新しい毛包の形成、はげ頭症の治療、及び除毛をするための方法
【課題】頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する
【解決手段】本発明に係る方法は、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する。
【解決手段】本発明に係る方法は、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象のはげ頭の治療、及び新しい毛包の形成をするための方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
小胞の新生は、出生後の、新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）の形成と定義される。人間は、生まれたときは、ＨＦを完全に備えている。しかし、はげ頭症の初期では、ＨＦの大きさと成長特性は変化する。また、はげ頭症の末期又は恒久的な瘢痕性脱毛症では、最終的に退化し消失する。そのため、一般的なはげ頭症、及びあまり一般的ではない脱毛症（例えば、円板状紅斑性狼瘡、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬、及び他の瘢痕性脱毛症）では、新しいＨＦを形成することが望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、対象のはげ頭症を治療する、及び新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成する方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【０００４】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【０００５】
他の実施形態では、本発明は、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法を提供する。
【０００６】
他の実施形態では、前記はげ頭症は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）によって引き起こされたはげ頭症である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０００７】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）タンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物又は因子のいずれかを接触させるステップとを含み、それによって、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法を提供する。
【０００８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法を提供する。
【０００９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００１０】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】表皮剥離によって新しい毛包（ＨＦ）が形成される様子を示す。ＨＦの成長進行段階を、左、中央及び右の図に示す。左の図における矢印は、毛芽を示す。黒く染色された細胞は、バルジ内のＨＦ幹細胞の子孫である。
【図２】ＢｒｄＵ標識された表皮剥離後のＨＦを示す。ＨＦ成長の進行段階を、左、中央及び右の図に示す。
【図３】上皮再形成の直後、創傷部位にはＨＦが存在しなかった。左の図は、創傷形成１０日後の創傷部位の上面図であり、右の図は、組織切片である。
【図４】創傷形成１２日後の毛芽の外観である。図中の矢印は、毛芽を示す。
【図５】ＥＤＩＨＮ（Epidermal disruption-Induced HF neogenesis：表皮破壊によって誘導されるＨＦ新生）によって形成された毛芽は、Ｋ１７を発現する。２つの異なる毛芽を、左右の図に示す。
【図６】ＥＤＩＨＮによって形成された毛芽は、真皮乳頭（dermal papilla：ＤＰ）細胞を含有することが、アルカリフォスファターゼ（alkaline phosphatase：ＡＰ）染色によって分った。図中の矢印は、ＤＰ細胞を示す。左の図は、毛芽を示す。右の図は、さらなる成長段階にあるＨＦを示す。
【図７】ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦと、胎児のＨＦとを、組織学的に比較した図である。上側における左端、左から２番目、左から３番目、及び右端の図は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦの成長進行段階を示す。下側における左、中央、及び右の図は、胎児のＨＦの成長進行段階を示す。
【図８】胎児のＨＦ成長のマーカーを、ＥＤＩＨＮによって誘起する状態を示す。左の図はＬｅｆ１、中央の図はｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（Ｗｎｔ）１０ｂ、右の図はソニック・ヘッジホッグ（Ｓｈｈ）を示す。ＨＦ組織は、矢印で示されている。
【図９】ＢｒｄＵパルス標識によって分った、ＥＤＩＨＮの間の増殖活性を示す。ＨＦの成長進行段階を、左、中央及び右の図に示す。
【図１０】ＥＤＩＨＮによる、ＨＦ標識であるＳ１００Ａ３の誘起。左の図は、ＨＦ軸に平行な組織切片であり、右の図は、毛包の断面図である。
【図１１】創傷形成の２５日後（左の図）及び４５日後（右の図）における新しい毛の成長を示す。
【図１２】ＥＤＩＨＮのホールマウント分析の概略図である。
【図１３】追跡期間後にＢｒｄＵ標識を保持することから分るように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦのバルジ内で幹細胞が再生する。左の図は低倍率（×５０）の場合であり、右の図は高倍率（×４００）の場合である。
【図１４Ａ】ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦの幹細胞は、Ｋ１５を発現する。左側の上の図は、創傷部の上面図である。下側の左端の図は表皮のホールマウントである。下側の左から２番目の図は、左端の図と同じであるが、白色光下で観察されている。右の図は、組織切片を示す。
【図１４Ｂ】新生ＨＦは、次の毛周期へ進む。
【図１５】ＥＤＩＨＮによる新しいＨＦの形成を示す概略図である。
【図１６】２１日齢マウスでは、創傷形成１１日後に、新しいＨＦは見られない。上の図は、肉眼検査を示す。左下の図は、真皮のＡＰ染色を示す。右下の図は、表皮のＫ１７染色を示す。
【図１７】創傷形成の１４日後には、真皮のＡＰ染色（左の図）及び表皮のＫ１７染色（右の図）から分るように、新しいＨＦが形成され始めた。メインの図の倍率は１０倍であり、挿入図の倍率は８０倍である。
【図１８】創傷形成の１７日後には、ＨＦはさらに成長した。左の図は、真皮のＡＰ染色を示し、右の図は、表皮のＫ１７染色を示す。メインの図の倍率は１０倍であり、挿入図の倍率は８０倍である。
【図１９】除毛後に創傷形成したマウス（左右の図における左の３匹のマウス）は、創傷形成しただけのマウス（左右の図における右の４匹のマウス）と同様に創傷が閉じた。左の図は、創傷形成直後の写真である。右の図は、創傷形成１０日後の写真である。
【図２０】創傷形成前に除毛によって成長期を誘起すると、ＥＤＩＨＮの効率が増大する。Ａ：左下の図は、真皮のＡＰ染色を示す。右下の図は、表皮のＫ１７染色を示す。Ｂ：除毛によるＥＤＩＨＮの増大を示すグラフである。
【図２１Ａ】切除創傷形成７日後に免疫不全（重症複合免疫不全）マウスに移植された人間の皮膚でのＥＤＩＨＮを示す。図中の矢印は、新しいＨＦを示す。
【図２１Ｂ】人間皮膚の移植片の表皮剥離は、ＥＤＩＨＮを誘導する。成人の皮膚（Ｗ）をマウスに移植した後に剥離し、７日後にＳ１００Ａ６（第１、第２、及び第４の横列）又はＳ１００Ａ４（第３の横列）の染色によって検査した。毛芽（Hair germs：ＨＧ）及び真皮乳頭（dermal papilla：ＤＰ）が示されている。比較のために、正常に成長した毛包を有する人間の胎児の皮膚（Ｆ）が示されている。対照として、創傷形成１７日後のマウスの皮膚が示されている（左上の図）。
【図２２Ａ−１】ＤＮＡチップ分析によって評価されるように、活性化されたＨＦ細胞では、転写物は、少なくとも２倍上方制御されている。活性化されていない（「ベースライン」）及び活性化された（「ｅｘｐｔ」）試料における上方制御された転写物の平均値及び標準誤差、並びに、活性化された試料の値と活性化されていない試料の値との間の倍率変化及び相違を示す。
【図２２Ａ−２】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−３】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−４】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−５】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−６】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−７】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−８】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ｂ−１】活性化されていない及び活性化された細胞における上方制御された転写物の未加工データである。「Ｃｔｒｌ」は活性化されていない細胞を意味し、「Ｈｉｇｈ−ｄｅｐ」は活性化された細胞を意味する。
【図２２Ｂ−２】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−３】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−４】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−５】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｃ−１】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−２】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−３】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−４】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−５】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−６】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２３Ａ】ＥＤＩＨＮ後に、Ｄｋｋ１発現マウスの皮膚に観察された、色素沈着した新生毛包を示す。倍率は３．２倍である。
【図２３Ｂ】ＥＤＩＨＮ後に、Ｄｋｋ１発現マウスの皮膚に観察された、色素沈着した新生毛包を示す。倍率は８倍である。
【図２４】対照マウスには、色素が沈着したＨＦは見られなかった。
【図２５Ａ】ＥＧＦは、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成を阻害する。ＥＧＦを投与したマウスにおける皮膚の創傷部位のＫ１７染色を示す。倍数は４倍である。
【図２５Ｂ】Ａに示した皮膚を高倍率像である（×１０）。
【図２５Ｃ】創傷形成後にＥＧＦを投与しなかった対照マウスにおける皮膚の創傷部位のＫ１７染色を示す。倍率は４倍である。
【図２５Ｄ】Ｃに示した皮膚の高倍率像である（×１０）。
【図２６Ａ】ＥＧＦ受容体阻害剤（ＡＧ１４７８）を投与すると、対照と比較してより多くの及びより大きなＨＦが形成される。上の図は、２匹の対照マウスの皮膚を示す。外側の点線は、収縮及び治癒後の創傷領域の範囲を示す。内側の点線は、新生領域を示す。下の図は、ＥＧＦ受容体阻害剤を投与した２匹のマウスの皮膚を示す。左右の図の囲まれた領域における左側の小さな領域以外は、創傷領域及び新生領域の大部分は一致する。
【図２６Ｂ】Ｇ１４７８を注入したマウスの創傷領域では、大きな毛包が発達した。左の図は、互いに近接する３つの大きな毛包を有する、Ｋ１７染色された表皮を示す。右の図は、大きな合体したＤＰ領域を有する、ＡＰ染色された真皮を示す。スケールバーは、２００μｍである。
【図２７Ａ】Ｋ１４−Ｗｎｔ７ａマウスにおける毛包形成の増加を示す図である。左の図は、Ｗｎｔ７ａトランスジェニック・マウスである。右の図は、対照（野生型）マウスである。
【図２７Ｂ】４週齢マウスを使用した実験の結果を定量化したグラフである。
【図２７Ｃ】３週齢マウスを使用した実験の結果を定量化したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、対象のはげ頭症を治療する、及び新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成する方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【００１３】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００１４】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＨＦの数を増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＨＦの数を増加させる方法を提供する。
【００１５】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮におけるＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法を提供する。他の実施形態では、前記因子は、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦＲの阻害剤である。他の実施形態では、前記因子は、ヘッジホッグ・タンパク質、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記因子は、アンドロゲンのアンタゴニストである。他の実施形態では、前記因子は、その他の、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２０】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記前駆細胞は、ＨＦ幹細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、表皮細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、真皮乳頭細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、結合組織鞘細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の、毛包細胞へ分化することができる細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、毛包細胞へ分化することができる前駆細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２３】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、毛包細胞へ分化することができる前駆細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。
【００２４】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、間葉細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、ここに列挙した他の種類の誘導細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の誘導細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２５】
ここで用いる「接触」という用語は、他の実施形態では、頭皮や眉などに、化合物、因子、細胞などを接触させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、頭皮や眉などに埋め込むことを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、頭皮や眉などに注入することを意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で公知の他の種類の接触を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２６】
「分化の促進」は、他の実施形態では、分化する細胞の割合を増加させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、分化する細胞の、皮膚の単位面積当たりの細胞数を増加させることを意味する。他の実施形態では、分化の促進は、皮膚環境で活性がある。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２７】
「中立表皮細胞（Uncommitted epidermal cell）」は、他の実施形態では、表皮幹細胞を意味する。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ由来細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、ＨＦ細胞への分化が誘導される当該技術分野で公知の他の種類の細胞である。
【００２８】
分化の結果生じる「ＨＦ細胞」は、他の実施形態では、ＨＦ幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、真皮乳頭細胞（dermal papilla cell）である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、毛球細胞（bulb cell）である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、マトリクス細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、毛幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、内毛根鞘細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、外毛根鞘細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、メラニン幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、メラニン細胞である。中立表皮細胞及びＨＦ細胞の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２９】
他の実施形態では、本発明は、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を接触させるステップとを含み、それによって頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記はげ頭症は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）によって引き起こされたはげ頭症である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３０】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、液剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、クリームの形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、軟膏の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、徐放製剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、リポソーム封入製剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、直接的に注入される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、当該技術分野で公知の他の方法によって使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３１】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）の阻害剤である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＥＧＦ受容体の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３２】
本明細書中で説明されるように、ＥＧＦを含有する（ＥＧＦの注入によって）１つ又は複数の経路は、ＨＦの形成を阻止する（実施例１１）。したがって、実施例１２で実証されるように、前記経路のアンタゴナイズにより、ＨＦの形成は増加する。
【００３３】
他の実施形態では、ＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤は、パニツムマブ（panitumumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＧ１４７８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ニモツズマブ（nimotuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＧＦ又はＥＧＦＲと結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＨｕＭａｘ ＥＧＦＲ（登録商標）（Genmab, Copenhagen, Denmark）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、セツキシマブ（cetuximab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＩＭＣ １１Ｆ８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、マツズマブ（matuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＳＣ １００である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＬＴ １１０である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０３２である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＢＭＳ ５９９６２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＭＤＸ ２１４である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０４１である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３４】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ゲフィチニブ（gefitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、エルロチニブ（erlotinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、カナーニチブ（canertinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、レフルノミドである。他の実施形態では、前記阻害剤は、Ａ７７ １７２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ペリニチブ（pelitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＺＤ １８３９である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＣＬ ３８７７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＫＩ ７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、バンデタニブ（vandetanib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３５】
他の実施形態では、ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ポテト（ＰＣｌ）タンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックに由来するカルボキシペプチダーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、Sproutyタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、Argosタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、leftyタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦ又はＥＧＦＲを識別する抗体又はその断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦ又はＥＧＦＲと結合してその活性を減少させる小分子阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＣＲＭ１９７である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ImClone Systems, New York. NY）である。
【００３６】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮におけるＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３９】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、βカテニンタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、βカテニンタンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記βカテニンタンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４０】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４２】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４３】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記ＦＧＦタンパク質又はＦＧＦ受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤である。他の実施形態では、抑制される前記タンパク質は、ＦＧＦ結合タンパク質である。他の実施形態では、抑制される前記タンパク質は、ＦＧＦ−ｂｐｌである。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４４】
本明細書中で説明されるように、ＥＧＦ及びその受容体は、ここで使用される条件下で、ＨＦ幹細胞の分化に対して上方制御される（実施例９）。さらに、ＦＧＦ−ｂｐｌは、ここで使用される条件下で、ＨＦ幹細胞の分化に対して下方制御される。したがって、ＥＧＦ及びその受容体は、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する。
【００４５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、エクトジスプラシン（ectodysplasin）・タンパク質（「ｅｄａ」又は「外胚葉性タンパク質」とも表記される）である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記エクトジスプラシン・タンパク質は、Ｅｄａ−Ａ１である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン受容体（「ｅｄａｒ」とも表記される）である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン受容体の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記エクトジスプラシン・タンパク質又はエクトジスプラシン受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４６】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるｅｄａタンパク質は、次の配列を有する。ＭＧＹＰＥＶＥＲＲＥＬＬＰＡＡＡＰＲＥＲＧＳＱＧＣＧＣＧＧＡＰＡＲＡＧＥＧＮＳＣＬＬＦＬＧＦＦＧＬＳＬＡＬＨＬＬＴＬＣＣＹＬＥＬＲＳＥＬＲＲＥＲＧＡＥＳＲＬＧＧＳＧＴＰＧＴＳＧＴＬＳＳＬＧＧＬＤＰＤＳＰＩＴＳＨＬＧＱＰＳＰＫＱＱＰＬＥＰＧＥＡＡＬＨＳＤＳＱＤＧＨＱＭＡＬＬＮＦＦＦＰＤＥＫＰＹＳＥＥＥＳＲＲＶｉｍＮＫＲＳＫＳＮＥＧＡＤＧＰＶＫＮＫＫＩＣＧＫＫＡＧＰＰＧＰＮＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＩＰＧＩＰＧＩＰＧＴＴＶＭＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＬＱＧＰＳＧＡＡＤＫＡＧＴＲＥＮＱＰＡＷＨＬＱＧＱＧＳＡＩＱＶＫＮＤＬＳＧＧＶＬＮＤＷＳＲＩＴＭＮＰＫＶＦＫＬＨＰＲＳＧＥＬＥＶＬＶＤＧＴＹＦＩＹＳＱＶＥＶＹＹＩＮＦＴＤＦＡＳＹＥＶＶＶＤＥＫＰＦＬＱＣＴＲＳＩＥＴＧＫＴＮＹＮＴＣＹＴＡＧＶＣＬＬＫＡＲＱＫＩＡＶＫＭＶＨＡＤＩＳＩＮＭＳＫＨＴＴＦＦＧＡＩＲＬＧＥＡＰＡＳ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１３９９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７４）。他の実施形態では、前記ｅｄａタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００１００５６０９、ＮＭ＿００１００５６１０、ＮＭ＿００１００５６１１、ＮＭ＿００１００５６１２、ＮＭ＿００１００５６１３、ＮＭ＿００１００５６１４、ＮＭ＿００１００５６１５、ＡＦ０４０６２８、ＡＦ０６１１９４、ＡＦ０６１１９３、ＡＦ０６１１９２、ＡＦ０６１１９１、ＡＦ０６１１９０、ＡＦ０６１１８９、及びＡＦ０６０９９９から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ｅｄａタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ｅｄａタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４７】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるｅｄａｒタンパク質は、次の配列を有する。ＭＡＨＶＧＤＣＴＱＴＰＷＬＰＶＬＶＶＳＬＭＣＳＡＲＡＥＹＳＮＣＧＥＮＥＹＹＮＱＴＴＧＬＣＱＥＣＰＰＣＧＰＧＥＥＰＹＬＳＣＧＹＧＴＫＤＥＤＹＧＣＶＰＣＰＡＥＫＦＳＫＧＧＹＱＩＣＲＲＨＫＤＣＥＧＦＦＲＡＴＶＬＴＰＧＤＭＥＮＤＡＥＣＧＰＣＬＰＧＹＹＭＬＥＮＲＰＲＮＩＹＧＭＶＣＹＳＣＬＬＡＰＰＮＴＫＥＣＶＧＡＴＳＧＡＳＡＮＦＰＧＴＳＧＳＳＴＬＳＰＦＱＨＡＨＫＥＬＳＧＱＧＨＬＡＴＡＬＩＩＡＭＳＴＩＦＩＭＡＩＡＩＶＬＩＩＭＦＹＩＬＫＴＫＰＳＡＰＡＣＣＴＳＨＰＧＫＳＶＥＡＱＶＳＫＤＥＥＫＫＥＡＰＤＮＶＶＭＦＳＥＫＤＥＦＥＫＬＴＡＴＰＡＫＰＴＫＳＥＮＤＡＳＳＥＮＥＱＬＬＳＲＳＶＤＳＤＥＥＰＡＰＤＫＱＧＳＰＥＬＣＬＬＳＬＶＨＬＡＲＥＫＳＡＴＳＮＫＳＡＧＩＱＳＲＲＫＫＩＬＤＶＹＡＮＶＣＧＶＶＥＧＬＳＰＴＥＬＰＦＤＣＬＥＫＴＳＲＭＬＳＳＴＹＮＳＥＩＡＶＶＫＴＷＲＨＬＡＥＳＦＧＬＫＲＤＥＩＧＧＭＴＤＧＭＱＬＦＤＲＩＳＴＡＧＹＳＩＰＥＬＬＴＫＬＶＱＩＥＲＬＤＡＶＥＳＬＣＡＤＩＬＥＷＡＧＶＶＰＰＡＳＱＰＨＡＡＳ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＢＣ０９３８７２；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７５）。他の実施形態では、前記ｅｄａｒタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０９３８７０、ＢＣ０３４９１９、ＮＭ＿０２１７８３、ＮＭ＿０２２３３６、ＡＹ１５２７２４、ＡＦ２９８８１２、ＡＨ００８０７７、ＡＦ１３０９９６、及びＡＦ１３０９８８から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ｅｄａｒタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ｅｄａｒタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４８】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ノギン・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ノギン・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記ノギン・タンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４９】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるノギン・タンパク質は、次の配列を有する。ＭＥＲＣＰＳＬＧＶＴＬＹＡＬＶＷＬＧＬＲＡＴＰＡＧＧＱＨＹＬＨＩＲＰＡＰＳＤＮＬＰＬＶＤＬＩＥＨＰＤＰＩＦＤＰＫＥＫＤＬＮＥＴＬＬＲＳＬＬＧＧＨＹＤＰＧＦＭＡＴＳＰＰＥＤＲＰＧＧＧＧＧＡＡＧＧＡＥＤＬＡＥＬＤＱＬＬＲＱＲＰＳＧＡＭＰＳＥＩＫＧＬＥＦＳＥＧＬＡＱＧＫＫＱＲＬＳＫＫＬＲＲＫＬＱＭＷＬＷＳＱＴＦＣＰＶＬＹＡＷＮＤＬＧＳＲＦＷＰＲＹＶＫＶＧＳＣＦＳＫＲＳＣＳＶＰＥＧＭＶＣＫＰＳＫＳＶＨＬＴＶＬＲＷＲＣＱＲＲＧＧＱＲＣＧＷＩＰＩＱＹＰＩＩＳＥＣＫＣＳＣ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００５４５０；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７６）。他の実施形態では、前記ノギン・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０３４０２７及びＵ３１２０２から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ノギン・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ノギン・タンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５０】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５１】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号ＮＭ＿０００１９３に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、Ｌ３８５１８及びＮＰ＿０００１８４から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、当該技術分野で公知の他のヘッジホッグ配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、当該技術分野では公知の他のソニック・ヘッジホッグ配列を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５２】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質のアンタゴニストである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストである。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５３】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ＴＧＦ−β１タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号ＢＣ０００１２５に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ００１１８０、ＢＣ０２２２４２、及びＮＭ＿０００６６０から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β１タンパク質は、当該技術分野で公知の他のＴＧＦ−βタンパク質を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５４】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号Ｊ０３２４１に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００３２３９、ＢＣ０１８５０３、ＢＴ００７２８７、及びＸ１４１４９から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、当該技術分野で公知の他のＴＧＦ−β３タンパク質を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、前記中立表皮細胞に直接的に作用する。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、間葉細胞を介して前記中立表皮細胞に作用する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５６】
