抗生物質化合物
ユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種による栄養培地の発酵は構造式（Ｉ）の新規な抗菌化合物を産生する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗菌活性を有している新規な天然産物に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌によって生じる感染症の医学的懸念が高まりつつある。何故なら、これらの病原体の多くが常用の様々な抗生物質に対して耐性を有するからである。このような微生物としては、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ブドウ球菌）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ（溶血性ブドウ球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿性連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ（エンテロコッカス・フェカーリス）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ（エンテロコッカス・フェシウム）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（緑膿菌）、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｅｔｉｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（大腸菌）及びＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａなどがある。本発明の抗生物質は、様々な既知の抗生物質に耐性の感染症を治療する治療方法に大きく貢献できる可能性を有している。概説書としては、Ｆ．Ｄ．Ｌｏｗｙ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ２００３，１１１（９），１２６５を参照するとよい。
【０００３】
本発明では、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種のユウバクテリア発酵から単離した新規な天然産物を記載する。この化合物は、現在利用されている抗生物質に耐性を有している多くの様々な病原体に対して抗菌活性を示す。
【発明の開示】
【０００４】
本発明は、式Ｉ：
【０００５】
【化３】
で示される新規な天然産物、及び、抗菌剤としてのその使用、または、細菌感染症の治療に有効な医薬的に許容されるその塩を記載している。
【０００６】
本発明はまた、ユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種で発酵させることによって化合物Ｉを産生させる方法に関する。本発明はまた発酵ブロスから式Ｉの化合物を単離する方法に関する。
【０００７】
本発明は式Ｉ：
【０００８】
【化４】
の化合物または医薬的に許容されるその塩を記載している。
【０００９】
本発明の化合物の医薬的に許容される塩は、無機または有機の無毒性塩基から形成されるような慣用の無毒塩を包含する。このような慣用の無毒塩は、例えばカリウム、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物のような無機塩基に由来の塩、及び、例えばジベンジルエチレンジアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、ピロリジン、ベンジルアミンなどのアミン、または、水酸化テトラメチルアンモニウムなどの水酸化第四アンモニウムのような有機塩基から製造された塩である。
【００１０】
医薬的に許容される塩は慣用の化学的方法によって本発明の化合物から合成できる。一般には、遊離酸を化学量論的量または過剰量の所望の塩形成性無機または有機塩基と共に適当な溶媒または種々の混合溶媒中で反応させることによって塩を製造する。
【００１１】
本発明の化合物Ｉは、細菌感染症の治療に有用な抗生物質活性を示す。該化合物は、既知の多くの抗生物質に耐性を示す種を含むＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＥ．ｃｏｌｉの様々な菌株、例えば、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種（ＶＲＥ）、多剤耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、リネゾライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＥ．ｆａｅｃｉｕｍに対して抗菌活性を示す。
【００１２】
化合物Ｉを医薬的に許容される担体と組合せることによって本発明の化合物を医薬組成物として配合し得る。このような担体の例は後述する。
【００１３】
化合物は粉末または結晶質形態、液体溶液または懸濁液として使用し得る。化合物は種々の手段で投与でき、主な投与手段には局所投与、経口投与、及び、注射（静脈内または筋肉内）による非経口投与がある。
【００１４】
１つの送達経路である注射用の組成物は、単一用量アンプルの形態または多用量容器に入った形態で調製し得る。注射用組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションのような形態にするとよく、様々な配合剤を含有し得る。あるいは、有効成分が、送達時点で滅菌水のような適当なビヒクルで復元できる粉末（凍結乾燥または非凍結乾燥）の形態であってもよい。注射用組成物の担体は典型的には滅菌水、生理食塩水または別の注射可能液体、例えば、筋肉内注射用のピーナツ油から成る。また、種々の緩衝剤、保存剤なども含有させ得る。
【００１５】
局所投与には、軟膏、クリーム、ローションを形成する疎水性もしくは親水性の塩基、塗布剤を形成する水性、油性もしくはアルコール性の液体、または、粉末を形成する無水希釈剤のような担体を配合し得る。
【００１６】
経口組成物は、錠剤、カプセル剤、経口懸濁液及び経口溶液の形態を有し得る。経口組成物は、慣用の配合剤のような担体を利用でき、徐放性であってもよく、また、即効性の送達形態でもよい。
【００１７】
投与すべき薬用量は、治療対象者の容態及び体格、投与の経路及び頻度、化合物に対する病原体の感受性、感染菌力及びその他の要因に大きく左右される。しかしながらこれらの事柄は、抗菌分野で公知の治療方針に従う医師の手慣れた裁量に委ねられる。
【００１８】
単位薬用量の形態でヒトに投与される組成物は、液体であるか固体であるかにかかわりなく、約０．０１％から約９９％という高い割合までの化合物Ｉを含有でき、この範囲の一例は約１０−６０％である。組成物は一般に約１５ｍｇ−約２．５ｇの化合物Ｉを含有し、この範囲の一例は約２５０ｍｇ−１０００ｍｇである。非経口投与では、単位薬用量の形態が、滅菌水中の純粋な化合物Ｉの溶液、または、溶液にして用いる可溶性粉末の形態であろう。これらの溶液は中性ｐＨ及び等張性に調整できる。
【００１９】
本文に記載された本発明はまた、感染治療に有効な量の化合物Ｉを哺乳動物に投与する段階を含む、治療を要する哺乳動物の細菌感染の治療方法を含む。
【００２０】
化合物Ｉの投与方法の１つの実施形態は、経口及び非経口方法、例えば、静脈内注入、静脈内ボーラス（ｉ．ｖ．ｂｏｌｕｓ）及び筋肉注射を含む。
【００２１】
成人用には、体重１ｋｇあたり約５−５０ｍｇの化合物Ｉを１日に１−４回投与するのが好ましい。好ましい用法は、２５０ｍｇ−１０００ｍｇの抗菌剤の１日に１−４回の投与である。より特定的に、軽度の感染症に対しては、約２５０ｍｇを１日に２回または３回投与する用法が望ましい。高度に感受性のグラム陽性生物による中程度の感染症に対しては、約５００ｍｇを１日に２回または３回投与する用法が望ましい。抗生物質に対する感受性の限界が最も高い生物による生命に危険な重度の感染症に対しては、約１０００−２０００ｍｇを１日に３回または４回投与する用法が望ましい。
【００２２】
小児用には、体重１ｋｇあたり約５−２５ｍｇを１日に２、３または４回投与する用法が好ましい。典型的には１０ｍｇ／ｋｇの用量が望ましい。
【００２３】
本発明の別の態様は、適当な栄養培地でＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種微生物を培養し、次いで発酵ブロスから本発明の化合物を回収する段階を含む、化合物Ｉの製造方法である。後述の生物分類学試験でユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種として同定されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の微生物ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２は、Ｍｅｒｃｋ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＭＡ７３３９として寄託されている。
