抗痙攣医薬組成物
タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ受容体活性化を増加させる有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するまたはＧＡＢＡ受容体を活性化する抗痙攣（anticonvulsive）有効成分を用いるヒトまたは動物の治療分野に関するものである。これらの抗痙攣有効成分はてんかん（epilepsy）を含む種々の神経疾患の予防に用いられる。
本発明は特に、これらの抗痙攣有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる網膜の損傷を含む望ましくない作用を減らす治療方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＧＡＢＡはパーキンソン病、ハンチントン舞踏病、アルツハイマー病、てんかん、反復的痙攣発作によって特徴付けられる中枢神経系疾患を含む複数の神経疾患で重要である。脳内のＧＡＢＡの欠乏は痙攣の一因とされている（非特許文献１）。
【０００３】
脳内のＧＡＢＡ濃度を上げる目的で、ＧＡＢＡの直接投与と経口投与の両方が研究されている。ＧＡＢＡの脳内への直接投与は抗痙攣効果を有するが、明らかに実用的な方法ではないことが示された。しかし、ＧＡＢＡは血液脳関門すなわち脳内の生体異物からＣＮＳを保護する膜を通過できないので、ＧＡＢＡの経口投与は有効ではない。
【０００４】
脳内ＧＡＢＡの欠乏を補正して痙攣を止めるのに重要な方法は、血液脳関門を通過できるＧＡＢＡ−アミノトランスフェラーゼ（ＧＡＢＡ-ＡＴ）阻害剤を用いることである（非特許文献２）。
【０００５】
この酵素の阻害によって脳内のＧＡＢＡ濃度が上がり、てんかん、その他の神経疾患の治療に応用できる。最も有効なＧＡＢＡ-ＡＴのインビボ時間依存性阻害剤の一つは４−アミノ−５−ヘキセン酸であり、これはγ−ビニルＧＡＢＡまたはビガバトリン（ほぼ世界中で市販されている抗痙攣剤）ともよばれる。
【０００６】
脳内ＧＡＢＡの欠乏を補正する他の方法はチアガビンのようなＧＡＢＡトランスポータを遮断するか、ＧＡＢＡ受容体に作用するか（トピラメートまたはフェルバメート）、グルタメートデカルボキシラーゼを活性化してＧＡＢＡ生合成を増加させて（ピリドキサルリン酸、バルプロエート、ガバペンチン）ＧＡＢＡ伝達を増加させるものである。全ての戦略は脳内のＧＡＢＡ濃度を増加させるか、その受容体を直接活性化して、てんかんを含む種々の神経疾患におけるＧＡＢＡの治療効果を促進するという点で共通している。
【０００７】
てんかんの場合には特に、既存の抗てんかん薬で新たに診断された患者の８０％の発作をなくすことができるが、社会経済的意味で重大な障害となる慢性難治性てんかんの患者も多い。
【０００８】
てんかん治療では抗てんかん薬を利用できるが、これらの薬剤にはいくつかの欠点がある。例えば、これらの薬剤は液体および体液に難溶性であることが多いか、極めて吸湿性である。さらに重要なことに、時間とともに薬剤が患者に効かなくなることが多い。さらに、多くの抗てんかん薬は望ましくない副作用、神経毒性および薬物相互作用を引き起こす。臨床で現在使用されている抗てんかん薬または抗てんかん薬の組合せで治療しても、てんかん患者の３０％は依然として発作を起こす。多くの抗てんかん薬が開発され、各患者毎に効果的な治療計画を建てる際の臨床医の医薬的選択肢が広がっている。
【０００９】
ビガバトリン (vigabatrin) は繃−アミノ酪酸トランスアミナーゼ阻害剤として開発されたもので、新規抗痙攣剤の最も有望な有効成分の一つであった。しかし、ビガバトリンは極めて激しい望ましくない作用、例えば非可逆的視野狭窄を誘発する。ビガバトリンによって誘発される視野狭窄が鼻部分に限定され、より中心の領域に広がるまでは、無症候性である。さらに、ビガバトリンによって誘発される視覚障害には視野狭窄だけでなく、視力低下、色の識別力および対比感度の低下を伴う中心視不全もある。ビガバトリンを用いた治療を停止することで視力障害を安定させることができるが、回復することはほとんどない。
【００１０】
しかし、てんかん発作は常に極めて重い障害であり、致死の危険性もあるため、ビガバトリンを含めたＧＡＢＡ濃度を増加させる有効成分が依然として処方されている。同様に、ＧＡＢＡトランスアミナーゼを遮断する（バルプロエート）、ＧＡＢＡトランスポータの遮断によってＧＡＢＡ濃度を増加させる（チアガビン）、ＧＡＢＡ生合成および／または遊離を刺激する（ガバペンチン、バルプロエート、levetiracetam）またはＧＡＢＡ受容体活性化を増加させる（トピラメート、フェルバメート、ベンゾジアゼピン、例えばジアゼパム、クロナゼパムおよびクロバザムまたはバルビツレート、例えばプリミドンおよびフェノバルビトン）の他の多くの抗てんかん性分子でも視覚的副作用が記述されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Karlsson,A.; Funnum,F.; Malthe-Sorrensen, D.; Storm-Mathisen, J.Biochem.Pharmacol 1974,22,3053-3061
【非特許文献２】Nanavati,S.M.; Silverman,R.B.J.Med.Chem.1989,32,2413-2421
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、当業界では、ＧＡＢＡ濃度を増加させ、または、ＧＡＢＡ受容体を活性化する抗痙攣有効成分を投与された人体または動物の体に引き起こされる副作用を避けることができる物質または方法が要望されている。
すなわち、望ましくない作用が少ないか、全くない抗痙攣有効成分をベースにした改良された抗痙攣医薬組成物、例えば抗てんかん医薬組成物が当業界では要望されている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質の、細胞外ＧＡＢＡの増加またはＧＡＢＡ伝達を誘発する有効成分を用いて人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用にある。
【００１４】
副作用を予防または阻止し、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発するのに好ましい有効成分はＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤、ＧＡＢＡ受容体活性剤およびグルタメートデカルボキシラーゼ活性剤からなる群の中から選択される。
【００１５】
副作用を予防または阻止するのに最も好ましい有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリンともよばれる）からなる。この有効成分はそのラセミ混合物または活性異性体のいずれかである。
【００１６】
本発明はさらに、有効成分として下記の（ｉ）および（ｉｉ）と、一種または複数の医薬上許容される賦形剤とを組み合わせて含む医薬組成物を提供する：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００１７】
本発明はさらに、（ｉ）と（ｉｉ）の組合せを治療を必要とする患者に投与する段階を含む、てんかんを含めた痙攣性疾患の治療方法に関する：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に重要な物質、例えばビタミンＢ６からなる群の中から選択される第２有効成分。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる副作用を防止するタウリンまたはビタミンＢ６による神経保護を示す図。
【図２】血漿中タウリン濃度とビガバトリンの網膜毒性との相関を示す図。
【図３】ラットのビガバトリン誘発網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図。
【図４】マウスのビガバトリン網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
［図１］は細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる副作用を防止するタウリンまたはビタミンＢ６による神経保護を示す図である。
ラット（図１Ａ）およびマウス（図１Ｂ）にビガバトリンを投与したときに、タウリンまたはビタミンＢ６を補充することでビガバトリンのみで認められた明所視網膜電図（ＥＲＧ）の振幅の減少が予防または部分的に抑制されている。対照とビガバトリン投与動物との間に明所視ＥＲＧの振幅の統計的有意差が認められる（ＶＧＢ：*ｐ＜０．０５）。逆に、マウスでは、対照動物と、ビガバトリン＋タウリンまたはビガバトリン＋ビタミンＢ６を投与した動物との間に有意差はなくなった。ラットでは、依然として対照群との間に有意差が認められた（ＶＧＢ＋タウリン：*ｐ＜０．０５）。しかし、マウスとラットの両方で、ビガバトリン＋タウリンを投与した動物は明所視ＥＲＧ振幅の減少が、ビガバトリンのみを投与した動物より小さく、統計的有意差を認められる（ＶＧＢ＋タウリン：。ｐ＜０．０５）。同様に、ビガバトリンに加えてビタミンＢ６を補充したマウスでは、明所視ＥＲＧの減少がビガバトリンのみを投与した動物より小さく、統計的有意差が認められた（ＶＧＢ＋Ｂ６，。ｐ＜０．０５）。
【００２０】
［図２］は血漿中タウリン濃度とビガバトリンの網膜毒性との相関を示す図で、（Ａ）は対照と各群のビガバトリン投与動物の血漿中タウリン濃度、（Ｂ）はＶＧＢ投与対照ラットの血漿中タウリン濃度と明所視ＥＲＧ振幅との相関を示し、これら２つの因子の相関因子は０．７６９（ｐ＝０．００９３％、ｎ＝１０）である。（Ｃ）は血漿中タウリン濃度と錐体光受容体内節／外節の密度との相関を示し、これら２つのパラメータの相関因子は０．８１８（ｐ＝０．００３８％、ｎ＝１０）である。（Ｄ）は明所視ＥＲＧ振幅と錐体光受容体内節／外節の密度との相関を示し、これら２つの因子の相関因子は０．７０３（ｐ＝０．００２３％、ｎ＝１０）である。（Ｅ）はタウリン補充によるＶＧＢ投与ラットの血漿中タウリン濃度の回復を示す。（Ａ）および（Ｅ）の横線は平均値を示す。
【００２１】
［図３］はラットのビガバトリン誘発網膜毒性の全特徴のタウリン補充による予防を示す図で、対照ラット（s.e.m.，ｎ＝６）、タウリンを補充したまたはタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物（ＶＧＢ、ｎ＝７；ＶＧＢ＋タウリン、ｎ＝７，s.e.m.）の明所視ＥＲＧ振幅（３Ａ）と、置換光受容体核を有する網膜領域の長さ（３Ｂ）と、錐体内節／外節の密度（３Ｃ）と、増加したＧＦＡＰ発現を有する領域（３Ｄ)とを定量化したものである。縮尺目盛りは５０μｍを示す（ＩＰＬ：内網状層）。
【００２２】
［図４］はマウスのビガバトリン網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図で、対照マウス（s.e.m.，ｎ＝５）、タウリンを補充したまたはタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物（ＶＧＢ、s.e.m.，ｎ＝７；ＶＧＢ＋タウリン、s.e.m.，ｎ＝７，）の明所視ＥＲＧ振幅（４Ａ）と、置換光受容体核を有する網膜領域の長さ（４Ｂ）と、錐体内節／外節の密度（４Ｃ）と、双極細胞がＯＮＬ中に出芽する領域（４Ｄ)とを定量化したものである。縮尺目盛りは５０μｍを示す（ＩＰＬ：内網状層）。
【００２３】
驚くことに、細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンで治療した患者の視力の進行性および非可逆的な低下は血中タウリン濃度の大きな減少に関連するということを本発明者は見出した。特に、ビガバトリンを投与した小児てんかん患者ではタウリン欠乏が認められた。
【００２４】
本発明でビガバトリン投与ラットで認められる血漿中の低タウリン濃度とこの動物の視覚機能の低下との間に相関があることがわかった。
本発明ではさらに、驚くべきことに、タウリンまたはタウリン生合成に必要な物質をビガバトリン投与個体に補充することによって、ビガバトリンによって誘発される望ましくない副作用が阻止される、特にビガバトリン誘発網膜病変が阻止されることがわかった。
【００２５】
ビガバトリンによってタウリンの濃度は変化しないが、ＧＡＢＡ濃度は３倍に増加することが従来技術で示されているので、本発明者のこれらの発見はなおさら驚きである。
本発明者は、細胞外ＧＡＢＡ誘発剤の役目をする抗痙攣有効成分によって引き起こされる有害な副作用を、人体または動物の体の血中タウリン量を増加させる物質のいずれか一つを投与することによって予防または遮断できることを見出した。
【００２６】
本明細書で人体または動物の体の血中タウリン量を増加させる物質はタウリン自体の他に、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質である。
【００２７】
本明細書ではタウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質をまとめて「タウリン様」物質とよぶことができる。
【００２８】
本発明の対象は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発する有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用にある。
本発明ではタウリンは２−アミノエタンスルホン酸からなる。
本発明ではタウリン前駆体とはヒトまたは動物に投与されたときに直接または間接的にタウリンにトランスフォームできる物質を意味する。
【００２９】
好ましいタウリン前駆体はシステイン、シスタチオニン、ホモシステイン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、セリン、Ｎ−アセチル−システイン、グルタチオン、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｓ−アデノシルメチオニン、ベタインおよびメチオニンからなる群の中から選択される。
本発明では、タウリン代謝物として、タウリンのトランスフォーメーションによってインビボで生成される物質がある。
好ましいタウリン代謝物はヒポタウリン、チオタウリン、タウロコール酸からなる群の中から選択される。
