改変されたトランスフェリン融合タンパク質
【課題】増大した血清半減期又は血清安定性を有する融合タンパク質を提供する。
【解決手段】トランスフェリンと、治療タンパク質又は治療ペプチドとの改変された融合タンパク質で、好ましい融合タンパク質は、トランスフェリン成分が、グリコシル化及び／又は鉄に対する結合及び／又はトランスフェリン受容体に対する結合を示さないか、或いは低下したグリコシル化及び／又は鉄に対する結合及び／又はトランスフェリン受容体に対する結合を示すように改変された融合タンパク質である。
【解決手段】トランスフェリンと、治療タンパク質又は治療ペプチドとの改変された融合タンパク質で、好ましい融合タンパク質は、トランスフェリン成分が、グリコシル化及び／又は鉄に対する結合及び／又はトランスフェリン受容体に対する結合を示さないか、或いは低下したグリコシル化及び／又は鉄に対する結合及び／又はトランスフェリン受容体に対する結合を示すように改変された融合タンパク質である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
低下したグリコシル化を示し、少なくとも１つの治療タンパク質又は治療ペプチドに融合されたトランスフェリン（Ｔｆ）タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２】
治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期が非融合状態の治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期よりも増大している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＣ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＮ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆの少なくとも１つのループに挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
Ｔｆタンパク質は、ＴｆＲに対する親和性が低下している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
Ｔｆタンパク質がラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）である、請求項１〜５に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
Ｔｆタンパク質はＴｆＲと結合しない、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
Ｔｆタンパク質は、鉄に対する親和性が低下している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
Ｔｆタンパク質は鉄と結合しない、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記Ｔｆタンパク質は、グリコシル化を妨げる少なくとも１つの変異を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
Ｔｆタンパク質がラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）である、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
ツニカマイシンの存在下で発現される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
前記Ｔｆタンパク質は、Ｔｆタンパク質のＮドメインの一部、架橋ペプチド、及びＴｆタンパク質のＣドメインの一部を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
架橋ペプチドにより、治療タンパク質又は治療ペプチドがＴｆに連結される、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
前記治療タンパク質、治療ペプチド又は治療ポリペプチドはＴｆタンパク質のＮドメインとＣドメインとの間に挿入される、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
Ｔｆタンパク質は少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加をヒンジ領域に有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
前記ヒンジ領域は、残基９４〜残基９６、残基２４５〜残基２４７、残基３１６〜残基３１８、残基４２５〜残基４２７、残基５８１〜残基５８２、及び残基６５２〜残基６５８からなる群から選択される、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
前記Ｔｆタンパク質は、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択される位置において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
治療タンパク質又は治療ペプチドにより、少なくとも１つのループが置換される、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
グルコシル化部位が、アミノ酸Ｎ４１３、アミノ酸Ｎ６１１に対応するアミノ酸残基からなる群から選択される、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
Ｔｆは、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択されるアミノ酸に対応するアミノ酸残基において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を含む、請求項６又は８に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に対する低下した親和性を示し、少なくとも１つの治療タンパク質又は治療ペプチドに融合された、トランスフェリン（Ｔｆ）タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２４】
治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期が非融合状態の治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期よりも増大している、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＣ末端に融合される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＮ末端に融合される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆの少なくとも１つのループに挿入される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
Ｔｆタンパク質はＴｆＲと結合しない、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
Ｔｆタンパク質は、鉄に対する親和性が低下している、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
Ｔｆタンパク質は鉄と結合しない、請求項２９に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
前記Ｔｆタンパク質は、低下したグリコシル化
を示すか、又はグリコシル化を示さない、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
グリコシル化を妨げる少なくとも１つの変異を含む、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
前記Ｔｆタンパク質は、Ｔｆタンパク質のＮドメインの一部、架橋ペプチド、及びＴｆタンパク質のＣドメインの一部を含む、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
架橋ペプチドにより、治療タンパク質又は治療ペプチドがＴｆに連結される、請求項３３に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
