1つの分子にVEGF結合要素およびDll4結合要素を含む二重特異性結合分子、具体的には免疫グロブリン単一可変ドメイン（例えばVHHおよびドメイン抗体）。前記を含む医薬組成物、および脈管形成におけるVEGF媒介およびDll4媒介作用と密接に関係する疾患の治療における前記医薬組成物の使用。二重特異性結合分子をコードする核酸、宿主細胞、および前記を調製する方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
Dll4結合要素およびVEGF結合要素を含む二重特異性結合分子。
【請求項２】
Dll4結合要素およびVEGF結合要素が、少なくとも1つのDll4結合免疫グロブリン単一可変ドメインおよび少なくとも1つのVEGF結合免疫グロブリン単一可変ドメインをそれぞれ含む、請求項1に記載の二重特異性結合分子。
【請求項３】
免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHである、請求項2に記載の二重特異性結合分子。
【請求項４】
VEGF結合要素がN末端に配置される、請求項2または3に記載の二重特異性結合分子。
【請求項５】
Dll4結合要素およびVEGF結合要素が、それぞれ少なくとも1つのVEGF結合免疫グロブリン単一可変ドメインおよび少なくとも1つのDll4結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含み、前記免疫グロブリン単一可変ドメインの各々が4つのフレームワーク領域および3つの相補性決定領域、それぞれCDR1、CDR2およびCDR3を含み、
a）前記少なくとも1つのDll4結合免疫グロブリン単一可変ドメインのCDR3が、
i）配列番号：1に示すようにArg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Xaa Pro Tyr Xaa Tyr Asp Xaaであって、8位のXaaがArg、AlaまたはGluであり、11位のXaaがLeuまたはGluであり、さらに14位のXaaがTyrまたはHisである配列；および
ii）配列番号：2に示すようにAsp Arg Tyr Ile Trp Ala Arg Gln Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Xaa Asp Tyrであって、XaaがGln、AlaまたはTyrである配列、
から選択されるアミノ酸配列を有し、さらに
b）前記少なくとも1つのVEGF結合免疫グロブリン単一可変ドメインのCDR3が、配列番号：3に示すアミノ酸配列Ser Arg Ala Tyr Gly Ser Ser Arg Leu Arg Leu Ala Asp Thr Tyr Xaa Tyrを有し、前記XaaがAspまたはGluであり、前記VEGF結合免疫グロブリン単一可変ドメインが、ヒト組換えVEGF165とヒト組換えVEGFR-2との相互作用を60%以上の阻害率で遮断することができる、請求項2から4のいずれか1項に記載の二重特異性結合分子。
【請求項６】
免疫グロブリン単一可変ドメインが、親の免疫グロブリン単一可変ドメインVHHの配列最適化、場合により親和性増進後の配列最適化によって入手されたVHHである、請求項5に記載の二重特異性結合分子。
【請求項７】
Dll4結合VHHが、配列番号：4−20および表5に示す配列から選択されるアミノ酸配列を有する親VHHから入手された、請求項6に記載の二重特異性結合分子。
【請求項８】
親VHHが配列番号：10に示すアミノ酸配列を有する、請求項7に記載の二重特異性結合分子。
【請求項９】
Dll4結合VHHが、配列番号：10に示す配列を有するVHH由来の親和性増進VHHの配列最適化によって入手され、前記親和性増進VHHは、配列番号：21−27および表16に示すアミノ酸配列を有するVHHから選択される、請求項8に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１０】
親和性増進VHHが配列番号：22に示すアミノ酸配列を有し、さらに配列最適化VHHが配列番号：34および35並びに表23に示す配列から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項9に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１１】
親VHHが配列番号：12に示すアミノ酸配列を有する、請求項7に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１２】
Dll4結合VHHが、配列番号：12に示す配列を有するVHH由来の親和性増進VHHの配列最適化によって入手され、前記親和性増進VHHが、配列番号：28−33および表17に示すアミノ酸配列を有するVHHから選択される、請求項11に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１３】
親和性増進VHHが配列番号：32に示すアミノ酸配列を有し、さらに配列最適化VHHが配列番号：40および41に示す配列から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項12に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１４】
VEGF結合が、配列番号：42−44および表32に示す配列から選択される配列を有するVHHから誘導されるVHHである、請求項6に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１５】
VEGF結合VHHが、配列番号：43に示すアミノ酸配列を有するVHHの配列最適化によって入手された、請求項14に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１６】
配列最適化VHHが、配列番号：63および64並びに表59に示す配列から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項15に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１７】
VEGF結合要素が二パラトープ性VHHであり、前記二パラトープ性VHHの構築ブロックを形成するVHHが非オーバーラップエピトープと結合する、請求項3に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１８】
少なくとも1つのVHHが、組換えヒトVEGFと組換えヒトVEGFR-2との間の相互作用を60%以上の阻害率で遮断することができ、さらに少なくとも1つのVHHが前記相互作用を60%以下の阻害率で遮断することができる、請求項17に記載の二重特異性結合分子。
【請求項１９】
60%以下の阻害率を有する前記VHHが、配列番号：45に示す配列を有するVHHの配列最適化変種である、請求項18に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２０】
VHHが、配列番号：65および66並びに表に示す配列または配列番号：67（表63）に示す配列を有する、請求項19に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２１】
以下を含む、請求項5に記載の二重特異性結合分子：
a）Dll4結合要素として、配列番号：35または41の配列から選択される配列を有するVHH；および
b）VEGF結合要素として、
i）配列番号：64に示す配列を有するVHH、または
ii）配列番号：64に示す配列を有するVHHおよび配列番号：67に示す配列を有するVHHを含む二パラトープ性VHH。
【請求項２２】
1つまたは2つ以上のリンカー分子および／または半減期延長要素を含む、請求項1から21のいずれか1項に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２３】
半減期延長要素が、免疫グロブリン単一可変ドメインに共有結合により連結されるかまたは融合され、さらにFc部分、アルブミン、アルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、またはポリオキシアルキレン分子から選択される、請求項22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２４】
配列番号：81に示すアミノ酸配列を有する、請求項21および22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２５】
配列番号：82に示すアミノ酸配列を有する、請求項21および22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２６】
配列番号：83に示すアミノ酸配列を有する、請求項21および22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２７】
配列番号：84に示すアミノ酸配列を有する、請求項21に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２８】
配列番号：85に示すアミノ酸配列を有する、請求項21および22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項２９】
配列番号：86に示すアミノ酸配列を有する、請求項21および22に記載の二重特異性結合分子。
【請求項３０】
請求項1から29のいずれか1項に記載の二重特異性結合分子をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクター。
【請求項３１】
請求項30に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項３２】
活性成分として、請求項1から29のいずれか1項に記載の少なくとも1つのVEGF結合分子を含む医薬組成物。
【請求項３３】
脈管形成におけるVEGF媒介作用と密接に関係する疾患の治療のための請求項32に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
癌および癌性疾患の治療のための請求項32に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
眼の疾患の治療のための請求項32に記載の医薬組成物。

