接着性胎盤幹細胞由来の肝細胞および軟骨細胞、ならびにＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞の濃縮細胞集団
本明細書では、胎盤幹細胞由来の肝細胞の作製のための方法および組成物が提供される。さらに、本明細書では、例えば肝臓の外傷、炎症および変性障害の治療ならびに処置におけるそのような肝細胞の使用が提供される。また、本明細書では、ナノ繊維足場と接着性胎盤幹細胞の組合せに関する組成物および方法、ならびに軟骨修復においてそれを使用する方法が提供される。最後に、本明細書では、胎盤由来の非接着性ＣＤ３４＋ＣＤ４５−幹細胞に関する組成物および方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋およびＣＤ２００＋の胎盤幹細胞を、前記幹細胞が肝細胞の特徴を示すのに十分な条件下および時間で酪酸ナトリウムと接触させることを含む、肝細胞を作製する方法。
【請求項２】
前記特徴が、アシアロ糖タンパク質受容体、アルファ−１−アンチトリプシン、アルブミン、シトクロムＰ４５０活性の生成、または未分化の胎盤幹細胞と比べて増加したサイトケラチン１８の生成である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記培養が、前記幹細胞を、アルギネート−ポリ−Ｌ−リジン中に封入することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法により作製される肝細胞または肝細胞性細胞。
【請求項５】
請求項４に記載の肝細胞または肝細胞性細胞を前記対象に導入することを含む、肝臓炎症を伴う疾患、障害または状態を有する対象を治療する方法。
【請求項６】
前記疾患、障害または状態が、肝硬変またはウイルス感染である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ヒト胎盤幹細胞由来の肝細胞または肝臓形成細胞を含むマウスであって、前記マウスは、下記ステップ：
ａ．前記マウスに、実質的に全ての内因性骨髄細胞を死滅させるのに十分なガンマ線を照射するステップ；
ｂ．前記マウスに、マウスの造血系を再構築するのに十分なＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスからの骨髄細胞または骨髄由来細胞を投与するステップ；および
ｃ．前記マウスに、複数の肝細胞または肝臓形成細胞を移植するステップであって、前記肝細胞または肝臓形成細胞が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞から分化したものである；
を含む方法により作製される、マウス。
【請求項８】
前記胎盤幹細胞が、さらにサイトケラチン１８＋である、請求項７に記載のマウス。
【請求項９】
前記肝細胞または肝臓形成細胞を前記マウスの耳介に投与する、請求項７に記載のマウス。
【請求項１０】
前記肝細胞または肝臓形成細胞がウイルスに感染している、請求項８に記載のマウス。
【請求項１１】
前記ウイルスが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである請求項１０に記載のマウス。
【請求項１２】
請求項１２に記載のマウスを対象化合物と接触させることを含む抗ウイルス剤を同定する方法であって、前記マウスからの血清が、検出可能なレベルのウイルスを有し、前記接触が、前記対象化合物と接触していないマウスからの血清と比較して、前記マウスからの血清中の前記ウイルスの量が検出可能な程度の低減をもたらす場合に、前記化合物が抗ウイルス剤である方法。
【請求項１３】
前記ウイルスが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ウイルスの抗原が検出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ウイルスの核酸が検出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルスである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗原が、ＨＢｅＡｇまたはＨＢｓＡｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
アルギネート中に封入された複数の細胞を含む組成物であって、前記細胞が、胎盤幹細胞から分化し、前記細胞が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋およびＣＤ２００＋である接着性胎盤幹細胞により発現されないか、または接着性胎盤幹細胞よりも検出可能に異なる程度で発現される肝細胞の少なくとも１つのマーカーを発現する組成物。
【請求項１９】
前記アルギネートが、ビーズの形である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ビーズが、約２００μｍ〜約８００μｍのサイズである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ビーズが、平均約５００μｍのサイズである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
単離された接着性ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞と、電気紡糸されたナノ繊維足場とを含む組成物。
【請求項２３】
前記ナノ繊維足場が、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ乳酸−グリコール酸（ＰＬＧＡ）、Ｉ型コラーゲン、フッ化ビニリデンとトリフルオロエチレンとの共重合体（ＰＶＤＦ−ＴｒＦＥ）、ポリ（−カプロラクトン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ε−カプロラクトン）［Ｐ（ＬＬＡ−ＣＬ）］（例えば７５：２５）、および／または（３−ヒドロキシブチレート−ｃｏ−３−ヒドロキシバレレート）（ＰＨＢＶ）とＩ型コラーゲンとの共重合体の繊維を含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ナノ繊維足場が、平均で約２５０ナノメートル〜約１０μｍの厚さの繊維を含む請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物を、胎盤幹細胞が軟骨形成細胞または軟骨細胞に分化する条件で接触させる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
