抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤
【課題】 紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害を抑制又は改善する抗皮膚障害剤、及びこれを有効成分として含有する皮膚外用剤の提供。
【解決手段】 グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤。
【解決手段】 グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤に関する。更に詳細には、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする抗皮膚障害剤、及び前記グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を抗皮膚障害剤として含有し、紫外線曝露に起因する皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化等の少なくとも一つ以上を抑制又は改善する化粧品や医薬品として有用な皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線(例えば、太陽光)の連続的な長期間曝露は皮膚にケミカルメディエーター、サイトカイン等による炎症を生じせしめ、シワ、タルミ、皮膚肥厚、皮膚硬化、皮膚癌、日光性弾性線維症等の皮膚障害が生じる（非特許文献１参照）。特に表皮及び真皮が肥厚することにより、皮膚の弾性、保湿性が低下し、これが皮膚老化の要因の一つとなっていると考えられている。そこで、従来からこれらの障害を防ぐために、紫外線吸収剤（特許文献１、非特許文献２参照）、紫外線散乱剤（非特許文献３参照）が配合された外用剤、すなわち乳液、クリーム、ローション、美容液、ファンデーション、軟膏、パップ剤、貼付剤等が使用されている。又、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のシワやタルミ、ハリや弾力性の低下を予防、あるいは改善するために、レチノイン酸（非特許文献４参照）、抗炎症薬（非特許文献５参照）やオウバクエキス、シラカバエキス、セージエキス、ローマカミツレエキス等（特許文献２参照）、メリッサ抽出物（特許文献３参照）、更に細胞外マトリックス成分の異常蓄積、皮膚肥厚、シワ等の抑制に活性型ビタミンＤ３（非特許文献６参照）の配合が報告されている。
【０００３】
しかしながら、例えば、レチノイン酸を配合した皮膚外用剤は、真皮上層にコラーゲンを増殖させ、シワを改善する効果は有するが、シワの発生を抑制する効果までは認められず、塗布を中止すると元に戻ってしまう等の問題がある。又、活性型ビタミンＤ３はカルシウム代謝等の副作用の問題がある。他の紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、抗炎症薬、植物抽出物等を配合した皮膚外用剤においても、シワ形成、皮膚肥厚等の抑制、改善効果が十分ではなかったり、効果を高めるためにこれらの添加物を高濃度に配合すると製剤の使用感が損なわれたり、高温時や経時で変質する等の問題が生じる場合があった。
【０００４】
一方、沙棘の化粧料への応用は、沙棘の果汁油及び種子油を含有する皮膚老化防止効果を有する化粧料（特許文献４参照）や沙棘の果実油と生薬抽出成分を併用し、美白作用、保湿作用、皮膚の弾力維持作用、老化防止、紫外線吸収作用を有する化粧料はある（特許文献５参照）が、沙棘の極性溶媒抽出物を含有し、紫外線暴露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する効果を有する化粧料は見当たらない。
【０００５】
【特許文献１】特開平０９−２６８１９４号公報
【特許文献２】特開平０８−１０９１２２号公報
【特許文献３】特開平０９−２４１１４８号公報
【特許文献４】特開昭６３−１４５２１０号公報
【特許文献５】特開２００４−１２３５６３号公報
【非特許文献１】菅原努、野津敬一著「太陽紫外線と健康」裳華房(１９９８) Ｐ．２〜１００
【非特許文献２】ニコラス・J・ローウ／ナディム・Ａ・ジャーム編「サンスクリーンと皮膚科学」フレグランスジャーナル社１９９３年５月２０日発行、Ｐ．１９５〜２６２
【非特許文献３】「フレグランスジャーナル」フレグランスジャーナル社編 ２００２年７月号 Ｐ．１６〜２７、３３〜３８
【非特許文献４】Ｌｏｒｒａｉｎｅ Ｈ.Ｋｌｉｇｍａｎ著,“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｒｍｉｓ ｏｆ ｈａｉｒｌｅｓｓ ｍｉｃｅ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９８６年，ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．４，Ｐａｒｔ．２，Ｏｃｔｏｂｅｒ，Ｐ．７７９〜７８５
【非特許文献５】Ｂｉｓｓｅｔｔ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．著,“Ｐｈｏｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｐｉｃａｌ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｋｉｎ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈａｉｒｌｅｓｓ ｍｏｕｓｅ”，１９９０年，ｖｏｌ．７，Ｐ．１５３〜１５８
【非特許文献６】Ｋｏｓｈｉｉｓｈｉ Ｉ，ｅｔ ａｌ．著,“１，２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ Ｄ３ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｔｏ ｆｉｂｒｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｓｋｉｎ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｃｈｒｏｎｉｃ ＵＶ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．”，Ｔｏｘｙｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１年，ｖｏｌ．１７３，Ｐ．９９〜１０４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害を有効に抑制又は改善する抗皮膚障害剤、及び使用感や剤型に悪影響を及ぼすことなくこれを含有した皮膚外用剤の開発が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために、すでに安全性が確認されている医薬品、化粧品原料、及び民間薬等で使用されている成分に着目し、鋭意研究を重ねた結果、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物が、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲンの架橋形成、さらにはシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害の発現を抑制又は改善する効果に優れるとの新知見を得、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する抗皮膚障害剤に関するものである。また、紫外線曝露に起因する皮膚障害が、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化の少なくとも一つ以上である抗皮膚障害剤に関するものである。