改良Ｎ４キレーターコンジュゲート
本発明は、リンカー基を介して生体ターゲティング部分と連結したテトラアミンキレーターコンジュゲート並びに放射性医薬品としてのそのテクネチウム錯体を提供する。リンカー基はキレーターが橋頭位で単官能化されるようなもので、柔軟性を与えるとともにアリール基を含まないものをもたらし、親油性及び立体的嵩高さを最小限にする。キレーターの保護形も提供し、テトラアミンキレーターのアミン窒素による干渉反応を起こさずに広範なターゲティング分子との結合が可能となる。官能化キレーターの合成についても、二官能性キレーター前駆体と併せて開示する。本発明のテクネチウム金属錯体を含む放射性医薬組成物についても、かかる放射性医薬品の調製用の非放射性キットと併せて開示する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性金属９９ｍＴｃとの金属錯体の形成に適したテトラアミンキレーターと生体ターゲティング分子との改良コンジュゲートに関する。この放射性金属錯体は９９ｍＴｃ放射性医薬品として有用である。キット及び前駆体も提供される。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第５４８９４２５号（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）には、金属の錯体化に有用な一群の鎖状及び大環状の官能化テトラアミンキレーター、特に放射性及び非放射性ロジウム錯体、殊に１０５Ｒｈ又は１０１ｍＲｈ放射性金属錯体が開示されている。開示された具体的なテトラアミンには、以下のものが含まれる。
【０００３】
【化１】
【０００４】
上記二官能性キレーターは、治療又は診断用のモノクローナル抗体又はその断片との結合に有用であると記載されている。米国特許第５４８９４２５号には、まず１０５Ｒｈ金属錯体を形成してから抗体と反応させた後、精製することによって、抗体放射性金属錯体キレーターコンジュゲートを調製することが開示されている（実施例２１、２２ａ及び２３）。米国特許第５４８９４２５号には、錯化していない抗体キレーターコンジュゲート、つまり放射性金属の配位していないものは記載されていない。米国特許第５４８９４２５号は、かかる抗体結合反応において側鎖アミンをキレーターの４つのアミンからどのように差別化するか何ら教示されていない。米国特許第５４８９４２５号は、二官能性キレーターが「テクネチウム及びレニウムとの錯体化にも有用であろう」と記載されているが、これをどのように達成するかについては開示されていないし、テクネチウム錯体の具体例も開示されていない。
【０００５】
米国特許第５６５０１３４号には、一群のキレーターのソマトスタチンペプチド−キレーターコンジュゲートが開示されている。実施例１には、オクトレオチドペプチドの６−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−１，４，８，１１−テトラアザウンデカンとの結合が記載されている。
【０００６】
欧州特許出願公開第１１８１９３６号には、以下の二官能性キレーターＢＢＮ−１及びＢＢＮ−２を用いて調製されたテトラアミンキレーターのボンベシン（テトラデカペプチド）コンジュゲート並びにそれらの９９ｍＴｃ錯体が開示されている。
【０００７】
【化２】
【０００８】
９９ｍＴｃ錯体はマウス体内から腎臓・尿路系を介しての迅速なクリアランスを呈すると記載されている。しかし、欧州特許出願公開第１１８１９３６号には、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２をボンベシンのＮ末端に結合する段階を除いて、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の合成に関して何ら開示されていないし、引用されてもいない。腫瘍イメージング用放射性医薬品候補を得るためのＢＢＮ−２とボンベシンとの結合及び９９ｍＴｃ標識についても、Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）に記載されている。この９９ｍＴｃ錯体は従来技術のボンベシンキレートコンジュゲートよりも親水性が向上し、そのため腎臓・尿路系による排泄に有利に働くと期待されると記載されている。
【０００９】
ヒトの患者用の腫瘍イメージング用放射性医薬品候補を得るためのＢＢＮ−１とオクトレオチドとの結合及び９９ｍＴｃ標識についても、Ｍａｒｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）に記載されている。以上のＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の刊行物のいずれにも、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の合成については何な記載されていない。
【特許文献１】米国特許第５４８９４２５号明細書
【特許文献２】米国特許第５６５０１３４号明細書
【特許文献３】欧州特許出願公開第１１８１９３６号明細書
【非特許文献１】Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）
【非特許文献２】Ｍａｒｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、リンカー基を介して生体ターゲティング部分と連結したテトラアミンキレーターコンジュゲート並びに放射性医薬品としてのそのテクネチウム錯体を提供する。リンカー基はキレーターが橋頭位で単官能化されるようなもので、柔軟性を与えるとともにアリール基を含まないものをもたらし、親油性及び立体的嵩高さを最小限にする。キレーターの適当な保護形も提供し、テトラアミンキレーターのアミン窒素による干渉反応を起こさずに広範なターゲティング分子との結合が可能となる。官能化キレーターの合成についても、二官能性キレーター前駆体と併せて説明する。
【００１１】
本発明のテクネチウム金属錯体を含む放射性医薬組成物についても、かかる放射性医薬品の調製用の非放射性キットと併せて説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
第一の実施形態では、本発明は次の式（Ｉ）の陽イオン９９ｍＴＣテクネチウム錯体を提供する。
【００１３】
【化３】
【００１４】
式中、
Ｘは−ＮＲ−、−ＣＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−又はＱ基であり、
各Ｙは独立にＤ−若しくはＬ−アミノ酸、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−又はＸ基であり、
Ｚは合成生体ターゲティング部分であり、
ｎは１〜８の整数であり、
ｍは０〜３０の整数であり、
ＲはＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル又はＣ１〜４フルオロアルキルであり、
Ｑは次式の基であり、
【００１５】
【化４】
【００１６】
Ａは対イオンであるが、
ヘテロ原子同士が直接結合した結合を原子鎖Ｘ１−（Ｙ）ｍが含まないことを条件とする。
【００１７】
テクネチウム放射性同位体は、９９ｍＴｃのようなγ線放射体でも、９４ｍＴｃのようなＰＥＴイメージングに適した陽電子放射体でもよい。好ましくはテクネチウム放射性同位体は９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃであり、最も好ましくは９９ｍＴｃである。
【００１８】
Ｘは好ましくは−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−又はＱ基である。Ｘは最も好ましくは−ＣＯＮＲ−又は−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−であり、−ＣＯＮＨ−及び−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−が特に好ましい。
【００１９】
式Ｉのリンカー基−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（Ｙ）ｍ−は、ヘテロ原子同士が直接結合した結合をＸ１−（Ｙ）ｍ原子鎖が含まないように選択され、「ヘテロ原子」という用語は窒素、酸素又はイオウのような非炭素原子を意味する。これは上記原子鎖がＯ−Ｏ、Ｎ−Ｎ又はＯ−Ｎのような結合を含まないことを意味する。
【００２０】
式Ｉのリンカー基−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（Ｙ）ｍ−の役割は、生体内での生体ターゲティング部分（Ｚ）の活性結合部位からテクネチウム錯体を離隔することであると想定される。これは生体内での活性部位への結合を比較的嵩高いテクネチウム錯体が立体的に阻害しないようにするのに役立つ。アルキレン基−（ＣＨ２）ｎ−は、結合した生体ターゲティング部分（Ｚ）との有意な水素結合相互作用がなく、そのためリンカーがＺに巻き付かないという利点を有する。好ましいアルキレン基はｎ＝１〜６、最も好ましくは２〜４であり、２が特に好ましい。
【００２１】
本発明のリンカー基はアリール環を含まない。これは、コンジュゲートの生体ターゲティング部分（Ｚ）に結合したリンカー基並びにテクネチウム錯体の親油性を最小限にするのに役立つ。リンカー基（及びテクネチウム錯体）の立体的嵩高さ及び分子量も最小限となるが、連鎖の柔軟性は維持される。
【００２２】
リンカー基の性状は、造影剤の体内分布の改変にも利用できる。例えば、−（Ｙ）ｍ−にエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑えるのに役立つであろう。−（Ｙ）ｍ−がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位又は１〜１０アミノ酸残基のペプチド鎖からなる場合、リンカー基は生体内での薬物動態及び造影剤の血液クリアランス速度を改善するように機能し得る。かかる「バイオモディファイアー」リンカー基は、筋肉や肝臓のようなバックグラウンド組織及び／又は血液からのテクネチウム造影剤のクリアランスを促進して、バックグラウンド干渉の低下による画質の向上した診断用画像を与え得る。バイオモディファイアーリンカー基は、特定の排泄経路、例えば肝臓経路よりも腎臓経路を優勢にするのにも使用し得る。或いは、バイオモディファイアーリンカー基は血中滞留時間を延ばして、生体内でのターゲット部位への薬剤の蓄積量を増すことができる。
【００２３】
−（Ｙ）ｍ−がアミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される。ペプチド鎖のアミノ酸の数は好ましくは１〜１０、最も好ましくは１〜３である。
【００２４】
−（Ｙ）ｍ−がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは式（−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）ｗの基を含むもので、ｗは３〜２５の整数である。整数ｗは好ましくは６〜２２である。特に好ましいＰＥＧ含有−（Ｙ）ｍ−基は、単分散ＰＥＧ様構造の式ＩＶの１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の重合で得られる単位である。
【００２５】
【化５】
【００２６】
式中、ｐは１〜１０の整数である。
【００２７】
「フルオロアルキル」という用語は、１以上のフッ素置換基を有するアルキル基を意味し、この用語はモノフルオロアルキル（例えば−ＣＨ２Ｆ）からペルフルオロアルキル（例えばＣＦ３）までの基を包含する。
【００２８】
−（Ｙ）ｍ−基は好ましくはジグリコール酸部分、マレイミド部分、グルタミン酸、コハク酸、ポリエチレングリコール系単位又は式ＩＶのＰＥＧ様単位を含む。
【００２９】
「合成」という用語は、その通常の意味、つまり天然資源（例えば哺乳動物の身体）から分離されたものではなく、人造のものを意味する。かかる化合物は、その製造並びに不純物特性を十分に制御できるという利点がある。従って、モノクローナル抗体及びその断片は、本願特許請求の範囲に属さない。
【００３０】
「生体ターゲティング部分」という用語は、３〜１００量体ペプチド若しくはペプチド類似体（これらは鎖状ペプチドでも環状ペプチドでも若しくはそれらの組合せでもよい。）、酵素の基質若しくはアンタゴニスト若しくは阻害剤、合成受容体結合性化合物、オリゴヌクレオチド、又はオリゴＤＮＡ断片若しくはオリゴＲＮＡ断片を意味する。
【００３１】
「環状ペプチド」という用語は、２つの末端アミノ酸が共有結合によって連結した５〜１５個のアミノ酸配列を意味し、上記共有結合はペプチド結合でも、ジスルフィド結合でも、或いはチオエーテル、ホスホジエステル、ジシロキサン又はウレタン結合のような合成非ペプチド結合でもよい。「アミノ酸」という用語は、Ｌ−若しくはＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体又はアミノ酸模倣体を意味し、光学的に純粋なもの、つまり単一の鏡像異性体でキラルなものでもよいし、鏡像異性体混合物であってもよい。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、天然アミノ酸の合成類似体であってアイソスターであるもの、つまり天然化合物の立体及び電子構造を模倣して設計されたものを意味する。かかるアイソスターは当業者に周知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロインベルソ型ペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールなどが挙げられる（Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７，（１９８５）参照）。 本発明での使用に適したペプチドとしては、以下のものが挙げられる。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
・ＳＴ受容体に結合するペプチド。ここで、ＳＴとは大腸菌その他の微生物の産生する熱安定性毒素をいう。
・ラミニン断片、例えばＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
・白血球集積のターゲティング部位用のＮ−ホルミルペプチド。
・血小板因子４（ＰＦ４）及びその断片。
・ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド。これは例えば血管新生をターゲティングし得る（Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６；Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． １９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７）。
・α２−アンチプラスミン若しくはフィブロネクチン若しくはβ−カゼインのペプチド断片、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジン。α２−アンチプラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン及びトロンボスポンジンのアミノ酸配列は以下の引用文献に記載されている：α２−アンチプラスミン前駆体（Ｍ．Ｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３，（１９８７））；β−カゼイン（Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｇｅｎｅ，１３９，１９３，（１９９４））；フィブロネクチン（Ａ．Ｇｕｔｍａｎ ｅｔ ａｌ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５，（１９９６））；トロンボスポンジン−１前駆体（Ｖ．Ｄｉｘｉｔ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９，（１９８６））；Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５，（１９８４）。
・アンジオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）、［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。
【００３２】
好ましくは、本発明のペプチドはアンチプラスミン又はアンジオテンシンＩＩペプチドを含む。アンチプラスミンペプチドは、Ｎ末端からみて以下のアミノ酸配列を含む。
（ｉ）α２−アンチプラスミン
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＯＨ、又はその変異体で１以上のアミノ酸が交換、付加又は除去されたもの、例えば、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨなど、或いは
（ｉｉ）カゼイン
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ。
【００３３】
本発明の合成ペプチドは、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているように、通常の固相合成法で得ることができる。
【００３４】
適当な酵素の基質、アンタゴニスト又は阻害剤としては、グルコース並びにフルオロデオキシグルコースのようなグルコース類似体、脂肪酸、又はエラスターゼ若しくはアンジオテンシンＩＩ若しくはメタロプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。好ましい非ペプチド系アンジオテンシンＩＩアンタゴニストはロサルタンである。
【００３５】
適当な受容体結合性化合物としては、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲストロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１若しくはＤ−２受容体、又はトロパンのようなドーパミン輸送体、並びにセロトニン受容体に対するリガンドが挙げられる。
【００３６】
生体ターゲティング部分（Ｚ）は好ましくは分子量５０００未満のもの、最も好ましくは４０００未満のもの、理想的には３０００未満のものである。これは、本発明のテトラアミンテクネチウム錯体の改善された生物学的特性が、式Ｉのコンジュゲートのテクネチウム錯体の全体的体内分布、特にクリアランスに影響をもつという利点を有する。ｎが３で、Ｘが（ＣＨ２）ｎ基に直接結合した窒素を含む場合、Ｚは合成物で分子量４０００未満となるように選択される。好ましい生体ターゲティング部分は３〜２０量体ペプチド又は酵素基質、酵素アンタゴニスト若しくは酵素阻害剤である。
【００３７】
対イオン（Ａ−）は、モル当量で存在し、式ＩのＴｃ（Ｖ）ジオキソテクネチウム錯体の陽電荷と釣り合う陰イオンを表す。陰イオン（Ａ）は、電荷が均衡する量で存在していれば単電荷のものでも多電荷のものでもよい。陰イオンは好適には無機酸又は有機酸から誘導される。適当な陰イオンの例としては、塩素又は臭素のようなハロゲンイオン、硫酸、硝酸、クエン酸、酢酸、リン酸及びホウ酸イオンが挙げられる。好ましい陰イオンは塩素イオンである。
【００３８】
式Ｉのテクネチウム錯体は、錯形成後に安定であり、テクネチウムを生体ターゲティング部分に優先的に結合させる強力なキランドを含んでいるという利点を有する。そのため、このテクネチウム錯体は生体内で生体高分子又は競合配位子とのトランスキレーション反応を起こしにくい。テクネチウム錯体は小さくてコンパクトであり、生体ターゲティング部分（Ｚ）と結合したときも立体的な影響が最小限である点で有用である。永続的な陽イオン交換とＴｃ（Ｖ）ジオキソコアの存在は、この錯体が親水性でもあることを意味しており、そのため錯体が細胞内の他の区画に分布する可能性が低く、生体内でバックグラウンド器官及び組織、例えば血流からのクリアランスが速い。
【００３９】
式Ｉのテクネチウム錯体は、以下の第二の実施形態で説明するように、適当なテクネチウム源と式ＩＩのキレーターコンジュゲートとの反応によって調製できる。
【００４０】
第二の実施形態では、本発明は式ＩＩのキレーターコンジュゲートを提供する。
【００４１】
【化６】
【００４２】
式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｎ及びｍは既に定義した通りであり、
Ｑ１〜Ｑ６は独立にＱ基であり、ＱはＨ又はアミン保護基である。
【００４３】
このキレーターコンジュゲートは、第一の実施形態に係る式Ｉのテクネチウム錯体の調製に有用である。
【００４４】
「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から開裂できる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者に周知であり、好適にはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から選択される。場合によっては、保護基の性状は、Ｑ１／Ｑ２又はＱ５／Ｑ６の両者、つまり関連するアミン窒素原子に全くＮＨ結合が存在しないようなものであってもよい。他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９１に記載されている。好ましいアミン保護基はＢｏｃ及びＦｍｏｃ、最も好ましくはＢｏｃである。Ｂｏｃを使用した場合、Ｑ１及びＱ６は共にＨであり、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５は各々ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
【００４５】
式ＩＩにおいて、アミン保護基は主にテクネチウムとの錯形成前の合成反応時にテトラアミンキレーターのアミン官能基を保護するために用いられる。しかし、生体ターゲティング基（Ｚ）が第一及び／又は第二アミンと反応し易い場合、これらの保護基は、テクネチウムと錯形成する前のキレーターアミンとＺとの不都合な反応の防止にも有用である。
【００４６】
式ＩＩの好ましいコンジュゲートは、保護されていないアミン窒素を少なくとも１つ以上有する（つまり、Ｑ３又はＱ４の一方がＨであるか、或いはＱ１／Ｑ２対又はＱ５／Ｑ６対がＨである）。１以上の遊離アミノ基は、式Ｉのテクネチウム錯体の調製の際の好ましい溶媒である水性媒体中でのコンジュゲートの溶解性が増すことを意味する。遊離アミノ基は、錯形成が保護基を予め除去しておくこと（これは金属の錯体化も阻害する）に依存しないので、テクネチウムとの錯形成が速やかになることを意味する。コンジュゲートした生体ターゲティング基（Ｚ）がアミンとの反応は起こしにくいときは、式ＩＩのコンジュゲートを完全な脱保護形（Ｑ１〜Ｑ６が各々Ｈ）で使用するのが好適であり、これが式ＩＩの特に好ましいキレーターコンジュゲートである。式Ｉのテクネチウム錯体を得るための錯体化反応には完全な脱保護形が好ましい。
【００４７】
本発明の式Ｉのテクネチウム錯体は、適切な酸化状態の放射性金属の溶液を適切なｐＨで式ＩＩのキレーターコンジュゲートと反応させることによって調製できる。溶液は、テクネチウムと弱く錯化する配位子（グルコン酸イオン又はクエン酸イオンなど）を適宜含んでいてもよく、テクネチウム錯体は配位子交換又はトランスキレーションによって調製される。かかる条件はテクネチウムイオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用であることが多いが、本発明のキレーターはテクネチウムと迅速に錯形成するので、本発明のキレーターでは重要性は低い。放射性同位体が９９ｍＴｃである場合、通常の出発原料は９９Ｍｏジェネレータから得られる過テクネチウム酸ナトリウムである。テクネチウムは、比較的反応性の低いＴｃ（ＶＩＩ）の酸化状態の９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩として存在する。そのため、酸化状態の低いＴｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ）のテクネチウム錯体の調製には、通常、錯体化を促すため亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような薬学的に許容される還元剤の添加が必要とされる。薬学的に許容される還元剤は好ましくは第一スズ塩であり、最も好ましくは塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズである。
【００４８】
式ＩＩのキレーターコンジュゲートは、以降の第五の実施形態で説明するように、生体ターゲティング分子（Ｚ）と式ＩＩＩの二官能性キレーターとの結合によって調製できる。
【００４９】
第三の実施形態では、本発明は、Ａが薬学的に許容される対イオンである第一の実施形態のテクネチウム錯体を生体適合性担体と共にヒトへの投与に適した形態で含む放射性医薬品を提供する。
【００５０】
「ヒトへの投与に適した形態」という用語は、無菌で、発熱物質も毒性又は副作用を生じる化合物も含まず、生体適合性のｐＨ（ｐＨ約４．０〜１０．５）で製剤化した組成物を意味する。かかる組成物は生体内で塞栓を惹起する危険性のある粒子を含まず、体液（例えば血液）と接しても沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物は生体適合性の賦形剤のみを含有し、好ましくは等張性である。
【００５１】
「生体適合性担体」とは、放射性医薬品を懸濁又は好ましくは溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。
【００５２】
「薬学的に許容される対イオン」という用語は、哺乳類の身体に投与したときに生体内で毒性又は悪影響を生じずに、医薬組成物の他の成分と化学的及び／又は毒性学的に適合性の陰イオン（負電荷イオン）を意味する。本発明のテクネチウム放射性医薬品に対する化学的適合性とは、この陰イオンがテクネチウムに対してテトラアミンキレーターと事実上競合しないことを意味する。かかる適当な陰イオンとしては、ハロゲンイオン（例えば塩素、ヨウ素及び臭素イオン）、Ｃ１〜２アルキルスルホン酸イオン（例えばメシレート又はエチルスルホン酸イオン）、アリールスルホン酸イオン（例えばフェニルスルホン酸又はトシレートイオン）、Ｃ１〜２アルキルホスホン酸イオン、ジ（Ｃ１〜２）アルキルリン酸イオン（例えばジメチルリン酸、ジエチルリン酸又はジグリセロールリン酸イオン）、アリールホスホン酸イオン、アリールリン酸イオン、アルキルアリールホスホン酸イオン、アルキルアリールリン酸イオン、Ｃ１〜２アルキルカルボン酸イオン（例えば酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸又はグリセリン酸イオン）、アリールカルボン酸イオン（例えば安息香酸イオン）などが挙げられる。好ましい薬学的に許容される対イオンは、塩素イオン、フッ素イオン、酢酸イオン、酒石酸イオン、水酸イオン及びリン酸イオンである。
【００５３】
かかる放射性医薬品は、好適には、無菌状態を維持しながら皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器には、１回又は複数回分の用量を入れることができる。好ましい多用量用容器は、複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ３のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に引き出すことができる。
プレフィルド型注射器は１回分の用量を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適した注射器である。プレフィルド型注射器は、適宜、オペレーターを放射能から保護するため、注射器シールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品注射器シールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。
【００５４】
本発明の好ましい放射性医薬品はテクネチウム放射性同位体９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃを含み、最も好ましくは９９ｍＴｃを含む。テクネチウム同位体が９９ｍＴｃである場合、画像診断用放射性医薬品に適した放射能含量は、生体内の撮像部位、取込み量及び標的／バックグラウンド比に応じて、１８０〜１５００ＭＢｑの９９ｍＴｃである。
本発明のテクネチウム放射性医薬品は、以下に挙げるような様々な方法で調製できる。
（ｉ）第二の実施形態に関して上記で説明したテクネチウム錯体形成をクリーンルーム環境下で実施する無菌製造法。
（ｉｉ）無菌製造を用いずにテクネチウム錯体形成を実施してから、最終段階で滅菌（例えばガンマ線照射又は高圧蒸気滅菌）する最終滅菌法。
（ｉｉｉ）式ＩＩのキレーターと薬学的に許容される還元剤を適宜他の賦形剤と共に含む無菌の凍結乾燥非放射性キット製剤を、９９ｍＴｃジェネレータから得られる無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸のアリコートと反応させるキット法。
【００５５】
方法（ｉｉｉ）が好ましく、この方法に使用するためのキットを以下の第四の実施形態で説明する。
【００５６】
第四の実施形態では、本発明は、上述の放射性医薬組成物を調製するための非放射性キットであって、式ＩＩのコンジュゲートを生体適合性還元剤と共に含むキットを提供する。かかるキットは、例えば血流への直接注射によるヒトへの投与に適した無菌放射性医薬製剤を与えるように設計される。リガンドコンジュゲート及びその好ましい態様は上記の第二の実施形態で記載した通りである。
