増殖が減弱されるように核酸が改変された、および／またはその核酸を修復する微生物の能力を減弱化させる遺伝子突然変異を含む自由生活微生物が提供される。また、抗原提示細胞の負荷、活性化および／または成熟化のための改変された微生物を使用する方法も提供される。改変された微生物および／または抗原提示細胞を含むワクチン組成物、およびワクチンを用いる方法も提供される。微生物は、さらに、癌または感染症に対するワクチンとして用いるための、腫瘍抗原または感染症抗原のような異種抗原を含むように改変することができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
自由生活微生物を含むワクチンであって、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されいる、ワクチン。
【請求項２】
前記核酸標的化化合物が、核酸アルキル化剤である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
前記核酸アルキル化剤が、β−アラニン，Ｎ−（アクリジン−９−イル），２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］エチルエステルである、請求項２に記載のワクチン。
【請求項４】
前記核酸標的化化合物が照射によって活性化される、請求項１に記載のワクチン。
【請求項５】
前記核酸標的化化合物が、ＵＶＡ照射によって活性化されたプソラレン化合物である、請求項４に記載のワクチン。
【請求項６】
前記核酸標的化化合物が、４’−（４−アミノ−２−オキサ）ブチル−４，５’，８−トリメチルプソラレンである、請求項５に記載のワクチン。
【請求項７】
前記微生物が、改変されているその核酸を修復する微生物の能力を減弱させる遺伝的突然変異を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項８】
前記微生物が、ＤＮＡ修復酵素を欠損している、請求項７に記載のワクチン。
【請求項９】
前記遺伝的突然変異が、ｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子内にあるか、またはｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子の機能的等価物内にある、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１０】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢの双方における遺伝的突然変異か、またはｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方の機能的等価物における遺伝的突然変異を含む、請求項９に記載のワクチン。
【請求項１１】
ＲｅｃＡ、またはＲｅｃＡの機能的等価物に関して欠損がある、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１２】
前記微生物が細菌である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項１３】
前記微生物が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである、請求項１２に記載のワクチン。
【請求項１４】
前記微生物が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓである、請求項１２に記載のワクチン。
【請求項１５】
前記微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項１２に記載のワクチン。
【請求項１６】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方における少なくとも１つの突然変異を含む、請求項１５に記載のワクチン。
【請求項１７】
前記微生物が、さらに、ａｃｔＡ遺伝子、ｉｎｌＢ遺伝子、または双方の遺伝子における突然変異を含む、請求項１６に記載のワクチン。
【請求項１８】
前記微生物が、抗原をコードする異種核酸配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項１９】
前記ワクチンが、さらに、薬学的に受容可能なキャリアまたはアジュバントを含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項２０】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、有効量の請求項１に記載のワクチンを該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、有効量の請求項１に記載のワクチンを該宿主に投与する工程を包含し、ここで前記微生物が該抗原を発現する、方法。
【請求項２２】
自由生活微生物を含む単離された専門抗原提示細胞であって、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、細胞。
【請求項２３】
樹状細胞である、請求項２２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２４】
前記核酸標的化化合物が、核酸アルキル化剤である、請求項２２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２５】
前記核酸アルキル化剤が、β−アルキル，Ｎ−（アクリジン−９−イル），２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］エチルエステルである、請求項２４に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２６】
前記核酸標的化化合物が、照射によって活性化される、請求項２２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２７】
前記核酸標的化化合物が、ＵＶＡ照射によって活性化されたプソラレン化合物である、請求項２６に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２８】
前記核酸標的化化合物が、４’−（４−アミノ−２−オキサ）ブチル−４，５’，８−トリメチルプソラレンである、請求項２７に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項２９】
前記微生物が、改変されているその核酸を修復する該微生物の能力を減弱させる遺伝子突然変異を含む、請求項２２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３０】
前記微生物が、ＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある、請求項２９に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３１】
前記遺伝子突然変異が、ｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子内にあるか、またはｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子の機能的等価物内にある、請求項３０に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３２】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方における遺伝的突然変異か、またはｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方の機能的等価物における遺伝子突然変異を含む、請求項３１に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３３】
