抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の製造方法
【課題】人間及び動物に対して抗疲労作用及び持久力増強作用を有する組成物の効率的な製造方法及びこれらを含む飲食品又は医薬品を提供すること。
【解決手段】ヒラタケ属担子菌を、−３０℃以下で、細胞の大きさ以下、好ましくは０．１μｍ〜３０μｍ、より好ましくは１μｍ〜２５μｍの微粒子に粉砕することにより、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を劣化させること無く、人間及び動物に効率よく吸収できる抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を製造することができる。
【解決手段】ヒラタケ属担子菌を、−３０℃以下で、細胞の大きさ以下、好ましくは０．１μｍ〜３０μｍ、より好ましくは１μｍ〜２５μｍの微粒子に粉砕することにより、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を劣化させること無く、人間及び動物に効率よく吸収できる抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を製造することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人間及び動物に対して抗疲労作用及び持久力増強作用を有する組成物の効率的な製造方法及びこれらを含む飲食品又は医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
健康志向が高まっている現在、スポーツと栄養又はスポーツと生理機能との関係についての認識が深まっている。このような中で、エネルギー補給、疲労回復、さらに瞬発力や持久力の増強、身体作りなど様々な場面でスポーツフーズが利用されている。スポーツフーズの中でも、抗疲労作用及び持久力増強作用を目的とするものは、スポーツ選手の成績向上のためのみならず、一般の人が仕事をする上でも持久力維持や、活力あふれる生活を送るためのものとして多く利用されている。
これらの抗疲労剤及び持久力増強剤の多くは、ビタミン類と生薬から成り、動物実験等の科学的根拠がないまま、古くからの伝承により効果を謳っているものが多い。また、これらの抗疲労剤等はカフェインやエチルアルコールを含有し、興奮、不眠、感覚鈍麻を伴う等の副作用が多いため、就寝前や自動車運転中等には服用することが好ましくなかった。このような実情において、抗疲労剤及び持久力増強剤には、明確な有効性の確認と、科学的根拠が求められている。
これら抗疲労作用及び持久力増強作用を有するものとして、担子菌に着目した研究が進められ、冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の培養菌糸体による強心作用及び抗疲労作用（特許文献１）や、霊芝の子実体による滋養強壮効果（特許文献２）、ウスヒラタケ菌子体による抗疲労作用及び持久力増強作用（特許文献３）が報告されている。
抗疲労作用及び持久力増強作用を有する健康食品素材を製剤化する方法としては、菌糸体からエキス成分を抽出する方法やクロマトグラフィー法等で精製する方法が報告されている。これらの方法で抽出された有効成分は、体内への吸収効率は良いが、生産時間が長い、方法が複雑である、収率が低い、安価に大量に生産できない等の問題があった。
一方、担子菌を微粉化し、それを健康食品素材として使用する場合、簡単に短時間で、安価に大量に生産することができるものの、単に微粉化するのみでは体内への吸収効率が悪い問題点があった。しかも、粉砕時に発生する熱により、有効成分の劣化や香気成分の逸脱等も問題であった。
【特許文献１】国際公開第９６／００５８０号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−６３９８１号公報
【特許文献３】特願２００４−３５３０９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、人間及び動物に対して抗疲労作用及び持久力増強作用を有する組成物の効率的な製造方法及びこれらを含む飲食品又は医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、ヒラタケ属担子菌由来成分及びその抽出物の粒径をより細かくして超微粒子にしたもの（超微粒子化体）を調製し、例えば、その粒子の平均粒径を０．１μｍ〜３０μｍ、より好ましくは１μｍ〜２５μｍにすることにより、細胞内の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物成分が外に出ており、そのため、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の小腸粘膜からの吸収効率が向上し、その結果、抗疲労効果を増大できることを見出した。さらに、−３０℃以下で微粒子化を行うことにより、熱劣化による抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱等防止できることも見出した。
すなわち、本発明は、以下の構成を有する。
（１）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を粉砕して細胞の大きさ以下である粒子を調製することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の製造方法。
（２）細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が０．１μｍ〜３０μｍの粒子である上記（１）に記載の製造方法。
（３）細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が１μｍ〜２５μｍの粒子である上記（１）又は（２）に記載の製造方法。
（４）粉砕を、−３０℃以下で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（５）粉砕を、−５０℃以下で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（６）粉砕を、液体窒素中で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（７）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである上記（１）〜（６）のいずれかに記載の製造方法。
（８）ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２２２）である上記（７）に記載の製造方法。
（９）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、培養菌糸体である上記（１）〜（８）のいずれかに記載の製造方法。
（１０）上記（１）〜（９）のいずれかに記載の製造方法により製造される抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物 。
（１１）上記（１０）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
（１２）上記（１０）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
（１３）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を−３０℃以下の冷却条件下で粉砕して得られる、平均粒径３０μｍ以下のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の微粒子。
（１４）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、あらかじめ凍結乾燥された乾燥物である、上記（１）〜（９）のいずれかに記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００５】
本発明により、ヒトや動物の疲労を軽減させることができる抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物及びそれを含有する飲食品又は医薬品等を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明について、以下に具体的に説明する。
本発明に関わるヒラタケ属担子菌としては、ヒラタケ属に分類される担子菌で有れば特に制限されないが、例えば、好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）等が挙げられる。さらに好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が挙げられる。
【０００７】
本発明に関わるウスヒラタケとしては、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、ヒジリタケ、クロアワビタケという名称でも市場に流通している。
本発明のウスヒラタケの一例として、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ S８２株が挙げられる。S８２株は自然界より単離された株であり、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ P−２０２２２として寄託(受理日平成１６年９月１４日)されている。
【０００８】
また、本発明に関わるヒラタケとしては、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、アワビタケ, カタヒラナバ, カンタケという名称でも市場に流通している。
本発明のヒラタケの一例としてＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓが挙げられる。これは、自然界より単離された株であり、菌じん研究所から分譲されたものである。
【０００９】
本発明のウスヒラタケ及びヒラタケには、さらに、これらの種の株に変異処理及び遺伝子操作を加え、目的成分の含有量や副生物の生成量を変化させた、変異体又は遺伝子組み換え体も含まれる。
ウスヒラタケ（のＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株）及びヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）の菌学的性質は以下のとおりである。
【００１０】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ P−２０２２２）の菌学的性質
（ａ）培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
以下の３種類のプレートにＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株を接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養1週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼及び実体顕微鏡ＳＺＨ１０（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はＫｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）に従った。
（１）ポテト・デキストロース寒天培地（商品名「ダイゴ」（日水製薬製））（ＰＤＡプレート）
（２）２％麦芽エキス寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＷＤ，ＵＳＡ）−１．５％寒天（ＭＥＡプレート）
（３）オートミール寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＷＤ，ＵＳＡ）１．５％寒天（ＯＡプレート）
【００１１】
２．生育温度試験
検体をＰＤＡプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で1週間培養し、巨視的観察を行った。
【００１２】
３．形態の微視的観察
菌体の微視的特徴の観察は、上記ＰＤＡプレートを用い２５℃で培養した菌体を直接採取してプレパラートを作成し、微分干渉顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス社製）で観察した。