【００５７】
９９ｍＴｃ用には、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（ＴｃＯ４−）で再構成すればそれ以上操作しなくてもヒトへの投与に適した溶液が得られるように設計される。
適当なキットは、遊離塩基又は酸塩の形態のキレーターコンジュゲートを亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような生体適合性還元剤と共に収容した容器（例えばセプタムシールバイアル）を備える。生体適合性還元剤は、好ましくは塩化第一スズや酒石酸第一スズのような第一スズ塩である。或いは、キットは非放射性金属錯体を適宜含んでいてもよく、テクネチウムの添加時にトランスメタレーション（金属交換）を起こして所望の生成物を与える。
【００５８】
非放射性キットはさらに、トランスキレーター、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加成分を適宜含んでいてもよい。「トランスキレーター」とは、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、次に上記キレーターで置換される化合物である。これはテクネチウム錯体化と競合する過テクネチウム酸塩の迅速な還元に起因した還元型加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が形成するおそれを最小限に抑制する。かかる適当なトランスキレーターは、弱有機酸（つまりｐＫａが３〜７の範囲内にある有機酸）と生体適合性陽イオンとの塩である。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化して負に荷電した陰イオン基と塩を形成する正電荷を有する対イオンで、しかも無毒で哺乳類の身体、特に人体への投与に適したものをいう。適当な生体適合性陽イオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、さらにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。適当な弱有機酸は、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸である。従って、適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノラート又はホスホン酸塩である。好ましい塩は、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩、特にジホスホン酸塩である。好ましいトランスキレーターは、ＭＤＰ（メチレンジホスホン酸）と生体適合性陽イオンとの塩である。
【００５９】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元過程のような分解反応を阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（即ち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらの生体適合性陽イオンとの塩から選択される。
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の放射線医薬組成物（つまり、放射性診断薬自体）における微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、再構成前の本発明の非放射性キットの１以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、即ちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベンである。
【００６０】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類の投与に関する許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。コンジュゲートを酸塩の形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階操作法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器で提供してもよい。
【００６１】
「充填剤」という用語は、製造時及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【００６２】
第五の実施形態では、本発明は式ＩＩＩの化合物を提供する。
【００６３】
【化７】
【００６４】
式中、Ｑ１〜Ｑ６及びｎは式Ｉ及びＩＩに関して定義した通りであり、
Ｅは第一の実施形態の生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適した官能基であるが、
（ｉ）ｎ＝３のとき、Ｑ１〜Ｑ６の１以上がアミン保護基であり、
（ｉｉ）ｎ＝３又は５のとき、ＥはＯＨではないことを条件とする。
【００６５】
式ＩＩＩの化合物は「二官能性キレーター」つまり１以上の官能基（Ｅ）が結合したキレーターである。官能基Ｅは生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適したものである。適当な官能基（Ｅ）としては、アミン、チオシアネート、マレイミド及び活性エステルが挙げられる。Ｅは好ましくは活性化されていないヒドロキシル（−ＯＨ）基を含まない。「活性エステル」という用語は、良好な脱離基で、生体ターゲティング部分に存在するアミンのような求核部位との反応を容易にするように設計されたカルボン酸のエステル誘導体を意味する。適当な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステルである。
【００６６】
Ｅは好ましくは第一アミン（−ＮＨ２）、−ＣＯ２Ｍ、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、マレイミド又はアクリルアミドである。ただし、ＭはＨ、陽イオン、保護基又は活性エステルである。Ｅは最も好ましくは−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｍ又はマレイミドであり、理想的には−ＮＨ２又は−ＣＯ２Ｍである。
【００６７】
式ＩＩＩの化合物は、生体ターゲティング分子（Ｚ）の適当な対応官能基と反応して式ＩＩの所望のコンジュゲートを形成する。生体ターゲティング分子（Ｚ）の適当な官能基としては、（アミン官能化二官能性キレーターとのアミド結合形成のための）カルボキシル、（カルボキシル又は活性エステル官能化二官能性キレーターとのアミド結合形成のための）アミン、（アミン官能化二官能性キレーターのＮアルキル化のための）ハロゲン、メシレート及びトシレート、並びに（マレイミド官能化二官能性キレーターとの反応のための）チオールが挙げられる。
【００６８】
Ｅが生体ターゲティング分子（Ｚ）のアミノ基と反応するように設計された基（例えば活性エステル）である場合、キレーターのアミンとの不都合な副反応のおそれがあることは明らかである。かかるＥ基については、テトラアミンキレーターの４つのアミン窒素原子の各々が保護されるように、式ＩＩＩのＱ１〜Ｑ６は好ましくは窒素保護基として選択される。Ｅがアミノ基である場合、生体ターゲティング分子（Ｚ）との反応がＥアミンでしか起こらず、テトラアミンキレーターのアミン窒素原子では起こらないことが明らかに重要である。従って、この状況下でも、式ＩＩＩのＱ１〜Ｑ６は好ましくは窒素保護基である。窒素保護基及びその好ましい具体例は上記の第二の実施形態で記載した通りである。
【００６９】
式ＩＩＩの化合物は以下のスキーム１及び２に記載したように調製できる。スキーム１はカルボキシ官能化Ｎ保護テトラアミンキレーターの順応性に富む合成経路を与え、式ＩＩＩのｎの様々な値に適応させることができる。−（ＣＨ２）５ＯＨ橋頭置換基をもつＢｏｃ保護テトラアミン類似体の合成は、Ｔｕｒｐｉｎ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｏｍｐ． Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，３７９−３９３（２００２）に記載されている。スキーム２はアミン官能化Ｎ保護テトラアミンキレーターの順応性に富む合成経路を与え、ｎの様々な値に適応させることができる。生体ターゲティングペプチドの結合は、Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）及びＭａｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）に記載のものと同様に実施できる。
【００７０】
【化８】
【００７１】
【化９】
【実施例】
【００７２】
本発明を以下の非限定的な実施例で例証する。実施例１では、本発明のカルボキシ官能化Ｎ保護テトラアミンキレーター（化合物１）の合成について記載する。実施例２では、本発明のアミン官能化Ｎ保護テトラアミンキレーター（化合物２）の合成について記載する。実施例３では、化合物１とアミン（ベンジルアミン）との結合を示す化合物（化合物３）の合成について記載する。実施例４では、化合物６の合成について記載し、化合物２とカルボン酸の活性エステルとの結合を例証する。実施例５では、本発明のキレーターとロサルタン誘導体とのコンジュゲート（化合物４）の合成について記載する。実施例６では、ＰＥＧリンカー基を含むロサルタンキレーターコンジュゲートの合成について記載する。実施例７では、本発明のキレーターのアンジオテンシンペプチドコンジュゲート（化合物８）の合成について説明する。実施例８では、本発明の幾つかのキレーターの９９ｍＴｃ放射標識化について記載する。実施例９では、本発明の様々な９９ｍＴｃ錯体の親油性（ｌｏｇＰ）を測定し、これらの錯体が比較的親水性であることを示す。実施例１０では、低い肝臓バックグラウンドと高い尿クリアランスを示す本発明の幾つかの９９ｍＴｃ錯体の生体内分布結果を示す。実施例１１では、化合物１の高収率の合成について記載する。実施例１２では、活性エステルの結合した本発明の保護テトラアミンキレーター（化合物９）の合成について記載する。
【００７３】
実施例１：化合物１の合成
段階（ａ）：ジエチル［２−（ベンジルオキシ）エチル］マロネート
標記化合物は、Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１，２８７５−２８９４（１９９５）の方法の修正法で調製した。ナトリウム（１．２０ｇ）をアルゴン雰囲気中で無水エタノール（２５ｍＬ）に溶解した。マロン酸ジエチル（１４．００ｇ）を加えて混合物を３０分間還流した。ベンジルブロモエチルエーテル（１０ｇ）を加えて、混合物を１６時間還流下で撹拌した。エタノールをロータリーエバポレーターで除去して、残渣をエーテル（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とに分配した。エーテル層を水（３×５０ｍＬ）で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。エバポレーターでエーテルを除去して、残渣を真空蒸留した。４０〜５５℃で留出した留分を廃棄した（未反応マロン酸ジエチル）。生成物は１４０〜１５０℃（１ｍｍ）で留出した（文献値ｂｐ１３８〜１４０℃（１ｍｍ））。収量は無色油１２．６０ｇであった。
【００７４】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．２８（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），４．１６（ｍ，４Ｈ，ＣＯＯＣＨ２），３．５８（ｔ，１Ｈ，ＣＨ），３．５０（ｔ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），２．２１（ｔ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），１．２０（ｔ，６Ｈ，ＣＯＯＣＨ２−ＣＨ３）。
【００７５】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１６９．２０（ＣＯ），１３８．１０，１２８．６０，１２７．８０（芳香族），７３．００（ＣＨ２Ｐｈ），６７．３０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），６１．７０（ＣＯＯＣＨ２），４９．１０（ＣＨ），２８．９０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），１４．１０（ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３）。
【００７６】
段階（ｂ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシ−エチル）マロンアミド
ジエチル［２−（ベンジルオキシ）エチル］マロネート（４．００ｇ）をエチレンジアミン（３０ｍＬ）に加えて、溶液を室温で２日間撹拌した。過剰のエチレンジアミンをロータリーエバポレーターで除去して、残渣を高真空下で２日間乾燥して黄色油状物（４．２８ｇ）を得、これを放置して結晶化させた。生成物は痕跡量のエチレンジアミンを依然として含んでいることがＮＭＲスペクトルで検出された。
【００７７】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．７４（ｂｒ ｔ，２Ｈ，ＣＯ−ＮＨ），７．３２（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５０（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２− ），３．３３（ｔ １Ｈ，ＣＨ），３．２３（ｍ，４Ｈ，ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２），２．７４（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２−ＮＨ２）２．１８（ｑ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−）１．５５（ｂｒ ｓ ４Ｈ，ＮＨ２）。
【００７８】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１７１．１０（ＣＯ），１３８．２０，１２８．３０，１２７．７０（芳香族），７３．００（ＣＨ２−Ｐｈ），６７．８０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５１．４０（ＣＨ），４２．４０（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２），４１．２０（ＣＨ２−ＮＨ２），３１．９０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−）。
【００７９】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジアミノプロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）マロンアミド（３．８０ｇ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解して、フラスコを氷浴に浸漬した。フラスコをアルゴンでフラッシュして、ＴＨＦボラン錯体（８０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）をシリンジで加えた。反応混合物を室温まで放温し、次いで４０℃で２日間撹拌し、１時間還流した。メタノール（５０ｍＬ）を滴下し、溶液を４０℃で１晩撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解した。水酸化ナトリウム（１５ｍＬの水中に１０ｇ）を加えて、メタノールを留去した。無色油状物が分離し、これをＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒の除去で３．４０ｇの無色油状物が得られた。
【００８０】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．３４（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５５（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），２．７６（ｔ，４Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．６３（ｍ，８Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），１．８４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），１．５８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），１．４１（ｂｒ ｓ，６Ｈ，ＮＨ）。
【００８１】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１３８．６０，１２８．３０，１２７．６０（芳香族），７２．８０（ＣＨ２−Ｐｈ），６８．７０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５３．５０（Ｎ−ＣＨ２），５２．８０（Ｎ−ＣＨ２），４１．６０（Ｎ−ＣＨ２）３６．４０（ＣＨ），３１．３０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）。
【００８２】
ＭＳ−ＥＩ：２９５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値２９５．２）。
【００８３】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミニエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジアミノプロパン（３．３０ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解して、トリエチルアミン（５．４０ｇ）及びｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１０．３０ｇ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）、クエン酸溶液（水中１０％１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると、黄色油状物が得られ、これを高真空で恒量になるまで乾燥した。粗生成物（７．７０ｇ）をシリカゲルカラム（２５０ｇ、２３０〜４００メッシュ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２−Ｅｔ２Ｏ１：１）で精製して、６．１０ｇ（７８．３％）の透明油状物を得た。
【００８４】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．３２（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），５．１２（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），４．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．４９（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），３．２４（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．１４（ｂｒ，１Ｈ，ＣＨ），１．５９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）１．４５（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．４２（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００８５】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１５５．９０（ＮＨ−ＣＯ），１３８．２０，１２８．３０ １２７．６０，１２７．５０（芳香族），７９．９０，７８．９０（ＣＭｅ３），７２．８０（ＣＨ２−Ｐｈ），６８．００（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５０．００（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），４６．９０（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），３９．２０（Ｎ−ＣＨ２），３４．４０（ｂｒ，ＣＨ），２９．８０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），２８．３０（ｔ−Ｂｕ）。
【００８６】
ＭＳ−ＥＩ：６９５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６９５．５）
段階（ｅ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（３．１６ｇ）を無水エタノール（１００ｍＬ）に溶解して、Ｐｄ−活性炭（１．００ｇ、乾燥、１０％）を加えた。混合物をＰａｒｒ水素添加装置中３５ｐｓｉで２日間水素添加した。触媒を濾別し、エタノールで洗浄した（３×２０ｍＬ）。エタノールをロータリーエバポレーターで除去すると無色油状物が得られ、これを高真空で恒量になるまで乾燥した（２．６７ｇ、９７．１％）。
【００８７】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝５．２５（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），３．６９（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），３．２８（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．７１（ｂｒ，ＯＨ），２．２３（ｂｒ，１Ｈ，ＣＨ），１．５６（ショルダー，ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）１．４８（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．４４（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００８８】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１５６．１０（ＮＨＣＯ），８０．００，７９．２０（ＣＭｅ３），５９．６０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），４９．９０（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），４７．００（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），３９．３４（Ｎ−ＣＨ２），３３．８０（ＣＨ），３２．３０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），２８．３０（ｔ−Ｂｕ）。
【００８９】
ＭＳ−ＥＩ：６０５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６０５．４）。
【００９０】
段階（ｆ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−カルボキシメチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（化合物１）
Ｍａｚｉｔｓｃｈｅｋ ｅｔ ａｌ（Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．ＩＮＴ．Ｅｄ．，４１，４０５９−４０６１（２００２））の方法を用いた。Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（２．６０ｇ）をＤＭＳＯ（１５ｍＬ）に溶解して、１−ヒドロキシ−１，２−ベンズヨードオキソール−３（Ｈ）−オン−オキシド（ＩＢＸ、３．５０ｇ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌してから、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．５０ｇ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌した。水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ、４０ｍＬ）を加えて、混合物を室温で４時間撹拌した。溶液を氷浴に浸漬して２Ｍ塩酸でｐＨ２に酸性化した。水層をエーテルで抽出して（４×１００ｍＬ）、一緒にしたエーテル抽出液を水で洗浄した（３×５０ｍＬ）。エーテル層をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると生成物及び２−ヨードソ安息香酸を含む黄色固体残渣が得られた。クロロホルム−ヘキサン（１：３）（８０ｍＬ）での結晶化によってヨードソ安息香酸（２．１ｇ）の大部分を除去した。クロロホルム−ヘキサン母液を蒸発させると黄色油状物（３ｇ）が得られ、これをシリカゲルカラム（３００ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２−Ｅｔ２Ｏ、１：１）にかけた。残留ヨードソ安息香酸はエーテルで溶出した。生成物はエーテル−メタノール（９：１）で溶出した。生成物を含む画分を一緒にし、溶媒を除去すると１．５ｇの淡黄色油状物が得られた。これを再びシリカゲルカラムでクロマトグラフィー処理した（５０ｇ、Ｅｔ２Ｏ）。生成物はエーテル−酢酸（９５：５）で溶出した。生成物を含む画分を一緒にして溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると、油状物が得られ、これを高真空で乾燥した。収量は１．１０ｇ（４１．３％）であった。
【００９１】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．６１（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），５．１９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），３．２２（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．４７（ｂｒ ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．２６（ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），１．４１（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．３７（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００９２】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１７５．９０（ＣＯＯＨ），１５６．１０（ＮＨＣＯ），８０．４０，７９．１０（ＣＭｅ３），４９．５０（Ｎ−ＣＨ２），４６．８０（Ｎ−ＣＨ２），３９．００（Ｎ−ＣＨ２），３４．７０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），３４．２０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），２８．３０，２８．２０（ｔ−Ｂｕ）。
【００９３】
ＭＳ−ＥＩ：６１９［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６１９．４）。
【００９４】
実施例２：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）の合成
段階（ａ）：２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）テトラヒドロピラン
６−クロロヘキサノール（６．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５００ｍｇ）を乾燥エーテル（７５ｍｌ）に溶解して氷浴で０〜５℃に冷却した。乾燥エーテル（２５ｍｌ）中のジヒドロピラン（４．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分かけて定常攪拌下に滴下した。添加完了後、冷却浴を除いて撹拌を１６時間継続した。溶液を水で抽出し（５０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させると、淡黄色油状物が残った。油状物はそれ以上精製せずに次の反応に使用できる十分な純度のものであることが１３ＣＮＭＲ分光法で判明した。収量１０．１ｇ（９１％）。