他の実施形態では、前記間葉細胞は、皮膚凝縮細胞（dermal condensate cell）である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、ＤＰ細胞である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、他の種類の細胞、又は皮膚凝縮ＤＰ系統（dermal condensate-DP lineage）における分化段階である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の間葉細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５７】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＥＧＦＲは、次の配列を有する。ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＢＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＫＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００５２２８；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７７）。他の実施形態では、前記ＥＧＦＲは、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿２０１２８２、ＮＭ＿２０１２８３、ＮＭ＿２０１２８４、ＢＣ０９４７６１、ＡＦ２８８７３８、ＡＹ５８８２４６、ＡＹ５７３０６１、Ｘ１７０５４、ＡＦ１２５２５３、Ｕ４８７２２、Ｋ０３１９３、及びＡＹ６９８０２４から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＥＧＦＲは、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ＥＧＦＲの生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５８】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＥＧＦは、次の配列を有する。ＭＬＬＴＬＩＩＬＬＰＶＶＳＫＦＳＦＶＳＬＳＡＰＱＨＷＳＣＰＥＧＴＬＡＧＮＧＮＳＴＣＶＧＰＡＰＦＬＩＦＳＨＧＮＳＩＦＲＩＤＴＥＧＴＮＹＥＱＬＶＶＤＡＧＶＳＶＩＭＤＦＨＹＮＥＫＲＩＹＷＶＤＬＥＲＱＬＬＱＲＶＦＬＮＧＳＲＱＥＲＶＣＮＩＥＫＮＶＳＧＭＡＩＮＷＩＮＥＥＶＩＷＳＮＱＱＥＧＩＩＴＶＴＤＭＫＧＮＮＳＨＩＬＬＳＡＬＫＹＰＡＮＶＡＶＤＰＶＥＲＦＩＦＷＳＳＥＶＡＧＳＬＹＲＡＤＬＤＧＶＧＶＫＡＬＬＥＴＳＥＫＩＴＡＶＳＬＤＶＬＤＫＩＩＬＦＷＩＱＹＮＲＥＧＳＮＳＬＩＣＳＣＤＹＤＧＧＳＶＨＩＳＫＨＰＴＱＨＮＬＦＡＭＳＬＦＧＤＲＩＦＹＳＴＷＫＭＫＴＩＷＩＡＮＫＩｉＴＧＫＤＭＶＲＩＮＬＨＳＳＦＶＰＬＧＥＬＫＶＶＨＰＬＡＱＰＫＡＥＤＤＴＷＥＰＥＱＫＬＣＫＬＲＫＧＮＣＳＳＴＶＣＧＱＤＬＱＳＨＬＣＭＣＡＥＧＹＡＬＳＲＤＲＫＹＣＥＤＶＮＥＣＡＦＷＮＨＧＣＴＬＧＣＫＮＴＰＧＳＹＹＣＴＣＰＶＧＦＶＬＬＰＤＧＫＲＣＨＱＬＶＳＣＰＲＮＶＳＥＣＳＨＤＣＶＬＴＳＥＧＰＬＣＦＣＰＥＧＳＶＬＥＲＤＧＫＴＣＳＧＣＳＳＰＤＮＧＧＣＳＱＬＣＶＰＬＳＰＶＳＷＥＣＤＣＦＰＧＹＤＬＱＬＤＥＫＳＣＡＡＳＧＰＱＰＦＬＬＦＡＮＳＱＤＩＲＨＭＨＦＤＧＴＤＹＧＴＬＬＳＱＱＭＧＭＶＹＡＬＤＨＤＰＶＥＮＫＩＹＦＡＨＴＡＬＫＷＩＥＲＡＮＭＤＧＳＱＲＥＲＬＩＥＥＧＶＤＶＰＥＧＬＡＶＤＷＩＧＲＲＦＹＷＴＤＲＧＫＳＬＩＧＲＳＤＬＮＧＫＲＳＫＩＩＴＫＥＮＩＳＱＰＲＧＩＡＶＨＰＭＡＫＲＬＦＷＴＤＴＧＩＮＰＲＩＥＳＳＳＬＱＧＬＧＲＬＶＩＡＳＳＤＬＩＷＰＳＧＩＴＩＤＦＬＴＤＫＬＹＷＣＤＡＫＱＳＶＩＥＭＡＮＬＤＧＳＫＲＲＲＬＴＱＮＤＶＧＨＰＦＡＶＡＶＦＥＤＹＶＷＦＳＤＷＡＭＰＳＶＩＲＶＮＫＲＴＧＫＤＲＶＲＬＱＧＳＭＬＫＰＳＳＬＶＶＶＨＰＬＡＫＰＧＡＤＰＣＬＹＱＮＧＧＣＥＨＩＣＫＫＲＬＧＴＡＷＣＳＣＲＥＧＦＭＫＡＳＤＧＫＴＣＬＡＬＤＧＨＱＬＬＡＧＧＥＶＤＬＫＮＱＶＴＰＬＤＤＬＳＫＴＲＶＳＥＤＮＩＴＥＳＱＨＭＬＶＡＥＩＭＶＳＤＱＤＤＣＡＰＶＧＣＳＭＹＡＲＣＩＳＥＧＥＤＡＴＣＱＣＬＫＧＦＡＧＤＧＫＬＣＳＤＩＤＥＣＥＭＧＶＰＶＣＰＰＡＳＳＫＣＩＮＴＥＧＧＹＶＣＲＣＳＥＧＹＱＧＤＧＩＨＣＬＤＩＤＥＣＱＬＧＶＨＳＣＧＥＮＡＳＣＴＮＴＥＧＧＹＴＣＭＣＡＧＲＬＳＥＰＧＬＩＣＰＤＳＴＰＰＰＨＬＲＥＤＤＨＨＹＳＶＲＮＳＤＳＥＣＰＬＳＨＤＧＹＣＬＨＤＧＶＣＭＹＩＥＡＬＤＫＹＡＣＮＣＶＶＧＹＩＧＥＲＣＱＹＲＤＬＫＷＷＥＬＲＨＡＧＨＧＱＱＱＫＶＩＶＶＡＶＣＷＶＬＶＭＬＬＬＬＳＬＷＧＡＨＹＹＲＴＱＫＬＬＳＫＮＰＫＮＰＹＥＥＳＳＲＤＶＲＳＲＲＰＡＤＴＥＤＧＭＳＳＣＰＱＰＷＦＶＶＩＫＥＨＱＤＬＫＮＧＧＱＰＶＡＧＥＤＧＱＡＡＤＧＳＭＱＰＴＳＷＲＱＥＰＱＬＣＧＭＧＴＥＱＧＣＷＩＰＶＳＳＤＫＧＳＣＰＱＶＭＥＲＳＦＨＭＰＳＹＧＴＱＴＬＥＧＧＶＥＫＰＨＳＬＬＳＡＮＰＬＷＱＱＲＡＬＤＰＰＨＱＭＥＬＴＱ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１９６３；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７８）。他の実施形態では、前記ＥＧＦは、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０９３７３１、ＡＹ５４８７６２、及びＸ０４５７１から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＥＧＦは、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ＥＧＦの生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５９】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるβカテニンタンパク質は、次の配列を有する。ＭＡＴＱＡＤＬＭＥＬＤＭＡＭＥＰＤＲＫＡＡＶＳＨＷＱＱＱＳＹＬＤＳＧＩＨＳＧＡＴＴＴＡＰＳＬＳＧＫＧＮＰＥＥＥＤＶＤＴＳＱＶＬＹＥＷＥＱＧＦＳＱＳＦＴＱＥＱＶＡＤＩＤＧＱＹＡＭＴＲＡＱＲＶＲＡＡＭＦＰＥＴＬＤＥＧＭＱＩＰＳＴＱＦＤＡＡＨＰＴＮＶＱＲＬＡＥＰＳＱＭＬＫＨＡＶＶＮＬＩＮＹＱＤＤＡＥＬＡＴＲＡＩＰＥＬＴＫＬＬＮＤＥＤＱＶＶＶＮＫＡＡＶＭＶＨＱＬＳＫＫＥＡＳＲＨＩＭＲＳＰＱＭＶＳＡＴＶｌｌＴＭＱＮＴＮＤＶＥＴＡＲＣＴＡＧＴＬＨＮＬＳＨＨＲＥＧＬＬＡＩＦＫＳＧＧＩＰＡＬＶＫＭＬＧＳＰＶＤＳＶＬＦＹＡＩＴＴＬＨＮＬＬＬＨＱＥＧＡＫＭＡＶＲＬＡＧＧＬＱＫＭＶＡＬＬＮＫＴＮＶＫＦＬＡＩＴＴＤＣＬＱＩＬＡＹＧＮＱＥＳＫＬＩＩＬＡＳＧＧＰＱＡＬＶＮＩＭＲＴＹＴＹＥＫＬＬＷＴＴＳＲＶＬＫＶＬＳＶＣＳＳＮＫＰＡＩＶＥＡＧＧＭＱＡＬＧＬＨＬＴＤＰＳＱＲＬＶＱＮＣＬＷＴＬＲＮＬＳＤＡＡＴＫＱＥＧＭＥＧＬＬＧＴＬＶＱＬＬＧＳＤＤＩＮＶＶＴＣＡＡＧＩＬＳＮＬＴＣＮＮＹＫＭＭＭＶＣＱＶＧＧＩＥＡＬＶＲＴＶＬＲＡＧＤＲＥＤＩＴＥＰＡＩＣＡＬＲＨＬＴＳＲＨＱＥＡＥＭＡＱＮＡＶＲＬＨＹＧＬＰＶＶＶＫＬＬＨＰＰＳＨＷＰＬＩＫＡＴＶＧＬＩＩＷＬＡＬＣＰＡＮＨＡＰＬＲＥＱＧＡＩＰＲＬＶＱＬＬＶＲＡＨＱＤＴＱＲＲＴＳＭＧＧＴＱＱＱＦＶＥＧＶＲＭＥＥＩＶＥＧＣＴＧＡＬＨＩＬＡＲＤＶＨＮＲＩＶＩＲＧＬＮＴＩＰＬＦＶＱＬＬＹＳＰＩＥＮＩＱＲＶＡＡＧＶＬＣＥＬＡＱＤＫＥＡＡＥＡＩＥＡＥＧＡＴＡＰＬＴＥＬＬＨＳＲＮＥＧＶＡＴＹＡＡＡＶＬＦＲＭＳＥＤＫＰＱＤＹＫＫＲＬＳＶＥＬＴＳＳＬＦＲＴＥＰＭＡＷＮＥＴＡＤＬＧＬＤＩＧＡＱＧＥＰＬＧＹＲＱＤＤＰＳＹＲＳＦＨＳＧＧＹＧＱＤＡＬＧＭＤＰＭＭＥＨＥＭＧＧＨＨＰＧＡＤＹＰＶＤＧＬＰＤＬＧＨＡＱＤＬＭＤＧＬＰＰＧＤＳＮＱＬＡＷＦＤＴＤＬ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１９０４；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７９）。他の実施形態では、前記βカテニンタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０５８９２６、Ｘ８７８３８、ＡＦ１３００８５、ＡＢ０６２２９２、Ｚ１９０５４、及びＮＰ＿００１８９５から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記βカテニンタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、βカテニンタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６０】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＷｎｔタンパク質は、次の配列を有する。ＭＮＲＫＡＲＲＣＬＧＨＬＦＬＳＬＧＭＶＹＬＷＧＧＦＳＳＷＡＬＧＡＳＵＣＮＫＩＰＧＬＡＰＲＱＲＡＩＣＱＳＧＳＱＭＧＬＤＥＣＱＦＱＦＲＮＧＲＷＮＣＳＡＬＧＥＲＴＶＦＧＫＥＬＫＶＧＳＲＥＡＡＦＴＹＡＨＡＡＧＶＡＨＡＩＴＡＡＣＴＱＧＮＬＳＤＣＧＣＤＫＥＫＱＧＱＹＨＲＤＥＧＷＫＷＧＧＣＳＡＤＩＲＹＧＩＧＦＡＫＶＦＶＤＡＲＥＩＫＱＮＡＲＴＬＭＮＬＨＮＮＥＡＧＲＫＩＬＥＥＮＭＫＬＥＣＫＣＨＧＶＳＧＳＣＴＴＫＴＣＷＴＴＬＰＱＦＲＥＬＧＹＶＬＫＤＫＹＮＥＡＶＨＶＥＰＶＲＡＳＲＮＫＲＰＴＦＬＫＩＫＫＰＬＳＹＲＫＰＭＤＴＤＬＶＹＩＥＫＳＰＮＹＣＥＥＤＰＶＴＧＳＶＧＴＱＧＲＡＣＮＫＴＡＰＱＡＳＧＣＤＬＭＣＣＧＲＧＹＮＴＨＱＹＡＲＶＷＱＣＮＣＫＦＨＷＣＣＹＶＫＣＮＴＣＳＥＲＴＥＭＹＴＣＫ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＢＣ００８８１１；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２８０）。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００４６２５、Ｄ８３１７５、Ｕ５３４７６、及びＮＰ＿００４６１６から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ｂタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７タンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７ａタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６１】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、遺伝子銀行に登録されているＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するリボ核酸（ribonucleic acid：ＲＮＡ）分子によってエンコードされたタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列と相同である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列のアイソフォームである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を増加させる。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを増加させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６２】
本明細書中で説明されるように、表３に示した転写物（実施例８；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２）、それらがエンコードするタンパク質、及び前記タンパク質が関与する経路は、ＨＦ幹細胞の活性化に大きく貢献する。そのため、ここで使用される条件下で、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化によって、毛髪の成長期を誘導することができる。したがって、表３に示した前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６３】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、遺伝子銀行に登録されているＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列と相同である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列のアイソフォームである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を増加させる。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを増加させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６４】
本明細書中で説明されるように、表４に示した転写物（実施例９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７）、それらがエンコードするタンパク質、及び前記タンパク質が関与する経路は、ここで使用される条件下で、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化に大きく貢献する。したがって、表４に示した前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を減少させる化合物又は因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを減少させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６６】
本発明の発見により実証されるように、表５に示した転写物（実施例９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３）、それらがエンコードするタンパク質、前記タンパク質が関与する経路は、ここで使用される条件下で、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化誘導を阻止するのに大きく貢献する。したがって、表５に示した前記転写物、タンパク質及び経路の抑制は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の抑制は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６７】
他の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２７３に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子、又は前記配列をエンコードしている核酸によってエンコードされたタンパク質を調節する化合物は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子又は前記配列をエンコードしている核酸によってエンコードされたタンパク質を調節する化合物を投与する前に投与される。他の実施形態では、前記２つの化合物は、同時に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６８】
ある実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２７３から選択されたＲＮＡ配列によってエンコードされたタンパク質又はそれを調節する化合物は、それらのＨＦ形成又は発毛促進の効果をさらに高めるために、前記ＲＮＡ配列によってエンコードされた他のタンパク質又はそれを調節する化合物を投与する前に投与される。他の実施形態では、ｗｎｔ経路は、ヘッジホッグ経路の前に刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、重複方法（overlapping fashion）によって刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、同時に刺激される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６９】
他の実施形態では、本発明に係る方法でのＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、転写機構を介して行われる（例えば、ＲＮＡの発現の活性化）。他の実施形態では、ＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、翻訳機構によって行われる。他の実施形態では、ＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、翻訳後機構によって行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７０】
他の実施形態では、本発明に係る方法で使用される核酸分子は、本発明に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子をエンコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子である。
【００７１】
ある実施形態では、本発明に係るＲＮＡ分子は、ＨＦ再生に関与するタンパク質をエンコードする。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、それ自体が触媒的に活性である（例えばリボザイムなど）。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７２】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する化合物又は因子は、細胞のプラコードを誘導する化合物又は因子である。本明細書中で説明されるように、細胞のプラコードを誘導する化合物又は因子は、実施例の欄で例示するように、ＥＤＩＨＮを誘導する。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＨＦ発達のプラコード段階で作用する。
【００７３】
他の実施形態では、前記化合物又は因子は、中立表皮細胞のＨＦへの分化を阻害する生物学的要因を抑制する。
【００７４】
本発明に係る方法及び組成物の他の実施形態では、上記の化合物又は因子の１つを含有する組成物が投与される。上記の種類の化合物、因子及び組成物の各々は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７５】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、ミノキシジル（minoxidil）を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００７６】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、ミノキシジルを接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００７７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するためのミノキシジルの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に前記ミノキシジルを接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００７８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するためのミノキシジルの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に前記ミノキシジルを接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００７９】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）ＥＧＦタンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかを接触させるステップとを含み、それによって、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法を提供する。
【００８０】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、光による皮膚剥離である。他の実施形態では、前記表皮破壊は、非瘢痕性方法である。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子の投与は、ＨＦ形成を抑制する。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、治療の数日以内に投与される。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、治療の約１日以内に投与される。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、Ｄｋｋｌタンパク質のためにここで列挙された任意の時間形態にしたがって投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域から毛包を除去する医薬組成物を製造するための、（ｉ）ＥＧＦタンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００８２】
他の実施形態では、本発明に係る組成物又は方法は、人間の皮膚に使用される、他の実施形態では、本発明に係る組成物又は方法は、発毛を望まない領域に使用される。他の実施形態では、前記領域は、顔である。他の実施形態では、前記領域は、ビキニ領域である。他の実施形態では、前記領域は、脚部である。他の実施形態では、前記領域は、腕部である。他の実施形態では、前記領域は、胸部である。
【００８３】
本発明に係る方法及び組成物に使用される「阻害剤」は、他の実施形態では、標的であるタンパク質又は生物学的因子と結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、薬理学的阻害剤である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他の薬理学的阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する
【００８４】
本発明に係る方法における表皮を破壊するステップは、他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域を剥離することにより行われる。他の実施形態では、「剥離（abrading）」という用語は、表皮剥離（abrasion）を引き起こす行為を意味する。他の実施形態では、「剥離」という用語は、こすり取ることを意味する。他の実施形態では、「剥離」という用語は、摩擦によってすり減らすことを意味する。本明細書中で説明されるように、表皮剥離は、ここで使用される条件下で、新たにＨＦ新生を引き起こす。他の実施形態では、表皮層は破壊される。
【００８５】
ある実施形態では、「剥離（abrasion）」は、「表皮剥離（abrading）」と同じ意味である。他の実施形態では、「表皮剥離」は、頭皮又は皮膚における、皮膚が除去された領域を意味する。他の実施形態では、「表皮剥離」は、頭皮又は皮膚における、表皮及び真皮が除去された領域を意味する。「剥離」及び「表皮剥離」の各定義は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８６】
他の実施形態では、本明細書中で説明されるように、使用される条件下で、本発明に係る方法での表皮破壊は、皮膚の背部を、毛包を再生する胎児様状態（embryonic-like state）に変換する。他の実施形態では、皮膚の新しいＨＦの数及びサイズを操作可能な間に、次の機会が得られる。他の実施形態では、この機会における、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する化合物又は因子の投与によって、より大きくより数の多いＨＦの再生が引き起こされる。剥離された皮膚におけるＨＦの形態は、初期のＨＦの形態と類似している（実施例１〜２、及びその後の実施例）、発現したマーカーも同様に類似している。
【００８７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を促進する方法であって、本発明に係る方法を実施することにより、対象の前記頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を促進する方法を提供する。実施例３で実証されているように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦは、発毛させることができる。したがって、本発明に係る方法は、発毛を促進するのに使用することができる。
【００８８】
「ＥＤＩＨＮ」は、表皮層の破壊によって誘起されたＨＦ新生を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮剥離によって誘起されたＨＦ新生を意味する。他の実施形態では、この用語は、創傷（wounding）によって誘発されたＨＦ再生を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮層の破壊、及びその後の、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子の投与によって誘発されたＨＦ再生を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８９】
他の実施形態では、本発明は、化合物のインビボでのＨＦ形成を調節する能力を試験する方法であって、（ａ）第１の対象における、前記化合物と接触させた第１の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、（ｂ）前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第１のＨＦ形成）を測定するステップと、（ｃ）前記第１の対象又はそれとは異なる第２の対象における、前記化合物と接触させていない第２の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、（ｄ）前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第２のＨＦ形成）を測定するステップと、（ｅ）前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成との差が示す前記化合物のインビボでのＨＦ形成調節能力を調べるために、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成とを比較するステップとを含む方法（実施例）。
【００９０】
他の実施形態では、本発明は、インビボにおける化合物の発毛促進能力を試験する方法であって、前記化合物と接触させた第１の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第１のＨＦ形成）を測定するステップと、前記化合物と接触させていない第２の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第２のＨＦ形成）を測定するステップと、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成との差が示すインビボにおける前記化合物の発毛促進能力を調べるために、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成とを比較するステップとを含む方法を提供する。
【００９１】
ある実施形態では、本発明に係る化合物の試験方法は、統計的に有意なサンプル数が得られるまで、複数の対象を使用して繰り返される。
【００９２】
本発明に係る化合物の試験方法の他の実施形態では、前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第１の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。他の実施形態では、前記対象は、新しいＨＦの形成を必要としている対象である。他の実施形態では、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第１の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。他の実施形態では、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第２の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９３】
他の実施形態では、本発明に係る方法における切除創傷は、手術道具を使用して作成される。ある実施形態では、前記手術道具は、皮膚生検パンチである（実施例２）。他の実施形態では、前記切除創傷は、冷凍処理又は冷凍損傷（cryoinjury）によって作成される。冷凍処理又は冷凍損傷の使用は当該技術分野で公知であり、例えば、傷ついた皮膚の皮膚専門医によって使用される。ある実施形態では、冷凍処理又は冷凍損傷は、水膨れをもたらす。他の実施形態では、前記水脹れは、薬剤及び細胞を再表皮化領域へ導入ための「チェンバー（chamber）」として使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９４】
他の実施形態では、本発明に係る方法における前記切除創傷は、手術で縫合されない。他の実施形態では、本発明に係る方法における前記切除創傷は、治癒する前又は創傷が作成されてから一定期間は、包帯と接触しない。他の実施形態では、前記切除創傷は、治癒する前又は創傷が作成されてから一定期間は、軟膏と接触されない。他の実施形態では、前記切除創傷は、２次的な意図で治癒される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９５】
他の実施形態では、本発明に係る方法での対象は、人間である。本明細書中で説明されるように、人間の皮膚は、ＥＤＩＨＮに対してマウスの皮膚と同様に反応する（実施例７）。他の実施形態では、前記対象は、男性である。他の実施形態では、前記対象は、女性である。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野で公知の他の種類の対象である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９６】
他の実施形態では、前記対象は、大人である。ある実施形態では、「大人」は、１８歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、２０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、２５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、３０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、３５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、４０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、４５歳以上を意味する。
【００９７】
他の実施形態では、前記対象は、高齢者である。他の実施形態では、「高齢者」は、４５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、５０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、５５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、６０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、６５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、７０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、７５歳以上を意味する。
【００９８】
他の実施形態では、前記第１の対象、又は、前記第１の対象、及び適用される場合は前記第１の対象と前記第２の対象の両方は、実験動物である。他の実施形態では、前記対象は、マウスである。他の実施形態では、前記対象は、ラットである。他の実施形態では、前記対象は、アレチネズミ（gerbil）である。他の実施形態では、前記対象は、ハムスターである。他の実施形態では、前記対象は、テンジクネズミ（guinea pig）である。他の実施形態では、前記対象は、ウサギである。他の実施形態では、前記対象は、ブタである。他の実施形態では、前記対象は、イヌである。他の実施形態では、前記対象は、ネコである。他の実施形態では、前記対象は、霊長類である。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野で公知の他の実験動物である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９９】
他の実施形態では、前記対象は、はげ頭症（balding）を含む疾病又は疾患がある。他の実施形態では、前記対象は、はげ頭症を含む疾病又は疾患はない。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、男性型はげ頭症である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、女性型はげ頭症である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、円板状エリテマトーデス（discoid lupus erythematosis）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、先天性貧毛（congenital hypotrichosis）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、毛孔性扁平苔癬（lichen planopilari）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、瘢痕性脱毛症（scarring alopecia）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、当該技術分野で公知の他のはげ頭症を含む疾病又は疾患である。
【０１００】
他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの大部分は、毛周期の休止期にある。実施例５〜６の結果は、（ａ）ＥＤＩＨＮは、前記休止期において、頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を元の状態に戻せること、及び、（ｂ）休止期でのＥＤＩＨＮの効率は、剥離又は創傷を作成する前の除毛によって高めることができることを示す。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの６０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの７０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの８０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの９０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの大部分は、毛周期の休止期にない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０１】
本発明に係る方法及び組成物の他の実施形態では、前記第１のステップ（例えば、表皮破壊）は、前記第２のステップ（例えば、活性化合物、因子、細胞等の投与）の３〜１２日前に行われる。他の実施形態では、前記間隔は、４〜１２日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１２日である。他の実施形態では、前記間隔は、４〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜９日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜８日である。他の実施形態では、前記間隔は、７〜８日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、７〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、約１週間である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０２】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＷｎｔタンパク質の活性又は発現を抑制するステップをさらに含む。本明細書中で説明されるように、Ｗｎｔ活性を抑制することにより、本発明に係る方法によって形成されたＨＦの色素沈着が誘起される。他の実施形態では、前記Ｗｎｔ活性又は発現を抑制するステップは、表皮破壊の約１０日以内に行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔ活性又は発現を抑制するステップは、第２のステップの前（例えば、ＨＦ細胞の分化を促進する化合物又は因子を投与する前）に行われる。
【０１０３】
他の実施形態では、本発明は、毛髪の色素沈着を誘起する方法であって、前記毛髪の毛包でのＷｎｔタンパク質の発現を抑制するステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、当該技術分野で公知の他のＷｎｔタンパク質である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０４】
他の実施形態では、本発明は、対象の色素沈着した頭毛は眉毛の成長を誘起する方法であって、本発明に係る方法に従って頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成するステップと、前記毛包でのＷｎｔタンパク質の発現を抑制するステップとを含み、それによって、対象の色素沈着した頭毛は眉毛の成長を誘起する方法を提供する。
【０１０５】
他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、当該技術分野で公知の他のＷｎｔ阻害剤の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制する前記ステップは、表皮破壊の直後又は少し後に行われる。他の実施形態では、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起する前記ステップは、表皮破壊の直後又は少し後に行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、表皮破壊の時点で行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、表皮破壊の時点で行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、毛包の形成の数日前に行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、毛包の形成の数日前に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０６】