【００１３】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
各種類の培養プレートにおける1週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面及び裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、下記のような特徴が認められた。
（１）ＰＤＡプレート：コロニー直径は４０〜５０mm、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。その他にコロニー表面上にＹｅｌｌｏｗｗｉｓｈ ｏｒａｎｇｅ（４Ａ−７）の浸出液の産生が認められた。
（２）ＭＥＡプレート：コロニー直径は４０〜４５mm、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。
（３）ＯＡプレート：コロニー直径は６０〜７０ｍｍ、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。
上記の（ ）内の数値は、Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）で用いられている色のコード番号を示す。
【００１４】
２．生育温度試験結果
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株をＰＤＡプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は１２〜１７ｍｍ。
培養温度２５℃：コロニー直径は４０〜４５ｍｍ。
培養温度２７℃：コロニー直径は３０〜３４ｍｍ。
培養温度３０℃：コロニー直径は３０〜３５ｍｍ。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００１５】
３．形態の微視的観察結果
栄養菌糸（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｈｙｐｈａｅ）は、寒天表面上もしくは寒天内に形成され、無色で（ｈｙａｌｉｎｅ）、隔壁を有し、かすがい連結（ｃｌａｍｐ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）の形成が認められたが、厚壁胞子（ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅ）の形成は認められなかった。生殖器官（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｏｒｇａｎ）については、1週間以上培養した平板において分生子（ｃｏｎｉｄｉｕｍ）等の生殖器官構造の形成は認められなかった。
【００１６】
(ｂ)生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件 ｐＨ ５〜６、温度 ２５℃
（２）生育の範囲 温度 ５〜３５℃
（３）フェノールオキシダーゼ反応 陽性
【００１７】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓの菌学的性質
（ａ）培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
ポテト・デキストロース寒天培地（商品名「ダイゴ」（日水製薬製））（ＰＤＡ）プレートにＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓを接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養１週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼及び実体顕微鏡ＳＺＨ１０（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はＫｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）に従った。
【００１８】
２．生育温度試験
検体をＰＤＡプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で1週間培養し、巨視的観察を行った。
【００１９】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
ＰＤＡプレートにおける1週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面及び裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、下記のような特徴が認められた。
コロニー直径は６０〜７０ｍｍ、色調は白色（１Ａ−１）、表面性状は綿毛状。
上記の（ ）内の数値は、Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）で用いられている色のコード番号を示す。
【００２０】
２．生育温度試験結果
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓをＰＤＡプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は５０〜６０ｍｍ。
培養温度２５℃：コロニー直径は６０〜７０ｍｍ。
培養温度３０℃：コロニー直径は４０〜５０ｍｍ。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００２１】
(ｂ)生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件 ｐＨ ５〜６、温度 ２５℃
（２）生育の範囲 温度 １０〜３５℃
【００２２】
本発明に用いる担子菌培養法は、液体培養、固体培養のいずれでもよく、培養条件の厳密なコントロールが可能な菌糸体の培養が望ましい。また、天然物及びポット培養等における子実体の栽培も同様に行うことができる。
【００２３】
本発明に用いる担子菌の培養法に使用する炭素源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる炭素源であれば何ら制限はないが、好ましくは、コーンスターチ、グルコース、マルトース、スクロース、ラクトース、澱粉、可溶性澱粉、セルロース、パルプ、マルツエキス、ビートモラセス、ケインモラセス、バレイショデンプン、キャッサバデンプン、ホエー、大豆油、オリーブ油、コーン油、綿実油、亜麻仁油等が挙げられ、好ましくは、コーンスターチ、グルコースが挙げられる。また、これら炭素源を併用して使用することもできる。
【００２４】
本発明の担子菌の培養に用いる窒素源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる窒素源であれば何ら制限はないが、好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、小麦ふすま、トウモロコシふすま、ＣＳＬ、ピーナッツミール、屠殺場廃棄物、魚粉、カツオエキス、肉エキス、カゼイン由来のペプトン、ポリペプトン、酵母エキス等の有機体窒素、ソイトン、カザミノ酸等のタンパク質分解物、硝酸カリウム、硝酸カルシウム等の硝酸体窒素、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモニウム体窒素、好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、酵母エキス、ＣＳＬが挙げられる。また、これら窒素源を併用して使用することもできる。
【００２５】
本発明の担子菌の培養に用いるミネラル源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できるミネラル源であれば何ら制限はないが、カリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、ナトリウム、クロライド等が挙げられ、好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、さらに好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウムが良い。
【００２６】
本発明の担子菌の培養に関わるｐＨとしては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、ｐＨ２．５〜８．５、さらに好ましくはｐＨ３．５〜７．５、さらに好ましくはｐＨ４．５〜６．５が良い。液体培地のｐＨはｐＨ２．５よりも低い場合、又はｐＨ８．５よりも高い場合、菌糸体の成長に著しく悪い影響を与える。
【００２７】
本発明の担子菌の培養に関わる温度としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、１５〜３５℃、さらに好ましくは１５〜３０℃、さらに好ましくは２０〜３０℃が良い。
【００２８】
本発明の担子菌を超微粒子化する粉砕方法は、所望の粒径を得ることができ、しかも、粉砕時の被処理物の温度が高温にならない限り、特に限定されるものではなく、公知の粉砕方法、例えば、ハンマーミル粉砕法、カッターミル粉砕法、ピンミル粉砕法、ジェットミル粉砕法、サイクロン粉砕法、又は、ボールミル粉砕法などを挙げることができる。
【００２９】
本発明で使用したサイクロン粉砕機は、図１に示すように、一対の対向する第１ローター５、第２ローター６を回転自在に支持する粉砕機本体９と、それら第１ローター５、第２と第２ローター６をそれぞれ個別に高速回転させる第１、第２高速回転機構１，２とから主になる。粉砕機本体９には、導入口７と排出口８が設けられている。第１ローター５、第２ローター６は、粉砕機本体９内に同軸上で対向し、間隔を任意の長さに設定し得るように設計されている。第１ローター５は第１高速回転モーター１によって、また、第２ローター６は第２高速回転モーター２によって正逆回転し得ると共に回転速度を調節し得るように構成されている。
【００３０】
サイクロン粉砕機は、例えば第１ローター５及び第２ローター６を逆方向に高速で回転させることにより、導入口７から導入された導入物の粒子同士の衝突による圧縮、衝撃、せん断力と、空気等の流体などの媒体を介した衝撃、せん断力とによって、所定の大きさに粉砕するように構成されている。また、粉砕粒径及び粒径分布は、第１ローター５及び第２ローター６の回転数や間隔を任意に可変させることによりを調節することができる。
【００３１】
このサイクロン粉砕機は、液体窒素（−１９６℃）で冷却した超低温状態の担子菌も粉砕させることができ、吸い込み空気や粉砕機本体の外周部を冷却することにより、簡単に冷却粉砕ができる。具体的には、液体窒素で冷却した導入口７から液体窒素で冷却した担子菌を入れ、凍結粉砕を行う。この粉砕法では、ローターの回転によって発生した熱による抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の劣化や香気成分の逸脱を防ぐことができる。
【００３２】
以上の粉砕方法を用いれば、超低温状態で、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物を含有する担子菌の細胞壁を破砕することができる。その結果、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が、劣化することなく細胞外に出て、体内で効率よく吸収されやすくなる。
【００３３】
本発明の担子菌の超微粒子化によって粉砕された粉砕品の平均粒径は、生体の細胞の大きさ（細胞サイズ）以下であれば特に制限しないが、好ましくは０．１μｍ〜３０μｍで、特に好ましくは１μｍ〜２５μｍである。その粉砕品の８０％は、平均粒径の３倍以下であることが好ましく、より好ましくは２．５倍以下である。前記粒径を有する粉砕物では、有用成分の溶出及び体内への吸収が向上する。すなわち、本発明の超微粒子化した担子菌は、細胞の大きさ以下に粉砕されているため、細胞内の成分が外に出ており、そのため、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の吸収効率が向上するものと考えられる。
【００３４】
