新規アセチレンアルコール誘導体、ＮＧＦ関連活性物質及びその製造方法
【課題】ＮＧＦ関連活性を有する新規アセチレンアルコール誘導体の提供。
【解決手段】下記一般式（１）で表される新規アセチレンアルコール誘導体。
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２はは炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
【解決手段】下記一般式（１）で表される新規アセチレンアルコール誘導体。
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２はは炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）などから単離可能な新規アセチレンアルコール誘導体、ＮＧＦ関連活性物質及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
琉球列島は、世界で最も生物多様性の高い熱帯海洋生物地理区であるインド−西太平洋域に属しており、サンゴ礁を形成するサンゴをはじめ多様な海洋生物が棲息している。例えば沖縄本島に投置されている構造物のポール一本から海綿だけでも４０種類以上が採取された例がある。このことは琉球列島が非常に多様性に富んだ海域であることの裏付けになるものである。こうした海の恵みを生かす研究が盛んに行われている。
【０００３】
例えば、沖縄産のオニヒトデから抽出されたＮＧＦ活性をもつステロイド配糖体が報告されている（特許文献１）。
【０００４】
以上のように、沖縄の海洋生物には有用な作用をもつものが多くあることが予測される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００６／０９０９１０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Aoki, S.; Matsui, K.; Tanaka, K.; Satari, R.; Kobayashi, M., Lembehyne A, a novel neuritogenic polyacetylene, from a marine sponge of Haliclona Sp. Tetrahedron (2000), 56(51), 9945-9948.
【非特許文献２】Aoki, S.; Matsui, K.; Wei, H.; Murakami, N.; Kobayashi, M., Structure-activity relationship of neuritogenic spongean acetylene alcohols, lembehynes. Tetrahedron (2002), 58(27), 5417-5422.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明者らは沖縄の海洋生物数百検体についてＮＧＦ活性の有無を精査した。その結果、高い活性をもつ化合物を発見したので、ここに報告する。
【０００８】
すなわち、本発明は、沖縄の海洋生物についての研究を通じて明らかになった新規アセチレンアルコール誘導体及び新規ＮＧＦ関連活性物質並びにその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
海綿からはいくつかの神経栄養因子（ＮＧＦ関連活性物質）が抽出されている（非特許文献１、２）。本発明者らはそれらに報告のない新規アセチレンアルコール誘導体を見いだしたと共に、それら新規アセチレンアルコール誘導体がＮＧＦ様神経突起伸長活性を示すことを発見した。更に、ＮＧＦに対してその作用を増強する場合（以下、「ＮＧＦ増強活性」と称する）もあることを発見した（本明細書において、ＮＧＦ様神経突起伸長活性とＮＧＦ増強活性とを併せて「ＮＧＦ関連活性」と称し、ＮＧＦ関連活性をもつ化合物を併せて「ＮＧＦ関連活性物質」と称する）。そしてこれらの知見に基づき以下の発明を完成した。
【００１０】
請求項１に係るアセチレンアルコール誘導体は、下記一般式（１）で表されるものである。
【００１１】
【化１】
【００１２】
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２は炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
請求項２に係るアセチレンアルコール誘導体は、請求項１において、前記一般式（１）中のＸがＯＨ基であり、Ｒ１がＨ、ｎが３、Ｒ２が下記（Ａ）〜（Ｃ）の置換基のうちの何れか１つ（式中の＊の部分にて炭素原子に結合する）であるものである。
【００１３】
【化２】
【００１４】
請求項３に係るＮＧＦ関連活性物質は、請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を含むことを特徴とする。
【００１５】
請求項４に係るＮＧＦ関連活性物質は、請求項３において、尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液であることを特徴とする。
【００１６】
請求項５に係るアセチレンアルコール誘導体の製造方法の特徴は、請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ、以下「沖縄産海綿Ａ」と称する）から抽出分離する工程を有することにある。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＮＧＦ関連活性物質は高い活性を有する従来にない化合物である。そして、化学構造が比較的単純なため、容易な全合成が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】沖縄産海綿Ａから得られた抽出液を分画する方法を示したフローチャートである。
