放射線障害防護剤
【課題】放射線被ばくや放射線療法に伴う障害を予防または治療し、生存率を上げる医薬を提供することである。
【解決手段】ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
【解決手段】ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線被ばくや放射線療法による放射線障害の防護に有用な医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
原子力発電所の作業者、非破壊検査員、放射性検査薬を扱う臨床検査技師ならびにレントゲン検査・癌等の放射線療法に従事する医師や診療放射線技師は、わずかな量でも業務中、常に放射線を被ばくしている可能性がある。また、原子力発電所の事故が起きると、作業者の他、周辺地域の住民も一度に大量の放射線を被ばくする可能性がある。
放射線を被ばくすると、生体内に酸素ラジカルが発生し、発生した酸素ラジカルによって、細胞死、突然変異等の障害が引き起こされる。そして、放射線の吸収線量に応じて造血・免疫系、消化器系、呼吸器系、中枢神経系等に障害を生じ、これを原因として被ばく者は死亡する場合がある。
【０００３】
また、放射線療法を受ける癌患者等は、患部に大量の放射線を受けるが、この時、患部周辺の正常組織にも放射線を受けるため、放射線によって生じた酸素ラジカルにより造血・免疫系、消化器系等に障害を生じる場合がある。
【０００４】
このような放射線障害に対して、特許文献１では、２−ピラノン誘導体類が、免疫異常により減少することで知られている特定の血液細胞を増加させることを開示している。また、特許文献２では、１，２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンの投与によって、Ｘ線照射されたマウスの生存率が有意に増加することを開示している。しかしながら、これらの剤は、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害を防護する放射線障害防護剤としては依然として満足できるものではない。
【０００５】
また、本発明者らによるこれまでの研究により、一酸化窒素が、一過性の放射線抵抗性の獲得や放射線適応応答に関与することが明らかとなり（非特許文献１〜４）、特に、一酸化窒素発生剤である硝酸イソソルビドでwtp53細胞を処理すると一過性の放射線抵抗性を獲得することが明らかになった（非特許文献３）。
【０００６】
一方、ニトロプルシドは、公知の一酸化窒素発生剤であり、血圧降下剤として上市されている。また、ニトロプルシドの薬理効果として血中ホモシステイン濃度抑制作用（特許文献３）が知られている。しかし、この化合物が放射線障害を防護する剤として有用であるということは、知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平５−２１３７５８号公報
【特許文献２】特開平１−１３５７１８号公報
【特許文献３】特開平２００３−９５９５９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Int J Radiat Biol. 2000 Dec; 76(12): 1649-57
【非特許文献２】Radiat Res. 2001 Mar; 155(3): 387-96
【非特許文献３】Cancer Res. 2007 Sep; 67(18): 8574-9
【非特許文献４】Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2008 Jun; 71(2): 550-8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の事情に鑑み、本発明が解決しようとする課題は、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害を予防または治療し、生存率を上げる医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、従来、高血圧症や狭心症の治療薬として知られていたニトロプルシドが意外にも放射線障害の防護に有用であり、放射線障害を起こした個体の生存率を上昇させることを見出した。
【００１１】
更に、放射線障害からの防護に効果的な投与スケジュールについて検討した。放射線により発生する酸素ラジカルの反応産物の半減期は、通常５分〜２０時間といわれている。放射線照射の直後にニトロプルシドを投与することにより良好な放射線防護効果が認められたことから、ニトロプルシドから産生される一酸化窒素が、放射線により発生する酸素ラジカルを消去すると推測された。しかし、更に詳細な検討を加えたところ、意外にも、放射線照射直後のニトロプルシド投与に加えて、放射線による酸素ラジカルの発生が既に終息した時期（放射線照射から１日後以降）に更にニトロプルシドを追加投与することにより、放射線障害防護効果が増強されることを見出した。このような放射線障害防護効果の増強は、試行した一酸化窒素発生剤の中で、ニトロプルシドにのみ確認された。
【００１２】
以上の知見に基づき本発明が完成された。即ち、本発明は以下の通りである。
［１］ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
［２］放射線被ばくの前または後６０分以内に投与を開始する、［１］記載の放射線障害防護剤。
［３］放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内に更に１回以上追加投与する、［２］記載の放射線障害防護剤。
［４］放射線被ばくの翌日に追加投与する、［３］記載の放射線障害防護剤。
［５］放射線被ばくの２日後に更に追加投与する、［４］記載の放射線障害防護剤
［６］放射線被ばくから６〜１０日後に、更に追加投与する、[４]または［５］に記載の放射線障害防護剤。
［７］１回の投与あたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、［１］〜［６］のいずれかに記載の放射線障害防護剤。
［８］放射線障害が急性放射線障害である、［１］〜［７］のいずれかに記載の放射線障害防護剤。
［９］急性放射線障害が造血・免疫系障害である、［８］記載の放射線障害防護剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、造血・免疫系機能の改善効果、延命効果および生存率の向上効果が得られ、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害に有用な放射線障害防護剤を提供することができる。しかも、毒性が低く、低用量投与で放射線障害の防護能が得られる。したがって、短時間に放射線被ばくしたときの治療薬はもとより、癌等の放射線療法が長期に必要な患者、放射線関連の業務に携わる従事者に対しても放射線障害の軽減、健康維持の観点から有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】Ｘ線照射後にニトロプルシドナトリウムを投与（照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回）したマウスと、Ｘ線照射のみのマウスの、Ｘ線照射後の生存率を示す図である。