本発明の担子菌の超微粒子化を行う際の温度は、熱劣化による抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱等が起こらない限り、特に限定されるものではいが、−３０℃以下で行うことが好ましく、より好ましくは−５０℃以下である。また、液体窒素中や液体酸素中で粉砕しても良い。この凍結粉砕方法では、粉砕時に高温となることがないため、抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱することがない。
【００３５】
本発明において、担子菌の超微粒子の測定方法については、通常の粒子、特に分散化状態にある粒子の測定方法を利用して行うことができる。例えば、粒径分布計を使用して、レーザー回折・錯乱式粒径分布測定法により測定することができる。
【００３６】
本発明で用いるヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物は、その子実体、菌糸体、培養物をそのまま、あるいはその乾燥体、もしくはその乾燥体を粉砕した粉末から得ることができる。このうちでも乾燥体が好ましく用いられる。
さらに、子実体、菌糸体、培養物から溶媒で抽出して得ることもできる。
なお、アルコール等の抽出成分には、水に不要な固形物もあり、これらも本発明の粉砕の対象として用いることができる。
【００３７】
本発明の抽出は、水抽出、熱水抽出、酸性下での抽出、アルカリ性下での抽出、メタノール、エタノール、プロパノール、ヘキサン、酢酸又は酢酸エチル等の有機溶媒抽出、超臨界水、超臨界二酸化炭素等の超臨界溶媒抽出等が挙げられる。さらに、培地中に有効成分が放出される際には培養物が液体の場合は、培養液を濃縮して用いることもでき、また、培養液を上記の方法で抽出することによっても用いることができる。抽出物は、単一成分でも、複数成分含んでいるものでも良い。さらに、子実体、菌糸体、培養液等の各種分画操作を経て作用の強い画分のみを抽出した抽出物を用いることもできる。
【００３８】
本発明の超微粒子化した担子菌の場合、細胞粉砕によって抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が細胞外に出ているため、また、比表面積が増加するために、溶媒等による抽出が効率的となる。
【００３９】
本発明における「疲労」とは、生体がある機能を発揮した結果、その機能が低下する現象をいう。これらに限定されるものではないが例えば、「水泳をした後の肉体疲労」「長時間にわたり、知的労働をした後の精神疲労」「毎日の通常生活においても蓄積する肉体的及び精神的な複合疲労」等を挙げることができる。
「抗疲労作用」とは本発明の組成物等を飲食服用することにより、そのような「疲労」状態を軽減させる作用及び「疲労」状態よりの回復を促進する作用、あるいは「疲労」を予防し、疲れにくくする作用などをいう。
「持久力」とは、ある一定の運動状態を継続して行うことができる能力をいい、「持久力増強作用」とは、その継続してできる能力が増強される作用、例えば、具体的には継続時間が延びることにより確認することができる。
【００４０】
本発明における抗疲労作用及び持久力増強作用の評価方法は、抗疲労作用及び持久力増強作用を評価できる方法で有れば特に制限はないが、強制水泳法、京大松元式運動量測定法、自発運動測定法、限界走行時間法、水浸拘束ストレス負荷等が挙げられる。特に、強制水泳法は、動物個体における総合的な反応の変化による抗疲労作用及び持久力増強作用を評価するために常用される試験である。水を投与したコントロール群とサンプルを投与した試験群を比較した時、試験群の遊泳時間が延長した場合は、サンプルが抗疲労作用及び持久力増強作用を有すること示す。
【００４１】
上記の方法で得られたヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を持つ組成物は、飲食品としてあるいは医薬品として用いることができる。医薬品としては、抗疲労剤又は持久力増強剤がこれに相当する。
【００４２】
医薬品としては、組成物それ自体で、あるいは常法に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせることもでき、種々の製剤化が可能である。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、非経口投与剤としては、注射剤のほか、坐剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調整することができる。
【００４３】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。
【００４４】
本発明に関わる抗疲労組成物及び持久力増強組成物を含有する医薬品の形態におけるヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００４５】
動物においても人間用と同様に製剤化すればよい。動物の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００４６】
本発明の食品としては、例えば、ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。この機能性食品は、そのまま食用に供してもよく、また種々の食品（例えばハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、パン、バター、粉乳、菓子など）に添加して使用しても、水、酒類、果汁、牛乳、清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。
【００４７】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、対象の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされる。
【００４８】
動物においても同様にヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。また、飼料及びペットフードに添加して使用しても、水などの飲料水に添加してもよい。
【００４９】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、動物の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされる。
【実施例】
【００５０】
以下に本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
〔製造例１〕
乾燥ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株）菌糸体の製造
（種菌の調製）
保存していたウスヒラタケの斜面培地培養菌糸体をマルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％、寒天１．５％の培地組成で作製した寒天培地に接種し、２８℃において７日間平面培養した。これを種菌として用いた。
（フラスコシード培養のための液体培地の調製）
次に液体培地を作る。マルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％の培地組成で液体培地を作製し、５００ｍＬ三角フラスコに２００ｍＬずつ分注した後オートクレーブ滅菌した。
（フラスコシード培養）
上記のフラスコシード培養のための液体培地を室温まで放冷した後、種菌を内径４ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、そのディスク片６つを１．５ｍＬ容ポリプロピレン製チューブに移し、ホモジナイザーペッスルでホモジナイズ後に接種した。接種後は温度２８℃、暗条件下で５日間振とう培養（１２０ｒｐｍ）を行った。これをフラスコシード培養の培養液をした。
（３０Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、３０Lジャーシード培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、３０Ｌジャーファーメンターに１５Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（３０Ｌジャーシード培養）
上記の３０Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、フラスコシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌１２０〜２６５ｒｐｍ、通気０．２ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（２００Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、２００Lジャーシード培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、２００Ｌジャーファーメンターに１２０Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（２００Ｌタンクシード培養）
上記の２００Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、３０Ｌジャーシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌６０〜１８０ｒｐｍ、通気０．２〜０．４ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（５ｋLタンク本培養のための液体培地の調製）
次に、５ｋLタンク本培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、５ｋLタンクに３ｋＬ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（５ｋLタンク本培養）
上記の５ｋLタンク本培養のための液体培地を室温まで冷却した後、２００Ｌタンクシード培養の培養液を４．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌６０〜１３０ｒｐｍ、通気０．２〜０．５ｖｖｍ、暗条件下で５日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行い、培養開始３日目にはｐＨを一度ｐＨ７．２まで上げた。
（集菌と乾燥）
培養を始めてから５日後に、菌糸体をろ過してから集菌し、そのケーキ部分を回収した。解砕したウスヒラタケ菌糸体のブロック（含水率９４．０％Ｗ．Ｂ．）３ｋｇ を専用トレー（５００ｍｍ ×７００ｍｍ）に充填し、−３０ ℃で２４時間予備凍結した。なお、「Ｗ．Ｂ．」は湿潤重量（ｗｅｔ ｂａｓｅ）を意味する。予備凍結したウスヒラタケ菌糸体を減圧条件下で凍結乾燥し、凍結乾燥品０．１８ｋｇ を得た。凍結乾燥時のウスヒラタケ菌糸体の最高温度は３５ ℃であり、凍結乾燥を完了するまで３０ 時間を要した。凍結乾燥品の含水率は２．７８％Ｗ．Ｂ．であった。
【００５１】
〔実施例１〕
（ウスヒラタケの超微粒子化）
上記の乾燥ウスヒラタケ菌糸体の製造工程に従って得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体５．０ｋｇをサイクロン粉砕機で粉砕した。図１に示す同体摩擦粉砕機の第１ローター、第２ローターを６０００ｒｐｍ（粒子速度：２５７ｍ／秒）で回転させ、全体を液体窒素（ＬＮ２、−１９６℃）で冷却し、排出口の温度が−５０℃に保持されるように導入口から液体窒素（ＬＮ２、−１９６℃）を導入した。そこに液体窒素で冷却した乾燥ウスヒラタケ菌子体５．０ｋｇを入れ、１０分間粉砕を行った。得られた粉砕品の粒径分布を図２に示す。平均粒径は２３．７μｍであり、全粒子の８０％は、３９．４μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕後のウスヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このようにして得られた粉砕品を後述する抗疲労効果の測定試験に用いた。
【００５２】
〔比較例１〕
図１に示す同体摩擦粉砕機の第１ローター、第２ローターを５５００ｒｐｍで回転させた以外、実施例１と同様の方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は３９．５μｍであり、全粒子の８０％は、６６．２μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕後のウスヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このようにして得られた粉砕品を抗疲労効果の測定試験に用いた。
