新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法
【課題】本発明は、新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法を提供するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【解決手段】本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法を提供するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
潜在的に生命を脅かす毒性が、葉酸代謝拮抗薬の最適な投与における主な制限である（一般的に、非特許文献１を参照）。例えば、安全で最大限の投与を可能とするべく、支持処置が通常用いられる。例えば、デキサメタゾン（dexamethone）等のステロイドは、葉酸代謝拮抗薬によって引き起こされる皮膚発疹の生成を防止するのに使用することができる（非特許文献１, 197頁）。
【０００３】
葉酸代謝拮抗薬は、最も十分に研究されている抗悪性腫瘍薬物のクラスの１つである。アミノプテリンが、約５０年前に最初に臨床的な活性を実証された。メトトレキセートがその直後に開発され、このものは今日、悪性疾患（例えば、リンパ腫、乳癌および頭頚癌）のための有効な化学療法レジメの標準的な成分である（非特許文献２−４参照）。葉酸代謝拮抗薬は、チミジンまたはプリンの生合成経路における１つまたは複数の重要な葉酸要求酵素、特にチミジル酸シンターゼ（「ＴＳ」）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（「ＤＨＦＲ」）およびグリシンアミドリボヌクレオチドトランスフェラーゼ（「ＧＡＲＦＴ」））を、これらの酵素の結合部位について還元型葉酸と競争することによって抑制する。（非特許文献５−６参照）。いくつかの葉酸代謝拮抗薬が、現在開発中である。チミジエル酸シンターゼ抑制（「ＴＳＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、５−フルオロウラシルおよびトムデックス（Tomudex、登録商標）を含む。ジヒドロ葉酸レダクターゼ抑制（「ＤＨＦＲＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、メトトレキセート（登録商標）である。グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ抑制（「ＧＡＦＲＴＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、ロメトレキソール（Lometrexol）である。これらの葉酸代謝拮抗薬の多数が、１つ以上の生合成経路を抑制する。例えば、ロメトレキソールはジヒドロ葉酸レダクターゼのインヒビターでもあり、そしてペメトレキセート（pemetrexed）二ナトリウム塩（このものは、アリムタ（Alimta, 登録商標）、イーライリリー社製、indianapolis, IN）は、チミジエル酸シンターゼ、ジヒドロ葉酸レダクターゼおよびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ抑制を実証されている。
【０００４】
これらの薬物の開発についての制限は、葉酸代謝拮抗薬の細胞毒性活性および続く有効性が、ある患者にとっては実質的な毒性と関連し得ることである。加えて、１クラスとしての葉酸代謝拮抗薬は、胃腸管の毒性を有する散発性の激しい骨髄抑制（mylosuppression）と関連し、これはまれではあるが、高い死亡率の危険を有する。これらの毒性を制御するのは無力なために、いくつかの葉酸代謝拮抗薬の臨床的な開発が放棄され、そして他のもの（例えば、ロメトレキソールおよびラルチトレックスド）の臨床的な開発を複雑にしている（非特許文献７−９参照）。
【０００５】
最初に、葉酸はＧＡＲＦＴＩに関連した毒性を処置するものとして使用された。例えば、特許文献１を参照のこと。葉酸は、ホモシステインレベルをよる低下させることが分かっている（例えば、非特許文献１０−１１参照）。また、ホモシステインレベルはＧＡＲＦＴインヒビターの使用に関連した細胞毒性事象の前兆であることも分かっている。例えば、米国特許第5,217,74号を参照。しかしながら、この処置を用いた場合でさえも、ＧＡＲＦＴインヒビターおよび１クラスとしての葉酸代謝拮抗薬の細胞毒性活性は、医薬としての葉酸代謝拮抗薬の開発において重要な関心がある。細胞毒性活性をより低下させる能力は、これらの薬物の使用において重要な利点となろう。
【０００６】
驚くべきで且つ予想外に、我々は、１クラスの葉酸代謝拮抗薬によって引き起こされるある毒性影響（例えば、死亡）および非血液学的な事象（例えば、皮膚発疹および疲労）をメチルマロン酸低下薬の存在によって有意に軽減することができ、治療学的な効力に有害な影響を及ぼさないことを見出した。従って、本発明はメチルマロン酸低下薬を用いた処置を与えている宿主に投与することによって、葉酸代謝拮抗薬の治療学的な有用性を改善する方法を提供する。我々は、メチルマロン酸レベルの上昇は葉酸代謝拮抗薬を与えている患者における毒性事象の前兆であって、そしてメチルマロン酸を増大させる処置（例えば、ビタミンＢ１２を用いた処置）が従来の葉酸代謝拮抗薬に関連した死亡率、非血液学的な事象（例えば、皮膚の発疹）および疲労事象を低下させることを見出した。
【０００７】
加えて、我々は、メチルマロン酸低下薬および葉酸の組み合わせが葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性事象を相乗的に低下させることを見出した。葉酸をビタミン１２と組み合わせて用いた心血管疾患の治療および予防が知られているが、葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性を処置するための該組み合わせの使用はこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５,２１７,９７４号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Antifolate Drugs in Cancer Therapy, Jackman, Ann L.編, Humana Press, Totowa, NJ, 1999
【非特許文献２】Bonnadonna G, Zambetti M, Valagussa P.による Sequential or alternating doxorubicin and CMF regimens in breast cancer with more than three positive nodes: Ten year results. JAMA 1995; 273 (7): 542-547
【非特許文献３】Bonnadonna G, Valagussa P, Moliterni A, Zambetti M, Brambilla C.による Adjuvant cyclophosphamide, methotrexate, and fluorouracil in node-positive breast cancer : The results of years of follow-up. N Engl J Med 995; 33 (4): 9-96
【非特許文献４】Hong WK, Schaefer S, Issell B.らによる A prospective randomized trial of methotrexate versus cisplatin in the treatment of recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer 1983; 52: 206-210
【非特許文献５】Shih C, Habeck L.L., Mendelsohn L.G., Chen V.J., Schultz R.M.による Multiple folate enzyme inhibition: Mechanism of a novel pyrrolopyrimidine-based antifolate LY354 (MTA). Advan Enzyme Regul, 1998; 38: 135-152
【非特許文献６】Shih C., Chen V.J., Gossett L.S.らによる LY354, a pyrrolo [2,3-d] pyrimidine-based antifolate that inhibits multiple folate-requiring enzymes. Cancer Res 1997; 57: 1116-1123
【非特許文献７】Jackman A.L., Calvert A.H.によるFolate-Based Thymidylate Synthase Inhibitors as Anticancer Drugs. Ann Oncol 1995; 6 (9): 871-888
【非特許文献８】Laohavinij S., Wedge S.R., Lind M.J.らによる A phase I clinical study of the antipurine antifolate Lometrexol (DDATHF) given with oral folic acid. Invest New Drugs 1996; 14: 325-335
【非特許文献９】Maughan T.S., James R.D., Kerr D., らによる on behalf of the British MRC Colorectal Cancer Working Party. Preliminary results of a multicenter randomized trial comparing 3 chemotherapy regimens (deGramont, Lokich, and raltitrexed) in metastatic colorectal cancer. Proc ASCO 1999; 18: Abst 1007
【非特許文献１０】Homocysteine Lowering Trialist's Collaboration. Lowering blood homocysteine with folic acid based supplements: meta-analysis of randomized trials. BMJ 1998; 316: 894-898
【非特許文献１１】Naurath H.J., Joosten E., Riezler R., Stabler S.P., Allen R.H., Lindenbaum J.による Effects of vitamin B12, folate and vitamin B6 supplements in elderly people with normal serum vitamin concentrations. Lancet 1995; 346: 85-89
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法を提供するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法に関するものであって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１３】
その上、本発明は哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１４】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１５】
その上、本発明は必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法に関するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１６】
