【課題】新規なMHC分子構築物、ならびに診断および治療のためにこれらの構築物を用いる方法を提供すること。
【解決手段】可溶性媒体に可溶性の形態であるか、または固体もしくは半固体支持体上に固定化されたMHC分子構築物であって、該MHC分子構築物は、１つより多くの結合実体が結合したデキストランキャリア分子を含んでなり、該１つより多くの結合実体の各々には、２〜４つのMHC分子が結合しており、該MHC分子構築物は、少なくとも５つのMHC分子を含む、MHC分子構築物。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
可溶性媒体に可溶性の形態であるか、または固体もしくは半固体支持体上に固定化されたMHC分子構築物であって、該MHC分子構築物は、１つより多くの結合実体が結合したデキストランキャリア分子を含んでなり、該１つより多くの結合実体の各々には、２〜４つのMHC分子が結合しており、該MHC分子構築物は、少なくとも５つのMHC分子を含む、MHC分子構築物。
【請求項２】
可溶性媒体に可溶性の形態であるか、または固体もしくは半固体支持体上に固定化されたMHC分子構築物であって、該MHC分子構築物は、１つより多くのストレプトアビジンが結合した多糖類キャリア分子を含んでなり、該１つより多くのストレプトアビジンの各々には、２〜４つのMHC分子が結合しており、該MHC分子構築物は、少なくとも５つのMHC分子を含む、MHC分子構築物。
【請求項３】
可溶性媒体に可溶性の形態であるMHC分子構築物であって、該MHC分子構築物は、１つより多くの結合実体が結合した多糖類キャリア分子を含んでなり、該１つより多くの結合実体の各々には、２〜４つのMHC分子が結合しており、該MHC分子構築物は、少なくとも５つのMHC分子を含む、MHC分子構築物。
【請求項４】
可溶性媒体に可溶性の形態であるか、または固体もしくは半固体支持体上に固定化されたMHC分子構築物であって、該MHC分子構築物は、少なくとも５つのMHC分子に結合した可溶性多糖類キャリア分子を含んでなり、該MHC分子は、該多糖類キャリア分子に直接結合しており、該MHC分子構築物は、１つ以上の標識を含む、MHC分子構築物。
【請求項５】
MHC分子が、ペプチド非含有MHC分子であるかまたはペプチド充填MHC分子である請求項１〜４いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項６】
MHC分子が同一であるかまたは少なくとも２つのMHC分子が異なるものである請求項１〜５いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項７】
MHC分子により収容されるペプチドが同一であるかまたはMHC分子によって収容される少なくとも２つのペプチドが異なるものである請求項１〜６いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項８】
１つ以上の生物学的に活性な分子をさらに含んでなる請求項１〜７いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項９】
生物学的に活性な分子が、
(a)MIC A、MIC B、CD1d、HLA E、HLA F、HLA G、HLA H、ULBP-1、ULBP-2、およびULBP-3等のMHCクラスI様タンパク質の群に由来するタンパク質、
(b)Tおよび／またはNK細胞上に発現されるCD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD9、CD27、CD28、CD30、CD69、CD134、CD137、CD147、CDw150、CD152、CD153、CD40L、NKG2D、ICOS、HVEM、HLAクラスII、PD-1、Fas、およびFasL、ならびにAPCおよび／または腫瘍細胞上に発現されるCD40、CD48、CD58、CD70、CD72、B7.1、B7.2、B7RP-1、B7-H3、PD-L1、PD-L2、CD134L、CD137L、ICOSL、およびLIGHTの群に由来する共刺激分子、
(c)NK細胞上に発現されるCD16、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80、2B4、KIR、LIR、CD94/NKG2A、およびCD94/NKG2C、ならびにIFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、コロニー刺激因子、ビタミンD3、IL-2毒素、シクロスポリン、FK-506、ラパマイシン、TGF-β、クロトリマゾール、ニトレンジピン、およびカリブドトキシンの群に由来する細胞調節分子、
(d)LFA-1、CD11a/18、CD54、CD106、およびCD49a、b、c、d、e、f/CD29の群に由来するアクセサリー分子、
(e)ICAM-1、ICAM-2、GlyCAM-1、CD34、抗-LFA-1、抗-CD44、抗-β7、ケモカイン、CXCR4、CCR5、抗セレクチンL、抗セレクチンE、および抗セレクチンPの群に由来する接着分子、