【００９５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１９．７（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２），２５．６（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），３０．８（ＣＨ２），３２．６（ＣＨ２），４５．０（ＣＨ２Ｃｌ），６２．３（ＯＣＨ２），６７．４（ＯＣＨ２），９８．８（ＯＣＨＯ）。
【００９６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．３０〜１．７１（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ２×７），３．２４〜３．３２（１Ｈ，３．４１〜３．４８（３Ｈ，ｍ，ＣＨ及びＣＨ２），３．６０〜３．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７２〜３．８２（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ），４．４４〜４．４９（１Ｈ，ｂｍ，ＯＣＨＯ）。
【００９７】
段階（ｂ）：２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル
少量のナトリウム（１．１３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を乾燥窒素ブランケット中定常攪拌下に乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解した。マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、溶液を６０℃で１時間加熱した。２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）−テトラヒドロピラン（９．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を一度に加えて温度を７５〜８０℃に上げて２４時間このレベルを保った。冷却後、無機固体を濾別して濾液から溶媒を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、水で抽出し（３０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、揮発分を除去すると淡黄色油状物が残った。油状物をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、溶出液として石油エーテル（４０〜６０℃）／エーテル（２００：４０）を用いた。所要生成物はｒｆ＝０．１５で無色油状物として溶出した。収量８．７ｇ（６０％）。
【００９８】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１４．０（ＣＨ３×２）、１９．６（ＣＨ２）、２５．５（ＣＨ２）、２７．２（ＣＨ２）、２８．６（ＣＨ２）、２９．０（ＣＨ２）、２９．６（（ＣＨ２）、３０．０（ＣＨ２）、３０．８（ＣＨ２）、５２．０（ＣＨ）、６１．２（ＯＣＨ２×２）、６２．２（ＯＣＨ２）、６７．４（ＯＣＨ２）、９８．８（ＯＣＨＯ）、１６９．４（Ｃ＝Ｏ×２）。
【００９９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１０〜１．２５（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ３×２，ＣＨ２×４）、１．３６〜１．５０（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３）、１．７０〜１．８１（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２）、３．１７〜３．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、３．５６〜３．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．７０〜３．８０（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ）、４．０４〜４．１６（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ２×２）、４．０３〜４．０８（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１００】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）ヘキシル−］−マロンアミド
２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル（５．１ｇ、１４．８ ｍｍｏｌ）を１，２−ジアミノエタン（１０ｇ、１６７ｍｍｏｌ）に溶解して、室温で１６時間撹拌した。揮発分を真空で除去すると（４０〜５０℃、０．０１ｍｍＨｇ）、淡緑色の粘稠な残渣が残り、これをカラムクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（５０：５０：５）で溶出した。標記化合物はｒｆ０．２で溶出し、淡緑色の粘稠な油状物として回収され、放置すると固化した。（収量３．９ｇ、７１％）。
【０１０１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１９．８（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２），２６．０（ＣＨ２），２７．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），３０．８（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），４１．０（ＮＣＨ２×２），４１．９（ＮＣＨ２×２），５４．６（ＣＨ），６２．５（ＯＣＨ２），６７．５（ＯＣＨ２），９８．９（ＯＣＨＯ），１７１．６（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１０２】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１５〜１．２８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．３９〜１．４４（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．６９〜１．７４（４Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×２），２．６４（４Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２×２），２．７３ ４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ２×２），３．０８〜３．２９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２×３），３．３５〜３．４１（１Ｈ，ｍ ＣＨ），３．５５〜３．６３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０〜３．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．４３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，ＯＣＨＯ），７．７８（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，ＯＣＮＨ×２）。
【０１０３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３４１７，３０８２，２９３６，２８６２，１６６３，１５５８，１４３９，１３５４，１３２３，１２６１，１２００，１１８９，１０７６，１０２６，９５６，９０７，８６７，８１０。
【０１０４】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）−マロンアミド
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド（３．９ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８．５ｇ、３ｍｍｏｌ）及びエタノール（５０ｍｌ）を７０〜７５℃で還流下で１６時間加熱した。冷却後、濃水酸化アンモニウム（．８８０）を、ｐＨ９が持続して得られるまで滴下した。沈殿した白色固体をセライトで除去し、濾過ケークをエタノール（３０ｍｌ）で洗浄した。エタノールを減圧で（１５ｍｍＨｇ、４０℃）除去すると、半固形状ワックスが残った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（１００：５０：１０）で溶出した。標記化合物のｒｆ＝０．２であった。生成物を回収して、残存する水を除去するためエタノールと共沸させた（１００ｍｌ×３）。淡緑色の粘稠な残渣が得られ、放置すると固化した。（収量２．１ｇ、６９％）。
【０１０５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ２５．４（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），３０．４（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），４０．６（ＮＣＨ２×２），４１．７（ＮＣＨ２×２），５４．１（ＣＨ），６１．６（ＣＨ２ＯＨ），１７１．７（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１０６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２８〜１．３８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．４６〜１．５５（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），１．７９〜１．８７（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ｈ２ＮＣＨ２×２），３．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ），３．２７（４Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６及び２Ｈｚ，ＨＮＣＨ２×２），３．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ２）。
【０１０７】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６４，２９３２，２８６２，２５２７，１６６３，１５５８，１４６２，１３２７，１２２３，１１９２，１０３４。
【０１０８】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ１３Ｈ２９Ｎ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）計算値２８９，実測値２８９。
【０１０９】
段階（ｅ）：（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥窒素ブランケット中、無溶媒ボラン−ジメチルスルフィド付加物（１５ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）をジオキサン（５０ｍｌ）中Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシエチル）マロンアミド（２．１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の攪拌混合物にシリンジで滴下した。添加完了後、混合物を１１０℃で穏やかに還流しながら５日間加熱した。その際若干の白色固体が残った。冷却後揮発分を減圧除去すると白色固体が残り、これにメタノール（５０ｍｌ）を滴下すると無色溶液が得られた。溶液を還流下で３時間加熱し、冷却し、濃ＨＣｌ（５ｍｌ）を加えて７０〜７５℃で還流下で４８時間加熱を続けた。溶媒を除去すると粘稠な緑色残渣が残り、これをメタノールで共沸すると（１００ｍｌ×３）、淡緑色固体が残った。この固体を乾燥メタノールに再溶解して無水炭酸カルシウム（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。無機固体をセライトで濾別し、濾液から溶媒を蒸発させると粘稠な残渣が残った。残渣を水（５０ｍｌ）と混合し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（５０ｍｌ×３）。有機画分を一緒にし、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を蒸発させると淡黄色残渣が残った。
【０１１０】
注：この時点で１３ＣＮＭＲで反応をモニターすると便利である。
【０１１１】
残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２ＣＬ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を溶出液として用いた。標記化合物はｒｆ＝０．４１で溶出し、無色の粘稠油状物として分離された（収量２．５ｇ、５２％）。
【０１１２】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２５．６（ＣＨ２），２６．４（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），２９．８（ＣＨ２×２），３２．６（ＣＨ２），３６．５（非常にブロード，ＣＨ），３９．２（ＮＣＨ２×２，隣接ＣＨ），４６．９（ブロード，ｓ，ＨＮＣＨ２×２），５０．０（ブロード，ｓ，ＮＣＨ２×２），６２．４（ＨＯＣＨ２），７９．０（ＯＣ×２），７９．９（ＯＣ×２），１５６．４（ブロード，ｓ，Ｃ＝Ｏ×４）
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０５〜１．１８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２７（１８ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ブチル），１．３１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ブチル），１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．６３（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），２．９８（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１１（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ２Ｏ），５．２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１１３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７６，２９３１，２８５９，１６７４，１５１６，１４５５，１４１８，１３９３，１２６０，１２５０，１１６５，１０６９，９６５，８７１，７７５。
【０１１４】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６５Ｎ４Ｏ９（Ｍ＋Ｈ）計算値６６１，実測値６６１。
【０１１５】
段階（ｆ）：トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチルエステル
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５２ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）を室温で撹拌して、溶媒をゆっくりと蒸発させた。反応を炭素ＮＭＲでモニターすると３日後に出発物質は少ししか残存していなかった。反応液容積をＣＨ２Ｃｌ２で３０ｍｌに一緒にし、水で抽出して（５０ｍｌ×３）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して溶媒を蒸発させると、褐色残渣が残った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：５）を溶出液として用いた。溶出した最初の化合物はｒｆ＝０．９５の未反応塩化トシルであった。標記化合物はｒｆ＝０．２で溶出し、淡黄色の粘稠な液体として分離された。収量（１．２０ｇ、３９％）。
【０１１６】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２１．７（ＣＨ３トシル），２５．３（ＣＨ２），２６．３（ＣＨ２），２８．５（ＣＨ３×１２），２８．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．９（ＣＨ２），３６．５（ＣＨ，非常にブロード），３９．４（ＮＣＨ２×２），４７．０（ブロード ＮＣＨ２×２），５０．５（ブロード，ＮＣＨ２×２），７０．６（ＴｓＯＣＨ２），７９．１（ＯＣ×２），８０．０（ＯＣ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２９．９（ＣＨ×２），１３３．２（Ｃ），１４４．７（Ｃ−Ｓ Ｔｓ），１５６．１（ブロード，Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１１７】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．８８（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３トシル），３．１０〜３．１２（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１９（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．９３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ２ＯＴｓ），５．０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．０８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ），７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ）。
【０１１８】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６０，２９７４，２９３２，２８６２，１６９３，１５１６，１４７９，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１７７，１０６９，９５９，８１６，７７５。
【０１１９】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７１Ｎ４Ｏ１１Ｓ（Ｍ＋Ｈ）計算値８１５，実測値８１５。
【０１２０】
段階（ｇ）：（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］メチル｝−オクチルエステル（１．１０５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、ナトリウムアジド（３５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、室温で約１〜２ｍｌ残るまでメタノールを減圧除去した。残渣を水（２５ｍｌ）で希釈してＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ×４）で抽出した。有機抽出液を一緒にして乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して揮発分を室温で蒸発させると（注：アジドは爆発の危険性があるので、この段階は安全シールドの後ろで行うべきである）、淡黄色の粘稠な残渣が残ったが、これが純粋な所望化合物であった（収量８２０ｍｇ、８８％）。
【０１２１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．３（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ３×１２），２８．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２９．８（ＣＨ２），３６．８（ブロード，ＣＨ），３９．３（ＮＣＨ２×２），４６．９（ブロード，ＮＣＨ２×２），５０．０（ブロード，ＮＣＨ２×２），５１．３（ＣＨ２Ｎ３），７９．０（ＯＣ×２），７９．８（ＯＣ×２），１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１２２】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４７（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ２隣接ＣＨ），１．８６（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．９５〜３．０５（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．０５〜３．２０（１０Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４及びＣＨ２Ｎ３），５．０９（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１２３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７４，２９３２，２８６０，２０９７（Ｓｔｒｏｎｇ ｂａｎｄ Ｎ３），１６９４，１５２０，１４７０，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１６７，１０６９，８７０，７７７。
【０１２４】
段階（ｈ）：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）
（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−活性炭（１００ｍｇ）及びメタノール（１０ｍｌ）を室温３０気圧の圧力下、水素ガスで１６時間処理した。セライトで濾過して固体を除去し、濾過ケークをメタノール（５０ｍｌ）で洗浄した。濾液から揮発分を除去すると粘稠油状物が残ったが、これが純粋な所望化合物であった（収量７００ｍｇ、８９％）。
【０１２５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．４（ＣＨ２），２６．６（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），３２．９（ＣＨ２×２），３６．８（ブロード，ＣＨ）． ３９．２（ＮＣＨ２×２），４１．８（Ｈ２ＮＣＨ２），４６．９（ブロード，ＮＣＨ２×２），４９．８（ブロード，ＮＣＨ２×２），７８．９（ＯＣ×２），７９．７（ＯＣ×２），１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１２６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．２７（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨ２），２．９７（４Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×２），３．００〜３．１６（８Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×４），５．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１２７】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６０，１６９３，１５２０，１４５９，１４１８，１３９２，１３６７，１２５０，１１７０，１０６８，９６４，９２２，８７１，７７５，７３３。
【０１２８】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６６Ｎ５Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）計算値６６０，実測値６６０。
【０１２９】
実施例３：化合物３の合成
段階（ａ）：化合物１とベンジルアミンとのカップリング
２０℃の丸底フラスコ（５０ｍｌ）内で、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中の化合物１（６１．８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をベンジルアミン（１０．７ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスフィン酸クロリド（２５．９ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（２９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）で１８時間処理した。次に反応液をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）で希釈し、１Ｎ塩酸（５ｍｌ）及び飽和炭酸カリウム水溶液（５ｍｌ）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２層を分離乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ガム状になるまで減圧濃縮した（〜５０ｍｇ）。次にこの粗生成物を石油中の酢酸エチルの勾配（５０％、７０％及び９０％各１００ｍｌ）でシリカクロマトグラフィーにかけた。少量の移動度の速い不純物と、そのすぐ後で主画分を回収した。
【０１３０】
ＣＤＣｌ３中で１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを測定した。その結果、主画分が所要純粋化合物であることが判明した。
【０１３１】
段階（ｂ）：Ｂｏｃ保護基の脱保護
段階（ａ）で得られたＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中の生成物（２７．８ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）で処理して、反応液を室温で３時間放置した。次いで反応混合物をガム状になるまで減圧濃縮して過剰の酸を除去し、秤量した（５３ｍｇ）。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）からＢｏｃ基が完全に除去されたことが判明した。化合物２の秤量試料を水に溶解してＴＦＡ塩の１０ミリモル濃度溶液を得て、これを放射標識実験に用いた。
【０１３２】
実施例４：化合物６の合成
段階（ａ）：（８−ベンゾイルアミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の安息香酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル（２０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の化合物２（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に一度に加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で希釈し、水（１５ｍｌ×２）で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、溶媒をロータリーエバポラーターで除去した。残った残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９４：６（ｒｆ＝０．２３）を溶出液として用いるシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、無色の粘稠油状物を得た。（収量２５ｍｇ、４１％）。
【０１３３】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．４（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２８．５（ＣＨ３×１２），２９．６（ＣＨ２×２），２９．７（ＣＨ２），２９．９（ＣＨ２），３６．６（ブロード，ＣＨ），３９．４（ＮＣＨ２×２），４０．０（Ｏ＝ＣＮＣＨ２×２），４７．０（ブロード，ＮＣＨ２×２），４９．８（ＮＣＨ２×２），７９．７（ＯＣ×２），８０．０（ＯＣ×２），１２７．０（ＡｒＣＨ×２），１２８．５（ＡｒＣＨ×２），１３１．３ （ＡｒＣＨ），１３４．９（ＡｒＣ），１５６．１（Ｃ＝Ｏ×４），１６７．６（ＡｒＣ＝Ｏ）。