その上、本発明は哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１７】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１８】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬についての哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造において、メチルマロン酸低下薬を単独で、またはＦＢＰ結合薬と組み合わせて使用することに関する。
【００１９】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該薬物は葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する。
【００２０】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該薬物は葉酸代謝拮抗薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与する。
【００２１】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法において使用するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該方法は該メチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することを含む。
【００２２】
その上、本発明は腫瘍の増殖を抑制する際に同時に、別々にまたは逐次的に使用するための組み合わせ製剤として、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬および場合によりＦＢＰ結合薬を含有する製品に関する。
【００２３】
本発明は、メチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することにより、該葉酸代謝拮抗薬の毒性を低下させるという発見に関する。
【００２４】
葉酸代謝拮抗薬に関する用語「抑制する」とは、腫瘍の増殖の進行を抑制し、軽減し、寛解し、停止し、制限し、遅らせもしくは逆転させるか、または腫瘍の増殖を減少させることを意味する。
【００２５】
本明細書で使用する用語「有効な量」とは、化合物または薬物についての目的とする結果を得ることができる量を意味する。例えば、腫瘍の増殖を低下させようと努力する際に投与する葉酸代謝拮抗薬の有効な量は、腫瘍の増殖を低下させるのに必要とされる量である。
【００２６】
本明細書で使用する用語「毒性」とは、葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性事象を意味する。該事象としては、好中球減少、血小板減少、毒物死、疲労、摂食障害、悪心、皮膚発疹、感染、下痢、粘膜炎および貧血症を含むが、これらに限定されない。葉酸代謝拮抗薬を与えている患者が経験する毒性の種類に関する更なる説明は、通常、Antifolate Drugs in Cancer Therapyを参照のこと。毒性は、毒物死、疲労、好中球減少、血小板減少および粘膜炎を意味することが好ましい。
【００２７】
本明細書で使用する用語「非血液学的な事象」とは、葉酸代謝拮抗薬の投与が原因の皮膚発疹または疲労の発生を意味する。
【００２８】
本明細書で使用する用語「組み合わせた」とは、哺乳動物における葉酸代謝拮抗薬の毒性を低下させるのに十分なレベルのメチルマロン酸低下薬および場合により葉酸が存在するようないずれかの順序で、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬、および場合により葉酸を投与することを意味する。該化合物の投与は、単一の組成物としてもしくは２つの別々の組成物として同時にすることができたり、あるいは第２および／または第３の薬物を投与するときに、最初に投与した薬物の有効な量が患者の体内に存在するように別々の組成物として逐次的に投与することができる。葉酸代謝拮抗薬を最初に哺乳動物に投与し、続いてメチルマロン酸低下薬を用いて処理することができる。別法として、哺乳動物は、葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と同時に投与することができる。哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理し、次いで葉酸代謝拮抗薬を用いて処理することが好ましい。葉酸をメチルマロン酸低下薬に加えて投与する場合には、該葉酸を、メチルマロン酸低下薬または葉酸代謝拮抗薬のいずれかの投与前、投与後、または同時でのいずれの時に投与することができる。哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理し、次いで葉酸を用いて処理し、続いて該葉酸代謝拮抗性化合物を用いて処理することが好ましい。
【００２９】
用語「葉酸代謝拮抗薬」または「葉酸代謝拮抗性薬物」とは、酵素の結合部位について還元型葉酸と競争することによって、チミジンまたはプリン生合成経路における少なくとも１つの重要な葉酸要求酵素（例えば、チミジル酸シンターゼ（「ＴＳ」）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（「ＤＨＦＲ」）またはグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（「ＧＡＲＦＴ」）が好ましい）を抑制する化学的な化合物を意味する。葉酸代謝拮抗薬の好ましい例としては、５−フルオロウラシル（グラクソ（Glaxo）製）；トムデックス（Tomudex、登録商標）（ゼネカ（Zeneca）製）；メトトレキセート（登録商標）（レデルレ（Lederle）製））；ロメトレキソール（Lometrexol）（登録商標）（ツラリカ（Tularik）製）；ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン誘導体（このものは、テイラーらによる米国特許第4,684,653号、4,833,145号、4,902,796号、4,871,743号および4,882,334号に記載されている）；誘導体（アキモト（Akimoto）らによる米国特許第4,997,838号に記載されている）；チミジル酸シンターゼインヒビター（このものは、ＥＰＯ出願番号239,362において知られる）を含む。ペメトレキセート（pemetrexed）ナトリウム（ＡＬＩＭＴＡ）（イーライリリー社製）が最も好ましい。
【００３０】
用語「メチルマロン酸」および「ＭＭＡ」とは、健康なヒトの尿に微量に存在するコハク酸の構造異性体を意味する。
【００３１】
用語「メチルマロン酸低下薬」とは、哺乳動物中のメチルマロン酸の濃度を低下させる基質を意味する。該基質の好ましい例は、ビタミンＢ１２である。従って、メチルマロン酸およびそのための基質を測定する方法については、例えば以下の文献を参照のこと。Matchar D.B., Feussner J.R., Millington D.S.らによる Isotope dilution assay for urinary methylmalonic acid in the diagnosis of vitamin B12 deficiency. A prospective clinical evaluation. Ann Intern Med 987; 106: 707-710; Norman E.J., Morrison J.A.によるScreening elderly populations for cobalamin (vitamin B12) deficiency using the urinary methylmalonic acid assay by gas chromatography mass spectrometry. Am. J. Med. 1993, 94, 589-594; Norman E.J.によるGas Chromatography mass spectrometry screening of urinary methylmalonic acid: early detection of vitamin B12 (cobalamin) deficiency to prevent permanent neurologic disability. GC/MS News 1984, 12, 120-129; Martin D.C., Francis J., Protetch J., Huff F.J.による Time dependency of cognitive recovery with cobalamin replacement: report of a pilot study. JAGS 1992, 40, 168-172; Norman E.J., Cronin C.による Cobalamin deficiency. Neurol 1996, 47, 310-311; Rasmussen K., Moelby I., Jensen M.K.による Studies on methylmalonic acid in humans; Savage D.G., Lindenbaum J., Stabler S.P., Allen R.H.による Sensitivity of methylmalonic acid and total homocysteine determination for diagnosing cobalamin and folate deficiency. Am. J. Med. 1994, 96, 239-246。
【００３２】
用語「ビタミンＢ１２」とは、ビタミンＢ１２およびその医薬的な誘導体（例えば、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミン）を意味する。該用語は、ビタミンＢ１２、コバラミンおよびクロロコバラミンを意味することが好ましい。
【００３３】
該用量は、通常、ビタミンサプリメント、すなわち経口投与する錠剤（例えば、除放性製剤）の形態であったり、飲用水に加えた水溶液としてであったり、または水溶性の非経口製剤として与えるであろう。該メチルマロン酸低下薬は筋肉内注射製剤として投与されることが好ましい。該製剤は当該分野で知られており、このものは商業的に入手することができる。
【００３４】
当該分野の当業者は、該メチルマロン酸低下薬が広い用量範囲にわたって有効であることを認めるであろう。例えば、コバラミンをメチルマロン酸低下薬として使用する場合には、コバラミンの用量は毎日１回を１ヶ月間から９週間毎に１回を１年間にわたって約０．２μｇ〜約３０００μｇの範囲であってよい。コバラミンは、約２４時間毎〜約１６８０時間毎に投与される約５００μｇ〜約１５００μｇの筋肉内注射として服用されることが好ましい。葉酸代謝拮抗薬を用いた処置を開始し、葉酸代謝拮抗薬の投与を止めるまで続けることに関係なく、葉酸代謝拮抗薬の投与の約１〜約３週間前に最初に約１０００μｇを筋肉内注射で投与し、約２４時間毎〜約１６８０時間毎に繰り返すことが好ましい。葉酸代謝拮抗薬の第１投与の約１週間〜約３週間前に約１０００μｇを筋肉内注射で投与し、該葉酸代謝拮抗薬の投与を止めるまで、６週間毎〜１２週間毎（約９週間毎が好ましい）に繰り返すことが最も好ましい。しかしながら、メチルマロン酸低下薬の量は実際には、関連する状況（このものは、処置する病気、投与の選択経路、投与する実際の薬物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の激しさを含む）に照らして医師によって決定されることを理解されるであろう。従って、該上記の用量範囲は本発明の範囲を限定することを意図するものではない。例えば、上記の範囲より低い用量レベルがより適当であったり、一方で他の場合には更に大きな用量をいずれの有害な副作用を生じることなく、使用することができる。
【００３５】