【００５３】
（抗疲労効果の測定試験）
５週齢の雄性ｄｄYマウスを用い、６日間の予備飼育後、１群１０匹で３群に分けた。群構成は、水を投与する対照群、実施例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群、比較例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群とし、３週間連続経口投与を行った。投与後にマウスに体重の８．５％の重りを付加して強制水泳させ、疲労困憊し頭部が完全に７秒間水中に沈むまでの時間を測定した。その結果を表１に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊はそれぞれ危険率５％で、＊＊はそれぞれ危険率１％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔｅｓｔ）。
【００５４】
これらの結果より、平均粒径が３０μｍ以下の乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例１）の遊泳時間が、３０μｍ以上の乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例１）の遊泳時間より、有意に延長されることが判った。粒径の小さい乾燥ウスヒラタケ菌子体の場合、菌子体が体内に吸収される効率、及び、菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物が体液に溶け出し、それら組成物が体内に吸収される効率が向上したものと考えられる。
【００５５】
〔比較例２〕
サイクロン粉砕機及び乾燥ウスヒラタケ菌子体を液体窒素で冷却しない以外は、実施例１と同様の製造方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は２９．６μｍであり、全粒子の８０％は、４５．３μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕前の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いと異なっていた。このようにして得られた粉砕品を抗疲労効果の測定試験に用いた。
抗疲労効果の測定は、群構成を、水を投与する対照群、実施例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌糸体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群及び比較例２で得られた乾燥ウスヒラタケ菌糸体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群とし、上述した実施例１と同様の方法により行った。
その結果を表２に示す。
【００５６】
これらの結果より、液体窒素（−１９６℃）で冷却しながら粉砕した乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例１）の遊泳時間が、冷却しないで粉砕した乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例２）の遊泳時間より、顕著に延長されることが判った。冷却しない場合、ローターの回転のために粉砕機本体内の温度が１１０℃以上の高温となり、ウスヒラタケ菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が熱劣化したものと考えられる。
【００５７】
〔製造例２〕
乾燥ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）菌糸体の製造
（種菌の調製）
保存していたヒラタケの斜面培地培養菌糸体をマルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％、寒天１．５％の培地組成で作製した寒天培地に接種し、２８℃において７日間平面培養した。これを種菌として用いた。
（フラスコシード培養）
上記のフラスコシード培養のための液体培地を室温まで放冷した後、種菌を内径４ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、そのディスク片６つを１．５ｍＬ容ポリプロピレン製チューブに移し、ホモジナイザーペッスルでホモジナイズ後に接種した。接種後は温度２８℃、暗条件下で５日間振とう培養（１２０ｒｐｍ）を行った。これをフラスコシード培養の培養液をした。
（３０Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、３０Lジャーシード培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地に移して７日間の撹拌培養を行った。培養槽は１０Ｌ容のものを用い、ＭＹ液体培地を作製し、３０Ｌジャーファーメンターに１５Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（３０Ｌジャーシード培養）
上記の３０Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、フラスコシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌１２０〜２６５ｒｐｍ、通気０．２ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（２００Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、２００Lジャーシード培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地を作製し、２００Ｌジャーファーメンターに１２０Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（２００Ｌタンクシード培養）
上記の２００Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、３０Ｌジャーシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌６０〜１８０ｒｐｍ、通気０．２〜０．４ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（５ｋLタンク本培養のための液体培地の調製）
次に５ｋLタンク本培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地を作製し、５ｋLタンクに３ｋＬ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（５ｋLタンク本培養）
上記の５ｋLタンク本培養のための液体培地を室温まで冷却した後、２００Ｌタンクシード培養の培養液を４．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌６０〜１３０ｒｐｍ、通気０．２〜０．５ｖｖｍ、暗条件下で５日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（集菌と乾燥）
培養を始めてから５日後に、菌糸体をろ過してから集菌し、そのケーキ部分を回収した。解砕したヒラタケ菌糸体のブロック（含水率９４．０％Ｗ．Ｂ．）３ｋｇ を専用トレー（５００ｍｍ ×７００ｍｍ）に充填し、−３０ ℃で２４時間予備凍結した。なお、「Ｗ．Ｂ．」は湿潤重量（ｗｅｔ ｂａｓｅ）を意味する。予備凍結したヒラタケ菌糸体を減圧条件下で凍結乾燥し、凍結乾燥品０．１８ｋｇ を得た。凍結乾燥時のヒラタケ菌糸体の最高温度は３５ ℃であり、凍結乾燥を完了するまで３０ 時間を要した。凍結乾燥品の含水率は２．７８％Ｗ．Ｂ．であった。
【００５８】
〔実施例２〕
（ヒラタケの超微粒子化）
実施例１と同様の方法で、ヒラタケの超微粒子化を行った。得られた粉砕品の粒径分布を図３に示す。平均粒径は２３．３μｍであり、全粒子の８０％は、３４．２μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕前の乾燥ヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このサンプルを実施例１と同様の方法で、抗疲労効果測定試験を行った。その結果を表３に示す。
【００５９】
〔比較例３〕
製造例１の乾燥ヒラタケ菌子体を比較例１と同様の方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は３８．５μｍであり、全粒子の８０％は、６４．５μｍ以下であることが判った。このサンプルを実施例１と同様の方法で、抗疲労効果測定試験を行った。その結果を表３に示す。
【００６０】
これらの結果より、平均粒径が３０μｍ以下の乾燥ヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例２）の遊泳時間が、３０μｍ以上の乾燥ヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例３）の遊泳時間より、有意に延長されることが判った。粒径の小さい乾燥ヒラタケ菌子体の場合、菌子体が体内に吸収される効率、及び、菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物が体液に溶け出し、それら組成物が体内に吸収される効率が向上したものと考えられる。
【００６１】
【表１】
【表２】
【表３】
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】サイクロン粉砕機の一例を示す構成図である。
【図２】乾燥ウスヒラタケ菌子体をサイクロン粉砕機で粉砕した粒径分布を示す図である。
【図３】乾燥ヒラタケ菌子体をサイクロン粉砕機で粉砕した粒径分布を示す図である。
【符号の説明】
【００６３】
１ 第１高速回転モーター
２ 第２高速回転モーター
３ 第１回転軸
４ 第２回転軸
５ 第１ローター
６ 第２ローター
７ 導入口
８ 排出口
９ 粉砕機本体
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人間及び動物に対して抗疲労作用及び持久力増強作用を有する組成物の効率的な製造方法及びこれらを含む飲食品又は医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
健康志向が高まっている現在、スポーツと栄養又はスポーツと生理機能との関係についての認識が深まっている。このような中で、エネルギー補給、疲労回復、さらに瞬発力や持久力の増強、身体作りなど様々な場面でスポーツフーズが利用されている。スポーツフーズの中でも、抗疲労作用及び持久力増強作用を目的とするものは、スポーツ選手の成績向上のためのみならず、一般の人が仕事をする上でも持久力維持や、活力あふれる生活を送るためのものとして多く利用されている。
これらの抗疲労剤及び持久力増強剤の多くは、ビタミン類と生薬から成り、動物実験等の科学的根拠がないまま、古くからの伝承により効果を謳っているものが多い。また、これらの抗疲労剤等はカフェインやエチルアルコールを含有し、興奮、不眠、感覚鈍麻を伴う等の副作用が多いため、就寝前や自動車運転中等には服用することが好ましくなかった。このような実情において、抗疲労剤及び持久力増強剤には、明確な有効性の確認と、科学的根拠が求められている。
これら抗疲労作用及び持久力増強作用を有するものとして、担子菌に着目した研究が進められ、冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の培養菌糸体による強心作用及び抗疲労作用（特許文献１）や、霊芝の子実体による滋養強壮効果（特許文献２）、ウスヒラタケ菌子体による抗疲労作用及び持久力増強作用（特許文献３）が報告されている。
抗疲労作用及び持久力増強作用を有する健康食品素材を製剤化する方法としては、菌糸体からエキス成分を抽出する方法やクロマトグラフィー法等で精製する方法が報告されている。これらの方法で抽出された有効成分は、体内への吸収効率は良いが、生産時間が長い、方法が複雑である、収率が低い、安価に大量に生産できない等の問題があった。
一方、担子菌を微粉化し、それを健康食品素材として使用する場合、簡単に短時間で、安価に大量に生産することができるものの、単に微粉化するのみでは体内への吸収効率が悪い問題点があった。しかも、粉砕時に発生する熱により、有効成分の劣化や香気成分の逸脱等も問題であった。