【００２４】
この微生物は引き続きＡｍｅｒｃｉａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，２０８５２に永久寄託され、受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）に指定された。
【００２５】
この微生物へのパブリックアクセスに関するいかなる制限も特許が発行されたときに排除される。本発明に関してはこれらの特定種の使用を記載しているが、化合物Ｉを産生できる上記生物の他の種及び突然変異体の存在は可能であり、本発明方法の実施にはそれらの使用も企画される。
【００２６】
構造式Ｉの化合物は、ユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の培養物を接種した調節条件下の適当な培地の好気性発酵によって産生される。適当な培地は好ましくは水性であり、同化性の炭素源、窒素源及び無機塩を含有している。
【００２７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種による発酵に使用される培地は主として公知のＤｉｆｃｏトリプチックダイズブロスであり、単独で使用されるかまたは当業者に常用の栄養素を添加して使用される。
【００２８】
本文中に記載の栄養培地が使用可能な多様な培地の単なる代表例であり、本発明の範囲が記載の培地に全く限定されないことに留意されたい。
【００２９】
発酵は約１０℃−約４０℃の範囲の温度で行う。しかしながら、最適結果を得るためには、発酵を約２８℃で行うのが好ましい。発酵中の栄養培地のｐＨは約５．５−約７．５にするとよい。
【００３０】
本発明の化合物を発酵産生させる場合、本発明がＡＴＣＣ受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）の特定Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の使用に限定されないことを理解されたい。記載の培養物から産生または誘導された他の天然もしくは人工突然変異体、または、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の他の変異体もしくは他の種の使用も、それらが本発明の化合物を産生できるならば本発明の範囲に含まれることが望ましくまた含ませる予定である。ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓの突然変異種または菌株の人工産生は、慣用の物理的または化学的な突然変異誘発、例えば、記載の培養物の紫外線照射、ニトロソグアニジン処理などによって行うことができる。プロトプラスト融合法、プラスミド組込み、染色体フラグメント組込みなどのような組換えＤＮＡ技術も有用であろう。
【実施例１】
【００３１】
化合物Ｉの産生
【００３２】
【表１】
【００３３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３９）の凍結懸濁液（１．３ｍＬ）を、５０ｍＬのシード培地を収容している２５０ｍＬ容のフラスコに接種した。フラスコを２２０ＲＰＭで撹拌しながら２８．０℃で４８時間インキュベートした。第一期シードの３％接種物を、５０ｍＬのシード培地を収容している２５０ｍＬ容の振盪フラスコに移すことによって第二期シードを増殖させた。フラスコを２２０ＲＰＭで撹拌しながら２８．０℃で２４時間インキュベートした。第二期シードの５％接種物を２５０ｍＬ中の３０ｍｌのＹＭＥ−ＴＥに移し、２２０ＲＰＭで撹拌しながら３２．０℃で１２日間インキュベートした。
【００３４】
化合物Ｉの単離：
２リットルの発酵ブロスに２リットルのアセトンを添加し、シェーカーで２時間振盪し、濾過した。減圧下で濾液を濃縮してアセトンをほぼ除去し、７５ｍＬ容のアンバークロム（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ）（ＣＧ１６１ｓ）カラムに充填した。カラムを９０％水から１００％メタノールまでの勾配で溶出させると、化合物がブロードゾーンに溶出したので、これを濃縮し凍結乾燥すると、１７０ｍｇの半精製画分が得られた。この画分の８０ｍｇの部分量を、０．１％トリフルオロ酢酸を含有している２０−９８％の水性アセトニトリル勾配で分取ＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ Ｒｘ Ｃ８ ２１．４×２５０ｍｍ）によって精製すると、１．１ｍｇの化合物Ｉが得られた。構造を分光分析によって解明した（下記参照）。
【００３５】
化合物Ｉの物理的データ：
【００３６】
【化５】
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
培養物のキャラクタリゼーション
化合物Ｉを産生する培養物ＭＡ−７３３９について概説する。
【００４０】
増殖、全般的な培養特性及び炭素源の利用に関する観察は、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｔｔｌｉｅｂの方法（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（１９６６）１６：３１３−３４０）に従って行った。培養物の変色は、Ｍｅｔｈｕｅｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｏｌｏｕｒ（Ａ．Ｋｏｍｅｒｕｐ ａｎｄ Ｊ．Ｈ．Ｗａｕｓｃｈｅｒ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９７８）に所収の色標準との比較によって決定した。
【００４１】
細胞の化学組成は、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ ａｎｄ Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ（１９８０）の方法を使用して決定した。
【００４２】
脂肪酸組成は、修正サンプル調製（Ｓａｓｓｅｒ，１９９０）を使用して決定した。脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）の分析は、フェニルメチルシリコーンカラム（０．２ｍｍ×２５ｍ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ｍｏｄｅｌ ６８９０Ｎガスクロマトグラフ／Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（ＭＩＤＩ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｄｅｌ）を使用するキャピラリーガスクロマトグラフィーによって行った。個々の脂肪酸の同定は、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェアによって決定した。
【００４３】
プライマー２７ｆ及び１５２５ｒ（Ｌａｎｅ，１９９１）を使用して得られた１５００ｂｐのＰＣＲフラグメントから１６Ｓ ｒＤＮＡの完全配列を決定した。ＰＣＲ産物はＡＢＩ ＰＲＩＳＭＴＭ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ配列決定キット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用する配列決定反応の鋳型として使用した。ＧＣＧ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ ８）を使用して部分配列を構成し、これらの配列をＣＬＵＳＴＡＬＷプログラム（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）に位置合せした。位置合せした配列の系統発生分析は、Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＰＡＵＰ）プログラムのバージョン４．０．（Ｓｗｏｆｆｏｒｄ，１９９３）の分枝限定アルゴリズムによる最大節約分析を使用して行った。
【００４４】
ソース：
菌株ＭＡ７３３９は、スペインのバレアレス諸島に属するマジョルカ島で採取した土壌から得られた。１％（ｗ／ｖ）のクロラミンＴで前処理後の土壌から菌株を単離し、２０μｇ／ｍｌのナリジキシン酸を補充したフミン酸基材の寒天で平板培養した。酵母麦芽エキス寒天上で精製後、ＦａｂＦ ＳＰＡＲ Ｃスクリーン中で寒天プラグとして試験すると単離物が活性で検出された。
【００４５】
全般的な増殖特性：