本発明でタウリン誘導体は、構造的にタウリンに近いが、少なくとも一つの構造上の差、例えば一つまたは複数の化学変化のある物質、例えばタウリンで見られる原子または化学基を異なる原子または異なる化学基で少なくとも一つ置換した物質である。
【００３０】
好ましいタウリン誘導体はアセチルホモタウリネート、およびピペリジノ−、ベンズアミド−、フタルイミド−またはフェニルスクシニルイミドタウリン誘導体からなる群等の種々の単位の中から選択される。このようなタウリン誘導体は下記非特許文献３および非特許文献４に記載されている。
【非特許文献３】Kontro et al. (1983, Prog Clin Biol Res, Vol. 125 : 211-220)
【非特許文献４】Andersen et al. (2006, Journal of pharmaceutical Sciences, Vol. 73(nー1) : 106-108)
【００３１】
誘導体の例としてはタウロリジン（４，４’−メチレン−ビス（テトラヒドロ−２Ｈ−１，２，４−チアジアジン−１,１−ジオキシドまたはタウロリン）、タウラルタムおよびタウリンアミド、クロロハイドレート−Ｎ−イソプロピルアミド−２−（１−フェニルエチル）アミノエタンスルホン酸が挙げられる。
【００３２】
本発明でタウリン類似体とはタウリンとは化学的に異なるが、同じ生物学活性を発揮する物質、例えば細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって誘発される網膜病変を阻止する物質である。
好ましいタウリン類似体は（+/-）ピペリジン−３−スルホン酸（ＰＳＡ）、２−アミノエチルホスホン酸（ＡＥＰ）、（+/-）２−アセチルアミノシクロヘキサンスルホン酸（ＡＴＡＨＳ）、２−アミノベンゼンスルホネート（ＡＮＳＡ）、ヒポタウリン、±トランス−２−アミノシクロペンタンスルホン酸（ＴＡＰＳ）８−テトラヒドロキノレインスルホン酸（ＴＨＱＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、β−アラニン、グリシン、グアニジノエチルスルフェート（ＧＥＳ）、３−アセトアミド−１−プロパンスルホン酸（acamprosate）からなる群の中から選択される。
【００３３】
本発明でタウリン生合成に必要な物質には、インビボタウリン生合成に関与する全ての物質、例えば酵素および酵素補助因子、従って、システインジオキシゲナーゼ（EC 1.13.11）、スルフィノアラニンデカルボキシラーゼ（EC 4.1.1.29）およびこれらの酵素補助因子が含まれる。
タウリン生合成に必要な物質はビタミンＢ６（またはピリドキサール−５’−リン酸）、ビタミンＢ１２（コバラミン）、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ナイアシン、チアミン（チアミンピロリン酸）およびパントテン酸からなる群の中から選択するのが好ましい。
【００３４】
本発明で細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ受容体活性化を増加させるのに有効成分はＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤、グルタメートデカルボキシラーゼ活性剤およびＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータを含む。
ＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼはＧＡＢＡトランスアミナーゼまたは４−アミノ酪酸トランスアミナーゼ（EC 2.6.1.19）ともよばれる。グルタメートデカルボキシラーゼはEC 4.1.1.15に分類される。
【００３５】
本発明で副作用がタウリンによって阻止または遮断されるＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤には下記が含まれる：４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）、バルプロエート、（1R,3S,4S）−３−アミノ−４−フルオロシクロペンタン−１−カルボン酸、（1R,4S）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（1S,4R）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4R）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4S）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（S）−４−アミノ−４，５−ジヒドロ−２−チオフェンカルボン酸、１Ｈ−テトラゾール−５−（α−ビニル−プロパンアミン）、２，４−ジアミノブタノエート、２−オキソアジピン酸、２−オキソグルタレート、２−チオウラシル、３−クロロ−４−アミノブタノエート、３−メルカプトプロピオン酸、３−メチル−２−ベンゾチアゾロンヒドラゾン塩酸塩、３−フェニル−４−アミノブタノエート、４−エチニル−４−アミノブタノエート、５−ジアゾウラシル、５−フルオロウラシル、アミノオキシアセテート、β−アラニン、シクロセリンおよびＤ−シクロセリン。
【００３６】
本発明で副作用をタウリンによって阻止または遮断できるグルタメートデカルボキシラーゼ活性剤には２−オキソグルタレート、３−メルカプトプロピオン酸、アミノオキシ酢酸およびグルタレートが含まれる。
ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤はチアガビン（tiagabine）で構成できる。
ＧＡＢＡ受容体アゴニストおよびモジュレータは下記の群の中から選択できる：トピラメート、フェルバメート、トラマドール、オキシカルバゼピン、カルバマゼピン、エスゾピクロン、ゾピクロン、バクロフェン、γ−ヒドロキシ酪酸、イミダゾピリジン、例えばザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロンフェニトイン、プロポフォール、フェニトイン、ベンゾジアゼピンおよびバルビツレート。
【００３７】
ベンゾジアゼピンは下記の群の中から選択できる：クロバザム、アプラゾラム(ザナックス、登録商標)、ブロマゼパム(Lexomil、登録商標)、ジアゼパム(ヴァリウム、登録商標)、ロラゼパム(Ativan、登録商標)、クロナゼパム(Klonopin、登録商標)、テマゼパム(Restoril、登録商標)、オキサゼパム(セラックス、登録商標)、フルニトラゼパム(ロヒプノール、登録商標)、トリアゾラム(ハルシオン、登録商標)、クロルジアゼポキサイド(リブリウム、登録商標)、フルラゼパム(ダルメーン、登録商標)、エスタゾラム(ProSom、登録商標)およびニトラゼパム(モガドン、登録商標)。
【００３８】
バルビツレートは下記の群の中から選択できる：プリミドン、フェノバルビトン、ペントバルビタール、ミダゾラム、フェニトイン、セコバルビタールおよびアモバルビタールブタバルビタールバルビタール、フェノバルビタール、ブタルビタール、シクロバルビタール、アロバルビタール、メチルフェノバルビタールおよびビニルビタール。
【００３９】
本発明の別の対象は、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止することを目的とする、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質を含む医薬組成物にある。
【００４０】
本発明の別の対象は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の有効量を、治療を必要とする人体または動物の体に投与する段階を含む、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止する治療法にある。
以下、これらの組成物および方法をさらに詳細に説明する。
【００４１】
医薬組成物および方法
一般に、本発明の医薬組成物は（ｉ）および（ｉｉ）と一種ま複数の医薬上許容される賦形剤との組合せからなる：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体、および、タウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００４２】
第２有効成分はタウリンおよび「タウリン様」物質とからなる群の中から選択されるといえる。
本発明の医薬組成物で高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するのに好ましい有効成分すなわち第１有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）、そのラセミ混合物または活性異性体である。
【００４３】
本発明の医薬組成物は種々の神経疾患、主に痙攣性疾患の予防で使用できる。痙攣性疾患にはてんかん、結節硬化症（tuberous sclerosis）、乳児痙攣、ヘロイン、コカイン、エタノールの薬物嗜癖症等の薬物嗜癖患者に発症する痙攣疾患が含まれる。
【００４４】
本発明の医薬組成物は抗痙攣医薬組成物が主成分である。第１および第２有効成分はこの抗痙攣医薬組成物中に「治療上有効な量」含まれる。治療上有効な量とは所望の抗痙攣効果を発揮すると同時に有害な副作用を全く誘発しないか、タウリンもタウリン様物質も含まない第１有効成分を含む医薬組成物によって誘発される有害な副作用に比較して、より少ない副作用を誘発する、十分な有効成分の組合せ量である。
【００４５】
一般的には、「治療上有効な量」または「有効量」または「治療上有効」とは所定条件および投与計画で治療効果が得られる量を意味する。これは必要な添加剤および希釈剤すなわちキャリアまたは投与媒体と組み合わせて所望の治療効果が得られるように計算された有効物質の所定量である。さらに、ホストの活性、機能および応答の臨床的に重要な欠陥を減らし、好ましくは予防するのに十分な量を意味する。あるいは、治療上有効量はホスト中で臨床的に有意な条件の改善をもたらすのに十分な量である。化合物の量はその比活性に応じて変えられることは当業者には理解できよう。適切な投与量は必要な希釈剤すなわちキャリアまたは添加剤と組み合わせて所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性組成物を含むことができる。
【００４６】
本発明の別の対象は、タウリンまたはタウリン様物質の有効量を、治療を必要とする人体または動物体に投与する段階を含む、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止する方法にある。
【００４７】
本発明の別の対象は、（ｉ）と（ｉｉ）との組合せを治療を必要とする人体または動物体に投与する段階を含む痙攣性疾患の予防または治療方法にある：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００４８】
一般に、第１有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）からなる。有利な実施例では第２有効成分はタウリンとビタミンＢ６からなる群の中から選択される。
治療を必要とする患者には痙攣性疾患、特にてんかんに罹った成人または小児の患者が含まれる。
本発明の一つの実施例での方法では、上記医薬組成物を治療を必要とする患者に投与する段階を含む。
【００４９】
本発明の医薬組成物で、第１有効成分すなわち高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発する有効成分の量は、痙攣性疾患に罹った患者の治療で一般に用いられる上記有効成分量である。一般に、ビガバトリンでは平均体重が８０キロの成人患者に対して、一日に１０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１００μｇ〜５ｇ、例えば１ｍｇ〜１ｇのビガバトリンを投与可能にするように医薬組成物の投与形態を合せる。一般に、一日に２回投与で１日量の半分を含むような剤形にする。有効成分の形態がラセミ体でなく活性異性体の場合は、ビガバトリンの使用量を少なくすることができ、その量は一般に従来用いられるラセミ体の量の半分である。
【００５０】
本発明の医薬組成物で、第２有効成分すなわちタウリンまたはタウリン様物質の量は、平均体重が８０キロの成人患者に対して一日に１０μｇ〜１０ｇの量のタウリンまたはタウリン様物質の投与可能にするように医薬組成物の剤形の量を合わせる。
【００５１】
本発明の医薬組成物または薬学方法は実際にはその有効成分を一種以上の医薬上または生理学的に許容される賦形剤と組み合わせて用いる。
一般に、本発明の医薬組成物は、上記組成物が（ｉ）タウリンおよびタウリン様物質の中から選択される一種または複数の物質のみを含む場合、あるいは（ｉｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発する第１有効成分と、タウリンおよびタウリン様物質の中から選択される第２有効成分との組合せを含む場合にかかわらず、一種または複数の有効成分を医薬組成物の全重量に対して０．１〜９９．９重量％、一般に１〜９０重量％の量で含む。
【００５２】
一般に、本発明の医薬組成物は、一種以上の賦形剤を医薬組成物の全重量に対して０．１〜９９．９重量％、一般に１０〜９９重量％の量で含む。
「生理学的に許容される賦形剤またはキャリア」とは、全身または局所投与で安全に用いることができる固体または液体の充填剤、希釈剤または物質を意味する。医薬上許容されるキャリアは、投与経路に応じて、固体または液体の充填剤、希釈剤、ヒドロトロープ、界面活性剤および封入物質として当業者に周知である。
【００５３】
本発明の組成物に含むことができる全身投与用の医薬上許容されるキャリアには糖、デンプン、セルロース、植物油、緩衝液、ポリオールおよびアルギン酸が含まれる。特定の医薬上許容されるキャリアは下記文献に記載されており、これらの文献は全て本明細書の一部を成す。
【特許文献１】米国特許第4,401,663号（Buckwalter、1983年8月30日公開）
【特許文献２】欧州特許出願第089710号（LaHann、1983年9月28日公開）
【特許文献３】欧州特許出願第0068592号（Buckwalter、1983年1月5日公開）
【００５４】
非経口投与に好ましいキャリアにはプロピレングリコール、ピロリドン、オレイン酸エチル、水性エタノールおよびこれらの組合せが含まれる。