また更には、該抗皮膚障害剤を有効成分として含有し、前記皮膚障害を抑制又は改善する皮膚外用剤、特に老化防止用の皮膚外用剤に関するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係わるグミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物は、紫外線曝露に起因する皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積やコラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化の少なくとも一つ以上の皮膚障害の抑制又は改善に効果の高い抗皮膚障害剤である。また、前記抗皮膚障害剤を有効成分として含有する皮膚外用剤は、紫外線曝露に起因する前記皮膚障害を有効に抑制又は改善するものであり、従って、皮膚老化を防止する化粧品や医薬部外品等として有利に利用することができるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられるグミ科ヒッポファエ属沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．；以下、ラテン語表示の学名及び日本語の科、属は省略し、単に沙棘と記す）の極性溶媒抽出物は、沙棘から極性溶媒を用いて抽出されるものである。その抽出部位は、特に限定されるものではないが、全草、又は根、茎、幹、樹皮、幼芽、葉、花、果実、種子等のいずれか１ヶ所以上から抽出することができ、これらを乾燥、細切、圧搾、或いは発酵等、適宜処理を施した後、低温もしくは室温〜加温下で極性溶媒により抽出する方法を挙げることができる。
【００１１】
本発明に用いられる抽出溶媒としては、油脂成分を除去するため水、アルコール、多価アルコール等の極性溶媒が挙げられ、これらの一種又は二種以上を用いることができる。特に好ましい抽出溶媒としては、水又は、水−エチルアルコール系の混合極性溶媒が挙げられる。
【００１２】
更にこの極性溶媒抽出物は、分子量分画、溶媒分画、各種の樹脂処理(イオン交換樹脂、吸着剤等)等によって精製されたもの、凍結乾燥されたもの等いずれのものでも用いることができる。
【００１３】
具体的な製法としては、例えば沙棘果実乾燥物を粉砕し、約１０倍量の濃度０〜１００ｖｏｌ％の含水エチルアルコール又は同含水１，３−ブチレングリコールを用い、室温で、又は加温して１〜２時間抽出を行った後、油脂成分を完全に除去するためセライト(珪藻土)を加え、ろ過し、更に抽出液を分子量分画、溶媒分画、各種の樹脂処理(イオン交換樹脂、吸着剤等)等によって精製し、凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を得る。また、水−エチルアルコール系の溶媒においてはエチルアルコールを留去後、凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を得る。
【００１４】
本発明の抗皮膚障害剤のその形態については、沙棘の極性溶媒抽出物として含む限り、特に制限はなく、液状、ペースト状、クリーム状、ゲル状、粉末状等いずれの形態で用いることもできる。
【００１５】
また本発明の皮膚外用剤は、沙棘の極性溶媒抽出物を抗皮膚障害剤として含有することを特徴とする。本発明の皮膚外用剤における抗皮膚障害剤の含有量は、特に限定されるものではないが、皮膚外用剤中、沙棘の極性溶媒抽出物として０．０００１〜１０質量％（以下、単に「％」と記す）であり、好ましくは０．００１〜５％、より好ましくは０．１〜３％である。この範囲であれば、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、特にコラーゲンの異常産生やコラーゲン架橋形成、さらにはシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害の発現を抑制又はその症状を改善する効果に優れ、経時安定性の面からも良好なものが得られる。
【００１６】
本発明の抗皮膚障害剤を含有する皮膚外用剤には上記必須成分の他、化粧料や医薬部外品、外用医薬品等に通常使用される各種の成分、即ち、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、美白剤、抗炎症剤、抗酸化剤、保湿剤、殺菌剤、血行促進剤等の各種薬効剤、動植物・微生物由来の抽出物、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、香料等を、本発明の効果を損なわない範囲で目的に応じて適宜加えることができる。
【００１７】
また、本発明の抗皮膚障害剤を含有する皮膚外用剤としては、化粧料、医薬部外品、医薬品等が挙げられ、剤型も水性剤型、油性剤型、乳化剤型、粉末剤型、固形剤型等いずれの剤型にも配合することができる。例えば、化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック、バスソルト軟膏、ゲル剤、ファンデーション、パウダー、リップクリーム、口紅、日焼け止め製品等に用いることができる。
【実施例】
【００１８】
次に沙棘の極性溶媒抽出物の製造例、及び実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら制約されるものではない。
【００１９】
沙棘の極性溶媒抽出物の製造例を製造例１〜４に、既に抗シワ作用が報告されているシラカバ樹皮抽出物の製造例(陽性コントロールとして評価試験に使用)を製造例５に示した。
[製造例１]
沙棘果実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、水１，０００ｍＬを加え、熱水抽出を１時間行なった。冷却後、この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６００ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１６．３ｇ得た。
【００２０】
[製造例２]
沙棘果実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６５０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１８．４ｇ得た。
【００２１】
[製造例３]
沙棘果実乾燥の破砕物１００ｇに対して、５０ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。これをろ過し、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、水４００ｍＬを加え、容量に対してセライトを１０％加え、ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液７４０ｍＬを得、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１３．８ｇ得た。
【００２２】
[製造例４]
沙棘樹皮乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６５０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を８．２ｇ得た。
【００２３】
[製造例５]
シラカバ樹皮乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。これを遠心分離、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６６０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、シラカバ樹皮抽出物を７．４ｇ得た。
【００２４】
実施例1：ヘアレスマウス紫外線照射による皮膚障害試験
下記調製方法により抗皮膚障害製剤を調製し、紫外線照射による皮膚肥厚、シワ形成、皮膚硬化、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積（総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量）、コラーゲン架橋形成（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン）について評価した。