菌株ＭＡ７３３９は、酵母麦芽エキス、オートミール、グリセロールアスパラギン、無機塩デンプン及びトリプチケースダイズのような一連の寒天培地で、２８℃で良好に増殖する。肉眼的コロニー形態はストレプトミセス科細菌の典型であり、胞子集団、色、基底菌糸体の色素沈着及び種々の色素の産生などを含むその増殖特性を種々の寒天培地中で記録した（表１）。
【００４６】
−コロニー形態（酵母麦芽エキス寒天上、ＩＳＰ２）：最初は黄白色の基底菌糸体が２１日間のインキュベーション後に黄褐色（５Ｄ７）に変色する。最初は白色の気生菌糸体は２１日のインキュベーション後も増殖を続け、灰白色（５Ｅｌ／５Ｅ２）に変色し、茶褐色の湿潤浸出液滴を生じる。
【００４７】
−微細形態：胞子鎖形態は倍率４００×及び１０００×の光学顕微鏡によってプレート上で直接観察した。観察は、酵母麦芽エキス寒天上で７、１４及び２１日間の培養後に行った。広範囲に枝分かれした基底菌糸から気生菌糸体が生じている。疎らに枝分かれした気生菌糸は最初は不規則にきつく巻かれた短いらせん状胞子鎖に分化する。１０−２０未満の胞子によって担胞子体が形成され、これらは時間の経過に伴って合着し、古い培養物では暗色の粘液性胞子集団となる。大抵の他の試験培地でも同様の形態が観察されたが、合着の程度は様々に異なっていた。グリセロールアスパラギン寒天中では逆に、菌株が不稔性の発育菌糸体として増殖する。
【００４８】
化学分類学的分析
細胞壁組成の分析は、菌株ＭＡ７３３９が全生物加水分解物中にＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓに特徴的なＬＬ−Ａ２ｐｍを含有し、また、細胞壁の主要な糖としてグルコース及びリボースを含有することを示す。菌株は、飽和した直鎖状及びイソ−及びアンテイソ−脂肪酸に富み、全細胞のメタノール分解物は、優位脂肪酸１５：０アンテイソ（１２．４３％）及び１６：０イソ（１７．９４％）を含有し、これもＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓに典型的である。しかしながら主要成分は脂肪酸種１５：０イソ（２０．４３％）である。完全な脂肪酸組成を表２に示す。これらの化学分類学的分析はいずれも、この菌株がＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の一員に相当することを示す。
【００４９】
生理学的特性
菌株ＭＡ７３３９は以下の炭素利用パターンを有している（表３）：スクロース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース及びラフィノースは高度の利用；Ｄ−グルコース、Ｉ−イノシトール及びＤ−マンニトールは中程度の利用；Ｌ−アラビノース、セルロース及びラムノースは非利用。
【００５０】
１６Ｓ ｒＤＮＡの配列及び系統発生学的分析
菌株ＭＡ−７３３９の１６Ｓ ｒＤＮＡの完全配列を決定した（図１）。配列をＧｅｎｂａｎｋ（ＡＢ０４５８８２）から得られたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓヌクレオチド配列及びＳ．ｐｌａｔｅｎｓｉｓ菌株ＭＡ７３２７及びＭＡ７３３１に位置合せした。これらの１６Ｓ ｒＤＮＡ配列に基づく系統樹を最大節約法を使用して作成した。各グループで得られたブートストラップ反復を統計的信頼性の尺度として使用した。ブートストラップ反復の９５％に見出されたグループを統計的に有意であるとした。
【００５１】
菌株ＭＡ７３３９は菌株Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓのＡＴＣＣ１３８６５及び菌株ＭＡ７３２７及びＭＡ７３３１に関連がある。この緊密な関係はブートストラップ値によって十分に裏付けられており（９７％）、この単離物をＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ種の別の菌株として同定できることを示唆する（図２）。
【００５２】
【表４】
【００５３】
【表５】
【００５４】
【表６】
【００５５】
以下の化合物を単一炭素源として増殖させる；
観察は２８℃で７、１４及び２１日目に行った；
増殖レベル：３＝高度利用；２＝中程度利用；１＝低度利用；０＝非利用。
【００５６】
【化６】
【００５７】
化合物Ｉの抗菌活性を定量するために使用したプロトコルを以下に記載する。
材料：
カチオン調節ミュラー−ヒントンブロス（ＭＨ；ＢＢＬ）
５０％溶解ウマ血液（ＬＨＢ；ＢＢＬ）（冷凍保存液）
ＲＰＭＩ １６４０（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）
ヒト血清（Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ）
ＲＰＭＩ １６４０（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）
ヘモフィルス試験培地（ＨＴＭ、Ｒｅｍｅｌ）
トリプチケースダイズブロス（ＴＳＢ、５ｍＬ／管；ＢＢＬ）
０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水；Ｂａｘｔｅｒ）
トリプチケースダイズ＋５％ヒツジ血液寒天プレート（ＴＳＡ；ＢＢＬ）
サブローデキストロース寒天プレート（ＢＢＬ）
チョコレート寒天プレート（ＢＢＬ）
２×脱脂乳（Ｒｅｍｅｌ）
Ｍｉｃｒｏｂａｎｋビーズ（Ｋｒａｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）
ＭＩＣ ２０００マイクロタイタープレート接種器
２×トリプチケースダイズブロス（ＴＳＢ、ＢＢＬ）＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清
９６−ウェルマイクロタイタープレート、蓋、接種物トレー（Ｄｙｎｅｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
８−チャンネルＦｉｎｎマルチチャンネルピペット器、０．５−１０μＬ容。
【００５８】
方法：
培地調製
カチオン調節ミュラー−ヒントンブロス（ＢＢＬ）：製造業者の指示に従って調製した（２２ｇｍを１０００ｍＬの水に溶解；２２分間のオートクレーブ処理）。冷蔵保存した。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌した。
【００５９】
５０％溶解ウマ血液：線維素除去したウマ血液を滅菌蒸留水で１：１に希釈する；凍結し、解凍し、再凍結し（少なくとも７回）、次いで遠心分離する。−２０℃で冷凍保存する。
【００６０】
カチオン調節ミュラー−ヒントン＋２．５％溶解ウマ血液：１００ｍＬのカチオン調節ミュラー−ヒントンブロスに５ｍＬの５０％溶解ウマ血液を無菌的に添加する。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６１】
カチオン調節ミュラー−ヒントン＋５０％ヒト血清：２×５０ｍＬのカチオン調節ミュラー−ヒントンブロスに５０ｍＬのヒト血清を無菌的に添加する。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６２】
ヘモフィルス試験培地（Ｒｅｍｅｌ）：調製済みの製品を製造業者から入手。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６３】
０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水；Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）：調製済みの製品を製造業者から入手。
【００６４】
２×脱脂乳（Ｒｅｍｅｌ）：調製済みの製品を製造業者から入手。
【００６５】
寒天プレートはいずれも調製済みの製品を製造業者から入手した。
【００６６】
【表７】
【００６７】
試験した抗生物質の最高濃度＝６４μｇ／ｍＬ（５０％ＤＭＳＯ中の１ｍｇ／ｍＬ溶液から開始したとき）
ウェルあたりのＤＭＳＯの最終濃度＝３．２％
【００６８】
単離物の選択及び維持
使用した菌株は、Ｍｅｒｃｋ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎまたはＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓから得られた単離物である。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの菌株は、Ｍｅｒｃｋでｉｎ ｖｉｖｏ試験に使用したマウス病原体である。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉの菌株は細胞壁透過性の菌株である。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの菌株を対照として使用する。これらの培養物は、ａ．）Ｍｉｃｒｏｂａｎｋビーズ；ｂ．）２×脱脂乳；またはｃ．）２×トリプチケースダイズブロス＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）中、−８０℃の冷凍予製液として保存する。