代表的なキャリアにはアカシア、寒天、アルギン酸塩、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラゲニン、粉末セルロース、グアーガム、コレステロール、ゼラチン、ゴム寒天、アラビアゴム、カラヤゴム、ガティゴム、ローカストビーンガム、オクトキシノール９、オレイルアルコール、ペクチン、ポリ（アクリル酸）およびその同族体、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリ（酸化エチレン）、ポリビニルピロリドン、グリコールモノステアレート、プロピレングリコールモノステアレート、キサンタンゴム、トラガカント、ソルビタンエステル、ステアリルアルコール、デンプンおよび化工デンプンが含まれる。適切な添加範囲は約０．５〜約１％である。
【００５５】
本発明の医薬組成物を配合する場合当業者は欧州薬局方または米国薬局方の最終版を参照するのが有利である。また、当業者は欧州薬局方の第５版「２００５年」または米国薬局方のＵＳＰ２８−ＮＦ２３版を参照するのが好ましい。
本発明の医薬組成物の各用量に含まれる有効成分の組合せ重量は医療上有効な化合物の分子量および痙攣性疾患を阻害または遮断するのに有効な重量に依存する。痙攣性疾患の予防または治療に必要な細胞外ＧＡＢＡ誘発剤、特にビガバトリンの有効量は当業者に周知である。
【００５６】
本発明の医薬組成物の投与量での細胞外ＧＡＢＡ誘発剤、例えばビガバトリンと組み合わされるタウリンまたはタウリン様物質の適量を決定するために、当業者はその中に含まれるタウリンまたはタウリン様物質に関する技術分野で周知または決定された有効量を参考にするのが有利である。
以下、実施例を参照して本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００５７】
実施例１、２
Ａ．実施例１、２の材料と方法
ビガバトリン処置
ウィスターラットRj Wi IOPS HanとＢＡＬＢ／ｃマウスをJanvier Breeding Center（フランス国、Le Genest-St-Isle）から生後７週で購入した（Duboc et al.,2004）（非特許文献５）。ＶＧＢを０．９％ＮａＣｌに１２５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶かしたものを、４０ｍｇ(125 mg/ml, 0.32 ml)で４５または６５日間、および、３ｍｇ(60 mg/ml, 0.05 ml)で２９日間マウスに毎日腹腔内注射した（一日量はラットで約２００ｍｇ／ｋｇ、マウスで１５０ｍｇ／ｋｇ）。ビタミンＢ６（活性体）を１ｍＭ／ｋｇ（溶液１５４，４６ｍｇ／ｍｌ）の用量で投与し、タウリンは０．１モル／ｌの飲料水で供給した。
最後のＶＧＢ注射の後にＥＲＧを記録した（Duboc et al.,2004）（非特許文献５）。ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液を筋肉注射し、麻酔をかけた。２．５ｃｄｍ-2の光強度に１０分順応させた後、１０ｃｄｍ-2の閃光強度で、３０秒の刺激間隔で１０回記録し、平均化した。これらの明所視ＥＲＧ測定をラットで５９日間、マウスで２９日間行った。
注射の６５日後に、ラットを麻酔して、血液サンプルを抽出した。麻酔は上述のようにかけた。麻酔下で留置カテーテルを頸動脈に入れた。この方法によって、一回で大量の良質な血液サンプルを得ることができる。各ラット毎にヘパリン添加血液サンプラーで１ｍｌの血液サンプルを採って直ぐに遠心分離し、−８０℃で凍結した。自動アミノ酸イオンクロマトグラフィ（Pasteur Cerba,France）を用いて、サンプル中の全遊離アミノ酸を定量的に決定した。
【００５８】
実施例１
細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによるタウリン欠乏の誘発
［表１］には、ビガバトリン投与動物と対照アルビノ動物の両方の血液サンプルで測定したアミノ酸濃度が示してある。この表から大部分のアミノ酸トレオニン、セリン、バリン、シトルリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチンでは、７〜３２％の濃度は統計的有意差が認められないことがわかる。既に報告されているように、グルタミン酸は血液サンプル中で５６％大幅に減少し、統計的有意差を認められる。しかし、最大の変化はタウリンで認められ、ビガバトリン投与動物で３７３．４から１２２．２μMまで６７％減少し、統計的有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。有意差（２２％）はメチオニンでも認められた。これらの観察結果から、ビガバトリン投与によるタウリンおよびメチオニン濃度の有意な減少が認められた。
【００５９】
実施例２
細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる望ましくない副作用のタウリンおよびタウリン様物質による予防および治療
タウリン補充によってビガバトリン誘発網膜の毒性を予防できるかどうかを調べるために、動物にビガバトリンのみまたはビガバトリン＋タウリン補充を投与した。ビガバトリンのみでは既に述べたように明所視網膜電図（ＥＲＧ）の測定値が減少した。逆に、マウスでは対照とビガバトリン＋タウリン補充またはビガバトリン＋ビタミンＢ６補充との間に統計的有意差を認められなくなった（図１Ｂ）。ラットではビガバトリンのみよりも明所視ＥＲＧ振幅の減少が小さいにもかかわらず、対照動物群では依然として統計的有意差が認められた（図１Ａ）。しかし、全ての種で、ビガバトリンとビガバトリン＋タウリン補充との間に投与動物では統計的有意差が認められた［図１］）。同様に、ビタミンＢ６の補充によっても明所視ＥＲＧ振幅の減少が小さくなり、ビガバトリンのみのマウス群とビガバトリン＋ビタミンＢ６補充投与群との間に統計的有意差が認められた（図１Ｂ）。これらの結果はビガバトリン誘発のタウリン濃度低下によってビガバトリンの網膜毒性が生じるという仮説と合致する。
【００６０】
【表１】
【００６１】
実施例３、４
Ａ．実施例３、４の材料と方法
Ａ．１．動物の処置
ウィスターラットRj Wi IOPS HanまたはＢＡＬＢ／ｃマウスをJanvier（フランス国、Le Genest-St-Isle）から生後６〜７週で購入した（非特許文献５）。ＶＧＢを０．９％ＮａＣｌに溶かしたものを４０ｍｇ(125 mg/ml, 0.32 ml)で４５または６５日間ラットに、および、３ｍｇ(60 mg/ml, 0.05 ml)で２９日間マウスに毎日腹腔内注射した。これらの一日量（ラットで２００ｍｇ／ｋｇ、マウスで１５０ｍｇ／ｋｇ）はてんかんの動物治療に記載されているもの（非特許文献５）またはてんかんのヒト治療（非特許文献６）に記載されているもの（成人患者：１〜６ｍｇ／ｋｇ、小児：５０〜７５ｍｇ／ｋｇまたは乳児：１００〜４００ｍｇ／ｋｇ）と一致している（非特許文献７）（非特許文献８）、（非特許文献９）。
【非特許文献５】Andre, V., Ferrandon, A., Marescaux, C. & Nehlig, A. Vigabatrin protects against hippocampal damage but is not antiepileptogenic in the lithium-pilocarpine modeT of temporal lobe epilepsy. Epilepsy research Vol. 47, 99-117 (2001)) or in humans (adult patients: 1-6mg/kg; children:50-75mg/kg; or infants: 100-400 mg/kg)
【非特許文献６】Chiron, C., Dumas, C., Jambaque, I., Mumford, J. & Dulac, O. Randomized trial comparing vigabatrin and hydrocortisone in infantile spasms due to tuberous sclerosis. Epilepsy research Vol. 26, 389-395 (1997)
【非特許文献７】Lux, A.L., et al. The United Kingdom Infantile Spasms Study comparing vigabatrin with prednisolone or tetracosactide at 14 days: a multicentre, randomised controlled trial. Lancet Vol. 364, 1773-1778 (2004)
【非特許文献８】Lux, A.L., et al. The United Kingdom Infantile Spasms Study comparing vigabatrin with prednisolone or tetracosactide at 14 days: a multicentre, randomised controlled trial. Lancet Vol. 364, 1773-1778 (2004)
【非特許文献９】Aicardi, J., Mumford, J.P., Dumas, C. & Wood, S. Vigabatrin as initial therapy for infantile spasms: a European retrospective survey. Sabril IS Investigator and Peer Review Groups. Epilepsia Vol. 37, 638-642 (1996))
【００６２】
タウリンは０．１Ｍ濃度の飲料水で補充した。動物のケージの光強度をラットの場合は１２５〜１３０ルクス、マウスは７０〜８５ルクスにした。
【００６３】
Ａ．２．網膜電図（ＥＲＧ）
最後のＶＧＢ注射の後に明所視ＥＲＧを記録した（非特許文献５）。ケタミン（４０ｍｇ／ｍｌ）およびキシラジン（４ｍｇ／ｍｌ Rompum）を含む溶液を筋肉注射（０．８〜１．２ｍｇ／ｋｇ）して麻酔をかけた。動物を２５ｃｄｍ-2の背景光に１０分間明順応させた。次いで、この背景光に閃光を当てた。マウス実験および暗所に維持したラットの場合は１０ｃｄｓｍ-2の閃光強度（［図２］、［図６］）に、その他の実験では２５ｃｄｓｍ-2の閃光強度（［図３］、［図５］）にした。３０秒の刺激間隔で１０回記録し、平均化した。
【００６４】
Ａ．３．組織学
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中で調製した４％（ｗｔ／ｖｏｌ）パラホルムアルデヒド中にアイカップを４℃で一晩固定した。４℃で１０％、２０％および３０％のショ糖を順次含むＰＢＳ中で凍結保護した後、組織を背腹軸に沿ってＯＣＴ中に包埋した（Labonord,Vielleneuve d'Ascq,France）。網膜切片（８〜１０μｍ厚さ）を０．１％トリトンＸ−１００（Sigma,St.Louis,MO）を含むＰＢＳ中で５分間透析処理し、洗浄し、１％ウシ血清アルブミン（Eurobio, Les-Ulis, France）、０．１％Tween20（Sigma）および０．１％アジ化ナトリウム（Merck,Fontenay-Sous-Bois,France）を含むＰＢＳ中で室温で２時間インキュベートした。この溶液に添加された一次抗体を室温で２時間インキュベートした。ポリクローナル抗体はＶＧｌｕＴ１（１：２０００、Chemicon）、ウサギＧＦＡＰ（1/400，Dako, USA）およびマウス錐体アレスチン／Luminaire junior（LUMIj）（１：２０，０００）に対する抗体にした。モノクローナル抗体はＧｏａ（１：２０００、Chemicon）に対する抗体にした。洗浄後、切片をAlexa TM594またはAlexa TM488（１：５００、分子プローブ、Eugene、OR）にコンジュゲートされた二次抗体、ヤギ抗ウサギｌｇＧまたはウサギ抗マウスｌｇＧで２時間インキュベートした。錐体光受容体の内節／外節をピーナッツレクチン（PNA,Sigma）で４℃で１２時間インキュベートした。最後のインキュベート期間に色素、ジアミドジフェニル−インドール（ＤＡＰＩ）を添加した。切片を洗浄し、フルオルサブ（Fluorsave）試薬（Calbiochem,San Diege,CA）を付け、ロッパー（Ropper）科学カメラ（Photometrics cool SNAP TM FX）を備えたライカ顕微鏡（LEICA DM 5000B）で観察した。
【非特許文献１０】Zhu, X., et al.Mouse cone arrestin expression pattern: light induced translocation in cone photoreceptors. Molecular vision Vol. 8, 462-471 (2002)) (Luminaire junior, LUMIJ, 1:20,000
【００６５】
定量化のために、背腹軸に沿った垂直断面を視神経で選択した。ＤＡＰＩ核染色に従って、組織崩壊した網膜領域の長さを測定した。ＧＦＡＰ免疫染色を用いて、反応性グリオーシスを有する網膜領域を検出および定量化した。錐体光受容体密度を錐体アレスチン免疫染色（ラット）またはＰＮＡ標識化（マウス）に従って計算し、錐体光受容体の内節／外節を可視化した。組織崩壊した網膜層状を有する領域を除外した。出芽する双極細胞を有する領域の定量化を、これらの細胞をプロテインＧｏαに対する抗体で免疫標識化して行った。
【００６６】
Ａ．３．アミノ酸測定
血液サンプルを、ヘパリン(14IU/ml)を含む溶血管に抽出し、遠心分離した(2200g、15分)。血漿中アミノ酸分析をJEOL AMINOTACアナライザーを使用して、ニンヒドリン検出イオン交換クロマトグラフィーによって行った。
【００６７】
Ｂ．結果
実施例３
ビガバトリンの網膜毒性はタウリン欠乏に依存する
タウリン欠乏は、マウス(Rascher et al., 2004)、ラット(Lake and Malik, 1987)、ネコ(Leon et al., 1995)およびサル(Imaki et al., 1987)の光受容体の変性を誘発することが知られている。代わりに、ビガバトリン投与動物(Halonen et al., 1990; Neal and Shah, 1990)および患者(Halonen et al., 1988; Pitkanen et al., 1988)のタウリン濃度は不変または増加すると報告されているが、本発明者はＶＧＢ網膜毒性におけるタウリンの潜在的な役割を調べた。対照動物およびＶＧＢを６５日間投与したラットの血漿中アミノ酸濃度を測定した。大部分のアミノ酸（トレオニン、セリン、バリン、シトルリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、およびオルニチン）の濃度の差は、２つの動物群の間で統計的に異ならなかった。逆に、血漿中グルタミン酸濃度はＶＧＢ投与動物の方が対照動物よりもはるかに（５６％）低く、既報告（非特許文献１１）と合致し、実施例２の［表１］に示すように統計的有意差を認めた(対照: 217.4±56.6 μM; VGB: 94.8±15.6 μM s.e.m., n=5)