【図２】実施例で行ったＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜ＣのＮＧＦ関連活性率の経日変化を示すグラフである。
【図３】実施例で行ったＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜ＣのＮＧＦ関連活性率の６日後を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（新規アセチレンアルコール誘導体）
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体は上記一般式（１）にて表される化合物である。式（１）中におけるＸはＯＨ又はＯＭｅ、特にＯＨであることが望ましい。
【００２０】
Ｒ１はＨ又はＭｅ、特にＨであることが望ましい。ｎは下限として１、２、３が例示でき、上限として１０、８、６、４、３が例示でき、これら下限と上限とは任意に組み合わせることができる。特に１〜４程度が望ましく、１〜３がより望ましく、２又は３が更に望ましい。
【００２１】
Ｒ２の炭素数は５〜２５であることが望ましく、１０〜２０であることが更に望ましい。Ｒ２は飽和炭化水素基であっても不飽和炭化水素基であってもよい。不飽和炭化水素基である場合には４位に二重結合をもつものが挙げられる。また、三重結合をもつこともできる。三重結合は末端にもつことができる。更に、Ｒ２は直鎖状の炭化水素基であっても分枝した炭化水素基であっても良い。Ｒ２としては上述したの置換基［（Ａ）：４−ヘプタデカニル基、（Ｂ）：１６−メチル−４−ヘプタデカニル基、（Ｃ）：４，２０−トリコサジエン−２２−イニル基］が挙げられる。特に（Ａ）又は（Ｂ）の置換基が望ましく、（Ａ）の置換が更に望ましい。
【００２２】
特に望ましいアセチレンアルコール誘導体を以下に示す（化合物（２）〜（４））。これら化合物はＸがＯＨ、Ｒ１がＨ、ｎが３である。Ｒ２については化合物（２）が置換基（Ａ）に、化合物（３）が置換基（Ｂ）に、化合物（４）が置換基（Ｃ）に対応している。
【００２３】
【化３】
【００２４】
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体を得る方法としては特に限定されず、公知の方法を組み合わせて合成する方法が採用できる。また、海洋生物から抽出する方法も採用できる。海洋生物としては海綿が例示できる。海綿としては、分類学上、尋常海綿綱に含まれるものが例示できる。特に沖縄の海洋にて産する海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から大量に抽出することが可能である。沖縄産海綿Ａは石垣島周辺海域に非常に多く生息しており、オーバーハング裏面など少し暗い環境を好む種である。生息量も非常に多く、抽出の為に量が必要になった場合にも容易に確保できる。
【００２５】
海洋生物からの抽出方法としては特に限定されない。海洋生物を粉砕したりすりつぶしたりした後、有機溶媒、水などに浸漬し、抽出を行うことができる。抽出液はろ過などを行って夾雑物を除くことが望ましい。その後、適正な担体及び溶媒を用いて分画を行うことができる。海洋生物はそのまま、凍結状態、乾燥状態などどのような状態で抽出操作に供しても良い。
（ＮＧＦ関連活性物質）
本発明のＮＧＦ関連活性物質としては前欄にて説明した一般式（１）で表される新規アセチレンアルコール誘導体から任意に選択できる。特に式（２）〜（４）の化合物の何れかであることが望ましい。特に、一般式（２）の化合物が望ましい。
【００２６】
更に、尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液を混合物である場合も含め、そのまま採用することもできる。例えば、式（２）〜（４）の化合物は海洋生物中から抽出することができる。海洋生物からの抽出方法としては新規アセチレンアルコール誘導体と同様の方法（抽出、分画などを組み合わせた分離方法）が採用できるため、更なる説明は省略する。抽出液がＮＧＦ関連活性物質であるか否かの判断は得られた分離物中のＮＧＦ関連活性の強度及び毒性の強度を判定することで行うことができる。ＮＧＦ関連活性の測定は、ＰＣ１２細胞など一般的な細胞を用いた試験系を用い、神経突起伸長を誘導するかどうかで判断する。単独で神経突起伸長を誘導する場合にはＮＧＦ様神経突起伸長活性を示す分画であり、ＮＧＦの活性を増強する場合にはＮＧＦ増強活性を示す分画である。ＰＣ１２細胞が損傷を受ける場合には毒性があるものと判断できる。
【実施例】
【００２７】
〔試験１：沖縄産海綿ＡからＮＧＦ関連活性物質を分離する方法〕
（抽出）
湿質量３８０ｇの沖縄産海綿Ａ（Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から抽出した酢酸エチル層エキス１．６ ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［Ｈｉ−ＦｌａｓｈＴＭ ２Ｌ （４５ｇ），クロロホルム：メタノール＝１００：０〜９０：１０（４０分間， ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ）， 流速１０ｍＬ／分］によって１０画分に分離した（Ｆｒ．１〜１０）。次にＦｒ．８（６２．２ ｍｇ，３５〜４０分）を高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール， 流速５ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］によって７画分に分離した （Ｆｒ．