新規スピロピペリジン化合物
下記の式の化合物：
またはその製薬的に許容し得る塩および医薬組成物、ならびに糖尿病を治療する方法。
またはその製薬的に許容し得る塩および医薬組成物、ならびに糖尿病を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規スピロピペリジン化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病を治療するための現在承認されている医薬の投与は、時々、低血糖症、肝臓障害、胃腸疾患、体重増加を含む望ましくない副作用、またはＰＰＡＲγ活性と関連し得る他の望ましくない作用と関連している。
【０００３】
ＧＰＲ４０は、主に齧歯動物の膵臓ベータ細胞、インスリノーマ細胞株、およびヒトの小島において高レベルで発現すると報告されているＧタンパク質共役受容体である。この受容体は培地および長鎖脂肪酸により活性化されるので、その受容体はＦＦＡＲ１（遊離脂肪酸受容体１）としても知られている。インスリン分泌のグルコース依存性は、ＧＰＲ４０を活性化する重要な特徴であり、この受容体は２型糖尿病（「Ｔ２Ｄ」）の治療における使用を有効に開発するための優れた標的となる。
【０００４】
最近公開された特許文献１（「’９０８」）は概して、炭化水素スピロ基特性を有する化合物を開示し、Ｇタンパク質共役受容体４０（「ＧＰＲ４０」）調節因子として活性を有すると記載している。’９０８開示の化合物は、スピロ特性においてヘテロ原子を含まない炭化水素スピロ基を必要とする化合物である。対照的に、多くの現在特許請求されているスピロピペリジン化合物は、検出可能なＰＰＡＲ活性を有さないＧＰＲ４０の所望の選択的活性化を提供している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願第２００９／０１７０９０８Ａ１号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の化合物はＧＰＲ４０の有効な活性化因子である。本発明は、市販の治療剤と比べて特有な薬理学的機構を介して作用する所望の新規治療オプションを提供し、さらに、ＰＰＡＲガンマと比べてＧＰＲ４０を選択的に活性化する化合物を提供する。選択的ＧＰＲ４０活性化因子としての、本発明の化合物の薬理学的プロファイルは、特にＴ２Ｄの治療の使用に好適であり得る。加えて、選択的ＧＰＲ４０調節は、ＰＰＡＲガンマ調節に関連する作用を回避することによってＴ２Ｄの治療に使用するための特に好適な安全性プロファイルを提供できる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は下記式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈまたは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
Ｘは、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、および−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−からなる群より選択され、
Ｒ７は、ＨおよびＣ１−３アルキルからなる群より選択され、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｒ３）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
Ｚ２は、−Ｓ−および−Ｏ−からなる群より選択され、
Ｚ３は、−Ｃ（Ｒ４）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
ここで、Ｚ１およびＺ３からなる群より選択される少なくとも１つは−Ｃ（Ｒ３）−または−Ｃ（Ｒ４）−である）
またはその製薬的に許容し得る塩に関する。
【０００８】
本発明のさらなる実施形態は、医薬の製造に使用するための本発明によって特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明の別の実施形態は、糖尿病の治療に使用するための医薬である。本発明のさらなる実施形態は、治療として使用するための本明細書に特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用である。本発明のさらなる実施形態は、糖尿病の治療に使用するための本発明によって特許請求される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩である。さらに、本発明は、医薬として使用するための本発明によって特許請求される化合物に関する。
【０００９】
本発明のさらなる実施形態は、哺乳動物において糖尿病を治療するための方法であって、本発明によって特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１０】
別の実施形態において、本発明はまた、本発明によって特許請求される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩と、製薬的に許容し得る担体とを含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態は、第２の薬剤をさらに含む本発明の医薬組成物である。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ＰＰＡＲガンマと比べてＧＰＲ４０を選択的に活性化する。例示した化合物のＰＰＡＲ活性についての相対的ＩＣ５０は概して１０μＭより高く、このような化合物がＰＰＡＲアイソフォームを活性化しないことを示唆する。
【００１２】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、式Ｉの化合物はキラル中心を有する。本発明は、ラセミ化合物および個々の異性体の両方を意図する。Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、Ｓ異性体が通常好ましい。
【００１３】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である式Ｉの化合物が好ましい。加えて、Ｒ５がＨであり、Ｒ１がＦである化合物が好ましい。Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、Ｒ１がＨである化合物が好ましい。Ｘが−ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ＝ＣＨ−から選択される化合物が好ましい。Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−である化合物が好ましい。Ｚ２が−Ｓ−である化合物が好ましい。Ｚ１が−Ｃ（Ｒ３）−である化合物が好ましい。Ｚ３が−Ｃ（Ｒ４）−である化合物が好ましい。Ｒ３がＨおよびＣＨ３から選択される化合物が好ましい。Ｒ４がＨである化合物が好ましい。Ｘが−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である化合物が好ましい。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−である）を提供する。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−Ｃ（Ｒ４）−である）を提供する。