【図２】Ｘ線照射後にニトロプルシドナトリウムを投与（照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回）したマウスと、Ｘ線照射のみのマウスの、Ｘ線照射から１４日目における白血球、赤血球および血小板の値を示す図である。
【図３】Ｘ線照射直後にニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図４】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後の計２回、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図５】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後および２日後の計３回、ニトロプルシドナトリウムを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図６】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を含有する放射線障害防護剤を提供するものである。
【００１６】
本発明におけるニトロプルシドとは、式（Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）２−で表される化合物であり、一酸化窒素を放出する作用を有する。放射線に被ばくすると生体内には酸素ラジカルが発生し、様々な障害を引き起こす。理論的には拘束されないが、一酸化窒素は、放射線により発生する酸素ラジカルをラジカル反応により消去し得るため、ニトロプルシドは放射線障害防護能を有すると考えられる。
【００１７】
ニトロプルシドの薬理学的に許容される塩としては、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩などが挙げられる。
【００１８】
無機塩基との塩の好適な例としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。
【００１９】
有機塩基との塩の好適な例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。
【００２０】
ニトロプルシドの薬理学的に許容される塩の好適な例としては、ニトロプルシドのナトリウム塩（Ｎａ２Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）やカリウム塩（Ｋ２Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）が挙げられる。
【００２１】
ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩は、結晶であってもまた非結晶であってもよく、水和物および／または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および／または溶媒和物も「ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩」に包含される。化学量論量の水和物および凍結乾燥のような方法によって得られる種々の量の水を含む化合物も本発明の範囲内にある。ニトロプルシドのナトリウム塩やカリウム塩は、通常２水和物の形で利用される。
【００２２】
本発明における放射線とは、放射性物質から放出されるα線、β線、γ線や人工的に作り出したＸ線、陽子線、炭素線、中性線、電子線を含み、本発明における放射線障害とは、かかる放射線の被ばくや放射線療法に伴う障害であり、天然に存在する放射線源による被ばく（自然被ばく）は含まない。例えば、原発事故や核爆発による全身性の放射線被ばくに起因する急性および／または晩発性放射線障害、あるいは癌治療等の医療目的での放射線照射または放射線被ばく事故等による局所性の放射線被ばくによる急性および／または晩発性放射線障害が挙げられる。これらのうち、局所性または全身性の急性放射線障害の防護に用いることが好ましく、特に好ましくは造血・免疫系障害である。
また、本発明における防護は、このような放射線被ばくや放射線療法に伴う障害の予防および／または治療が含まれるが、治療に用いることが好ましい。
【００２３】
本発明の放射線障害防護剤は、ニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を活性成分として含有し、任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することもできる。また、放射線障害防護剤は、活性成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
【００２４】
薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、その具体例としては、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などが挙げられる。製剤化の際には、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加剤を用いてもよい。
【００２５】
また、投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、通常は、経皮、静脈内等の非経口または経口で投与される。非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。これら非経口剤には、更に、必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤等を添加することもできる。また、非経口に適当な製剤は、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を、注射用蒸留水または植物油に懸濁して調製したものであってもよく、この場合、必要に応じて基剤、懸濁化剤、粘調剤等を添加することができる。また、非経口に適当な製剤は、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩の粉末または凍結乾燥品を用時溶解する形であってもよく、必要に応じて賦形剤等を添加することができる。経口製剤としては、錠剤（舌下錠、口腔内崩壊剤を含む）、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、散剤、顆粒剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。これらの製剤は、速放性製剤または除放性製剤などの放出制御製剤（例、除放性マイクロカプセル）であってもよい。
【００２６】
なお、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩として、ニトロプルシドナトリウムを有効成分とする血圧降下剤（注射剤）が、すでに臨床において使用されているので〔ニトプロ（丸石製薬（株）製）、Ｎｉｔｒｏｐｒｅｓｓ（Ａｂｂｏｔｔ（株）製）、Ｎｉｐｒｉｄｅ（Ｒｏｃｈｅ（株）製）〕、本発明の放射線障害防護剤として、上記市販製剤をそのまま用いることができる。
【００２７】