(f)シクロホスファミド、メトトレキセート（methrotrexate）、アザチオプリン、ミゾリビン、15-デオキシスペルグアリン（deoxuspergualin）、ネオマイシン、スタウロスポリン、ゲネスタイン、ハービマイシンA、シュードモナスエキソトキシンA、サポリン、リタキサン、リシン、ゲムツズマブオゾオガミチン、志賀毒素、重金属、無機水銀、有機水銀、FN18-CRM9、放射性同位体、ヨウ素の取り込まれた同位体、コバルトの取り込まれた同位体、セレンの取り込まれた同位体、トリチウムの取り込まれた同位体、リンの取り込まれた同位体、ハプテン、DNP、およびジゴキシゲニンの群に由来する毒性分子、
ならびに(a)〜(f)のいずれかの分子に対する抗体、該抗体の誘導体、および該抗体の断片、ならびにそれらの組み合わせ、ならびに
(g)タンパク質、共刺激分子、細胞調節分子、レセプター、アクセサリー分子、接着分子、天然のリガンド、および毒性分子、ならびにそれらに対する抗体および組換え結合分子、ならびにそれらの組み合わせ
から選ばれるものである請求項８記載のMHC分子構築物。
【請求項１０】
１つ以上の標識化合物をさらに含んでなる請求項１〜９いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項１１】
１つ以上の標識化合物が、キャリア分子および／または１つ以上の結合実体および／またはストレプトアビジンおよび／または１つ以上のMHC分子に結合している請求項１０記載のMHC分子構築物。
【請求項１２】
標識化合物が、
(a)5-および6-カルボキシフルオレセイン、5-または6-カルボキシフルオレセイン、6-フルオレセイン-5-および6-カルボキサミドヘキサン酸、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、テトラメチルローダミン、色素、Cy2、Cy3、Cy5、任意に置換されたクマリン、AMCA、PerCP、フィコビリンタンパク質、R-フィコエリトリン、アロフィコエリトリン、テキサスレッド、プリンストンレッド、グリーン蛍光タンパク質、およびそれらのアナログ、R-フィコエリトリンのコンジュゲート、アロフィコエリトリンおよびCy5またはテキサスレッドのコンジュゲート、半導体ナノ結晶に基づく無機蛍光標識、量子ドット、ならびにランタニドに基づく時間分解蛍光標識、Eu3+に基づく時間分解蛍光標識、およびSm3+に基づく時間分解蛍光標識の群に由来する蛍光標識から選ばれる、
(b)DNP、ビオチン、およびジゴキシゲニンの群に由来するハプテンから選ばれる、
(c)セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、β-N-アセチルグルコサミニダーゼ、β-グルクロニダーゼ、インベルターゼ、キサンチンオキシダーゼ、ホタルルシフェラーゼおよびグルコースオキシダーゼの群に由来する酵素標識から選ばれる、
(d)ルミノール、イソルミノール、アクリジニウムエステル、1,2-ジオキセタンおよびピリドピリダジンの群に由来する発光標識から選ばれる、および
(e)ヨウ素の取り込まれた同位体、コバルトの取り込まれた同位体、セレンの取り込まれた同位体、トリチウムの取り込まれた同位体、およびリンの取り込まれた同位体の群に由来する放射能標識から選ばれる、および
(f)蛍光標識、酵素標識、放射性同位体、化学発光標識、生物発光標識、ポリマー、金属粒子、ハプテン、抗体および色素から選択される
請求項１０または１１記載のMHC分子構築物。
【請求項１３】
キャリア分子が、
(a)多糖類、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、デキストランポリアルデヒド、カルボキシメチルデキストランラクトン、およびシクロデキストリン、プルラン、シゾフィラン、スクレログルカン、キサンタン、ジェラン、O-エチルアミノグアラン、6-O-カルボキシメチルキチンおよびN-カルボキシメチルキトサンを含むキチンおよびキトサン、
(b)誘導体化セロロジクス（cellolosics）、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、6-アミノ-6-デオキシセルロースおよびO-エチルアミンセルロース、
(c)ヒドロキシル化デンプン、ヒドロキシプロピルデンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カラゲナン、アルギン酸塩、およびアガロース、ならびに
(d)合成多糖類、フィコールおよびカルボキシメチル化フィコール
からなる群より選ばれるものである請求項２〜１２いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項１４】
固体または半固体支持体に固定化された請求項１〜１３いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項１５】
固体または半固体支持体に直接固定化された、あるいはリンカー、スペーサー、または抗体、その抗体誘導体もしくは断片を介して固体または半固体支持体に固定化された請求項１４記載のMHC分子構築物。
【請求項１６】