本明細書で使用する用語「ＦＢＰ結合薬」とは、葉酸結合性タンパク質の結合薬を意味する。このものは、例えば葉酸である(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルを含む。この後者の化合物は、J. Am. Chem. Soc. 74, 4215 (1952）に開示されているロイコボリン（Leucovorin）の(６Ｒ)−異性体である。該テトラヒドロ葉酸化合物の両方は、６−位で異常な立体配置を有する。それらは、それぞれの(６Ｓ)異性体と比較して葉酸結合タンパク質と結合する際に１０〜２０倍以上有効である（Ratnamらによる Folate and Antifolate Transport in Mammalian Cells Symposium, Mar. 21-22, 1991, Bethesda, MD.を参照）。これらの化合物は通常、対応するデヒドロ前駆体からの非立体選択的な還元反応、続いてクロマトグラフィー法または酵素による方法により分離することによって、ジアステレオマーである天然の(６Ｓ)体を有する混合物として製造する。例えば、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ880844 (また、Derwent Abstract 88-368464/5) およびカナダ国特許第1093554号を参照。例えば、Dietary Reference Intakes for Thiamin, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B , Pantothenic Acid, Biotin, and Choline (2000), 8 Folate, 196-305頁を参照。
【００３６】
「生理学的に許容し得る塩」とは、ＦＢＰ結合薬のカリウム、ナトリウム、リチウム、マグネシウム塩（カルシウム塩であることが好ましい）を意味する。「生理学的に許容し得るエステル」とは、哺乳動物に投与後に容易に加水分解されて、対応するＦＢＰ結合薬の遊離酸（例えば、Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステル、混合酸無水物など）を与えるエステルを意味する。
【００３７】
本発明に従って使用するＦＢＰ結合薬は、遊離酸の形態であったりあるいは生物学的な系中で親酸に変換される生理学的に許容し得る塩またはエステルの形態であり得る。該用量は通常、ビタミンサプリメントの形態で、すなわち経口投与される錠剤であったり（例えば、除放性製剤であることが好ましい）、飲用水に加えた水溶液としてであったり、水溶性の非経口製剤（例えば、静脈内製剤）などとして与える。
【００３８】
ＦＢＰ結合薬は通常、葉酸代謝拮抗薬を用いて処置する前に、被験者である哺乳動物に投与する。約１時間〜約２４時間での適当な量のＦＢＰ結合薬を用いた前処置は通常、該葉酸代謝拮抗薬を投与する前に葉酸代謝拮抗薬と結合するタンパク質と実質的に結合させたり、遮断させるのに十分である。ＦＢＰ結合薬の１回投与（これは、葉酸の経口投与が好ましい）は葉酸結合性タンパク質をロードするのに十分であるが、該ＦＢＰ結合薬の複数回服用を活性薬物による処置の数週間前に使用し、葉酸結合性タンパク質が十分に結合することを確実にしてそれら前処置から得られる利点を最大限とすることができる。
【００３９】
本発明の特に好ましい態様において、葉酸の約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ（約０．３ｍｇ〜約５ｍｇが最も好ましい）を、メチルマロン酸低下薬の投与の約１〜約３週間後で且つある量の葉酸代謝拮抗薬の非経口投与の約１〜約２４時間前に、哺乳動物に経口投与する。しかしながら、実際に投与するメチルマロン酸低下薬の量は、関連する状況（例えば、処置する病気、投与の選択経路、投与する実際の薬物、個々の患者の年齢、体重および反応、並びに患者の症状の激しさを含む）に照らして医師によって決定されるであろう。従って、上記の用量の範囲は本発明の範囲を限定することを意図するものではない。ある場合には、上記の範囲の下限よりも低い用量レベルがより適当であり、一方で他の場合には、より一層の多量をいずれの有害な副作用を引き起こさずに使用することができる。
【００４０】
通常、形容詞として使用する用語「医薬的な」は、生体にとって実質的に非毒性であることを意味する。
【００４１】
（実施例）
（方法）
メチルマロン酸低下薬の単独、または葉酸との組み合わせがヒト腫瘍異種移植片モデルに及ぼす効果を評価するために、ヒトＭＸ−１乳癌腫を有する雌性ヌードマウスを、ＡＬＩＭＴＡを単独でまたは生理学的を越えた用量の葉酸またはビタミンＢ１２（コバラミン）と一緒に用いて処置した。
【００４２】
該動物は、滅菌した標準的な実験用固形試料の任意量および滅菌水の任意量を維持した。ドナーの腫瘍から得られるヒトＭＸ−１腫瘍細胞（５×１０６）を、約８〜１０週齢の雌性ヌードマウスの大腿に皮下移植した。腫瘍細胞の移植の７日後に開始し、該動物をＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇ）を用いて、７日〜１１日目および１４日〜１８日目に毎日１回腹腔内注射のみによるか、あるいは同じスケジュールでの腹腔内注射による葉酸（６ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ）および／またはビタミンＢ１２（１６５ｍｇ／ｋｇ）を用いて腹腔内投与によって、同じスケジュールで処置した。
【００４３】
腫瘍の応答は、該実験期間中に週に２回、腫瘍の大きさを測定することによって追跡した。腫瘍の大きさの測定と同時期に、体重の測定によって、毒性を追跡した。腫瘍増殖の遅延は、処置腫瘍とコントロール腫瘍が１０００ｍｍ３に達するまでの差異（単位は日数）とした。
【００４４】
ヒトＭＸ−１乳癌癌腫異種移植片は、用量が１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇでＡＬＩＭＴＡを用いた処置について応答性であり、１７日および２１日の腫瘍増殖の遅延を得た。ＡＬＩＭＴＡと同じスケジュールで、６ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇの２つの用量で、葉酸を該動物に単独で投与して、それぞれ７日および１２日の腫瘍増殖の遅延を得た。用量が１６５ｍｇ／ｋｇでビタミンＢ１２を単独で投与することにより、１２日の腫瘍増殖の遅延を得た。
【００４５】
各２つの用量の場合でのＡＬＩＭＴＡと各ビタミンとの組み合わせを、同時組み合わせレジメとして投与した。葉酸（６ｍｇ／ｋｇ）とＡＬＩＭＴＡと一緒に投与することにより、ＡＬＩＭＴＡ単独での使用から生じる腫瘍増殖の遅延は変わらなかった。ＡＬＩＭＴＡの用量がそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇの場合に、高用量（６０ｍｇ／ｋｇ）の葉酸を各用量のＡＬＩＭＴＡと一緒に加えることにより、腫瘍増殖の遅延を２２日および２３日と少し増大させた。ＡＬＩＭＴＡおよびビタミン（Ｂ１２)（１６５ｍｇ／ｋｇ）の処置による腫瘍増殖の遅延は、ＡＬＩＭＴＡの用量がそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇでは、２２日および２４日であった。
【００４６】
体重の測定は、各処置レジメにおける毒性の一般的な測定基準として使用した。体重の減少パターンは処置レジメによって影響を受けた。７日目〜１１日目および１４日目〜１８日目の処置期間中は体重が増加し、２日間間隔を置くことによって体重は回復した。ＡＬＩＭＴＡが原因の体重の減少は用量に依存するが、総計で小さいものであった（３％）。葉酸を６ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇで単独の場合には体重の減少は生じず、実際に葉酸で処置した動物はコントロール動物よりも実験期間中、体重を維持したり、増加していた。ＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）および葉酸（６０ｍｇ／ｋｇ）を用いて処置した動物は、実験期間中、体重が増加した（約２０％）。
【００４７】
ビタミンＢ１２の投与により、実験期間中、該動物の体重の増加は防止されなかった。ＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）をビタミンＢ１２と一緒に用いて処置した動物は体重が増加したが、一方でＡＬＩＭＴＡ（１５０ｍｇ／ｋｇ）をビタミンＢ１２と一緒に用いて処置した動物は実験期間中、体重を維持した。
【００４８】
結論として、生理学的な用量を越えているが無毒な用量のビタミン、葉酸およびビタミンＢ１２の投与は、ヌードマウスのヒトＭＸ−１乳癌癌腫異種移植片腫瘍におけるＡＬＩＭＴＡの抗腫瘍活性を変化させず、そして動物の体重測定によって決まるＡＬＩＭＴＡの毒性を増大させなかった。
【００４９】
ビタミンＢ１２の単独、または葉酸との組み合わせが葉酸代謝拮抗薬に及ぼす効果は、通常使用される標準的な試験において示され、該葉酸代謝拮抗薬そのものの抗腫瘍活性および毒性効果を測定することができる。それらの１試験においては、２ｍｍ×２ｍｍの腫瘍断片をマウスの腋部分にトロカールにより挿入することによって、マウスを乳腺癌腫のＣ３Ｈ菌株に予防摂取する。メチルマロン酸低下薬の単独または葉酸との組み合わせの投与時期は変えることができる。１０動物を各々の用量レベルで用いる。副尺カリパスを用いて腫瘍増殖の長さおよび幅を測定することによって、１０日目に腫瘍活性を評価する（１日目は葉酸代謝拮抗薬の第１投与である）。該活性は、腫瘍増殖の抑制パーセントとして表す。
【００５０】
処置前の２週間および処置の間にビタミンＢ１２および場合により葉酸を完全に含まない食事を維持した感染マウスに、葉酸代謝拮抗薬を投与する場合には、非常に低用量では中位の抗腫瘍活性を示すが、非常に低用量では激しい毒性をも引き起こす（これは、マウスの死として測定される）。
【００５１】
マウスの試験グループは、ビタミンＢ１２および場合により葉酸のない食事を、処置前の２週間維持する。次いで、０．００３％のビタミンＢ１２（重量比／容量比）を筋肉内注射によって処置し、そして場合により０．０００３％の葉酸（重量比／容量比）を含有する飲用水を該動物に与える間に、ビタミンＢ１２および場合により葉酸を投与する。この濃度は、１日当たりの体表の平方メートルにつきビタミンＢ１２および場合により葉酸の約１．７５ｍｇと翻訳（translate）される。上記の結果が示す通り、示したレベルのビタミンＢ１２を葉酸代謝拮抗薬を与えている被験者の食事に加えることにより、低用量で優れた抗腫瘍活性が得られ、毒性効果はほとんどまたは全くなかった。
【００５２】
上記の試験は、葉酸を用いた処置前およびその期間中、ビタミンＢ１２および場合により葉酸なしの食事を維持された腫瘍を有するマウスの場合には、該葉酸代謝拮抗薬の毒性は非常に高く、１ｍｇ／ｋｇ／日では大部分のマウスが致死し、非毒性薬物用量ではより低い腫瘍活性が観察される。非常に低用量のビタミンＢ１２は、薬物毒性をいくらか逆転し、抗腫瘍活性を改善する。より多い用量のビタミンＢ１２は、葉酸代謝拮抗薬の毒性を一層より有意に低下させる。該マウスをビタミンＢ１２を用いて前処置し、次いで葉酸代謝拮抗薬を投与する前に葉酸を投与することにより、毒性の著しい低下が見られ、葉酸代謝拮抗薬の毒性をほとんど完全に除く。従って、ビタミンＢ１２を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせた使用は薬物の毒性を低下させ、抗腫瘍活性に有害な影響を及ぼさない。ビタミンＢ１２と葉酸との一緒の使用は、薬物毒性を相乗的に低下させる。
【００５３】