本発明の放射線障害防護剤の投与対象は、哺乳動物であり、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ等が挙げられ、好ましくはヒトである。
【００２８】
本発明の放射線障害防護剤は、放射線を被ばくし、生体内で酸素ラジカルが発生する直前または直後に投与することが好ましく、具体的には、放射線被ばくの前または後６０分以内、好ましくは３０分以内、より好ましくは１５分以内、さらに好ましくは１０分以内、特に好ましくは５分以内に投与を開始する。また、放射線被ばくから、放射線による酸素ラジカルの発生が既に終息した時期（放射線被ばくから１日後以降）に更に追加投与をすることが、延命効果や生存率向上の観点から好ましい。具体的には、放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内（より好ましくは８日以内、特に好ましくは７日以内）に更に１回以上（例えば１回、好ましくは２回、より好ましくは３回）追加投与することが好ましい。投与と投与の間隔は、通常０．５日以上（例えば１日）であるが、放射線被ばくの前または後６０分以内の単独投与と比較して放射線障害防護効果が増強される限りこれに限定されない。例えば、追加投与を放射線被ばくの翌日に行うことが好ましく、放射線被ばくの翌日と２日後に行うことがさらに好ましい。
また、放射線被ばくの翌日、もしくは翌日と２日後の追加投与に加えて、放射線被ばくから６〜１０日後（好ましくは７日後）に、更に追加投与することが延命効果や生存率を更に向上させる観点から好ましい。具体的な投与スケジュールの例としては、放射線被ばくの前または後６０分以内、放射線被ばくから１日後、２日後および７日後の計４回投与を挙げることができる。
なお、上記の追加投与の記載は、それ以外の時期に投与することを排除するものではない。
【００２９】
本発明の放射線障害防護剤の投与量は、放射線障害の防護（予防または治療）の目的、患者の年齢や状態などの条件に応じて適宜選択可能であるが、生体内でのニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩の濃度が、投与直後に１５〜６０μＭ（好ましくは３０〜６０μＭ）となるように、投与することが好ましい。具体的に投与量は、ニトロプルシドが細胞外液に均等分配されると仮定して、平均細胞外液量、ニトロプルシドの分子量（２５１．９５、ニトロプルシドナトリウムを用いる場合は２９７．９５）および上記で設定した生体内でのニトロプルシドの投与直後の濃度から算出することができる。また平均細胞外液量は、細胞外液の比重を１．００として、ヒトの場合は体重（ｋｇ）×０．２、マウスの場合は体重（ｋｇ）×０．３５から得られる。ただし、血圧降下作用が生じないような低用量が好ましく、１回の投与あたりの投与量は、体重１ｋｇあたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ、さらに好ましくは１．８〜３．６ｍｇ、特に好ましくは２．３〜３．６ｍｇである。また、投与制限速度は、２．０〜２．５μｇ／ｋｇ／分である。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明について、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
以下に実施例で用いた材料をまとめて記載する。
【００３１】
＜正常ヒト線維芽細胞＞
ＡＧ１５２２細胞を用いた。ＡＧ１５２２細胞は、１５％ウシ胎仔血清および２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法培養液を用いて培養した。
＜正常マウス＞
８週齢のｊｃｌ：ＩＣＲマウスを用いた。ｊｃｌ：ＩＣＲマウスは市販固形飼料で飼育した。
＜ニトロプルシド＞
丸石製薬（株）製のニトプロ（登録商標、ニトロプルシドナトリウム注射液）を用いた。
＜硝酸イソソルビド＞
エーザイ（株）製のニトロール（登録商標）注を用いた。
＜ニトログリセリン＞
日本化薬（株）製のミリスロール（登録商標）注を用いた。
＜ニコランジル＞
富士製薬（株）製のニコランジル点滴静注用を用いた。
＜ニプラジロール＞
（株）ニッテン製のニプラジロール点眼液０．２５％「ニッテン」を用いた。
【００３２】
また、実施例における、「生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを投与した」とは、ニトロプルシドナトリウムが細胞外液に均等分配されると仮定して、平均細胞外液量、ニトロプルシドナトリウムの分子量（２９７．９５）および設定した生体内でのニトロプルシドナトリウムの投与直後の濃度（３０μＭ）から投与量を算出し、投与したものである。また、平均細胞外液量は、マウスの細胞外液の比重を１．００とし、マウスの体重（ｋｇ）×０．３５から求めた。
【００３３】
以下に試験方法および結果を記載する。
＜毒性試験＞
正常マウスに対して、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与するとともに（投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ）、この腹腔内投与（１回目投与）から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様にニトロプルシドナトリウムを更に投与し経過観察したが、マウスの死亡は認められなかった（計４回投与、ｎ＝３）。
また、ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールについて同様に行ったが、これらの薬剤に対して死亡するマウスは認められなかった。
【００３４】
＜Ｘ線照射後の生存率＞
１．ＡＧ１５２２細胞
(1)ＡＧ１５２２細胞培養ディッシュに対し、Ｘ線発生装置（ＨＩＴＥＸ １５０ ハイテックス（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率１Ｇｙ／ｍｉｎで３．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍのアルミニウム・フィルターを使用）したところ、生存率は約１０％（５枚のディッシュの平均値）であった。
(2)ＡＧ１５２２細胞培養ディッシュを数枚用意し、各ディッシュの培養液中のニトロプルシドナトリウム濃度が０．３μＭまたは１．０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを添加してから１２０分後、Ｘ線発生装置（ＨＩＴＥＸ １５０ ハイテックス（株）製）を用いて、各ディッシュに対しＸ線を線量率１Ｇｙ／ｍｉｎで３．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍのアルミニウム・フィルターを使用）したところ、生存率は、ニトロプルシドナトリウム濃度が０．３μＭの場合は４８％、１．０μＭの場合は５７％（いずれも５枚のディッシュの平均値である。）となり、ニトロプルシドナトリウムを添加しない(1)と比較して生存率は上昇した。
(3)ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールについて(2)と同様に行ったところ、いずれも生存率は１０％を超え（硝酸イソソルビドは２４％、ニコランジルは２７％、ニトログリセリンは１６％、ニプラジロールは２９％）、これらの薬剤を添加しない(1)と比較して生存率は上昇した。