他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約８日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約８日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約９日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約９日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約１０日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約１０日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約１２日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約１２日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、表皮再形成の期間に行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、表皮再形成の期間に行われる。他の実施形態では、Ｄｋｋ１タンパク質の発現は、数日後に停止する。他の実施形態では、数日後でのＤｋｋ１タンパク質の発現停止は、Ｗｎｔタンパク質の発現を誘起する又は可能にする。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、剥離又は創傷した約９日後に誘起される。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、表皮再形成期間の後に誘起される。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、新しいＨＦの形成に必要である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０７】
他の実施形態では、「数日」は、約１日である。他の実施形態では、「数日」は、約２日である。他の実施形態では、「数日」は、約３日である。他の実施形態では、「数日」は、約５日である。他の実施形態では、「数日」は、約７日である。他の実施形態では、「数日」は、約１０日である。他の実施形態では、「数日」は、約１２日である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０８】
他の実施形態では、本発明に係る方法における接触ステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、化合物、ＲＮＡ、タンパク質などを直接的に接触させることを含む。他の実施形態では、本発明に係る方法における接触ステップは、化合物、ＲＮＡ又はタンパク質を前記頭皮、眉又は瘢痕領域に生物学的処理によって搬送した後に、対象の他の部位又は組織を介して前記頭皮、眉又は瘢痕領域に間接的に接触させることを含む。前記生物学的処理としては、例えば、液体（血液、リンパ液、間質液など）内での拡散、能動輸送又は循環などがある。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０９】
他の実施形態では、本発明に係る方法における表皮破壊は、頭皮、眉又は瘢痕領域から皮膚組織をさらに除去する。他の実施形態では、前記表皮破壊は、頭皮、眉又は瘢痕領域から皮膚組織を除去しない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１０】
表皮又は表皮層の「破壊（disrupting）は、他の実施形態では、表皮又は表皮層の一部の除去を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層を損傷させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層を穿孔することを意味する。他の実施形態では、表皮層の一部だけを除去する。他の実施形態では、表皮層全体を除去する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層の剥離を意味する（実施例）。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層の損傷を意味する（実施例）。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１１】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、サンドペーパーなどの道具によって行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、レーザーによって行われる。他の実施形態では、前記レーザーは、フラクセルレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、ＣＯ２レーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、エキシマレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、経表皮損傷の誘導が可能な他の種類のレーザーである。他の実施形態では、前記表皮破壊は、フェルトホイール（felt wheel）を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、手術道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野で公知の他の表皮破壊が可能な道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、マイクロ皮膚剥離装置を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、熱傷処置を含む。
【０１１２】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊、及び、前記表皮の毛包間領域の破壊を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊を含むが、前記表皮の毛包間領域の破壊は含まない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１３】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、光ベースの方法を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、可視光線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、赤外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、紫外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、常用電圧照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、Ｘ線照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野では公知の他の種類の照射を含む。
【０１１４】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、機械的手段を用いて行われる。他の実施形態では、「機械的手段」は、剥離である。他の実施形態では、前記用語は、損傷を意味する。他の実施形態では、前記用語は、超音波を意味する。他の実施形態では、前記用語は、無線周波数を意味する。他の実施形態では、前記用語は、ａｂ電気処理、又は電流の使用を意味する。他の実施形態では、前記用語は、エレクトロポレーションを意味する。他の実施形態では、前記用語は、切除を意味する。他の実施形態では、前記用語は、テープストリッピング（tape-stripping）を意味する。他の実施形態では、前記用語は、マイクロ皮膚剥離を意味する。他の実施形態では、前記用語は、ピール（peel）の使用を意味する。他の実施形態では、前記用語は、当該技術分野で公知の他の種類の機械的手段を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１５】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、化学物質による処理を含む。他の実施形態では、前記化学物質は、フェノールである。他の実施形態では、前記化学物質は、トリクロロ酢酸である。他の実施形態では、前記化学物質は、アスコルビン酸である。他の実施形態では、前記化学物質は、当該技術分野で公知の他の化学物質である。
【０１１６】
表皮破壊の各方法及び種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１７】
他の実施形態では、本発明に係る方法では、表皮外傷（epidermal trauma）が使用される。
【０１１８】
表皮剥離及び表皮外傷の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１９】
他の実施形態では、本発明に係る方法における表皮破壊は、少なくとも約１〜１．５ｃｍの擦傷を生じる。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約１ｃｍの幅である。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約１．５ｃｍの幅である。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約２ｃｍの幅である。擦傷の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２０】
他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、表皮破壊の後に、包帯と接触しない。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、表皮破壊の後に、軟膏と接触しない。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、通常は治療を促進するために擦傷又は創傷に使用される薬物、装置、軟膏などと接触しない状態で、一定期間に渡って治療される。他の実施形態では、前記一定期間は、表皮破壊の治療に要する時間である。他の実施形態では、前記一定期間は、２日〜３週間の任意の長さ及び範囲の時間である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２１】
ある実施形態では、「後（following）」は、約２日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約３日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約４日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約５日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約７日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約１０日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約２週間後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約３週間後を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２２】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域を除毛（depilation）するステップをさらに含む。本明細書中で説明されるように、実施例６の結果は、擦傷又は創傷誘導前の除毛によって、ＥＤＩＨＮの効率が向上することを示す。
【０１２３】
他の実施形態では、除毛は、脱毛である。他の実施形態では、除毛は、ワックス脱毛のステップを含む。他の実施形態では、除毛は、プラッキング（plucking）のステップを含む。他の実施形態では、除毛は、研磨材の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、レーザーの使用を含む。他の実施形態では、除毛は、電解の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、機械装置の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、チオグリコール酸の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、当該技術分野では公知の他の方法の使用を含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２４】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、局所レチノイドを投与するステップをさらに含む。ある実施形態では、前記局所レチノイドは、頭皮、眉又は瘢痕領域における休止中（休止期）のＨＦの成長期の開始を誘導する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２５】
他の実施形態では、前記付加的ステップ（除毛又はレチノイドの投与）は、表皮を破壊するステップの前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、表皮を破壊するステップの後、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子を添加する前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、分化を促進する化合物又は因子の添加と同時に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、分化を促進する化合物又は因子の添加後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２６】
他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２日〜約３週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約３日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約４日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約１週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約１０日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約３週間前に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２７】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導することができる誘導細胞を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、ＨＦ幹細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２８】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、真皮乳頭細胞（dermal papilla cell）である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、毛包乳頭細胞（follicular papilla cell）である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、皮膚鞘細胞で（dermal sheath cell）ある。他の実施形態では、前記誘導細胞は、ＨＦ幹細胞で上方制御されるように、例えば、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを活性化する因子をエンコードしている遺伝子によって遺伝子組み換えがされた細胞である。ある実施形態では、前記因子は、ヘッジホッグである。他の実施形態では、前記因子は、ＤＰ細胞タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（ｗｎｔ）である。他の実施形態では、前記因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、骨形態形成タンパク質（bone morphogenic protein：ＢＭＰ）である。他の実施形態では、前記因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）である。他の実施形態では、前記因子は、形質転換成長因子β（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ−β）タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ノイロトロピンである。他の実施形態では、前記因子は、表皮細胞のＨＦ細胞への分化誘導に寄与する当該技術分野で公知の他の因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２９】
他の実施形態では、前記誘導細胞が、ＨＦ幹細胞で下方制御されるように、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを抑制する因子をエンコードしている遺伝子によって、遺伝子的に操作される。他の実施形態では、前記誘導細胞が、ＨＦ幹細胞で上方制御されるように、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを活性化する因子をエンコードしている遺伝子によって、遺伝子的に操作される。
【０１３０】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、自己細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、同種細胞である。
【０１３１】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、間充織幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、中胚葉前駆細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、造血幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、胚幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、胚性癌腫細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、米国特許出願第２００３／０２０１８１５号に開示された細胞種類の１つである。他の実施形態では、前記誘導細胞は、当該技術分野では公知の他の種類の表皮細胞に対しての誘導的性質を有する細胞である。誘導細胞の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３２】
他の実施形態では、前記表皮細胞（例えば、ＨＦ細胞への分化を誘導する表皮細胞）は、表皮幹細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、当該技術分野で公知の他の種類のＨＦ細胞への分化を誘導する細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３３】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、抗アンドロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フィナステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、Ｆｌｕｒｉｄｉｌ（登録商標）である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、デュタステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、スピロノラクトンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、酢酸シプロテロンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ビカルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ニルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、アンドロゲン受容体の阻害剤である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３４】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン受容体アゴニストを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン類似体を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、エストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７βエストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７αエストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、ＺＹＣ３である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、又はエストロゲン類似体は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、又はエストロゲン類似体である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３５】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦタンパク質の阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦＲの阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦＲの発現を減少させる化合物を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３６】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３７】
ある実施形態では、頭皮が、本発明に係る方法により治療される。他の実施形態では、眉（眉）が、本発明に係る方法により治療される。他の実施形態では、皮膚の他の有毛領域が、本発明に係る方法により治療される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３８】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、リチウム化合物を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記リチウム化合物は、リチウムイオンを含む。他の実施形態では、前記リチウム化合物は、リチウム原子を含む。
【０１３９】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、（２´Ｚ，３´Ｅ）−６−ブロモインディルビン−３´−オキシム（ＢＩＯ）を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、当該技術分野では公知である、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化を誘導することができる他の化合物を接触させるステップをさらに含む。各化合物は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４０】
ある実施形態では、本発明に係る方法の一部として投与される前記化合物は、全身的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、局所的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、擦傷部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷が生じた部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、除毛部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷治癒の期間に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生の前に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生の期間に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４１】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法の実施を含む、ＨＦ幹細胞の形成を誘導する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法の実施を含む、ＤＰ細胞の形成を誘導する方法を提供する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４２】
他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体が、本発明に係る方法で投与される。他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体が、本発明に係る方法の標的にされる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４３】
「相同」、「相同性」などの用語は、タンパク質やペプチドに関しては、ある実施形態では、最大割合相同を達成するために、必要に応じて配列を整列化させてギャプを導入した後の、候補配列内における、対応する天然ポリペプチドの残余と一致するアミノ酸残余の割合を意味する（配列同一性の一部としての同類置換は考慮しない）。整列化のための方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野では公知である。
【０１４４】
他の実施形態では、「相同」という用語は、核酸配列に関しては、候補配列内における、対応する天然ポリペプチドの残余と一致する候補配列内のヌクレオチドの割合を示す。
【０１４５】
他の実施形態では、「相同」は、７０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、７５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９８％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９９％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、１００％以上の一致を意味する。
【０１４６】
本明細書中に記載された任意のアミノ酸配列と相同するタンパク質及び／又はペプチド相同は、ある実施形態では、例えば、イムノブロット解析又はアミノ酸配列のコンピュータアルゴリズム分析（任意のソフトウェア・パッケージを使用して）などの当該技術分野で公知の確立した手法によって測定される。前記ソフトウェア・パッケージとしては、例えば、 ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、ＭＰｓｒｃｈ、又はＳｃａｎｐｓパッケージがあり、Smith‐Watermanアルゴリズム、及び／又はグローバル／ローカル若しくはブロックアライメントを使用することができる。相同測定の各方法は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４７】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法に適した道具及び／又は化合物を含んでいるキットを提供する。
【０１４８】
他の実施形態では、本発明は、表皮破壊に適した道具、及び、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子の導入手段を含んでいる装置を提供する。
【０１４９】
他の実施形態では、本発明は、はげ頭症に関連する任意の疾病、疾患又は症状を治療する方法を提供する。各疾病、疾患又は症状は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５０】
（医薬組成物）
【０１５１】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物（及び／又はその類似体、誘導体、異性体、代謝物、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、又はそれらの組み合わせ）と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物の投与を含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５２】
前記ＨＦ幹細胞誘導性又は活性化化合物を含有する前記医薬組成物は、他の実施形態では、例えば、局所的、非経口、側癌的（paracanceraly）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、脳室内、脳内、膣内又は腫瘍内などの当該技術分野で公知の方法によって対象に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５３】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、経口投与される。そのため、前記医薬組成物は、経口投与に適した形態に（すなわち、固形及び液体製剤として）製剤化されている。適切な固形経口製剤としては、例えば、タブレット、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどがある。適切な液体経口製剤としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳剤、油などがある。本発明のある実施形態では、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物は、カプセルの形態に製剤化される。他の実施形態では、本発明に係る化合物は、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物及び不活性担体又は希釈剤に加えて、硬ゲル化カプセルを含有する。
【０１５４】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、身体表面に局所投与され、そのため、局所投与に適した形態に製剤化される。適切な局所製剤としては、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、滴剤などがある。局所投与するためには、ＨＦ幹細胞誘導若しくは活性化化合物又はその生理学的に許容される派生物（例えば、塩、エステル、Ｎ酸化物など）が作成され、溶液、懸濁液又は乳液として塗布される。前記溶液等は、薬学的担体を有する又は有さない、生理学的に許容される希釈剤に含まれる。
【０１５５】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、ペレットの皮下移植によって投与される。他の実施形態では、前記ペレットは、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物をある期間に渡って制御放出する。
【０１５６】
液体製剤の場合、薬学的に許容される担体としては、水溶性或いは非水性の溶液、懸濁液、乳濁液、又は油がある。非水溶媒の例としては、プロピレン・グリコール、ポリエチレン・グリコール、及び注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）がある。水溶性担体としては、水、アルコール性／水溶性の溶液、乳濁液、又は懸濁液（例えば、生理食塩水、緩衝培地など）がある。油の例としては、石油、動物性、植物性、又は合成系がある（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、及び魚肝油）。
【０１５７】
ある実施形態では、前記医薬組成物は、制御放出組成物であり、投与後に、前記ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物をある期間に渡って制御放出する。他の実施形態では、制御又は徐放組成物は、例えば、脂溶性デポー剤（例えば、脂肪酸、ワックス、油）である。他の実施形態では、前記組成物は、即時放出組成物であり、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物は、投与後すぐに放出される。
【実施例】
【０１５８】
実施例１：除毛及び表皮剥離によって、新しい毛包の形成が引き起こされる。
【０１５９】
≪材料及び実験方法≫
【０１６０】
＜除毛及び表皮剥離＞
【０１６１】
背部を毛刈りしてNair（Carter-Wallace, New York, NY）で除毛する前のマウスに、ペントバルビタールナトリウムを注射して麻酔する。その後、「Argyris T, J Invest Dermatol, 75: 360-362, 1980」に開示されているようにして、回転フェルトホイールを使用して表皮を除去した。７０％エタノールで洗浄して白熱ランプ下で乾燥させた後、Dremel Moto-tool（Racine, WI）上に設置されたフェルトホイールで、毛包間表皮の１．５ｃｍ２の領域における基底層及び基底層直上層を慎重に剥離して除去した。剥離後の皮膚は、つやがあり滑らかであった。皮膚に血液は見られなかった。１日後、剥離した領域はフィブリンのかさぶたで覆われていた。３〜７日後、かさぶたが剥がれ落ち、新たに再生された表皮が露出した。毛包間表皮が完全に除去されているかどうかを顕微鏡で確認するために、対照マウス群を表皮剥離の直後に屠殺した。
【０１６２】
＜免疫組織化学＞
【０１６３】
皮膚のサンプルを、ＰＢＳで緩衝化された１０％のホルマリンに保存した。６ミクロンの厚さのパラフィン切片を切断し、（該当する場合は）抗体で染色した。
【０１６４】
＜ＢｒｄＵ標識＞
【０１６５】
Bickenbachら（Cell Tiss Kinet 19: 325-333, 1986; Bickenbach et al, Exp Cell Res 244. 184-195, 1998）によって報告された方法を使用した。マウスに、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の５−ブロモ−２´−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を、１２時間ごとに計４回注射した。
【０１６６】
≪結果≫
【０１６７】
５０日齢マウスの背部の所定領域を除毛した後、回転フェルトホイールを使用してその表皮を除去した。１５日後、ＨＦプラコード、毛芽、及び他の毛包新生の兆候が見られた（図１。図中の矢印は毛芽を示す）。毛包の形態は、胎児の毛包の成長に類似していた。この新しい毛包の増殖の特徴をさらに明らかにするために、屠殺する６０分前に、皮膚をＢｒｄＵで標識した。図２に示すように、この増殖パターンは、胚子における毛包の成長と類似していた。
【０１６８】
これらの結果は、（ａ）表皮の破壊によって新しいＨＦの形成が引きこされること、並びに、この新しいＨＦの形成が（ｂ）成体及び（ｃ）休止期の間（５０日齢のマウスは毛周期の第２の休止期にある）に起こり得ることを示す。
【０１６９】
実施例２：切除創傷（小さな穿孔創傷ではない）の形成によって、新たな毛包が形成される。
【０１７０】
≪材料及び実験方法≫
【０１７１】
＜穿孔及び切除創傷の形成＞
【０１７２】
２１日齢のマウスの背部を実施例１で説明したようにして除毛し、アルコールで消毒した後、１％のヨード液で消毒した。皮膚生検パンチを使用して筋膜までの（筋膜は穿通しない）直径４ｍｍの穿孔創を形成した。切除創は全層に渡って形成され、その直径は１ｃｍであった（皮膚及び皮筋を、適切な手術バサミを使用して切除した）。
【０１７３】
≪結果≫
【０１７４】
創傷がＨＦ形成を誘起できるかどうかを検査するために、マウスに穿孔創及び切除創を形成した。創傷形成後、どちらの創傷も、収縮及び上皮再形成を示した。しかし、穿孔創傷が形成されたマウスとは異なり、切除創傷が形成されたマウスには、創傷形成後１０日間内に瘢痕が観察された（図３の左の図）。この時点では、毛包は観察されなかった（図３の右の図）。創傷作成１２日後にＢｒｄＵのパルス標識をしたところ、創傷部位に、胎児の毛芽と類似した形態の毛芽が観察された（図４）。観察された組織がＨＦであることを確認するために、幾つかの標識を使用した。創傷形成１２日後の時点で、ケラチン１７抗体（Ｋ１７）、ＨＦ標識（図５）、及びアルカリフォスファターゼ抗体で染色された組織は、ＨＦが有しているはずの、線維芽細胞を含む真皮乳頭を有することを証明される（図６：初期及び後期段階のＨＦのそれぞれを、左及び右の図に示す）。
【０１７５】
創傷形成によって形成されたＨＦの特徴をさらに調べるため、ＢｒｄＵ染色後、胎児のＨＦと形態学的に比較したところ、様々な段階で、形態学的に明らかに一致していることが観察された（図７）。さらに、胎児のＨＦ成長の標識であるＬｅｆ１、ｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（Ｗｎｔ）１０ｂ、及びソニック・ヘッジホグ（sonic hedgehog：Ｓｈｈ）を、ＥＤＩＨＮ（epidermal disruption-induced HF neogenesis）によって誘起した（図８）。さらなるＢｒｄＵ染色（図９）、並びに、ＨＦ標識であるＳ１００Ａ３及びＳ１００Ａ６の染色（図１０。左の図は、ＨＦ軸に平行な組織切片であり、右の図は、毛包の断面図である）により、ＥＤＩＨＮの毛包の成長が、胎児のＨＦの成長に非常に類似していることがさらに証明された。