【０１３４】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．２８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３８（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４２（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．９５（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），３．１（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２）３．２２（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４２（２Ｈ，ｂｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ−ベンゾイル），５．０８（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２），６．１８（１Ｈ，ｂｓ，ＨＮ−ベンゾイル），７．３８〜７．４５（３Ｈ，ｍ，ＡｒＣＨ×３），７．７４（２Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＡｒＣＨ×２），
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７６，２９３２，２８５９，１６９３（ブロード），１６５２，１５２０，１４１９，１３９１，１３６７，１２５１，１１６６，７３２。
【０１３５】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７０Ｎ５０９（Ｍ＋Ｈ）の計算値７６４，実測値７６４。
【０１３６】
段階（ｂ）：Ｂｏｃ保護基の脱保護
段階（ａ）で得たＢｏｃテトラアミンベンズアミド（４２ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中でトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）で処理して、反応液を室温で３時間放置した。次に反応液を減圧濃縮して過剰の酸を除去し、ガム状物を得た。重量予測値（４５ｍｇ）、重量実測値（４５．７ｍｇ）。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）から、Ｂｏｃ基が完全に除去されたこと並びに上記ガムが所要化合物を含むことが判明した。化合物の秤量試料を水に溶解してＴＦＡ塩の１０ミリモル濃度溶液（５．６ｍｌ中５６μｍｏｌ）を得て、これを放射標識に用いた。
【０１３７】
実施例５：化合物４の合成
反応はすべて窒素吹込式装置中で手作業で実施した。
【０１３８】
段階（ａ）：トリチル誘導体化固体担体へのロサルタンの結合
【０１３９】
【化１０】
【０１４０】
ロサルタン（ＭＳＤ，０．２３６ｇ、０．５５８ ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（Ｆｌｕｋａ社製、０．２３３ｍｌ、１．６７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍｌ）中塩化トリチル樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、置換量１．２４ｍｍｏｌ／ｇ、０．３００ｇ）の懸濁液に加えた。４日後樹脂を水抜きして洗浄した。樹脂のアリコートを開裂させた（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、９２．５：５．０：２．５、１５分）。ＨＰＬＣ分析で（カラム Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、４．６×５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で１０〜４０％Ｂ；流速２．０ｍｌ／分、２１４及び２５４ｎｍでＵＶ検出）、ロサルタンに相当するｔＲ６．７分のピークが得られた。樹脂をジクロロメタン／メタノール／ジイソプロピルエチルアミン溶液（１７：２：１、２０ｍｌ、１時間）で処理し、ジクロロメタンで洗浄して乾燥した。
【０１４１】
段階（ｂ）：ヒドロキシル基のアジドでの置換
【０１４２】
【化１１】
【０１４３】
ジフェニルホスホリルアジド（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．４８１ｍｌ、２．２３ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（０．６１１ｍｌ、４．０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中（１０ｍｌ）中で、段階（ａ）で得た樹脂に結合したロサルタン（０．３７２ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。この反応液を１晩放置した。樹脂のアリコートを段階（ａ）に記載の通り開裂させた。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で２０〜８０％Ｂ；流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）で、ｔＲ７．３分に上記の構造に相当するｍ／ｚ４４８．１（ＭＨ＋）を有するピークが得られた。
【０１４４】
段階（ｃ）：アジド基のアミンへの還元
【０１４５】
【化１２】
【０１４６】
段階（ｂ）からの樹脂のＴＨＦ中の懸濁液（４ｍｌ）に、塩化スズ（ＩＩ）（Ａｃｒｏｓ、０．１４１ｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）、チオフェノール（Ｆｌｕｋａ社製、０．３０４ｍｌ、２．９７６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（Ｆｌｕｋａ社製、０．３１１ｍｌ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。１．５時間後に樹脂のアリコートをａ）に記載の通り開裂させた。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で２０〜８０％Ｂ；流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）で、アミンで予想されるｍ／ｚ４２２．２（ＭＨ＋）を有するピークが１．９分に得られた。
【０１４７】
段階（ｄ）：ロサルタンロイシン−テトラアミンキレーター（化合物４）
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、０．０３０ｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で段階（ｃ）からの樹脂結合アミノロサルタンの一部（０．０４２ｍｍｏｌ）に、標準的なカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）及び標準的なＦｍｏｃ切断プロトコル（ＤＭＦ中２０％ピペリジン）を用いてカップリングした。カップリングの完結は標準的Ｋａｉｚｅｒ試験で確認した。次いでＤＭＦ中で同じカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）を用いて樹脂に化合物１（０．０２６ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）をカップリングした。４時間後に生成物を樹脂から切断してＢｏｃ基を同じ方法（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、４７．５：５０：２．５溶液で１時間）で除去した。溶液を濾過、濃縮して分取用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、５μｍ、２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配６０分間で２０〜４０％Ｂ；流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して、凍結乾燥後５ｍｇの生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で１０〜８０％Ｂ；流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）ｔＲ５．１分、ｍ／ｚ７３５．４（ＭＨ＋）で構造を確認した。
【０１４８】
実施例６：化合物５の合成
標記化合物は実施例４に記載の通り固体担体上で合成した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、０．０３３ｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−アミノＰＥＧジグリコール酸（Ｐｏｌｙｐｕｒｅ、０．０４９ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を、標準的カップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）及び標準的Ｆｍｏｃ切断プロトコル（ＤＭＦ中２０％ピペリジン）を用いて、ＤＭＦ中で、実施例４（ｃ）で得た樹脂結合アミノ−ロサルタン（０．０４６ｍｍｏｌ）に順次カップリングした。カップリングの完結は標準的Ｋａｉｚｅｒ試験で確認した。次に樹脂に化合物１（０．０２９ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で同じカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）を用いてカップリングした。反応液を１晩放置して、次いで生成物を樹脂から切断してＢｏｃ基を同じ方法（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、４７．５：５０：２．５溶液で１時間）で除去した。溶液を濾過、濃縮して分取用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、５μｍ、２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ；勾配６０分間で１０〜４０％Ｂ；流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して、凍結乾燥後３．５ｍｇの生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ；勾配１０分間で１０〜４０％Ｂ；流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）ｔＲ４．７分；ｍ／ｚ１０２５．４（ＭＨ＋）で構造を確認した。
【０１４９】
実施例７：化合物８の合成
段階（ａ）：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
１ｇのＮ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（Ｆｌｕｋａ社製０９６６０）を、０．５ｍＬのトリイソプロピルシランを含むジクロロメタン中５０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２０ｍＬで６０分間処理した。反応混合物を減圧蒸発させて残渣を水中５０％のテトラヒドロフラン２０ｍＬに再溶解した。２．６ｇのｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル無水物及び１．２ｍＬのＮ−メチルモルホリンを加えて混合物を４日間撹拌した。次にテトラヒドロフランを減圧蒸発させて残渣をジクロロメタンに再溶解した。有機層を水で洗浄してＭｇＳＯ４で乾燥した。ジクロロメタンを減圧蒸発させて残渣を５ｍＬのジメチルホルムアミドに再溶解した。このジメチルホルムアミド溶液を水中６０％のアセトニトリル４００ｍＬで希釈して、精製のため分取用ＨＰＬＣカラム（４０分間で３０〜８０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０×５０ｍｍカラムに流速５０ｍＬ／分）に送り、４５０ｍｇの純粋生成物を得た。生成物は分析用ＨＰＬＣで分析した（勾配、１０分間で２０〜７０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；流速０．３ｍＬ／分；カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ；検出、ＵＶ２１４ｎｍ；生成物保持時間８．６６分）。エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物をさらに特性決定した（ＭＨ＋計算値４４１．２；ＭＨ＋実測値４４０．８）。
【０１５０】
段階（ｂ）：Ｎ−（（ＣＨ２）２−ＮＨＣＯＣＨ２−テトラアミン）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＯＨ（化合物８）の合成
アンジオテンシンＩＩのペプチド類似体を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成機を用いて、０．１ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｗａｎｇ樹脂を出発材料として合成した。アルギニンまでのカップリング段階では、過剰の１ｍｍｏｌプレ活性化アミノ酸（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を使用）を用いた。１２３ｍｇのＮ−Ｂｏｃ−Ｎ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯＨ、１１４ｍｇの［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）及び６０μＬのＮ−メチルモルホリンをジメチルホルムアミドに溶解して５分間撹拌し、次に窒素吹込み装置中の樹脂に加えた。試薬を２時間後に除去して樹脂をジメチルホルムアミド及びジクロロメタンで洗浄した。樹脂をジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンで処理し（３×１０ｍｌ）、ジメチルホルムアミドで洗浄した。２３ｍｇの化合物１、１４ｍｇのＨＡＴＵ及び７．５μＬのＮ−メチルモルホリンをジメチルホルムアミドに１０分かけて溶解し、樹脂に加えた。試薬を４時間後に除去して樹脂をジメチルホルムアミド及びジクロロメタンで洗浄した。樹脂からの側鎖保護基の除去及び樹脂からのペプチドの切断は、２．５％のトリイソプロピルシラン及び２．５％の水を含むトリフルオロ酢酸１０ｍＬ中で同時に９０分間かけて実施した。トリフルオロ酢酸を真空で除去し、残渣にジエチルエーテルを加えて沈殿した生成物をジエチルエーテルで洗浄して風乾した。
【０１５１】
生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（４０分間で０〜３０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍカラムで流速１０ｍＬ／分）で精製して、３２ｍｇの純粋キレートペプチドコンジュゲートを得た。生成物を分析用ＨＰＬＣで分析した（勾配、２０分間で５〜５０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；流速１ｍＬ／分；カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ；検出、ＵＶ２１４ｎｍ；生成物保持時間５．２２分）。エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物をさらに特性決定した（ＭＨ＋計算値１１９７．８；ＭＨ＋実測値１１９７．８）。
【０１５２】
実施例８：化合物３〜７の９９ｍＴｃ放射標識
以下の成分を含む凍結乾燥キット（「Ｃｈｅｌａｋｉｔ Ａ ｐｌｕｓ」）を調製した。
【０１５３】
【表１】
【０１５４】
標識すべき化合物２５〜５０μｇ（溶媒２５〜５０μＬに溶解）をＣＨＥＬＡＫＩＴ−Ａ ｐｌｕｓに加え、次いでジェネレータ溶出液（食塩水中９９ｍＴｃＯ４−、１．０ｍＬ）を加えた。溶液を混合して室温で２０〜３０分間放置した。
【０１５５】
化合物３〜６は室温ｐＨ９でテクネチウム標識して、対応する陽イオン９９ｍＴｃ錯体を高収率で与える（ＲＣＰ＞９０％）。テトラアミン錯体をＨＰＬＣ（移動相：０．１％ＴＦＡ含有水、０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル；ＸＴＥＲＲＡ ＲＰ１８ ３．５μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム）で精製したところ、５０ｍＭリン酸緩衝液中３７℃で２時間安定である（２時間後ＨＰＬＣによるＲＣＰ＞９５％）。
【０１５６】
実施例９：９９ｍＴｃ錯体の親油性（ＬｏｇＰ）の測定
実施例８の９９ｍＴｃ錯体のオクタノール−水分配係数（ＬｏｇＰ）を以下の通り測定した。
【０１５７】
実施例８で得たＨＰＬＣ精製９９ｍＴｃ錯体１０μＬを、遠心チューブ内で１−オクタノール（２ｍｌ）及び５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．４、２．０ｍｌ）と混合した。チューブを室温で１分間ボルテックスし、高速で６０分遠心した。相間の汚染を避けるため注意しながら、両相の試料０．１ｍｌをピペットで他のチューブに移し、Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚｚａｒｄガンマカウンターで計数した。測定は３回繰り返した。
【０１５８】
分配計数Ｐは次のように計算した。
【０１５９】
Ｐ＝（オクタノール中のｃｐｍ−バックグラウンドｃｐｍ）／（水中のｃｐｍ−バックグラウンドｃｐｍ）
最終分配係数は一般にｌｏｇＰとして表される。結果を表１に示す。
【０１６０】
【表２】
【０１６１】
実施例１０：９９ｍＴｃ錯体の生体内分布
化合物４、５及び７の９９ｍＴｃ錯体を実施例８に記載の通り調製した。実験は、正常オスＷｉｓｔａｒラット（１８０〜２２０ｇ）で、試験標品の注射後（ｐ．ｉ．）所定の２時点（２及び１２０分）で実施した。動物をハロタン（酸素中６％）で麻酔し、０．１ｍｌ（５００ＭＢｑ／ｍｌ）の試験標品を注射し、犠牲死させて解剖し、試料の放射能をアッセイした。結果を表１に示す。
【０１６２】
【表３】
【０１６３】
実施例１１：化合物１の別の調製法
実施例１の段階（ｅ）で得たＮ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパンを四塩化炭素（１４ｍｌ）及びアセトニトリル（１４ｍｌ）に溶解した。水（２１ｍｌ）を加えると二相混合物になり、次いで過ヨウ素酸ナトリウム（４．５ｇ、２１ｍｍｏｌ）及び塩化ルテニウム水和物（３５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた暗褐色溶液を室温で１時間撹拌してから、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ×３）で抽出した。有機抽出液をすべて一緒にして乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して、揮発分を減圧蒸発させると、化合物１のナトリウム塩が暗色の粘稠残渣として残り、それ以上精製せずに使用した（４．１５ｇ、９６％）。
【０１６４】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＣ ２８．２（×１２）（ＣＨ３），３４．１（ＣＨ２），３４．４（ＣＨ），３８．６（×２）（ＮＣＨ２），４６．８（×２）（ＮＣＨ２），４９．３（×２）（ＮＣＨ２），７９．０（×２）（ＯＣ），８０．２（×２）（ＯＣ），１５５．９（×４）（Ｃ＝Ｏ），１７５．４（ＣＯＯＨ）。
【０１６５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ １．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），２．１９（１Ｈ，ｂｒ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｒ，ＣＨ２），３．０５〜３．２３（１２Ｈ，ｂｒ，ＮＣＨ２×６），５．１０〜５．２４（２Ｈ，ｂｒ，ＮＨ×２）。
【０１６６】
質量分析（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：（Ｍ＋Ｎａ）Ｃ２９Ｈ５４Ｏ１０Ｎ４Ｎａ計算値６４１．３７３８，実測値６４１．３７８７。
【０１６７】
実施例１２：化合物９の調製
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；２．１６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の化合物１（４．１５ｇ、６．９０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．８１ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に１度に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌してから、沈殿したＤＣＵ（１，３−ジシクロヘキシル尿素）を濾別した。濾液から揮発分を蒸発させるとワックス状残渣が残り、これに乾燥エーテル（５０ｍｌ）を加えるとさらにＤＣＵが沈殿し、これを濾別した。エーテル溶液を水（２５ｍｌ×２）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させるとワックス状固体が残った。この固体をＣＨ２Ｃｌ２／エーテル混液（１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで未反応ＤＣＣが除去されるまで精製した。溶出液をエーテルに代えて所要生成物（ｒｆ＝０．４、ＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ１：１）をｍｐ６６〜６８℃の無色固体として分離した（２．７ｇ、５７％）。
【０１６８】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＣ ２５．６（×２）（ＣＨ２），２８．４（×１２）（ＣＨ３），３１．８（ＣＨ２），３５．２（ＣＨ），３９．３（×２）（ＮＣＨ２），４７．１（×２）（ＮＣＨ２），４９．１（×２）（ＮＣＨ２），７９．９（×２）（ＯＣ），８０．５（×２）（ＯＣ），１５６．１（×４）（Ｃ＝０），１６７．７（Ｃ＝Ｏ），１６９．１（×２）（Ｃ＝Ｏ）。
【０１６９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ １．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），２．５２（３Ｈ，ｂｒｓ，ＣＨ及びＣＨ２），２．７７（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２×２），３．１０〜３．３５（１２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＣＨ２×６），５．０８（２Ｈ，ｂｒｓＮＨ×２）。
【０１７０】
質量分析（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：（Ｍ＋Ｎａ）Ｃ３３Ｈ５４Ｎ５Ｏ１２Ｎａ計算値７３８．３８９６，実測値７３８．３８９３。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【図２】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【図３】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性金属９９ｍＴｃとの金属錯体の形成に適したテトラアミンキレーターと生体ターゲティング分子との改良コンジュゲートに関する。この放射性金属錯体は９９ｍＴｃ放射性医薬品として有用である。キット及び前駆体も提供される。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第５４８９４２５号（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）には、金属の錯体化に有用な一群の鎖状及び大環状の官能化テトラアミンキレーター、特に放射性及び非放射性ロジウム錯体、殊に１０５Ｒｈ又は１０１ｍＲｈ放射性金属錯体が開示されている。開示された具体的なテトラアミンには、以下のものが含まれる。
【０００３】
【化１】
【０００４】
上記二官能性キレーターは、治療又は診断用のモノクローナル抗体又はその断片との結合に有用であると記載されている。米国特許第５４８９４２５号には、まず１０５Ｒｈ金属錯体を形成してから抗体と反応させた後、精製することによって、抗体放射性金属錯体キレーターコンジュゲートを調製することが開示されている（実施例２１、２２ａ及び２３）。米国特許第５４８９４２５号には、錯化していない抗体キレーターコンジュゲート、つまり放射性金属の配位していないものは記載されていない。米国特許第５４８９４２５号は、かかる抗体結合反応において側鎖アミンをキレーターの４つのアミンからどのように差別化するか何ら教示されていない。米国特許第５４８９４２５号は、二官能性キレーターが「テクネチウム及びレニウムとの錯体化にも有用であろう」と記載されているが、これをどのように達成するかについては開示されていないし、テクネチウム錯体の具体例も開示されていない。
【０００５】
米国特許第５６５０１３４号には、一群のキレーターのソマトスタチンペプチド−キレーターコンジュゲートが開示されている。実施例１には、オクトレオチドペプチドの６−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−１，４，８，１１−テトラアザウンデカンとの結合が記載されている。
【０００６】
欧州特許出願公開第１１８１９３６号には、以下の二官能性キレーターＢＢＮ−１及びＢＢＮ−２を用いて調製されたテトラアミンキレーターのボンベシン（テトラデカペプチド）コンジュゲート並びにそれらの９９ｍＴｃ錯体が開示されている。
【０００７】
【化２】
【０００８】
９９ｍＴｃ錯体はマウス体内から腎臓・尿路系を介しての迅速なクリアランスを呈すると記載されている。しかし、欧州特許出願公開第１１８１９３６号には、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２をボンベシンのＮ末端に結合する段階を除いて、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の合成に関して何ら開示されていないし、引用されてもいない。腫瘍イメージング用放射性医薬品候補を得るためのＢＢＮ−２とボンベシンとの結合及び９９ｍＴｃ標識についても、Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）に記載されている。この９９ｍＴｃ錯体は従来技術のボンベシンキレートコンジュゲートよりも親水性が向上し、そのため腎臓・尿路系による排泄に有利に働くと期待されると記載されている。
【０００９】
ヒトの患者用の腫瘍イメージング用放射性医薬品候補を得るためのＢＢＮ−１とオクトレオチドとの結合及び９９ｍＴｃ標識についても、Ｍａｒｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）に記載されている。以上のＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の刊行物のいずれにも、ＢＢＮ−１又はＢＢＮ−２の合成については何な記載されていない。
【特許文献１】米国特許第５４８９４２５号明細書
【特許文献２】米国特許第５６５０１３４号明細書
【特許文献３】欧州特許出願公開第１１８１９３６号明細書
【非特許文献１】Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）
【非特許文献２】Ｍａｒｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、リンカー基を介して生体ターゲティング部分と連結したテトラアミンキレーターコンジュゲート並びに放射性医薬品としてのそのテクネチウム錯体を提供する。リンカー基はキレーターが橋頭位で単官能化されるようなもので、柔軟性を与えるとともにアリール基を含まないものをもたらし、親油性及び立体的嵩高さを最小限にする。キレーターの適当な保護形も提供し、テトラアミンキレーターのアミン窒素による干渉反応を起こさずに広範なターゲティング分子との結合が可能となる。官能化キレーターの合成についても、二官能性キレーター前駆体と併せて説明する。
【００１１】
本発明のテクネチウム金属錯体を含む放射性医薬組成物についても、かかる放射性医薬品の調製用の非放射性キットと併せて説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
第一の実施形態では、本発明は次の式（Ｉ）の陽イオン９９ｍＴＣテクネチウム錯体を提供する。
【００１３】
【化３】
【００１４】
式中、
Ｘは−ＮＲ−、−ＣＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−又はＱ基であり、
各Ｙは独立にＤ−若しくはＬ−アミノ酸、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−又はＸ基であり、
Ｚは合成生体ターゲティング部分であり、
ｎは１〜８の整数であり、
ｍは０〜３０の整数であり、
ＲはＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル又はＣ１〜４フルオロアルキルであり、
Ｑは次式の基であり、
【００１５】
【化４】
【００１６】
Ａは対イオンであるが、