前記治療タンパク質、治療ペプチド又は治療ポリペプチドはＴｆタンパク質のＮドメインとＣドメインとの間に挿入される、請求項３３に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
Ｔｆタンパク質は少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加をヒンジ領域に有する、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
前記ヒンジ領域は、残基９４〜残基９６、残基２４５〜残基２４７、残基３１６〜残基３１８、残基４２５〜残基４２７、残基５８１〜残基５８２、及び残基６５２〜残基６５８からなる群から選択される、請求項３６に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
前記Ｔｆタンパク質は、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択される位置において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を有する、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
治療タンパク質又は治療ペプチドにより、少なくとも１つのループが置換される、請求項２５に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
グルコシル化部位が、アミノ酸Ｎ４１３、アミノ酸Ｎ６１１に対応するアミノ酸残基からなる群から選択される、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
請求項１又は２３にいずれかに記載される融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項４２】
請求項４１に記載される核酸分子を含むベクター。
【請求項４３】
請求項４２に記載されるベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
請求項４１に記載される核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項４５】
請求項４３に記載される宿主細胞を、コードされる融合タンパク質を発現させる条件のもとで培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４６】
請求項４４に記載される宿主細胞を、コードされる融合タンパク質を発現させる条件のもとで培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４７】
細胞が原核生物性又は真核生物性である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
細胞が原核生物性又は真核生物性である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
細胞が酵母細胞である、請求項４７に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
細胞が酵母細胞である、請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
請求項４１に記載される核酸分子を含む遺伝子導入動物（ヒトを除く）。
【請求項５２】
請求項５１に記載される遺伝子導入動物から融合タンパク質を単離することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を製造する方法。
【請求項５３】
Ｔｆ融合タンパク質がラクトフェリンを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
融合タンパク質が、遺伝子導入動物から得られる生物学的流体から単離される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
流体が血清又は乳汁である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１又は請求項２３に記載される融合タンパク質を含む、患者における疾患又は疾患症状の治療薬。
【請求項１】
低下したグリコシル化を示し、少なくとも１つの治療タンパク質又は治療ペプチドに融合されたトランスフェリン（Ｔｆ）タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２】
治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期が非融合状態の治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期よりも増大している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＣ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＮ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆの少なくとも１つのループに挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
Ｔｆタンパク質は、ＴｆＲに対する親和性が低下している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
Ｔｆタンパク質がラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）である、請求項１〜５に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
Ｔｆタンパク質はＴｆＲと結合しない、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
Ｔｆタンパク質は、鉄に対する親和性が低下している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
Ｔｆタンパク質は鉄と結合しない、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記Ｔｆタンパク質は、グリコシル化を妨げる少なくとも１つの変異を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
Ｔｆタンパク質がラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）である、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
ツニカマイシンの存在下で発現される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
前記Ｔｆタンパク質は、Ｔｆタンパク質のＮドメインの一部、架橋ペプチド、及びＴｆタンパク質のＣドメインの一部を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
架橋ペプチドにより、治療タンパク質又は治療ペプチドがＴｆに連結される、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
前記治療タンパク質、治療ペプチド又は治療ポリペプチドはＴｆタンパク質のＮドメインとＣドメインとの間に挿入される、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
Ｔｆタンパク質は少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加をヒンジ領域に有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
前記ヒンジ領域は、残基９４〜残基９６、残基２４５〜残基２４７、残基３１６〜残基３１８、残基４２５〜残基４２７、残基５８１〜残基５８２、及び残基６５２〜残基６５８からなる群から選択される、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
前記Ｔｆタンパク質は、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択される位置において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
治療タンパク質又は治療ペプチドにより、少なくとも１つのループが置換される、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