８−１〜７）。Ｆｒ．８−３（５．０ ｍｇ， １１〜１２分）は純粋であったため、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ（化合物（２）に相当）と名づけた。Ｆｒ．８−５（４．３ｍｇ，１３〜１３．５分）は精製不十分であったためさらに高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール，流速４ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］で精製し、４画分を得た（Ｆｒ．８−５−１〜４）。Ｆｒ．８−５−２（３．７ｍｇ，１６〜１８分）は純粋であったため、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂ（化合物（３）に相当）と名づけた。Ｆｒ．８−５−３（０．４ｍｇ，１８〜１９分）もまた純粋であったのでＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃ（化合物（４）に相当）と名づけた。またＦｒ．８−６（１０．６ｍｇ，１３．５〜１６．５分）も精製不十分であったので高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール，流速４ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］によって精製し、４画分を得た（Ｆｒ．８−６−１〜４）。Ｆｒ．８−６−２（１．２ ｍｇ，１５〜１６分）は純粋なＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂ、Ｆｒ．８−６−３（９．０ ｍｇ，１６〜１９分）は純粋なＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃであった（図１）。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａの物理化学的諸性質
外観：淡茶色粉末、分子式：Ｃ２５Ｈ４２Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ ４２９．２９８６ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ （＋１．０ ｍＤａ）、［α］２５Ｄ：−２．９（ｃ０．１６）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ ２０３（ε１７００）、２３１（ε４３０）、２４３（ε３８０）、２５７（ε２５０）ｎｍ、ＩＲ：３３６３（ｂｒ）、３００５、１１１４、１０７１、１０３１、６８０ｃｍ−１。ＮＭＲデータ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝４：１。以下同じ）を表１に示す。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂの物理化学的諸性質
外観：白色粉末、分子式：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４４３．３１４２［Ｍ＋Ｎａ］＋（＋１．０ｍＤａ）、［α］２７Ｄ−３．０（ｃ０．２５）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ２０５（ε１３００）， ２３０（ε６２０）， ２４３（ε４８０）， ２５７（ε３００）ｎｍ、ＩＲ：３３５６（ｂｒ），３００５，１１１４，１０７１，１０３１ｃｍ−１。ＮＭＲデータを表１に示す。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃの物理化学的諸性質
外観：白色粉末、分子式：Ｃ３１Ｈ４８Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４８５．３６４３［Ｍ＋Ｈ］＋（＋１．７ｍＤａ），５０７．３４６１ ［Ｍ＋Ｎａ］＋（＋１．６ｍＤａ）、［α］２６Ｄ：−３．６（ｃ０．１３）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ２２２（ε８６００）ｎｍ、ＩＲ：３３６０（ｂｒ），３３１３，１１１４，１０７１，１０３２，６８０ｃｍ−１。ＮＭＲデータを表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】
〔試験２：ＮＧＦ関連活性物質の活性評価〕
ラット副腎髄質褐色細胞腫由来ＰＣ１２細胞は、理研セルバンクから入手した。
【００３０】
凍結保存細胞（２ｘ１０4細胞）を培地（ＭＥＭＥ−１０％牛胎児血清−５％馬血清）で洗浄し、培地１０ｍＬとともに９ｃｍシャーレに撒き、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃、１週間静置培養した。細胞を収穫し新しい培地で２ｘ１０5細胞／シャーレになるように希釈して１週間培養する継代培養操作を４回以上繰返した後、収穫した細胞を試験に用いた（継代操作は１２回まで）。以下、培養とは５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で行うものとする。
【００３１】
２４穴マイクロプレートの各ウエルに、２ｘ１０4細胞のＰＣ１２細胞を含む培地１ｍＬを入れ、ＣＯ２インキュベータ中、３７℃で２４時間静置培養した。培地を、適当な濃度のサンプルを含む無血清ＭＥＭＥ培地１ｍＬ（１％ＤＭＳＯ含有）に交換し、２４時間ごとに１週間、細胞の様子を観察した。計約１００細胞が観察できる視野３つを無作為に選択し、突起長が細胞の長径より長い細胞数を計測して、その割合をパーセントに換算して、神経突起伸張率（％）とした。各濃度について３回ずつ測定した。結果を表２、図２（経時変化）及び図３（６日後の神経突起伸張率）に示す。何も加えない（０μＭ）場合には神経突起伸張率は０であり、ＮＧＦを４０ｎｇ／ｍＬ添加した場合には６日後に７４．３％であった。