癌患者に関する典型的な臨床的評価において、全ての患者について組織学的におよび細胞学的に癌の診断を確認する。葉酸代謝拮抗薬をビタミンＢ１２と組み合わせて投与する。ビタミンＢ１２は、葉酸代謝拮抗薬を用いた処置の１〜３週間前に、１０００μｇを筋肉内注射として投与する。１０００μｇのビタミンＢ１２の筋肉内注射を、患者が療法を中断するまで約９週間毎に行なう。該葉酸代謝拮抗薬を速い静脈内注射によって２週間の期間にわたって４回の服用で投与し、続いて非療法を２週間行う。投与は、いずれの２週間の期間内の１、４、８および１１日目に行なう。患者は、５ｍｇ／ｍ２／服用での最初の療法期間を有し、そして最初の期間中に観察される毒性効果に応じて、それらの続く期間を同じ用量としたり、６ｍｇ／ｍ２にまで増大させたり、あるいは４ｍｇ／ｍ２にまで減少させることができる。
【００５４】
上記の臨床研究のための製造において、ヒトにおけるパイロット研究は、ＡＬＩＭＴＡを与えている患者に与えたビタミンＢ１２が、ＡＬＩＭＴＡが原因の副作用を有効に低下させることを確認した。ＡＬＩＭＴＡ投与の１週間〜２週間前に、ヒト被験者から尿を集め、血液を採取した。ビタミン代謝物レベル、メチルマロン酸およびホモシステインを測定する。血中ホモシステインレベルは、蛍光分極イムノアッセイキット（アボット社（Abbot laboratories）製）によって測定する。メチルマロン酸レベルは、２４時間尿収集キット（バイオラボメディカルユニット（Biolab Medical Unit）（United Kingdom company）から入手可能）を用いた尿レベルによって測定する。加えて、尿および血液を、ＡＬＩＭＴＡの投与１週間前に（葉酸の補充の少なくとも５日後でビタミンＢ１２の補充の少なくとも１週間後）、および周期毎の４日前まで集めることができる。
【００５５】
投与方法および服用方法
１．葉酸
葉酸は、以下の選択肢の１つとして与える。選択肢１〜選択肢３の順序で好ましい。
１．葉酸の３５０〜６００μｇ。
２．選択肢１を使用できない場合には、３５０μｇ〜６００μｇの範囲の葉酸を含有するマルチビタミンが許容され得る。
３．選択肢１または選択肢２のいずれも使用できない場合には、３５０μｇ〜１０００μｇ用量の葉酸が許容され得る。
【００５６】
この研究の目的のために、患者はＡＬＩＭＴＡとシスプラチン、またはシスプラチン単独で用いた処置の約１〜約３週間前に葉酸の毎日の経口投与を開始し、研究療法を中断するまで毎日続けるべきである。
【００５７】
２．ビタミンＢ１２
ビタミンＢ１２を得て、１０００μｇを筋肉内注射として投与する。ビタミンＢ１２の注射は、ＡＬＩＭＴＡを用いた処置の約１〜３週間前に投与しなければならず、そのことは患者が研究療法を中断するまで約９週間毎に繰り返すべきである。
【００５８】
葉酸サプリメントの３５０〜６００μｇまたはその相当量は、ＭＴＡおよびシスプラチンの第１投与の約１〜３週間前に毎日の経口投与を開始すべきである。ビタミンＢ１２（１０００μｇ）の注射は、ＡＬＩＭＴＡの第１投与の約１〜３週間前に筋肉内投与しなければならず、そしてこのことは患者が研究療法を中断するまで約９週間毎に繰り返すべきである。
【００５９】
予め補充したホモシステインレベルおよびメチルマロン酸のレベルを、ａ）被験薬の第１服用の直前レベル、およびｂ）被験薬の第２服用の直前レベル（すなわち、補充の完全な周期後）と比較する。ベースラインから補充された患者における最初の７個までの治療周期を与えたある毒性の羅患率を、補充されていない初期の患者（ｎ＝２４６）において観察された羅疾患率（ファーバー（Farber）らによる）と比較する。
【００６０】
非補充周期対補充周期の患者（乗り換え(cross−over)患者）における毒性を、比較することができる。
比較するデータは以下の通りである：
１）患者数と、ベースラインから補充された患者のベースライン個体群の統計学的データ；
２）第１の服用前、第２の服用前および研究している癌の種類に応じた各治療サイクル前のホモシステインレベルおよびメチルマロン酸レベルと、ベースラインレベル；
３）これらの十分に補充された患者におけるグレード３と４の血液学的な毒性；
４）これらの十分に補充された患者におけるグレード３と４の非血液学的な毒性。
【００６１】
化学療法的な臨床トライアルにおける毒性のグレードは、当該分野の当業者にとってよく知られる。疲労および皮膚発疹のグレードの例を以下に示す。
疲労のグレード
神経運動
０） なしまたは変化なし
１） 主観的な脱力感；客観的な知見なし
２） 機能の有意な障害がない、中位の客観的な脱力感
３） 機能の障害を有する、客観的な脱力感
４） 運動麻痺
【００６２】
発疹のグレード
皮膚
０） なしまたは変化なし
１） 無症候性である散らばった黄斑、丘疹の皮疹または紅斑
２） かゆみ症を伴う無症候性の散らばった黄斑、丘疹の皮疹もしくは紅斑、または他の関連する皮疹の症状
３） 全身症候性の黄斑、丘疹または小胞の皮疹
４） 剥脱性の皮膚炎または潰瘍性の皮膚炎
【００６３】
以下の研究で使用するビタミン（葉酸およびＢ１２の両方）は、ゼニスゴールドライン社（Zenith Gold Line, Centrum, Folvite）またはインカナダアポ−ホリック社（in Canada Apo-Folic）から得ることができる。シアノコバラミンは、これらの研究においてメチルマロン酸低下薬として使用される。
【００６４】
現在および過去の臨床トライアルは、米国特許第5,217,974号に記載されている通り、薬物関連死亡全体の４％、グレード３／４の好中球減少症の５０％、グレード４の血小板減少症の７％、およびグレード３／４の下痢および粘膜炎の１０％を示す。ＡＬＩＭＴＡで補充したビタミンＢ１２は、薬物関連の毒性において中位の効果を示し、薬物関連の死を３％にまで低下させ、且つ激しい毒性を約２５％だけ低下させた。ビタミンＢ１２および葉酸とＡＬＩＭＴＡとの組み合わせは、処置した４８０以上において、薬物関連の死を＜１％にまで低下させた。ビタミンＢ１２と葉酸との組み合わせは、薬物に関連するグレード３／４の毒性事象を低下させた。このことを、表１に示す。
表１
【表１】
【００６５】
加えて、化学療法処置を必要とする化学的に未処置の６２患者を２つの群に分けた。これらのうちの１７患者は上記の通り、ＡＬＩＭＴＡを与えているが、ビタミンＢ１２または葉酸を与えなかった。残りの患者は、上記の通り、ビタミンＢ１２、葉酸およびＡＬＩＭＴＡを与えた。組合わせ処置を与えた患者において、４５のうちの８が化学療法に応答した。該組み合わせ療法を与えていないが、ＡＬＩＭＴＡを用いた処置だけを与えた患者においては、１７のうちの１だけが応答した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
潜在的に生命を脅かす毒性が、葉酸代謝拮抗薬の最適な投与における主な制限である（一般的に、非特許文献１を参照）。例えば、安全で最大限の投与を可能とするべく、支持処置が通常用いられる。例えば、デキサメタゾン（dexamethone）等のステロイドは、葉酸代謝拮抗薬によって引き起こされる皮膚発疹の生成を防止するのに使用することができる（非特許文献１, 197頁）。
【０００３】
葉酸代謝拮抗薬は、最も十分に研究されている抗悪性腫瘍薬物のクラスの１つである。アミノプテリンが、約５０年前に最初に臨床的な活性を実証された。メトトレキセートがその直後に開発され、このものは今日、悪性疾患（例えば、リンパ腫、乳癌および頭頚癌）のための有効な化学療法レジメの標準的な成分である（非特許文献２−４参照）。葉酸代謝拮抗薬は、チミジンまたはプリンの生合成経路における１つまたは複数の重要な葉酸要求酵素、特にチミジル酸シンターゼ（「ＴＳ」）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（「ＤＨＦＲ」）およびグリシンアミドリボヌクレオチドトランスフェラーゼ（「ＧＡＲＦＴ」））を、これらの酵素の結合部位について還元型葉酸と競争することによって抑制する。（非特許文献５−６参照）。いくつかの葉酸代謝拮抗薬が、現在開発中である。チミジエル酸シンターゼ抑制（「ＴＳＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、５−フルオロウラシルおよびトムデックス（Tomudex、登録商標）を含む。ジヒドロ葉酸レダクターゼ抑制（「ＤＨＦＲＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、メトトレキセート（登録商標）である。グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ抑制（「ＧＡＦＲＴＩ」）性質を有する葉酸代謝拮抗薬の例としては、ロメトレキソール（Lometrexol）である。これらの葉酸代謝拮抗薬の多数が、１つ以上の生合成経路を抑制する。例えば、ロメトレキソールはジヒドロ葉酸レダクターゼのインヒビターでもあり、そしてペメトレキセート（pemetrexed）二ナトリウム塩（このものは、アリムタ（Alimta, 登録商標）、イーライリリー社製、indianapolis, IN）は、チミジエル酸シンターゼ、ジヒドロ葉酸レダクターゼおよびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ抑制を実証されている。
【０００４】
これらの薬物の開発についての制限は、葉酸代謝拮抗薬の細胞毒性活性および続く有効性が、ある患者にとっては実質的な毒性と関連し得ることである。加えて、１クラスとしての葉酸代謝拮抗薬は、胃腸管の毒性を有する散発性の激しい骨髄抑制（mylosuppression）と関連し、これはまれではあるが、高い死亡率の危険を有する。これらの毒性を制御するのは無力なために、いくつかの葉酸代謝拮抗薬の臨床的な開発が放棄され、そして他のもの（例えば、ロメトレキソールおよびラルチトレックスド）の臨床的な開発を複雑にしている（非特許文献７−９参照）。
【０００５】
最初に、葉酸はＧＡＲＦＴＩに関連した毒性を処置するものとして使用された。例えば、特許文献１を参照のこと。葉酸は、ホモシステインレベルをよる低下させることが分かっている（例えば、非特許文献１０−１１参照）。また、ホモシステインレベルはＧＡＲＦＴインヒビターの使用に関連した細胞毒性事象の前兆であることも分かっている。例えば、米国特許第5,217,74号を参照。しかしながら、この処置を用いた場合でさえも、ＧＡＲＦＴインヒビターおよび１クラスとしての葉酸代謝拮抗薬の細胞毒性活性は、医薬としての葉酸代謝拮抗薬の開発において重要な関心がある。細胞毒性活性をより低下させる能力は、これらの薬物の使用において重要な利点となろう。
【０００６】
驚くべきで且つ予想外に、我々は、１クラスの葉酸代謝拮抗薬によって引き起こされるある毒性影響（例えば、死亡）および非血液学的な事象（例えば、皮膚発疹および疲労）をメチルマロン酸低下薬の存在によって有意に軽減することができ、治療学的な効力に有害な影響を及ぼさないことを見出した。従って、本発明はメチルマロン酸低下薬を用いた処置を与えている宿主に投与することによって、葉酸代謝拮抗薬の治療学的な有用性を改善する方法を提供する。我々は、メチルマロン酸レベルの上昇は葉酸代謝拮抗薬を与えている患者における毒性事象の前兆であって、そしてメチルマロン酸を増大させる処置（例えば、ビタミンＢ１２を用いた処置）が従来の葉酸代謝拮抗薬に関連した死亡率、非血液学的な事象（例えば、皮膚の発疹）および疲労事象を低下させることを見出した。
【０００７】
加えて、我々は、メチルマロン酸低下薬および葉酸の組み合わせが葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性事象を相乗的に低下させることを見出した。葉酸をビタミン１２と組み合わせて用いた心血管疾患の治療および予防が知られているが、葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性を処置するための該組み合わせの使用はこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５,２１７,９７４号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Antifolate Drugs in Cancer Therapy, Jackman, Ann L.編, Humana Press, Totowa, NJ, 1999