【特許文献１】国際公開第９６／００５８０号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−６３９８１号公報
【特許文献３】特願２００４−３５３０９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、人間及び動物に対して抗疲労作用及び持久力増強作用を有する組成物の効率的な製造方法及びこれらを含む飲食品又は医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、ヒラタケ属担子菌由来成分及びその抽出物の粒径をより細かくして超微粒子にしたもの（超微粒子化体）を調製し、例えば、その粒子の平均粒径を０．１μｍ〜３０μｍ、より好ましくは１μｍ〜２５μｍにすることにより、細胞内の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物成分が外に出ており、そのため、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の小腸粘膜からの吸収効率が向上し、その結果、抗疲労効果を増大できることを見出した。さらに、−３０℃以下で微粒子化を行うことにより、熱劣化による抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱等防止できることも見出した。
すなわち、本発明は、以下の構成を有する。
（１）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を粉砕して細胞の大きさ以下である粒子を調製することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の製造方法。
（２）細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が０．１μｍ〜３０μｍの粒子である上記（１）に記載の製造方法。
（３）細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が１μｍ〜２５μｍの粒子である上記（１）又は（２）に記載の製造方法。
（４）粉砕を、−３０℃以下で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（５）粉砕を、−５０℃以下で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（６）粉砕を、液体窒素中で行う上記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（７）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである上記（１）〜（６）のいずれかに記載の製造方法。
（８）ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２２２）である上記（７）に記載の製造方法。
（９）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、培養菌糸体である上記（１）〜（８）のいずれかに記載の製造方法。
（１０）上記（１）〜（９）のいずれかに記載の製造方法により製造される抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物 。
（１１）上記（１０）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
（１２）上記（１０）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
（１３）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を−３０℃以下の冷却条件下で粉砕して得られる、平均粒径３０μｍ以下のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の微粒子。
（１４）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、あらかじめ凍結乾燥された乾燥物である、上記（１）〜（９）のいずれかに記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００５】
本発明により、ヒトや動物の疲労を軽減させることができる抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物及びそれを含有する飲食品又は医薬品等を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明について、以下に具体的に説明する。
本発明に関わるヒラタケ属担子菌としては、ヒラタケ属に分類される担子菌で有れば特に制限されないが、例えば、好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）等が挙げられる。さらに好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が挙げられる。
【０００７】
本発明に関わるウスヒラタケとしては、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、ヒジリタケ、クロアワビタケという名称でも市場に流通している。
本発明のウスヒラタケの一例として、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ S８２株が挙げられる。S８２株は自然界より単離された株であり、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ P−２０２２２として寄託(受理日平成１６年９月１４日)されている。
【０００８】
また、本発明に関わるヒラタケとしては、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、アワビタケ, カタヒラナバ, カンタケという名称でも市場に流通している。
本発明のヒラタケの一例としてＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓが挙げられる。これは、自然界より単離された株であり、菌じん研究所から分譲されたものである。
【０００９】
本発明のウスヒラタケ及びヒラタケには、さらに、これらの種の株に変異処理及び遺伝子操作を加え、目的成分の含有量や副生物の生成量を変化させた、変異体又は遺伝子組み換え体も含まれる。
ウスヒラタケ（のＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株）及びヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）の菌学的性質は以下のとおりである。
【００１０】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ P−２０２２２）の菌学的性質
（ａ）培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
以下の３種類のプレートにＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株を接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養1週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼及び実体顕微鏡ＳＺＨ１０（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はＫｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）に従った。
（１）ポテト・デキストロース寒天培地（商品名「ダイゴ」（日水製薬製））（ＰＤＡプレート）
（２）２％麦芽エキス寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＷＤ，ＵＳＡ）−１．５％寒天（ＭＥＡプレート）
（３）オートミール寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＷＤ，ＵＳＡ）１．５％寒天（ＯＡプレート）
【００１１】
２．生育温度試験
検体をＰＤＡプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で1週間培養し、巨視的観察を行った。
【００１２】
３．形態の微視的観察
菌体の微視的特徴の観察は、上記ＰＤＡプレートを用い２５℃で培養した菌体を直接採取してプレパラートを作成し、微分干渉顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス社製）で観察した。
【００１３】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
各種類の培養プレートにおける1週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面及び裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、下記のような特徴が認められた。
（１）ＰＤＡプレート：コロニー直径は４０〜５０mm、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。その他にコロニー表面上にＹｅｌｌｏｗｗｉｓｈ ｏｒａｎｇｅ（４Ａ−７）の浸出液の産生が認められた。
（２）ＭＥＡプレート：コロニー直径は４０〜４５mm、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。
（３）ＯＡプレート：コロニー直径は６０〜７０ｍｍ、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状。
上記の（ ）内の数値は、Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）で用いられている色のコード番号を示す。
【００１４】
２．生育温度試験結果
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株をＰＤＡプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は１２〜１７ｍｍ。
培養温度２５℃：コロニー直径は４０〜４５ｍｍ。
培養温度２７℃：コロニー直径は３０〜３４ｍｍ。
培養温度３０℃：コロニー直径は３０〜３５ｍｍ。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００１５】
３．形態の微視的観察結果
栄養菌糸（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｈｙｐｈａｅ）は、寒天表面上もしくは寒天内に形成され、無色で（ｈｙａｌｉｎｅ）、隔壁を有し、かすがい連結（ｃｌａｍｐ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）の形成が認められたが、厚壁胞子（ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅ）の形成は認められなかった。生殖器官（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｏｒｇａｎ）については、1週間以上培養した平板において分生子（ｃｏｎｉｄｉｕｍ）等の生殖器官構造の形成は認められなかった。
【００１６】
(ｂ)生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件 ｐＨ ５〜６、温度 ２５℃
（２）生育の範囲 温度 ５〜３５℃
（３）フェノールオキシダーゼ反応 陽性
【００１７】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓの菌学的性質
（ａ）培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