【００３２】
【表２】
【００３３】
表２、図２及び３から明らかなように、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜Ｃすべてにおいて神経突起伸張活性が存在することが分かった。その中でもＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ及びＰｅｔｒｏｓｉｏｌ ＢがＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃよりも神経突起伸張率が高いことが分かった。Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ ＡとＢとではＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａの方が僅かに高い神経突起伸張率を示した。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体はＮＧＦ関連活性などの発現が期待できる。ＮＧＦ関連活性を有する物質は薬理作用として痴呆治療、学習能力向上などに有効な作用を発揮することが期待され、薬剤としての応用が期待できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）などから単離可能な新規アセチレンアルコール誘導体、ＮＧＦ関連活性物質及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
琉球列島は、世界で最も生物多様性の高い熱帯海洋生物地理区であるインド−西太平洋域に属しており、サンゴ礁を形成するサンゴをはじめ多様な海洋生物が棲息している。例えば沖縄本島に投置されている構造物のポール一本から海綿だけでも４０種類以上が採取された例がある。このことは琉球列島が非常に多様性に富んだ海域であることの裏付けになるものである。こうした海の恵みを生かす研究が盛んに行われている。
【０００３】
例えば、沖縄産のオニヒトデから抽出されたＮＧＦ活性をもつステロイド配糖体が報告されている（特許文献１）。
【０００４】
以上のように、沖縄の海洋生物には有用な作用をもつものが多くあることが予測される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００６／０９０９１０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Aoki, S.; Matsui, K.; Tanaka, K.; Satari, R.; Kobayashi, M., Lembehyne A, a novel neuritogenic polyacetylene, from a marine sponge of Haliclona Sp. Tetrahedron (2000), 56(51), 9945-9948.
【非特許文献２】Aoki, S.; Matsui, K.; Wei, H.; Murakami, N.; Kobayashi, M., Structure-activity relationship of neuritogenic spongean acetylene alcohols, lembehynes. Tetrahedron (2002), 58(27), 5417-5422.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明者らは沖縄の海洋生物数百検体についてＮＧＦ活性の有無を精査した。その結果、高い活性をもつ化合物を発見したので、ここに報告する。
【０００８】
すなわち、本発明は、沖縄の海洋生物についての研究を通じて明らかになった新規アセチレンアルコール誘導体及び新規ＮＧＦ関連活性物質並びにその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
海綿からはいくつかの神経栄養因子（ＮＧＦ関連活性物質）が抽出されている（非特許文献１、２）。本発明者らはそれらに報告のない新規アセチレンアルコール誘導体を見いだしたと共に、それら新規アセチレンアルコール誘導体がＮＧＦ様神経突起伸長活性を示すことを発見した。更に、ＮＧＦに対してその作用を増強する場合（以下、「ＮＧＦ増強活性」と称する）もあることを発見した（本明細書において、ＮＧＦ様神経突起伸長活性とＮＧＦ増強活性とを併せて「ＮＧＦ関連活性」と称し、ＮＧＦ関連活性をもつ化合物を併せて「ＮＧＦ関連活性物質」と称する）。そしてこれらの知見に基づき以下の発明を完成した。
【００１０】
請求項１に係るアセチレンアルコール誘導体は、下記一般式（１）で表されるものである。
【００１１】
【化１】
【００１２】
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２は炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
請求項２に係るアセチレンアルコール誘導体は、請求項１において、前記一般式（１）中のＸがＯＨ基であり、Ｒ１がＨ、ｎが３、Ｒ２が下記（Ａ）〜（Ｃ）の置換基のうちの何れか１つ（式中の＊の部分にて炭素原子に結合する）であるものである。
【００１３】
【化２】
【００１４】
請求項３に係るＮＧＦ関連活性物質は、請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を含むことを特徴とする。
【００１５】