【００２５】
［試料（抗皮膚障害製剤）の調製］
製造例１〜３の沙棘極性溶媒抽出物及び製造例５のシラカバ樹皮抽出物を基剤（ポリエチレングリコール１０００：エチルアルコール＝１：１）に溶解し、５％濃度に試料を調製し、ヘアレスマスウス紫外線照射による皮膚評価試験に用いた。尚、シラカバ樹皮抽出物は陽性コントロールとして用いた。
【００２６】
［試料塗布法と紫外線照射法］
１群８匹とし、紫外線照射９０分前に上述の試料をヘアレスマウス（１０週齢）背中に０．１ｇ塗布し、一定量の紫外線（東芝ＦＬ２０Ｓ・ＢＬＢランプ）を１日２時間（５回／週）２０週間照射し（総照射量：７２０Ｊ／ｃｍ２）、皮膚肥厚、シワ形成、及び皮膚硬化の抑制効果を調べた。
尚、これらの試料の紫外線吸収スペクトルを測定し、これらは評価試験に影響を与えないことを確認した。
【００２７】
［評価法］
（皮膚肥厚抑制効果）
紫外線照射前と紫外線照射２０週後の皮膚の厚みをダイアル厚みゲージ(ＯＺＡＫ．ＭＦＧ．ＣＯ．ＬＴＤ．)を用い測定した。結果は、８匹の皮膚厚みの平均値、及びその２０週間後の増加率で評価した。
【００２８】
（シワ形成抑制効果）
紫外線照射２０週後のシワ形成について、下記表４に示す「光皮膚老化グレード」に基づいてシワグレードを判定した。なお、結果は、８匹の評点の平均値で表し評価した。
【００２９】
（皮膚硬化抑制効果）
ヘアレスマウス皮膚背部中央部位を摘み、復元に５秒以上を要する皮膚を皮膚硬化とし、マウス８匹中の発現率で評価した。
【００３０】
［細胞外マトリックス成分の異常蓄積；総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量］
（総ヒドロキシプロリン；コラーゲン定量法）
皮膚中のヒドロキシプロリンを測定し、コラーゲン異常蓄積量を評価した。
ヒドロキシプロリンの定量は先ず、ヘアレスマウス背部皮膚の凍結切片（２０ミクロン）を作製し、スライドガラス上で皮膚切片を加熱処理後、０．０５％アルカリ性プロテアーゼ（アクチナーゼＥ；科研製薬製）（５００チロシナーゼ単位／ｍＬ）で酵素分解（４０℃−２時間）し、この酵素溶液に可溶化した。その後、真空封印し、６Ｎ塩酸を用い加水分解後（１４５℃−４時間）、Ｗｏｅｓｓｅｎｅｒ法にてヒドロシキプロリンを発色させ、測定した。
【００３１】
（デルマタン硫酸定量法）
コラーゲン同様、細胞外マトリックス成分であるデルマタン硫酸の異常蓄積は紫外線照射による皮膚老化指標の一つで、この成分を測定することにより皮膚老化度を評価した。ヘアレスマウス背部皮膚をホルマリン固定後、６ミクロンの皮膚切片を作製し、スライドガラス上で皮膚切片をコンドロイチナーゼＡＢＣ（０．５単位／ｍＬ）及びコラーゲナーゼ（５００マンデル単位／ｍＬ）の酵素混合溶液で酵素分解（３７℃−２時間）し、この酵素溶液に可溶化させた後、下記の条件のポストカラム法にてＨＰＬＣ装置を用いて試料を分離し、反応試薬１と混合し、次いで反応試薬２と混合後、１１０℃−２分間チューブ内で反応させ、蛍光誘導体とし、蛍光検出器で測定した。
【００３２】
（ＨＰＬＣ条件）
ＨＰＬＣカラム：ＤＯＣＯＳＩＬ（４．６ｉ．ｄ．×１５０ｍｍ：センシュー科学社製）
蛍光検出：Ｅｘ．３４６ｎｍ、Ｅｍ．４１０ｎｍ
移動相：８．５％アセトニトリル−１ｍＭテトラｎ−ブチルアンモニウム水素硫酸
流速：１．５ｍＬ／分
カラム温度：６０℃
反応試薬１：０．３Ｍ ＮａＯＨ（０．２５ｍＬ／分）
反応試薬２：０．２５％２−シアノアセトアミド
【００３３】
（コラーゲン架橋形成：ペプシン耐性ヒドロキシプロリン定量法）
酸性プロテアーゼ（ペプシン；ナカライテスク社製）による分解の難易により、皮膚中のコラーゲン架橋度を評価した。
先ず、上記コラーゲン定量法で作製したヘアレスマウス背部皮膚の凍結切片（２０ミクロン）をスライドガラス上で０．０１％ペプシン（３６６単位／ｍＬ）で酵素分解（５℃−６４時間）し、ペプシン可溶のコラーゲンを水にて洗浄し除去した。その後、上述した同様な方法にてペプシン耐性のコラーゲンを加熱後、アクチナーゼＥを用い酵素分解し、この酵素溶液に可溶化した。次に溶液を真空封印し、６Ｎ塩酸を用い加水分解後（１４５℃−４時間）、Ｗｏｅｓｓｅｎｅｒ法にてヒドロシキプロリンを発色させ、ペプシン耐性ヒドロキシプロリンを測定した。
【００３４】
（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン(％)算出法）
皮膚中の総ヒドロキシプロリンに対するペプシン耐性ヒドロキシプロリンの含有率を算出し、コラーゲン架橋形成の指標とした。
ペプシン耐性ヒドロキシプロリン含有率(％)＝（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン／総ヒドロキシプロリン）×１００
【００３５】
皮膚肥厚、シワ形成、皮膚硬化、細胞外マトリックス成分の異常蓄積（総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量）、コラーゲン架橋形成（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン量、含有率）の評価結果をそれぞれ表１〜３に併せて示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
【表４】
【００４０】
表１〜３から明らかなように、本発明品製造例１〜３の沙棘の極性溶媒抽出物は陽性コントロールであるシラカバ樹皮抽出物と比較し、いずれも顕著な皮膚肥厚、皮膚硬化、シワ形成、細胞外マトリックス成分異常蓄積、コラーゲン架橋を抑制する効果に極めて優れたものであった。
【００４１】
実施例２ クリーム
（成分） （％）
（１）モノステアリン酸
ポリエチレングリコール（４０Ｅ．Ｏ．） ２．０
（２）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ５．０
（３）ステアリン酸 ５．０
（４）ベヘニルアルコール １．０
（５）流動パラフィン １０．０
（６）トリオクタン酸グリセリル １０．０
（７）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ５．０
（８）グリセリン ５．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残量
＊１ 製造例１
【００４２】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（８）及び（１１）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（７）、（９）、（１０）を加えた後、冷却してクリームを得た。
【００４３】
実施例２は、変色変臭などがなく安定で、肌に適用すると、滑らかな伸び広がりであり、エモリエント感が高く、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は改善する効果に優れるものであった。
【００４４】
実施例３ 化粧水
（成分） （％）
（１）グリセリン １０．０
（２）１，３−ブチレングリコール ６．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）クエン酸ナトリウム ０．３
（５）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ２．０
（６）精製水 残量
（７）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．５
（８）エチルアルコール ８．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
＊１ 製造例２
【００４５】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合溶解する。
Ｂ．成分（７）〜（１０）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して、均一にし、化粧水を得た。
【００４６】