【非特許文献１１】Bernasconi, R., et al. Gamma-vinyl GABA: comparison of neurochemical and anticonvulsant effects in mice. J Neural Transm Vol. 72, 213-233 (1988)
【００６８】
しかし、タウリンで最大差が認められた。タウリン濃度はＶＧＢ投与動物(122.2±26.6 μM)の方が対照動物(373.4±46.7 μM)よりも６７％低かった(図２Ａ, p<0.05, n=5, s.e.m.)。メチオニンでも有意差（２２％低下）を認めた。タウリン濃度のこの低下が視力低下と相関しているかどうかを決めるために、ＥＲＧ振幅(r =0.769, p=0.0093%)と錐体密度(r=0.818, p=0.0038%)の両方を対照動物およびＶＧＢ投与ラットのタウリン濃度に対して示した（図２Ｂ、図２Ｃ）。タウリン濃度はＥＲＧ振幅と錐体密度の両方と高度に相関していた。この両因子も互いに相関していた（図２Ｄ,r =0.703, p=0.0023%）。従って、低い血中タウリン濃度はラットの網膜ＶＧＢ毒性に直接関与する可能性がある。
タウリンは主として栄養から得る。従って、ＶＧＢ投与ラットの一つの群の飲料水にタウリンを補充した（０．１Ｍ）（ｎ＝７）。これらの動物の血漿中タウリン濃度は対照動物およびタウリンを補充していないＶＧＢ投与ラットの血漿中タウリン濃度を超えて上昇した（図２Ｅ）。明所視ＥＲＧ振幅はタウリン補充したＶＧＢ投与動物の方がタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物よりも大きかった（n=7）（図３Ａ,* p<0.01）が、対照動物では低いままであった(n=5) (図３Ａ, * p<0.05)。同様に、錐体節密度はタウリン補充したＶＧＢ投与群の方がタウリンを補充していない動物よりも大きかった(図３Ｂ, * p<0.05)が、対照動物では低いままであった(図３Ｂ, * p<0.001)。さらに、ＶＧＢ誘発ＧＦＡＰ免疫染色はタウリン補充した動物の方がタウリンを補充していない動物よりも増大しなかった(図３Ｃ, * p<0.001)。このような発見から、ＶＧＢ誘発網膜損傷はラットのタウリン補充によって減弱できることがわかる。
別の種におけるＶＧＢ網膜毒性をタウリンによって予防できるかどうかを決めるために、マウスにタウリンを補充して（n=7）またはタウリンを補充せず(n=7)にＶＧＢを２９〜３０日間投与した。ラットと同様に、ＶＧＢ投与マウスには対照群（n=5）(図４Ａ, * p<0.01)より有意に低い明所視ＥＲＧ振幅が認められた。タウリン補充によってこの明所視ＥＲＧ振幅の減少が抑制され、これらのマウスと対照群との間に統計的有意差は認められなかった。タウリンを補充したまたは補充しない２つのＶＧＢ投与群の間には統計的有意差を認めた(図４Ａ,* p<0.05)。この２つのＶＧＢ投与群における外核層の組織崩壊の定量化から、タウリンを補充したマウスは補充しなかったマウスよりも網膜組織崩壊の領域が小さいことがわかった(図４Ｂ, * p<0.001)。錐体外節および内節をその細胞外マトリクスのレクチン染色に従って定量化することで、ＶＧＢ投与によって密度が低くなることがわかった(図４Ｃ, * p<0.001)。この錐体密度の減少はタウリン補充によって予防される(図４Ｄ, * p<0.001)。最後に、ＶＧＢ投与マウスでみられる双極細胞樹状突起の出芽はタウリン補充によって完全に抑制された。これらの結果から、タウリン補充によってマウスのＶＧＢ毒性の特徴も減ることがわかる。
【００６９】
実施例５
ビガバトリン治療を受けた乳児のタウリン欠乏
次いで、これらの発見がてんかん患者となんらかの臨床的関連を有するかどうかを評価した。ネッケル病院で過去３年間で、少なくとも６カ月間ＶＧＢ投与を受けた乳児痙攣を示す患者の血漿中タウリン濃度を遡及的に検査した。乳児痙攣を有する患者の血漿中アミノ酸濃度を、特に脳のRMIが良くないときに、病原学的精密検査の一部として、定期的に測定する。データは６人の患者から入手できた（［表２］）。５人の患者はタウリン濃度が同年齢の乳児の正常値より低かった。タウリンは２人の患者で検出不可能であった。この２人の患者の一方（患者２）は、タウリン濃度を測定した後に、１５カ月の期間のＶＧＢ治療を開始し、このタウリン濃度は正常になった。患者６は、タウリン濃度が正常値の下方部分にあったが、この測定値は血液遠心分離までの時間を過剰評価した可能性がある。従って、タウリン濃度はＶＧＢが投与されたてんかんの乳児では下がると思われる。
【００７０】
【表２】
（先行技術文献）
【００７１】
【非特許文献１２】Duboc A, Hanoteau N, Simonuth M, Rudolf G, Nehlig A, Sahel JA, Picaud S (2004) Vigabatrin, the GABA-transaminase inhibitor, damages cone photoreceptors in rats. Ann Neurol 55:695-705.
【非特許文献１３】Halonen T, Pitkanen A, Riekkinen PJ (1990) Administration of vigabatrin (gamma-vinyl acid) affects the levels of both inhibitory and excitatory amino acids in rat cerebrospinal fluid. J Neurochem 55:1870-1 874.
【非特許文献１４】Halonen T, Lehtinen M, Pitkanen A, Ylinen A, Riekkinen PJ (1988) Inhibitory and excitatory amino acids in CSF of patients suffering from complex partial seizures during chronic treatment with gamma-vinyl GABA (vigabatrin). Epilepsy Res 2:246-252.
【非特許文献１５】Imaki H, Moretz R, Wisniewski H, Neuringer M, Sturman J (1987) Retinal degeneration in 3-month-old rhesus monkey infants fed a taurine-free human infant formula. J Neurosci Res 18:602-614.
【非特許文献１６】Lake N, Malik N (1987) Retinal morphology in rats treated with a taurine transport antagonist. Exp Eye Res 44:331-346.
【非特許文献１７】Leon A, Levick WR, Sarossy MG (1995) Lesion topography and new histological features in feline taurine deficiency retinopathy. Exp Eye Res 61:731-741.
【非特許文献１８】Neal MJ, Shah MA (1990) Development of tolerance to the effects of vigabatrin (gamma-vinyl-GABA) on GABA release from rat cerebral cortex, spinal cord and retina. BrJ Pharmacol 100:324-328.
【非特許文献１９】Pitkanen A, Matilainen R, Ruutiainen T, Lehtinen M, Riekkinen P (1988) Effect of vigabatrin (gamma-vinyl GABA) on amino acid levels in CSF of epileptic patients. J Neurol Neurosurg Psychiatry 51:1395-1400.
【非特許文献２０】Rascher K, Servos G, Berthold G, Hartwig HG, Warskulat U, Heller-Stilb B, Haussinger D (2004) Light deprivation slows but does not prevent the loss of photoreceptors in taurine transporter knockout mice. Vision Res 44:2091-2100.
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するまたはＧＡＢＡ受容体を活性化する抗痙攣（anticonvulsive）有効成分を用いるヒトまたは動物の治療分野に関するものである。これらの抗痙攣有効成分はてんかん（epilepsy）を含む種々の神経疾患の予防に用いられる。
本発明は特に、これらの抗痙攣有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる網膜の損傷を含む望ましくない作用を減らす治療方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＧＡＢＡはパーキンソン病、ハンチントン舞踏病、アルツハイマー病、てんかん、反復的痙攣発作によって特徴付けられる中枢神経系疾患を含む複数の神経疾患で重要である。脳内のＧＡＢＡの欠乏は痙攣の一因とされている（非特許文献１）。
【０００３】
脳内のＧＡＢＡ濃度を上げる目的で、ＧＡＢＡの直接投与と経口投与の両方が研究されている。ＧＡＢＡの脳内への直接投与は抗痙攣効果を有するが、明らかに実用的な方法ではないことが示された。しかし、ＧＡＢＡは血液脳関門すなわち脳内の生体異物からＣＮＳを保護する膜を通過できないので、ＧＡＢＡの経口投与は有効ではない。
【０００４】
脳内ＧＡＢＡの欠乏を補正して痙攣を止めるのに重要な方法は、血液脳関門を通過できるＧＡＢＡ−アミノトランスフェラーゼ（ＧＡＢＡ-ＡＴ）阻害剤を用いることである（非特許文献２）。
【０００５】
この酵素の阻害によって脳内のＧＡＢＡ濃度が上がり、てんかん、その他の神経疾患の治療に応用できる。最も有効なＧＡＢＡ-ＡＴのインビボ時間依存性阻害剤の一つは４−アミノ−５−ヘキセン酸であり、これはγ−ビニルＧＡＢＡまたはビガバトリン（ほぼ世界中で市販されている抗痙攣剤）ともよばれる。
【０００６】
脳内ＧＡＢＡの欠乏を補正する他の方法はチアガビンのようなＧＡＢＡトランスポータを遮断するか、ＧＡＢＡ受容体に作用するか（トピラメートまたはフェルバメート）、グルタメートデカルボキシラーゼを活性化してＧＡＢＡ生合成を増加させて（ピリドキサルリン酸、バルプロエート、ガバペンチン）ＧＡＢＡ伝達を増加させるものである。全ての戦略は脳内のＧＡＢＡ濃度を増加させるか、その受容体を直接活性化して、てんかんを含む種々の神経疾患におけるＧＡＢＡの治療効果を促進するという点で共通している。
【０００７】
てんかんの場合には特に、既存の抗てんかん薬で新たに診断された患者の８０％の発作をなくすことができるが、社会経済的意味で重大な障害となる慢性難治性てんかんの患者も多い。
【０００８】
てんかん治療では抗てんかん薬を利用できるが、これらの薬剤にはいくつかの欠点がある。例えば、これらの薬剤は液体および体液に難溶性であることが多いか、極めて吸湿性である。さらに重要なことに、時間とともに薬剤が患者に効かなくなることが多い。さらに、多くの抗てんかん薬は望ましくない副作用、神経毒性および薬物相互作用を引き起こす。臨床で現在使用されている抗てんかん薬または抗てんかん薬の組合せで治療しても、てんかん患者の３０％は依然として発作を起こす。多くの抗てんかん薬が開発され、各患者毎に効果的な治療計画を建てる際の臨床医の医薬的選択肢が広がっている。
【０００９】
ビガバトリン (vigabatrin) は繃−アミノ酪酸トランスアミナーゼ阻害剤として開発されたもので、新規抗痙攣剤の最も有望な有効成分の一つであった。しかし、ビガバトリンは極めて激しい望ましくない作用、例えば非可逆的視野狭窄を誘発する。ビガバトリンによって誘発される視野狭窄が鼻部分に限定され、より中心の領域に広がるまでは、無症候性である。さらに、ビガバトリンによって誘発される視覚障害には視野狭窄だけでなく、視力低下、色の識別力および対比感度の低下を伴う中心視不全もある。ビガバトリンを用いた治療を停止することで視力障害を安定させることができるが、回復することはほとんどない。
【００１０】
しかし、てんかん発作は常に極めて重い障害であり、致死の危険性もあるため、ビガバトリンを含めたＧＡＢＡ濃度を増加させる有効成分が依然として処方されている。同様に、ＧＡＢＡトランスアミナーゼを遮断する（バルプロエート）、ＧＡＢＡトランスポータの遮断によってＧＡＢＡ濃度を増加させる（チアガビン）、ＧＡＢＡ生合成および／または遊離を刺激する（ガバペンチン、バルプロエート、levetiracetam）またはＧＡＢＡ受容体活性化を増加させる（トピラメート、フェルバメート、ベンゾジアゼピン、例えばジアゼパム、クロナゼパムおよびクロバザムまたはバルビツレート、例えばプリミドンおよびフェノバルビトン）の他の多くの抗てんかん性分子でも視覚的副作用が記述されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Karlsson,A.; Funnum,F.; Malthe-Sorrensen, D.; Storm-Mathisen, J.Biochem.Pharmacol 1974,22,3053-3061
【非特許文献２】Nanavati,S.M.; Silverman,R.B.J.Med.Chem.1989,32,2413-2421