請求項４に係るＮＧＦ関連活性物質は、請求項３において、尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液であることを特徴とする。
【００１６】
請求項５に係るアセチレンアルコール誘導体の製造方法の特徴は、請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ、以下「沖縄産海綿Ａ」と称する）から抽出分離する工程を有することにある。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＮＧＦ関連活性物質は高い活性を有する従来にない化合物である。そして、化学構造が比較的単純なため、容易な全合成が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】沖縄産海綿Ａから得られた抽出液を分画する方法を示したフローチャートである。
【図２】実施例で行ったＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜ＣのＮＧＦ関連活性率の経日変化を示すグラフである。
【図３】実施例で行ったＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜ＣのＮＧＦ関連活性率の６日後を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（新規アセチレンアルコール誘導体）
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体は上記一般式（１）にて表される化合物である。式（１）中におけるＸはＯＨ又はＯＭｅ、特にＯＨであることが望ましい。
【００２０】
Ｒ１はＨ又はＭｅ、特にＨであることが望ましい。ｎは下限として１、２、３が例示でき、上限として１０、８、６、４、３が例示でき、これら下限と上限とは任意に組み合わせることができる。特に１〜４程度が望ましく、１〜３がより望ましく、２又は３が更に望ましい。
【００２１】
Ｒ２の炭素数は５〜２５であることが望ましく、１０〜２０であることが更に望ましい。Ｒ２は飽和炭化水素基であっても不飽和炭化水素基であってもよい。不飽和炭化水素基である場合には４位に二重結合をもつものが挙げられる。また、三重結合をもつこともできる。三重結合は末端にもつことができる。更に、Ｒ２は直鎖状の炭化水素基であっても分枝した炭化水素基であっても良い。Ｒ２としては上述したの置換基［（Ａ）：４−ヘプタデカニル基、（Ｂ）：１６−メチル−４−ヘプタデカニル基、（Ｃ）：４，２０−トリコサジエン−２２−イニル基］が挙げられる。特に（Ａ）又は（Ｂ）の置換基が望ましく、（Ａ）の置換が更に望ましい。
【００２２】
特に望ましいアセチレンアルコール誘導体を以下に示す（化合物（２）〜（４））。これら化合物はＸがＯＨ、Ｒ１がＨ、ｎが３である。Ｒ２については化合物（２）が置換基（Ａ）に、化合物（３）が置換基（Ｂ）に、化合物（４）が置換基（Ｃ）に対応している。
【００２３】
【化３】
【００２４】
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体を得る方法としては特に限定されず、公知の方法を組み合わせて合成する方法が採用できる。また、海洋生物から抽出する方法も採用できる。海洋生物としては海綿が例示できる。海綿としては、分類学上、尋常海綿綱に含まれるものが例示できる。特に沖縄の海洋にて産する海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から大量に抽出することが可能である。沖縄産海綿Ａは石垣島周辺海域に非常に多く生息しており、オーバーハング裏面など少し暗い環境を好む種である。生息量も非常に多く、抽出の為に量が必要になった場合にも容易に確保できる。
【００２５】
海洋生物からの抽出方法としては特に限定されない。海洋生物を粉砕したりすりつぶしたりした後、有機溶媒、水などに浸漬し、抽出を行うことができる。抽出液はろ過などを行って夾雑物を除くことが望ましい。その後、適正な担体及び溶媒を用いて分画を行うことができる。海洋生物はそのまま、凍結状態、乾燥状態などどのような状態で抽出操作に供しても良い。
（ＮＧＦ関連活性物質）
本発明のＮＧＦ関連活性物質としては前欄にて説明した一般式（１）で表される新規アセチレンアルコール誘導体から任意に選択できる。特に式（２）〜（４）の化合物の何れかであることが望ましい。特に、一般式（２）の化合物が望ましい。
【００２６】
更に、尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液を混合物である場合も含め、そのまま採用することもできる。例えば、式（２）〜（４）の化合物は海洋生物中から抽出することができる。海洋生物からの抽出方法としては新規アセチレンアルコール誘導体と同様の方法（抽出、分画などを組み合わせた分離方法）が採用できるため、更なる説明は省略する。抽出液がＮＧＦ関連活性物質であるか否かの判断は得られた分離物中のＮＧＦ関連活性の強度及び毒性の強度を判定することで行うことができる。ＮＧＦ関連活性の測定は、ＰＣ１２細胞など一般的な細胞を用いた試験系を用い、神経突起伸長を誘導するかどうかで判断する。単独で神経突起伸長を誘導する場合にはＮＧＦ様神経突起伸長活性を示す分画であり、ＮＧＦの活性を増強する場合にはＮＧＦ増強活性を示す分画である。ＰＣ１２細胞が損傷を受ける場合には毒性があるものと判断できる。
【実施例】
【００２７】
〔試験１：沖縄産海綿ＡからＮＧＦ関連活性物質を分離する方法〕
（抽出）