【００６９】
接種物の調製
選択した単離物を、チョコレート寒天プレート（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、トリプチケースダイズ＋５％ヒツジ血液寒天プレート（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはサブローデキストロース寒天（Ｃａｎｄｉｄａ）で継代培養し、３５℃でインキュベートする。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは５％ＣＯ２中でインキュベートする。他の単離物はすべて周囲空気中でインキュベートする。アッセイ前に単離物を２×継代培養する。
【００７０】
プレートからコロニーを選択し、トリプチケースダイズブロス中の０．５ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準に等価の接種物を調製するために使用する。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの場合には１．０ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準に等価の密度をもつ接種物を調製する。全部の培養物の接種物密度はＴＳＢ中で〜１０８ＣＦＵ／ｍＬである。このＴＳＢ接種物を滅菌生理食塩水で１：１０に希釈し（４ｍＬの接種物＋３６ｍＬの生理食塩水；〜１０７ＣＦＵ／ｍＬに等価）、マイクロタイタープレートに接種するために使用するまで氷上に維持する。
【００７１】
無作為に選択した単離物のコロニー数をカウントしてＣＦＵ／ウェルを確認する（ＴＳＢ接種物をＴＳＡ ＩＩ＋５％ＳＢまたはチョコレート寒天プレートで１０−５、１０−６に平板培養し、３５℃、ＣＯ２中で一夜インキュベートした）。
【００７２】
プレート充填
９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｄｙｎｅｘ）の全部のウェルに１００ＴＬの培地を充填する。ヘモフィルス試験培地プレートはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを試験するために準備する；カチオン調節ミュラー−ヒントン＋５％溶解ウマ血液プレートはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを試験するために準備する；カチオン調節ミュラー−ヒントンブロスプレートは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓを試験するために準備する。ＲＰＭＩ １６４０はＣａｎｄｉｄａを試験するために使用する。血清中の何らかの成分によって化合物が失活するか否かを判断するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ Ｓｍｉｔｈに対するＭＩＣをカチオン調節ミュラー−ヒントン及びカチオン調節ミュラー−ヒントン＋５０％ヒト血清中で測定する。充填プレートをプラスチックバッグに包装し（蒸発をできるだけ抑えるため）、冷凍保存し、使用前に解凍する。
【００７３】
化合物の調製
化合物は重量基準で調製する。１００％ＤＭＳＯ中で２ｍｇ／ｍＬとなるように化合物を調製し、次いで，ＤＭＳＯ／２×ＣＡＭＨＢの１：１希釈物で１ｍｇ／ｍＬに希釈する（最終濃度＝５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢ）。ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｅｅｐ Ｗｅｌｌ Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ９６ウェルプレートを使用し、５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢ中で化合物を１：１に系列希釈する（初期濃度１ｍｇ／ｍＬ）。
【００７４】
マイクロブロス希釈アッセイ
Ｆｉｎｎ全自動マルチチャンネルピペット（０．５−１０μＬ容）を使用し、６．４ＴＬの抗菌処理用溶液を充填マイクロタイタープレートのウェルに加える（第一ウェルの抗菌剤の濃度＝６４μｇ／ｍＬ；ＤＭＳＯの濃度＝３．２％）。各ウェルのＤＭＳＯの量を一定に維持しこのようにして抗菌剤を加える（化合物を溶解状態に維持し、ＤＭＳＯによる非特異的殺菌の可能性を考慮に入れる）。最終列は３．２％ＤＭＳＯの増殖対照を含む。
【００７５】
各アッセイで対照も試験する。対照は、化合物と同様にして調製したペニシリンＧ及びクロラムフェニコールである。血清タンパク質結合アッセイの対照としてエルタペネム（Ｅｒｔａｐｅｎｅｍ）を使用する。
【００７６】
プレート接種
ウェルあたり１．５ＴＬの接種物を送り出す全自動プレート接種デバイスであるＭＩＣ２０００システムを使用してマイクロタイタープレートの全部のウェルに（生理食塩水で希釈した）培養物を接種する。プレートを周囲空気中、３５℃でインキュベートする。無菌性の検証のために非接種プレートもインキュベートする。２２−２４時間のインキュベーション後に結果を記録する。プレートが増殖ゼロになるまで読取りを行った。ＭＩＣは、２２−２４時間のインキュベーション後の増殖をゼロにする抗菌剤の最も低いレベルであると定義される。
【００７７】
化合物Ｉは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＥ．ｃｏｌｉの種々の菌株に対して抗菌活性を示す。化合物Ｉはまた、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種（ＶＲＥ）、多剤耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、リネゾライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＥ．ｆａｅｃｉｕｍのような公知の多くの抗生物質に耐性の様々な種に対して抗菌活性を示す。これらの試験菌株に対する最小阻害濃度（ＭＩＣ）の値は、０．５−３２ｕｇ／ｍＬの範囲である。ＭＩＣはＮＣＣＬＳ指針に従って得られる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】Ｃ５Ｄ５Ｎ中の化合物Ｉの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図２】Ｃ５Ｄ５Ｎ中の化合物Ｉの１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗菌活性を有している新規な天然産物に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌によって生じる感染症の医学的懸念が高まりつつある。何故なら、これらの病原体の多くが常用の様々な抗生物質に対して耐性を有するからである。このような微生物としては、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ブドウ球菌）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ（溶血性ブドウ球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿性連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ（エンテロコッカス・フェカーリス）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ（エンテロコッカス・フェシウム）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（緑膿菌）、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｅｔｉｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（大腸菌）及びＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａなどがある。本発明の抗生物質は、様々な既知の抗生物質に耐性の感染症を治療する治療方法に大きく貢献できる可能性を有している。概説書としては、Ｆ．Ｄ．Ｌｏｗｙ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ２００３，１１１（９），１２６５を参照するとよい。
【０００３】
本発明では、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種のユウバクテリア発酵から単離した新規な天然産物を記載する。この化合物は、現在利用されている抗生物質に耐性を有している多くの様々な病原体に対して抗菌活性を示す。