【非特許文献２】Bonnadonna G, Zambetti M, Valagussa P.による Sequential or alternating doxorubicin and CMF regimens in breast cancer with more than three positive nodes: Ten year results. JAMA 1995; 273 (7): 542-547
【非特許文献３】Bonnadonna G, Valagussa P, Moliterni A, Zambetti M, Brambilla C.による Adjuvant cyclophosphamide, methotrexate, and fluorouracil in node-positive breast cancer : The results of years of follow-up. N Engl J Med 995; 33 (4): 9-96
【非特許文献４】Hong WK, Schaefer S, Issell B.らによる A prospective randomized trial of methotrexate versus cisplatin in the treatment of recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer 1983; 52: 206-210
【非特許文献５】Shih C, Habeck L.L., Mendelsohn L.G., Chen V.J., Schultz R.M.による Multiple folate enzyme inhibition: Mechanism of a novel pyrrolopyrimidine-based antifolate LY354 (MTA). Advan Enzyme Regul, 1998; 38: 135-152
【非特許文献６】Shih C., Chen V.J., Gossett L.S.らによる LY354, a pyrrolo [2,3-d] pyrimidine-based antifolate that inhibits multiple folate-requiring enzymes. Cancer Res 1997; 57: 1116-1123
【非特許文献７】Jackman A.L., Calvert A.H.によるFolate-Based Thymidylate Synthase Inhibitors as Anticancer Drugs. Ann Oncol 1995; 6 (9): 871-888
【非特許文献８】Laohavinij S., Wedge S.R., Lind M.J.らによる A phase I clinical study of the antipurine antifolate Lometrexol (DDATHF) given with oral folic acid. Invest New Drugs 1996; 14: 325-335
【非特許文献９】Maughan T.S., James R.D., Kerr D., らによる on behalf of the British MRC Colorectal Cancer Working Party. Preliminary results of a multicenter randomized trial comparing 3 chemotherapy regimens (deGramont, Lokich, and raltitrexed) in metastatic colorectal cancer. Proc ASCO 1999; 18: Abst 1007
【非特許文献１０】Homocysteine Lowering Trialist's Collaboration. Lowering blood homocysteine with folic acid based supplements: meta-analysis of randomized trials. BMJ 1998; 316: 894-898
【非特許文献１１】Naurath H.J., Joosten E., Riezler R., Stabler S.P., Allen R.H., Lindenbaum J.による Effects of vitamin B12, folate and vitamin B6 supplements in elderly people with normal serum vitamin concentrations. Lancet 1995; 346: 85-89
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、新規な葉酸代謝拮抗薬の組み合わせ療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法を提供するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法に関するものであって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１３】
その上、本発明は哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１４】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１５】
その上、本発明は必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法に関するものであって、該方法は有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１６】
その上、本発明は哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１７】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法に関するものであって、該方法は該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む。好ましいＦＢＰ結合薬は、葉酸である。
【００１８】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬についての哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造において、メチルマロン酸低下薬を単独で、またはＦＢＰ結合薬と組み合わせて使用することに関する。
【００１９】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該薬物は葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する。
【００２０】
その上、本発明は葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該薬物は葉酸代謝拮抗薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与する。
【００２１】
その上、本発明は哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法において使用するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用に関するものであって、該方法は該メチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することを含む。
【００２２】
その上、本発明は腫瘍の増殖を抑制する際に同時に、別々にまたは逐次的に使用するための組み合わせ製剤として、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬および場合によりＦＢＰ結合薬を含有する製品に関する。
【００２３】
本発明は、メチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することにより、該葉酸代謝拮抗薬の毒性を低下させるという発見に関する。
【００２４】
葉酸代謝拮抗薬に関する用語「抑制する」とは、腫瘍の増殖の進行を抑制し、軽減し、寛解し、停止し、制限し、遅らせもしくは逆転させるか、または腫瘍の増殖を減少させることを意味する。
【００２５】
本明細書で使用する用語「有効な量」とは、化合物または薬物についての目的とする結果を得ることができる量を意味する。例えば、腫瘍の増殖を低下させようと努力する際に投与する葉酸代謝拮抗薬の有効な量は、腫瘍の増殖を低下させるのに必要とされる量である。
【００２６】
本明細書で使用する用語「毒性」とは、葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した毒性事象を意味する。該事象としては、好中球減少、血小板減少、毒物死、疲労、摂食障害、悪心、皮膚発疹、感染、下痢、粘膜炎および貧血症を含むが、これらに限定されない。葉酸代謝拮抗薬を与えている患者が経験する毒性の種類に関する更なる説明は、通常、Antifolate Drugs in Cancer Therapyを参照のこと。毒性は、毒物死、疲労、好中球減少、血小板減少および粘膜炎を意味することが好ましい。
【００２７】
本明細書で使用する用語「非血液学的な事象」とは、葉酸代謝拮抗薬の投与が原因の皮膚発疹または疲労の発生を意味する。
【００２８】
本明細書で使用する用語「組み合わせた」とは、哺乳動物における葉酸代謝拮抗薬の毒性を低下させるのに十分なレベルのメチルマロン酸低下薬および場合により葉酸が存在するようないずれかの順序で、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬、および場合により葉酸を投与することを意味する。該化合物の投与は、単一の組成物としてもしくは２つの別々の組成物として同時にすることができたり、あるいは第２および／または第３の薬物を投与するときに、最初に投与した薬物の有効な量が患者の体内に存在するように別々の組成物として逐次的に投与することができる。葉酸代謝拮抗薬を最初に哺乳動物に投与し、続いてメチルマロン酸低下薬を用いて処理することができる。別法として、哺乳動物は、葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と同時に投与することができる。哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理し、次いで葉酸代謝拮抗薬を用いて処理することが好ましい。葉酸をメチルマロン酸低下薬に加えて投与する場合には、該葉酸を、メチルマロン酸低下薬または葉酸代謝拮抗薬のいずれかの投与前、投与後、または同時でのいずれの時に投与することができる。哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理し、次いで葉酸を用いて処理し、続いて該葉酸代謝拮抗性化合物を用いて処理することが好ましい。
【００２９】
用語「葉酸代謝拮抗薬」または「葉酸代謝拮抗性薬物」とは、酵素の結合部位について還元型葉酸と競争することによって、チミジンまたはプリン生合成経路における少なくとも１つの重要な葉酸要求酵素（例えば、チミジル酸シンターゼ（「ＴＳ」）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（「ＤＨＦＲ」）またはグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（「ＧＡＲＦＴ」）が好ましい）を抑制する化学的な化合物を意味する。葉酸代謝拮抗薬の好ましい例としては、５−フルオロウラシル（グラクソ（Glaxo）製）；トムデックス（Tomudex、登録商標）（ゼネカ（Zeneca）製）；メトトレキセート（登録商標）（レデルレ（Lederle）製））；ロメトレキソール（Lometrexol）（登録商標）（ツラリカ（Tularik）製）；ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン誘導体（このものは、テイラーらによる米国特許第4,684,653号、4,833,145号、4,902,796号、4,871,743号および4,882,334号に記載されている）；誘導体（アキモト（Akimoto）らによる米国特許第4,997,838号に記載されている）；チミジル酸シンターゼインヒビター（このものは、ＥＰＯ出願番号239,362において知られる）を含む。ペメトレキセート（pemetrexed）ナトリウム（ＡＬＩＭＴＡ）（イーライリリー社製）が最も好ましい。