前記微生物が、ＲｅｃＡ、またはＲｅｃＡの機能的等価物に関して欠損がある、請求項３１に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３４】
前記微生物が細菌である、請求項２３に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３５】
前記微生物が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである、請求項３４に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３６】
前記微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項３４に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３７】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方における少なくとも１つの突然変異を含む、請求項３２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３８】
前記微生物が、抗原をコードする異種核酸配列を含む、請求項２２に記載の専門抗原提示細胞。
【請求項３９】
請求項２２に記載の専門抗原提示細胞を含む、ワクチン。
【請求項４０】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、有効量の請求項２２に記載の専門抗原提示細胞を該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、有効量の請求項２２に記載の専門抗原提示細胞を該宿主に投与する工程を包含し、ここで、前記微生物が該抗原をコードする核酸配列を含む、方法。
【請求項４２】
インビトロにおいてナイーブなＴ細胞を活性化する方法であって、該ナイーブなＴ細胞を活性化するのに適当な条件下で、かつそれに十分な時間の間、該ナイーブなＴ細胞と請求項２２に記載の専門抗原提示細胞とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項４３】
専門抗原提示細胞に抗原を負荷する方法であって、専門抗原提示細胞を負荷するのに適当な条件下で、かつそれに十分な時間の間、インビトロにおいて該専門抗原提示細胞と該抗原をコードする核酸配列を含む自由生活微生物とを接触させる工程を包含し、ここで、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、方法。
【請求項４４】
専門抗原提示細胞を活性化および／または成熟させる方法であって、
専門抗原提示細胞を活性化させ、および／または成熟させるのに適当な条件下で、かつそれに十分な時間の間、インビトロにおいて該専門抗原提示細胞と抗原をコードする核酸配列を含む自由生活微生物とを接触させる工程を包含し、ここで、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、方法。
【請求項４５】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、以下の工程：（ａ）専門抗原提示細胞と抗原をコードする核酸配列を含む自由生活微生物とを接触させる工程によって、該細胞に該抗原を負荷する工程であって、ここで、該微生物の核酸は、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、工程；および（ｂ）該負荷された専門抗原提示細胞を含む有効量の組成物を、該宿主に投与する工程、を包含する、方法。
【請求項４６】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、以下の工程：（ａ）専門抗原提示細胞と該抗原をコードする核酸配列を含む自由生活微生物と接触させることによって、該細胞に該抗原を負荷する工程であって、ここで、該微生物の核酸は、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、工程；および（ｂ）該負荷された専門抗原提示細胞を含む有効量の組成物を、該宿主に投与する工程、を包含する、方法。
【請求項４７】
単離された突然変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であって、その核酸を修復するその能力を減弱させる遺伝子突然変異を含む、突然変異体株。
【請求項４８】
少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある、請求項４７に記載の突然変異体株。
【請求項４９】
ＵｖｒＡ、ＵｖｒＢ、またはＵｖｒＡおよびＵｖｒＢ双方に関して減弱されている、請求項４７に記載の突然変異体株。
【請求項５０】
ｕｖｒＡ遺伝子、ｕｖｒＢ遺伝子、またはｕｖｒＡ遺伝子およびｕｖｒＢ遺伝子双方における遺伝子突然変異体を含む、請求項４９に記載の突然変異体株。
【請求項５１】
前記株の細菌の核酸が、該細菌が増殖について減弱されるように改変されている、請求項４７に記載の突然変異体株。
【請求項５２】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−５５６３によって同定されるＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓａｃｔＡ⁻／ｕｖｒＡＢ⁻株、またはＵｖｒＡ、ＵｖｒＢ、およびＡｃｔＡに関して欠損がある、該寄託された株の突然変異体よりなる群から選択される、請求項４７に記載の突然変異体株。
【請求項５３】
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−５５６２によって同定されるＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓａｃｔＡ⁻／ｉｎｌＢ⁻株である、請求項５２に記載の突然変異体株。
【請求項５４】
ワクチンであって、（ａ）請求項４７に記載の突然変異体株、および（ｂ）薬学的に受容可能なキャリアまたはアジュバントを含む、ワクチン。
【請求項５５】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、該宿主に、請求項４７に記載の株を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、ここで、該株が該抗原をコードする核酸分子を含む、方法。
【請求項５６】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、請求項４７に記載の株を含む有効量の組成物を該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項５７】
請求項４７に記載の株を含む、専門抗原提示細胞。
【請求項５８】
単離された突然変異体Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ株であって、その核酸を修復するその能力を減弱させる遺伝子突然変異を含む、突然変異体株。
【請求項５９】
少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある、請求項５８に記載の突然変異体株。
【請求項６０】
ＵｖｒＡ、ＵｖｒＢ、またはＵｖｒＡおよびＵｖｒＢ双方に関して減弱されている、請求項５９に記載の突然変異体株。
【請求項６１】
ｕｖｒＡ遺伝子、ｕｖｒＢ遺伝子、またはｕｖｒＡ遺伝子およびｕｖｒＢ遺伝子双方における遺伝子突然変異を含む、請求項６０に記載の突然変異体株。
【請求項６２】
前記株の毒性を低下させるｌｅｆ遺伝子、ｃｙａ遺伝子、または双方の遺伝子における１以上の突然変異を含む、請求項５８に記載の突然変異体株。
【請求項６３】
前記株の細菌の核酸が、該細菌が増殖について減弱されるように改変されている、請求項５８に記載の突然変異体株。
【請求項６４】
宿主においてＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、請求項５８に記載の突然変異体株を含む有効量の組成物を該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項６５】
