較例１）
抽出処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４２】
（比較例２）
加熱処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４３】
（比較例３）
加熱及び抽出処理を１０℃で行った以外は、実施例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００４４】
（比較例４）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）の水を加え、９０℃で１時間加熱した。得られた加熱処理物を青大豆種子と水の混合状態のままスプレードライして乾燥し、組成物を得た。
【００４５】
（比較例５）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、１５℃で３時間加熱抽出した。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４６】
（比較例６）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に７倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で３時間加熱抽出した。抽出後、ろ過して残渣を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４７】
（比較例７）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、７５℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、残渣を乾燥して組成物を得た。
【００４８】
（比較例８）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、１０℃で３時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサン層をとり、さらに同量のヘキサンを用いてろ過残渣を洗浄し、再度ろ過してヘキサン層を得た。得られたヘキサン層を減圧下に溶媒を除き、乾燥して、組成物を得た。
【００４９】
（比較例９）
加熱処理を７５℃で行った以外は、比較例８と同様に処理し、組成物を得た。
【００５０】
（試験例１）
ＮＯ産生抑制作用
マクロファージをリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で活性化してＮＯ産生を増強させ、このＮＯ産生に対する上記で調製した組成物の作用を調べた。
ＲＡＷ２６４．７細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社）は１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地で継代維持した。ＲＡＷ２６４．７細胞を２×１０5細胞／ｍＬ（１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地）に調整した細胞浮遊液を、１ｍＬずつ２４ウェルプレートに播種し、２４時間予備培養した。次いで、培地を５００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと実施例１〜２及び比較例１〜９の組成物のいずれかとを含む１０％ＦＣＳ＋ＤＭＥＭ培地に交換し、１８時間培養した。コントロールとして、ＬＰＳのみで上記組成物を含まない培地に交換し、同じ時間培養した。培養終了後、培地中に放出されたＮＯをＮＯ2イオンに誘導して定量を行った。
ＮＯ2イオンの定量は、測定キット（Griess Reagent System：Promega社）を用いて、操作説明書に従って行った。結果は、下記式によってコントロールを１００とする、ＮＯ産生量の相対値として計算した。なお、各組成物は、ＤＭＳＯに溶解して０．２体積％で培地に添加し、最終濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬとした。
１００−｛（サンプルのＮＯ産生量／コントロールのＮＯ産生量）×１００｝
結果を表１に示す。本発明の組成物は顕著なＮＯ産生抑制効果を示した。
【００５１】
【表１】
【００５２】
（調製例１）
青大豆種子（エチゴミドリ）の粉砕物に５倍量（ｗ／ｗ）のヘキサンを加え、２５℃で１時間加熱処理を行った。得られた加熱処理物をろ過してヘキサンを除き、さらに同量のヘキサンを用いて洗浄し、再度ろ過してヘキサンを除去した。得られたろ過残渣を乾燥後に５倍量（ｗ／ｗ）のエタノールを加え、８５℃で１時間振盪抽出を行った。抽出後、ろ過して残渣を除き、溶媒を除き、乾燥して、本発明の組成物を得た。
【００５３】
（調製例２）
加熱処理を５５℃で行った以外は、調製例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００５４】
（調製例３）
加熱処理を６５℃で行った以外は、調製例１と同様に処理し、組成物を得た。
【００５５】
（試験例２）
試験例１と同様にして、調製例１〜３の組成物のＮＯ産生抑制作用を測定した。その結果を表２に示す。
【００５６】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物。
【請求項２】
加熱処理が６０℃〜１０５℃で１５分〜２４時間の処理である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
加熱条件下での抽出処理が６０℃〜１０５℃で１５分〜２４時間の処理である、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
非極性溶媒が、ヘキサン及びエーテル類から選択されるいずれか１種以上の溶媒である、請求項１〜３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
極性溶媒が、炭素数１〜４のアルコール、水、及びそれらの混合物から選択されるいずれか１種以上の溶媒である、請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することを特徴とする、抗炎症用組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する医薬。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する化粧品。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する飲食品。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する飼料。
【請求項１】
青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することによって得られた抽出物を有効成分として含有する抗炎症用組成物。
【請求項２】
加熱処理が６０℃〜１０５℃で１５分〜２４時間の処理である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
加熱条件下での抽出処理が６０℃〜１０５℃で１５分〜２４時間の処理である、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
非極性溶媒が、ヘキサン及びエーテル類から選択されるいずれか１種以上の溶媒である、請求項１〜３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
極性溶媒が、炭素数１〜４のアルコール、水、及びそれらの混合物から選択されるいずれか１種以上の溶媒である、請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
青大豆種子を非極性溶媒とともに加熱処理した後、極性溶媒を用いて加熱条件下で抽出処理することを特徴とする、抗炎症用組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する医薬。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する化粧品。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する飲食品。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を含有する飼料。
【公開番号】特開２０１２−２５０９３２（Ｐ２０１２−２５０９３２Ａ）
【公開日】平成２４年１２月２０日（２０１２．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１２４５４３（Ｐ２０１１−１２４５４３）
【出願日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【出願人】（３０１０４９７４４）日清ファルマ株式会社 (61)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月２０日（２０１２．１２．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【出願人】（３０１０４９７４４）日清ファルマ株式会社 (61)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]