【０１７６】
これらの結果により、表皮の破壊によって新しいＨＦの形成が引きこされること、並びに、この新しいＨＦの形成が（ｂ）成体及び（ｃ）毛周期の休止期（２１日齢のマウスは、毛周期の第１の休止期にある）に起こり得ることが証明された。
【０１７７】
実施例３：ＥＤＩＨＮによって形成された毛包は毛を形成する。
【０１７８】
創傷形成の２５及び４５日後、創傷部位に新しい毛が観察された（それぞれ、図１１の左及び右の図）。創傷形成後の最初の９日間、Ｄｋｋ１（Dickkopf-1）でｗｎｔ経路が阻害された場合（実施例１０）を除き、新しい毛に色素沈着は見られなかった。
【０１７９】
これらの結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常に機能する（すなわち、毛を形成することができる）ことを示す。
【０１８０】
実施例４：ＥＤＩＨＮによって形成された毛包は、発毛の周期に入る能力を有する。
【０１８１】
≪材料及び実験方法≫
【０１８２】
＜ＢｒｄＵ標識＞
【０１８３】
創傷形成の２０日後から３日間に渡り、５０ｍｇ／ｋｇ体重のＢｒｄＵ（Sigma）を、１日２回注射した。ＢｒｄＵは、創傷形成４０日後に検出された（１７日間追跡）。
【０１８４】
＜ホールマウント及び免疫蛍光＞
【０１８５】
新鮮な皮膚をＥＤＴＡ（ＰＢＳ中に２０ｍＭ）内で、３７℃で一晩培養し、表皮及び真皮を分離することでＨＦのホールマウント（whole mount）を得た。その後、表皮を１０％のホルマリン内に室温で１０分間保存した。真皮は、アセトン内に室温（ＲＴ）で一晩保存した。ホールマウントを、ＰＢＳで洗浄した後に、免疫組織化学の抗体で染色し（図１２に模式的に示す）、Leica共焦点顕微鏡を使用して撮像した。
【０１８６】
≪結果≫
【０１８７】
ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常な量のＨＦ幹細胞を含んでいるかどうかを調べるために、創傷形成の２１日後、マウスの皮膚を標識保持細胞の有無について検査した。これらの条件下での、長期の追跡期間中におけるＢｒｄＵの保持は、ＨＦ幹細胞の特徴の１つである。（ＨＦのバルジ中に）正常な数及び配置の標識保持細胞が観察された（図１３）。標識保持細胞がＨＦ幹細胞であることを確認するために、Ｋ１５−ｅＧＦＰマウスを利用した。Ｋ１５−ｅＧＦＰマウスは、Ｋ１５プロモータから、ｅＧＦＰ（変異型緑色蛍光タンパク）が発現される。したがって、ｅＧＦＰの発現によって、ＨＦ幹細胞を特定することができる。図１４Ａに示すように、創傷形成の３５日後、新たに形成された毛包の組織切片（右側）にｅＧＦＰ発現細胞が観察された。また、表皮のホールマウントに、ｅＧＦＰ発現細胞が観察された（下側の左端の図）。このことは、表皮細胞が、毛包幹細胞の性質を有する細胞に変化したことを意味する（「下側の左から２番目」の図は、「下側の左端」の図と同じだが、白色光の下で観察している）。これらの結果は、観察された標識保持細胞がＨＦ幹細胞の性質を示すことを実証する。
【０１８８】
ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常な周期を有するかどうかを調べるために、創傷形成の３５、３８及び４５日後のさらなるマウスからマウント（mount）を得た。図１４Ｂに示すように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦは、静止期、休止期に入り、その後、成長期に入る。
【０１８９】
要約すれば、この実施例の結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが、胎児で形成されたＨＦと同様にＨＦ幹細胞を含有することを示す。ＨＦ幹細胞の存在は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが、胎児で形成されたＨＦと同様に発毛の周期に入る能力を有することを示す。また、この結果は、創傷が、表皮細胞を毛包幹細胞（Ｋ１５−ｅＧＦＰを発現する）の状態となるように誘導することを示す。このモデルは、図１５に模式的に示す。実施例２、３、及び４の結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが完全に機能し、それによって、必要としている患者における発毛の回復が可能であることを示す。
【０１９０】
実施例５：毛周期の休止期に、マウスにＥＤＩＨＮによって形成された新しい毛包。
【０１９１】
毛周期が休止期に創傷形成されたマウスに、ＥＤＩＨＮによって新しい毛包を形成できるかどうかを調べるために、実施例２で説明したようにして、２１日齢のマウスに１ｃｍの切除創傷を形成してＥＤＩＨＮを行った。次に、ホールマウント分析によって、皮膚を新しいＨＦの徴候に関して分析した。図１６に示すように、１１日後、肉眼検査（上の図）、真皮のＡＰ染色（左下の図）、又は表皮のＫ１７染色（右下の図）によっては、新しいＨＦは確認されなかった。図１７に示すように、１４日後、真皮に真皮乳頭細胞が確認され（左の図）、表皮にＨＦ幹細胞が確認された（右の図）。このことは、新しい毛包が形成されたことを示す。１７日後、真皮及び表皮の検査によって証明されたように、新しい毛包はさらに成長した（それぞれ、図１８の左及び右の図を参照）。この方法によって、創傷部に平均して４９の新しい毛包が形成された。この数字は、表１に示すように、実験を３回行うことにより得られた。
【０１９２】
表１：２１日齢のマウスに行った３回の実験の結果。
【０１９３】
【表１】
【０１９４】
この実施例の結果は、毛周期の休止期にあるマウスが創傷の間に成長期のＨＦを含まないという事実にも関わらず、前記マウスに対して、ＥＤＩＨＮによって新しいＨＦの形成を誘起できることを示す。
【０１９５】
実施例６：成体のマウスにおいて、成長期の誘起は、ＥＤＩＨＮの効率を増大させる。
【０１９６】
実施例５に示した実験を、様々な週齢のマウス（毛周期の段階が様々なマウス）に対して繰り返した。創傷の瘢痕化を確実にするために、高齢のマウスにはより大きな創傷を形成した。表２に示すように、休止期（例えば８週齢）の成体マウスでは、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成の効率は低かった。
【０１９７】
表２：毛周期の段階が様々なマウスにおける、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成の効率。
【０１９８】
【表２】
【０１９９】
＊マウスでは、第２の休止期は、約４０日間存続する。したがって、１４週齢及び２０週齢のマウスには、休止期及び成長期のＨＦが混合して含まれる。
【０２００】
成長期の実験的な誘起によってＥＤＩＨＮの効率が増大したか否かを確認するために、８週齢のマウスを創傷形成の数日前に除毛した。図１９に示すように、創傷形成前の除毛の有無に関わらず、創傷は同様に閉じた。図２０Ａ及び２０Ｂに示すように、除毛したマウスは、除毛しなかったマウス（実施例５のマウス）よりもＥＤＩＨＮが１１倍大きかった。
【０２０１】
この実施例の結果は、成長期の誘起がＥＤＩＨＮを増大させることを示す。また、これらの結果は、ＥＤＩＨＮが新しいＨＦを形成するだけではなく、ＨＦが存在する前の休止期において成長期を活性化させることを示す。
【０２０２】
実施例７：ＥＤＩＨＮは、人間の皮膚に新しい毛包を形成する。
【０２０３】
≪材料及び実験方法≫
【０２０４】
＜移植＞
【０２０５】
形成手術から得られた成人の耳介前部からの不要な頭皮を、免疫不全（ＳＣＩＤ：重症複合免疫不全）マウスに移植した。移植片に包帯を巻いて治癒させ、移植３ヶ月後に創傷治癒実験に使用した。
【０２０６】
≪結果≫
【０２０７】
人間の皮膚がマウスの皮膚と同様にＥＤＩＨＮに反応するかどうかを確認するために、人間の皮膚をＳＣＩＤ（免疫不全）マウスに移植し、プラッキングで除毛し、３日後に創傷形成した。創傷形成の７日後、パラフィン包埋した組織切片のヘマトキシリン及びエオシン染色によって、人間の皮膚に新しいＨＦの形成が観察された（図２１Ａ。図中の矢印は新しいＨＦを示す）。
【０２０８】
さらなる実験では、成人の皮膚をマウスに移植し、剥離し、剥離した７日後に検査した。その結果、人間の皮膚に、新しいＨＦが形成された。Ｓ１００Ａ６又はＳ１００Ａ４で染色したところ、人間の皮膚での新しいＨＦの形成は、胎児が成長する際の通常の毛包形成と類似することが判明した（図２１Ｂ）。
【０２０９】
この実施例の結果は、マウスの皮膚の場合と同様に、人間の皮膚にＥＤＩＨＮを使用して毛を形成できることを示す。
【０２１０】
実施例８：ＨＦ幹細胞の活性化の間に活性化された分子経路。
【０２１１】
≪材料及び実験方法≫
【０２１２】
＜ＨＦ幹細胞の単離及び活性化＞
【０２１３】
新しいＨＦの形成を誘導するために、Ｋ１５−ｅＧＦＰのマウスを除毛した。除毛の２日後、蛍光活性化細胞分類（fluorescence-activated cell sorting：ＦＡＣＳ）によって、Ｋ１５−ｅＧＦＰのマウスから活性化された毛包幹細胞を単離した。そして、細胞集団から５μｇの全ＲＮＡを単離し、逆転写し、Affymetrix（Santa Clara, California）アレイのＭＧ＿Ｕ７４ｖ２チップに混成させた。活性化されたＨＦ幹細胞（ＨＦＳＣ）と活性化されていない（休止期）のＨＦＳＣとの間の発現倍率変化（fold-change）を検出するために、スキャンしたチップの画像を、Affymetrix Microarray Suite 5.0及びGeneSpringソフトウェア（Silicon Genetics）を使用して分析した。倍率変化、及び、活性化されていない「ベースライン」と活性化された（「ｅｘｐｔ」）サンプルとの間の相違を計算する前に、数値を正規化した。
≪結果≫
【０２１４】
ＨＦ幹細胞の活性化の間に上方制御された分子経路を特定するために、活性化されたＨＦ幹細胞を単離し、その後、上方制御された転写物を検出すべく、細胞の遺伝子発現パターンを分析した。表３に示す転写物は、活性化されたＨＦ幹細胞では、活性化される前の細胞よりも少なくとも２倍上方制御された。一部の例では、表３の配列は、転写物の配列を含むゲノム配列である。転写物の上方制御に関するデータ及びそれらのさらなる情報は、図２２に示される。
【０２１５】
表３：ＨＦ幹細胞の活性化の間に上方制御されたＲＮＡ転写物。
【０２１６】
【表３−１】
【０２１７】
【表３−２】
【０２１８】
【表３−３】
【０２１９】
【表３−４】
【０２２０】
【表３−５】
【０２２１】
【表３−６】
【０２２２】
【表３−７】
【０２２３】
【表３−８】
【０２２４】
【表３−９】
【０２２５】
【表３−１０】
【０２２６】
【表３−１１】
【０２２７】
【表３−１２】
【０２２８】
【表３−１３】
【０２２９】
【表３−１４】
【０２３０】
【表３−１５】
【０２３１】
【表３−１６】
【０２３２】
【表３−１７】
【０２３３】
【表３−１８】
【０２３４】
【表３−１９】
【０２３５】
【表３−２０】
【０２３６】
【表３−２１】
【０２３７】
【表３−２２】
【０２３８】
【表３−２３】
【０２３９】
【表３−２４】
【０２４０】
【表３−２５】
【０２４１】
【表３−２６】
【０２４２】
【表３−２７】
【０２４３】
【表３−２８】
【０２４４】
【表３−２９】
【０２４５】
【表３−３０】
【０２４６】
【表３−３１】
【０２４７】
【表３−３２】
【０２４８】
【表３−３３】
【０２４９】
【表３−３４】
【０２５０】
【表３−３５】
【０２５１】
【表３−３６】
【０２５２】
【表３−３７】
【０２５３】
【表３−３８】
【０２５４】
【表３−３９】
【０２５５】
【表３−４０】
【０２５６】
【表３−４１】
【０２５７】
【表３−４２】
【０２５８】
【表３−４３】
【０２５９】
【表３−４４】
【０２６０】
【表３−４５】
【０２６１】
【表３−４６】
【０２６２】
【表３−４７】
【０２６３】
【表３−４８】
【０２６４】
【表３−４９】
【０２６５】
【表３−５０】
【０２６６】
【表３−５１】
【０２６７】
【表３−５２】
【０２６８】
【表３−５３】
【０２６９】
【表３−５４】
【０２７０】
【表３−５５】
【０２７１】
【表３−５６】
【０２７２】
【表３−５７】
【０２７３】
【表３−５８】
【０２７４】
【表３−５９】
【０２７５】
【表３−６０】
【０２７６】
【表３−６１】
【０２７７】
【表３−６２】
【０２７８】
【表３−６３】
【０２７９】
【表３−６４】
【０２８０】
【表３−６５】
【０２８１】
【表３−６６】
【０２８２】
【表３−６７】
【０２８３】
【表３−６８】
【０２８４】
【表３−６９】
【０２８５】
【表３−７０】
【０２８６】
【表３−７１】
【０２８７】
【表３−７２】
【０２８８】
【表３−７３】
【０２８９】
【表３−７４】
【０２９０】
【表３−７５】
【０２９１】
【表３−７６】
【０２９２】
【表３−７７】
【０２９３】
【表３−７８】
【０２９４】
【表３−７９】
【０２９５】
【表３−８０】
【０２９６】
【表３−８１】
【０２９７】
【表３−８２】
【０２９８】
【表３−８３】
【０２９９】
【表３−８４】
【０３００】
【表３−８５】
【０３０１】
【表３−８６】
【０３０２】
【表３−８７】
【０３０３】
【表３−８８】
【０３０４】
【表３−８９】
【０３０５】
【表３−９０】
【０３０６】
【表３−９１】
【０３０７】
【表３−９２】
【０３０８】
【表３−９３】
【０３０９】
【表３−９４】
【０３１０】
【表３−９５】
【０３１１】
【表３−９６】
【０３１２】
【表３−９７】
【０３１３】
【表３−９８】
【０３１４】
【表３−９９】
【０３１５】
【表３−１００】
【０３１６】
【表３−１０１】
【０３１７】
【表３−１０２】
【０３１８】
【表３−１０３】
【０３１９】
【表３−１０４】
【０３２０】
【表３−１０５】
【０３２１】
【表３−１０６】
【０３２２】
【表３−１０７】
【０３２３】
【表３−１０８】
【０３２４】
【表３−１０９】
【０３２５】
【表３−１１０】
【０３２６】
【表３−１１１】
【０３２７】
【表３−１１２】
【０３２８】
以上のように、この実施例で特定された転写物、その転写物がエンコードするタンパク、及び前記タンパクが関与する経路は、ＨＦ幹細胞の活性化に大きく貢献する。したがって、これらの転写物、タンパク及び経路を活性化させることによって、成長期を誘起することができる。
【０３２９】
実施例９：表皮細胞からＨＦ幹細胞への分化を誘導する間に活性化された分子経路。
【０３３０】
実施例８で説明したようにして、ＨＦ幹細胞の発現パターンを分析し、非バルジ基底ケラチノサイト（non-bulge basal keratinocyte）と比較した。マイクロアレイ分析及び定量的ポリメラーゼ連鎖反応（quantitative polymerase chain reaction：ｑＰＣＲ）によって評価すると、ＨＦ幹細胞には１５７の遺伝子が異なった形で発現していた。ＨＦ幹細胞での発現量が多い遺伝子を選択した群を、表４に示す。ＨＦ幹細胞での発現量が少ない遺伝子を選択した群を、表５に示す。
【０３３１】
表４：ＨＦ幹細胞で上方制御された遺伝子。括弧の中の数字は、定量的リアルタイムＰＣＲで測定した増加倍率である。
【０３３２】
【表４−０１】
【０３３３】
【表４−０２】
【０３３４】
【表４−０３】
【０３３５】
【表４−０４】
【０３３６】
【表４−０５】
【０３３７】
【表４−０６】
【０３３８】
【表４−０７】
【０３３９】
【表４−０８】
【０３４０】
【表４−０９】
【０３４１】
【表４−１０】
【０３４２】
【表４−１１】
【０３４３】
【表４−１２】
【０３４４】
【表４−１３】
【０３４５】
【表４−１４】
【０３４６】
【表４−１５】
【０３４７】
【表４−１６】
【０３４８】
【表４−１７】
【０３４９】
【表４−１８】
【０３５０】
【表４−１９】
【０３５１】
【表４−２０】
【０３５２】
表５：ＨＦ幹細胞で下方制御された遺伝子。
【０３５３】
【表５−０１】
【０３５４】
【表５−０２】
【０３５５】
【表５−０３】
【０３５６】
【表５−０４】
【０３５７】
【表５−０５】
【０３５８】
【表５−０６】
【０３５９】
【表５−０７】
【０３６０】
【表５−０８】
【０３６１】
【表５−０９】
【０３６２】
【表５−１０】
【０３６３】
【表５−１１】
【０３６４】
【表５−１２】
【０３６５】
【表５−１３】
【０３６６】
よって、この実施例で特定された転写物、その転写物がエンコードするタンパク、及び前記タンパクが関与する経路は、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化の誘導に大きく貢献する。したがって、これらの転写物、タンパク及び経路の活性化によって、成長期を誘起することができる。したがって、表４に示した転写物、タンパク、及び経路を活性化させることによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。また、表４に示した転写物、タンパク及び経路を阻害することによって、ＥＤＩＨＮを防止し、毛包を除去することができる。さらに、表５に示した転写物、タンパク、及び経路を阻害することによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。また、表５に示した転写物、タンパク、及び経路を活性化させることによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。
【０３６７】
実施例１０：創傷形成後の９日間にＷＮＴ−１阻害因子が発現すると、新しいＨＦの色素沈着が生じる。
【０３６８】
≪材料及び実験方法≫
【０３６９】
この実施例では、ｔｅｔＯ−Ｄｋｋ１とＫ５−ｒｔＴＡとを発現する２重トランスジェニックのマウスを使用した。Ｋ５プロモータの制御下で、前記マウスに１ｇ／ｋｇのドキシサイクリン（BioServ, Laurel, MD）が調合された餌を与えた場合、基底表皮にＤｋｋ１が発現する。また、対照マウスにもドキシトリンを投与したが、対照マウスはＫ５−ｒｔＴＡを有していないため、Ｄｋｋ１は発現しなかった。
【０３７０】
≪結果≫
【０３７１】
２１日齢又は５０日齢の２重トランスジェニックマウスの背下部に、１ｃｍ２の創傷を形成した。Ｄｋｋ１の発現を誘導するため、創傷形成の直後、前記マウスにドキシサイクリンを含有する餌を与えた。そして、創傷形成の９日後に上皮が再形成されたときに、ドキシサイクリンを与えるのを中止した。Ｄｋｋ１の発現はＷｎｔの活性を阻害し、その結果、毛包の色素沈着が生じた。創傷形成後の２２日目には、表皮シートの作成後、摘出皮膚に色素が沈着したＨＦが観察された（図２３Ａ及び２２Ｂ）。対照マウスには、色素が沈着したＨＦは見られなかった（図２４）。
【０３７２】
他の実験では、創傷形成の９日後にＤｋｋ１の発現を継続させたところ、新しいＨＦの形成が阻害された。
【０３７３】
この実施例の結果は、上皮再形成の期間中にＷｎｔ１の発現の抑制、又はＤｋｋ１の発現の誘導を行い、その後にＷｎｔの発現を誘導することによって、色素が沈着したＨＦを形成できることを示す。また、この実施例の結果は、新しい毛包の形成を阻害する因子（例えばＤｋｋ１）が、ＥＤＩＨＮも阻害することを示す。このことは、ＥＤＩＨＮによって形成された毛包が通常の毛包に類似しているという考えをさらに裏付ける。
【０３７４】
実施例１１：表皮成長因子の注入によるＥＤＩＨＮの阻害。
【０３７５】
前述の実施例で説明したようにして、２１日齢のマウスに創傷を形成した。創傷形成の１１日後（創傷が再び上皮で覆われた時点）から、創傷床にＥＧＦ（１μｇ／ｍｌ）の注入（１０μｌ）を開始した。この時点から５日間に渡って、ＥＧＦを１日１回注入した。３日後、皮膚を回収し、ＥＤＩＨＮのホールマウント分析を行った。全体の形態から評価すると、ＥＧＦはＨＦの形成を防止した。また、対照及び処理した皮膚のホールマウントを、Ｋ１７抗体免疫染色によって分析した。予想通り対照マウス（２匹）には数多くの新しいＨＦの形成が見られたが（図２５Ｃ及び２５Ｄ）、ＥＧＦが注射された全てのマウス（４匹）には新しいＨＦの形成は見られなかった（図２５Ａ及び２５Ｂ）。
【０３７６】
さらなる実験では、創傷形成後の１１、１３及び１５日目に、組み換えＥＧＦ（１マイクログラム（ｍｃｇ）／マイクロリットル（ｍｃｌ））を注射した。創傷形成の１８日後に皮膚を回収し、Ｋ１７及びアルカリフォスファターゼ染色を行った。またしても、ＥＧＦの投与によって、ＥＤＩＨＮが阻害された。
【０３７７】
この実施例の結果は、ＥＧＦがＨＦ形成を阻害することを示す。したがって、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、又はこれらの因子が関与する経路の１つを阻害すると、ＥＤＩＨＮ誘導性のＨＦ形成が増加する。
【０３７８】
実施例１２：ＥＧＦ受容体の阻害によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３７９】
ＥＧＦ受容体阻害剤の投与がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、切開創傷（１ｃｍ２）を形成した１１日後、創傷中心の皮膚表面付近に、阻害剤であるＡＧ１４７８（１０μＬの量に１５０μＭ）を単回注射によって投与した。ＥＧＦ受容体阻害剤の投与によって、創傷を形成しただけの対照マウスと比較してより多くの及びより大きな毛包が形成された（図２６Ａ）。図２６Ｂに示すように、ＡＧ１４７８を注射したマウスの創傷領域には、大きな毛包が成長した。左の図は、互いに近接する３つの大きな毛包を有する、Ｋ１７染色された表皮を示す。右の図は、大きな合体したＤＰ領域を有する、ＡＰ染色された真皮を示す。
【０３８０】
この実施例の結果は、上述の実施例の結果を裏付けるものであり、ＥＤＩＨＮにＥＧＦＲ阻害剤若しくは同様の作用機構を有する化合物（例えば、ヘッジホッグタンパク質及びアンドロゲンアンタゴニスト）投与すると（又はその後に行われると）、より多くの及びより大きなＨＦを形成できることを示す。
【０３８１】
実施例１３：β−カテニン活性化因子の発現によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８２】
β−カテニン活性化因子の投与がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、β−カテニン経路の活性化因子であるＷｎｔ７を表皮で過剰発現するＫ１４−Ｗｎｔ７トランスジェニック・マウスに対してＥＤＩＨＮを行い、創傷を形成した１９日後にＨＦ形成を評価した。４週齢及び３週齢のマウスを用いた２つの実験では、トランスジェニック・マウスは、対照である同腹の非トランスジェニック・マウスと比較して、著しく多くのＨＦが形成された（図２７Ａ〜Ｃ）。
【０３８３】
したがって、β−カテニン活性化因子を投与すると、ＥＤＩＨＮが増大される。実施例１１〜１３の結果は、（ａ）表皮の破壊、及び（ｂ）中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８４】
実施例１４：ＦＧＦの投与によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８５】
線維芽細胞細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、実施例１１で説明したようにして切開創傷を形成した１１日後に組み換えＦＧＦを投与した。ＦＧＦを投与すると、ＨＦ形成が増加する。このことは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）ＦＧＦ、ＦＧＦをエンコードするヌクレオチド、又はＦＧＦによるシグナル伝達を増加させる因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８６】
実施例１５：ＥＤＡＲの投与によるＥＤＩＨＮの増大
【０３８７】
ＥＤＡＲがＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、Ｋ１４−Ｅｄａ−Ａ１トランスジェニック・マウス（Ｅｄａ−Ａ１（エクトジスプラシン−Ａ１）を表皮で過剰発現する）にＥＤＩＨＮを行った後、実施例１３で説明したようにして創傷を形成した１９日後にＨＦ形成を検査した。前記トランスジェニック・マウスは、対照の同腹の非トランスジェニック・マウスと比較して、著しく多くのＨＦを形成した。このことは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）エクトジスプラシンによるシグナル伝達を増加させる因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８８】
実施例１６：ミノキジルの投与によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８９】
ミノキシジルがＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、実施例１１で説明したようにして切除創傷を形成した１１日後にミノキジルを投与した。ミノキシジルの投与により、ＨＦ形成が増加した。これは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）ミノキシジルの投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３９０】
実施例１７：表皮剥離及びＥＧＦの投与によるＨＦの除去。
【０３９１】
実施例１で説明したようにしてマウスの表皮の有毛領域を剥離した後、組み換えＥＧＦを投与した。この方法によって、剥離された領域における毛の再生が防止される。このことは、（ａ）表皮層の破壊、及び、（ｂ）ＥＧＦ、ＥＧＦをエンコードするヌクレオチド、又はＥＧＦによるシグナル伝達を増大させる因子の投与によって、毛を除去できることを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象のはげ頭の治療、及び新しい毛包の形成をするための方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
小胞の新生は、出生後の、新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）の形成と定義される。人間は、生まれたときは、ＨＦを完全に備えている。しかし、はげ頭症の初期では、ＨＦの大きさと成長特性は変化する。また、はげ頭症の末期又は恒久的な瘢痕性脱毛症では、最終的に退化し消失する。そのため、一般的なはげ頭症、及びあまり一般的ではない脱毛症（例えば、円板状紅斑性狼瘡、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬、及び他の瘢痕性脱毛症）では、新しいＨＦを形成することが望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、対象のはげ頭症を治療する、及び新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成する方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【０００４】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【０００５】
他の実施形態では、本発明は、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法を提供する。
【０００６】
他の実施形態では、前記はげ頭症は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）によって引き起こされたはげ頭症である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０００７】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）タンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物又は因子のいずれかを接触させるステップとを含み、それによって、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法を提供する。
【０００８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法を提供する。
【０００９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００１０】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】表皮剥離によって新しい毛包（ＨＦ）が形成される様子を示す。ＨＦの成長進行段階を、左、中央及び右の図に示す。左の図における矢印は、毛芽を示す。黒く染色された細胞は、バルジ内のＨＦ幹細胞の子孫である。
【図２】ＢｒｄＵ標識された表皮剥離後のＨＦを示す。ＨＦ成長の進行段階を、左、中央及び右の図に示す。
【図３】上皮再形成の直後、創傷部位にはＨＦが存在しなかった。左の図は、創傷形成１０日後の創傷部位の上面図であり、右の図は、組織切片である。
【図４】創傷形成１２日後の毛芽の外観である。図中の矢印は、毛芽を示す。
【図５】ＥＤＩＨＮ（Epidermal disruption-Induced HF neogenesis：表皮破壊によって誘導されるＨＦ新生）によって形成された毛芽は、Ｋ１７を発現する。２つの異なる毛芽を、左右の図に示す。
【図６】ＥＤＩＨＮによって形成された毛芽は、真皮乳頭（dermal papilla：ＤＰ）細胞を含有することが、アルカリフォスファターゼ（alkaline phosphatase：ＡＰ）染色によって分った。図中の矢印は、ＤＰ細胞を示す。左の図は、毛芽を示す。右の図は、さらなる成長段階にあるＨＦを示す。
【図７】ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦと、胎児のＨＦとを、組織学的に比較した図である。上側における左端、左から２番目、左から３番目、及び右端の図は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦの成長進行段階を示す。下側における左、中央、及び右の図は、胎児のＨＦの成長進行段階を示す。
【図８】胎児のＨＦ成長のマーカーを、ＥＤＩＨＮによって誘起する状態を示す。左の図はＬｅｆ１、中央の図はｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（Ｗｎｔ）１０ｂ、右の図はソニック・ヘッジホッグ（Ｓｈｈ）を示す。ＨＦ組織は、矢印で示されている。
【図９】ＢｒｄＵパルス標識によって分った、ＥＤＩＨＮの間の増殖活性を示す。ＨＦの成長進行段階を、左、中央及び右の図に示す。
【図１０】ＥＤＩＨＮによる、ＨＦ標識であるＳ１００Ａ３の誘起。左の図は、ＨＦ軸に平行な組織切片であり、右の図は、毛包の断面図である。
【図１１】創傷形成の２５日後（左の図）及び４５日後（右の図）における新しい毛の成長を示す。
【図１２】ＥＤＩＨＮのホールマウント分析の概略図である。
【図１３】追跡期間後にＢｒｄＵ標識を保持することから分るように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦのバルジ内で幹細胞が再生する。左の図は低倍率（×５０）の場合であり、右の図は高倍率（×４００）の場合である。
【図１４Ａ】ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦの幹細胞は、Ｋ１５を発現する。左側の上の図は、創傷部の上面図である。下側の左端の図は表皮のホールマウントである。下側の左から２番目の図は、左端の図と同じであるが、白色光下で観察されている。右の図は、組織切片を示す。
【図１４Ｂ】新生ＨＦは、次の毛周期へ進む。
【図１５】ＥＤＩＨＮによる新しいＨＦの形成を示す概略図である。
【図１６】２１日齢マウスでは、創傷形成１１日後に、新しいＨＦは見られない。上の図は、肉眼検査を示す。左下の図は、真皮のＡＰ染色を示す。右下の図は、表皮のＫ１７染色を示す。
【図１７】創傷形成の１４日後には、真皮のＡＰ染色（左の図）及び表皮のＫ１７染色（右の図）から分るように、新しいＨＦが形成され始めた。メインの図の倍率は１０倍であり、挿入図の倍率は８０倍である。
【図１８】創傷形成の１７日後には、ＨＦはさらに成長した。左の図は、真皮のＡＰ染色を示し、右の図は、表皮のＫ１７染色を示す。メインの図の倍率は１０倍であり、挿入図の倍率は８０倍である。
【図１９】除毛後に創傷形成したマウス（左右の図における左の３匹のマウス）は、創傷形成しただけのマウス（左右の図における右の４匹のマウス）と同様に創傷が閉じた。左の図は、創傷形成直後の写真である。右の図は、創傷形成１０日後の写真である。
【図２０】創傷形成前に除毛によって成長期を誘起すると、ＥＤＩＨＮの効率が増大する。Ａ：左下の図は、真皮のＡＰ染色を示す。右下の図は、表皮のＫ１７染色を示す。Ｂ：除毛によるＥＤＩＨＮの増大を示すグラフである。
【図２１Ａ】切除創傷形成７日後に免疫不全（重症複合免疫不全）マウスに移植された人間の皮膚でのＥＤＩＨＮを示す。図中の矢印は、新しいＨＦを示す。
【図２１Ｂ】人間皮膚の移植片の表皮剥離は、ＥＤＩＨＮを誘導する。成人の皮膚（Ｗ）をマウスに移植した後に剥離し、７日後にＳ１００Ａ６（第１、第２、及び第４の横列）又はＳ１００Ａ４（第３の横列）の染色によって検査した。毛芽（Hair germs：ＨＧ）及び真皮乳頭（dermal papilla：ＤＰ）が示されている。比較のために、正常に成長した毛包を有する人間の胎児の皮膚（Ｆ）が示されている。対照として、創傷形成１７日後のマウスの皮膚が示されている（左上の図）。
【図２２Ａ−１】ＤＮＡチップ分析によって評価されるように、活性化されたＨＦ細胞では、転写物は、少なくとも２倍上方制御されている。活性化されていない（「ベースライン」）及び活性化された（「ｅｘｐｔ」）試料における上方制御された転写物の平均値及び標準誤差、並びに、活性化された試料の値と活性化されていない試料の値との間の倍率変化及び相違を示す。
【図２２Ａ−２】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−３】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−４】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−５】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−６】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−７】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ａ−８】上方制御された転写物の平均値及び標準誤差等を示す。
【図２２Ｂ−１】活性化されていない及び活性化された細胞における上方制御された転写物の未加工データである。「Ｃｔｒｌ」は活性化されていない細胞を意味し、「Ｈｉｇｈ−ｄｅｐ」は活性化された細胞を意味する。
【図２２Ｂ−２】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−３】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−４】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｂ−５】上方制御された転写物の未加工データを示す。
【図２２Ｃ−１】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−２】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−３】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−４】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−５】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２２Ｃ−６】上方制御された転写物のさらなる情報である。
【図２３Ａ】ＥＤＩＨＮ後に、Ｄｋｋ１発現マウスの皮膚に観察された、色素沈着した新生毛包を示す。倍率は３．２倍である。
【図２３Ｂ】ＥＤＩＨＮ後に、Ｄｋｋ１発現マウスの皮膚に観察された、色素沈着した新生毛包を示す。倍率は８倍である。
【図２４】対照マウスには、色素が沈着したＨＦは見られなかった。
【図２５Ａ】ＥＧＦは、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成を阻害する。ＥＧＦを投与したマウスにおける皮膚の創傷部位のＫ１７染色を示す。倍数は４倍である。
【図２５Ｂ】Ａに示した皮膚を高倍率像である（×１０）。
【図２５Ｃ】創傷形成後にＥＧＦを投与しなかった対照マウスにおける皮膚の創傷部位のＫ１７染色を示す。倍率は４倍である。
【図２５Ｄ】Ｃに示した皮膚の高倍率像である（×１０）。
【図２６Ａ】ＥＧＦ受容体阻害剤（ＡＧ１４７８）を投与すると、対照と比較してより多くの及びより大きなＨＦが形成される。上の図は、２匹の対照マウスの皮膚を示す。外側の点線は、収縮及び治癒後の創傷領域の範囲を示す。内側の点線は、新生領域を示す。下の図は、ＥＧＦ受容体阻害剤を投与した２匹のマウスの皮膚を示す。左右の図の囲まれた領域における左側の小さな領域以外は、創傷領域及び新生領域の大部分は一致する。
【図２６Ｂ】Ｇ１４７８を注入したマウスの創傷領域では、大きな毛包が発達した。左の図は、互いに近接する３つの大きな毛包を有する、Ｋ１７染色された表皮を示す。右の図は、大きな合体したＤＰ領域を有する、ＡＰ染色された真皮を示す。スケールバーは、２００μｍである。
【図２７Ａ】Ｋ１４−Ｗｎｔ７ａマウスにおける毛包形成の増加を示す図である。左の図は、Ｗｎｔ７ａトランスジェニック・マウスである。右の図は、対照（野生型）マウスである。
【図２７Ｂ】４週齢マウスを使用した実験の結果を定量化したグラフである。
【図２７Ｃ】３週齢マウスを使用した実験の結果を定量化したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、対象のはげ頭症を治療する、及び新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成する方法であって、表皮を破壊するステップと、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を投与するステップとを含む方法を提供する。また、本発明は、除毛をするための、及び髪の色素沈着を誘導するための方法を提供する。
【００１３】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００１４】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＨＦの数を増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＨＦの数を増加させる方法を提供する。