ポテト・デキストロース寒天培地（商品名「ダイゴ」（日水製薬製））（ＰＤＡ）プレートにＰｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓを接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養１週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼及び実体顕微鏡ＳＺＨ１０（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はＫｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）に従った。
【００１８】
２．生育温度試験
検体をＰＤＡプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で1週間培養し、巨視的観察を行った。
【００１９】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
ＰＤＡプレートにおける1週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面及び裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、下記のような特徴が認められた。
コロニー直径は６０〜７０ｍｍ、色調は白色（１Ａ−１）、表面性状は綿毛状。
上記の（ ）内の数値は、Ｋｏｒｎｅｒｕｐ ａｎｄ Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）で用いられている色のコード番号を示す。
【００２０】
２．生育温度試験結果
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓをＰＤＡプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は５０〜６０ｍｍ。
培養温度２５℃：コロニー直径は６０〜７０ｍｍ。
培養温度３０℃：コロニー直径は４０〜５０ｍｍ。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００２１】
(ｂ)生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件 ｐＨ ５〜６、温度 ２５℃
（２）生育の範囲 温度 １０〜３５℃
【００２２】
本発明に用いる担子菌培養法は、液体培養、固体培養のいずれでもよく、培養条件の厳密なコントロールが可能な菌糸体の培養が望ましい。また、天然物及びポット培養等における子実体の栽培も同様に行うことができる。
【００２３】
本発明に用いる担子菌の培養法に使用する炭素源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる炭素源であれば何ら制限はないが、好ましくは、コーンスターチ、グルコース、マルトース、スクロース、ラクトース、澱粉、可溶性澱粉、セルロース、パルプ、マルツエキス、ビートモラセス、ケインモラセス、バレイショデンプン、キャッサバデンプン、ホエー、大豆油、オリーブ油、コーン油、綿実油、亜麻仁油等が挙げられ、好ましくは、コーンスターチ、グルコースが挙げられる。また、これら炭素源を併用して使用することもできる。
【００２４】
本発明の担子菌の培養に用いる窒素源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる窒素源であれば何ら制限はないが、好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、小麦ふすま、トウモロコシふすま、ＣＳＬ、ピーナッツミール、屠殺場廃棄物、魚粉、カツオエキス、肉エキス、カゼイン由来のペプトン、ポリペプトン、酵母エキス等の有機体窒素、ソイトン、カザミノ酸等のタンパク質分解物、硝酸カリウム、硝酸カルシウム等の硝酸体窒素、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモニウム体窒素、好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、酵母エキス、ＣＳＬが挙げられる。また、これら窒素源を併用して使用することもできる。
【００２５】
本発明の担子菌の培養に用いるミネラル源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できるミネラル源であれば何ら制限はないが、カリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、ナトリウム、クロライド等が挙げられ、好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、さらに好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウムが良い。
【００２６】
本発明の担子菌の培養に関わるｐＨとしては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、ｐＨ２．５〜８．５、さらに好ましくはｐＨ３．５〜７．５、さらに好ましくはｐＨ４．５〜６．５が良い。液体培地のｐＨはｐＨ２．５よりも低い場合、又はｐＨ８．５よりも高い場合、菌糸体の成長に著しく悪い影響を与える。
【００２７】
本発明の担子菌の培養に関わる温度としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、１５〜３５℃、さらに好ましくは１５〜３０℃、さらに好ましくは２０〜３０℃が良い。
【００２８】
本発明の担子菌を超微粒子化する粉砕方法は、所望の粒径を得ることができ、しかも、粉砕時の被処理物の温度が高温にならない限り、特に限定されるものではなく、公知の粉砕方法、例えば、ハンマーミル粉砕法、カッターミル粉砕法、ピンミル粉砕法、ジェットミル粉砕法、サイクロン粉砕法、又は、ボールミル粉砕法などを挙げることができる。
【００２９】
本発明で使用したサイクロン粉砕機は、図１に示すように、一対の対向する第１ローター５、第２ローター６を回転自在に支持する粉砕機本体９と、それら第１ローター５、第２と第２ローター６をそれぞれ個別に高速回転させる第１、第２高速回転機構１，２とから主になる。粉砕機本体９には、導入口７と排出口８が設けられている。第１ローター５、第２ローター６は、粉砕機本体９内に同軸上で対向し、間隔を任意の長さに設定し得るように設計されている。第１ローター５は第１高速回転モーター１によって、また、第２ローター６は第２高速回転モーター２によって正逆回転し得ると共に回転速度を調節し得るように構成されている。
【００３０】
サイクロン粉砕機は、例えば第１ローター５及び第２ローター６を逆方向に高速で回転させることにより、導入口７から導入された導入物の粒子同士の衝突による圧縮、衝撃、せん断力と、空気等の流体などの媒体を介した衝撃、せん断力とによって、所定の大きさに粉砕するように構成されている。また、粉砕粒径及び粒径分布は、第１ローター５及び第２ローター６の回転数や間隔を任意に可変させることによりを調節することができる。
【００３１】
このサイクロン粉砕機は、液体窒素（−１９６℃）で冷却した超低温状態の担子菌も粉砕させることができ、吸い込み空気や粉砕機本体の外周部を冷却することにより、簡単に冷却粉砕ができる。具体的には、液体窒素で冷却した導入口７から液体窒素で冷却した担子菌を入れ、凍結粉砕を行う。この粉砕法では、ローターの回転によって発生した熱による抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の劣化や香気成分の逸脱を防ぐことができる。
【００３２】
以上の粉砕方法を用いれば、超低温状態で、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物を含有する担子菌の細胞壁を破砕することができる。その結果、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が、劣化することなく細胞外に出て、体内で効率よく吸収されやすくなる。
【００３３】
本発明の担子菌の超微粒子化によって粉砕された粉砕品の平均粒径は、生体の細胞の大きさ（細胞サイズ）以下であれば特に制限しないが、好ましくは０．１μｍ〜３０μｍで、特に好ましくは１μｍ〜２５μｍである。その粉砕品の８０％は、平均粒径の３倍以下であることが好ましく、より好ましくは２．５倍以下である。前記粒径を有する粉砕物では、有用成分の溶出及び体内への吸収が向上する。すなわち、本発明の超微粒子化した担子菌は、細胞の大きさ以下に粉砕されているため、細胞内の成分が外に出ており、そのため、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物の吸収効率が向上するものと考えられる。
【００３４】
本発明の担子菌の超微粒子化を行う際の温度は、熱劣化による抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱等が起こらない限り、特に限定されるものではいが、−３０℃以下で行うことが好ましく、より好ましくは−５０℃以下である。また、液体窒素中や液体酸素中で粉砕しても良い。この凍結粉砕方法では、粉砕時に高温となることがないため、抗疲労効果の損失や香気成分の逸脱することがない。
【００３５】
本発明において、担子菌の超微粒子の測定方法については、通常の粒子、特に分散化状態にある粒子の測定方法を利用して行うことができる。例えば、粒径分布計を使用して、レーザー回折・錯乱式粒径分布測定法により測定することができる。
【００３６】
本発明で用いるヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物は、その子実体、菌糸体、培養物をそのまま、あるいはその乾燥体、もしくはその乾燥体を粉砕した粉末から得ることができる。このうちでも乾燥体が好ましく用いられる。
さらに、子実体、菌糸体、培養物から溶媒で抽出して得ることもできる。
なお、アルコール等の抽出成分には、水に不要な固形物もあり、これらも本発明の粉砕の対象として用いることができる。
【００３７】
本発明の抽出は、水抽出、熱水抽出、酸性下での抽出、アルカリ性下での抽出、メタノール、エタノール、プロパノール、ヘキサン、酢酸又は酢酸エチル等の有機溶媒抽出、超臨界水、超臨界二酸化炭素等の超臨界溶媒抽出等が挙げられる。さらに、培地中に有効成分が放出される際には培養物が液体の場合は、培養液を濃縮して用いることもでき、また、培養液を上記の方法で抽出することによっても用いることができる。抽出物は、単一成分でも、複数成分含んでいるものでも良い。さらに、子実体、菌糸体、培養液等の各種分画操作を経て作用の強い画分のみを抽出した抽出物を用いることもできる。
【００３８】
本発明の超微粒子化した担子菌の場合、細胞粉砕によって抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が細胞外に出ているため、また、比表面積が増加するために、溶媒等による抽出が効率的となる。
【００３９】
本発明における「疲労」とは、生体がある機能を発揮した結果、その機能が低下する現象をいう。これらに限定されるものではないが例えば、「水泳をした後の肉体疲労」「長時間にわたり、知的労働をした後の精神疲労」「毎日の通常生活においても蓄積する肉体的及び精神的な複合疲労」等を挙げることができる。
「抗疲労作用」とは本発明の組成物等を飲食服用することにより、そのような「疲労」状態を軽減させる作用及び「疲労」状態よりの回復を促進する作用、あるいは「疲労」を予防し、疲れにくくする作用などをいう。
「持久力」とは、ある一定の運動状態を継続して行うことができる能力をいい、「持久力増強作用」とは、その継続してできる能力が増強される作用、例えば、具体的には継続時間が延びることにより確認することができる。
【００４０】
本発明における抗疲労作用及び持久力増強作用の評価方法は、抗疲労作用及び持久力増強作用を評価できる方法で有れば特に制限はないが、強制水泳法、京大松元式運動量測定法、自発運動測定法、限界走行時間法、水浸拘束ストレス負荷等が挙げられる。特に、強制水泳法は、動物個体における総合的な反応の変化による抗疲労作用及び持久力増強作用を評価するために常用される試験である。水を投与したコントロール群とサンプルを投与した試験群を比較した時、試験群の遊泳時間が延長した場合は、サンプルが抗疲労作用及び持久力増強作用を有すること示す。
【００４１】
上記の方法で得られたヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を持つ組成物は、飲食品としてあるいは医薬品として用いることができる。医薬品としては、抗疲労剤又は持久力増強剤がこれに相当する。