支持体が、粒子、ビーズ、生分解性粒子、シート、ゲル、フィルター、膜、ナイロン膜、繊維、毛細管、針、マイクロタイター条片、チューブ、プレートまたはウェル、コーム、ピペットチップ、マイクロアレイ、チップおよびスライドからなる群より選ばれるものであり、該ビーズまたは粒子が、ポリマービーズ、ポリマー粒子、磁性ビーズ、磁性粒子、超磁性ビーズ、または超磁性粒子である請求項１４または１５記載のMHC分子構築物。
【請求項１７】
フローサイトメトリー法、組織学的方法または細胞学的方法において使用するための請求項１〜１６いずれか記載のMHC分子構築物。
【請求項１８】
請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を含有してなる組成物。
【請求項１９】
可溶化媒体中における請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
MHC分子構築物が、ペプチド充填MHC分子またはペプチド非含有MHC分子を含んでなり、ペプチド非含有MHC分子を充填するためのペプチド、およびペプチド非含有分子を含むMHC分子構築物が、別々に提供される請求項１８または１９記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を含んでなる治療用組成物。
【請求項２２】
１つ以上の生物学的に活性な分子および／または賦形剤をさらに含んでなる請求項２１記載の治療用組成物。
【請求項２３】
MHC認識細胞に関与する疾患の治療、予防、安定化、または軽減における使用のための、請求項２１または２２記載の治療用組成物。
【請求項２４】
疾患が、炎症性、自己免疫性、アレルギー性、ウイルス性、癌性、感染性、同種異系性、異種性、移植片対宿主起源、もしくは宿主対移植片起源の疾患であるか、あるいは慢性炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性結腸炎、硬化症、Ｉ型糖尿病、慢性関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、喘息、悪性黒色腫、腎癌、乳癌、肺癌、子宮の癌、前立腺癌、脳癌、頭部および頚部の癌、白血病、皮膚リンパ腫、肝癌、結腸直腸癌、膀胱癌、拒絶関連疾患、対宿主性移植片病、または肝炎、AIDS、麻疹、痘、水痘、風疹もしくは疱疹に関連するウイルス性疾患である請求項２１〜２３いずれか記載の治療用組成物。
【請求項２５】
インビボ療法またはエキソビボ療法における使用のための請求項２１〜２３いずれか記載の治療用組成物。
【請求項２６】
免疫応答をアップレギュレート、ダウンレギュレート、もしくは調節するための、細胞のアネルギーを誘導するための、または養子免疫療法のための医薬の製造における請求項２１〜２５いずれか記載の治療用組成物の使用。
【請求項２７】
請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を提供する工程、
治療用物質に適切な媒体中にMHC分子構築物を溶解または分散させる工程、および
任意に他の賦形剤を添加する工程
を含む請求項２１〜２５いずれか記載の治療用組成物の製造方法。
【請求項２８】
請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を用いてMHC認識細胞を得る工程、
かかるMHC認識細胞を臨床的に関連する数に増殖する工程、
投与に適した媒体中で得られた細胞を製剤化する工程、および
任意に賦形剤を添加する工程
を含む請求項２１〜２５いずれか記載の治療用組成物の製造方法。
【請求項２９】
（ａ）MHC認識細胞を含有することが予想されるサンプルと請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を接触させる工程、および
（ｂ）MHC分子構築物の任意の結合を測定し、それによりMHC認識細胞に関与する疾患の予後を確立し、該疾患の状態を決定し、または該疾患を診断する工程
を含むMHC認識細胞に関与する疾患の予後の確立、該疾患の状態の決定、または該疾患の診断のための方法。
【請求項３０】
（ａ）医薬での処置を受けた被験体由来のサンプルと請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を接触させる工程、および
（ｂ）MHC分子構築物の任意の結合を測定し、それにより医薬の有効性を決定する工程、
を含むMHC認識細胞に関与する疾患に対する医薬の有効性を決定するための方法。
【請求項３１】
（ａ）MHC認識細胞を含有することが予想されるサンプルを提供する工程、
（ｂ）サンプルと請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を接触させる工程、および
（ｃ）MHC分子構築物の任意の結合を測定し、それによりMHC認識細胞をモニターする工程
を含むMHC認識細胞のモニターまたは検出のための方法。
【請求項３２】