ヘテロ原子同士が直接結合した結合を原子鎖Ｘ１−（Ｙ）ｍが含まないことを条件とする。
【００１７】
テクネチウム放射性同位体は、９９ｍＴｃのようなγ線放射体でも、９４ｍＴｃのようなＰＥＴイメージングに適した陽電子放射体でもよい。好ましくはテクネチウム放射性同位体は９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃであり、最も好ましくは９９ｍＴｃである。
【００１８】
Ｘは好ましくは−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−又はＱ基である。Ｘは最も好ましくは−ＣＯＮＲ−又は−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−であり、−ＣＯＮＨ−及び−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−が特に好ましい。
【００１９】
式Ｉのリンカー基−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（Ｙ）ｍ−は、ヘテロ原子同士が直接結合した結合をＸ１−（Ｙ）ｍ原子鎖が含まないように選択され、「ヘテロ原子」という用語は窒素、酸素又はイオウのような非炭素原子を意味する。これは上記原子鎖がＯ−Ｏ、Ｎ−Ｎ又はＯ−Ｎのような結合を含まないことを意味する。
【００２０】
式Ｉのリンカー基−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（Ｙ）ｍ−の役割は、生体内での生体ターゲティング部分（Ｚ）の活性結合部位からテクネチウム錯体を離隔することであると想定される。これは生体内での活性部位への結合を比較的嵩高いテクネチウム錯体が立体的に阻害しないようにするのに役立つ。アルキレン基−（ＣＨ２）ｎ−は、結合した生体ターゲティング部分（Ｚ）との有意な水素結合相互作用がなく、そのためリンカーがＺに巻き付かないという利点を有する。好ましいアルキレン基はｎ＝１〜６、最も好ましくは２〜４であり、２が特に好ましい。
【００２１】
本発明のリンカー基はアリール環を含まない。これは、コンジュゲートの生体ターゲティング部分（Ｚ）に結合したリンカー基並びにテクネチウム錯体の親油性を最小限にするのに役立つ。リンカー基（及びテクネチウム錯体）の立体的嵩高さ及び分子量も最小限となるが、連鎖の柔軟性は維持される。
【００２２】
リンカー基の性状は、造影剤の体内分布の改変にも利用できる。例えば、−（Ｙ）ｍ−にエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑えるのに役立つであろう。−（Ｙ）ｍ−がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位又は１〜１０アミノ酸残基のペプチド鎖からなる場合、リンカー基は生体内での薬物動態及び造影剤の血液クリアランス速度を改善するように機能し得る。かかる「バイオモディファイアー」リンカー基は、筋肉や肝臓のようなバックグラウンド組織及び／又は血液からのテクネチウム造影剤のクリアランスを促進して、バックグラウンド干渉の低下による画質の向上した診断用画像を与え得る。バイオモディファイアーリンカー基は、特定の排泄経路、例えば肝臓経路よりも腎臓経路を優勢にするのにも使用し得る。或いは、バイオモディファイアーリンカー基は血中滞留時間を延ばして、生体内でのターゲット部位への薬剤の蓄積量を増すことができる。
【００２３】
−（Ｙ）ｍ−がアミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される。ペプチド鎖のアミノ酸の数は好ましくは１〜１０、最も好ましくは１〜３である。
【００２４】
−（Ｙ）ｍ−がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは式（−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）ｗの基を含むもので、ｗは３〜２５の整数である。整数ｗは好ましくは６〜２２である。特に好ましいＰＥＧ含有−（Ｙ）ｍ−基は、単分散ＰＥＧ様構造の式ＩＶの１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の重合で得られる単位である。
【００２５】
【化５】
【００２６】
式中、ｐは１〜１０の整数である。
【００２７】
「フルオロアルキル」という用語は、１以上のフッ素置換基を有するアルキル基を意味し、この用語はモノフルオロアルキル（例えば−ＣＨ２Ｆ）からペルフルオロアルキル（例えばＣＦ３）までの基を包含する。
【００２８】
−（Ｙ）ｍ−基は好ましくはジグリコール酸部分、マレイミド部分、グルタミン酸、コハク酸、ポリエチレングリコール系単位又は式ＩＶのＰＥＧ様単位を含む。
【００２９】
「合成」という用語は、その通常の意味、つまり天然資源（例えば哺乳動物の身体）から分離されたものではなく、人造のものを意味する。かかる化合物は、その製造並びに不純物特性を十分に制御できるという利点がある。従って、モノクローナル抗体及びその断片は、本願特許請求の範囲に属さない。
【００３０】
「生体ターゲティング部分」という用語は、３〜１００量体ペプチド若しくはペプチド類似体（これらは鎖状ペプチドでも環状ペプチドでも若しくはそれらの組合せでもよい。）、酵素の基質若しくはアンタゴニスト若しくは阻害剤、合成受容体結合性化合物、オリゴヌクレオチド、又はオリゴＤＮＡ断片若しくはオリゴＲＮＡ断片を意味する。
【００３１】
「環状ペプチド」という用語は、２つの末端アミノ酸が共有結合によって連結した５〜１５個のアミノ酸配列を意味し、上記共有結合はペプチド結合でも、ジスルフィド結合でも、或いはチオエーテル、ホスホジエステル、ジシロキサン又はウレタン結合のような合成非ペプチド結合でもよい。「アミノ酸」という用語は、Ｌ−若しくはＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体又はアミノ酸模倣体を意味し、光学的に純粋なもの、つまり単一の鏡像異性体でキラルなものでもよいし、鏡像異性体混合物であってもよい。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、天然アミノ酸の合成類似体であってアイソスターであるもの、つまり天然化合物の立体及び電子構造を模倣して設計されたものを意味する。かかるアイソスターは当業者に周知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロインベルソ型ペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールなどが挙げられる（Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７，（１９８５）参照）。 本発明での使用に適したペプチドとしては、以下のものが挙げられる。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
・ＳＴ受容体に結合するペプチド。ここで、ＳＴとは大腸菌その他の微生物の産生する熱安定性毒素をいう。
・ラミニン断片、例えばＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
・白血球集積のターゲティング部位用のＮ−ホルミルペプチド。
・血小板因子４（ＰＦ４）及びその断片。
・ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド。これは例えば血管新生をターゲティングし得る（Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６；Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． １９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７）。
・α２−アンチプラスミン若しくはフィブロネクチン若しくはβ−カゼインのペプチド断片、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジン。α２−アンチプラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン及びトロンボスポンジンのアミノ酸配列は以下の引用文献に記載されている：α２−アンチプラスミン前駆体（Ｍ．Ｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３，（１９８７））；β−カゼイン（Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｇｅｎｅ，１３９，１９３，（１９９４））；フィブロネクチン（Ａ．Ｇｕｔｍａｎ ｅｔ ａｌ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５，（１９９６））；トロンボスポンジン−１前駆体（Ｖ．Ｄｉｘｉｔ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９，（１９８６））；Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５，（１９８４）。
・アンジオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）、［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。
【００３２】
好ましくは、本発明のペプチドはアンチプラスミン又はアンジオテンシンＩＩペプチドを含む。アンチプラスミンペプチドは、Ｎ末端からみて以下のアミノ酸配列を含む。
（ｉ）α２−アンチプラスミン
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＯＨ、又はその変異体で１以上のアミノ酸が交換、付加又は除去されたもの、例えば、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨなど、或いは
（ｉｉ）カゼイン
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ。
【００３３】
本発明の合成ペプチドは、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているように、通常の固相合成法で得ることができる。
【００３４】
適当な酵素の基質、アンタゴニスト又は阻害剤としては、グルコース並びにフルオロデオキシグルコースのようなグルコース類似体、脂肪酸、又はエラスターゼ若しくはアンジオテンシンＩＩ若しくはメタロプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。好ましい非ペプチド系アンジオテンシンＩＩアンタゴニストはロサルタンである。
【００３５】
適当な受容体結合性化合物としては、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲストロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１若しくはＤ−２受容体、又はトロパンのようなドーパミン輸送体、並びにセロトニン受容体に対するリガンドが挙げられる。
【００３６】
生体ターゲティング部分（Ｚ）は好ましくは分子量５０００未満のもの、最も好ましくは４０００未満のもの、理想的には３０００未満のものである。これは、本発明のテトラアミンテクネチウム錯体の改善された生物学的特性が、式Ｉのコンジュゲートのテクネチウム錯体の全体的体内分布、特にクリアランスに影響をもつという利点を有する。ｎが３で、Ｘが（ＣＨ２）ｎ基に直接結合した窒素を含む場合、Ｚは合成物で分子量４０００未満となるように選択される。好ましい生体ターゲティング部分は３〜２０量体ペプチド又は酵素基質、酵素アンタゴニスト若しくは酵素阻害剤である。
【００３７】
対イオン（Ａ−）は、モル当量で存在し、式ＩのＴｃ（Ｖ）ジオキソテクネチウム錯体の陽電荷と釣り合う陰イオンを表す。陰イオン（Ａ）は、電荷が均衡する量で存在していれば単電荷のものでも多電荷のものでもよい。陰イオンは好適には無機酸又は有機酸から誘導される。適当な陰イオンの例としては、塩素又は臭素のようなハロゲンイオン、硫酸、硝酸、クエン酸、酢酸、リン酸及びホウ酸イオンが挙げられる。好ましい陰イオンは塩素イオンである。
【００３８】
式Ｉのテクネチウム錯体は、錯形成後に安定であり、テクネチウムを生体ターゲティング部分に優先的に結合させる強力なキランドを含んでいるという利点を有する。そのため、このテクネチウム錯体は生体内で生体高分子又は競合配位子とのトランスキレーション反応を起こしにくい。テクネチウム錯体は小さくてコンパクトであり、生体ターゲティング部分（Ｚ）と結合したときも立体的な影響が最小限である点で有用である。永続的な陽イオン交換とＴｃ（Ｖ）ジオキソコアの存在は、この錯体が親水性でもあることを意味しており、そのため錯体が細胞内の他の区画に分布する可能性が低く、生体内でバックグラウンド器官及び組織、例えば血流からのクリアランスが速い。
【００３９】
式Ｉのテクネチウム錯体は、以下の第二の実施形態で説明するように、適当なテクネチウム源と式ＩＩのキレーターコンジュゲートとの反応によって調製できる。
【００４０】
第二の実施形態では、本発明は式ＩＩのキレーターコンジュゲートを提供する。
【００４１】
【化６】
【００４２】
式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｎ及びｍは既に定義した通りであり、
Ｑ１〜Ｑ６は独立にＱ基であり、ＱはＨ又はアミン保護基である。
【００４３】
このキレーターコンジュゲートは、第一の実施形態に係る式Ｉのテクネチウム錯体の調製に有用である。
【００４４】
「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から開裂できる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者に周知であり、好適にはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から選択される。場合によっては、保護基の性状は、Ｑ１／Ｑ２又はＱ５／Ｑ６の両者、つまり関連するアミン窒素原子に全くＮＨ結合が存在しないようなものであってもよい。他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９１に記載されている。好ましいアミン保護基はＢｏｃ及びＦｍｏｃ、最も好ましくはＢｏｃである。Ｂｏｃを使用した場合、Ｑ１及びＱ６は共にＨであり、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５は各々ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
【００４５】
式ＩＩにおいて、アミン保護基は主にテクネチウムとの錯形成前の合成反応時にテトラアミンキレーターのアミン官能基を保護するために用いられる。しかし、生体ターゲティング基（Ｚ）が第一及び／又は第二アミンと反応し易い場合、これらの保護基は、テクネチウムと錯形成する前のキレーターアミンとＺとの不都合な反応の防止にも有用である。
【００４６】
式ＩＩの好ましいコンジュゲートは、保護されていないアミン窒素を少なくとも１つ以上有する（つまり、Ｑ３又はＱ４の一方がＨであるか、或いはＱ１／Ｑ２対又はＱ５／Ｑ６対がＨである）。１以上の遊離アミノ基は、式Ｉのテクネチウム錯体の調製の際の好ましい溶媒である水性媒体中でのコンジュゲートの溶解性が増すことを意味する。遊離アミノ基は、錯形成が保護基を予め除去しておくこと（これは金属の錯体化も阻害する）に依存しないので、テクネチウムとの錯形成が速やかになることを意味する。コンジュゲートした生体ターゲティング基（Ｚ）がアミンとの反応は起こしにくいときは、式ＩＩのコンジュゲートを完全な脱保護形（Ｑ１〜Ｑ６が各々Ｈ）で使用するのが好適であり、これが式ＩＩの特に好ましいキレーターコンジュゲートである。式Ｉのテクネチウム錯体を得るための錯体化反応には完全な脱保護形が好ましい。
【００４７】
本発明の式Ｉのテクネチウム錯体は、適切な酸化状態の放射性金属の溶液を適切なｐＨで式ＩＩのキレーターコンジュゲートと反応させることによって調製できる。溶液は、テクネチウムと弱く錯化する配位子（グルコン酸イオン又はクエン酸イオンなど）を適宜含んでいてもよく、テクネチウム錯体は配位子交換又はトランスキレーションによって調製される。かかる条件はテクネチウムイオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用であることが多いが、本発明のキレーターはテクネチウムと迅速に錯形成するので、本発明のキレーターでは重要性は低い。放射性同位体が９９ｍＴｃである場合、通常の出発原料は９９Ｍｏジェネレータから得られる過テクネチウム酸ナトリウムである。テクネチウムは、比較的反応性の低いＴｃ（ＶＩＩ）の酸化状態の９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩として存在する。そのため、酸化状態の低いＴｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ）のテクネチウム錯体の調製には、通常、錯体化を促すため亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような薬学的に許容される還元剤の添加が必要とされる。薬学的に許容される還元剤は好ましくは第一スズ塩であり、最も好ましくは塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズである。
【００４８】
式ＩＩのキレーターコンジュゲートは、以降の第五の実施形態で説明するように、生体ターゲティング分子（Ｚ）と式ＩＩＩの二官能性キレーターとの結合によって調製できる。
【００４９】
第三の実施形態では、本発明は、Ａが薬学的に許容される対イオンである第一の実施形態のテクネチウム錯体を生体適合性担体と共にヒトへの投与に適した形態で含む放射性医薬品を提供する。
【００５０】
「ヒトへの投与に適した形態」という用語は、無菌で、発熱物質も毒性又は副作用を生じる化合物も含まず、生体適合性のｐＨ（ｐＨ約４．０〜１０．５）で製剤化した組成物を意味する。かかる組成物は生体内で塞栓を惹起する危険性のある粒子を含まず、体液（例えば血液）と接しても沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物は生体適合性の賦形剤のみを含有し、好ましくは等張性である。
【００５１】
「生体適合性担体」とは、放射性医薬品を懸濁又は好ましくは溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。
【００５２】
「薬学的に許容される対イオン」という用語は、哺乳類の身体に投与したときに生体内で毒性又は悪影響を生じずに、医薬組成物の他の成分と化学的及び／又は毒性学的に適合性の陰イオン（負電荷イオン）を意味する。本発明のテクネチウム放射性医薬品に対する化学的適合性とは、この陰イオンがテクネチウムに対してテトラアミンキレーターと事実上競合しないことを意味する。かかる適当な陰イオンとしては、ハロゲンイオン（例えば塩素、ヨウ素及び臭素イオン）、Ｃ１〜２アルキルスルホン酸イオン（例えばメシレート又はエチルスルホン酸イオン）、アリールスルホン酸イオン（例えばフェニルスルホン酸又はトシレートイオン）、Ｃ１〜２アルキルホスホン酸イオン、ジ（Ｃ１〜２）アルキルリン酸イオン（例えばジメチルリン酸、ジエチルリン酸又はジグリセロールリン酸イオン）、アリールホスホン酸イオン、アリールリン酸イオン、アルキルアリールホスホン酸イオン、アルキルアリールリン酸イオン、Ｃ１〜２アルキルカルボン酸イオン（例えば酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸又はグリセリン酸イオン）、アリールカルボン酸イオン（例えば安息香酸イオン）などが挙げられる。好ましい薬学的に許容される対イオンは、塩素イオン、フッ素イオン、酢酸イオン、酒石酸イオン、水酸イオン及びリン酸イオンである。
【００５３】
かかる放射性医薬品は、好適には、無菌状態を維持しながら皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器には、１回又は複数回分の用量を入れることができる。好ましい多用量用容器は、複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ３のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に引き出すことができる。
プレフィルド型注射器は１回分の用量を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適した注射器である。プレフィルド型注射器は、適宜、オペレーターを放射能から保護するため、注射器シールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品注射器シールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。
【００５４】
本発明の好ましい放射性医薬品はテクネチウム放射性同位体９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃを含み、最も好ましくは９９ｍＴｃを含む。テクネチウム同位体が９９ｍＴｃである場合、画像診断用放射性医薬品に適した放射能含量は、生体内の撮像部位、取込み量及び標的／バックグラウンド比に応じて、１８０〜１５００ＭＢｑの９９ｍＴｃである。
本発明のテクネチウム放射性医薬品は、以下に挙げるような様々な方法で調製できる。
（ｉ）第二の実施形態に関して上記で説明したテクネチウム錯体形成をクリーンルーム環境下で実施する無菌製造法。
（ｉｉ）無菌製造を用いずにテクネチウム錯体形成を実施してから、最終段階で滅菌（例えばガンマ線照射又は高圧蒸気滅菌）する最終滅菌法。
（ｉｉｉ）式ＩＩのキレーターと薬学的に許容される還元剤を適宜他の賦形剤と共に含む無菌の凍結乾燥非放射性キット製剤を、９９ｍＴｃジェネレータから得られる無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸のアリコートと反応させるキット法。
【００５５】
方法（ｉｉｉ）が好ましく、この方法に使用するためのキットを以下の第四の実施形態で説明する。
【００５６】
第四の実施形態では、本発明は、上述の放射性医薬組成物を調製するための非放射性キットであって、式ＩＩのコンジュゲートを生体適合性還元剤と共に含むキットを提供する。かかるキットは、例えば血流への直接注射によるヒトへの投与に適した無菌放射性医薬製剤を与えるように設計される。リガンドコンジュゲート及びその好ましい態様は上記の第二の実施形態で記載した通りである。
【００５７】
９９ｍＴｃ用には、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの無菌９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（ＴｃＯ４−）で再構成すればそれ以上操作しなくてもヒトへの投与に適した溶液が得られるように設計される。
適当なキットは、遊離塩基又は酸塩の形態のキレーターコンジュゲートを亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような生体適合性還元剤と共に収容した容器（例えばセプタムシールバイアル）を備える。生体適合性還元剤は、好ましくは塩化第一スズや酒石酸第一スズのような第一スズ塩である。或いは、キットは非放射性金属錯体を適宜含んでいてもよく、テクネチウムの添加時にトランスメタレーション（金属交換）を起こして所望の生成物を与える。
【００５８】
非放射性キットはさらに、トランスキレーター、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加成分を適宜含んでいてもよい。「トランスキレーター」とは、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、次に上記キレーターで置換される化合物である。これはテクネチウム錯体化と競合する過テクネチウム酸塩の迅速な還元に起因した還元型加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が形成するおそれを最小限に抑制する。かかる適当なトランスキレーターは、弱有機酸（つまりｐＫａが３〜７の範囲内にある有機酸）と生体適合性陽イオンとの塩である。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化して負に荷電した陰イオン基と塩を形成する正電荷を有する対イオンで、しかも無毒で哺乳類の身体、特に人体への投与に適したものをいう。適当な生体適合性陽イオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、さらにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。適当な弱有機酸は、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸である。従って、適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノラート又はホスホン酸塩である。好ましい塩は、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩、特にジホスホン酸塩である。好ましいトランスキレーターは、ＭＤＰ（メチレンジホスホン酸）と生体適合性陽イオンとの塩である。
【００５９】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元過程のような分解反応を阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（即ち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらの生体適合性陽イオンとの塩から選択される。
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の放射線医薬組成物（つまり、放射性診断薬自体）における微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、再構成前の本発明の非放射性キットの１以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、即ちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベンである。
【００６０】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類の投与に関する許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。コンジュゲートを酸塩の形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階操作法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器で提供してもよい。
【００６１】
「充填剤」という用語は、製造時及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【００６２】
第五の実施形態では、本発明は式ＩＩＩの化合物を提供する。
【００６３】
【化７】
【００６４】
式中、Ｑ１〜Ｑ６及びｎは式Ｉ及びＩＩに関して定義した通りであり、
Ｅは第一の実施形態の生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適した官能基であるが、
（ｉ）ｎ＝３のとき、Ｑ１〜Ｑ６の１以上がアミン保護基であり、
（ｉｉ）ｎ＝３又は５のとき、ＥはＯＨではないことを条件とする。
【００６５】
式ＩＩＩの化合物は「二官能性キレーター」つまり１以上の官能基（Ｅ）が結合したキレーターである。官能基Ｅは生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適したものである。適当な官能基（Ｅ）としては、アミン、チオシアネート、マレイミド及び活性エステルが挙げられる。Ｅは好ましくは活性化されていないヒドロキシル（−ＯＨ）基を含まない。「活性エステル」という用語は、良好な脱離基で、生体ターゲティング部分に存在するアミンのような求核部位との反応を容易にするように設計されたカルボン酸のエステル誘導体を意味する。適当な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステルである。
【００６６】
Ｅは好ましくは第一アミン（−ＮＨ２）、−ＣＯ２Ｍ、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、マレイミド又はアクリルアミドである。ただし、ＭはＨ、陽イオン、保護基又は活性エステルである。Ｅは最も好ましくは−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｍ又はマレイミドであり、理想的には−ＮＨ２又は−ＣＯ２Ｍである。
【００６７】
式ＩＩＩの化合物は、生体ターゲティング分子（Ｚ）の適当な対応官能基と反応して式ＩＩの所望のコンジュゲートを形成する。生体ターゲティング分子（Ｚ）の適当な官能基としては、（アミン官能化二官能性キレーターとのアミド結合形成のための）カルボキシル、（カルボキシル又は活性エステル官能化二官能性キレーターとのアミド結合形成のための）アミン、（アミン官能化二官能性キレーターのＮアルキル化のための）ハロゲン、メシレート及びトシレート、並びに（マレイミド官能化二官能性キレーターとの反応のための）チオールが挙げられる。