【００１５】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮におけるＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法を提供する。他の実施形態では、前記因子は、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦＲの阻害剤である。他の実施形態では、前記因子は、ヘッジホッグ・タンパク質、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記因子は、アンドロゲンのアンタゴニストである。他の実施形態では、前記因子は、その他の、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２０】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記前駆細胞は、ＨＦ幹細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、表皮細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、真皮乳頭細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、結合組織鞘細胞である。他の実施形態では、前記前駆細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の、毛包細胞へ分化することができる細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、毛包細胞へ分化することができる前駆細胞を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２３】
他の実施形態では、本発明は、頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮に、毛包細胞へ分化することができる前駆細胞を接触させるステップとを含み、それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法を提供する。
【００２４】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、間葉細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、ここに列挙した他の種類の誘導細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の誘導細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２５】
ここで用いる「接触」という用語は、他の実施形態では、頭皮や眉などに、化合物、因子、細胞などを接触させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、頭皮や眉などに埋め込むことを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、頭皮や眉などに注入することを意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で公知の他の種類の接触を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２６】
「分化の促進」は、他の実施形態では、分化する細胞の割合を増加させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、分化する細胞の、皮膚の単位面積当たりの細胞数を増加させることを意味する。他の実施形態では、分化の促進は、皮膚環境で活性がある。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２７】
「中立表皮細胞（Uncommitted epidermal cell）」は、他の実施形態では、表皮幹細胞を意味する。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ由来細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、ＨＦ細胞への分化が誘導される当該技術分野で公知の他の種類の細胞である。
【００２８】
分化の結果生じる「ＨＦ細胞」は、他の実施形態では、ＨＦ幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、真皮乳頭細胞（dermal papilla cell）である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、毛球細胞（bulb cell）である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、マトリクス細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、毛幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、内毛根鞘細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、外毛根鞘細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、メラニン幹細胞である。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、メラニン細胞である。中立表皮細胞及びＨＦ細胞の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００２９】
他の実施形態では、本発明は、頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物を接触させるステップとを含み、それによって頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法を提供する。他の実施形態では、前記はげ頭症は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）によって引き起こされたはげ頭症である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３０】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、液剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、クリームの形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、軟膏の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、徐放製剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、リポソーム封入製剤の形態で使用される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、直接的に注入される。他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、当該技術分野で公知の他の方法によって使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３１】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）の阻害剤である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＥＧＦ受容体の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３２】
本明細書中で説明されるように、ＥＧＦを含有する（ＥＧＦの注入によって）１つ又は複数の経路は、ＨＦの形成を阻止する（実施例１１）。したがって、実施例１２で実証されるように、前記経路のアンタゴナイズにより、ＨＦの形成は増加する。
【００３３】
他の実施形態では、ＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤は、パニツムマブ（panitumumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＧ１４７８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ニモツズマブ（nimotuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＧＦ又はＥＧＦＲと結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＨｕＭａｘ ＥＧＦＲ（登録商標）（Genmab, Copenhagen, Denmark）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、セツキシマブ（cetuximab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＩＭＣ １１Ｆ８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、マツズマブ（matuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＳＣ １００である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＬＴ １１０である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０３２である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＢＭＳ ５９９６２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＭＤＸ ２１４である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０４１である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３４】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ゲフィチニブ（gefitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、エルロチニブ（erlotinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、カナーニチブ（canertinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、レフルノミドである。他の実施形態では、前記阻害剤は、Ａ７７ １７２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ペリニチブ（pelitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＺＤ １８３９である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＣＬ ３８７７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＫＩ ７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、バンデタニブ（vandetanib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００３５】
他の実施形態では、ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ポテト（ＰＣｌ）タンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックに由来するカルボキシペプチダーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、Sproutyタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、Argosタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、leftyタンパク質又はその相同体、断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦ又はＥＧＦＲを識別する抗体又はその断片若しくはミメティックである。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦ又はＥＧＦＲと結合してその活性を減少させる小分子阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＣＲＭ１９７である。他の実施形態では、前記ＥＧＦ又はＥＧＦＲアンタゴニストは、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ImClone Systems, New York. NY）である。
【００３６】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮におけるＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦ受容体の阻害剤を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００３９】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、βカテニンタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、βカテニンタンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記βカテニンタンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４０】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４２】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のＡＧＡを治療する医薬組成物を製造するための、（Ａ）βカテニンタンパク質、（Ｂ）βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、又は（Ｃ）βカテニンタンパク質を活性化させる化合物若しくは因子の使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記βカテニンタンパク質、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００４３】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦ受容体の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記ＦＧＦタンパク質又はＦＧＦ受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤である。他の実施形態では、抑制される前記タンパク質は、ＦＧＦ結合タンパク質である。他の実施形態では、抑制される前記タンパク質は、ＦＧＦ−ｂｐｌである。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４４】
本明細書中で説明されるように、ＥＧＦ及びその受容体は、ここで使用される条件下で、ＨＦ幹細胞の分化に対して上方制御される（実施例９）。さらに、ＦＧＦ−ｂｐｌは、ここで使用される条件下で、ＨＦ幹細胞の分化に対して下方制御される。したがって、ＥＧＦ及びその受容体は、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する。
【００４５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、エクトジスプラシン（ectodysplasin）・タンパク質（「ｅｄａ」又は「外胚葉性タンパク質」とも表記される）である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＦＧＦタンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記エクトジスプラシン・タンパク質は、Ｅｄａ−Ａ１である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン受容体（「ｅｄａｒ」とも表記される）である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、エクトジスプラシン受容体の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記エクトジスプラシン・タンパク質又はエクトジスプラシン受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４６】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるｅｄａタンパク質は、次の配列を有する。ＭＧＹＰＥＶＥＲＲＥＬＬＰＡＡＡＰＲＥＲＧＳＱＧＣＧＣＧＧＡＰＡＲＡＧＥＧＮＳＣＬＬＦＬＧＦＦＧＬＳＬＡＬＨＬＬＴＬＣＣＹＬＥＬＲＳＥＬＲＲＥＲＧＡＥＳＲＬＧＧＳＧＴＰＧＴＳＧＴＬＳＳＬＧＧＬＤＰＤＳＰＩＴＳＨＬＧＱＰＳＰＫＱＱＰＬＥＰＧＥＡＡＬＨＳＤＳＱＤＧＨＱＭＡＬＬＮＦＦＦＰＤＥＫＰＹＳＥＥＥＳＲＲＶｉｍＮＫＲＳＫＳＮＥＧＡＤＧＰＶＫＮＫＫＩＣＧＫＫＡＧＰＰＧＰＮＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＩＰＧＩＰＧＩＰＧＴＴＶＭＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＬＱＧＰＳＧＡＡＤＫＡＧＴＲＥＮＱＰＡＷＨＬＱＧＱＧＳＡＩＱＶＫＮＤＬＳＧＧＶＬＮＤＷＳＲＩＴＭＮＰＫＶＦＫＬＨＰＲＳＧＥＬＥＶＬＶＤＧＴＹＦＩＹＳＱＶＥＶＹＹＩＮＦＴＤＦＡＳＹＥＶＶＶＤＥＫＰＦＬＱＣＴＲＳＩＥＴＧＫＴＮＹＮＴＣＹＴＡＧＶＣＬＬＫＡＲＱＫＩＡＶＫＭＶＨＡＤＩＳＩＮＭＳＫＨＴＴＦＦＧＡＩＲＬＧＥＡＰＡＳ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１３９９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７４）。他の実施形態では、前記ｅｄａタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００１００５６０９、ＮＭ＿００１００５６１０、ＮＭ＿００１００５６１１、ＮＭ＿００１００５６１２、ＮＭ＿００１００５６１３、ＮＭ＿００１００５６１４、ＮＭ＿００１００５６１５、ＡＦ０４０６２８、ＡＦ０６１１９４、ＡＦ０６１１９３、ＡＦ０６１１９２、ＡＦ０６１１９１、ＡＦ０６１１９０、ＡＦ０６１１８９、及びＡＦ０６０９９９から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ｅｄａタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ｅｄａタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４７】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるｅｄａｒタンパク質は、次の配列を有する。ＭＡＨＶＧＤＣＴＱＴＰＷＬＰＶＬＶＶＳＬＭＣＳＡＲＡＥＹＳＮＣＧＥＮＥＹＹＮＱＴＴＧＬＣＱＥＣＰＰＣＧＰＧＥＥＰＹＬＳＣＧＹＧＴＫＤＥＤＹＧＣＶＰＣＰＡＥＫＦＳＫＧＧＹＱＩＣＲＲＨＫＤＣＥＧＦＦＲＡＴＶＬＴＰＧＤＭＥＮＤＡＥＣＧＰＣＬＰＧＹＹＭＬＥＮＲＰＲＮＩＹＧＭＶＣＹＳＣＬＬＡＰＰＮＴＫＥＣＶＧＡＴＳＧＡＳＡＮＦＰＧＴＳＧＳＳＴＬＳＰＦＱＨＡＨＫＥＬＳＧＱＧＨＬＡＴＡＬＩＩＡＭＳＴＩＦＩＭＡＩＡＩＶＬＩＩＭＦＹＩＬＫＴＫＰＳＡＰＡＣＣＴＳＨＰＧＫＳＶＥＡＱＶＳＫＤＥＥＫＫＥＡＰＤＮＶＶＭＦＳＥＫＤＥＦＥＫＬＴＡＴＰＡＫＰＴＫＳＥＮＤＡＳＳＥＮＥＱＬＬＳＲＳＶＤＳＤＥＥＰＡＰＤＫＱＧＳＰＥＬＣＬＬＳＬＶＨＬＡＲＥＫＳＡＴＳＮＫＳＡＧＩＱＳＲＲＫＫＩＬＤＶＹＡＮＶＣＧＶＶＥＧＬＳＰＴＥＬＰＦＤＣＬＥＫＴＳＲＭＬＳＳＴＹＮＳＥＩＡＶＶＫＴＷＲＨＬＡＥＳＦＧＬＫＲＤＥＩＧＧＭＴＤＧＭＱＬＦＤＲＩＳＴＡＧＹＳＩＰＥＬＬＴＫＬＶＱＩＥＲＬＤＡＶＥＳＬＣＡＤＩＬＥＷＡＧＶＶＰＰＡＳＱＰＨＡＡＳ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＢＣ０９３８７２；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７５）。他の実施形態では、前記ｅｄａｒタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０９３８７０、ＢＣ０３４９１９、ＮＭ＿０２１７８３、ＮＭ＿０２２３３６、ＡＹ１５２７２４、ＡＦ２９８８１２、ＡＨ００８０７７、ＡＦ１３０９９６、及びＡＦ１３０９８８から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ｅｄａｒタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ｅｄａｒタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４８】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ノギン・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ノギン・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、前記ノギン・タンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００４９】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるノギン・タンパク質は、次の配列を有する。ＭＥＲＣＰＳＬＧＶＴＬＹＡＬＶＷＬＧＬＲＡＴＰＡＧＧＱＨＹＬＨＩＲＰＡＰＳＤＮＬＰＬＶＤＬＩＥＨＰＤＰＩＦＤＰＫＥＫＤＬＮＥＴＬＬＲＳＬＬＧＧＨＹＤＰＧＦＭＡＴＳＰＰＥＤＲＰＧＧＧＧＧＡＡＧＧＡＥＤＬＡＥＬＤＱＬＬＲＱＲＰＳＧＡＭＰＳＥＩＫＧＬＥＦＳＥＧＬＡＱＧＫＫＱＲＬＳＫＫＬＲＲＫＬＱＭＷＬＷＳＱＴＦＣＰＶＬＹＡＷＮＤＬＧＳＲＦＷＰＲＹＶＫＶＧＳＣＦＳＫＲＳＣＳＶＰＥＧＭＶＣＫＰＳＫＳＶＨＬＴＶＬＲＷＲＣＱＲＲＧＧＱＲＣＧＷＩＰＩＱＹＰＩＩＳＥＣＫＣＳＣ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００５４５０；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７６）。他の実施形態では、前記ノギン・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０３４０２７及びＵ３１２０２から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ノギン・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ノギン・タンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５０】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５１】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号ＮＭ＿０００１９３に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、Ｌ３８５１８及びＮＰ＿０００１８４から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、当該技術分野で公知の他のヘッジホッグ配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、当該技術分野では公知の他のソニック・ヘッジホッグ配列を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５２】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチドである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β１タンパク質のアンタゴニストである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストである。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５３】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ＴＧＦ−β１タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号ＢＣ０００１２５に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ヘッジホッグ・タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ００１１８０、ＢＣ０２２２４２、及びＮＭ＿０００６６０から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β１タンパク質は、当該技術分野で公知の他のＴＧＦ−βタンパク質を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５４】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用される前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、遺伝子銀行のアクセス番号Ｊ０３２４１に登録されている配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００３２３９、ＢＣ０１８５０３、ＢＴ００７２８７、及びＸ１４１４９から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＴＧＦ−β３タンパク質は、当該技術分野で公知の他のＴＧＦ−β３タンパク質を有する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、前記中立表皮細胞に直接的に作用する。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、間葉細胞を介して前記中立表皮細胞に作用する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５６】
他の実施形態では、前記間葉細胞は、皮膚凝縮細胞（dermal condensate cell）である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、ＤＰ細胞である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、他の種類の細胞、又は皮膚凝縮ＤＰ系統（dermal condensate-DP lineage）における分化段階である。他の実施形態では、前記間葉細胞は、当該技術分野で公知の他の種類の間葉細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５７】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＥＧＦＲは、次の配列を有する。ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＢＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＫＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００５２２８；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７７）。他の実施形態では、前記ＥＧＦＲは、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿２０１２８２、ＮＭ＿２０１２８３、ＮＭ＿２０１２８４、ＢＣ０９４７６１、ＡＦ２８８７３８、ＡＹ５８８２４６、ＡＹ５７３０６１、Ｘ１７０５４、ＡＦ１２５２５３、Ｕ４８７２２、Ｋ０３１９３、及びＡＹ６９８０２４から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＥＧＦＲは、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ＥＧＦＲの生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５８】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＥＧＦは、次の配列を有する。ＭＬＬＴＬＩＩＬＬＰＶＶＳＫＦＳＦＶＳＬＳＡＰＱＨＷＳＣＰＥＧＴＬＡＧＮＧＮＳＴＣＶＧＰＡＰＦＬＩＦＳＨＧＮＳＩＦＲＩＤＴＥＧＴＮＹＥＱＬＶＶＤＡＧＶＳＶＩＭＤＦＨＹＮＥＫＲＩＹＷＶＤＬＥＲＱＬＬＱＲＶＦＬＮＧＳＲＱＥＲＶＣＮＩＥＫＮＶＳＧＭＡＩＮＷＩＮＥＥＶＩＷＳＮＱＱＥＧＩＩＴＶＴＤＭＫＧＮＮＳＨＩＬＬＳＡＬＫＹＰＡＮＶＡＶＤＰＶＥＲＦＩＦＷＳＳＥＶＡＧＳＬＹＲＡＤＬＤＧＶＧＶＫＡＬＬＥＴＳＥＫＩＴＡＶＳＬＤＶＬＤＫＩＩＬＦＷＩＱＹＮＲＥＧＳＮＳＬＩＣＳＣＤＹＤＧＧＳＶＨＩＳＫＨＰＴＱＨＮＬＦＡＭＳＬＦＧＤＲＩＦＹＳＴＷＫＭＫＴＩＷＩＡＮＫＩｉＴＧＫＤＭＶＲＩＮＬＨＳＳＦＶＰＬＧＥＬＫＶＶＨＰＬＡＱＰＫＡＥＤＤＴＷＥＰＥＱＫＬＣＫＬＲＫＧＮＣＳＳＴＶＣＧＱＤＬＱＳＨＬＣＭＣＡＥＧＹＡＬＳＲＤＲＫＹＣＥＤＶＮＥＣＡＦＷＮＨＧＣＴＬＧＣＫＮＴＰＧＳＹＹＣＴＣＰＶＧＦＶＬＬＰＤＧＫＲＣＨＱＬＶＳＣＰＲＮＶＳＥＣＳＨＤＣＶＬＴＳＥＧＰＬＣＦＣＰＥＧＳＶＬＥＲＤＧＫＴＣＳＧＣＳＳＰＤＮＧＧＣＳＱＬＣＶＰＬＳＰＶＳＷＥＣＤＣＦＰＧＹＤＬＱＬＤＥＫＳＣＡＡＳＧＰＱＰＦＬＬＦＡＮＳＱＤＩＲＨＭＨＦＤＧＴＤＹＧＴＬＬＳＱＱＭＧＭＶＹＡＬＤＨＤＰＶＥＮＫＩＹＦＡＨＴＡＬＫＷＩＥＲＡＮＭＤＧＳＱＲＥＲＬＩＥＥＧＶＤＶＰＥＧＬＡＶＤＷＩＧＲＲＦＹＷＴＤＲＧＫＳＬＩＧＲＳＤＬＮＧＫＲＳＫＩＩＴＫＥＮＩＳＱＰＲＧＩＡＶＨＰＭＡＫＲＬＦＷＴＤＴＧＩＮＰＲＩＥＳＳＳＬＱＧＬＧＲＬＶＩＡＳＳＤＬＩＷＰＳＧＩＴＩＤＦＬＴＤＫＬＹＷＣＤＡＫＱＳＶＩＥＭＡＮＬＤＧＳＫＲＲＲＬＴＱＮＤＶＧＨＰＦＡＶＡＶＦＥＤＹＶＷＦＳＤＷＡＭＰＳＶＩＲＶＮＫＲＴＧＫＤＲＶＲＬＱＧＳＭＬＫＰＳＳＬＶＶＶＨＰＬＡＫＰＧＡＤＰＣＬＹＱＮＧＧＣＥＨＩＣＫＫＲＬＧＴＡＷＣＳＣＲＥＧＦＭＫＡＳＤＧＫＴＣＬＡＬＤＧＨＱＬＬＡＧＧＥＶＤＬＫＮＱＶＴＰＬＤＤＬＳＫＴＲＶＳＥＤＮＩＴＥＳＱＨＭＬＶＡＥＩＭＶＳＤＱＤＤＣＡＰＶＧＣＳＭＹＡＲＣＩＳＥＧＥＤＡＴＣＱＣＬＫＧＦＡＧＤＧＫＬＣＳＤＩＤＥＣＥＭＧＶＰＶＣＰＰＡＳＳＫＣＩＮＴＥＧＧＹＶＣＲＣＳＥＧＹＱＧＤＧＩＨＣＬＤＩＤＥＣＱＬＧＶＨＳＣＧＥＮＡＳＣＴＮＴＥＧＧＹＴＣＭＣＡＧＲＬＳＥＰＧＬＩＣＰＤＳＴＰＰＰＨＬＲＥＤＤＨＨＹＳＶＲＮＳＤＳＥＣＰＬＳＨＤＧＹＣＬＨＤＧＶＣＭＹＩＥＡＬＤＫＹＡＣＮＣＶＶＧＹＩＧＥＲＣＱＹＲＤＬＫＷＷＥＬＲＨＡＧＨＧＱＱＱＫＶＩＶＶＡＶＣＷＶＬＶＭＬＬＬＬＳＬＷＧＡＨＹＹＲＴＱＫＬＬＳＫＮＰＫＮＰＹＥＥＳＳＲＤＶＲＳＲＲＰＡＤＴＥＤＧＭＳＳＣＰＱＰＷＦＶＶＩＫＥＨＱＤＬＫＮＧＧＱＰＶＡＧＥＤＧＱＡＡＤＧＳＭＱＰＴＳＷＲＱＥＰＱＬＣＧＭＧＴＥＱＧＣＷＩＰＶＳＳＤＫＧＳＣＰＱＶＭＥＲＳＦＨＭＰＳＹＧＴＱＴＬＥＧＧＶＥＫＰＨＳＬＬＳＡＮＰＬＷＱＱＲＡＬＤＰＰＨＱＭＥＬＴＱ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１９６３；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７８）。他の実施形態では、前記ＥＧＦは、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０９３７３１、ＡＹ５４８７６２、及びＸ０４５７１から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記ＥＧＦは、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、ＥＧＦの生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００５９】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるβカテニンタンパク質は、次の配列を有する。ＭＡＴＱＡＤＬＭＥＬＤＭＡＭＥＰＤＲＫＡＡＶＳＨＷＱＱＱＳＹＬＤＳＧＩＨＳＧＡＴＴＴＡＰＳＬＳＧＫＧＮＰＥＥＥＤＶＤＴＳＱＶＬＹＥＷＥＱＧＦＳＱＳＦＴＱＥＱＶＡＤＩＤＧＱＹＡＭＴＲＡＱＲＶＲＡＡＭＦＰＥＴＬＤＥＧＭＱＩＰＳＴＱＦＤＡＡＨＰＴＮＶＱＲＬＡＥＰＳＱＭＬＫＨＡＶＶＮＬＩＮＹＱＤＤＡＥＬＡＴＲＡＩＰＥＬＴＫＬＬＮＤＥＤＱＶＶＶＮＫＡＡＶＭＶＨＱＬＳＫＫＥＡＳＲＨＩＭＲＳＰＱＭＶＳＡＴＶｌｌＴＭＱＮＴＮＤＶＥＴＡＲＣＴＡＧＴＬＨＮＬＳＨＨＲＥＧＬＬＡＩＦＫＳＧＧＩＰＡＬＶＫＭＬＧＳＰＶＤＳＶＬＦＹＡＩＴＴＬＨＮＬＬＬＨＱＥＧＡＫＭＡＶＲＬＡＧＧＬＱＫＭＶＡＬＬＮＫＴＮＶＫＦＬＡＩＴＴＤＣＬＱＩＬＡＹＧＮＱＥＳＫＬＩＩＬＡＳＧＧＰＱＡＬＶＮＩＭＲＴＹＴＹＥＫＬＬＷＴＴＳＲＶＬＫＶＬＳＶＣＳＳＮＫＰＡＩＶＥＡＧＧＭＱＡＬＧＬＨＬＴＤＰＳＱＲＬＶＱＮＣＬＷＴＬＲＮＬＳＤＡＡＴＫＱＥＧＭＥＧＬＬＧＴＬＶＱＬＬＧＳＤＤＩＮＶＶＴＣＡＡＧＩＬＳＮＬＴＣＮＮＹＫＭＭＭＶＣＱＶＧＧＩＥＡＬＶＲＴＶＬＲＡＧＤＲＥＤＩＴＥＰＡＩＣＡＬＲＨＬＴＳＲＨＱＥＡＥＭＡＱＮＡＶＲＬＨＹＧＬＰＶＶＶＫＬＬＨＰＰＳＨＷＰＬＩＫＡＴＶＧＬＩＩＷＬＡＬＣＰＡＮＨＡＰＬＲＥＱＧＡＩＰＲＬＶＱＬＬＶＲＡＨＱＤＴＱＲＲＴＳＭＧＧＴＱＱＱＦＶＥＧＶＲＭＥＥＩＶＥＧＣＴＧＡＬＨＩＬＡＲＤＶＨＮＲＩＶＩＲＧＬＮＴＩＰＬＦＶＱＬＬＹＳＰＩＥＮＩＱＲＶＡＡＧＶＬＣＥＬＡＱＤＫＥＡＡＥＡＩＥＡＥＧＡＴＡＰＬＴＥＬＬＨＳＲＮＥＧＶＡＴＹＡＡＡＶＬＦＲＭＳＥＤＫＰＱＤＹＫＫＲＬＳＶＥＬＴＳＳＬＦＲＴＥＰＭＡＷＮＥＴＡＤＬＧＬＤＩＧＡＱＧＥＰＬＧＹＲＱＤＤＰＳＹＲＳＦＨＳＧＧＹＧＱＤＡＬＧＭＤＰＭＭＥＨＥＭＧＧＨＨＰＧＡＤＹＰＶＤＧＬＰＤＬＧＨＡＱＤＬＭＤＧＬＰＰＧＤＳＮＱＬＡＷＦＤＴＤＬ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＮＭ＿００１９０４；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２７９）。他の実施形態では、前記βカテニンタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＢＣ０５８９２６、Ｘ８７８３８、ＡＦ１３００８５、ＡＢ０６２２９２、Ｚ１９０５４、及びＮＰ＿００１８９５から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記βカテニンタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、βカテニンタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６０】
他の実施形態では、本発明に係る方法及び組成物で使用されるＷｎｔタンパク質は、次の配列を有する。ＭＮＲＫＡＲＲＣＬＧＨＬＦＬＳＬＧＭＶＹＬＷＧＧＦＳＳＷＡＬＧＡＳＵＣＮＫＩＰＧＬＡＰＲＱＲＡＩＣＱＳＧＳＱＭＧＬＤＥＣＱＦＱＦＲＮＧＲＷＮＣＳＡＬＧＥＲＴＶＦＧＫＥＬＫＶＧＳＲＥＡＡＦＴＹＡＨＡＡＧＶＡＨＡＩＴＡＡＣＴＱＧＮＬＳＤＣＧＣＤＫＥＫＱＧＱＹＨＲＤＥＧＷＫＷＧＧＣＳＡＤＩＲＹＧＩＧＦＡＫＶＦＶＤＡＲＥＩＫＱＮＡＲＴＬＭＮＬＨＮＮＥＡＧＲＫＩＬＥＥＮＭＫＬＥＣＫＣＨＧＶＳＧＳＣＴＴＫＴＣＷＴＴＬＰＱＦＲＥＬＧＹＶＬＫＤＫＹＮＥＡＶＨＶＥＰＶＲＡＳＲＮＫＲＰＴＦＬＫＩＫＫＰＬＳＹＲＫＰＭＤＴＤＬＶＹＩＥＫＳＰＮＹＣＥＥＤＰＶＴＧＳＶＧＴＱＧＲＡＣＮＫＴＡＰＱＡＳＧＣＤＬＭＣＣＧＲＧＹＮＴＨＱＹＡＲＶＷＱＣＮＣＫＦＨＷＣＣＹＶＫＣＮＴＣＳＥＲＴＥＭＹＴＣＫ（遺伝子銀行のアクセス番号：ＢＣ００８８１１；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２８０）。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている、ＮＭ＿００４６２５、Ｄ８３１７５、Ｕ５３４７６、及びＮＰ＿００４６１６から選択された配列を有する。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０タンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ａタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ｂタンパク質である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、遺伝子銀行に登録されている上記のいずれか１つの配列を有する核酸分子によってエンコードされる。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７タンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７ａタンパク質の生物活性断片が、本発明に係る方法に使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６１】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、遺伝子銀行に登録されているＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するリボ核酸（ribonucleic acid：ＲＮＡ）分子によってエンコードされたタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列と相同である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列のアイソフォームである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を増加させる。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを増加させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６２】