【００３０】
用語「メチルマロン酸」および「ＭＭＡ」とは、健康なヒトの尿に微量に存在するコハク酸の構造異性体を意味する。
【００３１】
用語「メチルマロン酸低下薬」とは、哺乳動物中のメチルマロン酸の濃度を低下させる基質を意味する。該基質の好ましい例は、ビタミンＢ１２である。従って、メチルマロン酸およびそのための基質を測定する方法については、例えば以下の文献を参照のこと。Matchar D.B., Feussner J.R., Millington D.S.らによる Isotope dilution assay for urinary methylmalonic acid in the diagnosis of vitamin B12 deficiency. A prospective clinical evaluation. Ann Intern Med 987; 106: 707-710; Norman E.J., Morrison J.A.によるScreening elderly populations for cobalamin (vitamin B12) deficiency using the urinary methylmalonic acid assay by gas chromatography mass spectrometry. Am. J. Med. 1993, 94, 589-594; Norman E.J.によるGas Chromatography mass spectrometry screening of urinary methylmalonic acid: early detection of vitamin B12 (cobalamin) deficiency to prevent permanent neurologic disability. GC/MS News 1984, 12, 120-129; Martin D.C., Francis J., Protetch J., Huff F.J.による Time dependency of cognitive recovery with cobalamin replacement: report of a pilot study. JAGS 1992, 40, 168-172; Norman E.J., Cronin C.による Cobalamin deficiency. Neurol 1996, 47, 310-311; Rasmussen K., Moelby I., Jensen M.K.による Studies on methylmalonic acid in humans; Savage D.G., Lindenbaum J., Stabler S.P., Allen R.H.による Sensitivity of methylmalonic acid and total homocysteine determination for diagnosing cobalamin and folate deficiency. Am. J. Med. 1994, 96, 239-246。
【００３２】
用語「ビタミンＢ１２」とは、ビタミンＢ１２およびその医薬的な誘導体（例えば、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミン）を意味する。該用語は、ビタミンＢ１２、コバラミンおよびクロロコバラミンを意味することが好ましい。
【００３３】
該用量は、通常、ビタミンサプリメント、すなわち経口投与する錠剤（例えば、除放性製剤）の形態であったり、飲用水に加えた水溶液としてであったり、または水溶性の非経口製剤として与えるであろう。該メチルマロン酸低下薬は筋肉内注射製剤として投与されることが好ましい。該製剤は当該分野で知られており、このものは商業的に入手することができる。
【００３４】
当該分野の当業者は、該メチルマロン酸低下薬が広い用量範囲にわたって有効であることを認めるであろう。例えば、コバラミンをメチルマロン酸低下薬として使用する場合には、コバラミンの用量は毎日１回を１ヶ月間から９週間毎に１回を１年間にわたって約０．２μｇ〜約３０００μｇの範囲であってよい。コバラミンは、約２４時間毎〜約１６８０時間毎に投与される約５００μｇ〜約１５００μｇの筋肉内注射として服用されることが好ましい。葉酸代謝拮抗薬を用いた処置を開始し、葉酸代謝拮抗薬の投与を止めるまで続けることに関係なく、葉酸代謝拮抗薬の投与の約１〜約３週間前に最初に約１０００μｇを筋肉内注射で投与し、約２４時間毎〜約１６８０時間毎に繰り返すことが好ましい。葉酸代謝拮抗薬の第１投与の約１週間〜約３週間前に約１０００μｇを筋肉内注射で投与し、該葉酸代謝拮抗薬の投与を止めるまで、６週間毎〜１２週間毎（約９週間毎が好ましい）に繰り返すことが最も好ましい。しかしながら、メチルマロン酸低下薬の量は実際には、関連する状況（このものは、処置する病気、投与の選択経路、投与する実際の薬物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の激しさを含む）に照らして医師によって決定されることを理解されるであろう。従って、該上記の用量範囲は本発明の範囲を限定することを意図するものではない。例えば、上記の範囲より低い用量レベルがより適当であったり、一方で他の場合には更に大きな用量をいずれの有害な副作用を生じることなく、使用することができる。
【００３５】
本明細書で使用する用語「ＦＢＰ結合薬」とは、葉酸結合性タンパク質の結合薬を意味する。このものは、例えば葉酸である(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルを含む。この後者の化合物は、J. Am. Chem. Soc. 74, 4215 (1952）に開示されているロイコボリン（Leucovorin）の(６Ｒ)−異性体である。該テトラヒドロ葉酸化合物の両方は、６−位で異常な立体配置を有する。それらは、それぞれの(６Ｓ)異性体と比較して葉酸結合タンパク質と結合する際に１０〜２０倍以上有効である（Ratnamらによる Folate and Antifolate Transport in Mammalian Cells Symposium, Mar. 21-22, 1991, Bethesda, MD.を参照）。これらの化合物は通常、対応するデヒドロ前駆体からの非立体選択的な還元反応、続いてクロマトグラフィー法または酵素による方法により分離することによって、ジアステレオマーである天然の(６Ｓ)体を有する混合物として製造する。例えば、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ880844 (また、Derwent Abstract 88-368464/5) およびカナダ国特許第1093554号を参照。例えば、Dietary Reference Intakes for Thiamin, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B , Pantothenic Acid, Biotin, and Choline (2000), 8 Folate, 196-305頁を参照。
【００３６】
「生理学的に許容し得る塩」とは、ＦＢＰ結合薬のカリウム、ナトリウム、リチウム、マグネシウム塩（カルシウム塩であることが好ましい）を意味する。「生理学的に許容し得るエステル」とは、哺乳動物に投与後に容易に加水分解されて、対応するＦＢＰ結合薬の遊離酸（例えば、Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステル、混合酸無水物など）を与えるエステルを意味する。
【００３７】
本発明に従って使用するＦＢＰ結合薬は、遊離酸の形態であったりあるいは生物学的な系中で親酸に変換される生理学的に許容し得る塩またはエステルの形態であり得る。該用量は通常、ビタミンサプリメントの形態で、すなわち経口投与される錠剤であったり（例えば、除放性製剤であることが好ましい）、飲用水に加えた水溶液としてであったり、水溶性の非経口製剤（例えば、静脈内製剤）などとして与える。
【００３８】
ＦＢＰ結合薬は通常、葉酸代謝拮抗薬を用いて処置する前に、被験者である哺乳動物に投与する。約１時間〜約２４時間での適当な量のＦＢＰ結合薬を用いた前処置は通常、該葉酸代謝拮抗薬を投与する前に葉酸代謝拮抗薬と結合するタンパク質と実質的に結合させたり、遮断させるのに十分である。ＦＢＰ結合薬の１回投与（これは、葉酸の経口投与が好ましい）は葉酸結合性タンパク質をロードするのに十分であるが、該ＦＢＰ結合薬の複数回服用を活性薬物による処置の数週間前に使用し、葉酸結合性タンパク質が十分に結合することを確実にしてそれら前処置から得られる利点を最大限とすることができる。
【００３９】
本発明の特に好ましい態様において、葉酸の約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ（約０．３ｍｇ〜約５ｍｇが最も好ましい）を、メチルマロン酸低下薬の投与の約１〜約３週間後で且つある量の葉酸代謝拮抗薬の非経口投与の約１〜約２４時間前に、哺乳動物に経口投与する。しかしながら、実際に投与するメチルマロン酸低下薬の量は、関連する状況（例えば、処置する病気、投与の選択経路、投与する実際の薬物、個々の患者の年齢、体重および反応、並びに患者の症状の激しさを含む）に照らして医師によって決定されるであろう。従って、上記の用量の範囲は本発明の範囲を限定することを意図するものではない。ある場合には、上記の範囲の下限よりも低い用量レベルがより適当であり、一方で他の場合には、より一層の多量をいずれの有害な副作用を引き起こさずに使用することができる。
【００４０】
通常、形容詞として使用する用語「医薬的な」は、生体にとって実質的に非毒性であることを意味する。
【００４１】
（実施例）
（方法）
メチルマロン酸低下薬の単独、または葉酸との組み合わせがヒト腫瘍異種移植片モデルに及ぼす効果を評価するために、ヒトＭＸ−１乳癌腫を有する雌性ヌードマウスを、ＡＬＩＭＴＡを単独でまたは生理学的を越えた用量の葉酸またはビタミンＢ１２（コバラミン）と一緒に用いて処置した。
【００４２】
該動物は、滅菌した標準的な実験用固形試料の任意量および滅菌水の任意量を維持した。ドナーの腫瘍から得られるヒトＭＸ−１腫瘍細胞（５×１０６）を、約８〜１０週齢の雌性ヌードマウスの大腿に皮下移植した。腫瘍細胞の移植の７日後に開始し、該動物をＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇ）を用いて、７日〜１１日目および１４日〜１８日目に毎日１回腹腔内注射のみによるか、あるいは同じスケジュールでの腹腔内注射による葉酸（６ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ）および／またはビタミンＢ１２（１６５ｍｇ／ｋｇ）を用いて腹腔内投与によって、同じスケジュールで処置した。
【００４３】
腫瘍の応答は、該実験期間中に週に２回、腫瘍の大きさを測定することによって追跡した。腫瘍の大きさの測定と同時期に、体重の測定によって、毒性を追跡した。腫瘍増殖の遅延は、処置腫瘍とコントロール腫瘍が１０００ｍｍ３に達するまでの差異（単位は日数）とした。
【００４４】