【００３５】
２．正常マウス
試験１
(1)正常マウス（ｎ＝５１）に対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）したところ、生存率は約３０〜４０％であった（図１参照）。
(2)正常マウス（ｎ＝５１）に対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）した。次に、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるように、Ｘ線照射したマウスにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した（１回目投与、Ｘ線照射から５分後、投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ）。さらに、Ｘ線照射から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様にニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した。その結果、生存率は約８０％となり、ニトロプルシドナトリウムを投与しない(1)と比較して、大幅に生存率が向上した（図１参照）。
(3)また、(1)および(2)において、Ｘ線照射から１４日目に血液を採取し、血液検査を行ったところ（ｎ＝１０）、ニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与したネズミの白血球、赤血球および血小板の値が、投与しない場合と比較して上昇し、造血・免疫系機能の改善効果が認められた（図２参照）。
【００３６】
試験２
(1)正常マウスに対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）した。
(2)次に、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるように、(1)でＸ線照射したマウスにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した（計1回投与、ｎ＝３、Ｘ線照射から５分後、投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ、図３参照）。
(3)(2)と同様にして、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを、(1)のＸ線照射したマウスにそれぞれ腹腔内投与した（各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図３参照）。
【００３７】
試験３
試験３では、薬剤としてニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールを用いた。そして、試験２と同様にして、正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計２回投与、各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図４参照）。
【００３８】
試験４
試験４では薬剤としてニトロプルシドナトリウムを用いた。そして、試験２と同様にして、正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後および２日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計３回投与、ｎ＝３、図５参照）。
【００３９】
試験５
試験５では、薬剤として、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールを用いた。そして、試験２と同様にして正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計４回投与、各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図６参照）。
【００４０】
試験２〜５より、ニトロプルシドナトリウムは、使用した薬剤の中で高い延命効果を有していた（図３参照）。また、Ｘ線照射直後の投与に加えて、更に追加投与すると延命効果が大幅に向上した（図３〜図６参照）。特に、Ｘ線照射から１日後および２日後に連日して追加投与するとともに、Ｘ線照射から７日後に更に追加投与すると、Ｘ線照射から３０日後もマウスが３匹中２匹生存していた（図６参照）。
一方、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールは延命効果が認められたが、ニトロプルシドナトリウムのような高い延命効果は得られなかった（図３参照）。また、ニトロプルシドナトリウムのような追加投与による延命効果の向上は認められなかった（図４および図６参照）。
【００４１】
以上より、ニトロプルシドナトリウムは、毒性が低く、しかも低用量投与で造血・免疫系機能の改善効果、延命効果および生存率の向上効果が得られた。また、ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールと比較しても、優れた放射線障害防護能を有していた。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明の放射線障害防護剤は、造血・免疫系機能の改善効果、延命効果、生存率の向上効果を有し、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害の予防や治療に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線被ばくや放射線療法による放射線障害の防護に有用な医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
原子力発電所の作業者、非破壊検査員、放射性検査薬を扱う臨床検査技師ならびにレントゲン検査・癌等の放射線療法に従事する医師や診療放射線技師は、わずかな量でも業務中、常に放射線を被ばくしている可能性がある。また、原子力発電所の事故が起きると、作業者の他、周辺地域の住民も一度に大量の放射線を被ばくする可能性がある。
放射線を被ばくすると、生体内に酸素ラジカルが発生し、発生した酸素ラジカルによって、細胞死、突然変異等の障害が引き起こされる。そして、放射線の吸収線量に応じて造血・免疫系、消化器系、呼吸器系、中枢神経系等に障害を生じ、これを原因として被ばく者は死亡する場合がある。
【０００３】
また、放射線療法を受ける癌患者等は、患部に大量の放射線を受けるが、この時、患部周辺の正常組織にも放射線を受けるため、放射線によって生じた酸素ラジカルにより造血・免疫系、消化器系等に障害を生じる場合がある。
【０００４】
このような放射線障害に対して、特許文献１では、２−ピラノン誘導体類が、免疫異常により減少することで知られている特定の血液細胞を増加させることを開示している。また、特許文献２では、１，２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンの投与によって、Ｘ線照射されたマウスの生存率が有意に増加することを開示している。しかしながら、これらの剤は、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害を防護する放射線障害防護剤としては依然として満足できるものではない。