【発明の開示】
【０００４】
本発明は、式Ｉ：
【０００５】
【化３】
で示される新規な天然産物、及び、抗菌剤としてのその使用、または、細菌感染症の治療に有効な医薬的に許容されるその塩を記載している。
【０００６】
本発明はまた、ユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種で発酵させることによって化合物Ｉを産生させる方法に関する。本発明はまた発酵ブロスから式Ｉの化合物を単離する方法に関する。
【０００７】
本発明は式Ｉ：
【０００８】
【化４】
の化合物または医薬的に許容されるその塩を記載している。
【０００９】
本発明の化合物の医薬的に許容される塩は、無機または有機の無毒性塩基から形成されるような慣用の無毒塩を包含する。このような慣用の無毒塩は、例えばカリウム、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物のような無機塩基に由来の塩、及び、例えばジベンジルエチレンジアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、ピロリジン、ベンジルアミンなどのアミン、または、水酸化テトラメチルアンモニウムなどの水酸化第四アンモニウムのような有機塩基から製造された塩である。
【００１０】
医薬的に許容される塩は慣用の化学的方法によって本発明の化合物から合成できる。一般には、遊離酸を化学量論的量または過剰量の所望の塩形成性無機または有機塩基と共に適当な溶媒または種々の混合溶媒中で反応させることによって塩を製造する。
【００１１】
本発明の化合物Ｉは、細菌感染症の治療に有用な抗生物質活性を示す。該化合物は、既知の多くの抗生物質に耐性を示す種を含むＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＥ．ｃｏｌｉの様々な菌株、例えば、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種（ＶＲＥ）、多剤耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、リネゾライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＥ．ｆａｅｃｉｕｍに対して抗菌活性を示す。
【００１２】
化合物Ｉを医薬的に許容される担体と組合せることによって本発明の化合物を医薬組成物として配合し得る。このような担体の例は後述する。
【００１３】
化合物は粉末または結晶質形態、液体溶液または懸濁液として使用し得る。化合物は種々の手段で投与でき、主な投与手段には局所投与、経口投与、及び、注射（静脈内または筋肉内）による非経口投与がある。
【００１４】
１つの送達経路である注射用の組成物は、単一用量アンプルの形態または多用量容器に入った形態で調製し得る。注射用組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションのような形態にするとよく、様々な配合剤を含有し得る。あるいは、有効成分が、送達時点で滅菌水のような適当なビヒクルで復元できる粉末（凍結乾燥または非凍結乾燥）の形態であってもよい。注射用組成物の担体は典型的には滅菌水、生理食塩水または別の注射可能液体、例えば、筋肉内注射用のピーナツ油から成る。また、種々の緩衝剤、保存剤なども含有させ得る。
【００１５】
局所投与には、軟膏、クリーム、ローションを形成する疎水性もしくは親水性の塩基、塗布剤を形成する水性、油性もしくはアルコール性の液体、または、粉末を形成する無水希釈剤のような担体を配合し得る。
【００１６】
経口組成物は、錠剤、カプセル剤、経口懸濁液及び経口溶液の形態を有し得る。経口組成物は、慣用の配合剤のような担体を利用でき、徐放性であってもよく、また、即効性の送達形態でもよい。
【００１７】
投与すべき薬用量は、治療対象者の容態及び体格、投与の経路及び頻度、化合物に対する病原体の感受性、感染菌力及びその他の要因に大きく左右される。しかしながらこれらの事柄は、抗菌分野で公知の治療方針に従う医師の手慣れた裁量に委ねられる。
【００１８】
単位薬用量の形態でヒトに投与される組成物は、液体であるか固体であるかにかかわりなく、約０．０１％から約９９％という高い割合までの化合物Ｉを含有でき、この範囲の一例は約１０−６０％である。組成物は一般に約１５ｍｇ−約２．５ｇの化合物Ｉを含有し、この範囲の一例は約２５０ｍｇ−１０００ｍｇである。非経口投与では、単位薬用量の形態が、滅菌水中の純粋な化合物Ｉの溶液、または、溶液にして用いる可溶性粉末の形態であろう。これらの溶液は中性ｐＨ及び等張性に調整できる。
【００１９】
本文に記載された本発明はまた、感染治療に有効な量の化合物Ｉを哺乳動物に投与する段階を含む、治療を要する哺乳動物の細菌感染の治療方法を含む。
【００２０】
化合物Ｉの投与方法の１つの実施形態は、経口及び非経口方法、例えば、静脈内注入、静脈内ボーラス（ｉ．ｖ．ｂｏｌｕｓ）及び筋肉注射を含む。
【００２１】
成人用には、体重１ｋｇあたり約５−５０ｍｇの化合物Ｉを１日に１−４回投与するのが好ましい。好ましい用法は、２５０ｍｇ−１０００ｍｇの抗菌剤の１日に１−４回の投与である。より特定的に、軽度の感染症に対しては、約２５０ｍｇを１日に２回または３回投与する用法が望ましい。高度に感受性のグラム陽性生物による中程度の感染症に対しては、約５００ｍｇを１日に２回または３回投与する用法が望ましい。抗生物質に対する感受性の限界が最も高い生物による生命に危険な重度の感染症に対しては、約１０００−２０００ｍｇを１日に３回または４回投与する用法が望ましい。
【００２２】
小児用には、体重１ｋｇあたり約５−２５ｍｇを１日に２、３または４回投与する用法が好ましい。典型的には１０ｍｇ／ｋｇの用量が望ましい。
【００２３】
本発明の別の態様は、適当な栄養培地でＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種微生物を培養し、次いで発酵ブロスから本発明の化合物を回収する段階を含む、化合物Ｉの製造方法である。後述の生物分類学試験でユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種として同定されたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の微生物ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２は、Ｍｅｒｃｋ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＭＡ７３３９として寄託されている。
【００２４】
この微生物は引き続きＡｍｅｒｃｉａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，２０８５２に永久寄託され、受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）に指定された。
【００２５】
この微生物へのパブリックアクセスに関するいかなる制限も特許が発行されたときに排除される。本発明に関してはこれらの特定種の使用を記載しているが、化合物Ｉを産生できる上記生物の他の種及び突然変異体の存在は可能であり、本発明方法の実施にはそれらの使用も企画される。
【００２６】
構造式Ｉの化合物は、ユウバクテリウムＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の培養物を接種した調節条件下の適当な培地の好気性発酵によって産生される。適当な培地は好ましくは水性であり、同化性の炭素源、窒素源及び無機塩を含有している。
【００２７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種による発酵に使用される培地は主として公知のＤｉｆｃｏトリプチックダイズブロスであり、単独で使用されるかまたは当業者に常用の栄養素を添加して使用される。
【００２８】
本文中に記載の栄養培地が使用可能な多様な培地の単なる代表例であり、本発明の範囲が記載の培地に全く限定されないことに留意されたい。
【００２９】
発酵は約１０℃−約４０℃の範囲の温度で行う。しかしながら、最適結果を得るためには、発酵を約２８℃で行うのが好ましい。発酵中の栄養培地のｐＨは約５．５−約７．５にするとよい。
【００３０】