ヒトＭＸ−１乳癌癌腫異種移植片は、用量が１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇでＡＬＩＭＴＡを用いた処置について応答性であり、１７日および２１日の腫瘍増殖の遅延を得た。ＡＬＩＭＴＡと同じスケジュールで、６ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇの２つの用量で、葉酸を該動物に単独で投与して、それぞれ７日および１２日の腫瘍増殖の遅延を得た。用量が１６５ｍｇ／ｋｇでビタミンＢ１２を単独で投与することにより、１２日の腫瘍増殖の遅延を得た。
【００４５】
各２つの用量の場合でのＡＬＩＭＴＡと各ビタミンとの組み合わせを、同時組み合わせレジメとして投与した。葉酸（６ｍｇ／ｋｇ）とＡＬＩＭＴＡと一緒に投与することにより、ＡＬＩＭＴＡ単独での使用から生じる腫瘍増殖の遅延は変わらなかった。ＡＬＩＭＴＡの用量がそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇの場合に、高用量（６０ｍｇ／ｋｇ）の葉酸を各用量のＡＬＩＭＴＡと一緒に加えることにより、腫瘍増殖の遅延を２２日および２３日と少し増大させた。ＡＬＩＭＴＡおよびビタミン（Ｂ１２)（１６５ｍｇ／ｋｇ）の処置による腫瘍増殖の遅延は、ＡＬＩＭＴＡの用量がそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇでは、２２日および２４日であった。
【００４６】
体重の測定は、各処置レジメにおける毒性の一般的な測定基準として使用した。体重の減少パターンは処置レジメによって影響を受けた。７日目〜１１日目および１４日目〜１８日目の処置期間中は体重が増加し、２日間間隔を置くことによって体重は回復した。ＡＬＩＭＴＡが原因の体重の減少は用量に依存するが、総計で小さいものであった（３％）。葉酸を６ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇで単独の場合には体重の減少は生じず、実際に葉酸で処置した動物はコントロール動物よりも実験期間中、体重を維持したり、増加していた。ＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）および葉酸（６０ｍｇ／ｋｇ）を用いて処置した動物は、実験期間中、体重が増加した（約２０％）。
【００４７】
ビタミンＢ１２の投与により、実験期間中、該動物の体重の増加は防止されなかった。ＡＬＩＭＴＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）をビタミンＢ１２と一緒に用いて処置した動物は体重が増加したが、一方でＡＬＩＭＴＡ（１５０ｍｇ／ｋｇ）をビタミンＢ１２と一緒に用いて処置した動物は実験期間中、体重を維持した。
【００４８】
結論として、生理学的な用量を越えているが無毒な用量のビタミン、葉酸およびビタミンＢ１２の投与は、ヌードマウスのヒトＭＸ−１乳癌癌腫異種移植片腫瘍におけるＡＬＩＭＴＡの抗腫瘍活性を変化させず、そして動物の体重測定によって決まるＡＬＩＭＴＡの毒性を増大させなかった。
【００４９】
ビタミンＢ１２の単独、または葉酸との組み合わせが葉酸代謝拮抗薬に及ぼす効果は、通常使用される標準的な試験において示され、該葉酸代謝拮抗薬そのものの抗腫瘍活性および毒性効果を測定することができる。それらの１試験においては、２ｍｍ×２ｍｍの腫瘍断片をマウスの腋部分にトロカールにより挿入することによって、マウスを乳腺癌腫のＣ３Ｈ菌株に予防摂取する。メチルマロン酸低下薬の単独または葉酸との組み合わせの投与時期は変えることができる。１０動物を各々の用量レベルで用いる。副尺カリパスを用いて腫瘍増殖の長さおよび幅を測定することによって、１０日目に腫瘍活性を評価する（１日目は葉酸代謝拮抗薬の第１投与である）。該活性は、腫瘍増殖の抑制パーセントとして表す。
【００５０】
処置前の２週間および処置の間にビタミンＢ１２および場合により葉酸を完全に含まない食事を維持した感染マウスに、葉酸代謝拮抗薬を投与する場合には、非常に低用量では中位の抗腫瘍活性を示すが、非常に低用量では激しい毒性をも引き起こす（これは、マウスの死として測定される）。
【００５１】
マウスの試験グループは、ビタミンＢ１２および場合により葉酸のない食事を、処置前の２週間維持する。次いで、０．００３％のビタミンＢ１２（重量比／容量比）を筋肉内注射によって処置し、そして場合により０．０００３％の葉酸（重量比／容量比）を含有する飲用水を該動物に与える間に、ビタミンＢ１２および場合により葉酸を投与する。この濃度は、１日当たりの体表の平方メートルにつきビタミンＢ１２および場合により葉酸の約１．７５ｍｇと翻訳（translate）される。上記の結果が示す通り、示したレベルのビタミンＢ１２を葉酸代謝拮抗薬を与えている被験者の食事に加えることにより、低用量で優れた抗腫瘍活性が得られ、毒性効果はほとんどまたは全くなかった。
【００５２】
上記の試験は、葉酸を用いた処置前およびその期間中、ビタミンＢ１２および場合により葉酸なしの食事を維持された腫瘍を有するマウスの場合には、該葉酸代謝拮抗薬の毒性は非常に高く、１ｍｇ／ｋｇ／日では大部分のマウスが致死し、非毒性薬物用量ではより低い腫瘍活性が観察される。非常に低用量のビタミンＢ１２は、薬物毒性をいくらか逆転し、抗腫瘍活性を改善する。より多い用量のビタミンＢ１２は、葉酸代謝拮抗薬の毒性を一層より有意に低下させる。該マウスをビタミンＢ１２を用いて前処置し、次いで葉酸代謝拮抗薬を投与する前に葉酸を投与することにより、毒性の著しい低下が見られ、葉酸代謝拮抗薬の毒性をほとんど完全に除く。従って、ビタミンＢ１２を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせた使用は薬物の毒性を低下させ、抗腫瘍活性に有害な影響を及ぼさない。ビタミンＢ１２と葉酸との一緒の使用は、薬物毒性を相乗的に低下させる。
【００５３】
癌患者に関する典型的な臨床的評価において、全ての患者について組織学的におよび細胞学的に癌の診断を確認する。葉酸代謝拮抗薬をビタミンＢ１２と組み合わせて投与する。ビタミンＢ１２は、葉酸代謝拮抗薬を用いた処置の１〜３週間前に、１０００μｇを筋肉内注射として投与する。１０００μｇのビタミンＢ１２の筋肉内注射を、患者が療法を中断するまで約９週間毎に行なう。該葉酸代謝拮抗薬を速い静脈内注射によって２週間の期間にわたって４回の服用で投与し、続いて非療法を２週間行う。投与は、いずれの２週間の期間内の１、４、８および１１日目に行なう。患者は、５ｍｇ／ｍ２／服用での最初の療法期間を有し、そして最初の期間中に観察される毒性効果に応じて、それらの続く期間を同じ用量としたり、６ｍｇ／ｍ２にまで増大させたり、あるいは４ｍｇ／ｍ２にまで減少させることができる。
【００５４】
上記の臨床研究のための製造において、ヒトにおけるパイロット研究は、ＡＬＩＭＴＡを与えている患者に与えたビタミンＢ１２が、ＡＬＩＭＴＡが原因の副作用を有効に低下させることを確認した。ＡＬＩＭＴＡ投与の１週間〜２週間前に、ヒト被験者から尿を集め、血液を採取した。ビタミン代謝物レベル、メチルマロン酸およびホモシステインを測定する。血中ホモシステインレベルは、蛍光分極イムノアッセイキット（アボット社（Abbot laboratories）製）によって測定する。メチルマロン酸レベルは、２４時間尿収集キット（バイオラボメディカルユニット（Biolab Medical Unit）（United Kingdom company）から入手可能）を用いた尿レベルによって測定する。加えて、尿および血液を、ＡＬＩＭＴＡの投与１週間前に（葉酸の補充の少なくとも５日後でビタミンＢ１２の補充の少なくとも１週間後）、および周期毎の４日前まで集めることができる。
【００５５】
投与方法および服用方法
１．葉酸
葉酸は、以下の選択肢の１つとして与える。選択肢１〜選択肢３の順序で好ましい。
１．葉酸の３５０〜６００μｇ。
２．選択肢１を使用できない場合には、３５０μｇ〜６００μｇの範囲の葉酸を含有するマルチビタミンが許容され得る。
３．選択肢１または選択肢２のいずれも使用できない場合には、３５０μｇ〜１０００μｇ用量の葉酸が許容され得る。
【００５６】
この研究の目的のために、患者はＡＬＩＭＴＡとシスプラチン、またはシスプラチン単独で用いた処置の約１〜約３週間前に葉酸の毎日の経口投与を開始し、研究療法を中断するまで毎日続けるべきである。
【００５７】
２．ビタミンＢ１２
ビタミンＢ１２を得て、１０００μｇを筋肉内注射として投与する。ビタミンＢ１２の注射は、ＡＬＩＭＴＡを用いた処置の約１〜３週間前に投与しなければならず、そのことは患者が研究療法を中断するまで約９週間毎に繰り返すべきである。
【００５８】
葉酸サプリメントの３５０〜６００μｇまたはその相当量は、ＭＴＡおよびシスプラチンの第１投与の約１〜３週間前に毎日の経口投与を開始すべきである。ビタミンＢ１２（１０００μｇ）の注射は、ＡＬＩＭＴＡの第１投与の約１〜３週間前に筋肉内投与しなければならず、そしてこのことは患者が研究療法を中断するまで約９週間毎に繰り返すべきである。
【００５９】
予め補充したホモシステインレベルおよびメチルマロン酸のレベルを、ａ）被験薬の第１服用の直前レベル、およびｂ）被験薬の第２服用の直前レベル（すなわち、補充の完全な周期後）と比較する。ベースラインから補充された患者における最初の７個までの治療周期を与えたある毒性の羅患率を、補充されていない初期の患者（ｎ＝２４６）において観察された羅疾患率（ファーバー（Farber）らによる）と比較する。
【００６０】
非補充周期対補充周期の患者（乗り換え(cross−over)患者）における毒性を、比較することができる。
比較するデータは以下の通りである：
１）患者数と、ベースラインから補充された患者のベースライン個体群の統計学的データ；
２）第１の服用前、第２の服用前および研究している癌の種類に応じた各治療サイクル前のホモシステインレベルおよびメチルマロン酸レベルと、ベースラインレベル；
３）これらの十分に補充された患者におけるグレード３と４の血液学的な毒性；
４）これらの十分に補充された患者におけるグレード３と４の非血液学的な毒性。
【００６１】
化学療法的な臨床トライアルにおける毒性のグレードは、当該分野の当業者にとってよく知られる。疲労および皮膚発疹のグレードの例を以下に示す。
疲労のグレード
神経運動
０） なしまたは変化なし
１） 主観的な脱力感；客観的な知見なし
２） 機能の有意な障害がない、中位の客観的な脱力感
３） 機能の障害を有する、客観的な脱力感
４） 運動麻痺
【００６２】
発疹のグレード
皮膚
０） なしまたは変化なし
１） 無症候性である散らばった黄斑、丘疹の皮疹または紅斑
２） かゆみ症を伴う無症候性の散らばった黄斑、丘疹の皮疹もしくは紅斑、または他の関連する皮疹の症状
３） 全身症候性の黄斑、丘疹または小胞の皮疹
４） 剥脱性の皮膚炎または潰瘍性の皮膚炎
【００６３】
以下の研究で使用するビタミン（葉酸およびＢ１２の両方）は、ゼニスゴールドライン社（Zenith Gold Line, Centrum, Folvite）またはインカナダアポ−ホリック社（in Canada Apo-Folic）から得ることができる。シアノコバラミンは、これらの研究においてメチルマロン酸低下薬として使用される。
【００６４】
現在および過去の臨床トライアルは、米国特許第5,217,974号に記載されている通り、薬物関連死亡全体の４％、グレード３／４の好中球減少症の５０％、グレード４の血小板減少症の７％、およびグレード３／４の下痢および粘膜炎の１０％を示す。ＡＬＩＭＴＡで補充したビタミンＢ１２は、薬物関連の毒性において中位の効果を示し、薬物関連の死を３％にまで低下させ、且つ激しい毒性を約２５％だけ低下させた。ビタミンＢ１２および葉酸とＡＬＩＭＴＡとの組み合わせは、処置した４８０以上において、薬物関連の死を＜１％にまで低下させた。ビタミンＢ１２と葉酸との組み合わせは、薬物に関連するグレード３／４の毒性事象を低下させた。このことを、表１に示す。
表１
【表１】
【００６５】