【０００５】
また、本発明者らによるこれまでの研究により、一酸化窒素が、一過性の放射線抵抗性の獲得や放射線適応応答に関与することが明らかとなり（非特許文献１〜４）、特に、一酸化窒素発生剤である硝酸イソソルビドでwtp53細胞を処理すると一過性の放射線抵抗性を獲得することが明らかになった（非特許文献３）。
【０００６】
一方、ニトロプルシドは、公知の一酸化窒素発生剤であり、血圧降下剤として上市されている。また、ニトロプルシドの薬理効果として血中ホモシステイン濃度抑制作用（特許文献３）が知られている。しかし、この化合物が放射線障害を防護する剤として有用であるということは、知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平５−２１３７５８号公報
【特許文献２】特開平１−１３５７１８号公報
【特許文献３】特開平２００３−９５９５９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Int J Radiat Biol. 2000 Dec; 76(12): 1649-57
【非特許文献２】Radiat Res. 2001 Mar; 155(3): 387-96
【非特許文献３】Cancer Res. 2007 Sep; 67(18): 8574-9
【非特許文献４】Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2008 Jun; 71(2): 550-8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の事情に鑑み、本発明が解決しようとする課題は、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害を予防または治療し、生存率を上げる医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、従来、高血圧症や狭心症の治療薬として知られていたニトロプルシドが意外にも放射線障害の防護に有用であり、放射線障害を起こした個体の生存率を上昇させることを見出した。
【００１１】
更に、放射線障害からの防護に効果的な投与スケジュールについて検討した。放射線により発生する酸素ラジカルの反応産物の半減期は、通常５分〜２０時間といわれている。放射線照射の直後にニトロプルシドを投与することにより良好な放射線防護効果が認められたことから、ニトロプルシドから産生される一酸化窒素が、放射線により発生する酸素ラジカルを消去すると推測された。しかし、更に詳細な検討を加えたところ、意外にも、放射線照射直後のニトロプルシド投与に加えて、放射線による酸素ラジカルの発生が既に終息した時期（放射線照射から１日後以降）に更にニトロプルシドを追加投与することにより、放射線障害防護効果が増強されることを見出した。このような放射線障害防護効果の増強は、試行した一酸化窒素発生剤の中で、ニトロプルシドにのみ確認された。
【００１２】
以上の知見に基づき本発明が完成された。即ち、本発明は以下の通りである。
［１］ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
［２］放射線被ばくの前または後６０分以内に投与を開始する、［１］記載の放射線障害防護剤。
［３］放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内に更に１回以上追加投与する、［２］記載の放射線障害防護剤。
［４］放射線被ばくの翌日に追加投与する、［３］記載の放射線障害防護剤。
［５］放射線被ばくの２日後に更に追加投与する、［４］記載の放射線障害防護剤
［６］放射線被ばくから６〜１０日後に、更に追加投与する、[４]または［５］に記載の放射線障害防護剤。
［７］１回の投与あたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、［１］〜［６］のいずれかに記載の放射線障害防護剤。
［８］放射線障害が急性放射線障害である、［１］〜［７］のいずれかに記載の放射線障害防護剤。
［９］急性放射線障害が造血・免疫系障害である、［８］記載の放射線障害防護剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、造血・免疫系機能の改善効果、延命効果および生存率の向上効果が得られ、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害に有用な放射線障害防護剤を提供することができる。しかも、毒性が低く、低用量投与で放射線障害の防護能が得られる。したがって、短時間に放射線被ばくしたときの治療薬はもとより、癌等の放射線療法が長期に必要な患者、放射線関連の業務に携わる従事者に対しても放射線障害の軽減、健康維持の観点から有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】Ｘ線照射後にニトロプルシドナトリウムを投与（照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回）したマウスと、Ｘ線照射のみのマウスの、Ｘ線照射後の生存率を示す図である。
【図２】Ｘ線照射後にニトロプルシドナトリウムを投与（照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回）したマウスと、Ｘ線照射のみのマウスの、Ｘ線照射から１４日目における白血球、赤血球および血小板の値を示す図である。
【図３】Ｘ線照射直後にニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図４】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後の計２回、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図５】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後および２日後の計３回、ニトロプルシドナトリウムを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【図６】Ｘ線照射直後とＸ線照射から１日後、２日後および７日後の計４回、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを投与したマウスと、Ｘ線照射のみで薬剤を投与しないマウス（ＮＴ）の、Ｘ線照射後の生存日数を示す図である。また、図におけるコントロールは、Ｘ線を照射せず、薬剤のみを投与スケジュールに従って投与したマウスである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を含有する放射線障害防護剤を提供するものである。
【００１６】
本発明におけるニトロプルシドとは、式（Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）２−で表される化合物であり、一酸化窒素を放出する作用を有する。放射線に被ばくすると生体内には酸素ラジカルが発生し、様々な障害を引き起こす。理論的には拘束されないが、一酸化窒素は、放射線により発生する酸素ラジカルをラジカル反応により消去し得るため、ニトロプルシドは放射線障害防護能を有すると考えられる。