本発明の化合物を発酵産生させる場合、本発明がＡＴＣＣ受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）の特定Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種の使用に限定されないことを理解されたい。記載の培養物から産生または誘導された他の天然もしくは人工突然変異体、または、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の他の変異体もしくは他の種の使用も、それらが本発明の化合物を産生できるならば本発明の範囲に含まれることが望ましくまた含ませる予定である。ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（Ｍｅｒｃｋ＃ＭＡ７３３９）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓの突然変異種または菌株の人工産生は、慣用の物理的または化学的な突然変異誘発、例えば、記載の培養物の紫外線照射、ニトロソグアニジン処理などによって行うことができる。プロトプラスト融合法、プラスミド組込み、染色体フラグメント組込みなどのような組換えＤＮＡ技術も有用であろう。
【実施例１】
【００３１】
化合物Ｉの産生
【００３２】
【表１】
【００３３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３９）の凍結懸濁液（１．３ｍＬ）を、５０ｍＬのシード培地を収容している２５０ｍＬ容のフラスコに接種した。フラスコを２２０ＲＰＭで撹拌しながら２８．０℃で４８時間インキュベートした。第一期シードの３％接種物を、５０ｍＬのシード培地を収容している２５０ｍＬ容の振盪フラスコに移すことによって第二期シードを増殖させた。フラスコを２２０ＲＰＭで撹拌しながら２８．０℃で２４時間インキュベートした。第二期シードの５％接種物を２５０ｍＬ中の３０ｍｌのＹＭＥ−ＴＥに移し、２２０ＲＰＭで撹拌しながら３２．０℃で１２日間インキュベートした。
【００３４】
化合物Ｉの単離：
２リットルの発酵ブロスに２リットルのアセトンを添加し、シェーカーで２時間振盪し、濾過した。減圧下で濾液を濃縮してアセトンをほぼ除去し、７５ｍＬ容のアンバークロム（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ）（ＣＧ１６１ｓ）カラムに充填した。カラムを９０％水から１００％メタノールまでの勾配で溶出させると、化合物がブロードゾーンに溶出したので、これを濃縮し凍結乾燥すると、１７０ｍｇの半精製画分が得られた。この画分の８０ｍｇの部分量を、０．１％トリフルオロ酢酸を含有している２０−９８％の水性アセトニトリル勾配で分取ＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ Ｒｘ Ｃ８ ２１．４×２５０ｍｍ）によって精製すると、１．１ｍｇの化合物Ｉが得られた。構造を分光分析によって解明した（下記参照）。
【００３５】
化合物Ｉの物理的データ：
【００３６】
【化５】
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
培養物のキャラクタリゼーション
化合物Ｉを産生する培養物ＭＡ−７３３９について概説する。
【００４０】
増殖、全般的な培養特性及び炭素源の利用に関する観察は、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｔｔｌｉｅｂの方法（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（１９６６）１６：３１３−３４０）に従って行った。培養物の変色は、Ｍｅｔｈｕｅｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｏｌｏｕｒ（Ａ．Ｋｏｍｅｒｕｐ ａｎｄ Ｊ．Ｈ．Ｗａｕｓｃｈｅｒ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９７８）に所収の色標準との比較によって決定した。
【００４１】
細胞の化学組成は、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ ａｎｄ Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ（１９８０）の方法を使用して決定した。
【００４２】
脂肪酸組成は、修正サンプル調製（Ｓａｓｓｅｒ，１９９０）を使用して決定した。脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）の分析は、フェニルメチルシリコーンカラム（０．２ｍｍ×２５ｍ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ｍｏｄｅｌ ６８９０Ｎガスクロマトグラフ／Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（ＭＩＤＩ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｄｅｌ）を使用するキャピラリーガスクロマトグラフィーによって行った。個々の脂肪酸の同定は、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍソフトウェアによって決定した。
【００４３】
プライマー２７ｆ及び１５２５ｒ（Ｌａｎｅ，１９９１）を使用して得られた１５００ｂｐのＰＣＲフラグメントから１６Ｓ ｒＤＮＡの完全配列を決定した。ＰＣＲ産物はＡＢＩ ＰＲＩＳＭＴＭ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ配列決定キット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用する配列決定反応の鋳型として使用した。ＧＣＧ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ ８）を使用して部分配列を構成し、これらの配列をＣＬＵＳＴＡＬＷプログラム（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）に位置合せした。位置合せした配列の系統発生分析は、Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＰＡＵＰ）プログラムのバージョン４．０．（Ｓｗｏｆｆｏｒｄ，１９９３）の分枝限定アルゴリズムによる最大節約分析を使用して行った。
【００４４】
ソース：
菌株ＭＡ７３３９は、スペインのバレアレス諸島に属するマジョルカ島で採取した土壌から得られた。１％（ｗ／ｖ）のクロラミンＴで前処理後の土壌から菌株を単離し、２０μｇ／ｍｌのナリジキシン酸を補充したフミン酸基材の寒天で平板培養した。酵母麦芽エキス寒天上で精製後、ＦａｂＦ ＳＰＡＲ Ｃスクリーン中で寒天プラグとして試験すると単離物が活性で検出された。
【００４５】
全般的な増殖特性：
菌株ＭＡ７３３９は、酵母麦芽エキス、オートミール、グリセロールアスパラギン、無機塩デンプン及びトリプチケースダイズのような一連の寒天培地で、２８℃で良好に増殖する。肉眼的コロニー形態はストレプトミセス科細菌の典型であり、胞子集団、色、基底菌糸体の色素沈着及び種々の色素の産生などを含むその増殖特性を種々の寒天培地中で記録した（表１）。
【００４６】
−コロニー形態（酵母麦芽エキス寒天上、ＩＳＰ２）：最初は黄白色の基底菌糸体が２１日間のインキュベーション後に黄褐色（５Ｄ７）に変色する。最初は白色の気生菌糸体は２１日のインキュベーション後も増殖を続け、灰白色（５Ｅｌ／５Ｅ２）に変色し、茶褐色の湿潤浸出液滴を生じる。
【００４７】
−微細形態：胞子鎖形態は倍率４００×及び１０００×の光学顕微鏡によってプレート上で直接観察した。観察は、酵母麦芽エキス寒天上で７、１４及び２１日間の培養後に行った。広範囲に枝分かれした基底菌糸から気生菌糸体が生じている。疎らに枝分かれした気生菌糸は最初は不規則にきつく巻かれた短いらせん状胞子鎖に分化する。１０−２０未満の胞子によって担胞子体が形成され、これらは時間の経過に伴って合着し、古い培養物では暗色の粘液性胞子集団となる。大抵の他の試験培地でも同様の形態が観察されたが、合着の程度は様々に異なっていた。グリセロールアスパラギン寒天中では逆に、菌株が不稔性の発育菌糸体として増殖する。
【００４８】
化学分類学的分析
細胞壁組成の分析は、菌株ＭＡ７３３９が全生物加水分解物中にＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓに特徴的なＬＬ−Ａ２ｐｍを含有し、また、細胞壁の主要な糖としてグルコース及びリボースを含有することを示す。菌株は、飽和した直鎖状及びイソ−及びアンテイソ−脂肪酸に富み、全細胞のメタノール分解物は、優位脂肪酸１５：０アンテイソ（１２．４３％）及び１６：０イソ（１７．９４％）を含有し、これもＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓに典型的である。しかしながら主要成分は脂肪酸種１５：０イソ（２０．４３％）である。完全な脂肪酸組成を表２に示す。これらの化学分類学的分析はいずれも、この菌株がＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の一員に相当することを示す。
【００４９】
生理学的特性