本明細書中で説明されるように、表３に示した転写物（実施例８；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２）、それらがエンコードするタンパク質、及び前記タンパク質が関与する経路は、ＨＦ幹細胞の活性化に大きく貢献する。そのため、ここで使用される条件下で、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化によって、毛髪の成長期を誘導することができる。したがって、表３に示した前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６３】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、遺伝子銀行に登録されているＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列と相同である。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列のアイソフォームである。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を増加させる。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを増加させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６４】
本明細書中で説明されるように、表４に示した転写物（実施例９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２５７）、それらがエンコードするタンパク質、及び前記タンパク質が関与する経路は、ここで使用される条件下で、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化に大きく貢献する。したがって、表４に示した前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の活性化は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６５】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の活性を減少させる化合物又は因子である。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３から選択された配列を有するＲＮＡ分子によってエンコードされたタンパク質の発現又はレベルを減少させる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６６】
本発明の発見により実証されるように、表５に示した転写物（実施例９；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５８〜２７３）、それらがエンコードするタンパク質、前記タンパク質が関与する経路は、ここで使用される条件下で、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化誘導を阻止するのに大きく貢献する。したがって、表５に示した前記転写物、タンパク質及び経路の抑制は、ＥＤＩＨＮを誘導するための方法である。他の実施形態では、前記転写物、タンパク質及び経路の抑制は、対象の髪の成長を促進するための方法である。
【００６７】
他の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２３３〜２７３に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子、又は前記配列をエンコードしている核酸によってエンコードされたタンパク質を調節する化合物は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２３２に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子又は前記配列をエンコードしている核酸によってエンコードされたタンパク質を調節する化合物を投与する前に投与される。他の実施形態では、前記２つの化合物は、同時に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６８】
ある実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１〜２７３から選択されたＲＮＡ配列によってエンコードされたタンパク質又はそれを調節する化合物は、それらのＨＦ形成又は発毛促進の効果をさらに高めるために、前記ＲＮＡ配列によってエンコードされた他のタンパク質又はそれを調節する化合物を投与する前に投与される。他の実施形態では、ｗｎｔ経路は、ヘッジホッグ経路の前に刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、重複方法（overlapping fashion）によって刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、同時に刺激される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００６９】
他の実施形態では、本発明に係る方法でのＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、転写機構を介して行われる（例えば、ＲＮＡの発現の活性化）。他の実施形態では、ＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、翻訳機構によって行われる。他の実施形態では、ＲＮＡ転写物の発現の活性化又は減少は、翻訳後機構によって行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７０】
他の実施形態では、本発明に係る方法で使用される核酸分子は、本発明に記載された配列から選択された配列を有するＲＮＡ分子をエンコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子である。
【００７１】
ある実施形態では、本発明に係るＲＮＡ分子は、ＨＦ再生に関与するタンパク質をエンコードする。他の実施形態では、前記ＲＮＡ分子は、それ自体が触媒的に活性である（例えばリボザイムなど）。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７２】
他の実施形態では、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する化合物又は因子は、細胞のプラコードを誘導する化合物又は因子である。本明細書中で説明されるように、細胞のプラコードを誘導する化合物又は因子は、実施例の欄で例示するように、ＥＤＩＨＮを誘導する。他の実施形態では、前記化合物又は因子は、ＨＦ発達のプラコード段階で作用する。
【００７３】
他の実施形態では、前記化合物又は因子は、中立表皮細胞のＨＦへの分化を阻害する生物学的要因を抑制する。
【００７４】
本発明に係る方法及び組成物の他の実施形態では、上記の化合物又は因子の１つを含有する組成物が投与される。上記の種類の化合物、因子及び組成物の各々は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００７５】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、ミノキシジル（minoxidil）を接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００７６】
ある実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する方法であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、ミノキシジルを接触させるステップとを含み、それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法を提供する。
【００７７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する医薬組成物を製造するためのミノキシジルの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に前記ミノキシジルを接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００７８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域のはげ頭症を治療する医薬組成物を製造するためのミノキシジルの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に前記ミノキシジルを接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００７９】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）ＥＧＦタンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかを接触させるステップとを含み、それによって、対象の皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法を提供する。
【００８０】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、光による皮膚剥離である。他の実施形態では、前記表皮破壊は、非瘢痕性方法である。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子の投与は、ＨＦ形成を抑制する。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、治療の数日以内に投与される。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、治療の約１日以内に投与される。他の実施形態では、ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド、化合物又は因子は、Ｄｋｋｌタンパク質のためにここで列挙された任意の時間形態にしたがって投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８１】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域から毛包を除去する医薬組成物を製造するための、（ｉ）ＥＧＦタンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかの使用であって、（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊し、（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、前記ＥＧＦタンパク質、ＥＧＦ受容体、ヌクレオチド又は化合物又は因子を接触させることを特徴とする使用を提供する。
【００８２】
他の実施形態では、本発明に係る組成物又は方法は、人間の皮膚に使用される、他の実施形態では、本発明に係る組成物又は方法は、発毛を望まない領域に使用される。他の実施形態では、前記領域は、顔である。他の実施形態では、前記領域は、ビキニ領域である。他の実施形態では、前記領域は、脚部である。他の実施形態では、前記領域は、腕部である。他の実施形態では、前記領域は、胸部である。
【００８３】
本発明に係る方法及び組成物に使用される「阻害剤」は、他の実施形態では、標的であるタンパク質又は生物学的因子と結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、薬理学的阻害剤である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他の薬理学的阻害剤である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する
【００８４】
本発明に係る方法における表皮を破壊するステップは、他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域を剥離することにより行われる。他の実施形態では、「剥離（abrading）」という用語は、表皮剥離（abrasion）を引き起こす行為を意味する。他の実施形態では、「剥離」という用語は、こすり取ることを意味する。他の実施形態では、「剥離」という用語は、摩擦によってすり減らすことを意味する。本明細書中で説明されるように、表皮剥離は、ここで使用される条件下で、新たにＨＦ新生を引き起こす。他の実施形態では、表皮層は破壊される。
【００８５】
ある実施形態では、「剥離（abrasion）」は、「表皮剥離（abrading）」と同じ意味である。他の実施形態では、「表皮剥離」は、頭皮又は皮膚における、皮膚が除去された領域を意味する。他の実施形態では、「表皮剥離」は、頭皮又は皮膚における、表皮及び真皮が除去された領域を意味する。「剥離」及び「表皮剥離」の各定義は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８６】
他の実施形態では、本明細書中で説明されるように、使用される条件下で、本発明に係る方法での表皮破壊は、皮膚の背部を、毛包を再生する胎児様状態（embryonic-like state）に変換する。他の実施形態では、皮膚の新しいＨＦの数及びサイズを操作可能な間に、次の機会が得られる。他の実施形態では、この機会における、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する化合物又は因子の投与によって、より大きくより数の多いＨＦの再生が引き起こされる。剥離された皮膚におけるＨＦの形態は、初期のＨＦの形態と類似している（実施例１〜２、及びその後の実施例）、発現したマーカーも同様に類似している。
【００８７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を促進する方法であって、本発明に係る方法を実施することにより、対象の前記頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を促進する方法を提供する。実施例３で実証されているように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦは、発毛させることができる。したがって、本発明に係る方法は、発毛を促進するのに使用することができる。
【００８８】
「ＥＤＩＨＮ」は、表皮層の破壊によって誘起されたＨＦ新生を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮剥離によって誘起されたＨＦ新生を意味する。他の実施形態では、この用語は、創傷（wounding）によって誘発されたＨＦ再生を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮層の破壊、及びその後の、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子の投与によって誘発されたＨＦ再生を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００８９】
他の実施形態では、本発明は、化合物のインビボでのＨＦ形成を調節する能力を試験する方法であって、（ａ）第１の対象における、前記化合物と接触させた第１の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、（ｂ）前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第１のＨＦ形成）を測定するステップと、（ｃ）前記第１の対象又はそれとは異なる第２の対象における、前記化合物と接触させていない第２の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、（ｄ）前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第２のＨＦ形成）を測定するステップと、（ｅ）前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成との差が示す前記化合物のインビボでのＨＦ形成調節能力を調べるために、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成とを比較するステップとを含む方法（実施例）。
【００９０】
他の実施形態では、本発明は、インビボにおける化合物の発毛促進能力を試験する方法であって、前記化合物と接触させた第１の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第１のＨＦ形成）を測定するステップと、前記化合物と接触させていない第２の頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮層を破壊するステップと、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦ形成（第２のＨＦ形成）を測定するステップと、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成との差が示すインビボにおける前記化合物の発毛促進能力を調べるために、前記第１のＨＦ形成と前記第２のＨＦ形成とを比較するステップとを含む方法を提供する。
【００９１】
ある実施形態では、本発明に係る化合物の試験方法は、統計的に有意なサンプル数が得られるまで、複数の対象を使用して繰り返される。
【００９２】
本発明に係る化合物の試験方法の他の実施形態では、前記第１の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第１の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。他の実施形態では、前記対象は、新しいＨＦの形成を必要としている対象である。他の実施形態では、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第１の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。他の実施形態では、前記第２の頭皮、眉又は瘢痕領域は、第２の対象における頭皮、眉又は瘢痕領域である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９３】
他の実施形態では、本発明に係る方法における切除創傷は、手術道具を使用して作成される。ある実施形態では、前記手術道具は、皮膚生検パンチである（実施例２）。他の実施形態では、前記切除創傷は、冷凍処理又は冷凍損傷（cryoinjury）によって作成される。冷凍処理又は冷凍損傷の使用は当該技術分野で公知であり、例えば、傷ついた皮膚の皮膚専門医によって使用される。ある実施形態では、冷凍処理又は冷凍損傷は、水膨れをもたらす。他の実施形態では、前記水脹れは、薬剤及び細胞を再表皮化領域へ導入ための「チェンバー（chamber）」として使用される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９４】
他の実施形態では、本発明に係る方法における前記切除創傷は、手術で縫合されない。他の実施形態では、本発明に係る方法における前記切除創傷は、治癒する前又は創傷が作成されてから一定期間は、包帯と接触しない。他の実施形態では、前記切除創傷は、治癒する前又は創傷が作成されてから一定期間は、軟膏と接触されない。他の実施形態では、前記切除創傷は、２次的な意図で治癒される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９５】
他の実施形態では、本発明に係る方法での対象は、人間である。本明細書中で説明されるように、人間の皮膚は、ＥＤＩＨＮに対してマウスの皮膚と同様に反応する（実施例７）。他の実施形態では、前記対象は、男性である。他の実施形態では、前記対象は、女性である。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野で公知の他の種類の対象である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９６】
他の実施形態では、前記対象は、大人である。ある実施形態では、「大人」は、１８歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、２０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、２５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、３０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、３５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、４０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、４５歳以上を意味する。
【００９７】
他の実施形態では、前記対象は、高齢者である。他の実施形態では、「高齢者」は、４５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、５０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、５５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、６０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、６５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、７０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、７５歳以上を意味する。
【００９８】
他の実施形態では、前記第１の対象、又は、前記第１の対象、及び適用される場合は前記第１の対象と前記第２の対象の両方は、実験動物である。他の実施形態では、前記対象は、マウスである。他の実施形態では、前記対象は、ラットである。他の実施形態では、前記対象は、アレチネズミ（gerbil）である。他の実施形態では、前記対象は、ハムスターである。他の実施形態では、前記対象は、テンジクネズミ（guinea pig）である。他の実施形態では、前記対象は、ウサギである。他の実施形態では、前記対象は、ブタである。他の実施形態では、前記対象は、イヌである。他の実施形態では、前記対象は、ネコである。他の実施形態では、前記対象は、霊長類である。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野で公知の他の実験動物である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【００９９】
他の実施形態では、前記対象は、はげ頭症（balding）を含む疾病又は疾患がある。他の実施形態では、前記対象は、はげ頭症を含む疾病又は疾患はない。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、アンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、男性型はげ頭症である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、女性型はげ頭症である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、円板状エリテマトーデス（discoid lupus erythematosis）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、先天性貧毛（congenital hypotrichosis）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、毛孔性扁平苔癬（lichen planopilari）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、瘢痕性脱毛症（scarring alopecia）である。他の実施形態では、前記疾病又は疾患は、当該技術分野で公知の他のはげ頭症を含む疾病又は疾患である。
【０１００】
他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの大部分は、毛周期の休止期にある。実施例５〜６の結果は、（ａ）ＥＤＩＨＮは、前記休止期において、頭皮、眉又は瘢痕領域における発毛を元の状態に戻せること、及び、（ｂ）休止期でのＥＤＩＨＮの効率は、剥離又は創傷を作成する前の除毛によって高めることができることを示す。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの６０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの７０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの８０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、前記頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの９０％以上は、毛周期の休止期にある。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域のＨＦの大部分は、毛周期の休止期にない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０１】
本発明に係る方法及び組成物の他の実施形態では、前記第１のステップ（例えば、表皮破壊）は、前記第２のステップ（例えば、活性化合物、因子、細胞等の投与）の３〜１２日前に行われる。他の実施形態では、前記間隔は、４〜１２日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１２日である。他の実施形態では、前記間隔は、４〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜９日である。他の実施形態では、前記間隔は、６〜８日である。他の実施形態では、前記間隔は、７〜８日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１１日である。他の実施形態では、前記間隔は、５〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、７〜１０日である。他の実施形態では、前記間隔は、約１週間である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０２】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域におけるＷｎｔタンパク質の活性又は発現を抑制するステップをさらに含む。本明細書中で説明されるように、Ｗｎｔ活性を抑制することにより、本発明に係る方法によって形成されたＨＦの色素沈着が誘起される。他の実施形態では、前記Ｗｎｔ活性又は発現を抑制するステップは、表皮破壊の約１０日以内に行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔ活性又は発現を抑制するステップは、第２のステップの前（例えば、ＨＦ細胞の分化を促進する化合物又は因子を投与する前）に行われる。
【０１０３】
他の実施形態では、本発明は、毛髪の色素沈着を誘起する方法であって、前記毛髪の毛包でのＷｎｔタンパク質の発現を抑制するステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ７ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ３ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０である。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、Ｗｎｔ１０ａである。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質は、当該技術分野で公知の他のＷｎｔタンパク質である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０４】
他の実施形態では、本発明は、対象の色素沈着した頭毛は眉毛の成長を誘起する方法であって、本発明に係る方法に従って頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成するステップと、前記毛包でのＷｎｔタンパク質の発現を抑制するステップとを含み、それによって、対象の色素沈着した頭毛は眉毛の成長を誘起する方法を提供する。
【０１０５】
他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、当該技術分野で公知の他のＷｎｔ阻害剤の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起することを含む。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制する前記ステップは、表皮破壊の直後又は少し後に行われる。他の実施形態では、Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起する前記ステップは、表皮破壊の直後又は少し後に行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、表皮破壊の時点で行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、表皮破壊の時点で行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、毛包の形成の数日前に行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、毛包の形成の数日前に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０６】
他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約８日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約８日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約９日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約９日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約１０日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約１０日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、約１２日間行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、約１２日間行われる。他の実施形態では、前記Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制するステップは、表皮再形成の期間に行われる。他の実施形態では、前記Ｄｋｋ１タンパク質の発現を誘起するステップは、表皮再形成の期間に行われる。他の実施形態では、Ｄｋｋ１タンパク質の発現は、数日後に停止する。他の実施形態では、数日後でのＤｋｋ１タンパク質の発現停止は、Ｗｎｔタンパク質の発現を誘起する又は可能にする。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、剥離又は創傷した約９日後に誘起される。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、表皮再形成期間の後に誘起される。他の実施形態では、Ｗｎｔタンパク質の発現は、新しいＨＦの形成に必要である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０７】
他の実施形態では、「数日」は、約１日である。他の実施形態では、「数日」は、約２日である。他の実施形態では、「数日」は、約３日である。他の実施形態では、「数日」は、約５日である。他の実施形態では、「数日」は、約７日である。他の実施形態では、「数日」は、約１０日である。他の実施形態では、「数日」は、約１２日である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０８】
他の実施形態では、本発明に係る方法における接触ステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、化合物、ＲＮＡ、タンパク質などを直接的に接触させることを含む。他の実施形態では、本発明に係る方法における接触ステップは、化合物、ＲＮＡ又はタンパク質を前記頭皮、眉又は瘢痕領域に生物学的処理によって搬送した後に、対象の他の部位又は組織を介して前記頭皮、眉又は瘢痕領域に間接的に接触させることを含む。前記生物学的処理としては、例えば、液体（血液、リンパ液、間質液など）内での拡散、能動輸送又は循環などがある。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１０９】
他の実施形態では、本発明に係る方法における表皮破壊は、頭皮、眉又は瘢痕領域から皮膚組織をさらに除去する。他の実施形態では、前記表皮破壊は、頭皮、眉又は瘢痕領域から皮膚組織を除去しない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１０】
表皮又は表皮層の「破壊（disrupting）は、他の実施形態では、表皮又は表皮層の一部の除去を意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層を損傷させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層を穿孔することを意味する。他の実施形態では、表皮層の一部だけを除去する。他の実施形態では、表皮層全体を除去する。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層の剥離を意味する（実施例）。他の実施形態では、この用語は、表皮又は表皮層の損傷を意味する（実施例）。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１１】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、サンドペーパーなどの道具によって行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、レーザーによって行われる。他の実施形態では、前記レーザーは、フラクセルレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、ＣＯ２レーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、エキシマレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、経表皮損傷の誘導が可能な他の種類のレーザーである。他の実施形態では、前記表皮破壊は、フェルトホイール（felt wheel）を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、手術道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野で公知の他の表皮破壊が可能な道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、マイクロ皮膚剥離装置を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、熱傷処置を含む。
【０１１２】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊、及び、前記表皮の毛包間領域の破壊を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊を含むが、前記表皮の毛包間領域の破壊は含まない。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１３】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、光ベースの方法を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、可視光線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、赤外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、紫外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、常用電圧照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、Ｘ線照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野では公知の他の種類の照射を含む。
【０１１４】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、機械的手段を用いて行われる。他の実施形態では、「機械的手段」は、剥離である。他の実施形態では、前記用語は、損傷を意味する。他の実施形態では、前記用語は、超音波を意味する。他の実施形態では、前記用語は、無線周波数を意味する。他の実施形態では、前記用語は、ａｂ電気処理、又は電流の使用を意味する。他の実施形態では、前記用語は、エレクトロポレーションを意味する。他の実施形態では、前記用語は、切除を意味する。他の実施形態では、前記用語は、テープストリッピング（tape-stripping）を意味する。他の実施形態では、前記用語は、マイクロ皮膚剥離を意味する。他の実施形態では、前記用語は、ピール（peel）の使用を意味する。他の実施形態では、前記用語は、当該技術分野で公知の他の種類の機械的手段を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１５】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、化学物質による処理を含む。他の実施形態では、前記化学物質は、フェノールである。他の実施形態では、前記化学物質は、トリクロロ酢酸である。他の実施形態では、前記化学物質は、アスコルビン酸である。他の実施形態では、前記化学物質は、当該技術分野で公知の他の化学物質である。
【０１１６】
表皮破壊の各方法及び種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１７】
他の実施形態では、本発明に係る方法では、表皮外傷（epidermal trauma）が使用される。
【０１１８】
表皮剥離及び表皮外傷の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１１９】
他の実施形態では、本発明に係る方法における表皮破壊は、少なくとも約１〜１．５ｃｍの擦傷を生じる。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約１ｃｍの幅である。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約１．５ｃｍの幅である。他の実施形態では、前記擦傷は、少なくとも約２ｃｍの幅である。擦傷の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２０】