【００１７】
ニトロプルシドの薬理学的に許容される塩としては、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩などが挙げられる。
【００１８】
無機塩基との塩の好適な例としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。
【００１９】
有機塩基との塩の好適な例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。
【００２０】
ニトロプルシドの薬理学的に許容される塩の好適な例としては、ニトロプルシドのナトリウム塩（Ｎａ２Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）やカリウム塩（Ｋ２Ｆｅ（ＣＮ）５ＮＯ）が挙げられる。
【００２１】
ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩は、結晶であってもまた非結晶であってもよく、水和物および／または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および／または溶媒和物も「ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩」に包含される。化学量論量の水和物および凍結乾燥のような方法によって得られる種々の量の水を含む化合物も本発明の範囲内にある。ニトロプルシドのナトリウム塩やカリウム塩は、通常２水和物の形で利用される。
【００２２】
本発明における放射線とは、放射性物質から放出されるα線、β線、γ線や人工的に作り出したＸ線、陽子線、炭素線、中性線、電子線を含み、本発明における放射線障害とは、かかる放射線の被ばくや放射線療法に伴う障害であり、天然に存在する放射線源による被ばく（自然被ばく）は含まない。例えば、原発事故や核爆発による全身性の放射線被ばくに起因する急性および／または晩発性放射線障害、あるいは癌治療等の医療目的での放射線照射または放射線被ばく事故等による局所性の放射線被ばくによる急性および／または晩発性放射線障害が挙げられる。これらのうち、局所性または全身性の急性放射線障害の防護に用いることが好ましく、特に好ましくは造血・免疫系障害である。
また、本発明における防護は、このような放射線被ばくや放射線療法に伴う障害の予防および／または治療が含まれるが、治療に用いることが好ましい。
【００２３】
本発明の放射線障害防護剤は、ニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を活性成分として含有し、任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することもできる。また、放射線障害防護剤は、活性成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
【００２４】
薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、その具体例としては、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などが挙げられる。製剤化の際には、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加剤を用いてもよい。
【００２５】
また、投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、通常は、経皮、静脈内等の非経口または経口で投与される。非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。これら非経口剤には、更に、必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤等を添加することもできる。また、非経口に適当な製剤は、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩を、注射用蒸留水または植物油に懸濁して調製したものであってもよく、この場合、必要に応じて基剤、懸濁化剤、粘調剤等を添加することができる。また、非経口に適当な製剤は、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩の粉末または凍結乾燥品を用時溶解する形であってもよく、必要に応じて賦形剤等を添加することができる。経口製剤としては、錠剤（舌下錠、口腔内崩壊剤を含む）、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、散剤、顆粒剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。これらの製剤は、速放性製剤または除放性製剤などの放出制御製剤（例、除放性マイクロカプセル）であってもよい。
【００２６】
なお、本発明におけるニトロプルシド、またはその薬理学的に許容される塩として、ニトロプルシドナトリウムを有効成分とする血圧降下剤（注射剤）が、すでに臨床において使用されているので〔ニトプロ（丸石製薬（株）製）、Ｎｉｔｒｏｐｒｅｓｓ（Ａｂｂｏｔｔ（株）製）、Ｎｉｐｒｉｄｅ（Ｒｏｃｈｅ（株）製）〕、本発明の放射線障害防護剤として、上記市販製剤をそのまま用いることができる。
【００２７】
本発明の放射線障害防護剤の投与対象は、哺乳動物であり、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ等が挙げられ、好ましくはヒトである。
【００２８】
本発明の放射線障害防護剤は、放射線を被ばくし、生体内で酸素ラジカルが発生する直前または直後に投与することが好ましく、具体的には、放射線被ばくの前または後６０分以内、好ましくは３０分以内、より好ましくは１５分以内、さらに好ましくは１０分以内、特に好ましくは５分以内に投与を開始する。また、放射線被ばくから、放射線による酸素ラジカルの発生が既に終息した時期（放射線被ばくから１日後以降）に更に追加投与をすることが、延命効果や生存率向上の観点から好ましい。具体的には、放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内（より好ましくは８日以内、特に好ましくは７日以内）に更に１回以上（例えば１回、好ましくは２回、より好ましくは３回）追加投与することが好ましい。投与と投与の間隔は、通常０．５日以上（例えば１日）であるが、放射線被ばくの前または後６０分以内の単独投与と比較して放射線障害防護効果が増強される限りこれに限定されない。例えば、追加投与を放射線被ばくの翌日に行うことが好ましく、放射線被ばくの翌日と２日後に行うことがさらに好ましい。
また、放射線被ばくの翌日、もしくは翌日と２日後の追加投与に加えて、放射線被ばくから６〜１０日後（好ましくは７日後）に、更に追加投与することが延命効果や生存率を更に向上させる観点から好ましい。具体的な投与スケジュールの例としては、放射線被ばくの前または後６０分以内、放射線被ばくから１日後、２日後および７日後の計４回投与を挙げることができる。