【００６８】
Ｅが生体ターゲティング分子（Ｚ）のアミノ基と反応するように設計された基（例えば活性エステル）である場合、キレーターのアミンとの不都合な副反応のおそれがあることは明らかである。かかるＥ基については、テトラアミンキレーターの４つのアミン窒素原子の各々が保護されるように、式ＩＩＩのＱ１〜Ｑ６は好ましくは窒素保護基として選択される。Ｅがアミノ基である場合、生体ターゲティング分子（Ｚ）との反応がＥアミンでしか起こらず、テトラアミンキレーターのアミン窒素原子では起こらないことが明らかに重要である。従って、この状況下でも、式ＩＩＩのＱ１〜Ｑ６は好ましくは窒素保護基である。窒素保護基及びその好ましい具体例は上記の第二の実施形態で記載した通りである。
【００６９】
式ＩＩＩの化合物は以下のスキーム１及び２に記載したように調製できる。スキーム１はカルボキシ官能化Ｎ保護テトラアミンキレーターの順応性に富む合成経路を与え、式ＩＩＩのｎの様々な値に適応させることができる。−（ＣＨ２）５ＯＨ橋頭置換基をもつＢｏｃ保護テトラアミン類似体の合成は、Ｔｕｒｐｉｎ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｏｍｐ． Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，３７９−３９３（２００２）に記載されている。スキーム２はアミン官能化Ｎ保護テトラアミンキレーターの順応性に富む合成経路を与え、ｎの様々な値に適応させることができる。生体ターゲティングペプチドの結合は、Ｎｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（２），２４７−２５８（２００３）及びＭａｉｎａ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．，３０（９），１２１１−１２１９（２００３）に記載のものと同様に実施できる。
【００７０】
【化８】
【００７１】
【化９】
【実施例】
【００７２】
本発明を以下の非限定的な実施例で例証する。実施例１では、本発明のカルボキシ官能化Ｎ保護テトラアミンキレーター（化合物１）の合成について記載する。実施例２では、本発明のアミン官能化Ｎ保護テトラアミンキレーター（化合物２）の合成について記載する。実施例３では、化合物１とアミン（ベンジルアミン）との結合を示す化合物（化合物３）の合成について記載する。実施例４では、化合物６の合成について記載し、化合物２とカルボン酸の活性エステルとの結合を例証する。実施例５では、本発明のキレーターとロサルタン誘導体とのコンジュゲート（化合物４）の合成について記載する。実施例６では、ＰＥＧリンカー基を含むロサルタンキレーターコンジュゲートの合成について記載する。実施例７では、本発明のキレーターのアンジオテンシンペプチドコンジュゲート（化合物８）の合成について説明する。実施例８では、本発明の幾つかのキレーターの９９ｍＴｃ放射標識化について記載する。実施例９では、本発明の様々な９９ｍＴｃ錯体の親油性（ｌｏｇＰ）を測定し、これらの錯体が比較的親水性であることを示す。実施例１０では、低い肝臓バックグラウンドと高い尿クリアランスを示す本発明の幾つかの９９ｍＴｃ錯体の生体内分布結果を示す。実施例１１では、化合物１の高収率の合成について記載する。実施例１２では、活性エステルの結合した本発明の保護テトラアミンキレーター（化合物９）の合成について記載する。
【００７３】
実施例１：化合物１の合成
段階（ａ）：ジエチル［２−（ベンジルオキシ）エチル］マロネート
標記化合物は、Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１，２８７５−２８９４（１９９５）の方法の修正法で調製した。ナトリウム（１．２０ｇ）をアルゴン雰囲気中で無水エタノール（２５ｍＬ）に溶解した。マロン酸ジエチル（１４．００ｇ）を加えて混合物を３０分間還流した。ベンジルブロモエチルエーテル（１０ｇ）を加えて、混合物を１６時間還流下で撹拌した。エタノールをロータリーエバポレーターで除去して、残渣をエーテル（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とに分配した。エーテル層を水（３×５０ｍＬ）で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。エバポレーターでエーテルを除去して、残渣を真空蒸留した。４０〜５５℃で留出した留分を廃棄した（未反応マロン酸ジエチル）。生成物は１４０〜１５０℃（１ｍｍ）で留出した（文献値ｂｐ１３８〜１４０℃（１ｍｍ））。収量は無色油１２．６０ｇであった。
【００７４】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．２８（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），４．１６（ｍ，４Ｈ，ＣＯＯＣＨ２），３．５８（ｔ，１Ｈ，ＣＨ），３．５０（ｔ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），２．２１（ｔ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），１．２０（ｔ，６Ｈ，ＣＯＯＣＨ２−ＣＨ３）。
【００７５】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１６９．２０（ＣＯ），１３８．１０，１２８．６０，１２７．８０（芳香族），７３．００（ＣＨ２Ｐｈ），６７．３０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），６１．７０（ＣＯＯＣＨ２），４９．１０（ＣＨ），２８．９０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），１４．１０（ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３）。
【００７６】
段階（ｂ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシ−エチル）マロンアミド
ジエチル［２−（ベンジルオキシ）エチル］マロネート（４．００ｇ）をエチレンジアミン（３０ｍＬ）に加えて、溶液を室温で２日間撹拌した。過剰のエチレンジアミンをロータリーエバポレーターで除去して、残渣を高真空下で２日間乾燥して黄色油状物（４．２８ｇ）を得、これを放置して結晶化させた。生成物は痕跡量のエチレンジアミンを依然として含んでいることがＮＭＲスペクトルで検出された。
【００７７】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．７４（ｂｒ ｔ，２Ｈ，ＣＯ−ＮＨ），７．３２（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５０（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２− ），３．３３（ｔ １Ｈ，ＣＨ），３．２３（ｍ，４Ｈ，ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２），２．７４（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２−ＮＨ２）２．１８（ｑ，２Ｈ，Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−）１．５５（ｂｒ ｓ ４Ｈ，ＮＨ２）。
【００７８】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１７１．１０（ＣＯ），１３８．２０，１２８．３０，１２７．７０（芳香族），７３．００（ＣＨ２−Ｐｈ），６７．８０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５１．４０（ＣＨ），４２．４０（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２），４１．２０（ＣＨ２−ＮＨ２），３１．９０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−）。
【００７９】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジアミノプロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）マロンアミド（３．８０ｇ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解して、フラスコを氷浴に浸漬した。フラスコをアルゴンでフラッシュして、ＴＨＦボラン錯体（８０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）をシリンジで加えた。反応混合物を室温まで放温し、次いで４０℃で２日間撹拌し、１時間還流した。メタノール（５０ｍＬ）を滴下し、溶液を４０℃で１晩撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解した。水酸化ナトリウム（１５ｍＬの水中に１０ｇ）を加えて、メタノールを留去した。無色油状物が分離し、これをＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒の除去で３．４０ｇの無色油状物が得られた。
【００８０】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．３４（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），４．４９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５５（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），２．７６（ｔ，４Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．６３（ｍ，８Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），１．８４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），１．５８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），１．４１（ｂｒ ｓ，６Ｈ，ＮＨ）。
【００８１】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１３８．６０，１２８．３０，１２７．６０（芳香族），７２．８０（ＣＨ２−Ｐｈ），６８．７０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５３．５０（Ｎ−ＣＨ２），５２．８０（Ｎ−ＣＨ２），４１．６０（Ｎ−ＣＨ２）３６．４０（ＣＨ），３１．３０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）。
【００８２】
ＭＳ−ＥＩ：２９５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値２９５．２）。
【００８３】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミニエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジアミノプロパン（３．３０ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解して、トリエチルアミン（５．４０ｇ）及びｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１０．３０ｇ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）、クエン酸溶液（水中１０％１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると、黄色油状物が得られ、これを高真空で恒量になるまで乾燥した。粗生成物（７．７０ｇ）をシリカゲルカラム（２５０ｇ、２３０〜４００メッシュ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２−Ｅｔ２Ｏ１：１）で精製して、６．１０ｇ（７８．３％）の透明油状物を得た。
【００８４】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．３２（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５），５．１２（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），４．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．４９（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），３．２４（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．１４（ｂｒ，１Ｈ，ＣＨ），１．５９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）１．４５（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．４２（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００８５】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１５５．９０（ＮＨ−ＣＯ），１３８．２０，１２８．３０ １２７．６０，１２７．５０（芳香族），７９．９０，７８．９０（ＣＭｅ３），７２．８０（ＣＨ２−Ｐｈ），６８．００（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），５０．００（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），４６．９０（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），３９．２０（Ｎ−ＣＨ２），３４．４０（ｂｒ，ＣＨ），２９．８０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），２８．３０（ｔ−Ｂｕ）。
【００８６】
ＭＳ−ＥＩ：６９５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６９５．５）
段階（ｅ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ベンジルオキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（３．１６ｇ）を無水エタノール（１００ｍＬ）に溶解して、Ｐｄ−活性炭（１．００ｇ、乾燥、１０％）を加えた。混合物をＰａｒｒ水素添加装置中３５ｐｓｉで２日間水素添加した。触媒を濾別し、エタノールで洗浄した（３×２０ｍＬ）。エタノールをロータリーエバポレーターで除去すると無色油状物が得られ、これを高真空で恒量になるまで乾燥した（２．６７ｇ、９７．１％）。
【００８７】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝５．２５（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），３．６９（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２−），３．２８（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．７１（ｂｒ，ＯＨ），２．２３（ｂｒ，１Ｈ，ＣＨ），１．５６（ショルダー，ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）１．４８（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．４４（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００８８】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１５６．１０（ＮＨＣＯ），８０．００，７９．２０（ＣＭｅ３），５９．６０（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２），４９．９０（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），４７．００（ｂｒ，Ｎ−ＣＨ２），３９．３４（Ｎ−ＣＨ２），３３．８０（ＣＨ），３２．３０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ），２８．３０（ｔ−Ｂｕ）。
【００８９】
ＭＳ−ＥＩ：６０５［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６０５．４）。
【００９０】
段階（ｆ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−カルボキシメチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（化合物１）
Ｍａｚｉｔｓｃｈｅｋ ｅｔ ａｌ（Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．ＩＮＴ．Ｅｄ．，４１，４０５９−４０６１（２００２））の方法を用いた。Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン（２．６０ｇ）をＤＭＳＯ（１５ｍＬ）に溶解して、１−ヒドロキシ−１，２−ベンズヨードオキソール−３（Ｈ）−オン−オキシド（ＩＢＸ、３．５０ｇ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌してから、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．５０ｇ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌した。水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ、４０ｍＬ）を加えて、混合物を室温で４時間撹拌した。溶液を氷浴に浸漬して２Ｍ塩酸でｐＨ２に酸性化した。水層をエーテルで抽出して（４×１００ｍＬ）、一緒にしたエーテル抽出液を水で洗浄した（３×５０ｍＬ）。エーテル層をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると生成物及び２−ヨードソ安息香酸を含む黄色固体残渣が得られた。クロロホルム−ヘキサン（１：３）（８０ｍＬ）での結晶化によってヨードソ安息香酸（２．１ｇ）の大部分を除去した。クロロホルム−ヘキサン母液を蒸発させると黄色油状物（３ｇ）が得られ、これをシリカゲルカラム（３００ｇ、ＣＨ２Ｃｌ２−Ｅｔ２Ｏ、１：１）にかけた。残留ヨードソ安息香酸はエーテルで溶出した。生成物はエーテル−メタノール（９：１）で溶出した。生成物を含む画分を一緒にし、溶媒を除去すると１．５ｇの淡黄色油状物が得られた。これを再びシリカゲルカラムでクロマトグラフィー処理した（５０ｇ、Ｅｔ２Ｏ）。生成物はエーテル−酢酸（９５：５）で溶出した。生成物を含む画分を一緒にして溶媒をロータリーエバポレーターで除去すると、油状物が得られ、これを高真空で乾燥した。収量は１．１０ｇ（４１．３％）であった。
【００９１】
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝７．６１（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），５．１９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，ＮＨ），３．２２（ｂｒ，１２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２），２．４７（ｂｒ ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．２６（ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），１．４１（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．３７（ｓ，１８Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。
【００９２】
１３Ｃ ＮＭＲ（６７．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃，ＴＭＳ）：δ＝１７５．９０（ＣＯＯＨ），１５６．１０（ＮＨＣＯ），８０．４０，７９．１０（ＣＭｅ３），４９．５０（Ｎ−ＣＨ２），４６．８０（Ｎ−ＣＨ２），３９．００（Ｎ−ＣＨ２），３４．７０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），３４．２０（ＣＨ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ），２８．３０，２８．２０（ｔ−Ｂｕ）。
【００９３】
ＭＳ−ＥＩ：６１９［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値６１９．４）。
【００９４】
実施例２：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）の合成
段階（ａ）：２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）テトラヒドロピラン
６−クロロヘキサノール（６．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５００ｍｇ）を乾燥エーテル（７５ｍｌ）に溶解して氷浴で０〜５℃に冷却した。乾燥エーテル（２５ｍｌ）中のジヒドロピラン（４．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分かけて定常攪拌下に滴下した。添加完了後、冷却浴を除いて撹拌を１６時間継続した。溶液を水で抽出し（５０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させると、淡黄色油状物が残った。油状物はそれ以上精製せずに次の反応に使用できる十分な純度のものであることが１３ＣＮＭＲ分光法で判明した。収量１０．１ｇ（９１％）。
【００９５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１９．７（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２），２５．６（ＣＨ２），２６．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），３０．８（ＣＨ２），３２．６（ＣＨ２），４５．０（ＣＨ２Ｃｌ），６２．３（ＯＣＨ２），６７．４（ＯＣＨ２），９８．８（ＯＣＨＯ）。
【００９６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．３０〜１．７１（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ２×７），３．２４〜３．３２（１Ｈ，３．４１〜３．４８（３Ｈ，ｍ，ＣＨ及びＣＨ２），３．６０〜３．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７２〜３．８２（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ），４．４４〜４．４９（１Ｈ，ｂｍ，ＯＣＨＯ）。
【００９７】
段階（ｂ）：２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル
少量のナトリウム（１．１３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を乾燥窒素ブランケット中定常攪拌下に乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解した。マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、溶液を６０℃で１時間加熱した。２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）−テトラヒドロピラン（９．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を一度に加えて温度を７５〜８０℃に上げて２４時間このレベルを保った。冷却後、無機固体を濾別して濾液から溶媒を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、水で抽出し（３０ｍｌ×２）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、揮発分を除去すると淡黄色油状物が残った。油状物をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、溶出液として石油エーテル（４０〜６０℃）／エーテル（２００：４０）を用いた。所要生成物はｒｆ＝０．１５で無色油状物として溶出した。収量８．７ｇ（６０％）。
【００９８】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１４．０（ＣＨ３×２）、１９．６（ＣＨ２）、２５．５（ＣＨ２）、２７．２（ＣＨ２）、２８．６（ＣＨ２）、２９．０（ＣＨ２）、２９．６（（ＣＨ２）、３０．０（ＣＨ２）、３０．８（ＣＨ２）、５２．０（ＣＨ）、６１．２（ＯＣＨ２×２）、６２．２（ＯＣＨ２）、６７．４（ＯＣＨ２）、９８．８（ＯＣＨＯ）、１６９．４（Ｃ＝Ｏ×２）。
【００９９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１０〜１．２５（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ３×２，ＣＨ２×４）、１．３６〜１．５０（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３）、１．７０〜１．８１（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２）、３．１７〜３．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、３．５６〜３．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．７０〜３．８０（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ）、４．０４〜４．１６（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ２×２）、４．０３〜４．０８（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１００】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）ヘキシル−］−マロンアミド
２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル（５．１ｇ、１４．８ ｍｍｏｌ）を１，２−ジアミノエタン（１０ｇ、１６７ｍｍｏｌ）に溶解して、室温で１６時間撹拌した。揮発分を真空で除去すると（４０〜５０℃、０．０１ｍｍＨｇ）、淡緑色の粘稠な残渣が残り、これをカラムクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（５０：５０：５）で溶出した。標記化合物はｒｆ０．２で溶出し、淡緑色の粘稠な油状物として回収され、放置すると固化した。（収量３．９ｇ、７１％）。
【０１０１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１９．８（ＣＨ２），２５．５（ＣＨ２），２６．０（ＣＨ２），２７．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２９．７（ＣＨ２），３０．８（ＣＨ２），３１．９（ＣＨ２），４１．０（ＮＣＨ２×２），４１．９（ＮＣＨ２×２），５４．６（ＣＨ），６２．５（ＯＣＨ２），６７．５（ＯＣＨ２），９８．９（ＯＣＨＯ），１７１．６（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１０２】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１５〜１．２８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．３９〜１．４４（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×３），１．６９〜１．７４（４Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２×２），２．６４（４Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２×２），２．７３ ４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ２×２），３．０８〜３．２９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２×３），３．３５〜３．４１（１Ｈ，ｍ ＣＨ），３．５５〜３．６３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７０〜３．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．４３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，ＯＣＨＯ），７．７８（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，ＯＣＮＨ×２）。