MHC認識細胞が、炎症性、自己免疫性、アレルギー性、ウイルス性、癌性、感染性、同種異系性、異種性、移植片対宿主起源、または宿主対移植片起源の疾患、あるいは慢性炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性結腸炎、硬化症、Ｉ型糖尿病、慢性関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、喘息、悪性黒色腫、腎癌、乳癌、肺癌、子宮の癌、子宮頸癌、前立腺癌、脳癌、頭部および頚部の癌、白血病、皮膚リンパ腫、肝癌、結腸直腸癌、膀胱癌、拒絶関連疾患、対宿主性移植片病、または肝炎、AIDS、麻疹、痘、水痘、風疹もしくは疱疹に関連するウイルス性疾患に関与している請求項２７〜３１いずれか記載の方法。
【請求項３３】
サンプルが、組織学的材料、細胞学的材料、原発腫瘍、二次器官転移物、細針吸引物、脾臓組織、骨髄検体、細胞スメア、剥脱性細胞検体、接触調製物、口腔スワブ、喉頭スワブ、膣スワブ、気管支洗浄物、胃洗浄物、臍帯サンプル、体液サンプル、血液サンプル、血液から単離された末梢血液単核細胞集団由来のサンプル、血液由来調製物由来のサンプル、白血球搬出産物由来のサンプル、痰サンプル、喀出物、気管支吸引液、生検、および生検の切片からなる群より選ばれるものである請求項２７〜３２いずれか記載の方法。
【請求項３４】
結合の測定が、顕微鏡での検査、光、蛍光、電子透過、またはフローサイトメトリーにより行われる請求項２７〜３３いずれか記載の方法。
【請求項３５】
サンプルが、支持体、固体もしくは半固体の支持体上に、またはガラススライド、１つ以上のウェルを有するマイクロタイタープレート、ビーズ、粒子、膜、フィルター、フィルター膜、ポリマースライド、ポリマー膜、チャンバースライド、皿、もしくはペトリ皿上にマウントされる請求項２７〜３４いずれか記載の方法。
【請求項３６】
(i)少なくとも５つのMHC分子を提供する工程；
(ii) キャリア分子を提供する工程；
(iii)１つより多くのストレプトアビジンまたは１つより多くの結合実体を提供する工程；
(iv)該キャリア分子に、該１つより多くのストレプトアビジンまたは該１つより多くの結合実体を介して、該少なくとも５つのMHC分子を結合させる工程、ここで、結合により、各ストレプトアビジンまたは各結合実体は、２〜４つのMHC分子に結合される；
(v)任意に、該キャリア分子に、直接にまたは該１つより多くのストレプトアビジンもしくは該１つより多くの結合実体を介して、１つ以上の生物学的に活性な分子を結合させる工程；
(vi)任意に、１つ以上の標識化合物を、該キャリア分子に、該１つより多くのストレプトアビジンの１つ以上に、または該少なくとも５つのMHC分子の１つ以上に結合させる工程、および
それによって請求項２１〜２５いずれか記載の治療用組成物を製造する工程
を含む、請求項２１〜２５いずれか記載の治療用組成物の製造方法。
【請求項３７】
請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物を使用する工程を含む、MHC認識細胞を得るための方法。
【請求項３８】
MHC認識細胞が、
MHC認識細胞を含有する被験体に由来するサンプルを請求項１〜１７いずれか記載のMHC分子構築物の１つ以上と接触させ、それによりMHC認識細胞がMHC分子構築物に結合する工程、
結合MHC分子構築物およびMHC認識細胞を単離する工程、および
任意に、かかるMHC認識細胞を臨床的に関連する数にエキソビボ増殖する工程により得られるものである請求項３７記載の方法であって、該単離されたMHC認識細胞は、増殖の前にMHC分子構築物から遊離される、方法。
【請求項３９】
該方法が、磁場を印加することまたはフローサイトメトリーによるMHC認識細胞の単離を含む請求項３７または３８記載の方法。
【請求項４０】
MHC分子構築物が、サンプルとの接触の前または後に、固体または半固体支持体に固定化される請求項３７〜３９いずれか記載の方法。
【請求項４１】
増殖が、１つ以上のMHC分子構築物、任意に１つ以上の生物学的に活性な分子および任意に樹状細胞または他のフィーダー細胞等のフィーダー細胞の存在下で行われる請求項３７〜４０いずれか記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４−１】

【図３４−２】

【図３４−３】

【図３４−４】

【図３４−５】

【図３４−６】

【図３４−７】

【図３４−８】

【図３４−９】

【図３５】

【図３６】

【図３７−１】

【図３７−２】

【図３７−３】

【図３７−４】

【図３７−５】

【図３７−６】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【公開番号】特開２０１０−２４８２００（Ｐ２０１０−２４８２００Ａ）
【公開日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１２０７２０（Ｐ２０１０−１２０７２０）
【出願日】平成２２年５月２６日（２０１０．５．２６）
【分割の表示】特願２００２−５７１５４４（Ｐ２００２−５７１５４４）の分割
【原出願日】平成１４年３月１３日（２００２．３．１３）
【出願人】（５０３０９６５６８）ダコ　デンマーク　アクティーゼルスカブ (2)
【出願人】（５０６００１５１６）
【Ｆターム（参考）】