なお、上記の追加投与の記載は、それ以外の時期に投与することを排除するものではない。
【００２９】
本発明の放射線障害防護剤の投与量は、放射線障害の防護（予防または治療）の目的、患者の年齢や状態などの条件に応じて適宜選択可能であるが、生体内でのニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩の濃度が、投与直後に１５〜６０μＭ（好ましくは３０〜６０μＭ）となるように、投与することが好ましい。具体的に投与量は、ニトロプルシドが細胞外液に均等分配されると仮定して、平均細胞外液量、ニトロプルシドの分子量（２５１．９５、ニトロプルシドナトリウムを用いる場合は２９７．９５）および上記で設定した生体内でのニトロプルシドの投与直後の濃度から算出することができる。また平均細胞外液量は、細胞外液の比重を１．００として、ヒトの場合は体重（ｋｇ）×０．２、マウスの場合は体重（ｋｇ）×０．３５から得られる。ただし、血圧降下作用が生じないような低用量が好ましく、１回の投与あたりの投与量は、体重１ｋｇあたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ、さらに好ましくは１．８〜３．６ｍｇ、特に好ましくは２．３〜３．６ｍｇである。また、投与制限速度は、２．０〜２．５μｇ／ｋｇ／分である。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明について、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
以下に実施例で用いた材料をまとめて記載する。
【００３１】
＜正常ヒト線維芽細胞＞
ＡＧ１５２２細胞を用いた。ＡＧ１５２２細胞は、１５％ウシ胎仔血清および２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法培養液を用いて培養した。
＜正常マウス＞
８週齢のｊｃｌ：ＩＣＲマウスを用いた。ｊｃｌ：ＩＣＲマウスは市販固形飼料で飼育した。
＜ニトロプルシド＞
丸石製薬（株）製のニトプロ（登録商標、ニトロプルシドナトリウム注射液）を用いた。
＜硝酸イソソルビド＞
エーザイ（株）製のニトロール（登録商標）注を用いた。
＜ニトログリセリン＞
日本化薬（株）製のミリスロール（登録商標）注を用いた。
＜ニコランジル＞
富士製薬（株）製のニコランジル点滴静注用を用いた。
＜ニプラジロール＞
（株）ニッテン製のニプラジロール点眼液０．２５％「ニッテン」を用いた。
【００３２】
また、実施例における、「生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを投与した」とは、ニトロプルシドナトリウムが細胞外液に均等分配されると仮定して、平均細胞外液量、ニトロプルシドナトリウムの分子量（２９７．９５）および設定した生体内でのニトロプルシドナトリウムの投与直後の濃度（３０μＭ）から投与量を算出し、投与したものである。また、平均細胞外液量は、マウスの細胞外液の比重を１．００とし、マウスの体重（ｋｇ）×０．３５から求めた。
【００３３】
以下に試験方法および結果を記載する。
＜毒性試験＞
正常マウスに対して、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与するとともに（投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ）、この腹腔内投与（１回目投与）から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様にニトロプルシドナトリウムを更に投与し経過観察したが、マウスの死亡は認められなかった（計４回投与、ｎ＝３）。
また、ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールについて同様に行ったが、これらの薬剤に対して死亡するマウスは認められなかった。
【００３４】
＜Ｘ線照射後の生存率＞
１．ＡＧ１５２２細胞
(1)ＡＧ１５２２細胞培養ディッシュに対し、Ｘ線発生装置（ＨＩＴＥＸ １５０ ハイテックス（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率１Ｇｙ／ｍｉｎで３．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍのアルミニウム・フィルターを使用）したところ、生存率は約１０％（５枚のディッシュの平均値）であった。
(2)ＡＧ１５２２細胞培養ディッシュを数枚用意し、各ディッシュの培養液中のニトロプルシドナトリウム濃度が０．３μＭまたは１．０μＭとなるようにニトロプルシドナトリウムを添加してから１２０分後、Ｘ線発生装置（ＨＩＴＥＸ １５０ ハイテックス（株）製）を用いて、各ディッシュに対しＸ線を線量率１Ｇｙ／ｍｉｎで３．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍのアルミニウム・フィルターを使用）したところ、生存率は、ニトロプルシドナトリウム濃度が０．３μＭの場合は４８％、１．０μＭの場合は５７％（いずれも５枚のディッシュの平均値である。）となり、ニトロプルシドナトリウムを添加しない(1)と比較して生存率は上昇した。
(3)ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールについて(2)と同様に行ったところ、いずれも生存率は１０％を超え（硝酸イソソルビドは２４％、ニコランジルは２７％、ニトログリセリンは１６％、ニプラジロールは２９％）、これらの薬剤を添加しない(1)と比較して生存率は上昇した。
【００３５】
２．正常マウス
試験１
(1)正常マウス（ｎ＝５１）に対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）したところ、生存率は約３０〜４０％であった（図１参照）。
(2)正常マウス（ｎ＝５１）に対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）した。次に、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるように、Ｘ線照射したマウスにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した（１回目投与、Ｘ線照射から５分後、投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ）。さらに、Ｘ線照射から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様にニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した。その結果、生存率は約８０％となり、ニトロプルシドナトリウムを投与しない(1)と比較して、大幅に生存率が向上した（図１参照）。
(3)また、(1)および(2)において、Ｘ線照射から１４日目に血液を採取し、血液検査を行ったところ（ｎ＝１０）、ニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与したネズミの白血球、赤血球および血小板の値が、投与しない場合と比較して上昇し、造血・免疫系機能の改善効果が認められた（図２参照）。