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、当業界では、ＧＡＢＡ濃度を増加させ、または、ＧＡＢＡ受容体を活性化する抗痙攣有効成分を投与された人体または動物の体に引き起こされる副作用を避けることができる物質または方法が要望されている。
すなわち、望ましくない作用が少ないか、全くない抗痙攣有効成分をベースにした改良された抗痙攣医薬組成物、例えば抗てんかん医薬組成物が当業界では要望されている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質の、細胞外ＧＡＢＡの増加またはＧＡＢＡ伝達を誘発する有効成分を用いて人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用にある。
【００１４】
副作用を予防または阻止し、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発するのに好ましい有効成分はＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤、ＧＡＢＡ受容体活性剤およびグルタメートデカルボキシラーゼ活性剤からなる群の中から選択される。
【００１５】
副作用を予防または阻止するのに最も好ましい有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリンともよばれる）からなる。この有効成分はそのラセミ混合物または活性異性体のいずれかである。
【００１６】
本発明はさらに、有効成分として下記の（ｉ）および（ｉｉ）と、一種または複数の医薬上許容される賦形剤とを組み合わせて含む医薬組成物を提供する：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００１７】
本発明はさらに、（ｉ）と（ｉｉ）の組合せを治療を必要とする患者に投与する段階を含む、てんかんを含めた痙攣性疾患の治療方法に関する：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に重要な物質、例えばビタミンＢ６からなる群の中から選択される第２有効成分。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる副作用を防止するタウリンまたはビタミンＢ６による神経保護を示す図。
【図２】血漿中タウリン濃度とビガバトリンの網膜毒性との相関を示す図。
【図３】ラットのビガバトリン誘発網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図。
【図４】マウスのビガバトリン網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
［図１］は細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる副作用を防止するタウリンまたはビタミンＢ６による神経保護を示す図である。
ラット（図１Ａ）およびマウス（図１Ｂ）にビガバトリンを投与したときに、タウリンまたはビタミンＢ６を補充することでビガバトリンのみで認められた明所視網膜電図（ＥＲＧ）の振幅の減少が予防または部分的に抑制されている。対照とビガバトリン投与動物との間に明所視ＥＲＧの振幅の統計的有意差が認められる（ＶＧＢ：*ｐ＜０．０５）。逆に、マウスでは、対照動物と、ビガバトリン＋タウリンまたはビガバトリン＋ビタミンＢ６を投与した動物との間に有意差はなくなった。ラットでは、依然として対照群との間に有意差が認められた（ＶＧＢ＋タウリン：*ｐ＜０．０５）。しかし、マウスとラットの両方で、ビガバトリン＋タウリンを投与した動物は明所視ＥＲＧ振幅の減少が、ビガバトリンのみを投与した動物より小さく、統計的有意差を認められる（ＶＧＢ＋タウリン：。ｐ＜０．０５）。同様に、ビガバトリンに加えてビタミンＢ６を補充したマウスでは、明所視ＥＲＧの減少がビガバトリンのみを投与した動物より小さく、統計的有意差が認められた（ＶＧＢ＋Ｂ６，。ｐ＜０．０５）。
【００２０】
［図２］は血漿中タウリン濃度とビガバトリンの網膜毒性との相関を示す図で、（Ａ）は対照と各群のビガバトリン投与動物の血漿中タウリン濃度、（Ｂ）はＶＧＢ投与対照ラットの血漿中タウリン濃度と明所視ＥＲＧ振幅との相関を示し、これら２つの因子の相関因子は０．７６９（ｐ＝０．００９３％、ｎ＝１０）である。（Ｃ）は血漿中タウリン濃度と錐体光受容体内節／外節の密度との相関を示し、これら２つのパラメータの相関因子は０．８１８（ｐ＝０．００３８％、ｎ＝１０）である。（Ｄ）は明所視ＥＲＧ振幅と錐体光受容体内節／外節の密度との相関を示し、これら２つの因子の相関因子は０．７０３（ｐ＝０．００２３％、ｎ＝１０）である。（Ｅ）はタウリン補充によるＶＧＢ投与ラットの血漿中タウリン濃度の回復を示す。（Ａ）および（Ｅ）の横線は平均値を示す。
【００２１】
［図３］はラットのビガバトリン誘発網膜毒性の全特徴のタウリン補充による予防を示す図で、対照ラット（s.e.m.，ｎ＝６）、タウリンを補充したまたはタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物（ＶＧＢ、ｎ＝７；ＶＧＢ＋タウリン、ｎ＝７，s.e.m.）の明所視ＥＲＧ振幅（３Ａ）と、置換光受容体核を有する網膜領域の長さ（３Ｂ）と、錐体内節／外節の密度（３Ｃ）と、増加したＧＦＡＰ発現を有する領域（３Ｄ)とを定量化したものである。縮尺目盛りは５０μｍを示す（ＩＰＬ：内網状層）。
【００２２】
［図４］はマウスのビガバトリン網膜毒性の全ての特徴のタウリン補充による予防を示す図で、対照マウス（s.e.m.，ｎ＝５）、タウリンを補充したまたはタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物（ＶＧＢ、s.e.m.，ｎ＝７；ＶＧＢ＋タウリン、s.e.m.，ｎ＝７，）の明所視ＥＲＧ振幅（４Ａ）と、置換光受容体核を有する網膜領域の長さ（４Ｂ）と、錐体内節／外節の密度（４Ｃ）と、双極細胞がＯＮＬ中に出芽する領域（４Ｄ)とを定量化したものである。縮尺目盛りは５０μｍを示す（ＩＰＬ：内網状層）。
【００２３】
驚くことに、細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンで治療した患者の視力の進行性および非可逆的な低下は血中タウリン濃度の大きな減少に関連するということを本発明者は見出した。特に、ビガバトリンを投与した小児てんかん患者ではタウリン欠乏が認められた。
【００２４】
本発明でビガバトリン投与ラットで認められる血漿中の低タウリン濃度とこの動物の視覚機能の低下との間に相関があることがわかった。
本発明ではさらに、驚くべきことに、タウリンまたはタウリン生合成に必要な物質をビガバトリン投与個体に補充することによって、ビガバトリンによって誘発される望ましくない副作用が阻止される、特にビガバトリン誘発網膜病変が阻止されることがわかった。
【００２５】
ビガバトリンによってタウリンの濃度は変化しないが、ＧＡＢＡ濃度は３倍に増加することが従来技術で示されているので、本発明者のこれらの発見はなおさら驚きである。
本発明者は、細胞外ＧＡＢＡ誘発剤の役目をする抗痙攣有効成分によって引き起こされる有害な副作用を、人体または動物の体の血中タウリン量を増加させる物質のいずれか一つを投与することによって予防または遮断できることを見出した。
【００２６】
本明細書で人体または動物の体の血中タウリン量を増加させる物質はタウリン自体の他に、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質である。
【００２７】
本明細書ではタウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質をまとめて「タウリン様」物質とよぶことができる。
【００２８】
本発明の対象は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発する有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用にある。
本発明ではタウリンは２−アミノエタンスルホン酸からなる。
本発明ではタウリン前駆体とはヒトまたは動物に投与されたときに直接または間接的にタウリンにトランスフォームできる物質を意味する。
【００２９】
好ましいタウリン前駆体はシステイン、シスタチオニン、ホモシステイン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、セリン、Ｎ−アセチル−システイン、グルタチオン、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｓ−アデノシルメチオニン、ベタインおよびメチオニンからなる群の中から選択される。
本発明では、タウリン代謝物として、タウリンのトランスフォーメーションによってインビボで生成される物質がある。
好ましいタウリン代謝物はヒポタウリン、チオタウリン、タウロコール酸からなる群の中から選択される。
本発明でタウリン誘導体は、構造的にタウリンに近いが、少なくとも一つの構造上の差、例えば一つまたは複数の化学変化のある物質、例えばタウリンで見られる原子または化学基を異なる原子または異なる化学基で少なくとも一つ置換した物質である。
【００３０】
好ましいタウリン誘導体はアセチルホモタウリネート、およびピペリジノ−、ベンズアミド−、フタルイミド−またはフェニルスクシニルイミドタウリン誘導体からなる群等の種々の単位の中から選択される。このようなタウリン誘導体は下記非特許文献３および非特許文献４に記載されている。
【非特許文献３】Kontro et al. (1983, Prog Clin Biol Res, Vol. 125 : 211-220)
【非特許文献４】Andersen et al. (2006, Journal of pharmaceutical Sciences, Vol. 73(nー1) : 106-108)
【００３１】
誘導体の例としてはタウロリジン（４，４’−メチレン−ビス（テトラヒドロ−２Ｈ−１，２，４−チアジアジン−１,１−ジオキシドまたはタウロリン）、タウラルタムおよびタウリンアミド、クロロハイドレート−Ｎ−イソプロピルアミド−２−（１−フェニルエチル）アミノエタンスルホン酸が挙げられる。
【００３２】
本発明でタウリン類似体とはタウリンとは化学的に異なるが、同じ生物学活性を発揮する物質、例えば細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって誘発される網膜病変を阻止する物質である。
好ましいタウリン類似体は（+/-）ピペリジン−３−スルホン酸（ＰＳＡ）、２−アミノエチルホスホン酸（ＡＥＰ）、（+/-）２−アセチルアミノシクロヘキサンスルホン酸（ＡＴＡＨＳ）、２−アミノベンゼンスルホネート（ＡＮＳＡ）、ヒポタウリン、±トランス−２−アミノシクロペンタンスルホン酸（ＴＡＰＳ）８−テトラヒドロキノレインスルホン酸（ＴＨＱＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、β−アラニン、グリシン、グアニジノエチルスルフェート（ＧＥＳ）、３−アセトアミド−１−プロパンスルホン酸（acamprosate）からなる群の中から選択される。
【００３３】
本発明でタウリン生合成に必要な物質には、インビボタウリン生合成に関与する全ての物質、例えば酵素および酵素補助因子、従って、システインジオキシゲナーゼ（EC 1.13.11）、スルフィノアラニンデカルボキシラーゼ（EC 4.1.1.29）およびこれらの酵素補助因子が含まれる。
タウリン生合成に必要な物質はビタミンＢ６（またはピリドキサール−５’−リン酸）、ビタミンＢ１２（コバラミン）、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ナイアシン、チアミン（チアミンピロリン酸）およびパントテン酸からなる群の中から選択するのが好ましい。
【００３４】
本発明で細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ受容体活性化を増加させるのに有効成分はＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤、グルタメートデカルボキシラーゼ活性剤およびＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータを含む。
ＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼはＧＡＢＡトランスアミナーゼまたは４−アミノ酪酸トランスアミナーゼ（EC 2.6.1.19）ともよばれる。グルタメートデカルボキシラーゼはEC 4.1.1.15に分類される。
【００３５】
本発明で副作用がタウリンによって阻止または遮断されるＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤には下記が含まれる：４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）、バルプロエート、（1R,3S,4S）−３−アミノ−４−フルオロシクロペンタン−１−カルボン酸、（1R,4S）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（1S,4R）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4R）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4S）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（S）−４−アミノ−４，５−ジヒドロ−２−チオフェンカルボン酸、１Ｈ−テトラゾール−５−（α−ビニル−プロパンアミン）、２，４−ジアミノブタノエート、２−オキソアジピン酸、２−オキソグルタレート、２−チオウラシル、３−クロロ−４−アミノブタノエート、３−メルカプトプロピオン酸、３−メチル−２−ベンゾチアゾロンヒドラゾン塩酸塩、３−フェニル−４−アミノブタノエート、４−エチニル−４−アミノブタノエート、５−ジアゾウラシル、５−フルオロウラシル、アミノオキシアセテート、β−アラニン、シクロセリンおよびＤ−シクロセリン。
【００３６】
本発明で副作用をタウリンによって阻止または遮断できるグルタメートデカルボキシラーゼ活性剤には２−オキソグルタレート、３−メルカプトプロピオン酸、アミノオキシ酢酸およびグルタレートが含まれる。
ＧＡＢＡトランスポータ阻害剤はチアガビン（tiagabine）で構成できる。