宿主においてＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ感染を予防または処置する方法であって、請求項５８に記載の突然変異体株を含む有効量の組成物を該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項６６】
ワクチンであって、少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある自由生活微生物を含む、ワクチン。
【請求項６７】
前記微生物が、ｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子内においてか、またはｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子の機能的等価物内における遺伝子突然変異を含む、請求項６６に記載のワクチン。
【請求項６８】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方における遺伝子突然変異か、またはｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方の機能的等価物における遺伝子突然変異を含む、請求項６７に記載のワクチン。
【請求項６９】
ＲｅｃＡ、またはＲｅｃＡの機能的等価物に関して欠損がある、請求項６６に記載のワクチン。
【請求項７０】
前記微生物が細菌である、請求項６６に記載のワクチン。
【請求項７１】
前記微生物が、抗原をコードする異種核酸配列を含む、請求項６６に記載のワクチン。
【請求項７２】
前記ワクチンが、さらに、薬学的に受容可能なキャリアまたはアジュバントを含む、請求項６６に記載のワクチン。
【請求項７３】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、有効量の請求項６６に記載のワクチンを該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項７４】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、有効量の請求項６６に記載のワクチンを該宿主に投与する工程を包含し、ここで、該微生物が該抗原を発現する、方法。
【請求項７５】
少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある自由生活微生物を含む、単離された専門抗原提示細胞。
【請求項７６】
前記微生物が、ｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子内においてか、またはｐｈｒＢ、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤおよびｒｅｃＡよりなる群から選択される１以上の遺伝子の機能的等価物内において遺伝子突然変異を含む、請求項７５に記載の抗原提示細胞。
【請求項７７】
前記微生物が、ｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方における遺伝子突然変異か、またはｕｖｒＡおよびｕｖｒＢ双方の機能的等価物における遺伝子突然変異を含む、請求項７６に記載の抗原提示細胞。
【請求項７８】
ＲｅｃＡ、またはＲｅｃＡの機能的等価物に関して欠損がある、請求項７５に記載の抗原提示細胞。
【請求項７９】
前記微生物が細菌である、請求項７５に記載の抗原提示細胞。
【請求項８０】
前記微生物が、抗原をコードする異種核酸配列を含む、請求項７５に記載の抗原提示細胞。
【請求項８１】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、有効量の請求項７５に記載の抗原提示細胞を該宿主に投与する工程を包含する、方法。
【請求項８２】
宿主において抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、有効量の請求項７５に記載の抗原提示細胞を該宿主に投与する工程を包含し、ここで、該微生物が該抗原を発現する、方法。
【請求項８３】
医療用途のための自由生活微生物であって、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、微生物。
【請求項８４】
医療用途のための抗原提示細胞であって、該抗原提示細胞が、自由生活微生物を含み、ここで、該微生物の核酸が、該微生物が増殖について減弱されるように、該核酸と直接的に反応する核酸標的化化合物との反応によって改変されている、抗原提示細胞。
【請求項８５】
医療用途のための突然変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であって、該突然変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株が、その核酸を修復するその能力を減弱させる遺伝子突然変異を含む、突然変異体株。
【請求項８６】
医療用途のための自由生活微生物であって、該微生物が、少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある、微生物。
【請求項８７】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓまたはＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項８６に記載の微生物。
【請求項８８】
医療用途のための抗原提示細胞であって、該抗原提示細胞が、自由生活微生物を含み、ここで、該微生物が、少なくとも１つのＤＮＡ修復酵素に関して欠損がある、抗原提示細胞。
【請求項８９】
キットであって、以下：（ａ）請求項４７に記載の突然変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株、請求項５８に記載の突然変異体Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ株または自由生活微生物を含む組成物であって、ここで、該自由生活微生物の核酸が、核酸標的化化合物との反応によって改変されている、組成物；および（ｂ）宿主における疾患の予防または処置における該組成物の使用のための指示書、の両方を含む、キット。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９ＡＢ】

【図９ＣＤ】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】


【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２０Ｃ】

【図２０Ｄ】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２２】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２３Ｃ】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９Ａ】

【図２９Ｂ】

【図２９Ｃ】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【公表番号】特表２００６−５２１３７６（Ｐ２００６−５２１３７６Ａ）
【公表日】平成１８年９月２１日（２００６．９．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０８６９７（Ｐ２００６−５０８６９７）
【出願日】平成１６年２月６日（２００４．２．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００３６７１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８４９３６
【国際公開日】平成１６年１０月７日（２００４．１０．７）
【出願人】（５０５２９７０２４）シーラス　コーポレイション (10)
【Ｆターム（参考）】