【０１０３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３４１７，３０８２，２９３６，２８６２，１６６３，１５５８，１４３９，１３５４，１３２３，１２６１，１２００，１１８９，１０７６，１０２６，９５６，９０７，８６７，８１０。
【０１０４】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）−マロンアミド
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロンアミド（３．９ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８．５ｇ、３ｍｍｏｌ）及びエタノール（５０ｍｌ）を７０〜７５℃で還流下で１６時間加熱した。冷却後、濃水酸化アンモニウム（．８８０）を、ｐＨ９が持続して得られるまで滴下した。沈殿した白色固体をセライトで除去し、濾過ケークをエタノール（３０ｍｌ）で洗浄した。エタノールを減圧で（１５ｍｍＨｇ、４０℃）除去すると、半固形状ワックスが残った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（１００：５０：１０）で溶出した。標記化合物のｒｆ＝０．２であった。生成物を回収して、残存する水を除去するためエタノールと共沸させた（１００ｍｌ×３）。淡緑色の粘稠な残渣が得られ、放置すると固化した。（収量２．１ｇ、６９％）。
【０１０５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ２５．４（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２８．９（ＣＨ２），３０．４（ＣＨ２），３２．２（ＣＨ２），４０．６（ＮＣＨ２×２），４１．７（ＮＣＨ２×２），５４．１（ＣＨ），６１．６（ＣＨ２ＯＨ），１７１．７（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１０６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２８〜１．３８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×３），１．４６〜１．５５（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），１．７９〜１．８７（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ｈ２ＮＣＨ２×２），３．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ），３．２７（４Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６及び２Ｈｚ，ＨＮＣＨ２×２），３．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ２）。
【０１０７】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６４，２９３２，２８６２，２５２７，１６６３，１５５８，１４６２，１３２７，１２２３，１１９２，１０３４。
【０１０８】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ１３Ｈ２９Ｎ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）計算値２８９，実測値２８９。
【０１０９】
段階（ｅ）：（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥窒素ブランケット中、無溶媒ボラン−ジメチルスルフィド付加物（１５ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）をジオキサン（５０ｍｌ）中Ｎ，Ｎ′−ビス−（２−アミノエチル）−２−（６−ヒドロキシエチル）マロンアミド（２．１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の攪拌混合物にシリンジで滴下した。添加完了後、混合物を１１０℃で穏やかに還流しながら５日間加熱した。その際若干の白色固体が残った。冷却後揮発分を減圧除去すると白色固体が残り、これにメタノール（５０ｍｌ）を滴下すると無色溶液が得られた。溶液を還流下で３時間加熱し、冷却し、濃ＨＣｌ（５ｍｌ）を加えて７０〜７５℃で還流下で４８時間加熱を続けた。溶媒を除去すると粘稠な緑色残渣が残り、これをメタノールで共沸すると（１００ｍｌ×３）、淡緑色固体が残った。この固体を乾燥メタノールに再溶解して無水炭酸カルシウム（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。無機固体をセライトで濾別し、濾液から溶媒を蒸発させると粘稠な残渣が残った。残渣を水（５０ｍｌ）と混合し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（５０ｍｌ×３）。有機画分を一緒にし、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を蒸発させると淡黄色残渣が残った。
【０１１０】
注：この時点で１３ＣＮＭＲで反応をモニターすると便利である。
【０１１１】
残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２ＣＬ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を溶出液として用いた。標記化合物はｒｆ＝０．４１で溶出し、無色の粘稠油状物として分離された（収量２．５ｇ、５２％）。
【０１１２】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２５．６（ＣＨ２），２６．４（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），２９．８（ＣＨ２×２），３２．６（ＣＨ２），３６．５（非常にブロード，ＣＨ），３９．２（ＮＣＨ２×２，隣接ＣＨ），４６．９（ブロード，ｓ，ＨＮＣＨ２×２），５０．０（ブロード，ｓ，ＮＣＨ２×２），６２．４（ＨＯＣＨ２），７９．０（ＯＣ×２），７９．９（ＯＣ×２），１５６．４（ブロード，ｓ，Ｃ＝Ｏ×４）
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０５〜１．１８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２７（１８ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ブチル），１．３１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６，ｔ−ブチル），１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．６３（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），２．９８（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１１（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ２Ｏ），５．２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１１３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７６，２９３１，２８５９，１６７４，１５１６，１４５５，１４１８，１３９３，１２６０，１２５０，１１６５，１０６９，９６５，８７１，７７５。
【０１１４】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６５Ｎ４Ｏ９（Ｍ＋Ｈ）計算値６６１，実測値６６１。
【０１１５】
段階（ｆ）：トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチルエステル
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５２ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）を室温で撹拌して、溶媒をゆっくりと蒸発させた。反応を炭素ＮＭＲでモニターすると３日後に出発物質は少ししか残存していなかった。反応液容積をＣＨ２Ｃｌ２で３０ｍｌに一緒にし、水で抽出して（５０ｍｌ×３）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して溶媒を蒸発させると、褐色残渣が残った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００：５）を溶出液として用いた。溶出した最初の化合物はｒｆ＝０．９５の未反応塩化トシルであった。標記化合物はｒｆ＝０．２で溶出し、淡黄色の粘稠な液体として分離された。収量（１．２０ｇ、３９％）。
【０１１６】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２１．７（ＣＨ３トシル），２５．３（ＣＨ２），２６．３（ＣＨ２），２８．５（ＣＨ３×１２），２８．８（ＣＨ２），２９．５（ＣＨ２），２９．９（ＣＨ２），３６．５（ＣＨ，非常にブロード），３９．４（ＮＣＨ２×２），４７．０（ブロード ＮＣＨ２×２），５０．５（ブロード，ＮＣＨ２×２），７０．６（ＴｓＯＣＨ２），７９．１（ＯＣ×２），８０．０（ＯＣ×２），１２７．９（ＣＨ×２），１２９．９（ＣＨ×２），１３３．２（Ｃ），１４４．７（Ｃ−Ｓ Ｔｓ），１５６．１（ブロード，Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１１７】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．８８（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３トシル），３．１０〜３．１２（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．１９（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．９３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ２ＯＴｓ），５．０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．０８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ），７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ）。
【０１１８】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６０，２９７４，２９３２，２８６２，１６９３，１５１６，１４７９，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１７７，１０６９，９５９，８１６，７７５。
【０１１９】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７１Ｎ４Ｏ１１Ｓ（Ｍ＋Ｈ）計算値８１５，実測値８１５。
【０１２０】
段階（ｇ）：（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］メチル｝−オクチルエステル（１．１０５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、ナトリウムアジド（３５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、室温で約１〜２ｍｌ残るまでメタノールを減圧除去した。残渣を水（２５ｍｌ）で希釈してＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ×４）で抽出した。有機抽出液を一緒にして乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して揮発分を室温で蒸発させると（注：アジドは爆発の危険性があるので、この段階は安全シールドの後ろで行うべきである）、淡黄色の粘稠な残渣が残ったが、これが純粋な所望化合物であった（収量８２０ｍｇ、８８％）。
【０１２１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．３（ＣＨ２），２６．５（ＣＨ２），２８．３（ＣＨ３×１２），２８．７（ＣＨ２），２９．６（ＣＨ２），２９．８（ＣＨ２），３６．８（ブロード，ＣＨ），３９．３（ＮＣＨ２×２），４６．９（ブロード，ＮＣＨ２×２），５０．０（ブロード，ＮＣＨ２×２），５１．３（ＣＨ２Ｎ３），７９．０（ＯＣ×２），７９．８（ＯＣ×２），１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１２２】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４７（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ２隣接ＣＨ），１．８６（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．９５〜３．０５（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２），３．０５〜３．２０（１０Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４及びＣＨ２Ｎ３），５．０９（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１２３】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７４，２９３２，２８６０，２０９７（Ｓｔｒｏｎｇ ｂａｎｄ Ｎ３），１６９４，１５２０，１４７０，１４１８，１３９１，１３６６，１２５０，１１６７，１０６９，８７０，７７７。
【０１２４】
段階（ｈ）：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物２）
（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−活性炭（１００ｍｇ）及びメタノール（１０ｍｌ）を室温３０気圧の圧力下、水素ガスで１６時間処理した。セライトで濾過して固体を除去し、濾過ケークをメタノール（５０ｍｌ）で洗浄した。濾液から揮発分を除去すると粘稠油状物が残ったが、これが純粋な所望化合物であった（収量７００ｍｇ、８９％）。
【０１２５】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．４（ＣＨ２），２６．６（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ３×１２），３２．９（ＣＨ２×２），３６．８（ブロード，ＣＨ）． ３９．２（ＮＣＨ２×２），４１．８（Ｈ２ＮＣＨ２），４６．９（ブロード，ＮＣＨ２×２），４９．８（ブロード，ＮＣＨ２×２），７８．９（ＯＣ×２），７９．７（ＯＣ×２），１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１２６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．２３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．２７（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ２），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨ２），２．９７（４Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×２），３．００〜３．１６（８Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ２×４），５．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），５．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１２７】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３６０，１６９３，１５２０，１４５９，１４１８，１３９２，１３６７，１２５０，１１７０，１０６８，９６４，９２２，８７１，７７５，７３３。
【０１２８】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ３３Ｈ６６Ｎ５Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）計算値６６０，実測値６６０。
【０１２９】
実施例３：化合物３の合成
段階（ａ）：化合物１とベンジルアミンとのカップリング
２０℃の丸底フラスコ（５０ｍｌ）内で、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中の化合物１（６１．８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をベンジルアミン（１０．７ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスフィン酸クロリド（２５．９ｍｇ）及びジイソプロピルアミン（２９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）で１８時間処理した。次に反応液をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）で希釈し、１Ｎ塩酸（５ｍｌ）及び飽和炭酸カリウム水溶液（５ｍｌ）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２層を分離乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ガム状になるまで減圧濃縮した（〜５０ｍｇ）。次にこの粗生成物を石油中の酢酸エチルの勾配（５０％、７０％及び９０％各１００ｍｌ）でシリカクロマトグラフィーにかけた。少量の移動度の速い不純物と、そのすぐ後で主画分を回収した。
【０１３０】
ＣＤＣｌ３中で１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを測定した。その結果、主画分が所要純粋化合物であることが判明した。
【０１３１】
段階（ｂ）：Ｂｏｃ保護基の脱保護
段階（ａ）で得られたＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中の生成物（２７．８ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）で処理して、反応液を室温で３時間放置した。次いで反応混合物をガム状になるまで減圧濃縮して過剰の酸を除去し、秤量した（５３ｍｇ）。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）からＢｏｃ基が完全に除去されたことが判明した。化合物２の秤量試料を水に溶解してＴＦＡ塩の１０ミリモル濃度溶液を得て、これを放射標識実験に用いた。
【０１３２】
実施例４：化合物６の合成
段階（ａ）：（８−ベンゾイルアミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノエチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の安息香酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル（２０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中の化合物２（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に一度に加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で希釈し、水（１５ｍｌ×２）で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、溶媒をロータリーエバポラーターで除去した。残った残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９４：６（ｒｆ＝０．２３）を溶出液として用いるシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、無色の粘稠油状物を得た。（収量２５ｍｇ、４１％）。
【０１３３】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．４（ＣＨ２），２６．８（ＣＨ２），２８．５（ＣＨ３×１２），２９．６（ＣＨ２×２），２９．７（ＣＨ２），２９．９（ＣＨ２），３６．６（ブロード，ＣＨ），３９．４（ＮＣＨ２×２），４０．０（Ｏ＝ＣＮＣＨ２×２），４７．０（ブロード，ＮＣＨ２×２），４９．８（ＮＣＨ２×２），７９．７（ＯＣ×２），８０．０（ＯＣ×２），１２７．０（ＡｒＣＨ×２），１２８．５（ＡｒＣＨ×２），１３１．３ （ＡｒＣＨ），１３４．９（ＡｒＣ），１５６．１（Ｃ＝Ｏ×４），１６７．６（ＡｒＣ＝Ｏ）。
【０１３４】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．２８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２×４），１．３８（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４２（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ３×６及びＣＨ２），１．９５（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ），３．１（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×２）３．２２（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ２×４），３．４２（２Ｈ，ｂｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ−ベンゾイル），５．０８（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２），６．１８（１Ｈ，ｂｓ，ＨＮ−ベンゾイル），７．３８〜７．４５（３Ｈ，ｍ，ＡｒＣＨ×３），７．７４（２Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＡｒＣＨ×２），
ＩＲ（薄膜）ｃｍ−１：３３５０，２９７６，２９３２，２８５９，１６９３（ブロード），１６５２，１５２０，１４１９，１３９１，１３６７，１２５１，１１６６，７３２。
【０１３５】
質量分析（ＦＡＢ）ｍ／ｅ：Ｃ４０Ｈ７０Ｎ５０９（Ｍ＋Ｈ）の計算値７６４，実測値７６４。
【０１３６】
段階（ｂ）：Ｂｏｃ保護基の脱保護
段階（ａ）で得たＢｏｃテトラアミンベンズアミド（４２ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中でトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）で処理して、反応液を室温で３時間放置した。次に反応液を減圧濃縮して過剰の酸を除去し、ガム状物を得た。重量予測値（４５ｍｇ）、重量実測値（４５．７ｍｇ）。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）から、Ｂｏｃ基が完全に除去されたこと並びに上記ガムが所要化合物を含むことが判明した。化合物の秤量試料を水に溶解してＴＦＡ塩の１０ミリモル濃度溶液（５．６ｍｌ中５６μｍｏｌ）を得て、これを放射標識に用いた。
【０１３７】
実施例５：化合物４の合成
反応はすべて窒素吹込式装置中で手作業で実施した。
【０１３８】
段階（ａ）：トリチル誘導体化固体担体へのロサルタンの結合
【０１３９】
【化１０】
【０１４０】
ロサルタン（ＭＳＤ，０．２３６ｇ、０．５５８ ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（Ｆｌｕｋａ社製、０．２３３ｍｌ、１．６７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍｌ）中塩化トリチル樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、置換量１．２４ｍｍｏｌ／ｇ、０．３００ｇ）の懸濁液に加えた。４日後樹脂を水抜きして洗浄した。樹脂のアリコートを開裂させた（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、９２．５：５．０：２．５、１５分）。ＨＰＬＣ分析で（カラム Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、４．６×５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で１０〜４０％Ｂ；流速２．０ｍｌ／分、２１４及び２５４ｎｍでＵＶ検出）、ロサルタンに相当するｔＲ６．７分のピークが得られた。樹脂をジクロロメタン／メタノール／ジイソプロピルエチルアミン溶液（１７：２：１、２０ｍｌ、１時間）で処理し、ジクロロメタンで洗浄して乾燥した。
【０１４１】
段階（ｂ）：ヒドロキシル基のアジドでの置換
【０１４２】
【化１１】
【０１４３】
ジフェニルホスホリルアジド（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．４８１ｍｌ、２．２３ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（０．６１１ｍｌ、４．０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中（１０ｍｌ）中で、段階（ａ）で得た樹脂に結合したロサルタン（０．３７２ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。この反応液を１晩放置した。樹脂のアリコートを段階（ａ）に記載の通り開裂させた。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で２０〜８０％Ｂ；流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）で、ｔＲ７．３分に上記の構造に相当するｍ／ｚ４４８．１（ＭＨ＋）を有するピークが得られた。
【０１４４】
段階（ｃ）：アジド基のアミンへの還元
【０１４５】
【化１２】
【０１４６】
段階（ｂ）からの樹脂のＴＨＦ中の懸濁液（４ｍｌ）に、塩化スズ（ＩＩ）（Ａｃｒｏｓ、０．１４１ｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）、チオフェノール（Ｆｌｕｋａ社製、０．３０４ｍｌ、２．９７６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（Ｆｌｕｋａ社製、０．３１１ｍｌ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。１．５時間後に樹脂のアリコートをａ）に記載の通り開裂させた。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で２０〜８０％Ｂ；流速１ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）で、アミンで予想されるｍ／ｚ４２２．２（ＭＨ＋）を有するピークが１．９分に得られた。
【０１４７】
段階（ｄ）：ロサルタンロイシン−テトラアミンキレーター（化合物４）