菌株ＭＡ７３３９は以下の炭素利用パターンを有している（表３）：スクロース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース及びラフィノースは高度の利用；Ｄ−グルコース、Ｉ−イノシトール及びＤ−マンニトールは中程度の利用；Ｌ−アラビノース、セルロース及びラムノースは非利用。
【００５０】
１６Ｓ ｒＤＮＡの配列及び系統発生学的分析
菌株ＭＡ−７３３９の１６Ｓ ｒＤＮＡの完全配列を決定した（図１）。配列をＧｅｎｂａｎｋ（ＡＢ０４５８８２）から得られたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓヌクレオチド配列及びＳ．ｐｌａｔｅｎｓｉｓ菌株ＭＡ７３２７及びＭＡ７３３１に位置合せした。これらの１６Ｓ ｒＤＮＡ配列に基づく系統樹を最大節約法を使用して作成した。各グループで得られたブートストラップ反復を統計的信頼性の尺度として使用した。ブートストラップ反復の９５％に見出されたグループを統計的に有意であるとした。
【００５１】
菌株ＭＡ７３３９は菌株Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓのＡＴＣＣ１３８６５及び菌株ＭＡ７３２７及びＭＡ７３３１に関連がある。この緊密な関係はブートストラップ値によって十分に裏付けられており（９７％）、この単離物をＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ種の別の菌株として同定できることを示唆する（図２）。
【００５２】
【表４】
【００５３】
【表５】
【００５４】
【表６】
【００５５】
以下の化合物を単一炭素源として増殖させる；
観察は２８℃で７、１４及び２１日目に行った；
増殖レベル：３＝高度利用；２＝中程度利用；１＝低度利用；０＝非利用。
【００５６】
【化６】
【００５７】
化合物Ｉの抗菌活性を定量するために使用したプロトコルを以下に記載する。
材料：
カチオン調節ミュラー−ヒントンブロス（ＭＨ；ＢＢＬ）
５０％溶解ウマ血液（ＬＨＢ；ＢＢＬ）（冷凍保存液）
ＲＰＭＩ １６４０（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）
ヒト血清（Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ）
ＲＰＭＩ １６４０（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）
ヘモフィルス試験培地（ＨＴＭ、Ｒｅｍｅｌ）
トリプチケースダイズブロス（ＴＳＢ、５ｍＬ／管；ＢＢＬ）
０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水；Ｂａｘｔｅｒ）
トリプチケースダイズ＋５％ヒツジ血液寒天プレート（ＴＳＡ；ＢＢＬ）
サブローデキストロース寒天プレート（ＢＢＬ）
チョコレート寒天プレート（ＢＢＬ）
２×脱脂乳（Ｒｅｍｅｌ）
Ｍｉｃｒｏｂａｎｋビーズ（Ｋｒａｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）
ＭＩＣ ２０００マイクロタイタープレート接種器
２×トリプチケースダイズブロス（ＴＳＢ、ＢＢＬ）＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清
９６−ウェルマイクロタイタープレート、蓋、接種物トレー（Ｄｙｎｅｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
８−チャンネルＦｉｎｎマルチチャンネルピペット器、０．５−１０μＬ容。
【００５８】
方法：
培地調製
カチオン調節ミュラー−ヒントンブロス（ＢＢＬ）：製造業者の指示に従って調製した（２２ｇｍを１０００ｍＬの水に溶解；２２分間のオートクレーブ処理）。冷蔵保存した。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌した。
【００５９】
５０％溶解ウマ血液：線維素除去したウマ血液を滅菌蒸留水で１：１に希釈する；凍結し、解凍し、再凍結し（少なくとも７回）、次いで遠心分離する。−２０℃で冷凍保存する。
【００６０】
カチオン調節ミュラー−ヒントン＋２．５％溶解ウマ血液：１００ｍＬのカチオン調節ミュラー−ヒントンブロスに５ｍＬの５０％溶解ウマ血液を無菌的に添加する。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６１】
カチオン調節ミュラー−ヒントン＋５０％ヒト血清：２×５０ｍＬのカチオン調節ミュラー−ヒントンブロスに５０ｍＬのヒト血清を無菌的に添加する。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６２】
ヘモフィルス試験培地（Ｒｅｍｅｌ）：調製済みの製品を製造業者から入手。使用前にＣｏｒｎｉｎｇ ０．４５ Ｔｍ酢酸セルロースフィルターを使用してフィルター滅菌する。
【００６３】
０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水；Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）：調製済みの製品を製造業者から入手。
【００６４】
２×脱脂乳（Ｒｅｍｅｌ）：調製済みの製品を製造業者から入手。
【００６５】
寒天プレートはいずれも調製済みの製品を製造業者から入手した。
【００６６】
【表７】
【００６７】
試験した抗生物質の最高濃度＝６４μｇ／ｍＬ（５０％ＤＭＳＯ中の１ｍｇ／ｍＬ溶液から開始したとき）
ウェルあたりのＤＭＳＯの最終濃度＝３．２％
【００６８】
単離物の選択及び維持
使用した菌株は、Ｍｅｒｃｋ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎまたはＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓから得られた単離物である。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの菌株は、Ｍｅｒｃｋでｉｎ ｖｉｖｏ試験に使用したマウス病原体である。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉの菌株は細胞壁透過性の菌株である。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの菌株を対照として使用する。これらの培養物は、ａ．）Ｍｉｃｒｏｂａｎｋビーズ；ｂ．）２×脱脂乳；またはｃ．）２×トリプチケースダイズブロス＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）中、−８０℃の冷凍予製液として保存する。
【００６９】
接種物の調製
選択した単離物を、チョコレート寒天プレート（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、トリプチケースダイズ＋５％ヒツジ血液寒天プレート（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはサブローデキストロース寒天（Ｃａｎｄｉｄａ）で継代培養し、３５℃でインキュベートする。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは５％ＣＯ２中でインキュベートする。他の単離物はすべて周囲空気中でインキュベートする。アッセイ前に単離物を２×継代培養する。
【００７０】
プレートからコロニーを選択し、トリプチケースダイズブロス中の０．５ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準に等価の接種物を調製するために使用する。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの場合には１．０ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準に等価の密度をもつ接種物を調製する。全部の培養物の接種物密度はＴＳＢ中で〜１０８ＣＦＵ／ｍＬである。このＴＳＢ接種物を滅菌生理食塩水で１：１０に希釈し（４ｍＬの接種物＋３６ｍＬの生理食塩水；〜１０７ＣＦＵ／ｍＬに等価）、マイクロタイタープレートに接種するために使用するまで氷上に維持する。
【００７１】
無作為に選択した単離物のコロニー数をカウントしてＣＦＵ／ウェルを確認する（ＴＳＢ接種物をＴＳＡ ＩＩ＋５％ＳＢまたはチョコレート寒天プレートで１０−５、１０−６に平板培養し、３５℃、ＣＯ２中で一夜インキュベートした）。
【００７２】
プレート充填