ＧＡＢＡ受容体アゴニストおよびモジュレータは下記の群の中から選択できる：トピラメート、フェルバメート、トラマドール、オキシカルバゼピン、カルバマゼピン、エスゾピクロン、ゾピクロン、バクロフェン、γ−ヒドロキシ酪酸、イミダゾピリジン、例えばザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロンフェニトイン、プロポフォール、フェニトイン、ベンゾジアゼピンおよびバルビツレート。
【００３７】
ベンゾジアゼピンは下記の群の中から選択できる：クロバザム、アプラゾラム(ザナックス、登録商標)、ブロマゼパム(Lexomil、登録商標)、ジアゼパム(ヴァリウム、登録商標)、ロラゼパム(Ativan、登録商標)、クロナゼパム(Klonopin、登録商標)、テマゼパム(Restoril、登録商標)、オキサゼパム(セラックス、登録商標)、フルニトラゼパム(ロヒプノール、登録商標)、トリアゾラム(ハルシオン、登録商標)、クロルジアゼポキサイド(リブリウム、登録商標)、フルラゼパム(ダルメーン、登録商標)、エスタゾラム(ProSom、登録商標)およびニトラゼパム(モガドン、登録商標)。
【００３８】
バルビツレートは下記の群の中から選択できる：プリミドン、フェノバルビトン、ペントバルビタール、ミダゾラム、フェニトイン、セコバルビタールおよびアモバルビタールブタバルビタールバルビタール、フェノバルビタール、ブタルビタール、シクロバルビタール、アロバルビタール、メチルフェノバルビタールおよびビニルビタール。
【００３９】
本発明の別の対象は、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止することを目的とする、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質を含む医薬組成物にある。
【００４０】
本発明の別の対象は、タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の有効量を、治療を必要とする人体または動物の体に投与する段階を含む、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止する治療法にある。
以下、これらの組成物および方法をさらに詳細に説明する。
【００４１】
医薬組成物および方法
一般に、本発明の医薬組成物は（ｉ）および（ｉｉ）と一種ま複数の医薬上許容される賦形剤との組合せからなる：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体、および、タウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００４２】
第２有効成分はタウリンおよび「タウリン様」物質とからなる群の中から選択されるといえる。
本発明の医薬組成物で高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するのに好ましい有効成分すなわち第１有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）、そのラセミ混合物または活性異性体である。
【００４３】
本発明の医薬組成物は種々の神経疾患、主に痙攣性疾患の予防で使用できる。痙攣性疾患にはてんかん、結節硬化症（tuberous sclerosis）、乳児痙攣、ヘロイン、コカイン、エタノールの薬物嗜癖症等の薬物嗜癖患者に発症する痙攣疾患が含まれる。
【００４４】
本発明の医薬組成物は抗痙攣医薬組成物が主成分である。第１および第２有効成分はこの抗痙攣医薬組成物中に「治療上有効な量」含まれる。治療上有効な量とは所望の抗痙攣効果を発揮すると同時に有害な副作用を全く誘発しないか、タウリンもタウリン様物質も含まない第１有効成分を含む医薬組成物によって誘発される有害な副作用に比較して、より少ない副作用を誘発する、十分な有効成分の組合せ量である。
【００４５】
一般的には、「治療上有効な量」または「有効量」または「治療上有効」とは所定条件および投与計画で治療効果が得られる量を意味する。これは必要な添加剤および希釈剤すなわちキャリアまたは投与媒体と組み合わせて所望の治療効果が得られるように計算された有効物質の所定量である。さらに、ホストの活性、機能および応答の臨床的に重要な欠陥を減らし、好ましくは予防するのに十分な量を意味する。あるいは、治療上有効量はホスト中で臨床的に有意な条件の改善をもたらすのに十分な量である。化合物の量はその比活性に応じて変えられることは当業者には理解できよう。適切な投与量は必要な希釈剤すなわちキャリアまたは添加剤と組み合わせて所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性組成物を含むことができる。
【００４６】
本発明の別の対象は、タウリンまたはタウリン様物質の有効量を、治療を必要とする人体または動物体に投与する段階を含む、高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止する方法にある。
【００４７】
本発明の別の対象は、（ｉ）と（ｉｉ）との組合せを治療を必要とする人体または動物体に投与する段階を含む痙攣性疾患の予防または治療方法にある：
（ｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発するかあるいはＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【００４８】
一般に、第１有効成分は４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン）からなる。有利な実施例では第２有効成分はタウリンとビタミンＢ６からなる群の中から選択される。
治療を必要とする患者には痙攣性疾患、特にてんかんに罹った成人または小児の患者が含まれる。
本発明の一つの実施例での方法では、上記医薬組成物を治療を必要とする患者に投与する段階を含む。
【００４９】
本発明の医薬組成物で、第１有効成分すなわち高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発する有効成分の量は、痙攣性疾患に罹った患者の治療で一般に用いられる上記有効成分量である。一般に、ビガバトリンでは平均体重が８０キロの成人患者に対して、一日に１０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１００μｇ〜５ｇ、例えば１ｍｇ〜１ｇのビガバトリンを投与可能にするように医薬組成物の投与形態を合せる。一般に、一日に２回投与で１日量の半分を含むような剤形にする。有効成分の形態がラセミ体でなく活性異性体の場合は、ビガバトリンの使用量を少なくすることができ、その量は一般に従来用いられるラセミ体の量の半分である。
【００５０】
本発明の医薬組成物で、第２有効成分すなわちタウリンまたはタウリン様物質の量は、平均体重が８０キロの成人患者に対して一日に１０μｇ〜１０ｇの量のタウリンまたはタウリン様物質の投与可能にするように医薬組成物の剤形の量を合わせる。
【００５１】
本発明の医薬組成物または薬学方法は実際にはその有効成分を一種以上の医薬上または生理学的に許容される賦形剤と組み合わせて用いる。
一般に、本発明の医薬組成物は、上記組成物が（ｉ）タウリンおよびタウリン様物質の中から選択される一種または複数の物質のみを含む場合、あるいは（ｉｉ）高レベルの細胞外ＧＡＢＡを誘発する第１有効成分と、タウリンおよびタウリン様物質の中から選択される第２有効成分との組合せを含む場合にかかわらず、一種または複数の有効成分を医薬組成物の全重量に対して０．１〜９９．９重量％、一般に１〜９０重量％の量で含む。
【００５２】
一般に、本発明の医薬組成物は、一種以上の賦形剤を医薬組成物の全重量に対して０．１〜９９．９重量％、一般に１０〜９９重量％の量で含む。
「生理学的に許容される賦形剤またはキャリア」とは、全身または局所投与で安全に用いることができる固体または液体の充填剤、希釈剤または物質を意味する。医薬上許容されるキャリアは、投与経路に応じて、固体または液体の充填剤、希釈剤、ヒドロトロープ、界面活性剤および封入物質として当業者に周知である。
【００５３】
本発明の組成物に含むことができる全身投与用の医薬上許容されるキャリアには糖、デンプン、セルロース、植物油、緩衝液、ポリオールおよびアルギン酸が含まれる。特定の医薬上許容されるキャリアは下記文献に記載されており、これらの文献は全て本明細書の一部を成す。
【特許文献１】米国特許第4,401,663号（Buckwalter、1983年8月30日公開）
【特許文献２】欧州特許出願第089710号（LaHann、1983年9月28日公開）
【特許文献３】欧州特許出願第0068592号（Buckwalter、1983年1月5日公開）
【００５４】
非経口投与に好ましいキャリアにはプロピレングリコール、ピロリドン、オレイン酸エチル、水性エタノールおよびこれらの組合せが含まれる。
代表的なキャリアにはアカシア、寒天、アルギン酸塩、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラゲニン、粉末セルロース、グアーガム、コレステロール、ゼラチン、ゴム寒天、アラビアゴム、カラヤゴム、ガティゴム、ローカストビーンガム、オクトキシノール９、オレイルアルコール、ペクチン、ポリ（アクリル酸）およびその同族体、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリ（酸化エチレン）、ポリビニルピロリドン、グリコールモノステアレート、プロピレングリコールモノステアレート、キサンタンゴム、トラガカント、ソルビタンエステル、ステアリルアルコール、デンプンおよび化工デンプンが含まれる。適切な添加範囲は約０．５〜約１％である。
【００５５】
本発明の医薬組成物を配合する場合当業者は欧州薬局方または米国薬局方の最終版を参照するのが有利である。また、当業者は欧州薬局方の第５版「２００５年」または米国薬局方のＵＳＰ２８−ＮＦ２３版を参照するのが好ましい。
本発明の医薬組成物の各用量に含まれる有効成分の組合せ重量は医療上有効な化合物の分子量および痙攣性疾患を阻害または遮断するのに有効な重量に依存する。痙攣性疾患の予防または治療に必要な細胞外ＧＡＢＡ誘発剤、特にビガバトリンの有効量は当業者に周知である。
【００５６】
本発明の医薬組成物の投与量での細胞外ＧＡＢＡ誘発剤、例えばビガバトリンと組み合わされるタウリンまたはタウリン様物質の適量を決定するために、当業者はその中に含まれるタウリンまたはタウリン様物質に関する技術分野で周知または決定された有効量を参考にするのが有利である。
以下、実施例を参照して本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００５７】
実施例１、２
Ａ．実施例１、２の材料と方法
ビガバトリン処置
ウィスターラットRj Wi IOPS HanとＢＡＬＢ／ｃマウスをJanvier Breeding Center（フランス国、Le Genest-St-Isle）から生後７週で購入した（Duboc et al.,2004）（非特許文献５）。ＶＧＢを０．９％ＮａＣｌに１２５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶かしたものを、４０ｍｇ(125 mg/ml, 0.32 ml)で４５または６５日間、および、３ｍｇ(60 mg/ml, 0.05 ml)で２９日間マウスに毎日腹腔内注射した（一日量はラットで約２００ｍｇ／ｋｇ、マウスで１５０ｍｇ／ｋｇ）。ビタミンＢ６（活性体）を１ｍＭ／ｋｇ（溶液１５４，４６ｍｇ／ｍｌ）の用量で投与し、タウリンは０．１モル／ｌの飲料水で供給した。
最後のＶＧＢ注射の後にＥＲＧを記録した（Duboc et al.,2004）（非特許文献５）。ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）を含む溶液を筋肉注射し、麻酔をかけた。２．５ｃｄｍ-2の光強度に１０分順応させた後、１０ｃｄｍ-2の閃光強度で、３０秒の刺激間隔で１０回記録し、平均化した。これらの明所視ＥＲＧ測定をラットで５９日間、マウスで２９日間行った。
注射の６５日後に、ラットを麻酔して、血液サンプルを抽出した。麻酔は上述のようにかけた。麻酔下で留置カテーテルを頸動脈に入れた。この方法によって、一回で大量の良質な血液サンプルを得ることができる。各ラット毎にヘパリン添加血液サンプラーで１ｍｌの血液サンプルを採って直ぐに遠心分離し、−８０℃で凍結した。自動アミノ酸イオンクロマトグラフィ（Pasteur Cerba,France）を用いて、サンプル中の全遊離アミノ酸を定量的に決定した。
【００５８】
実施例１
細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによるタウリン欠乏の誘発
［表１］には、ビガバトリン投与動物と対照アルビノ動物の両方の血液サンプルで測定したアミノ酸濃度が示してある。この表から大部分のアミノ酸トレオニン、セリン、バリン、シトルリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチンでは、７〜３２％の濃度は統計的有意差が認められないことがわかる。既に報告されているように、グルタミン酸は血液サンプル中で５６％大幅に減少し、統計的有意差を認められる。しかし、最大の変化はタウリンで認められ、ビガバトリン投与動物で３７３．４から１２２．２μMまで６７％減少し、統計的有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。有意差（２２％）はメチオニンでも認められた。これらの観察結果から、ビガバトリン投与によるタウリンおよびメチオニン濃度の有意な減少が認められた。
【００５９】
実施例２
細胞外ＧＡＢＡ誘発剤ビガバトリンによって引き起こされる望ましくない副作用のタウリンおよびタウリン様物質による予防および治療
タウリン補充によってビガバトリン誘発網膜の毒性を予防できるかどうかを調べるために、動物にビガバトリンのみまたはビガバトリン＋タウリン補充を投与した。ビガバトリンのみでは既に述べたように明所視網膜電図（ＥＲＧ）の測定値が減少した。逆に、マウスでは対照とビガバトリン＋タウリン補充またはビガバトリン＋ビタミンＢ６補充との間に統計的有意差を認められなくなった（図１Ｂ）。ラットではビガバトリンのみよりも明所視ＥＲＧ振幅の減少が小さいにもかかわらず、対照動物群では依然として統計的有意差が認められた（図１Ａ）。しかし、全ての種で、ビガバトリンとビガバトリン＋タウリン補充との間に投与動物では統計的有意差が認められた［図１］）。同様に、ビタミンＢ６の補充によっても明所視ＥＲＧ振幅の減少が小さくなり、ビガバトリンのみのマウス群とビガバトリン＋ビタミンＢ６補充投与群との間に統計的有意差が認められた（図１Ｂ）。これらの結果はビガバトリン誘発のタウリン濃度低下によってビガバトリンの網膜毒性が生じるという仮説と合致する。