グルコシル化部位が、アミノ酸Ｎ４１３、アミノ酸Ｎ６１１に対応するアミノ酸残基からなる群から選択される、請求項１１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
Ｔｆは、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択されるアミノ酸に対応するアミノ酸残基において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を含む、請求項６又は８に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に対する低下した親和性を示し、少なくとも１つの治療タンパク質又は治療ペプチドに融合された、トランスフェリン（Ｔｆ）タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２４】
治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期が非融合状態の治療タンパク質又は治療ペプチドの血清半減期よりも増大している、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＣ末端に融合される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆのＮ末端に融合される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
治療タンパク質又は治療ペプチドはＴｆの少なくとも１つのループに挿入される、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
Ｔｆタンパク質はＴｆＲと結合しない、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
Ｔｆタンパク質は、鉄に対する親和性が低下している、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
Ｔｆタンパク質は鉄と結合しない、請求項２９に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
前記Ｔｆタンパク質は、低下したグリコシル化
を示すか、又はグリコシル化を示さない、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
グリコシル化を妨げる少なくとも１つの変異を含む、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
前記Ｔｆタンパク質は、Ｔｆタンパク質のＮドメインの一部、架橋ペプチド、及びＴｆタンパク質のＣドメインの一部を含む、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
架橋ペプチドにより、治療タンパク質又は治療ペプチドがＴｆに連結される、請求項３３に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
前記治療タンパク質、治療ペプチド又は治療ポリペプチドはＴｆタンパク質のＮドメインとＣドメインとの間に挿入される、請求項３３に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
Ｔｆタンパク質は少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加をヒンジ領域に有する、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
前記ヒンジ領域は、残基９４〜残基９６、残基２４５〜残基２４７、残基３１６〜残基３１８、残基４２５〜残基４２７、残基５８１〜残基５８２、及び残基６５２〜残基６５８からなる群から選択される、請求項３６に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
前記Ｔｆタンパク質は、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８及びＧｌｙ４５９からなる群から選択される位置において少なくとも１つのアミノ酸置換、アミノ酸欠失又はアミノ酸付加を有する、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
治療タンパク質又は治療ペプチドにより、少なくとも１つのループが置換される、請求項２５に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
グルコシル化部位が、アミノ酸Ｎ４１３、アミノ酸Ｎ６１１に対応するアミノ酸残基からなる群から選択される、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
請求項１又は２３にいずれかに記載される融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項４２】
請求項４１に記載される核酸分子を含むベクター。
【請求項４３】
請求項４２に記載されるベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
請求項４１に記載される核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項４５】
請求項４３に記載される宿主細胞を、コードされる融合タンパク質を発現させる条件のもとで培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４６】
請求項４４に記載される宿主細胞を、コードされる融合タンパク質を発現させる条件のもとで培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項４７】
細胞が原核生物性又は真核生物性である、請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
細胞が原核生物性又は真核生物性である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
細胞が酵母細胞である、請求項４７に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
細胞が酵母細胞である、請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
請求項４１に記載される核酸分子を含む遺伝子導入動物（ヒトを除く）。
【請求項５２】
請求項５１に記載される遺伝子導入動物から融合タンパク質を単離することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を製造する方法。
【請求項５３】
Ｔｆ融合タンパク質がラクトフェリンを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
融合タンパク質が、遺伝子導入動物から得られる生物学的流体から単離される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
流体が血清又は乳汁である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１又は請求項２３に記載される融合タンパク質を含む、患者における疾患又は疾患症状の治療薬。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２０１０−４８９１（Ｐ２０１０−４８９１Ａ）
【公開日】平成２２年１月１４日（２０１０．１．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１９７０９８（Ｐ２００９−１９７０９８）
【出願日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【分割の表示】特願２００３−５２５０１６（Ｐ２００３−５２５０１６）の分割
【原出願日】平成１４年８月３０日（２００２．８．３０）
【出願人】（５０８１１３４２４）バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１月１４日（２０１０．１．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【分割の表示】特願２００３−５２５０１６（Ｐ２００３−５２５０１６）の分割
【原出願日】平成１４年８月３０日（２００２．８．３０）
【出願人】（５０８１１３４２４）バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】
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