９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｄｙｎｅｘ）の全部のウェルに１００ＴＬの培地を充填する。ヘモフィルス試験培地プレートはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを試験するために準備する；カチオン調節ミュラー−ヒントン＋５％溶解ウマ血液プレートはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを試験するために準備する；カチオン調節ミュラー−ヒントンブロスプレートは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓを試験するために準備する。ＲＰＭＩ １６４０はＣａｎｄｉｄａを試験するために使用する。血清中の何らかの成分によって化合物が失活するか否かを判断するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ Ｓｍｉｔｈに対するＭＩＣをカチオン調節ミュラー−ヒントン及びカチオン調節ミュラー−ヒントン＋５０％ヒト血清中で測定する。充填プレートをプラスチックバッグに包装し（蒸発をできるだけ抑えるため）、冷凍保存し、使用前に解凍する。
【００７３】
化合物の調製
化合物は重量基準で調製する。１００％ＤＭＳＯ中で２ｍｇ／ｍＬとなるように化合物を調製し、次いで，ＤＭＳＯ／２×ＣＡＭＨＢの１：１希釈物で１ｍｇ／ｍＬに希釈する（最終濃度＝５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢ）。ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｅｅｐ Ｗｅｌｌ Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ９６ウェルプレートを使用し、５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢ中で化合物を１：１に系列希釈する（初期濃度１ｍｇ／ｍＬ）。
【００７４】
マイクロブロス希釈アッセイ
Ｆｉｎｎ全自動マルチチャンネルピペット（０．５−１０μＬ容）を使用し、６．４ＴＬの抗菌処理用溶液を充填マイクロタイタープレートのウェルに加える（第一ウェルの抗菌剤の濃度＝６４μｇ／ｍＬ；ＤＭＳＯの濃度＝３．２％）。各ウェルのＤＭＳＯの量を一定に維持しこのようにして抗菌剤を加える（化合物を溶解状態に維持し、ＤＭＳＯによる非特異的殺菌の可能性を考慮に入れる）。最終列は３．２％ＤＭＳＯの増殖対照を含む。
【００７５】
各アッセイで対照も試験する。対照は、化合物と同様にして調製したペニシリンＧ及びクロラムフェニコールである。血清タンパク質結合アッセイの対照としてエルタペネム（Ｅｒｔａｐｅｎｅｍ）を使用する。
【００７６】
プレート接種
ウェルあたり１．５ＴＬの接種物を送り出す全自動プレート接種デバイスであるＭＩＣ２０００システムを使用してマイクロタイタープレートの全部のウェルに（生理食塩水で希釈した）培養物を接種する。プレートを周囲空気中、３５℃でインキュベートする。無菌性の検証のために非接種プレートもインキュベートする。２２−２４時間のインキュベーション後に結果を記録する。プレートが増殖ゼロになるまで読取りを行った。ＭＩＣは、２２−２４時間のインキュベーション後の増殖をゼロにする抗菌剤の最も低いレベルであると定義される。
【００７７】
化合物Ｉは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＥ．ｃｏｌｉの種々の菌株に対して抗菌活性を示す。化合物Ｉはまた、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種（ＶＲＥ）、多剤耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、リネゾライド耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＥ．ｆａｅｃｉｕｍのような公知の多くの抗生物質に耐性の様々な種に対して抗菌活性を示す。これらの試験菌株に対する最小阻害濃度（ＭＩＣ）の値は、０．５−３２ｕｇ／ｍＬの範囲である。ＭＩＣはＮＣＣＬＳ指針に従って得られる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】Ｃ５Ｄ５Ｎ中の化合物Ｉの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図２】Ｃ５Ｄ５Ｎ中の化合物Ｉの１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉ：
【化１】
の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３８）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種またはその天然もしくは人工突然変異体を栄養培地で培養する段階と発酵ブロスから化合物Ｉを回収する段階とを含む、構造式Ｉ：
【化２】
の化合物の製造方法。
【請求項３】
発酵を約１０℃から約４０℃の範囲の温度で行う請求項２に記載の方法。
【請求項４】
発酵を約２８℃の温度で行う請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＡＴＣＣ受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３８）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種。
【請求項６】
医薬的に許容される担体と有効量の請求項１に記載の構造Ｉの化合物とを含む医薬組成物。
【請求項７】
有効量の請求項１に記載の式Ｉの化合物の投与を含む、治療を要する宿主の細菌感染症の治療方法。
【請求項１】
構造式Ｉ：
【化１】
の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３８）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種またはその天然もしくは人工突然変異体を栄養培地で培養する段階と発酵ブロスから化合物Ｉを回収する段階とを含む、構造式Ｉ：
【化２】
の化合物の製造方法。
【請求項３】
発酵を約１０℃から約４０℃の範囲の温度で行う請求項２に記載の方法。
【請求項４】
発酵を約２８℃の温度で行う請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＡＴＣＣ受託番号ＡＴＣＣ＃ＰＴＡ−５９４２（ＭＡ７３３８）のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種。
【請求項６】
医薬的に許容される担体と有効量の請求項１に記載の構造Ｉの化合物とを含む医薬組成物。
【請求項７】
有効量の請求項１に記載の式Ｉの化合物の投与を含む、治療を要する宿主の細菌感染症の治療方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５００３４３（Ｐ２００８−５００３４３Ａ）
【公表日】平成２０年１月１０日（２００８．１．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１５２０５（Ｐ２００７−５１５２０５）
【出願日】平成１７年５月２０日（２００５．５．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１７８３２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１５４００
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（３９００２３５２６）メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド (924)
【氏名又は名称原語表記】ＭＥＲＣＫ ＆ ＣＯＭＰＡＮＹ ＩＮＣＯＰＯＲＡＴＥＤ
【出願人】（５０４２２５７０３）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１月１０日（２００８．１．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月２０日（２００５．５．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１７８３２
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１５４００
【国際公開日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【出願人】（３９００２３５２６）メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド (924)
【氏名又は名称原語表記】ＭＥＲＣＫ ＆ ＣＯＭＰＡＮＹ ＩＮＣＯＰＯＲＡＴＥＤ
【出願人】（５０４２２５７０３）
【Ｆターム（参考）】
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