【００６０】
【表１】
【００６１】
実施例３、４
Ａ．実施例３、４の材料と方法
Ａ．１．動物の処置
ウィスターラットRj Wi IOPS HanまたはＢＡＬＢ／ｃマウスをJanvier（フランス国、Le Genest-St-Isle）から生後６〜７週で購入した（非特許文献５）。ＶＧＢを０．９％ＮａＣｌに溶かしたものを４０ｍｇ(125 mg/ml, 0.32 ml)で４５または６５日間ラットに、および、３ｍｇ(60 mg/ml, 0.05 ml)で２９日間マウスに毎日腹腔内注射した。これらの一日量（ラットで２００ｍｇ／ｋｇ、マウスで１５０ｍｇ／ｋｇ）はてんかんの動物治療に記載されているもの（非特許文献５）またはてんかんのヒト治療（非特許文献６）に記載されているもの（成人患者：１〜６ｍｇ／ｋｇ、小児：５０〜７５ｍｇ／ｋｇまたは乳児：１００〜４００ｍｇ／ｋｇ）と一致している（非特許文献７）（非特許文献８）、（非特許文献９）。
【非特許文献５】Andre, V., Ferrandon, A., Marescaux, C. & Nehlig, A. Vigabatrin protects against hippocampal damage but is not antiepileptogenic in the lithium-pilocarpine modeT of temporal lobe epilepsy. Epilepsy research Vol. 47, 99-117 (2001)) or in humans (adult patients: 1-6mg/kg; children:50-75mg/kg; or infants: 100-400 mg/kg)
【非特許文献６】Chiron, C., Dumas, C., Jambaque, I., Mumford, J. & Dulac, O. Randomized trial comparing vigabatrin and hydrocortisone in infantile spasms due to tuberous sclerosis. Epilepsy research Vol. 26, 389-395 (1997)
【非特許文献７】Lux, A.L., et al. The United Kingdom Infantile Spasms Study comparing vigabatrin with prednisolone or tetracosactide at 14 days: a multicentre, randomised controlled trial. Lancet Vol. 364, 1773-1778 (2004)
【非特許文献８】Lux, A.L., et al. The United Kingdom Infantile Spasms Study comparing vigabatrin with prednisolone or tetracosactide at 14 days: a multicentre, randomised controlled trial. Lancet Vol. 364, 1773-1778 (2004)
【非特許文献９】Aicardi, J., Mumford, J.P., Dumas, C. & Wood, S. Vigabatrin as initial therapy for infantile spasms: a European retrospective survey. Sabril IS Investigator and Peer Review Groups. Epilepsia Vol. 37, 638-642 (1996))
【００６２】
タウリンは０．１Ｍ濃度の飲料水で補充した。動物のケージの光強度をラットの場合は１２５〜１３０ルクス、マウスは７０〜８５ルクスにした。
【００６３】
Ａ．２．網膜電図（ＥＲＧ）
最後のＶＧＢ注射の後に明所視ＥＲＧを記録した（非特許文献５）。ケタミン（４０ｍｇ／ｍｌ）およびキシラジン（４ｍｇ／ｍｌ Rompum）を含む溶液を筋肉注射（０．８〜１．２ｍｇ／ｋｇ）して麻酔をかけた。動物を２５ｃｄｍ-2の背景光に１０分間明順応させた。次いで、この背景光に閃光を当てた。マウス実験および暗所に維持したラットの場合は１０ｃｄｓｍ-2の閃光強度（［図２］、［図６］）に、その他の実験では２５ｃｄｓｍ-2の閃光強度（［図３］、［図５］）にした。３０秒の刺激間隔で１０回記録し、平均化した。
【００６４】
Ａ．３．組織学
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中で調製した４％（ｗｔ／ｖｏｌ）パラホルムアルデヒド中にアイカップを４℃で一晩固定した。４℃で１０％、２０％および３０％のショ糖を順次含むＰＢＳ中で凍結保護した後、組織を背腹軸に沿ってＯＣＴ中に包埋した（Labonord,Vielleneuve d'Ascq,France）。網膜切片（８〜１０μｍ厚さ）を０．１％トリトンＸ−１００（Sigma,St.Louis,MO）を含むＰＢＳ中で５分間透析処理し、洗浄し、１％ウシ血清アルブミン（Eurobio, Les-Ulis, France）、０．１％Tween20（Sigma）および０．１％アジ化ナトリウム（Merck,Fontenay-Sous-Bois,France）を含むＰＢＳ中で室温で２時間インキュベートした。この溶液に添加された一次抗体を室温で２時間インキュベートした。ポリクローナル抗体はＶＧｌｕＴ１（１：２０００、Chemicon）、ウサギＧＦＡＰ（1/400，Dako, USA）およびマウス錐体アレスチン／Luminaire junior（LUMIj）（１：２０，０００）に対する抗体にした。モノクローナル抗体はＧｏａ（１：２０００、Chemicon）に対する抗体にした。洗浄後、切片をAlexa TM594またはAlexa TM488（１：５００、分子プローブ、Eugene、OR）にコンジュゲートされた二次抗体、ヤギ抗ウサギｌｇＧまたはウサギ抗マウスｌｇＧで２時間インキュベートした。錐体光受容体の内節／外節をピーナッツレクチン（PNA,Sigma）で４℃で１２時間インキュベートした。最後のインキュベート期間に色素、ジアミドジフェニル−インドール（ＤＡＰＩ）を添加した。切片を洗浄し、フルオルサブ（Fluorsave）試薬（Calbiochem,San Diege,CA）を付け、ロッパー（Ropper）科学カメラ（Photometrics cool SNAP TM FX）を備えたライカ顕微鏡（LEICA DM 5000B）で観察した。
【非特許文献１０】Zhu, X., et al.Mouse cone arrestin expression pattern: light induced translocation in cone photoreceptors. Molecular vision Vol. 8, 462-471 (2002)) (Luminaire junior, LUMIJ, 1:20,000
【００６５】
定量化のために、背腹軸に沿った垂直断面を視神経で選択した。ＤＡＰＩ核染色に従って、組織崩壊した網膜領域の長さを測定した。ＧＦＡＰ免疫染色を用いて、反応性グリオーシスを有する網膜領域を検出および定量化した。錐体光受容体密度を錐体アレスチン免疫染色（ラット）またはＰＮＡ標識化（マウス）に従って計算し、錐体光受容体の内節／外節を可視化した。組織崩壊した網膜層状を有する領域を除外した。出芽する双極細胞を有する領域の定量化を、これらの細胞をプロテインＧｏαに対する抗体で免疫標識化して行った。
【００６６】
Ａ．３．アミノ酸測定
血液サンプルを、ヘパリン(14IU/ml)を含む溶血管に抽出し、遠心分離した(2200g、15分)。血漿中アミノ酸分析をJEOL AMINOTACアナライザーを使用して、ニンヒドリン検出イオン交換クロマトグラフィーによって行った。
【００６７】
Ｂ．結果
実施例３
ビガバトリンの網膜毒性はタウリン欠乏に依存する
タウリン欠乏は、マウス(Rascher et al., 2004)、ラット(Lake and Malik, 1987)、ネコ(Leon et al., 1995)およびサル(Imaki et al., 1987)の光受容体の変性を誘発することが知られている。代わりに、ビガバトリン投与動物(Halonen et al., 1990; Neal and Shah, 1990)および患者(Halonen et al., 1988; Pitkanen et al., 1988)のタウリン濃度は不変または増加すると報告されているが、本発明者はＶＧＢ網膜毒性におけるタウリンの潜在的な役割を調べた。対照動物およびＶＧＢを６５日間投与したラットの血漿中アミノ酸濃度を測定した。大部分のアミノ酸（トレオニン、セリン、バリン、シトルリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、およびオルニチン）の濃度の差は、２つの動物群の間で統計的に異ならなかった。逆に、血漿中グルタミン酸濃度はＶＧＢ投与動物の方が対照動物よりもはるかに（５６％）低く、既報告（非特許文献１１）と合致し、実施例２の［表１］に示すように統計的有意差を認めた(対照: 217.4±56.6 μM; VGB: 94.8±15.6 μM s.e.m., n=5)
【非特許文献１１】Bernasconi, R., et al. Gamma-vinyl GABA: comparison of neurochemical and anticonvulsant effects in mice. J Neural Transm Vol. 72, 213-233 (1988)
【００６８】
しかし、タウリンで最大差が認められた。タウリン濃度はＶＧＢ投与動物(122.2±26.6 μM)の方が対照動物(373.4±46.7 μM)よりも６７％低かった(図２Ａ, p<0.05, n=5, s.e.m.)。メチオニンでも有意差（２２％低下）を認めた。タウリン濃度のこの低下が視力低下と相関しているかどうかを決めるために、ＥＲＧ振幅(r =0.769, p=0.0093%)と錐体密度(r=0.818, p=0.0038%)の両方を対照動物およびＶＧＢ投与ラットのタウリン濃度に対して示した（図２Ｂ、図２Ｃ）。タウリン濃度はＥＲＧ振幅と錐体密度の両方と高度に相関していた。この両因子も互いに相関していた（図２Ｄ,r =0.703, p=0.0023%）。従って、低い血中タウリン濃度はラットの網膜ＶＧＢ毒性に直接関与する可能性がある。
タウリンは主として栄養から得る。従って、ＶＧＢ投与ラットの一つの群の飲料水にタウリンを補充した（０．１Ｍ）（ｎ＝７）。これらの動物の血漿中タウリン濃度は対照動物およびタウリンを補充していないＶＧＢ投与ラットの血漿中タウリン濃度を超えて上昇した（図２Ｅ）。明所視ＥＲＧ振幅はタウリン補充したＶＧＢ投与動物の方がタウリンを補充していないＶＧＢ投与動物よりも大きかった（n=7）（図３Ａ,* p<0.01）が、対照動物では低いままであった(n=5) (図３Ａ, * p<0.05)。同様に、錐体節密度はタウリン補充したＶＧＢ投与群の方がタウリンを補充していない動物よりも大きかった(図３Ｂ, * p<0.05)が、対照動物では低いままであった(図３Ｂ, * p<0.001)。さらに、ＶＧＢ誘発ＧＦＡＰ免疫染色はタウリン補充した動物の方がタウリンを補充していない動物よりも増大しなかった(図３Ｃ, * p<0.001)。このような発見から、ＶＧＢ誘発網膜損傷はラットのタウリン補充によって減弱できることがわかる。
別の種におけるＶＧＢ網膜毒性をタウリンによって予防できるかどうかを決めるために、マウスにタウリンを補充して（n=7）またはタウリンを補充せず(n=7)にＶＧＢを２９〜３０日間投与した。ラットと同様に、ＶＧＢ投与マウスには対照群（n=5）(図４Ａ, * p<0.01)より有意に低い明所視ＥＲＧ振幅が認められた。タウリン補充によってこの明所視ＥＲＧ振幅の減少が抑制され、これらのマウスと対照群との間に統計的有意差は認められなかった。タウリンを補充したまたは補充しない２つのＶＧＢ投与群の間には統計的有意差を認めた(図４Ａ,* p<0.05)。この２つのＶＧＢ投与群における外核層の組織崩壊の定量化から、タウリンを補充したマウスは補充しなかったマウスよりも網膜組織崩壊の領域が小さいことがわかった(図４Ｂ, * p<0.001)。錐体外節および内節をその細胞外マトリクスのレクチン染色に従って定量化することで、ＶＧＢ投与によって密度が低くなることがわかった(図４Ｃ, * p<0.001)。この錐体密度の減少はタウリン補充によって予防される(図４Ｄ, * p<0.001)。最後に、ＶＧＢ投与マウスでみられる双極細胞樹状突起の出芽はタウリン補充によって完全に抑制された。これらの結果から、タウリン補充によってマウスのＶＧＢ毒性の特徴も減ることがわかる。
【００６９】
実施例５
ビガバトリン治療を受けた乳児のタウリン欠乏
次いで、これらの発見がてんかん患者となんらかの臨床的関連を有するかどうかを評価した。ネッケル病院で過去３年間で、少なくとも６カ月間ＶＧＢ投与を受けた乳児痙攣を示す患者の血漿中タウリン濃度を遡及的に検査した。乳児痙攣を有する患者の血漿中アミノ酸濃度を、特に脳のRMIが良くないときに、病原学的精密検査の一部として、定期的に測定する。データは６人の患者から入手できた（［表２］）。５人の患者はタウリン濃度が同年齢の乳児の正常値より低かった。タウリンは２人の患者で検出不可能であった。この２人の患者の一方（患者２）は、タウリン濃度を測定した後に、１５カ月の期間のＶＧＢ治療を開始し、このタウリン濃度は正常になった。患者６は、タウリン濃度が正常値の下方部分にあったが、この測定値は血液遠心分離までの時間を過剰評価した可能性がある。従って、タウリン濃度はＶＧＢが投与されたてんかんの乳児では下がると思われる。
【００７０】
【表２】
（先行技術文献）
【００７１】
【非特許文献１２】Duboc A, Hanoteau N, Simonuth M, Rudolf G, Nehlig A, Sahel JA, Picaud S (2004) Vigabatrin, the GABA-transaminase inhibitor, damages cone photoreceptors in rats. Ann Neurol 55:695-705.