湿質量３８０ｇの沖縄産海綿Ａ（Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から抽出した酢酸エチル層エキス１．６ ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［Ｈｉ−ＦｌａｓｈＴＭ ２Ｌ （４５ｇ），クロロホルム：メタノール＝１００：０〜９０：１０（４０分間， ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ）， 流速１０ｍＬ／分］によって１０画分に分離した（Ｆｒ．１〜１０）。次にＦｒ．８（６２．２ ｍｇ，３５〜４０分）を高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール， 流速５ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］によって７画分に分離した （Ｆｒ．８−１〜７）。Ｆｒ．８−３（５．０ ｍｇ， １１〜１２分）は純粋であったため、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ（化合物（２）に相当）と名づけた。Ｆｒ．８−５（４．３ｍｇ，１３〜１３．５分）は精製不十分であったためさらに高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール，流速４ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］で精製し、４画分を得た（Ｆｒ．８−５−１〜４）。Ｆｒ．８−５−２（３．７ｍｇ，１６〜１８分）は純粋であったため、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂ（化合物（３）に相当）と名づけた。Ｆｒ．８−５−３（０．４ｍｇ，１８〜１９分）もまた純粋であったのでＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃ（化合物（４）に相当）と名づけた。またＦｒ．８−６（１０．６ｍｇ，１３．５〜１６．５分）も精製不十分であったので高速液体クロマトグラフィー ［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＵＧ−５ （１０×２５０ｍｍ），９０％メタノール，流速４ｍＬ／分，検出ＵＶ波長２４５ｎｍ］によって精製し、４画分を得た（Ｆｒ．８−６−１〜４）。Ｆｒ．８−６−２（１．２ ｍｇ，１５〜１６分）は純粋なＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂ、Ｆｒ．８−６−３（９．０ ｍｇ，１６〜１９分）は純粋なＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃであった（図１）。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａの物理化学的諸性質
外観：淡茶色粉末、分子式：Ｃ２５Ｈ４２Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ ４２９．２９８６ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ （＋１．０ ｍＤａ）、［α］２５Ｄ：−２．９（ｃ０．１６）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ ２０３（ε１７００）、２３１（ε４３０）、２４３（ε３８０）、２５７（ε２５０）ｎｍ、ＩＲ：３３６３（ｂｒ）、３００５、１１１４、１０７１、１０３１、６８０ｃｍ−１。ＮＭＲデータ（ＣＤＣｌ３：ＣＤ３ＯＤ＝４：１。以下同じ）を表１に示す。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｂの物理化学的諸性質
外観：白色粉末、分子式：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４４３．３１４２［Ｍ＋Ｎａ］＋（＋１．０ｍＤａ）、［α］２７Ｄ−３．０（ｃ０．２５）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ２０５（ε１３００）， ２３０（ε６２０）， ２４３（ε４８０）， ２５７（ε３００）ｎｍ、ＩＲ：３３５６（ｂｒ），３００５，１１１４，１０７１，１０３１ｃｍ−１。ＮＭＲデータを表１に示す。
・Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃの物理化学的諸性質
外観：白色粉末、分子式：Ｃ３１Ｈ４８Ｏ４、ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４８５．３６４３［Ｍ＋Ｈ］＋（＋１．７ｍＤａ），５０７．３４６１ ［Ｍ＋Ｎａ］＋（＋１．６ｍＤａ）、［α］２６Ｄ：−３．６（ｃ０．１３）、ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ２２２（ε８６００）ｎｍ、ＩＲ：３３６０（ｂｒ），３３１３，１１１４，１０７１，１０３２，６８０ｃｍ−１。ＮＭＲデータを表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】
〔試験２：ＮＧＦ関連活性物質の活性評価〕
ラット副腎髄質褐色細胞腫由来ＰＣ１２細胞は、理研セルバンクから入手した。
【００３０】
凍結保存細胞（２ｘ１０4細胞）を培地（ＭＥＭＥ−１０％牛胎児血清−５％馬血清）で洗浄し、培地１０ｍＬとともに９ｃｍシャーレに撒き、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃、１週間静置培養した。細胞を収穫し新しい培地で２ｘ１０5細胞／シャーレになるように希釈して１週間培養する継代培養操作を４回以上繰返した後、収穫した細胞を試験に用いた（継代操作は１２回まで）。以下、培養とは５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で行うものとする。