実施例３は、変色変臭、沈殿などがなく安定で、肌に適用すると、みずみずしい伸び広がり、保湿感があり、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化などの皮膚障害を抑制又は改善する効果のあるものであった。
【００４７】
実施例４ 乳液
（成分） （％）
（１）モノステアリン酸ソルビタン ０．３
（２）モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン
（２０Ｅ．Ｏ．） ０．１
（３）親油型モノステアリン酸グリセリル ０．２
（４）ステアリン酸 ０．５
（５）セタノール ０．５
（６）スクワラン ３．０
（７）流動パラフィン ４．０
（８）トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル ２．０
（９）ジメチルポリシロキサン １．０
（１０）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（１１）カルボキシビニルポリマー水溶液（１．０％） １０．０
（１２）水酸化ナトリウム ０．０５
（１３）グリセリン ５．０
（１４）１，３−ブチレングリコール ７．０
（１５）精製水 残量
（１６）沙棘極性溶媒抽出物＊１ １．０
（１７）エチルアルコール ５．０
（１８）無水ケイ酸 １．０
（１９）防腐剤 適量
（２０）香料 適量
＊１ 製造例３
【００４８】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（１０）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１１）〜（１５）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後（１６）、（１７）〜（２０）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００４９】
実施例４は、変色変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、滑らかな伸び広がりであり、保湿感が高く、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化などの皮膚障害を抑制又は改善する効果のあるものであった。
【００５０】
実施例５ パック
（成分） （％）
（１）ポリビニルアルコール １５．０
（２）無水ケイ酸 ０．５
（３）ポリエチレングリコール ０．５
（４）ポリオキシプロピレンメチルグルコシド ５．０
（５）グリセリン ５．０
（６）精製水 残量
（７）エチルアルコール １０．０
（８）防腐剤 適量
（９）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．２
（１０）香料 適量
＊１ 製造例４
【００５１】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合し、７０℃に加熱して溶解する。
Ｂ．成分（７）〜（８）を混合して溶解する。
Ｃ．Ｂを先のＡに加え、混合した後、冷却して（９）、（１０）を均一に分散してパックを得た。
【００５２】
実施例５は、変色変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、適度な緊張感があり、パックを剥がしたが後の肌は潤い感が高く、紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【００５３】
実施例６ リキッドファンデーション
（成分） （％）
（１）ジペンタエリトリットテトラ１２ヒドロキシステアリン酸
セスキステアリン酸ヘミロジンエステル ２．０
（２）流動パラフィン ５．０
（３）ステアリン酸 ２．０
（４）セタノール １．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ８．０
（７）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．１
（８）防腐剤 適量
（９）グリセリン ５．０
（１０）トリエタノールアミン １．０
（１１）カルボキシメチルセルロース ０．２
（１２）ベントナイト ０．５
（１３）精製水 残量
（１４）酸化チタン ６．０
（１５）微粒子酸化チタン ２．０
（１６）微粒子酸化亜鉛 ５．０
（１７）マイカ ２．０
（１８）タルク ４．０
（１９）着色顔料 ４．０
（２０）香料 適量
＊１ 製造例１
【００５４】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を加熱し混合溶解する。
Ｂ．Ａに成分（１４）〜（１９）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．成分（８）〜（１３）を均一に溶解し、７０℃に保つ。
Ｄ．ＣにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｅ．Ｄを冷却後、成分（７）、（２０）を添加してリキッドファンデーションを得た。
【００５５】
実施例６は、変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、潤い感のあるメイク効果に優れ、日中の紫外線からも適度に肌を守り、紫外線によるシワ、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【００５６】
実施例７ 日焼け止め乳液
（成分） （％）
（１）ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（２）ジメチルポリシロキサン ５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン ２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル ５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ５．０
（６）微粒子酸化チタン １０．０
（７）微粒子酸化亜鉛 １０．０
（８）酸化ジルコニウム ５．０
（９）ポリスチレン末 ３．０
（１０）トリメチルシロキシケイ酸 ０．５
（１１）防腐剤 適量
（１２）ジプロピレングリコール ３．０
（１３）エチルアルコール １０．０
（１４）精製水 残量
（１５）食塩 ０．２
（１６）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．２
（１７）香料 適量
＊１ 製造例３
【００５７】
(製法)
Ａ．成分（１）〜（１０）を混合分散する。
Ｂ．成分（１１）〜（１５）を混合溶解する。
Ｃ．ＡにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（１６）、（１７）を添加して日焼け止め乳液を得た。
【００５８】
実施例７は、変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、さっぱりとしたエモリエント感があり、日中の紫外線から肌を守り、紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤に関する。更に詳細には、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする抗皮膚障害剤、及び前記グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を抗皮膚障害剤として含有し、紫外線曝露に起因する皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化等の少なくとも一つ以上を抑制又は改善する化粧品や医薬品として有用な皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線(例えば、太陽光)の連続的な長期間曝露は皮膚にケミカルメディエーター、サイトカイン等による炎症を生じせしめ、シワ、タルミ、皮膚肥厚、皮膚硬化、皮膚癌、日光性弾性線維症等の皮膚障害が生じる（非特許文献１参照）。特に表皮及び真皮が肥厚することにより、皮膚の弾性、保湿性が低下し、これが皮膚老化の要因の一つとなっていると考えられている。そこで、従来からこれらの障害を防ぐために、紫外線吸収剤（特許文献１、非特許文献２参照）、紫外線散乱剤（非特許文献３参照）が配合された外用剤、すなわち乳液、クリーム、ローション、美容液、ファンデーション、軟膏、パップ剤、貼付剤等が使用されている。又、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のシワやタルミ、ハリや弾力性の低下を予防、あるいは改善するために、レチノイン酸（非特許文献４参照）、抗炎症薬（非特許文献５参照）やオウバクエキス、シラカバエキス、セージエキス、ローマカミツレエキス等（特許文献２参照）、メリッサ抽出物（特許文献３参照）、更に細胞外マトリックス成分の異常蓄積、皮膚肥厚、シワ等の抑制に活性型ビタミンＤ３（非特許文献６参照）の配合が報告されている。