【非特許文献１３】Halonen T, Pitkanen A, Riekkinen PJ (1990) Administration of vigabatrin (gamma-vinyl acid) affects the levels of both inhibitory and excitatory amino acids in rat cerebrospinal fluid. J Neurochem 55:1870-1 874.
【非特許文献１４】Halonen T, Lehtinen M, Pitkanen A, Ylinen A, Riekkinen PJ (1988) Inhibitory and excitatory amino acids in CSF of patients suffering from complex partial seizures during chronic treatment with gamma-vinyl GABA (vigabatrin). Epilepsy Res 2:246-252.
【非特許文献１５】Imaki H, Moretz R, Wisniewski H, Neuringer M, Sturman J (1987) Retinal degeneration in 3-month-old rhesus monkey infants fed a taurine-free human infant formula. J Neurosci Res 18:602-614.
【非特許文献１６】Lake N, Malik N (1987) Retinal morphology in rats treated with a taurine transport antagonist. Exp Eye Res 44:331-346.
【非特許文献１７】Leon A, Levick WR, Sarossy MG (1995) Lesion topography and new histological features in feline taurine deficiency retinopathy. Exp Eye Res 61:731-741.
【非特許文献１８】Neal MJ, Shah MA (1990) Development of tolerance to the effects of vigabatrin (gamma-vinyl-GABA) on GABA release from rat cerebral cortex, spinal cord and retina. BrJ Pharmacol 100:324-328.
【非特許文献１９】Pitkanen A, Matilainen R, Ruutiainen T, Lehtinen M, Riekkinen P (1988) Effect of vigabatrin (gamma-vinyl GABA) on amino acid levels in CSF of epileptic patients. J Neurol Neurosurg Psychiatry 51:1395-1400.
【非特許文献２０】Rascher K, Servos G, Berthold G, Hartwig HG, Warskulat U, Heller-Stilb B, Haussinger D (2004) Light deprivation slows but does not prevent the loss of photoreceptors in taurine transporter knockout mice. Vision Res 44:2091-2100.
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用。
【請求項２】
タウリン前駆体がシステイン、シスタチオニン、ホモシステイン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、セリン、Ｎ−アセチル−システイン、グルタチオン、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｓ−アデノシルメチオニン、ベタインおよびメチオニンからなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
タウリン代謝物がヒポタウリン、チオタウリン、タウロコール酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項４】
タウリン誘導体がアセチルホモタウリネート、ピペリジノ−、ベンズアミド−、フタルイミド−またはフェニルスクシニルイミド誘導体タウロリジン、タウラルタム、タウリンアミド、クロロハイドレート−Ｎ−イソプロピルアミド−２−（１−フェニルエチル）アミノエタンスルホン酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項５】
タウリン類似体が（+/-）ピペリジン−３−スルホン酸（ＰＳＡ）、２−アミノエチルホスホン酸（ＡＥＰ）、（+/-）２−アセチルアミノシクロヘキサンスルホン酸（ＡＴＡＨＳ）、２−アミノベンゼンスルホネート（ＡＮＳＡ）、ヒポタウリン、±トランス−２−アミノシクロペンタンスルホン酸（ＴＡＰＳ）８−テトラヒドロキノレインスルホン酸（ＴＨＱＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、β−アラニン、グリシン、グアニジノエチルスルフェート（ＧＥＳ）、３−アセトアミド−１−プロパンスルホン酸（acamprosate）からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項６】
タウリン生合成に必要な物質がビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ナイアシン、チアミンおよびパントテン酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項７】
細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ受容体の活性化を増加させる有効成分がＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ（輸送体）ブロッカー、グルタメートデカルボキシラーゼ活性剤およびＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータからなる群の中から選択される請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
ＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤が４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン(viＧＡＢＡtrin)）、そのラセミ混合物または活性異性体、バルプロエート、（1R,3S,4S）−３−アミノ−４−フルオロシクロペンタン−１−カルボン酸、（1R,4S）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（1S,4R）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4R）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4S）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（S）−４−アミノ−４，５−ジヒドロ−２−チオフェンカルボン酸、１Ｈ−テトラゾール−５−（α−ビニル−プロパンアミン）、２，４−ジアミノブタノエート、２−オキソアジピン酸、２−オキソグルタレート、２−チオウラシル、３−クロロ−４−アミノブタノエート、３−メルカプトプロピオン酸、３−メチル−２−ベンゾチアゾロンヒドラゾン塩酸塩、３−フェニル−４−アミノブタノエート、４−エチニル−４−アミノブタノエート、５−ジアゾウラシル、５−フルオロウラシル、アミノオキシアセテート、β−アラニン、シクロセリンおよびＤ−シクロセリンからなる請求項７に記載の使用。
【請求項９】
ＧＡＢＡトランスポータブロッカーがチアガビン（tiagabine）からなる請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
ＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータがトピラメート、フェルバメート、トラマドール、オキシカルバゼピン、カルバマゼピン、エスゾピクロン、ゾピクロン、バクロフェン、γ−ヒドロキシ酪酸、イミダゾピリジン、例えばザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロンフェニトイン、プロポフォール、フェニトイン、ベンゾジアゼピンおよびバルビツレートからなる群の中から選択される請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
有効成分として下記の（ｉ）および（ｉｉ）と一種または複数の医薬上許容される賦形剤とを組み合わせて含む医薬組成物：
（ｉ）細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【請求項１２】
細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発する第１有効成分が４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン、vigabatrin）、そのラセミ混合物または活性異性体からなる請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
第２有効成分がタウリンからなる請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１】
タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される物質の、細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ伝達を増加させる有効成分によって人体または動物の体に引き起こされる望ましくない副作用を予防または阻止するための医薬組成物の製造での使用。
【請求項２】
タウリン前駆体がシステイン、シスタチオニン、ホモシステイン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、セリン、Ｎ−アセチル−システイン、グルタチオン、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｓ−アデノシルメチオニン、ベタインおよびメチオニンからなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
タウリン代謝物がヒポタウリン、チオタウリン、タウロコール酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項４】
タウリン誘導体がアセチルホモタウリネート、ピペリジノ−、ベンズアミド−、フタルイミド−またはフェニルスクシニルイミド誘導体タウロリジン、タウラルタム、タウリンアミド、クロロハイドレート−Ｎ−イソプロピルアミド−２−（１−フェニルエチル）アミノエタンスルホン酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項５】
タウリン類似体が（+/-）ピペリジン−３−スルホン酸（ＰＳＡ）、２−アミノエチルホスホン酸（ＡＥＰ）、（+/-）２−アセチルアミノシクロヘキサンスルホン酸（ＡＴＡＨＳ）、２−アミノベンゼンスルホネート（ＡＮＳＡ）、ヒポタウリン、±トランス−２−アミノシクロペンタンスルホン酸（ＴＡＰＳ）８−テトラヒドロキノレインスルホン酸（ＴＨＱＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、β−アラニン、グリシン、グアニジノエチルスルフェート（ＧＥＳ）、３−アセトアミド−１−プロパンスルホン酸（acamprosate）からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項６】
タウリン生合成に必要な物質がビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ナイアシン、チアミンおよびパントテン酸からなる群の中から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項７】
細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ受容体の活性化を増加させる有効成分がＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤、ＧＡＢＡトランスポータ（輸送体）ブロッカー、グルタメートデカルボキシラーゼ活性剤およびＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータからなる群の中から選択される請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
ＧＡＢＡアミノトランスフェラーゼ阻害剤が４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン(viＧＡＢＡtrin)）、そのラセミ混合物または活性異性体、バルプロエート、（1R,3S,4S）−３−アミノ−４−フルオロシクロペンタン−１−カルボン酸、（1R,4S）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（1S,4R）−４−アミノ−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4R）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（4S）−４−アミノ−１−シクロペンテン−１−カルボン酸、（S）−４−アミノ−４，５−ジヒドロ−２−チオフェンカルボン酸、１Ｈ−テトラゾール−５−（α−ビニル−プロパンアミン）、２，４−ジアミノブタノエート、２−オキソアジピン酸、２−オキソグルタレート、２−チオウラシル、３−クロロ−４−アミノブタノエート、３−メルカプトプロピオン酸、３−メチル−２−ベンゾチアゾロンヒドラゾン塩酸塩、３−フェニル−４−アミノブタノエート、４−エチニル−４−アミノブタノエート、５−ジアゾウラシル、５−フルオロウラシル、アミノオキシアセテート、β−アラニン、シクロセリンおよびＤ−シクロセリンからなる請求項７に記載の使用。
【請求項９】
ＧＡＢＡトランスポータブロッカーがチアガビン（tiagabine）からなる請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
ＧＡＢＡ受容体アゴニストまたはモジュレータがトピラメート、フェルバメート、トラマドール、オキシカルバゼピン、カルバマゼピン、エスゾピクロン、ゾピクロン、バクロフェン、γ−ヒドロキシ酪酸、イミダゾピリジン、例えばザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロンフェニトイン、プロポフォール、フェニトイン、ベンゾジアゼピンおよびバルビツレートからなる群の中から選択される請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
有効成分として下記の（ｉ）および（ｉｉ）と一種または複数の医薬上許容される賦形剤とを組み合わせて含む医薬組成物：
（ｉ）細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発し、または、ＧＡＢＡ伝達を増加させる第１有効成分、
（ｉｉ）タウリン、タウリン前駆体、タウリン代謝物、タウリン誘導体、タウリン類似体およびタウリン生合成に必要な物質からなる群の中から選択される第２有効成分。
【請求項１２】
細胞外ＧＡＢＡを高レベルに誘発する第１有効成分が４−アミノ−５−ヘキセン酸（ビガバトリン、vigabatrin）、そのラセミ混合物または活性異性体からなる請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
第２有効成分がタウリンからなる請求項１１に記載の医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１０−５３２３３１（Ｐ２０１０−５３２３３１Ａ）
【公表日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１４００２（Ｐ２０１０−５１４００２）
【出願日】平成２０年７月４日（２００８．７．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５８６７２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００４０８２
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【出願人】（５９９１７６５０６）アンセルム（アンスチチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル） (23)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月４日（２００８．７．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５８６７２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００４０８２
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【出願人】（５９９１７６５０６）アンセルム（アンスチチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル） (23)
【Ｆターム（参考）】
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