他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、表皮破壊の後に、包帯と接触しない。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、表皮破壊の後に、軟膏と接触しない。他の実施形態では、頭皮、眉又は瘢痕領域は、通常は治療を促進するために擦傷又は創傷に使用される薬物、装置、軟膏などと接触しない状態で、一定期間に渡って治療される。他の実施形態では、前記一定期間は、表皮破壊の治療に要する時間である。他の実施形態では、前記一定期間は、２日〜３週間の任意の長さ及び範囲の時間である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２１】
ある実施形態では、「後（following）」は、約２日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約３日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約４日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約５日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約７日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約１０日後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約２週間後を意味する。ある実施形態では、「後」は、約３週間後を意味する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２２】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域を除毛（depilation）するステップをさらに含む。本明細書中で説明されるように、実施例６の結果は、擦傷又は創傷誘導前の除毛によって、ＥＤＩＨＮの効率が向上することを示す。
【０１２３】
他の実施形態では、除毛は、脱毛である。他の実施形態では、除毛は、ワックス脱毛のステップを含む。他の実施形態では、除毛は、プラッキング（plucking）のステップを含む。他の実施形態では、除毛は、研磨材の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、レーザーの使用を含む。他の実施形態では、除毛は、電解の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、機械装置の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、チオグリコール酸の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、当該技術分野では公知の他の方法の使用を含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２４】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、局所レチノイドを投与するステップをさらに含む。ある実施形態では、前記局所レチノイドは、頭皮、眉又は瘢痕領域における休止中（休止期）のＨＦの成長期の開始を誘導する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２５】
他の実施形態では、前記付加的ステップ（除毛又はレチノイドの投与）は、表皮を破壊するステップの前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、表皮を破壊するステップの後、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子を添加する前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、分化を促進する化合物又は因子の添加と同時に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、分化を促進する化合物又は因子の添加後に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２６】
他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２日〜約３週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約３日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約４日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約１週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約１０日前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約２週間前に行われる。他の実施形態では、前記付加的ステップは、前記剥離ステップの約３週間前に行われる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２７】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導することができる誘導細胞を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記ＨＦ細胞は、ＨＦ幹細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２８】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、真皮乳頭細胞（dermal papilla cell）である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、毛包乳頭細胞（follicular papilla cell）である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、皮膚鞘細胞で（dermal sheath cell）ある。他の実施形態では、前記誘導細胞は、ＨＦ幹細胞で上方制御されるように、例えば、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを活性化する因子をエンコードしている遺伝子によって遺伝子組み換えがされた細胞である。ある実施形態では、前記因子は、ヘッジホッグである。他の実施形態では、前記因子は、ＤＰ細胞タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（ｗｎｔ）である。他の実施形態では、前記因子は、ノギン・タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、骨形態形成タンパク質（bone morphogenic protein：ＢＭＰ）である。他の実施形態では、前記因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）である。他の実施形態では、前記因子は、形質転換成長因子β（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ−β）タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質である。他の実施形態では、前記因子は、ノイロトロピンである。他の実施形態では、前記因子は、表皮細胞のＨＦ細胞への分化誘導に寄与する当該技術分野で公知の他の因子である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１２９】
他の実施形態では、前記誘導細胞が、ＨＦ幹細胞で下方制御されるように、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを抑制する因子をエンコードしている遺伝子によって、遺伝子的に操作される。他の実施形態では、前記誘導細胞が、ＨＦ幹細胞で上方制御されるように、本発明で示されたタンパク質又は経路の１つを活性化する因子をエンコードしている遺伝子によって、遺伝子的に操作される。
【０１３０】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、自己細胞である。他の実施形態では、前記誘導細胞は、同種細胞である。
【０１３１】
他の実施形態では、前記誘導細胞は、間充織幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、中胚葉前駆細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、造血幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、胚幹細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、胚性癌腫細胞に由来する。他の実施形態では、前記誘導細胞は、米国特許出願第２００３／０２０１８１５号に開示された細胞種類の１つである。他の実施形態では、前記誘導細胞は、当該技術分野では公知の他の種類の表皮細胞に対しての誘導的性質を有する細胞である。誘導細胞の各種類は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３２】
他の実施形態では、前記表皮細胞（例えば、ＨＦ細胞への分化を誘導する表皮細胞）は、表皮幹細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、バルジ細胞である。他の実施形態では、前記表皮細胞は、当該技術分野で公知の他の種類のＨＦ細胞への分化を誘導する細胞である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３３】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、抗アンドロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フィナステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、Ｆｌｕｒｉｄｉｌ（登録商標）である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、デュタステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、スピロノラクトンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、酢酸シプロテロンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ビカルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ニルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、アンドロゲン受容体の阻害剤である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３４】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン受容体アゴニストを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、エストロゲン類似体を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、エストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７βエストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７αエストラジオールである。ある実施形態では、前記エストロゲン類似体は、ＺＹＣ３である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、又はエストロゲン類似体は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、又はエストロゲン類似体である。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３５】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦタンパク質の阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦＲの阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ＥＧＦタンパク質又はＥＧＦＲの発現を減少させる化合物を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３６】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチドを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、ヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３７】
ある実施形態では、頭皮が、本発明に係る方法により治療される。他の実施形態では、眉（眉）が、本発明に係る方法により治療される。他の実施形態では、皮膚の他の有毛領域が、本発明に係る方法により治療される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１３８】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、リチウム化合物を接触させるステップをさらに含む。ある実施形態では、前記リチウム化合物は、リチウムイオンを含む。他の実施形態では、前記リチウム化合物は、リチウム原子を含む。
【０１３９】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、（２´Ｚ，３´Ｅ）−６−ブロモインディルビン−３´−オキシム（ＢＩＯ）を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明に係る方法は、頭皮、眉又は瘢痕領域に、当該技術分野では公知である、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化を誘導することができる他の化合物を接触させるステップをさらに含む。各化合物は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４０】
ある実施形態では、本発明に係る方法の一部として投与される前記化合物は、全身的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、局所的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、擦傷部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷が生じた部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、除毛部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷治癒の期間に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生の前に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生の期間に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４１】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法の実施を含む、ＨＦ幹細胞の形成を誘導する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法の実施を含む、ＤＰ細胞の形成を誘導する方法を提供する。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４２】
他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体が、本発明に係る方法で投与される。他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体が、本発明に係る方法の標的にされる。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４３】
「相同」、「相同性」などの用語は、タンパク質やペプチドに関しては、ある実施形態では、最大割合相同を達成するために、必要に応じて配列を整列化させてギャプを導入した後の、候補配列内における、対応する天然ポリペプチドの残余と一致するアミノ酸残余の割合を意味する（配列同一性の一部としての同類置換は考慮しない）。整列化のための方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野では公知である。
【０１４４】
他の実施形態では、「相同」という用語は、核酸配列に関しては、候補配列内における、対応する天然ポリペプチドの残余と一致する候補配列内のヌクレオチドの割合を示す。
【０１４５】
他の実施形態では、「相同」は、７０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、７５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９８％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９９％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、１００％以上の一致を意味する。
【０１４６】
本明細書中に記載された任意のアミノ酸配列と相同するタンパク質及び／又はペプチド相同は、ある実施形態では、例えば、イムノブロット解析又はアミノ酸配列のコンピュータアルゴリズム分析（任意のソフトウェア・パッケージを使用して）などの当該技術分野で公知の確立した手法によって測定される。前記ソフトウェア・パッケージとしては、例えば、 ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、ＭＰｓｒｃｈ、又はＳｃａｎｐｓパッケージがあり、Smith‐Watermanアルゴリズム、及び／又はグローバル／ローカル若しくはブロックアライメントを使用することができる。相同測定の各方法は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１４７】
他の実施形態では、本発明は、本発明に係る方法に適した道具及び／又は化合物を含んでいるキットを提供する。
【０１４８】
他の実施形態では、本発明は、表皮破壊に適した道具、及び、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物又は因子の導入手段を含んでいる装置を提供する。
【０１４９】
他の実施形態では、本発明は、はげ頭症に関連する任意の疾病、疾患又は症状を治療する方法を提供する。各疾病、疾患又は症状は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５０】
（医薬組成物）
【０１５１】
他の実施形態では、本発明に係る方法は、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物（及び／又はその類似体、誘導体、異性体、代謝物、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、又はそれらの組み合わせ）と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物の投与を含む。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５２】
前記ＨＦ幹細胞誘導性又は活性化化合物を含有する前記医薬組成物は、他の実施形態では、例えば、局所的、非経口、側癌的（paracanceraly）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、脳室内、脳内、膣内又は腫瘍内などの当該技術分野で公知の方法によって対象に投与される。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１５３】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、経口投与される。そのため、前記医薬組成物は、経口投与に適した形態に（すなわち、固形及び液体製剤として）製剤化されている。適切な固形経口製剤としては、例えば、タブレット、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどがある。適切な液体経口製剤としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳剤、油などがある。本発明のある実施形態では、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物は、カプセルの形態に製剤化される。他の実施形態では、本発明に係る化合物は、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物及び不活性担体又は希釈剤に加えて、硬ゲル化カプセルを含有する。
【０１５４】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、身体表面に局所投与され、そのため、局所投与に適した形態に製剤化される。適切な局所製剤としては、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、滴剤などがある。局所投与するためには、ＨＦ幹細胞誘導若しくは活性化化合物又はその生理学的に許容される派生物（例えば、塩、エステル、Ｎ酸化物など）が作成され、溶液、懸濁液又は乳液として塗布される。前記溶液等は、薬学的担体を有する又は有さない、生理学的に許容される希釈剤に含まれる。
【０１５５】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、ペレットの皮下移植によって投与される。他の実施形態では、前記ペレットは、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物をある期間に渡って制御放出する。
【０１５６】
液体製剤の場合、薬学的に許容される担体としては、水溶性或いは非水性の溶液、懸濁液、乳濁液、又は油がある。非水溶媒の例としては、プロピレン・グリコール、ポリエチレン・グリコール、及び注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）がある。水溶性担体としては、水、アルコール性／水溶性の溶液、乳濁液、又は懸濁液（例えば、生理食塩水、緩衝培地など）がある。油の例としては、石油、動物性、植物性、又は合成系がある（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、及び魚肝油）。
【０１５７】
ある実施形態では、前記医薬組成物は、制御放出組成物であり、投与後に、前記ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物をある期間に渡って制御放出する。他の実施形態では、制御又は徐放組成物は、例えば、脂溶性デポー剤（例えば、脂肪酸、ワックス、油）である。他の実施形態では、前記組成物は、即時放出組成物であり、ＨＦ幹細胞誘導又は活性化化合物は、投与後すぐに放出される。
【実施例】
【０１５８】
実施例１：除毛及び表皮剥離によって、新しい毛包の形成が引き起こされる。
【０１５９】
≪材料及び実験方法≫
【０１６０】
＜除毛及び表皮剥離＞
【０１６１】
背部を毛刈りしてNair（Carter-Wallace, New York, NY）で除毛する前のマウスに、ペントバルビタールナトリウムを注射して麻酔する。その後、「Argyris T, J Invest Dermatol, 75: 360-362, 1980」に開示されているようにして、回転フェルトホイールを使用して表皮を除去した。７０％エタノールで洗浄して白熱ランプ下で乾燥させた後、Dremel Moto-tool（Racine, WI）上に設置されたフェルトホイールで、毛包間表皮の１．５ｃｍ２の領域における基底層及び基底層直上層を慎重に剥離して除去した。剥離後の皮膚は、つやがあり滑らかであった。皮膚に血液は見られなかった。１日後、剥離した領域はフィブリンのかさぶたで覆われていた。３〜７日後、かさぶたが剥がれ落ち、新たに再生された表皮が露出した。毛包間表皮が完全に除去されているかどうかを顕微鏡で確認するために、対照マウス群を表皮剥離の直後に屠殺した。
【０１６２】
＜免疫組織化学＞
【０１６３】
皮膚のサンプルを、ＰＢＳで緩衝化された１０％のホルマリンに保存した。６ミクロンの厚さのパラフィン切片を切断し、（該当する場合は）抗体で染色した。
【０１６４】
＜ＢｒｄＵ標識＞
【０１６５】
Bickenbachら（Cell Tiss Kinet 19: 325-333, 1986; Bickenbach et al, Exp Cell Res 244. 184-195, 1998）によって報告された方法を使用した。マウスに、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の５−ブロモ−２´−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を、１２時間ごとに計４回注射した。
【０１６６】
≪結果≫
【０１６７】
５０日齢マウスの背部の所定領域を除毛した後、回転フェルトホイールを使用してその表皮を除去した。１５日後、ＨＦプラコード、毛芽、及び他の毛包新生の兆候が見られた（図１。図中の矢印は毛芽を示す）。毛包の形態は、胎児の毛包の成長に類似していた。この新しい毛包の増殖の特徴をさらに明らかにするために、屠殺する６０分前に、皮膚をＢｒｄＵで標識した。図２に示すように、この増殖パターンは、胚子における毛包の成長と類似していた。
【０１６８】
これらの結果は、（ａ）表皮の破壊によって新しいＨＦの形成が引きこされること、並びに、この新しいＨＦの形成が（ｂ）成体及び（ｃ）休止期の間（５０日齢のマウスは毛周期の第２の休止期にある）に起こり得ることを示す。
【０１６９】
実施例２：切除創傷（小さな穿孔創傷ではない）の形成によって、新たな毛包が形成される。
【０１７０】
≪材料及び実験方法≫
【０１７１】
＜穿孔及び切除創傷の形成＞
【０１７２】
２１日齢のマウスの背部を実施例１で説明したようにして除毛し、アルコールで消毒した後、１％のヨード液で消毒した。皮膚生検パンチを使用して筋膜までの（筋膜は穿通しない）直径４ｍｍの穿孔創を形成した。切除創は全層に渡って形成され、その直径は１ｃｍであった（皮膚及び皮筋を、適切な手術バサミを使用して切除した）。
【０１７３】
≪結果≫
【０１７４】
創傷がＨＦ形成を誘起できるかどうかを検査するために、マウスに穿孔創及び切除創を形成した。創傷形成後、どちらの創傷も、収縮及び上皮再形成を示した。しかし、穿孔創傷が形成されたマウスとは異なり、切除創傷が形成されたマウスには、創傷形成後１０日間内に瘢痕が観察された（図３の左の図）。この時点では、毛包は観察されなかった（図３の右の図）。創傷作成１２日後にＢｒｄＵのパルス標識をしたところ、創傷部位に、胎児の毛芽と類似した形態の毛芽が観察された（図４）。観察された組織がＨＦであることを確認するために、幾つかの標識を使用した。創傷形成１２日後の時点で、ケラチン１７抗体（Ｋ１７）、ＨＦ標識（図５）、及びアルカリフォスファターゼ抗体で染色された組織は、ＨＦが有しているはずの、線維芽細胞を含む真皮乳頭を有することを証明される（図６：初期及び後期段階のＨＦのそれぞれを、左及び右の図に示す）。
【０１７５】
創傷形成によって形成されたＨＦの特徴をさらに調べるため、ＢｒｄＵ染色後、胎児のＨＦと形態学的に比較したところ、様々な段階で、形態学的に明らかに一致していることが観察された（図７）。さらに、胎児のＨＦ成長の標識であるＬｅｆ１、ｗｉｎｇｌｅｓｓ／ｉｎｔ（Ｗｎｔ）１０ｂ、及びソニック・ヘッジホグ（sonic hedgehog：Ｓｈｈ）を、ＥＤＩＨＮ（epidermal disruption-induced HF neogenesis）によって誘起した（図８）。さらなるＢｒｄＵ染色（図９）、並びに、ＨＦ標識であるＳ１００Ａ３及びＳ１００Ａ６の染色（図１０。左の図は、ＨＦ軸に平行な組織切片であり、右の図は、毛包の断面図である）により、ＥＤＩＨＮの毛包の成長が、胎児のＨＦの成長に非常に類似していることがさらに証明された。
【０１７６】
これらの結果により、表皮の破壊によって新しいＨＦの形成が引きこされること、並びに、この新しいＨＦの形成が（ｂ）成体及び（ｃ）毛周期の休止期（２１日齢のマウスは、毛周期の第１の休止期にある）に起こり得ることが証明された。
【０１７７】
実施例３：ＥＤＩＨＮによって形成された毛包は毛を形成する。
【０１７８】
創傷形成の２５及び４５日後、創傷部位に新しい毛が観察された（それぞれ、図１１の左及び右の図）。創傷形成後の最初の９日間、Ｄｋｋ１（Dickkopf-1）でｗｎｔ経路が阻害された場合（実施例１０）を除き、新しい毛に色素沈着は見られなかった。
【０１７９】
これらの結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常に機能する（すなわち、毛を形成することができる）ことを示す。
【０１８０】
実施例４：ＥＤＩＨＮによって形成された毛包は、発毛の周期に入る能力を有する。
【０１８１】
≪材料及び実験方法≫
【０１８２】
＜ＢｒｄＵ標識＞
【０１８３】
創傷形成の２０日後から３日間に渡り、５０ｍｇ／ｋｇ体重のＢｒｄＵ（Sigma）を、１日２回注射した。ＢｒｄＵは、創傷形成４０日後に検出された（１７日間追跡）。
【０１８４】
＜ホールマウント及び免疫蛍光＞
【０１８５】
新鮮な皮膚をＥＤＴＡ（ＰＢＳ中に２０ｍＭ）内で、３７℃で一晩培養し、表皮及び真皮を分離することでＨＦのホールマウント（whole mount）を得た。その後、表皮を１０％のホルマリン内に室温で１０分間保存した。真皮は、アセトン内に室温（ＲＴ）で一晩保存した。ホールマウントを、ＰＢＳで洗浄した後に、免疫組織化学の抗体で染色し（図１２に模式的に示す）、Leica共焦点顕微鏡を使用して撮像した。
【０１８６】
≪結果≫
【０１８７】
ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常な量のＨＦ幹細胞を含んでいるかどうかを調べるために、創傷形成の２１日後、マウスの皮膚を標識保持細胞の有無について検査した。これらの条件下での、長期の追跡期間中におけるＢｒｄＵの保持は、ＨＦ幹細胞の特徴の１つである。（ＨＦのバルジ中に）正常な数及び配置の標識保持細胞が観察された（図１３）。標識保持細胞がＨＦ幹細胞であることを確認するために、Ｋ１５−ｅＧＦＰマウスを利用した。Ｋ１５−ｅＧＦＰマウスは、Ｋ１５プロモータから、ｅＧＦＰ（変異型緑色蛍光タンパク）が発現される。したがって、ｅＧＦＰの発現によって、ＨＦ幹細胞を特定することができる。図１４Ａに示すように、創傷形成の３５日後、新たに形成された毛包の組織切片（右側）にｅＧＦＰ発現細胞が観察された。また、表皮のホールマウントに、ｅＧＦＰ発現細胞が観察された（下側の左端の図）。このことは、表皮細胞が、毛包幹細胞の性質を有する細胞に変化したことを意味する（「下側の左から２番目」の図は、「下側の左端」の図と同じだが、白色光の下で観察している）。これらの結果は、観察された標識保持細胞がＨＦ幹細胞の性質を示すことを実証する。
【０１８８】
ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが正常な周期を有するかどうかを調べるために、創傷形成の３５、３８及び４５日後のさらなるマウスからマウント（mount）を得た。図１４Ｂに示すように、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦは、静止期、休止期に入り、その後、成長期に入る。
【０１８９】
要約すれば、この実施例の結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが、胎児で形成されたＨＦと同様にＨＦ幹細胞を含有することを示す。ＨＦ幹細胞の存在は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが、胎児で形成されたＨＦと同様に発毛の周期に入る能力を有することを示す。また、この結果は、創傷が、表皮細胞を毛包幹細胞（Ｋ１５−ｅＧＦＰを発現する）の状態となるように誘導することを示す。このモデルは、図１５に模式的に示す。実施例２、３、及び４の結果は、ＥＤＩＨＮによって形成されたＨＦが完全に機能し、それによって、必要としている患者における発毛の回復が可能であることを示す。
【０１９０】
実施例５：毛周期の休止期に、マウスにＥＤＩＨＮによって形成された新しい毛包。
【０１９１】
毛周期が休止期に創傷形成されたマウスに、ＥＤＩＨＮによって新しい毛包を形成できるかどうかを調べるために、実施例２で説明したようにして、２１日齢のマウスに１ｃｍの切除創傷を形成してＥＤＩＨＮを行った。次に、ホールマウント分析によって、皮膚を新しいＨＦの徴候に関して分析した。図１６に示すように、１１日後、肉眼検査（上の図）、真皮のＡＰ染色（左下の図）、又は表皮のＫ１７染色（右下の図）によっては、新しいＨＦは確認されなかった。図１７に示すように、１４日後、真皮に真皮乳頭細胞が確認され（左の図）、表皮にＨＦ幹細胞が確認された（右の図）。このことは、新しい毛包が形成されたことを示す。１７日後、真皮及び表皮の検査によって証明されたように、新しい毛包はさらに成長した（それぞれ、図１８の左及び右の図を参照）。この方法によって、創傷部に平均して４９の新しい毛包が形成された。この数字は、表１に示すように、実験を３回行うことにより得られた。
【０１９２】
表１：２１日齢のマウスに行った３回の実験の結果。
【０１９３】
【表１】
【０１９４】
この実施例の結果は、毛周期の休止期にあるマウスが創傷の間に成長期のＨＦを含まないという事実にも関わらず、前記マウスに対して、ＥＤＩＨＮによって新しいＨＦの形成を誘起できることを示す。
【０１９５】
実施例６：成体のマウスにおいて、成長期の誘起は、ＥＤＩＨＮの効率を増大させる。
【０１９６】
実施例５に示した実験を、様々な週齢のマウス（毛周期の段階が様々なマウス）に対して繰り返した。創傷の瘢痕化を確実にするために、高齢のマウスにはより大きな創傷を形成した。表２に示すように、休止期（例えば８週齢）の成体マウスでは、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成の効率は低かった。
【０１９７】
表２：毛周期の段階が様々なマウスにおける、ＥＤＩＨＮによるＨＦ形成の効率。
【０１９８】
【表２】
【０１９９】
＊マウスでは、第２の休止期は、約４０日間存続する。したがって、１４週齢及び２０週齢のマウスには、休止期及び成長期のＨＦが混合して含まれる。
【０２００】
成長期の実験的な誘起によってＥＤＩＨＮの効率が増大したか否かを確認するために、８週齢のマウスを創傷形成の数日前に除毛した。図１９に示すように、創傷形成前の除毛の有無に関わらず、創傷は同様に閉じた。図２０Ａ及び２０Ｂに示すように、除毛したマウスは、除毛しなかったマウス（実施例５のマウス）よりもＥＤＩＨＮが１１倍大きかった。
【０２０１】
この実施例の結果は、成長期の誘起がＥＤＩＨＮを増大させることを示す。また、これらの結果は、ＥＤＩＨＮが新しいＨＦを形成するだけではなく、ＨＦが存在する前の休止期において成長期を活性化させることを示す。
【０２０２】
実施例７：ＥＤＩＨＮは、人間の皮膚に新しい毛包を形成する。
【０２０３】
≪材料及び実験方法≫
【０２０４】
＜移植＞
【０２０５】
形成手術から得られた成人の耳介前部からの不要な頭皮を、免疫不全（ＳＣＩＤ：重症複合免疫不全）マウスに移植した。移植片に包帯を巻いて治癒させ、移植３ヶ月後に創傷治癒実験に使用した。
【０２０６】
≪結果≫
【０２０７】
人間の皮膚がマウスの皮膚と同様にＥＤＩＨＮに反応するかどうかを確認するために、人間の皮膚をＳＣＩＤ（免疫不全）マウスに移植し、プラッキングで除毛し、３日後に創傷形成した。創傷形成の７日後、パラフィン包埋した組織切片のヘマトキシリン及びエオシン染色によって、人間の皮膚に新しいＨＦの形成が観察された（図２１Ａ。図中の矢印は新しいＨＦを示す）。
【０２０８】
さらなる実験では、成人の皮膚をマウスに移植し、剥離し、剥離した７日後に検査した。その結果、人間の皮膚に、新しいＨＦが形成された。Ｓ１００Ａ６又はＳ１００Ａ４で染色したところ、人間の皮膚での新しいＨＦの形成は、胎児が成長する際の通常の毛包形成と類似することが判明した（図２１Ｂ）。
【０２０９】
この実施例の結果は、マウスの皮膚の場合と同様に、人間の皮膚にＥＤＩＨＮを使用して毛を形成できることを示す。
【０２１０】
実施例８：ＨＦ幹細胞の活性化の間に活性化された分子経路。
【０２１１】
≪材料及び実験方法≫
【０２１２】
＜ＨＦ幹細胞の単離及び活性化＞
【０２１３】
新しいＨＦの形成を誘導するために、Ｋ１５−ｅＧＦＰのマウスを除毛した。除毛の２日後、蛍光活性化細胞分類（fluorescence-activated cell sorting：ＦＡＣＳ）によって、Ｋ１５−ｅＧＦＰのマウスから活性化された毛包幹細胞を単離した。そして、細胞集団から５μｇの全ＲＮＡを単離し、逆転写し、Affymetrix（Santa Clara, California）アレイのＭＧ＿Ｕ７４ｖ２チップに混成させた。活性化されたＨＦ幹細胞（ＨＦＳＣ）と活性化されていない（休止期）のＨＦＳＣとの間の発現倍率変化（fold-change）を検出するために、スキャンしたチップの画像を、Affymetrix Microarray Suite 5.0及びGeneSpringソフトウェア（Silicon Genetics）を使用して分析した。倍率変化、及び、活性化されていない「ベースライン」と活性化された（「ｅｘｐｔ」）サンプルとの間の相違を計算する前に、数値を正規化した。
≪結果≫
【０２１４】
ＨＦ幹細胞の活性化の間に上方制御された分子経路を特定するために、活性化されたＨＦ幹細胞を単離し、その後、上方制御された転写物を検出すべく、細胞の遺伝子発現パターンを分析した。表３に示す転写物は、活性化されたＨＦ幹細胞では、活性化される前の細胞よりも少なくとも２倍上方制御された。一部の例では、表３の配列は、転写物の配列を含むゲノム配列である。転写物の上方制御に関するデータ及びそれらのさらなる情報は、図２２に示される。
【０２１５】
表３：ＨＦ幹細胞の活性化の間に上方制御されたＲＮＡ転写物。
【０２１６】
【表３−１】
【０２１７】
【表３−２】
【０２１８】
【表３−３】
【０２１９】
【表３−４】
【０２２０】
【表３−５】
【０２２１】