【００４２】
医薬品としては、組成物それ自体で、あるいは常法に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせることもでき、種々の製剤化が可能である。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、非経口投与剤としては、注射剤のほか、坐剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調整することができる。
【００４３】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。
【００４４】
本発明に関わる抗疲労組成物及び持久力増強組成物を含有する医薬品の形態におけるヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００４５】
動物においても人間用と同様に製剤化すればよい。動物の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００４６】
本発明の食品としては、例えば、ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。この機能性食品は、そのまま食用に供してもよく、また種々の食品（例えばハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、パン、バター、粉乳、菓子など）に添加して使用しても、水、酒類、果汁、牛乳、清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。
【００４７】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、対象の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされる。
【００４８】
動物においても同様にヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。また、飼料及びペットフードに添加して使用しても、水などの飲料水に添加してもよい。
【００４９】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、動物の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされる。
【実施例】
【００５０】
以下に本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
〔製造例１〕
乾燥ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株）菌糸体の製造
（種菌の調製）
保存していたウスヒラタケの斜面培地培養菌糸体をマルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％、寒天１．５％の培地組成で作製した寒天培地に接種し、２８℃において７日間平面培養した。これを種菌として用いた。
（フラスコシード培養のための液体培地の調製）
次に液体培地を作る。マルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％の培地組成で液体培地を作製し、５００ｍＬ三角フラスコに２００ｍＬずつ分注した後オートクレーブ滅菌した。
（フラスコシード培養）
上記のフラスコシード培養のための液体培地を室温まで放冷した後、種菌を内径４ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、そのディスク片６つを１．５ｍＬ容ポリプロピレン製チューブに移し、ホモジナイザーペッスルでホモジナイズ後に接種した。接種後は温度２８℃、暗条件下で５日間振とう培養（１２０ｒｐｍ）を行った。これをフラスコシード培養の培養液をした。
（３０Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、３０Lジャーシード培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、３０Ｌジャーファーメンターに１５Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（３０Ｌジャーシード培養）
上記の３０Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、フラスコシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌１２０〜２６５ｒｐｍ、通気０．２ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（２００Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、２００Lジャーシード培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、２００Ｌジャーファーメンターに１２０Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（２００Ｌタンクシード培養）
上記の２００Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、３０Ｌジャーシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌６０〜１８０ｒｐｍ、通気０．２〜０．４ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（５ｋLタンク本培養のための液体培地の調製）
次に、５ｋLタンク本培養のための液体培地を作る。グルコース２．５％、コーンスターチ０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、５ｋLタンクに３ｋＬ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（５ｋLタンク本培養）
上記の５ｋLタンク本培養のための液体培地を室温まで冷却した後、２００Ｌタンクシード培養の培養液を４．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌６０〜１３０ｒｐｍ、通気０．２〜０．５ｖｖｍ、暗条件下で５日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行い、培養開始３日目にはｐＨを一度ｐＨ７．２まで上げた。
（集菌と乾燥）
培養を始めてから５日後に、菌糸体をろ過してから集菌し、そのケーキ部分を回収した。解砕したウスヒラタケ菌糸体のブロック（含水率９４．０％Ｗ．Ｂ．）３ｋｇ を専用トレー（５００ｍｍ ×７００ｍｍ）に充填し、−３０ ℃で２４時間予備凍結した。なお、「Ｗ．Ｂ．」は湿潤重量（ｗｅｔ ｂａｓｅ）を意味する。予備凍結したウスヒラタケ菌糸体を減圧条件下で凍結乾燥し、凍結乾燥品０．１８ｋｇ を得た。凍結乾燥時のウスヒラタケ菌糸体の最高温度は３５ ℃であり、凍結乾燥を完了するまで３０ 時間を要した。凍結乾燥品の含水率は２．７８％Ｗ．Ｂ．であった。
【００５１】
〔実施例１〕
（ウスヒラタケの超微粒子化）
上記の乾燥ウスヒラタケ菌糸体の製造工程に従って得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体５．０ｋｇをサイクロン粉砕機で粉砕した。図１に示す同体摩擦粉砕機の第１ローター、第２ローターを６０００ｒｐｍ（粒子速度：２５７ｍ／秒）で回転させ、全体を液体窒素（ＬＮ２、−１９６℃）で冷却し、排出口の温度が−５０℃に保持されるように導入口から液体窒素（ＬＮ２、−１９６℃）を導入した。そこに液体窒素で冷却した乾燥ウスヒラタケ菌子体５．０ｋｇを入れ、１０分間粉砕を行った。得られた粉砕品の粒径分布を図２に示す。平均粒径は２３．７μｍであり、全粒子の８０％は、３９．４μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕後のウスヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このようにして得られた粉砕品を後述する抗疲労効果の測定試験に用いた。
【００５２】
〔比較例１〕
図１に示す同体摩擦粉砕機の第１ローター、第２ローターを５５００ｒｐｍで回転させた以外、実施例１と同様の方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は３９．５μｍであり、全粒子の８０％は、６６．２μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕後のウスヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このようにして得られた粉砕品を抗疲労効果の測定試験に用いた。
【００５３】
（抗疲労効果の測定試験）
５週齢の雄性ｄｄYマウスを用い、６日間の予備飼育後、１群１０匹で３群に分けた。群構成は、水を投与する対照群、実施例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群、比較例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌子体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群とし、３週間連続経口投与を行った。投与後にマウスに体重の８．５％の重りを付加して強制水泳させ、疲労困憊し頭部が完全に７秒間水中に沈むまでの時間を測定した。その結果を表１に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊はそれぞれ危険率５％で、＊＊はそれぞれ危険率１％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔｅｓｔ）。
【００５４】
これらの結果より、平均粒径が３０μｍ以下の乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例１）の遊泳時間が、３０μｍ以上の乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例１）の遊泳時間より、有意に延長されることが判った。粒径の小さい乾燥ウスヒラタケ菌子体の場合、菌子体が体内に吸収される効率、及び、菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物が体液に溶け出し、それら組成物が体内に吸収される効率が向上したものと考えられる。
【００５５】
〔比較例２〕
サイクロン粉砕機及び乾燥ウスヒラタケ菌子体を液体窒素で冷却しない以外は、実施例１と同様の製造方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は２９．６μｍであり、全粒子の８０％は、４５．３μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕前の乾燥ウスヒラタケ菌子体の臭いと異なっていた。このようにして得られた粉砕品を抗疲労効果の測定試験に用いた。
抗疲労効果の測定は、群構成を、水を投与する対照群、実施例１で得られた乾燥ウスヒラタケ菌糸体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群及び比較例２で得られた乾燥ウスヒラタケ菌糸体４００ｍｇ／ｋｇを投与する群とし、上述した実施例１と同様の方法により行った。
その結果を表２に示す。
【００５６】
これらの結果より、液体窒素（−１９６℃）で冷却しながら粉砕した乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例１）の遊泳時間が、冷却しないで粉砕した乾燥ウスヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例２）の遊泳時間より、顕著に延長されることが判った。冷却しない場合、ローターの回転のために粉砕機本体内の温度が１１０℃以上の高温となり、ウスヒラタケ菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強組成物が熱劣化したものと考えられる。
【００５７】
〔製造例２〕