接着性ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、電気紡糸されたナノ繊維足場と接触させることを含む組成物を作製する方法であって、前記ナノ繊維足場を、約２０ｋＶにて、約３０ｃｍの針と収集板との距離で、約０．０５ｍＬ／分〜約０．１ｍＬ／分の流速でＰＬＬＡまたはＰＬＧＡを電気紡糸することにより作製し、前記ＰＬＬＡまたはＰＬＧＡが、約１０％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗの溶液である、方法。
【請求項２７】
ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞の濃縮単離細胞集団。
【請求項２８】
前記集団の細胞の少なくとも５０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項２９】
前記集団の細胞の少なくとも７０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項３０】
前記集団の細胞の少なくとも９０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２７に記載の細胞集団。
【請求項３１】
前記集団が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞を含む、請求項２７に記載の細胞集団。
【請求項３２】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、ＣＤ３４−接着性胎盤幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３３】
前記接着性胎盤幹細胞が、ＣＤ２００＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−およびＣＤ４５−である、請求項３２に記載の細胞集団。
【請求項３４】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３５】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５＋造血性幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３６】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、臍帯血または胎盤血内に含まれる、請求項８に記載の細胞集団。
【請求項３７】
ＣＤ３４＋胎盤細胞の集団を形成するために胎盤細胞の集団からＣＤ３４＋細胞を選択すること、および前記ＣＤ３４＋胎盤細胞の集団からＣＤ４５＋細胞を除去することを含む、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞集団を作製する方法であって、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞集団が作製される、方法。
【請求項１】
ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋およびＣＤ２００＋の胎盤幹細胞を、前記幹細胞が肝細胞の特徴を示すのに十分な条件下および時間で酪酸ナトリウムと接触させることを含む、肝細胞を作製する方法。
【請求項２】
前記特徴が、アシアロ糖タンパク質受容体、アルファ−１−アンチトリプシン、アルブミン、シトクロムＰ４５０活性の生成、または未分化の胎盤幹細胞と比べて増加したサイトケラチン１８の生成である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記培養が、前記幹細胞を、アルギネート−ポリ−Ｌ−リジン中に封入することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法により作製される肝細胞または肝細胞性細胞。
【請求項５】
請求項４に記載の肝細胞または肝細胞性細胞を前記対象に導入することを含む、肝臓炎症を伴う疾患、障害または状態を有する対象を治療する方法。
【請求項６】
前記疾患、障害または状態が、肝硬変またはウイルス感染である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ヒト胎盤幹細胞由来の肝細胞または肝臓形成細胞を含むマウスであって、前記マウスは、下記ステップ：
ａ．前記マウスに、実質的に全ての内因性骨髄細胞を死滅させるのに十分なガンマ線を照射するステップ；
ｂ．前記マウスに、マウスの造血系を再構築するのに十分なＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスからの骨髄細胞または骨髄由来細胞を投与するステップ；および
ｃ．前記マウスに、複数の肝細胞または肝臓形成細胞を移植するステップであって、前記肝細胞または肝臓形成細胞が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞から分化したものである；
を含む方法により作製される、マウス。
【請求項８】
前記胎盤幹細胞が、さらにサイトケラチン１８＋である、請求項７に記載のマウス。
【請求項９】
前記肝細胞または肝臓形成細胞を前記マウスの耳介に投与する、請求項７に記載のマウス。
【請求項１０】
前記肝細胞または肝臓形成細胞がウイルスに感染している、請求項８に記載のマウス。
【請求項１１】
前記ウイルスが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである請求項１０に記載のマウス。
【請求項１２】
請求項１２に記載のマウスを対象化合物と接触させることを含む抗ウイルス剤を同定する方法であって、前記マウスからの血清が、検出可能なレベルのウイルスを有し、前記接触が、前記対象化合物と接触していないマウスからの血清と比較して、前記マウスからの血清中の前記ウイルスの量が検出可能な程度の低減をもたらす場合に、前記化合物が抗ウイルス剤である方法。
【請求項１３】
前記ウイルスが、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ウイルスの抗原が検出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ウイルスの核酸が検出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルスである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗原が、ＨＢｅＡｇまたはＨＢｓＡｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