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、０．０３０ｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で段階（ｃ）からの樹脂結合アミノロサルタンの一部（０．０４２ｍｍｏｌ）に、標準的なカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）及び標準的なＦｍｏｃ切断プロトコル（ＤＭＦ中２０％ピペリジン）を用いてカップリングした。カップリングの完結は標準的Ｋａｉｚｅｒ試験で確認した。次いでＤＭＦ中で同じカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）を用いて樹脂に化合物１（０．０２６ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）をカップリングした。４時間後に生成物を樹脂から切断してＢｏｃ基を同じ方法（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、４７．５：５０：２．５溶液で１時間）で除去した。溶液を濾過、濃縮して分取用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、５μｍ、２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配６０分間で２０〜４０％Ｂ；流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して、凍結乾燥後５ｍｇの生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配１０分間で１０〜８０％Ｂ；流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）ｔＲ５．１分、ｍ／ｚ７３５．４（ＭＨ＋）で構造を確認した。
【０１４８】
実施例６：化合物５の合成
標記化合物は実施例４に記載の通り固体担体上で合成した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、０．０３３ｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−アミノＰＥＧジグリコール酸（Ｐｏｌｙｐｕｒｅ、０．０４９ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を、標準的カップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）及び標準的Ｆｍｏｃ切断プロトコル（ＤＭＦ中２０％ピペリジン）を用いて、ＤＭＦ中で、実施例４（ｃ）で得た樹脂結合アミノ−ロサルタン（０．０４６ｍｍｏｌ）に順次カップリングした。カップリングの完結は標準的Ｋａｉｚｅｒ試験で確認した。次に樹脂に化合物１（０．０２９ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で同じカップリング剤（ＨＡＴＵ及びＤＩＥＡ）を用いてカップリングした。反応液を１晩放置して、次いで生成物を樹脂から切断してＢｏｃ基を同じ方法（ジクロロメタン／ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン、４７．５：５０：２．５溶液で１時間）で除去した。溶液を濾過、濃縮して分取用ＨＰＬＣ（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、５μｍ、２１．２×２５０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ；勾配６０分間で１０〜４０％Ｂ；流速１０．０ｍｌ／分、２１４ｎｍでＵＶ検出）で精製して、凍結乾燥後３．５ｍｇの生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、３μｍ、５０×４．６０ｍｍ、溶媒：Ａ＝水／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ；勾配１０分間で１０〜４０％Ｂ；流速０．３ｍｌ／分、２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出、ＥＳＩ−ＭＳ）ｔＲ４．７分；ｍ／ｚ１０２５．４（ＭＨ＋）で構造を確認した。
【０１４９】
実施例７：化合物８の合成
段階（ａ）：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
１ｇのＮ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（Ｆｌｕｋａ社製０９６６０）を、０．５ｍＬのトリイソプロピルシランを含むジクロロメタン中５０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２０ｍＬで６０分間処理した。反応混合物を減圧蒸発させて残渣を水中５０％のテトラヒドロフラン２０ｍＬに再溶解した。２．６ｇのｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル無水物及び１．２ｍＬのＮ−メチルモルホリンを加えて混合物を４日間撹拌した。次にテトラヒドロフランを減圧蒸発させて残渣をジクロロメタンに再溶解した。有機層を水で洗浄してＭｇＳＯ４で乾燥した。ジクロロメタンを減圧蒸発させて残渣を５ｍＬのジメチルホルムアミドに再溶解した。このジメチルホルムアミド溶液を水中６０％のアセトニトリル４００ｍＬで希釈して、精製のため分取用ＨＰＬＣカラム（４０分間で３０〜８０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０×５０ｍｍカラムに流速５０ｍＬ／分）に送り、４５０ｍｇの純粋生成物を得た。生成物は分析用ＨＰＬＣで分析した（勾配、１０分間で２０〜７０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；流速０．３ｍＬ／分；カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ；検出、ＵＶ２１４ｎｍ；生成物保持時間８．６６分）。エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物をさらに特性決定した（ＭＨ＋計算値４４１．２；ＭＨ＋実測値４４０．８）。
【０１５０】
段階（ｂ）：Ｎ−（（ＣＨ２）２−ＮＨＣＯＣＨ２−テトラアミン）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＯＨ（化合物８）の合成
アンジオテンシンＩＩのペプチド類似体を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成機を用いて、０．１ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｗａｎｇ樹脂を出発材料として合成した。アルギニンまでのカップリング段階では、過剰の１ｍｍｏｌプレ活性化アミノ酸（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を使用）を用いた。１２３ｍｇのＮ−Ｂｏｃ−Ｎ−［ＦｍｏｃＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２］−Ｇｌｙ−ＯＨ、１１４ｍｇの［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）及び６０μＬのＮ−メチルモルホリンをジメチルホルムアミドに溶解して５分間撹拌し、次に窒素吹込み装置中の樹脂に加えた。試薬を２時間後に除去して樹脂をジメチルホルムアミド及びジクロロメタンで洗浄した。樹脂をジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンで処理し（３×１０ｍｌ）、ジメチルホルムアミドで洗浄した。２３ｍｇの化合物１、１４ｍｇのＨＡＴＵ及び７．５μＬのＮ−メチルモルホリンをジメチルホルムアミドに１０分かけて溶解し、樹脂に加えた。試薬を４時間後に除去して樹脂をジメチルホルムアミド及びジクロロメタンで洗浄した。樹脂からの側鎖保護基の除去及び樹脂からのペプチドの切断は、２．５％のトリイソプロピルシラン及び２．５％の水を含むトリフルオロ酢酸１０ｍＬ中で同時に９０分間かけて実施した。トリフルオロ酢酸を真空で除去し、残渣にジエチルエーテルを加えて沈殿した生成物をジエチルエーテルで洗浄して風乾した。
【０１５１】
生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（４０分間で０〜３０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍカラムで流速１０ｍＬ／分）で精製して、３２ｍｇの純粋キレートペプチドコンジュゲートを得た。生成物を分析用ＨＰＬＣで分析した（勾配、２０分間で５〜５０％Ｂ、但しＡ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ；流速１ｍＬ／分；カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ；検出、ＵＶ２１４ｎｍ；生成物保持時間５．２２分）。エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物をさらに特性決定した（ＭＨ＋計算値１１９７．８；ＭＨ＋実測値１１９７．８）。
【０１５２】
実施例８：化合物３〜７の９９ｍＴｃ放射標識
以下の成分を含む凍結乾燥キット（「Ｃｈｅｌａｋｉｔ Ａ ｐｌｕｓ」）を調製した。
【０１５３】
【表１】
【０１５４】
標識すべき化合物２５〜５０μｇ（溶媒２５〜５０μＬに溶解）をＣＨＥＬＡＫＩＴ−Ａ ｐｌｕｓに加え、次いでジェネレータ溶出液（食塩水中９９ｍＴｃＯ４−、１．０ｍＬ）を加えた。溶液を混合して室温で２０〜３０分間放置した。
【０１５５】
化合物３〜６は室温ｐＨ９でテクネチウム標識して、対応する陽イオン９９ｍＴｃ錯体を高収率で与える（ＲＣＰ＞９０％）。テトラアミン錯体をＨＰＬＣ（移動相：０．１％ＴＦＡ含有水、０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル；ＸＴＥＲＲＡ ＲＰ１８ ３．５μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム）で精製したところ、５０ｍＭリン酸緩衝液中３７℃で２時間安定である（２時間後ＨＰＬＣによるＲＣＰ＞９５％）。
【０１５６】
実施例９：９９ｍＴｃ錯体の親油性（ＬｏｇＰ）の測定
実施例８の９９ｍＴｃ錯体のオクタノール−水分配係数（ＬｏｇＰ）を以下の通り測定した。
【０１５７】
実施例８で得たＨＰＬＣ精製９９ｍＴｃ錯体１０μＬを、遠心チューブ内で１−オクタノール（２ｍｌ）及び５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．４、２．０ｍｌ）と混合した。チューブを室温で１分間ボルテックスし、高速で６０分遠心した。相間の汚染を避けるため注意しながら、両相の試料０．１ｍｌをピペットで他のチューブに移し、Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚｚａｒｄガンマカウンターで計数した。測定は３回繰り返した。
【０１５８】
分配計数Ｐは次のように計算した。
【０１５９】
Ｐ＝（オクタノール中のｃｐｍ−バックグラウンドｃｐｍ）／（水中のｃｐｍ−バックグラウンドｃｐｍ）
最終分配係数は一般にｌｏｇＰとして表される。結果を表１に示す。
【０１６０】
【表２】
【０１６１】
実施例１０：９９ｍＴｃ錯体の生体内分布
化合物４、５及び７の９９ｍＴｃ錯体を実施例８に記載の通り調製した。実験は、正常オスＷｉｓｔａｒラット（１８０〜２２０ｇ）で、試験標品の注射後（ｐ．ｉ．）所定の２時点（２及び１２０分）で実施した。動物をハロタン（酸素中６％）で麻酔し、０．１ｍｌ（５００ＭＢｑ／ｍｌ）の試験標品を注射し、犠牲死させて解剖し、試料の放射能をアッセイした。結果を表１に示す。
【０１６２】
【表３】
【０１６３】
実施例１１：化合物１の別の調製法
実施例１の段階（ｅ）で得たＮ，Ｎ′−ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパンを四塩化炭素（１４ｍｌ）及びアセトニトリル（１４ｍｌ）に溶解した。水（２１ｍｌ）を加えると二相混合物になり、次いで過ヨウ素酸ナトリウム（４．５ｇ、２１ｍｍｏｌ）及び塩化ルテニウム水和物（３５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた暗褐色溶液を室温で１時間撹拌してから、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ×３）で抽出した。有機抽出液をすべて一緒にして乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して、揮発分を減圧蒸発させると、化合物１のナトリウム塩が暗色の粘稠残渣として残り、それ以上精製せずに使用した（４．１５ｇ、９６％）。
【０１６４】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＣ ２８．２（×１２）（ＣＨ３），３４．１（ＣＨ２），３４．４（ＣＨ），３８．６（×２）（ＮＣＨ２），４６．８（×２）（ＮＣＨ２），４９．３（×２）（ＮＣＨ２），７９．０（×２）（ＯＣ），８０．２（×２）（ＯＣ），１５５．９（×４）（Ｃ＝Ｏ），１７５．４（ＣＯＯＨ）。
【０１６５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ １．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），２．１９（１Ｈ，ｂｒ，ＣＨ），２．４０（２Ｈ，ｂｒ，ＣＨ２），３．０５〜３．２３（１２Ｈ，ｂｒ，ＮＣＨ２×６），５．１０〜５．２４（２Ｈ，ｂｒ，ＮＨ×２）。
【０１６６】
質量分析（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：（Ｍ＋Ｎａ）Ｃ２９Ｈ５４Ｏ１０Ｎ４Ｎａ計算値６４１．３７３８，実測値６４１．３７８７。
【０１６７】
実施例１２：化合物９の調製
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；２．１６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の化合物１（４．１５ｇ、６．９０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．８１ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に１度に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌してから、沈殿したＤＣＵ（１，３−ジシクロヘキシル尿素）を濾別した。濾液から揮発分を蒸発させるとワックス状残渣が残り、これに乾燥エーテル（５０ｍｌ）を加えるとさらにＤＣＵが沈殿し、これを濾別した。エーテル溶液を水（２５ｍｌ×２）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させるとワックス状固体が残った。この固体をＣＨ２Ｃｌ２／エーテル混液（１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで未反応ＤＣＣが除去されるまで精製した。溶出液をエーテルに代えて所要生成物（ｒｆ＝０．４、ＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ１：１）をｍｐ６６〜６８℃の無色固体として分離した（２．７ｇ、５７％）。
【０１６８】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＣ ２５．６（×２）（ＣＨ２），２８．４（×１２）（ＣＨ３），３１．８（ＣＨ２），３５．２（ＣＨ），３９．３（×２）（ＮＣＨ２），４７．１（×２）（ＮＣＨ２），４９．１（×２）（ＮＣＨ２），７９．９（×２）（ＯＣ），８０．５（×２）（ＯＣ），１５６．１（×４）（Ｃ＝０），１６７．７（Ｃ＝Ｏ），１６９．１（×２）（Ｃ＝Ｏ）。
【０１６９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ １．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），１．４１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ３×６），２．５２（３Ｈ，ｂｒｓ，ＣＨ及びＣＨ２），２．７７（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２×２），３．１０〜３．３５（１２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＣＨ２×６），５．０８（２Ｈ，ｂｒｓＮＨ×２）。
【０１７０】
質量分析（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：（Ｍ＋Ｎａ）Ｃ３３Ｈ５４Ｎ５Ｏ１２Ｎａ計算値７３８．３８９６，実測値７３８．３８９３。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【図２】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【図３】実施例に記載の各種化合物の構造を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（Ｉ）のテクネチウム錯体。
【化１】
式中、
Ｘは−ＮＲ−、−ＣＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−又はＱ基であり、
各Ｙは独立にＤ−若しくはＬ−アミノ酸、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−又はＸ基であり、
Ｚは合成生体ターゲティング部分であり、
ｎは１〜８の整数であり、
ｍは０〜３０の整数であり、
ＲはＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル又はＣ１〜４フルオロアルキルであり、
Ｑは次式の基であり、
【化２】
Ａは対イオンであるが、
ヘテロ原子同士が直接結合した結合を原子鎖Ｘ１−（Ｙ）ｍが含まないことを条件とする。
【請求項２】
テクネチウム放射性同位体が９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃである、請求項１記載のテクネチウム錯体。
【請求項３】
ｎが１〜６であり、Ｘが−ＣＯＮＲ−又は−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項１又は請求項２記載のテクネチウム錯体。
【請求項４】
Ｘが−ＣＯＮＨ−又は−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項３記載のテクネチウム錯体。
【請求項５】
−（Ｙ）ｍ−が式（−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）ｗのＰＥＧ基からなり、ｗが３〜２５の整数である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項６】
ｗが６〜２２である、請求項５記載のテクネチウム錯体。
【請求項７】
−（Ｙ）ｍ−が１〜１０個のアミノ酸を含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項８】
前記アミノ酸が独立にグリシン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される、請求項７記載のテクネチウム錯体。
【請求項９】
Ｚが、
（ｉ）３〜３０量体ペプチド、及び
（ｉｉ）酵素の基質、酵素アンタゴニスト又は酵素阻害剤
から選択される、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項１０】
請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載のテクネチウム錯体の調製に有用なキレーターコンジュゲートであって、当該コンジュゲートが次の式ＩＩのものであるキレーターコンジュゲート。
【化３】
式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｎ及びｍは請求項１で定義した通りであり、
Ｑ１〜Ｑ６は独立にＱ基であって、ＱはＨ又はアミン保護基である。
【請求項１１】
Ｑ１〜Ｑ６の各々がＨである、請求項１０記載のキレーターコンジュゲート。
【請求項１２】
Ｑ１及びＱ６が共にＨであり、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５が各々ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである、請求項１０記載のキレーターコンジュゲート。
【請求項１３】
Ａが薬学的に許容される対イオンである請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の式Ｉのテクネチウム錯体を、生体適合性担体と共にヒトへの投与に適した形態で含む放射性医薬品。
【請求項１４】
テクネチウム放射性同位体が９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃである、請求項１３記載の放射性医薬品。
【請求項１５】
請求項１３又は請求項１４記載の放射性医薬品の調製用キットであって、
（ｉ）請求項１０乃至請求項１２のいずれか１項記載のキレーターコンジュゲート、及び
（ｉｉ）生体適合性還元剤
を備えるキット。
【請求項１６】
生体適合性還元剤が第一スズイオンを含む、請求項１５記載のキット。
【請求項１７】
Ｑ１〜Ｑ６の各々がＨである、請求項１５又は請求項１６記載のキット。
【請求項１８】
Ｚが請求項９で定義した通りである、請求項１５乃至請求項１７のいずれか１項記載のキット。
【請求項１９】
次の式ＩＩＩの化合物。
【化４】
式中、
Ｑ１〜Ｑ６及びｎは請求項１０で定義した通りであり、
Ｅは請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適した官能基であるが、
ａ．ｎ＝３のとき、Ｑ１〜Ｑ６の１以上がアミン保護基であり、
ｂ．ｎ＝３又は５のとき、ＥはＯＨではないことを条件とする。
【請求項２０】
Ｅが−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｍ（式中、ＭはＨ、陽イオン、保護基又は活性エステルである。）、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、マレイミド又はアクリルアミドである、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
Ｅが−ＮＨ２又は−ＣＯ２Ｍである、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
ｎが１〜６である、請求項１９乃至請求項２１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１】
次の式（Ｉ）のテクネチウム錯体。
【化１】
式中、
Ｘは−ＮＲ−、−ＣＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−又はＱ基であり、
各Ｙは独立にＤ−若しくはＬ−アミノ酸、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−又は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−又はＸ基であり、
Ｚは合成生体ターゲティング部分であり、
ｎは１〜８の整数であり、
ｍは０〜３０の整数であり、
ＲはＨ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル又はＣ１〜４フルオロアルキルであり、
Ｑは次式の基であり、
【化２】
Ａは対イオンであるが、
ヘテロ原子同士が直接結合した結合を原子鎖Ｘ１−（Ｙ）ｍが含まないことを条件とする。
【請求項２】
テクネチウム放射性同位体が９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃである、請求項１記載のテクネチウム錯体。
【請求項３】
ｎが１〜６であり、Ｘが−ＣＯＮＲ−又は−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項１又は請求項２記載のテクネチウム錯体。
【請求項４】
Ｘが−ＣＯＮＨ−又は−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項３記載のテクネチウム錯体。
【請求項５】
−（Ｙ）ｍ−が式（−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）ｗのＰＥＧ基からなり、ｗが３〜２５の整数である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項６】
ｗが６〜２２である、請求項５記載のテクネチウム錯体。
【請求項７】
−（Ｙ）ｍ−が１〜１０個のアミノ酸を含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項８】
前記アミノ酸が独立にグリシン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される、請求項７記載のテクネチウム錯体。
【請求項９】
Ｚが、
（ｉ）３〜３０量体ペプチド、及び
（ｉｉ）酵素の基質、酵素アンタゴニスト又は酵素阻害剤
から選択される、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載のテクネチウム錯体。
【請求項１０】
請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載のテクネチウム錯体の調製に有用なキレーターコンジュゲートであって、当該コンジュゲートが次の式ＩＩのものであるキレーターコンジュゲート。
【化３】
式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｎ及びｍは請求項１で定義した通りであり、
Ｑ１〜Ｑ６は独立にＱ基であって、ＱはＨ又はアミン保護基である。
【請求項１１】
Ｑ１〜Ｑ６の各々がＨである、請求項１０記載のキレーターコンジュゲート。
【請求項１２】
Ｑ１及びＱ６が共にＨであり、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５が各々ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである、請求項１０記載のキレーターコンジュゲート。
【請求項１３】
Ａが薬学的に許容される対イオンである請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の式Ｉのテクネチウム錯体を、生体適合性担体と共にヒトへの投与に適した形態で含む放射性医薬品。
【請求項１４】
テクネチウム放射性同位体が９９ｍＴｃ又は９４ｍＴｃである、請求項１３記載の放射性医薬品。
【請求項１５】
請求項１３又は請求項１４記載の放射性医薬品の調製用キットであって、
（ｉ）請求項１０乃至請求項１２のいずれか１項記載のキレーターコンジュゲート、及び
（ｉｉ）生体適合性還元剤
を備えるキット。
【請求項１６】
生体適合性還元剤が第一スズイオンを含む、請求項１５記載のキット。
【請求項１７】
Ｑ１〜Ｑ６の各々がＨである、請求項１５又は請求項１６記載のキット。
【請求項１８】
Ｚが請求項９で定義した通りである、請求項１５乃至請求項１７のいずれか１項記載のキット。
【請求項１９】
次の式ＩＩＩの化合物。
【化４】
式中、
Ｑ１〜Ｑ６及びｎは請求項１０で定義した通りであり、
Ｅは請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の生体ターゲティング部分（Ｚ）との結合に適した官能基であるが、
ａ．ｎ＝３のとき、Ｑ１〜Ｑ６の１以上がアミン保護基であり、
ｂ．ｎ＝３又は５のとき、ＥはＯＨではないことを条件とする。
【請求項２０】
Ｅが−ＮＨ２、−ＣＯ２Ｍ（式中、ＭはＨ、陽イオン、保護基又は活性エステルである。）、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、マレイミド又はアクリルアミドである、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
Ｅが−ＮＨ２又は−ＣＯ２Ｍである、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
ｎが１〜６である、請求項１９乃至請求項２１のいずれか１項記載の化合物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００８−５１０６８３（Ｐ２００８−５１０６８３Ａ）
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２２０１１（Ｐ２００７−５２２０１１）
【出願日】平成１７年７月１９日（２００５．７．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２８０７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００８４９６
【国際公開日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月１９日（２００５．７．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２８０７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００８４９６
【国際公開日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【出願人】（３０５０４０７１０）ジーイー・ヘルスケア・リミテッド (99)
【Ｆターム（参考）】
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