加えて、化学療法処置を必要とする化学的に未処置の６２患者を２つの群に分けた。これらのうちの１７患者は上記の通り、ＡＬＩＭＴＡを与えているが、ビタミンＢ１２または葉酸を与えなかった。残りの患者は、上記の通り、ビタミンＢ１２、葉酸およびＡＬＩＭＴＡを与えた。組合わせ処置を与えた患者において、４５のうちの８が化学療法に応答した。該組み合わせ療法を与えていないが、ＡＬＩＭＴＡを用いた処置だけを与えた患者においては、１７のうちの１だけが応答した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項２】
哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法であって、該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項３】
哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項４】
必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項５】
哺乳動物ヘ葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項６】
哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する方法であって、該哺乳動物に有効な量の葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項７】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該薬物を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１２】
葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該薬物を葉酸代謝拮抗薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１３】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１１または１２のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項１１〜１３のいずれかに記載の使用。
【請求項１５】
葉酸代謝拮抗薬はＡＩＭＴＡである、請求項１１〜１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理する、請求項１１〜１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した哺乳動物の毒性を抑制するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該メチルマロン酸低下薬を該葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１８】
哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する方法において使用するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該方法はメチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することを含む使用。
【請求項１９】
ＦＢＰ結合薬を該メチルマロン酸低下薬および葉酸代謝拮抗薬とも組み合わせて投与する、請求項１７または１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬、および場合によりＦＢＰ結合薬を、互いに同時に、別々に、または逐次的に投与する、請求項１７〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１７〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２２】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項１９〜２１のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項１７〜２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２４】
哺乳動物をメチルマロン酸低下薬で予め処理する、請求項１７〜２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２５】
腫瘍の増殖を抑制する際に同時に、別々にまたは逐次的に使用するための組み合わせ製剤としての、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬および場合によりＦＢＰ結合薬を含有する製品。
【請求項２６】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項２５に記載の製品。
【請求項２７】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項２５または２６のいずれかに記載の製品。
【請求項２８】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項２５〜２７のいずれかに記載の製品。
【請求項１】
必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項２】
哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法であって、該哺乳動物に有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項３】
哺乳動物における腫瘍の増殖を抑制する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項４】
必要のある哺乳動物に葉酸代謝拮抗薬を投与する方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項５】
哺乳動物ヘ葉酸代謝拮抗薬を投与することに関連した毒性を低下させる方法であって、有効な量の該葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項６】
哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する方法であって、該哺乳動物に有効な量の葉酸代謝拮抗薬をメチルマロン酸低下薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項７】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該薬物を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１２】
葉酸代謝拮抗薬に関連した哺乳動物の毒性を低下させるのに有用な薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該薬物を葉酸代謝拮抗薬およびＦＢＰ結合薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１３】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１１または１２のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項１１〜１３のいずれかに記載の使用。
【請求項１５】
葉酸代謝拮抗薬はＡＩＭＴＡである、請求項１１〜１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
哺乳動物はメチルマロン酸低下薬を用いて予め処理する、請求項１１〜１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
葉酸代謝拮抗薬の投与に関連した哺乳動物の毒性を抑制するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該メチルマロン酸低下薬を該葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与する使用。
【請求項１８】
哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する方法において使用するための薬物の製造におけるメチルマロン酸低下薬の使用であって、該方法はメチルマロン酸低下薬を葉酸代謝拮抗薬と組み合わせて投与することを含む使用。
【請求項１９】
ＦＢＰ結合薬を該メチルマロン酸低下薬および葉酸代謝拮抗薬とも組み合わせて投与する、請求項１７または１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬、および場合によりＦＢＰ結合薬を、互いに同時に、別々に、または逐次的に投与する、請求項１７〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項１７〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２２】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項１９〜２１のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項１７〜２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２４】
哺乳動物をメチルマロン酸低下薬で予め処理する、請求項１７〜２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２５】
腫瘍の増殖を抑制する際に同時に、別々にまたは逐次的に使用するための組み合わせ製剤としての、メチルマロン酸低下薬、葉酸代謝拮抗薬および場合によりＦＢＰ結合薬を含有する製品。
【請求項２６】
メチルマロン酸低下薬は、ヒドロオキソコバラミン、シアノ−１０−クロロコバラミン、アココバラミン過塩素酸塩、アコ−１０−クロロコバラミン過塩素酸塩、アジドコバラミン、クロロコバラミンおよびコバラミンからなる群から選ばれる、請求項２５に記載の製品。
【請求項２７】
葉酸代謝拮抗薬はＡＬＩＭＴＡである、請求項２５または２６のいずれかに記載の製品。
【請求項２８】
ＦＢＰ結合薬は、葉酸、(６Ｒ)−５−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸および(６Ｒ)−５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸、またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくはエステルからなる群から選ばれる、請求項２５〜２７のいずれかに記載の製品。
【公開番号】特開２０１２−１８０３８１（Ｐ２０１２−１８０３８１Ａ）
【公開日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１４４５７０（Ｐ２０１２−１４４５７０）
【出願日】平成２４年６月２７日（２０１２．６．２７）
【分割の表示】特願２００２−５０６７１５（Ｐ２００２−５０６７１５）の分割
【原出願日】平成１３年６月１５日（２００１．６．１５）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１４４５７０（Ｐ２０１２−１４４５７０）
【出願日】平成２４年６月２７日（２０１２．６．２７）
【分割の表示】特願２００２−５０６７１５（Ｐ２００２−５０６７１５）の分割
【原出願日】平成１３年６月１５日（２００１．６．１５）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
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