【０００３】
しかしながら、例えば、レチノイン酸を配合した皮膚外用剤は、真皮上層にコラーゲンを増殖させ、シワを改善する効果は有するが、シワの発生を抑制する効果までは認められず、塗布を中止すると元に戻ってしまう等の問題がある。又、活性型ビタミンＤ３はカルシウム代謝等の副作用の問題がある。他の紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、抗炎症薬、植物抽出物等を配合した皮膚外用剤においても、シワ形成、皮膚肥厚等の抑制、改善効果が十分ではなかったり、効果を高めるためにこれらの添加物を高濃度に配合すると製剤の使用感が損なわれたり、高温時や経時で変質する等の問題が生じる場合があった。
【０００４】
一方、沙棘の化粧料への応用は、沙棘の果汁油及び種子油を含有する皮膚老化防止効果を有する化粧料（特許文献４参照）や沙棘の果実油と生薬抽出成分を併用し、美白作用、保湿作用、皮膚の弾力維持作用、老化防止、紫外線吸収作用を有する化粧料はある（特許文献５参照）が、沙棘の極性溶媒抽出物を含有し、紫外線暴露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する効果を有する化粧料は見当たらない。
【０００５】
【特許文献１】特開平０９−２６８１９４号公報
【特許文献２】特開平０８−１０９１２２号公報
【特許文献３】特開平０９−２４１１４８号公報
【特許文献４】特開昭６３−１４５２１０号公報
【特許文献５】特開２００４−１２３５６３号公報
【非特許文献１】菅原努、野津敬一著「太陽紫外線と健康」裳華房(１９９８) Ｐ．２〜１００
【非特許文献２】ニコラス・J・ローウ／ナディム・Ａ・ジャーム編「サンスクリーンと皮膚科学」フレグランスジャーナル社１９９３年５月２０日発行、Ｐ．１９５〜２６２
【非特許文献３】「フレグランスジャーナル」フレグランスジャーナル社編 ２００２年７月号 Ｐ．１６〜２７、３３〜３８
【非特許文献４】Ｌｏｒｒａｉｎｅ Ｈ.Ｋｌｉｇｍａｎ著,“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｒｍｉｓ ｏｆ ｈａｉｒｌｅｓｓ ｍｉｃｅ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９８６年，ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．４，Ｐａｒｔ．２，Ｏｃｔｏｂｅｒ，Ｐ．７７９〜７８５
【非特許文献５】Ｂｉｓｓｅｔｔ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．著,“Ｐｈｏｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｐｉｃａｌ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｋｉｎ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈａｉｒｌｅｓｓ ｍｏｕｓｅ”，１９９０年，ｖｏｌ．７，Ｐ．１５３〜１５８
【非特許文献６】Ｋｏｓｈｉｉｓｈｉ Ｉ，ｅｔ ａｌ．著,“１，２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ Ｄ３ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｔｏ ｆｉｂｒｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｓｋｉｎ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｃｈｒｏｎｉｃ ＵＶ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．”，Ｔｏｘｙｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１年，ｖｏｌ．１７３，Ｐ．９９〜１０４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害を有効に抑制又は改善する抗皮膚障害剤、及び使用感や剤型に悪影響を及ぼすことなくこれを含有した皮膚外用剤の開発が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために、すでに安全性が確認されている医薬品、化粧品原料、及び民間薬等で使用されている成分に着目し、鋭意研究を重ねた結果、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物が、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲンの架橋形成、さらにはシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害の発現を抑制又は改善する効果に優れるとの新知見を得、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とする紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善する抗皮膚障害剤に関するものである。また、紫外線曝露に起因する皮膚障害が、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化の少なくとも一つ以上である抗皮膚障害剤に関するものである。また更には、該抗皮膚障害剤を有効成分として含有し、前記皮膚障害を抑制又は改善する皮膚外用剤、特に老化防止用の皮膚外用剤に関するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係わるグミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物は、紫外線曝露に起因する皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積やコラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、及び皮膚硬化の少なくとも一つ以上の皮膚障害の抑制又は改善に効果の高い抗皮膚障害剤である。また、前記抗皮膚障害剤を有効成分として含有する皮膚外用剤は、紫外線曝露に起因する前記皮膚障害を有効に抑制又は改善するものであり、従って、皮膚老化を防止する化粧品や医薬部外品等として有利に利用することができるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられるグミ科ヒッポファエ属沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．；以下、ラテン語表示の学名及び日本語の科、属は省略し、単に沙棘と記す）の極性溶媒抽出物は、沙棘から極性溶媒を用いて抽出されるものである。その抽出部位は、特に限定されるものではないが、全草、又は根、茎、幹、樹皮、幼芽、葉、花、果実、種子等のいずれか１ヶ所以上から抽出することができ、これらを乾燥、細切、圧搾、或いは発酵等、適宜処理を施した後、低温もしくは室温〜加温下で極性溶媒により抽出する方法を挙げることができる。
