本発明は、アポトーシス特異的真核生物開始因子5A（eIF-5A）（アポトーシス特異的eIF-5A、またはeIF-5A1とも呼ばれる）と、アポトーシス特異的eIF-5Aの核酸およびポリペプチドと、アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止するためのアンチセンス・オリゴヌクレオチドまたはsiRNAを用いて細胞内でアポトーシスを阻止または抑制する方法に関する。本発明は、アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止することにより、炎症性サイトカインの発現を抑制または阻止すること、あるいはNFκBの活性化を阻止することにも関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの内在性発現を抑制する、アポトーシス特異的eIF-5Aのアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記アポトーシス特異的eIF-5Aが、配列番号20のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記アポトーシス特異的eIF-5Aが、配列番号41のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号35に示す配列を有する、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号37に示す配列を有する、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号39に示す配列を有する、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
哺乳動物の細胞にトランスフェクトするための発現ベクターであって、請求項1に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド及びそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドに作動可能に結合した調節配列を含み、当該細胞内でそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドの転写を可能にする、前記発現ベクター。
【請求項８】
哺乳動物の細胞にトランスフェクトするための発現ベクターであって、請求項4に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド及びそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドに作動可能に結合した調節配列を含み、当該細胞内でそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドの転写を可能にする、前記発現ベクター。
【請求項９】
哺乳動物の細胞にトランスフェクトするための発現ベクターであって、請求項5に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド及びそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドに作動可能に結合した調節配列を含み、当該細胞内でそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドの転写を可能にする、前記発現ベクター。
【請求項１０】
哺乳動物の細胞にトランスフェクトするための発現ベクターであって、請求項6に記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチド及びそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドに作動可能に結合した調節配列を含み、当該細胞内でそのアンチセンス・オリゴヌクレオチドの転写を可能にする、前記発現ベクター。
【請求項１１】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項7に記載の発現ベクターをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5Aのアンチセンス・オリゴヌクレオチドがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項１２】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項8、9又は10のいずれか1項に記載の発現ベクターをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5Aのアンチセンス・オリゴヌクレオチドがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項１３】
前記細胞内における内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの前記発現阻止が、当該細胞に対して、その細胞内でのアポトーシス抑制、その細胞内でのp53の発現低下、その細胞内で産生されるサイトカインのレベル低下、その細胞内でのBcl-2の発現増大；その細胞内で産生されるミエロペルオキシダーゼのレベル低下、その細胞内での活性なNFκベータのレベル低下、その細胞内でのTLR4のレベル低下、その細胞内でのTNFR-1のレベル低下、及びその細胞内でのiNOSのレベル低下からなる群より選ばれる効果を及ぼす、請求項11に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞内における内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの前記発現阻止が、当該細胞に対して、その細胞内でのアポトーシス抑制、その細胞内でのp53の発現低下、その細胞内で産生されるサイトカインのレベル低下、その細胞内でのBcl-2の発現増大；その細胞内で産生されるミエロペルオキシダーゼのレベル低下、その細胞内での活性なNFκベータのレベル低下、その細胞内でのTLR4のレベル低下、その細胞内でのTNFR-1のレベル低下、及びその細胞内でのiNOSのレベル低下からなる群より選ばれる効果を及ぼす、請求項12に記載の方法。
【請求項１５】
siRNAを哺乳動物の肺細胞にin vivoで送達する方法であって、そのsiRNAを水と混合して哺乳動物の鼻腔内に供給するステップを含む、前記方法。
【請求項１６】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの内在性発現を抑制する、アポトーシス特異的eIF-5AのsiRNA。
【請求項１７】
前記アポトーシス特異的eIF-5Aが、配列番号20のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項１８】
前記アポトーシス特異的eIF-5Aが、配列番号41のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項１９】
配列番号30に示す配列を有する、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項２０】
配列番号31に示す配列を有する、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項２１】
配列番号32に示す配列を有する、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項２２】
配列番号33に示す配列を有する、請求項16に記載のsiRNA。
【請求項２３】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項16に記載のsiRNAをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5A siRNAがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項２４】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項19、20、21又は22のいずれか1項に記載のsiRNAをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5A siRNAがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項２５】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項16に記載のsiRNAをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5A siRNAがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項２６】
細胞内におけるアポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する方法であって、請求項19、20、21又は22のいずれか1項に記載のsiRNAをその細胞に投与するステップを含み、それによりアポトーシス特異的eIF-5A siRNAがその細胞内で内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの発現を阻止する、前記方法。
【請求項２７】
前記細胞内における内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの前記発現阻止が、当該細胞に対して、その細胞内でのアポトーシス抑制、その細胞内でのp53の発現低下、その細胞内で産生されるサイトカインのレベル低下、その細胞内でのBcl-2の発現増大；その細胞内で産生されるミエロペルオキシダーゼのレベル低下、その細胞内での活性なNFκベータのレベル低下、その細胞内でのTLR4のレベル低下、その細胞内でのTNFR-1のレベル低下、及びその細胞内でのiNOSのレベル低下からなる群より選ばれる効果を及ぼす、請求項25に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞内における内在性アポトーシス特異的eIF-5Aの前記発現阻止が、当該細胞に対して、その細胞内でのアポトーシス抑制、その細胞内でのp53の発現低下、その細胞内で産生されるサイトカインのレベル低下、その細胞内でのBcl-2の発現増大；その細胞内で産生されるミエロペルオキシダーゼのレベル低下、その細胞内での活性なNFκベータのレベル低下、その細胞内でのTLR4のレベル低下、その細胞内でのTNFR-1のレベル低下、及びその細胞内でのiNOSのレベル低下からなる群より選ばれる効果を及ぼす、請求項26に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７Ａ】

【図３７Ｂ】

【図３７Ｃ】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２Ａ】

【図４２Ｂ】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０Ａ】

【図５０Ｂ】





【図５１】

【図５１Ａ】

【図５１Ｂ】

【図５１Ｃ】

【図５１Ｄ】

【図５２】


【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１】

【図６２】

【図６３】

【図６４】

【図６５】

【図６６】

【図６７】

【図６８】

【図６９】

【図７０】

【図７１】

【図７２】

【図７３Ａ】

【図７３Ｂ】

【図７４】

【図７５】

【図７６】

【図７７】

【図７８】

【図７９】

【図８０】

【図８１】

【図８２】

【図８３】

【図８４】

【図８５】

【図８６】

【図８７】

【図８８】


【図８９】

【図９０】

【図９１】

【図９２】

【図９３】

【図９４】

【図９５】

【図９６】

【図９７】

【図９８】

【図９９】

【図１００】

【図１０１】

【図１０２】

【図１０３】

【図１０４】

【図１０５】

【図１０６】

【図１０７】

【図１０８】

【図１０９】

【図１１０】

【図１１１】

【図１１２】

【図１１３】

【図１１４】

【図１１５】

【公表番号】特表２００６−５２６９８９（Ｐ２００６−５２６９８９Ａ）
【公表日】平成１８年１１月３０日（２００６．１１．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１５２５７（Ｐ２００６−５１５２５７）
【出願日】平成１６年６月７日（２００４．６．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１８０１２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００７８５３
【国際公開日】平成１７年１月２７日（２００５．１．２７）
【出願人】（５０２４５８１３２）セネスコ　テクノロジーズ，インコーポレイティド (16)
【Ｆターム（参考）】