乾燥ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）菌糸体の製造
（種菌の調製）
保存していたヒラタケの斜面培地培養菌糸体をマルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％、寒天１．５％の培地組成で作製した寒天培地に接種し、２８℃において７日間平面培養した。これを種菌として用いた。
（フラスコシード培養）
上記のフラスコシード培養のための液体培地を室温まで放冷した後、種菌を内径４ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、そのディスク片６つを１．５ｍＬ容ポリプロピレン製チューブに移し、ホモジナイザーペッスルでホモジナイズ後に接種した。接種後は温度２８℃、暗条件下で５日間振とう培養（１２０ｒｐｍ）を行った。これをフラスコシード培養の培養液をした。
（３０Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、３０Lジャーシード培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地に移して７日間の撹拌培養を行った。培養槽は１０Ｌ容のものを用い、ＭＹ液体培地を作製し、３０Ｌジャーファーメンターに１５Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（３０Ｌジャーシード培養）
上記の３０Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、フラスコシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌１２０〜２６５ｒｐｍ、通気０．２ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（２００Lジャーシード培養のための液体培地の調製）
次に、２００Lジャーシード培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地を作製し、２００Ｌジャーファーメンターに１２０Ｌ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（２００Ｌタンクシード培養）
上記の２００Lジャーシード培養のための液体培地を室温まで冷却した後、３０Ｌジャーシード培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌６０〜１８０ｒｐｍ、通気０．２〜０．４ｖｖｍ、暗条件下で３日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（５ｋLタンク本培養のための液体培地の調製）
次に５ｋLタンク本培養のための液体培地を作る。ＭＹ液体培地を作製し、５ｋLタンクに３ｋＬ仕込んだ後１２１℃で３０分間蒸気滅菌した。
（５ｋLタンク本培養）
上記の５ｋLタンク本培養のための液体培地を室温まで冷却した後、２００Ｌタンクシード培養の培養液を４．０％になるように移植した。移植後は温度２５℃、攪拌６０〜１３０ｒｐｍ、通気０．２〜０．５ｖｖｍ、暗条件下で５日間培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．５で一定になるように、アルカリとして２０％のＮａＯＨ水溶液、酸として１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して自動制御を行った。
（集菌と乾燥）
培養を始めてから５日後に、菌糸体をろ過してから集菌し、そのケーキ部分を回収した。解砕したヒラタケ菌糸体のブロック（含水率９４．０％Ｗ．Ｂ．）３ｋｇ を専用トレー（５００ｍｍ ×７００ｍｍ）に充填し、−３０ ℃で２４時間予備凍結した。なお、「Ｗ．Ｂ．」は湿潤重量（ｗｅｔ ｂａｓｅ）を意味する。予備凍結したヒラタケ菌糸体を減圧条件下で凍結乾燥し、凍結乾燥品０．１８ｋｇ を得た。凍結乾燥時のヒラタケ菌糸体の最高温度は３５ ℃であり、凍結乾燥を完了するまで３０ 時間を要した。凍結乾燥品の含水率は２．７８％Ｗ．Ｂ．であった。
【００５８】
〔実施例２〕
（ヒラタケの超微粒子化）
実施例１と同様の方法で、ヒラタケの超微粒子化を行った。得られた粉砕品の粒径分布を図３に示す。平均粒径は２３．３μｍであり、全粒子の８０％は、３４．２μｍ以下であることが判った。粉砕後の乾燥ヒラタケ菌子体の臭いは、粉砕前の乾燥ヒラタケ菌子体の臭いと同じであった。このサンプルを実施例１と同様の方法で、抗疲労効果測定試験を行った。その結果を表３に示す。
【００５９】
〔比較例３〕
製造例１の乾燥ヒラタケ菌子体を比較例１と同様の方法で粉砕を行った。その結果、平均粒径は３８．５μｍであり、全粒子の８０％は、６４．５μｍ以下であることが判った。このサンプルを実施例１と同様の方法で、抗疲労効果測定試験を行った。その結果を表３に示す。
【００６０】
これらの結果より、平均粒径が３０μｍ以下の乾燥ヒラタケ菌子体を投与したマウス（実施例２）の遊泳時間が、３０μｍ以上の乾燥ヒラタケ菌子体を投与したマウス（比較例３）の遊泳時間より、有意に延長されることが判った。粒径の小さい乾燥ヒラタケ菌子体の場合、菌子体が体内に吸収される効率、及び、菌子体中の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物が体液に溶け出し、それら組成物が体内に吸収される効率が向上したものと考えられる。
【００６１】
【表１】
【表２】
【表３】
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】サイクロン粉砕機の一例を示す構成図である。
【図２】乾燥ウスヒラタケ菌子体をサイクロン粉砕機で粉砕した粒径分布を示す図である。
【図３】乾燥ヒラタケ菌子体をサイクロン粉砕機で粉砕した粒径分布を示す図である。
【符号の説明】
【００６３】
１ 第１高速回転モーター
２ 第２高速回転モーター
３ 第１回転軸
４ 第２回転軸
５ 第１ローター
６ 第２ローター
７ 導入口
８ 排出口
９ 粉砕機本体
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を粉砕して細胞の大きさ以下である粒子を調製することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の製造方法。
【請求項２】
細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が０．１μｍ〜３０μｍの粒子である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が１μｍ〜２５μｍの粒子である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
粉砕を、−３０℃以下で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
粉砕を、−５０℃以下で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
粉砕を、液体窒素中で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項７】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである請求項１〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２２２）である請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、培養菌糸体である請求項１〜８のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の製造方法により製造される抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物 。
【請求項１１】
請求項１０に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
【請求項１２】
請求項１０に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
【請求項１３】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を−３０℃以下の冷却条件下で粉砕して得られる、平均粒径３０μｍ以下のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の微粒子。
【請求項１４】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、あらかじめ凍結乾燥された乾燥物である、請求項１〜９のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を粉砕して細胞の大きさ以下である粒子を調製することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の製造方法。
【請求項２】
細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が０．１μｍ〜３０μｍの粒子である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
細胞の大きさ以下である粒子が、平均粒径が１μｍ〜２５μｍの粒子である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
粉砕を、−３０℃以下で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
粉砕を、−５０℃以下で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
粉砕を、液体窒素中で行う請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項７】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである請求項１〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ Ｓ８２株（ＦＥＲＭ Ｐ−２０２２２）である請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、培養菌糸体である請求項１〜８のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の製造方法により製造される抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物 。
【請求項１１】
請求項１０に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
【請求項１２】
請求項１０に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
【請求項１３】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を−３０℃以下の冷却条件下で粉砕して得られる、平均粒径３０μｍ以下のヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の微粒子。
【請求項１４】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、あらかじめ凍結乾燥された乾燥物である、請求項１〜９のいずれかに記載の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００７−２７７１３８（Ｐ２００７−２７７１３８Ａ）
【公開日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１０４４５５（Ｐ２００６−１０４４５５）
【出願日】平成１８年４月５日（２００６．４．５）
【出願人】（０００００００３３）旭化成株式会社 (901)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月５日（２００６．４．５）
【出願人】（０００００００３３）旭化成株式会社 (901)
【Ｆターム（参考）】
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