【００１１】
本発明に用いられる抽出溶媒としては、油脂成分を除去するため水、アルコール、多価アルコール等の極性溶媒が挙げられ、これらの一種又は二種以上を用いることができる。特に好ましい抽出溶媒としては、水又は、水−エチルアルコール系の混合極性溶媒が挙げられる。
【００１２】
更にこの極性溶媒抽出物は、分子量分画、溶媒分画、各種の樹脂処理(イオン交換樹脂、吸着剤等)等によって精製されたもの、凍結乾燥されたもの等いずれのものでも用いることができる。
【００１３】
具体的な製法としては、例えば沙棘果実乾燥物を粉砕し、約１０倍量の濃度０〜１００ｖｏｌ％の含水エチルアルコール又は同含水１，３−ブチレングリコールを用い、室温で、又は加温して１〜２時間抽出を行った後、油脂成分を完全に除去するためセライト(珪藻土)を加え、ろ過し、更に抽出液を分子量分画、溶媒分画、各種の樹脂処理(イオン交換樹脂、吸着剤等)等によって精製し、凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を得る。また、水−エチルアルコール系の溶媒においてはエチルアルコールを留去後、凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を得る。
【００１４】
本発明の抗皮膚障害剤のその形態については、沙棘の極性溶媒抽出物として含む限り、特に制限はなく、液状、ペースト状、クリーム状、ゲル状、粉末状等いずれの形態で用いることもできる。
【００１５】
また本発明の皮膚外用剤は、沙棘の極性溶媒抽出物を抗皮膚障害剤として含有することを特徴とする。本発明の皮膚外用剤における抗皮膚障害剤の含有量は、特に限定されるものではないが、皮膚外用剤中、沙棘の極性溶媒抽出物として０．０００１〜１０質量％（以下、単に「％」と記す）であり、好ましくは０．００１〜５％、より好ましくは０．１〜３％である。この範囲であれば、紫外線曝露に起因する細胞外マトリックス成分の異常蓄積、特にコラーゲンの異常産生やコラーゲン架橋形成、さらにはシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化等の少なくとも一つ以上の皮膚障害の発現を抑制又はその症状を改善する効果に優れ、経時安定性の面からも良好なものが得られる。
【００１６】
本発明の抗皮膚障害剤を含有する皮膚外用剤には上記必須成分の他、化粧料や医薬部外品、外用医薬品等に通常使用される各種の成分、即ち、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、美白剤、抗炎症剤、抗酸化剤、保湿剤、殺菌剤、血行促進剤等の各種薬効剤、動植物・微生物由来の抽出物、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、香料等を、本発明の効果を損なわない範囲で目的に応じて適宜加えることができる。
【００１７】
また、本発明の抗皮膚障害剤を含有する皮膚外用剤としては、化粧料、医薬部外品、医薬品等が挙げられ、剤型も水性剤型、油性剤型、乳化剤型、粉末剤型、固形剤型等いずれの剤型にも配合することができる。例えば、化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック、バスソルト軟膏、ゲル剤、ファンデーション、パウダー、リップクリーム、口紅、日焼け止め製品等に用いることができる。
【実施例】
【００１８】
次に沙棘の極性溶媒抽出物の製造例、及び実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら制約されるものではない。
【００１９】
沙棘の極性溶媒抽出物の製造例を製造例１〜４に、既に抗シワ作用が報告されているシラカバ樹皮抽出物の製造例(陽性コントロールとして評価試験に使用)を製造例５に示した。
[製造例１]
沙棘果実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、水１，０００ｍＬを加え、熱水抽出を１時間行なった。冷却後、この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６００ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１６．３ｇ得た。
【００２０】
[製造例２]
沙棘果実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６５０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１８．４ｇ得た。
【００２１】
[製造例３]
沙棘果実乾燥の破砕物１００ｇに対して、５０ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。これをろ過し、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、水４００ｍＬを加え、容量に対してセライトを１０％加え、ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液７４０ｍＬを得、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を１３．８ｇ得た。
【００２２】
[製造例４]
沙棘樹皮乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。この容量に対してセライト１０％を加え、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６５０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、沙棘の極性溶媒抽出物を８．２ｇ得た。
【００２３】
[製造例５]
シラカバ樹皮乾燥物の破砕物１００ｇに対して、２５ｖｏｌ％エタノール水溶液１，０００ｍＬを加え、還流抽出を２時間行なった。これを遠心分離、加圧ろ過し、膜分離を用い、分子量５，０００以下のものを採取し、抽出液６６０ｍＬを得、エバポレーターで減圧濃縮し、エタノールを留去後、この液を凍結乾燥し、シラカバ樹皮抽出物を７．４ｇ得た。
【００２４】
実施例1：ヘアレスマウス紫外線照射による皮膚障害試験
下記調製方法により抗皮膚障害製剤を調製し、紫外線照射による皮膚肥厚、シワ形成、皮膚硬化、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積（総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量）、コラーゲン架橋形成（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン）について評価した。
【００２５】
［試料（抗皮膚障害製剤）の調製］
製造例１〜３の沙棘極性溶媒抽出物及び製造例５のシラカバ樹皮抽出物を基剤（ポリエチレングリコール１０００：エチルアルコール＝１：１）に溶解し、５％濃度に試料を調製し、ヘアレスマスウス紫外線照射による皮膚評価試験に用いた。尚、シラカバ樹皮抽出物は陽性コントロールとして用いた。
【００２６】
［試料塗布法と紫外線照射法］
１群８匹とし、紫外線照射９０分前に上述の試料をヘアレスマウス（１０週齢）背中に０．１ｇ塗布し、一定量の紫外線（東芝ＦＬ２０Ｓ・ＢＬＢランプ）を１日２時間（５回／週）２０週間照射し（総照射量：７２０Ｊ／ｃｍ２）、皮膚肥厚、シワ形成、及び皮膚硬化の抑制効果を調べた。
尚、これらの試料の紫外線吸収スペクトルを測定し、これらは評価試験に影響を与えないことを確認した。
【００２７】
［評価法］
（皮膚肥厚抑制効果）
紫外線照射前と紫外線照射２０週後の皮膚の厚みをダイアル厚みゲージ(ＯＺＡＫ．ＭＦＧ．ＣＯ．ＬＴＤ．)を用い測定した。結果は、８匹の皮膚厚みの平均値、及びその２０週間後の増加率で評価した。
【００２８】
（シワ形成抑制効果）
紫外線照射２０週後のシワ形成について、下記表４に示す「光皮膚老化グレード」に基づいてシワグレードを判定した。なお、結果は、８匹の評点の平均値で表し評価した。