【００３１】
２４穴マイクロプレートの各ウエルに、２ｘ１０4細胞のＰＣ１２細胞を含む培地１ｍＬを入れ、ＣＯ２インキュベータ中、３７℃で２４時間静置培養した。培地を、適当な濃度のサンプルを含む無血清ＭＥＭＥ培地１ｍＬ（１％ＤＭＳＯ含有）に交換し、２４時間ごとに１週間、細胞の様子を観察した。計約１００細胞が観察できる視野３つを無作為に選択し、突起長が細胞の長径より長い細胞数を計測して、その割合をパーセントに換算して、神経突起伸張率（％）とした。各濃度について３回ずつ測定した。結果を表２、図２（経時変化）及び図３（６日後の神経突起伸張率）に示す。何も加えない（０μＭ）場合には神経突起伸張率は０であり、ＮＧＦを４０ｎｇ／ｍＬ添加した場合には６日後に７４．３％であった。
【００３２】
【表２】
【００３３】
表２、図２及び３から明らかなように、Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ〜Ｃすべてにおいて神経突起伸張活性が存在することが分かった。その中でもＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａ及びＰｅｔｒｏｓｉｏｌ ＢがＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ｃよりも神経突起伸張率が高いことが分かった。Ｐｅｔｒｏｓｉｏｌ ＡとＢとではＰｅｔｒｏｓｉｏｌ Ａの方が僅かに高い神経突起伸張率を示した。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明の新規アセチレンアルコール誘導体はＮＧＦ関連活性などの発現が期待できる。ＮＧＦ関連活性を有する物質は薬理作用として痴呆治療、学習能力向上などに有効な作用を発揮することが期待され、薬剤としての応用が期待できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるアセチレンアルコール誘導体。
【化１】
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２はは炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
【請求項２】
前記一般式（１）中のＸがＯＨ基であり、Ｒ１がＨ、ｎが３、Ｒ２が下記（Ａ）〜（Ｃ）の置換基のうちの何れか１つ（式中の＊の部分にて炭素原子に結合する）である請求項１に記載のアセチレンアルコール誘導体。
【化２】
【請求項３】
請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を含むことを特徴とするＮＧＦ関連活性物質。
【請求項４】
尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液である請求項３に記載のＮＧＦ関連活性物質。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から抽出分離する工程を有することを特徴とするアセチレンアルコール誘導体の製造方法。
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるアセチレンアルコール誘導体。
【化１】
（式（１）中、ＸはＯＨ、ＯＲ３、Ｈ、Ｒ３から選択される（Ｒ３は炭素数１〜５の炭化水素基から選択される）。；Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の炭化水素基から選択される。；Ｒ２はは炭素数５〜３０の炭化水素基から選択される。；ｎは自然数）
【請求項２】
前記一般式（１）中のＸがＯＨ基であり、Ｒ１がＨ、ｎが３、Ｒ２が下記（Ａ）〜（Ｃ）の置換基のうちの何れか１つ（式中の＊の部分にて炭素原子に結合する）である請求項１に記載のアセチレンアルコール誘導体。
【化２】
【請求項３】
請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を含むことを特徴とするＮＧＦ関連活性物質。
【請求項４】
尋常海綿綱に属する海洋生物からの抽出液である請求項３に記載のＮＧＦ関連活性物質。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のアセチレンアルコール誘導体を海綿（学名：Ｐｅｔｒｏｓｉａ ｓｔｒｏｎｇｙｌａｔａ）から抽出分離する工程を有することを特徴とするアセチレンアルコール誘導体の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１０−１８０１５５（Ｐ２０１０−１８０１５５Ａ）
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２４６５１（Ｐ２００９−２４６５１）
【出願日】平成２１年２月５日（２００９．２．５）
【出願人】（５０４１３９６６２）国立大学法人名古屋大学 (996)
【出願人】（５０９０３６２７４）オーピーバイオファクトリー株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月５日（２００９．２．５）
【出願人】（５０４１３９６６２）国立大学法人名古屋大学 (996)
【出願人】（５０９０３６２７４）オーピーバイオファクトリー株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
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