【表３−６】
【０２２２】
【表３−７】
【０２２３】
【表３−８】
【０２２４】
【表３−９】
【０２２５】
【表３−１０】
【０２２６】
【表３−１１】
【０２２７】
【表３−１２】
【０２２８】
【表３−１３】
【０２２９】
【表３−１４】
【０２３０】
【表３−１５】
【０２３１】
【表３−１６】
【０２３２】
【表３−１７】
【０２３３】
【表３−１８】
【０２３４】
【表３−１９】
【０２３５】
【表３−２０】
【０２３６】
【表３−２１】
【０２３７】
【表３−２２】
【０２３８】
【表３−２３】
【０２３９】
【表３−２４】
【０２４０】
【表３−２５】
【０２４１】
【表３−２６】
【０２４２】
【表３−２７】
【０２４３】
【表３−２８】
【０２４４】
【表３−２９】
【０２４５】
【表３−３０】
【０２４６】
【表３−３１】
【０２４７】
【表３−３２】
【０２４８】
【表３−３３】
【０２４９】
【表３−３４】
【０２５０】
【表３−３５】
【０２５１】
【表３−３６】
【０２５２】
【表３−３７】
【０２５３】
【表３−３８】
【０２５４】
【表３−３９】
【０２５５】
【表３−４０】
【０２５６】
【表３−４１】
【０２５７】
【表３−４２】
【０２５８】
【表３−４３】
【０２５９】
【表３−４４】
【０２６０】
【表３−４５】
【０２６１】
【表３−４６】
【０２６２】
【表３−４７】
【０２６３】
【表３−４８】
【０２６４】
【表３−４９】
【０２６５】
【表３−５０】
【０２６６】
【表３−５１】
【０２６７】
【表３−５２】
【０２６８】
【表３−５３】
【０２６９】
【表３−５４】
【０２７０】
【表３−５５】
【０２７１】
【表３−５６】
【０２７２】
【表３−５７】
【０２７３】
【表３−５８】
【０２７４】
【表３−５９】
【０２７５】
【表３−６０】
【０２７６】
【表３−６１】
【０２７７】
【表３−６２】
【０２７８】
【表３−６３】
【０２７９】
【表３−６４】
【０２８０】
【表３−６５】
【０２８１】
【表３−６６】
【０２８２】
【表３−６７】
【０２８３】
【表３−６８】
【０２８４】
【表３−６９】
【０２８５】
【表３−７０】
【０２８６】
【表３−７１】
【０２８７】
【表３−７２】
【０２８８】
【表３−７３】
【０２８９】
【表３−７４】
【０２９０】
【表３−７５】
【０２９１】
【表３−７６】
【０２９２】
【表３−７７】
【０２９３】
【表３−７８】
【０２９４】
【表３−７９】
【０２９５】
【表３−８０】
【０２９６】
【表３−８１】
【０２９７】
【表３−８２】
【０２９８】
【表３−８３】
【０２９９】
【表３−８４】
【０３００】
【表３−８５】
【０３０１】
【表３−８６】
【０３０２】
【表３−８７】
【０３０３】
【表３−８８】
【０３０４】
【表３−８９】
【０３０５】
【表３−９０】
【０３０６】
【表３−９１】
【０３０７】
【表３−９２】
【０３０８】
【表３−９３】
【０３０９】
【表３−９４】
【０３１０】
【表３−９５】
【０３１１】
【表３−９６】
【０３１２】
【表３−９７】
【０３１３】
【表３−９８】
【０３１４】
【表３−９９】
【０３１５】
【表３−１００】
【０３１６】
【表３−１０１】
【０３１７】
【表３−１０２】
【０３１８】
【表３−１０３】
【０３１９】
【表３−１０４】
【０３２０】
【表３−１０５】
【０３２１】
【表３−１０６】
【０３２２】
【表３−１０７】
【０３２３】
【表３−１０８】
【０３２４】
【表３−１０９】
【０３２５】
【表３−１１０】
【０３２６】
【表３−１１１】
【０３２７】
【表３−１１２】
【０３２８】
以上のように、この実施例で特定された転写物、その転写物がエンコードするタンパク、及び前記タンパクが関与する経路は、ＨＦ幹細胞の活性化に大きく貢献する。したがって、これらの転写物、タンパク及び経路を活性化させることによって、成長期を誘起することができる。
【０３２９】
実施例９：表皮細胞からＨＦ幹細胞への分化を誘導する間に活性化された分子経路。
【０３３０】
実施例８で説明したようにして、ＨＦ幹細胞の発現パターンを分析し、非バルジ基底ケラチノサイト（non-bulge basal keratinocyte）と比較した。マイクロアレイ分析及び定量的ポリメラーゼ連鎖反応（quantitative polymerase chain reaction：ｑＰＣＲ）によって評価すると、ＨＦ幹細胞には１５７の遺伝子が異なった形で発現していた。ＨＦ幹細胞での発現量が多い遺伝子を選択した群を、表４に示す。ＨＦ幹細胞での発現量が少ない遺伝子を選択した群を、表５に示す。
【０３３１】
表４：ＨＦ幹細胞で上方制御された遺伝子。括弧の中の数字は、定量的リアルタイムＰＣＲで測定した増加倍率である。
【０３３２】
【表４−０１】
【０３３３】
【表４−０２】
【０３３４】
【表４−０３】
【０３３５】
【表４−０４】
【０３３６】
【表４−０５】
【０３３７】
【表４−０６】
【０３３８】
【表４−０７】
【０３３９】
【表４−０８】
【０３４０】
【表４−０９】
【０３４１】
【表４−１０】
【０３４２】
【表４−１１】
【０３４３】
【表４−１２】
【０３４４】
【表４−１３】
【０３４５】
【表４−１４】
【０３４６】
【表４−１５】
【０３４７】
【表４−１６】
【０３４８】
【表４−１７】
【０３４９】
【表４−１８】
【０３５０】
【表４−１９】
【０３５１】
【表４−２０】
【０３５２】
表５：ＨＦ幹細胞で下方制御された遺伝子。
【０３５３】
【表５−０１】
【０３５４】
【表５−０２】
【０３５５】
【表５−０３】
【０３５６】
【表５−０４】
【０３５７】
【表５−０５】
【０３５８】
【表５−０６】
【０３５９】
【表５−０７】
【０３６０】
【表５−０８】
【０３６１】
【表５−０９】
【０３６２】
【表５−１０】
【０３６３】
【表５−１１】
【０３６４】
【表５−１２】
【０３６５】
【表５−１３】
【０３６６】
よって、この実施例で特定された転写物、その転写物がエンコードするタンパク、及び前記タンパクが関与する経路は、表皮細胞のＨＦ幹細胞への分化の誘導に大きく貢献する。したがって、これらの転写物、タンパク及び経路の活性化によって、成長期を誘起することができる。したがって、表４に示した転写物、タンパク、及び経路を活性化させることによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。また、表４に示した転写物、タンパク及び経路を阻害することによって、ＥＤＩＨＮを防止し、毛包を除去することができる。さらに、表５に示した転写物、タンパク、及び経路を阻害することによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。また、表５に示した転写物、タンパク、及び経路を活性化させることによって、ＥＤＩＨＮを増大させることができる。
【０３６７】
実施例１０：創傷形成後の９日間にＷＮＴ−１阻害因子が発現すると、新しいＨＦの色素沈着が生じる。
【０３６８】
≪材料及び実験方法≫
【０３６９】
この実施例では、ｔｅｔＯ−Ｄｋｋ１とＫ５−ｒｔＴＡとを発現する２重トランスジェニックのマウスを使用した。Ｋ５プロモータの制御下で、前記マウスに１ｇ／ｋｇのドキシサイクリン（BioServ, Laurel, MD）が調合された餌を与えた場合、基底表皮にＤｋｋ１が発現する。また、対照マウスにもドキシトリンを投与したが、対照マウスはＫ５−ｒｔＴＡを有していないため、Ｄｋｋ１は発現しなかった。
【０３７０】
≪結果≫
【０３７１】
２１日齢又は５０日齢の２重トランスジェニックマウスの背下部に、１ｃｍ２の創傷を形成した。Ｄｋｋ１の発現を誘導するため、創傷形成の直後、前記マウスにドキシサイクリンを含有する餌を与えた。そして、創傷形成の９日後に上皮が再形成されたときに、ドキシサイクリンを与えるのを中止した。Ｄｋｋ１の発現はＷｎｔの活性を阻害し、その結果、毛包の色素沈着が生じた。創傷形成後の２２日目には、表皮シートの作成後、摘出皮膚に色素が沈着したＨＦが観察された（図２３Ａ及び２２Ｂ）。対照マウスには、色素が沈着したＨＦは見られなかった（図２４）。
【０３７２】
他の実験では、創傷形成の９日後にＤｋｋ１の発現を継続させたところ、新しいＨＦの形成が阻害された。
【０３７３】
この実施例の結果は、上皮再形成の期間中にＷｎｔ１の発現の抑制、又はＤｋｋ１の発現の誘導を行い、その後にＷｎｔの発現を誘導することによって、色素が沈着したＨＦを形成できることを示す。また、この実施例の結果は、新しい毛包の形成を阻害する因子（例えばＤｋｋ１）が、ＥＤＩＨＮも阻害することを示す。このことは、ＥＤＩＨＮによって形成された毛包が通常の毛包に類似しているという考えをさらに裏付ける。
【０３７４】
実施例１１：表皮成長因子の注入によるＥＤＩＨＮの阻害。
【０３７５】
前述の実施例で説明したようにして、２１日齢のマウスに創傷を形成した。創傷形成の１１日後（創傷が再び上皮で覆われた時点）から、創傷床にＥＧＦ（１μｇ／ｍｌ）の注入（１０μｌ）を開始した。この時点から５日間に渡って、ＥＧＦを１日１回注入した。３日後、皮膚を回収し、ＥＤＩＨＮのホールマウント分析を行った。全体の形態から評価すると、ＥＧＦはＨＦの形成を防止した。また、対照及び処理した皮膚のホールマウントを、Ｋ１７抗体免疫染色によって分析した。予想通り対照マウス（２匹）には数多くの新しいＨＦの形成が見られたが（図２５Ｃ及び２５Ｄ）、ＥＧＦが注射された全てのマウス（４匹）には新しいＨＦの形成は見られなかった（図２５Ａ及び２５Ｂ）。
【０３７６】
さらなる実験では、創傷形成後の１１、１３及び１５日目に、組み換えＥＧＦ（１マイクログラム（ｍｃｇ）／マイクロリットル（ｍｃｌ））を注射した。創傷形成の１８日後に皮膚を回収し、Ｋ１７及びアルカリフォスファターゼ染色を行った。またしても、ＥＧＦの投与によって、ＥＤＩＨＮが阻害された。
【０３７７】
この実施例の結果は、ＥＧＦがＨＦ形成を阻害することを示す。したがって、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、又はこれらの因子が関与する経路の１つを阻害すると、ＥＤＩＨＮ誘導性のＨＦ形成が増加する。
【０３７８】
実施例１２：ＥＧＦ受容体の阻害によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３７９】
ＥＧＦ受容体阻害剤の投与がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、切開創傷（１ｃｍ２）を形成した１１日後、創傷中心の皮膚表面付近に、阻害剤であるＡＧ１４７８（１０μＬの量に１５０μＭ）を単回注射によって投与した。ＥＧＦ受容体阻害剤の投与によって、創傷を形成しただけの対照マウスと比較してより多くの及びより大きな毛包が形成された（図２６Ａ）。図２６Ｂに示すように、ＡＧ１４７８を注射したマウスの創傷領域には、大きな毛包が成長した。左の図は、互いに近接する３つの大きな毛包を有する、Ｋ１７染色された表皮を示す。右の図は、大きな合体したＤＰ領域を有する、ＡＰ染色された真皮を示す。
【０３８０】
この実施例の結果は、上述の実施例の結果を裏付けるものであり、ＥＤＩＨＮにＥＧＦＲ阻害剤若しくは同様の作用機構を有する化合物（例えば、ヘッジホッグタンパク質及びアンドロゲンアンタゴニスト）投与すると（又はその後に行われると）、より多くの及びより大きなＨＦを形成できることを示す。
【０３８１】
実施例１３：β−カテニン活性化因子の発現によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８２】
β−カテニン活性化因子の投与がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、β−カテニン経路の活性化因子であるＷｎｔ７を表皮で過剰発現するＫ１４−Ｗｎｔ７トランスジェニック・マウスに対してＥＤＩＨＮを行い、創傷を形成した１９日後にＨＦ形成を評価した。４週齢及び３週齢のマウスを用いた２つの実験では、トランスジェニック・マウスは、対照である同腹の非トランスジェニック・マウスと比較して、著しく多くのＨＦが形成された（図２７Ａ〜Ｃ）。
【０３８３】
したがって、β−カテニン活性化因子を投与すると、ＥＤＩＨＮが増大される。実施例１１〜１３の結果は、（ａ）表皮の破壊、及び（ｂ）中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を誘導する因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８４】
実施例１４：ＦＧＦの投与によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８５】
線維芽細胞細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）がＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、実施例１１で説明したようにして切開創傷を形成した１１日後に組み換えＦＧＦを投与した。ＦＧＦを投与すると、ＨＦ形成が増加する。このことは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）ＦＧＦ、ＦＧＦをエンコードするヌクレオチド、又はＦＧＦによるシグナル伝達を増加させる因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８６】
実施例１５：ＥＤＡＲの投与によるＥＤＩＨＮの増大
【０３８７】
ＥＤＡＲがＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、Ｋ１４−Ｅｄａ−Ａ１トランスジェニック・マウス（Ｅｄａ−Ａ１（エクトジスプラシン−Ａ１）を表皮で過剰発現する）にＥＤＩＨＮを行った後、実施例１３で説明したようにして創傷を形成した１９日後にＨＦ形成を検査した。前記トランスジェニック・マウスは、対照の同腹の非トランスジェニック・マウスと比較して、著しく多くのＨＦを形成した。このことは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）エクトジスプラシンによるシグナル伝達を増加させる因子の投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３８８】
実施例１６：ミノキジルの投与によるＥＤＩＨＮの増大。
【０３８９】
ミノキシジルがＥＤＩＨＮに与える影響を調べるために、実施例１１で説明したようにして切除創傷を形成した１１日後にミノキジルを投与した。ミノキシジルの投与により、ＨＦ形成が増加した。これは、（ａ）表皮の破壊、及び、（ｂ）ミノキシジルの投与によって、新しいＨＦを形成できることを示す。
【０３９０】
実施例１７：表皮剥離及びＥＧＦの投与によるＨＦの除去。
【０３９１】
実施例１で説明したようにしてマウスの表皮の有毛領域を剥離した後、組み換えＥＧＦを投与した。この方法によって、剥離された領域における毛の再生が防止される。このことは、（ａ）表皮層の破壊、及び、（ｂ）ＥＧＦ、ＥＧＦをエンコードするヌクレオチド、又はＥＧＦによるシグナル伝達を増大させる因子の投与によって、毛を除去できることを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法。
【請求項２】
頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、
（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、頭皮におけるＡＧＡを治療する方法。
【請求項３】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）の阻害剤、又はＥＧＦ受容体の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤は、ＡＧ１４７８、パニツムマブ（panitumumab）、ニモツズマブ（nimotuzumab）、ＨｕＭａｘ ＥＧＦＲ、セツキシマブ（cetuximab）、ＩＭＣ １１Ｆ８、マツズマブ（matuzumab）、ＳＣ １００、ＡＬＴ １１０、ＰＸ １０３２、ＢＭＳ ５９９６２６、ＭＤＸ ２１４、及びＰＸ １０４１から選択されることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、ゲフィチニブ（gefitinib）、エルロチニブ（erlotinib）、カナーニチブ（canertinib）、ペリニチブ（pelitinib）、ＺＤ １８３９、ＣＬ ３８７７８５、ＥＫＩ ７８５、及びバンデタニブ（vandetanib）から選択されることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、レフルノミドであることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、Ａ７７ １７２６であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、βカテニンタンパク質、βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、βカテニンタンパク質の活性化因子、又はβカテニンタンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、
前記βカテニンタンパク質の活性化因子は、Ｗｎｔ７タンパク質、Ｗｎｔ７タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はＷｎｔ７タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）タンパク質、ＦＧＦ受容体、ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性化因子、又はＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、
ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性を抑制する前記タンパク質は、ＦＧＦ結合タンパク質、又はＦＧＦ結合タンパク質をエンコードするヌクレオチドから選択されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、エクトジスプラシン・タンパク質、エクトジスプラシン受容体、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体をエンコードするヌクレオチド、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体の活性化因子、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ミノキシジルであることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク、ノギン・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はノギン・タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチド、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子、ＴＧＦ−β３タンパク質、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチド、及びＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質のアンタゴニスト及びＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストから選択されることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、前記中立表皮細胞に直接的に作用することを特徴とする方法。
【請求項２１】
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、間葉細胞を介して前記中立表皮細胞に作用することを特徴とする方法。
【請求項２２】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、
前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われ、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法。
【請求項２３】
頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、
（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、
それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法。
【請求項２４】
請求項２２又は２３のいずれかに記載の方法であって、
前記前駆細胞は、毛包幹細胞、表皮細胞、真皮乳頭細胞、又は結合組織鞘細胞から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１乃至２４のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域を除毛するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１乃至２５のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域包に、局所レチノイドを投与するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１乃至２６のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制する化合物又は因子を接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項１乃至２７のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、アンドロゲンのアンタゴニスト又はアンドロゲン受容体のアンタゴニストを接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２９】
皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、
（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）タンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかを接触させるステップとを含み、
それによって、皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であって、
前記化合物若しくは因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチド、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子、ＴＧＦ−β３タンパク質、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチド、及びＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２９に記載の方法であって、
前記化合物若しくは因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質のアンタゴニスト、及びＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストから選択されることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップは、機械的手段によって行われることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域を化学物質に曝すことによって行われることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域に放射線を照射することによって行われることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項１乃至３４のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記表皮の毛包の破壊、及び前記表皮の毛包間領域の破壊を含むことを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項１乃至３４のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記表皮の毛包の破壊を含むが、前記表皮の毛包間領域の破壊は含まないことを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項１乃至３６のいずれかに記載の方法であって、前記対象は人間であることを特徴とする方法。
【請求項１】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法。
【請求項２】
頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、
（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、頭皮におけるＡＧＡを治療する方法。
【請求項３】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子を接触させるステップとを含み、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域の毛包の大きさを増加させる方法。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）の阻害剤、又はＥＧＦ受容体の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ又はＥＧＦ受容体の阻害剤は、ＡＧ１４７８、パニツムマブ（panitumumab）、ニモツズマブ（nimotuzumab）、ＨｕＭａｘ ＥＧＦＲ、セツキシマブ（cetuximab）、ＩＭＣ １１Ｆ８、マツズマブ（matuzumab）、ＳＣ １００、ＡＬＴ １１０、ＰＸ １０３２、ＢＭＳ ５９９６２６、ＭＤＸ ２１４、及びＰＸ １０４１から選択されることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、ゲフィチニブ（gefitinib）、エルロチニブ（erlotinib）、カナーニチブ（canertinib）、ペリニチブ（pelitinib）、ＺＤ １８３９、ＣＬ ３８７７８５、ＥＫＩ ７８５、及びバンデタニブ（vandetanib）から選択されることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、レフルノミドであることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項６に記載の方法であって、
前記ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤は、Ａ７７ １７２６であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、βカテニンタンパク質、βカテニンタンパク質をエンコードするヌクレオチド、βカテニンタンパク質の活性化因子、又はβカテニンタンパク質の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、
前記βカテニンタンパク質の活性化因子は、Ｗｎｔ７タンパク質、Ｗｎｔ７タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はＷｎｔ７タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、線維芽細胞成長因子（fibroblast growth factor：ＦＧＦ）タンパク質、ＦＧＦ受容体、ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性化因子、又はＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、
ＦＧＦタンパク質若しくはＦＧＦ受容体の活性を抑制する前記タンパク質は、ＦＧＦ結合タンパク質、又はＦＧＦ結合タンパク質をエンコードするヌクレオチドから選択されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、エクトジスプラシン・タンパク質、エクトジスプラシン受容体、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体をエンコードするヌクレオチド、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体の活性化因子、エクトジスプラシン・タンパク質若しくはエクトジスプラシン受容体の活性抑制タンパク質の阻害剤から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ミノキシジルであることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ノギン・タンパク、ノギン・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はノギン・タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、ヘッジホッグ・タンパク質、ヘッジホッグ・タンパク質をエンコードするヌクレオチド、又はヘッジホッグ・タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチド、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子、ＴＧＦ−β３タンパク質、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチド、及びＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質のアンタゴニスト及びＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストから選択されることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１乃至３のいずれかに記載の方法であって、
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、前記中立表皮細胞に直接的に作用することを特徴とする方法。
【請求項２１】
前記中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進する化合物又は因子は、間葉細胞を介して前記中立表皮細胞に作用することを特徴とする方法。
【請求項２２】
対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法であって、
（ａ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、
前記（ｂ）のステップは、前記（ａ）のステップの３〜１２日後に行われ、
それによって、対象の頭皮、眉又は瘢痕領域に毛包を形成する方法。
【請求項２３】
頭皮におけるアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療する方法であって、
（ａ）前記頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記頭皮に、（Ａ）毛包細胞へ分化することができる前駆細胞、（Ｂ）中立表皮細胞の毛包細胞への分化を促進することができる誘導細胞、又は（Ｃ）毛包若しくはその一部、から選択される細胞を接触させるステップとを含み、
それによって、頭皮のＡＧＡを治療する方法。
【請求項２４】
請求項２２又は２３のいずれかに記載の方法であって、
前記前駆細胞は、毛包幹細胞、表皮細胞、真皮乳頭細胞、又は結合組織鞘細胞から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１乃至２４のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域を除毛するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１乃至２５のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域包に、局所レチノイドを投与するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１乃至２６のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、Ｗｎｔタンパク質の発現を抑制する化合物又は因子を接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項１乃至２７のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域に、アンドロゲンのアンタゴニスト又はアンドロゲン受容体のアンタゴニストを接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２９】
皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法であって、
（ａ）前記皮膚又は頭皮の表皮を破壊するステップと、
（ｂ）前記皮膚又は頭皮に、（ｉ）表皮成長因子（Epidermal Growth Factor：ＥＧＦ）タンパク質、（ｉｉ）ＥＧＦ受容体、（ｉｉｉ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体をエンコードするヌクレオチド、又は（ｉｖ）ＥＧＦタンパク質若しくはＥＧＦ受容体を活性化させる化合物若しくは因子のいずれかを接触させるステップとを含み、
それによって、皮膚又は頭皮から毛包を除去する方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であって、
前記化合物若しくは因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質、ＴＧＦ−β１タンパク質をエンコードするヌクレオチド、ＴＧＦ−β１タンパク質の活性化因子、ＴＧＦ−β３タンパク質、ＴＧＦ−β３タンパク質をエンコードするヌクレオチド、及びＴＧＦ−β３タンパク質の活性化因子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２９に記載の方法であって、
前記化合物若しくは因子は、形質転換成長因子（Transforming Growth Factor：ＴＧＦ）β１タンパク質のアンタゴニスト、及びＴＧＦ−β３タンパク質のアンタゴニストから選択されることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記頭皮、眉又は瘢痕領域の表皮を破壊するステップは、機械的手段によって行われることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域を化学物質に曝すことによって行われることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項１乃至３１のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記頭皮、眉又は瘢痕領域に放射線を照射することによって行われることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項１乃至３４のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記表皮の毛包の破壊、及び前記表皮の毛包間領域の破壊を含むことを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項１乃至３４のいずれかに記載の方法であって、
前記表皮を破壊するステップは、前記表皮の毛包の破壊を含むが、前記表皮の毛包間領域の破壊は含まないことを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項１乃至３６のいずれかに記載の方法であって、前記対象は人間であることを特徴とする方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２２Ａ−１】
【図２２Ａ−２】
【図２２Ａ−３】
【図２２Ａ−４】
【図２２Ａ−５】
【図２２Ａ−６】
【図２２Ａ−７】
【図２２Ａ−８】
【図２２Ｂ−１】
【図２２Ｂ−２】
【図２２Ｂ−３】
【図２２Ｂ−４】
【図２２Ｂ−５】
【図２２Ｃ−１】
【図２２Ｃ−２】
【図２２Ｃ−３】
【図２２Ｃ−４】
【図２２Ｃ−５】
【図２２Ｃ−６】
【図２３Ａ】
【図２３Ｂ】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２５Ｃ】
【図２５Ｄ】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【図２７Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２２Ａ−１】
【図２２Ａ−２】
【図２２Ａ−３】
【図２２Ａ−４】
【図２２Ａ−５】
【図２２Ａ−６】
【図２２Ａ−７】
【図２２Ａ−８】
【図２２Ｂ−１】
【図２２Ｂ−２】
【図２２Ｂ−３】
【図２２Ｂ−４】
【図２２Ｂ−５】
【図２２Ｃ−１】
【図２２Ｃ−２】
【図２２Ｃ−３】
【図２２Ｃ−４】
【図２２Ｃ−５】
【図２２Ｃ−６】
【図２３Ａ】
【図２３Ｂ】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２５Ｃ】
【図２５Ｄ】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【図２７Ｃ】
【公開番号】特開２０１３−４９６９１（Ｐ２０１３−４９６９１Ａ）
【公開日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２３５６７５（Ｐ２０１２−２３５６７５）
【出願日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【分割の表示】特願２００８−５０４２５７（Ｐ２００８−５０４２５７）の分割
【原出願日】平成１８年３月２８日（２００６．３．２８）
【出願人】（５００４２９１０３）ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア (102)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【分割の表示】特願２００８−５０４２５７（Ｐ２００８−５０４２５７）の分割
【原出願日】平成１８年３月２８日（２００６．３．２８）
【出願人】（５００４２９１０３）ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア (102)
【Ｆターム（参考）】
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