【図１】

【図２】

【図３−１】

【図３−２】

【図３−３】

【図４−１】

【図４−２】

【図４−３】

【図４−４】

【図４−５】

【図５−１】

【図５−２】

【図５−３】

【図５−４】

【図５−５】

【図５−６】

【図５−７】

【図５−８】

【図５−９】

【図５−１０】

【図６−１】

【図６−２】

【図６−３】

【図６−４】

【図７−１】

【図７−２】

【図７−３】

【図７−４】

【図８−１】

【図８−２】

【図８−３】

【図９−１】

【図９−２】

【図９−３】

【図９−４】

【図１０−１】

【図１０−２】

【図１１−１】

【図１１−２】

【図１１−３】

【図１１−４】

【図１２−１】

【図１２−２】

【図１２−３】

【図１２−４】

【図１３−１】

【図１３−２】

【図１３−３】

【図１３−４】

【図１４−１】

【図１４−２】

【図１４−３】

【図１４−４】

【図１４−５】

【図１４−６】

【図１５】

【図１６−１】

【図１６−２】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８−１】

【図１８−２】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６−１】

【図２６−２】

【図２６−３】

【図２６−４】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３−１】

【図３３−２】

【図３３−３】

【図３３−４】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１−１】

【図４１−２】

【図４１−３】

【図４１−４】

【図４２−１】

【図４２−２】

【図４３−１】

【図４３−２】

【図４３−３】

【図４３−４】

【図４４−１】

【図４４−２】

【図４４−３】

【図４４−４】

【図４５−１】

【図４５−２】

【図４６−１】

【図４６−２】

【図４６−３】

【図４６−４】

【図４６−５】

【図４６−６】

【図４６−７】

【図４６−８】

【図４６−９】

【図４６−１０】

【図４７−１】

【図４７−２】

【図４８】

【図４９−１】

【図４９−２】

【図４９−３】

【図５０−１】

【図５０−２】

【図５１−１】

【図５１−２】

【図５１−３】

【図５２Ａ】

【図５２Ｂ】

【図５２Ｃ】

【公表番号】特表２０１３−５０６４１１（Ｐ２０１３−５０６４１１Ａ）
【公表日】平成２５年２月２８日（２０１３．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３１４５１（Ｐ２０１２−５３１４５１）
【出願日】平成２２年１０月１日（２０１０．１０．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６４６９５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０３９３７０
【国際公開日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【出願人】（５０３３８５９２３）ベーリンガー　インゲルハイム　インターナショナル　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフツング (976)
【Ｆターム（参考）】