【００２９】
（皮膚硬化抑制効果）
ヘアレスマウス皮膚背部中央部位を摘み、復元に５秒以上を要する皮膚を皮膚硬化とし、マウス８匹中の発現率で評価した。
【００３０】
［細胞外マトリックス成分の異常蓄積；総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量］
（総ヒドロキシプロリン；コラーゲン定量法）
皮膚中のヒドロキシプロリンを測定し、コラーゲン異常蓄積量を評価した。
ヒドロキシプロリンの定量は先ず、ヘアレスマウス背部皮膚の凍結切片（２０ミクロン）を作製し、スライドガラス上で皮膚切片を加熱処理後、０．０５％アルカリ性プロテアーゼ（アクチナーゼＥ；科研製薬製）（５００チロシナーゼ単位／ｍＬ）で酵素分解（４０℃−２時間）し、この酵素溶液に可溶化した。その後、真空封印し、６Ｎ塩酸を用い加水分解後（１４５℃−４時間）、Ｗｏｅｓｓｅｎｅｒ法にてヒドロシキプロリンを発色させ、測定した。
【００３１】
（デルマタン硫酸定量法）
コラーゲン同様、細胞外マトリックス成分であるデルマタン硫酸の異常蓄積は紫外線照射による皮膚老化指標の一つで、この成分を測定することにより皮膚老化度を評価した。ヘアレスマウス背部皮膚をホルマリン固定後、６ミクロンの皮膚切片を作製し、スライドガラス上で皮膚切片をコンドロイチナーゼＡＢＣ（０．５単位／ｍＬ）及びコラーゲナーゼ（５００マンデル単位／ｍＬ）の酵素混合溶液で酵素分解（３７℃−２時間）し、この酵素溶液に可溶化させた後、下記の条件のポストカラム法にてＨＰＬＣ装置を用いて試料を分離し、反応試薬１と混合し、次いで反応試薬２と混合後、１１０℃−２分間チューブ内で反応させ、蛍光誘導体とし、蛍光検出器で測定した。
【００３２】
（ＨＰＬＣ条件）
ＨＰＬＣカラム：ＤＯＣＯＳＩＬ（４．６ｉ．ｄ．×１５０ｍｍ：センシュー科学社製）
蛍光検出：Ｅｘ．３４６ｎｍ、Ｅｍ．４１０ｎｍ
移動相：８．５％アセトニトリル−１ｍＭテトラｎ−ブチルアンモニウム水素硫酸
流速：１．５ｍＬ／分
カラム温度：６０℃
反応試薬１：０．３Ｍ ＮａＯＨ（０．２５ｍＬ／分）
反応試薬２：０．２５％２−シアノアセトアミド
【００３３】
（コラーゲン架橋形成：ペプシン耐性ヒドロキシプロリン定量法）
酸性プロテアーゼ（ペプシン；ナカライテスク社製）による分解の難易により、皮膚中のコラーゲン架橋度を評価した。
先ず、上記コラーゲン定量法で作製したヘアレスマウス背部皮膚の凍結切片（２０ミクロン）をスライドガラス上で０．０１％ペプシン（３６６単位／ｍＬ）で酵素分解（５℃−６４時間）し、ペプシン可溶のコラーゲンを水にて洗浄し除去した。その後、上述した同様な方法にてペプシン耐性のコラーゲンを加熱後、アクチナーゼＥを用い酵素分解し、この酵素溶液に可溶化した。次に溶液を真空封印し、６Ｎ塩酸を用い加水分解後（１４５℃−４時間）、Ｗｏｅｓｓｅｎｅｒ法にてヒドロシキプロリンを発色させ、ペプシン耐性ヒドロキシプロリンを測定した。
【００３４】
（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン(％)算出法）
皮膚中の総ヒドロキシプロリンに対するペプシン耐性ヒドロキシプロリンの含有率を算出し、コラーゲン架橋形成の指標とした。
ペプシン耐性ヒドロキシプロリン含有率(％)＝（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン／総ヒドロキシプロリン）×１００
【００３５】
皮膚肥厚、シワ形成、皮膚硬化、細胞外マトリックス成分の異常蓄積（総ヒドロキシプロリン量、デルマタン硫酸量）、コラーゲン架橋形成（ペプシン耐性ヒドロキシプロリン量、含有率）の評価結果をそれぞれ表１〜３に併せて示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
【表４】
【００４０】
表１〜３から明らかなように、本発明品製造例１〜３の沙棘の極性溶媒抽出物は陽性コントロールであるシラカバ樹皮抽出物と比較し、いずれも顕著な皮膚肥厚、皮膚硬化、シワ形成、細胞外マトリックス成分異常蓄積、コラーゲン架橋を抑制する効果に極めて優れたものであった。
【００４１】
実施例２ クリーム
（成分） （％）
（１）モノステアリン酸
ポリエチレングリコール（４０Ｅ．Ｏ．） ２．０
（２）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ５．０
（３）ステアリン酸 ５．０
（４）ベヘニルアルコール １．０
（５）流動パラフィン １０．０
（６）トリオクタン酸グリセリル １０．０
（７）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ５．０
（８）グリセリン ５．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残量
＊１ 製造例１
【００４２】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（８）及び（１１）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（７）、（９）、（１０）を加えた後、冷却してクリームを得た。
【００４３】
実施例２は、変色変臭などがなく安定で、肌に適用すると、滑らかな伸び広がりであり、エモリエント感が高く、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は改善する効果に優れるものであった。
【００４４】
実施例３ 化粧水
（成分） （％）
（１）グリセリン １０．０
（２）１，３−ブチレングリコール ６．０
（３）クエン酸 ０．１
（４）クエン酸ナトリウム ０．３
（５）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ２．０
（６）精製水 残量
（７）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．５
（８）エチルアルコール ８．０
（９）防腐剤 適量
（１０）香料 適量
＊１ 製造例２
【００４５】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合溶解する。
Ｂ．成分（７）〜（１０）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して、均一にし、化粧水を得た。
【００４６】
実施例３は、変色変臭、沈殿などがなく安定で、肌に適用すると、みずみずしい伸び広がり、保湿感があり、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化などの皮膚障害を抑制又は改善する効果のあるものであった。
【００４７】
実施例４ 乳液
（成分） （％）
（１）モノステアリン酸ソルビタン ０．３
（２）モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン
（２０Ｅ．Ｏ．） ０．１
（３）親油型モノステアリン酸グリセリル ０．２
（４）ステアリン酸 ０．５
（５）セタノール ０．５
（６）スクワラン ３．０
（７）流動パラフィン ４．０
（８）トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル ２．０
（９）ジメチルポリシロキサン １．０
（１０）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（１１）カルボキシビニルポリマー水溶液（１．０％） １０．０
（１２）水酸化ナトリウム ０．０５
（１３）グリセリン ５．０
（１４）１，３−ブチレングリコール ７．０
（１５）精製水 残量
（１６）沙棘極性溶媒抽出物＊１ １．０
（１７）エチルアルコール ５．０
（１８）無水ケイ酸 １．０
（１９）防腐剤 適量
（２０）香料 適量
＊１ 製造例３