【００３６】
試験２
(1)正常マウスに対し、Ｘ線発生装置（ＭＢＲ−１５２０Ａ−３ 日立メディコ（株）製）を用いて、Ｘ線を線量率０．５Ｇｙ／ｍｉｎで６．５Ｇｙ照射（０．５ｍｍアルミニウム/０．３ｍｍ銅・フィルターを使用）した。
(2)次に、生体内での投与直後の濃度が３０μＭとなるように、(1)でＸ線照射したマウスにニトロプルシドナトリウムを腹腔内投与した（計1回投与、ｎ＝３、Ｘ線照射から５分後、投与量：２．８〜３．２ｍｇ／ｋｇ、図３参照）。
(3)(2)と同様にして、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンまたはニプラジロールを、(1)のＸ線照射したマウスにそれぞれ腹腔内投与した（各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図３参照）。
【００３７】
試験３
試験３では、薬剤としてニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールを用いた。そして、試験２と同様にして、正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計２回投与、各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図４参照）。
【００３８】
試験４
試験４では薬剤としてニトロプルシドナトリウムを用いた。そして、試験２と同様にして、正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後および２日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計３回投与、ｎ＝３、図５参照）。
【００３９】
試験５
試験５では、薬剤として、ニトロプルシドナトリウム、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールを用いた。そして、試験２と同様にして正常マウスにＸ線照射するとともに、Ｘ線照射したマウスに対して薬剤を投与し（１回目投与）、Ｘ線照射から１日後、２日後および７日後に１回目投与と同様に薬剤を投与した（計４回投与、各薬剤につきそれぞれｎ＝３、図６参照）。
【００４０】
試験２〜５より、ニトロプルシドナトリウムは、使用した薬剤の中で高い延命効果を有していた（図３参照）。また、Ｘ線照射直後の投与に加えて、更に追加投与すると延命効果が大幅に向上した（図３〜図６参照）。特に、Ｘ線照射から１日後および２日後に連日して追加投与するとともに、Ｘ線照射から７日後に更に追加投与すると、Ｘ線照射から３０日後もマウスが３匹中２匹生存していた（図６参照）。
一方、硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールは延命効果が認められたが、ニトロプルシドナトリウムのような高い延命効果は得られなかった（図３参照）。また、ニトロプルシドナトリウムのような追加投与による延命効果の向上は認められなかった（図４および図６参照）。
【００４１】
以上より、ニトロプルシドナトリウムは、毒性が低く、しかも低用量投与で造血・免疫系機能の改善効果、延命効果および生存率の向上効果が得られた。また、ニトロプルシドナトリウムと同じく一酸化窒素を放出する作用を有する硝酸イソソルビド、ニコランジル、ニトログリセリンおよびニプラジロールと比較しても、優れた放射線障害防護能を有していた。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明の放射線障害防護剤は、造血・免疫系機能の改善効果、延命効果、生存率の向上効果を有し、放射線被ばくや放射線療法に伴う障害の予防や治療に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
【請求項２】
放射線被ばくの前または後６０分以内に投与を開始する、請求項１記載の放射線障害防護剤。
【請求項３】
放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内に更に１回以上追加投与する、請求項２記載の放射線障害防護剤。
【請求項４】
放射線被ばくの翌日に追加投与する、請求項３記載の放射線障害防護剤。
【請求項５】
放射線被ばくの２日後に更に追加投与する、請求項４記載の放射線障害防護剤。
【請求項６】
放射線被ばくから６〜１０日後に、更に追加投与する、請求項４または５に記載の放射線障害防護剤。
【請求項７】
１回の投与あたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の放射線障害防護剤。
【請求項８】
放射線障害が急性放射線障害である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の放射線障害防護剤。
【請求項９】
急性放射線障害が造血・免疫系障害である、請求項８記載の放射線障害防護剤。
【請求項１】
ニトロプルシドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する、放射線障害防護剤。
【請求項２】
放射線被ばくの前または後６０分以内に投与を開始する、請求項１記載の放射線障害防護剤。
【請求項３】
放射線被ばくから１日後以降且つ１０日以内に更に１回以上追加投与する、請求項２記載の放射線障害防護剤。
【請求項４】
放射線被ばくの翌日に追加投与する、請求項３記載の放射線障害防護剤。
【請求項５】
放射線被ばくの２日後に更に追加投与する、請求項４記載の放射線障害防護剤。
【請求項６】
放射線被ばくから６〜１０日後に、更に追加投与する、請求項４または５に記載の放射線障害防護剤。
【請求項７】
１回の投与あたり、ニトロプルシドとして０．９〜３．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の放射線障害防護剤。
【請求項８】
放射線障害が急性放射線障害である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の放射線障害防護剤。
【請求項９】
急性放射線障害が造血・免疫系障害である、請求項８記載の放射線障害防護剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１１−２０７８４１（Ｐ２０１１−２０７８４１Ａ）
【公開日】平成２３年１０月２０日（２０１１．１０．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−７９１５０（Ｐ２０１０−７９１５０）
【出願日】平成２２年３月３０日（２０１０．３．３０）
【出願人】（５０４１４５３２０）国立大学法人福井大学 (287)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１０月２０日（２０１１．１０．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月３０日（２０１０．３．３０）
【出願人】（５０４１４５３２０）国立大学法人福井大学 (287)
【Ｆターム（参考）】
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