アルギネート中に封入された複数の細胞を含む組成物であって、前記細胞が、胎盤幹細胞から分化し、前記細胞が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋およびＣＤ２００＋である接着性胎盤幹細胞により発現されないか、または接着性胎盤幹細胞よりも検出可能に異なる程度で発現される肝細胞の少なくとも１つのマーカーを発現する組成物。
【請求項１９】
前記アルギネートが、ビーズの形である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ビーズが、約２００μｍ〜約８００μｍのサイズである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ビーズが、平均約５００μｍのサイズである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
単離された接着性ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞と、電気紡糸されたナノ繊維足場とを含む組成物。
【請求項２３】
前記ナノ繊維足場が、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ乳酸−グリコール酸（ＰＬＧＡ）、Ｉ型コラーゲン、フッ化ビニリデンとトリフルオロエチレンとの共重合体（ＰＶＤＦ−ＴｒＦＥ）、ポリ（−カプロラクトン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ε−カプロラクトン）［Ｐ（ＬＬＡ−ＣＬ）］（例えば７５：２５）、および／または（３−ヒドロキシブチレート−ｃｏ−３−ヒドロキシバレレート）（ＰＨＢＶ）とＩ型コラーゲンとの共重合体の繊維を含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ナノ繊維足場が、平均で約２５０ナノメートル〜約１０μｍの厚さの繊維を含む請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物を、胎盤幹細胞が軟骨形成細胞または軟骨細胞に分化する条件で接触させる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
接着性ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、電気紡糸されたナノ繊維足場と接触させることを含む組成物を作製する方法であって、前記ナノ繊維足場を、約２０ｋＶにて、約３０ｃｍの針と収集板との距離で、約０．０５ｍＬ／分〜約０．１ｍＬ／分の流速でＰＬＬＡまたはＰＬＧＡを電気紡糸することにより作製し、前記ＰＬＬＡまたはＰＬＧＡが、約１０％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗの溶液である、方法。
【請求項２７】
ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞の濃縮単離細胞集団。
【請求項２８】
前記集団の細胞の少なくとも５０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項２９】
前記集団の細胞の少なくとも７０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項３０】
前記集団の細胞の少なくとも９０％が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−である、請求項２７に記載の細胞集団。
【請求項３１】
前記集団が、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞を含む、請求項２７に記載の細胞集団。
【請求項３２】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、ＣＤ３４−接着性胎盤幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３３】
前記接着性胎盤幹細胞が、ＣＤ２００＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４−およびＣＤ４５−である、請求項３２に記載の細胞集団。
【請求項３４】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３５】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５＋造血性幹細胞である、請求項３１に記載の細胞集団。
【請求項３６】
前記ＣＤ３４＋およびＣＤ４５−でない幹細胞が、臍帯血または胎盤血内に含まれる、請求項８に記載の細胞集団。
【請求項３７】
ＣＤ３４＋胎盤細胞の集団を形成するために胎盤細胞の集団からＣＤ３４＋細胞を選択すること、および前記ＣＤ３４＋胎盤細胞の集団からＣＤ４５＋細胞を除去することを含む、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞集団を作製する方法であって、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−胎盤幹細胞集団が作製される、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１０−５１８８１２（Ｐ２０１０−５１８８１２Ａ）
【公表日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４９１３９（Ｐ２００９−５４９１３９）
【出願日】平成２０年２月１２日（２００８．２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００１８３０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１００４９７
【国際公開日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５０９２２６８７５）アンスロジェネシス コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月１２日（２００８．２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００１８３０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１００４９７
【国際公開日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５０９２２６８７５）アンスロジェネシス コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】
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