【００４８】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（１０）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１１）〜（１５）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後（１６）、（１７）〜（２０）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００４９】
実施例４は、変色変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、滑らかな伸び広がりであり、保湿感が高く、連続的に適用することにより紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化などの皮膚障害を抑制又は改善する効果のあるものであった。
【００５０】
実施例５ パック
（成分） （％）
（１）ポリビニルアルコール １５．０
（２）無水ケイ酸 ０．５
（３）ポリエチレングリコール ０．５
（４）ポリオキシプロピレンメチルグルコシド ５．０
（５）グリセリン ５．０
（６）精製水 残量
（７）エチルアルコール １０．０
（８）防腐剤 適量
（９）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．２
（１０）香料 適量
＊１ 製造例４
【００５１】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合し、７０℃に加熱して溶解する。
Ｂ．成分（７）〜（８）を混合して溶解する。
Ｃ．Ｂを先のＡに加え、混合した後、冷却して（９）、（１０）を均一に分散してパックを得た。
【００５２】
実施例５は、変色変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、適度な緊張感があり、パックを剥がしたが後の肌は潤い感が高く、紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【００５３】
実施例６ リキッドファンデーション
（成分） （％）
（１）ジペンタエリトリットテトラ１２ヒドロキシステアリン酸
セスキステアリン酸ヘミロジンエステル ２．０
（２）流動パラフィン ５．０
（３）ステアリン酸 ２．０
（４）セタノール １．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ８．０
（７）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．１
（８）防腐剤 適量
（９）グリセリン ５．０
（１０）トリエタノールアミン １．０
（１１）カルボキシメチルセルロース ０．２
（１２）ベントナイト ０．５
（１３）精製水 残量
（１４）酸化チタン ６．０
（１５）微粒子酸化チタン ２．０
（１６）微粒子酸化亜鉛 ５．０
（１７）マイカ ２．０
（１８）タルク ４．０
（１９）着色顔料 ４．０
（２０）香料 適量
＊１ 製造例１
【００５４】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を加熱し混合溶解する。
Ｂ．Ａに成分（１４）〜（１９）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．成分（８）〜（１３）を均一に溶解し、７０℃に保つ。
Ｄ．ＣにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｅ．Ｄを冷却後、成分（７）、（２０）を添加してリキッドファンデーションを得た。
【００５５】
実施例６は、変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、潤い感のあるメイク効果に優れ、日中の紫外線からも適度に肌を守り、紫外線によるシワ、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【００５６】
実施例７ 日焼け止め乳液
（成分） （％）
（１）ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（２）ジメチルポリシロキサン ５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン ２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル ５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル ５．０
（６）微粒子酸化チタン １０．０
（７）微粒子酸化亜鉛 １０．０
（８）酸化ジルコニウム ５．０
（９）ポリスチレン末 ３．０
（１０）トリメチルシロキシケイ酸 ０．５
（１１）防腐剤 適量
（１２）ジプロピレングリコール ３．０
（１３）エチルアルコール １０．０
（１４）精製水 残量
（１５）食塩 ０．２
（１６）沙棘極性溶媒抽出物＊１ ０．２
（１７）香料 適量
＊１ 製造例３
【００５７】
(製法)
Ａ．成分（１）〜（１０）を混合分散する。
Ｂ．成分（１１）〜（１５）を混合溶解する。
Ｃ．ＡにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（１６）、（１７）を添加して日焼け止め乳液を得た。
【００５８】
実施例７は、変臭、分離などがなく安定であり、肌に適用すると、さっぱりとしたエモリエント感があり、日中の紫外線から肌を守り、紫外線によるシワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化など皮膚障害を抑制又は軽減する効果に優れるものであった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とし、紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善することを特徴とする抗皮膚障害剤。
【請求項２】
紫外線曝露に起因する皮膚障害が、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化の少なくとも一つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の抗皮膚障害剤。
【請求項３】
請求項１〜２の何れか１項に記載の抗皮膚障害剤を有効成分として含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項４】
皮膚外用剤が老化防止用であることを特徴とする請求項３記載の皮膚外用剤。
【請求項１】
グミ科ヒッポファエ属沙棘(Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ．)の極性溶媒抽出物を有効成分とし、紫外線曝露に起因する皮膚障害を抑制又は改善することを特徴とする抗皮膚障害剤。
【請求項２】
紫外線曝露に起因する皮膚障害が、皮膚細胞外マトリックス成分の異常蓄積、コラーゲン架橋形成、シワ形成、皮膚肥厚、皮膚硬化の少なくとも一つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の抗皮膚障害剤。
【請求項３】
請求項１〜２の何れか１項に記載の抗皮膚障害剤を有効成分として含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項４】
皮膚外用剤が老化防止用であることを特徴とする請求項３記載の皮膚外用剤。
【公開番号】特開２００６−１８８４８８（Ｐ２００６−１８８４８８Ａ）
【公開日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３０９１７５（Ｐ２００５−３０９１７５）
【出願日】平成１７年１０月２５日（２００５．１０．２５）
【出願人】（０００１４５８６２）株式会社コーセー (734)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月２５日（２００５．１０．２５）
【出願人】（０００１４５８６２）株式会社コーセー (734)
【Ｆターム（参考）】
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