【００１６】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−ＣＨ−である）を提供する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＦまたはＣｌであり、Ｒ５はＨであり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−である）を提供する。
【００１８】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＦであり、Ｒ５はＨであり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−Ｃ（Ｒ４）−である）を提供する。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ５がＨである場合、Ｒ１はＦまたはＣｌである）を提供する。
【００２０】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である）を提供する。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−であり、Ｚ１はＣ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−ＣＨ−である）を提供する。
【００２２】
本発明の別の好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３である）のＳ異性体である。
【００２３】
本発明の好ましい化合物は下記式の化合物：
【化２】
またはその製薬的に許容し得る塩である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の化合物は好ましくは種々の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。
【００２５】
「製薬的に許容し得る塩」とは、臨床および／または獣医用途に受容可能であるとみなされる本発明の化合物の塩を指す。製薬的に許容し得る塩およびそれらを調製するための一般的方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９９７年１月を参照のこと。
【００２６】
用語「製薬的に許容し得る担体」とは、担体、希釈剤、賦形剤、および塩が、組成物の他の成分と医薬的に適合可能であることを意味する。
【００２７】
本明細書で使用する略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義する：「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＡＤＤＰ」は１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンを指し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＴＲ」は保持時間を指し；「ＩＣ５０」は薬剤について可能な最大阻害反応の５０％を生じるその薬剤の濃度を指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し；「Ｆ１２」はハムＦ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指し；「ＨＥＫ」はヒト胎児腎臓を指し；「ＰＰＡＲ」はペルオキシソーム増殖剤応答性受容体を指し；「ＰＰＲＥ」はペルオキシソーム増殖剤応答性エレメントを指し；「ＲＰＭＩ」はＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを指し；「ＴＫ」はチミジンキナーゼを指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化を指す。
【００２８】
以下のスキームにおいて、他に示さない限り、全ての置換基は上記に定義した通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。他のものは、既知の構造的に同様の化合物の合成と同様である有機化学および複素環化学の標準的な技術、ならびにいずれかの新規手順を含む、以下のスキーム、調製例、および実施例に記載される手順によって作製され得る。
【００２９】
【化３】
式Ｉの化合物はスキームＩに示すような反応に従って調製できる。スキームＩ（工程１ａ）は、適切な置換ピペリジン（３）を用いる置換または非置換芳香族複素環ブロモメチル化合物（１）のアルキル化により、工程２におけるエステルの還元後、置換芳香族複素環メチルアルコール（５）を得ることを示す。次いで化合物（５）はさらにヒドロキシルでの光延反応を介して伸長またはアルキル化され、脱保護されて、式Ｉの化合物を得ることができる。ＰＧ’’はエステルなどの酸ならびにまたカルバミン酸塩およびアミドなどのアミノ基のために開発された保護基である。そのような保護基は周知であり、当該技術分野において理解されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，上記を参照のこと。
【００３０】
式（１）の化合物をアルキル化条件下で式（３）の化合物と反応させる（工程１ａ）。当業者は、複素環臭化物およびアミンの反応から得られるアミンアルキル化のための多くの方法および試薬が存在することを理解するだろう。例えば、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で、適切な式（１）の化合物と、式（３）のトリフルオロ酢酸塩またはＨＣｌ塩などの適切なアミンまたはアミン塩との反応により式（４）の化合物を得る。式４のエステルを、工程２において、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を用いてアルコールに還元させて、化合物（５）を得ることができる。次いで化合物（５）を光延条件下で式（７）の化合物でさらにアルキル化し、脱保護して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる（工程４ａ）。光延条件は当該技術分野において周知であり、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン、またはトリエチルホスフィンなどのホスフィンおよびＡＤＤＰなどのアゾジカルボニルまたはジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）などのアゾジカルボキシレートを用いる、アルコール（５）とフェノール（７）などの求核試薬との反応を含む。別法として、化合物（５）をメチルスルホニルなどの保護基で保護して、化合物（６、工程３）を得ることができる。次いで化合物６を、炭酸セシウムなどの塩基を用いて（７）と反応させ、続いて酸を脱保護して、式Ｉの化合物を得ることができる。別のバリエーションにおいて、式（１）の化合物を、工程１ｂに示すように、水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を用いてブロモメチル複素環メチルアルコール（２）に還元できるか、または化合物（２）は商業的に入手可能であり得、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で式（３、工程１ｃ）の適切なアミンまたはアミン塩でアルキル化して、化合物（５）を得て、次いで上記のように実施して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００３１】
任意選択の工程において、式（Ｉ）の化合物の製薬的に許容し得る塩は、標準的な条件下で適切な溶媒中での式（Ｉ）の適切な酸と、適切な製薬的に許容し得る塩基との反応により形成できる。加えて、このような塩の形成はエステルの加水分解と同時に起こり得る。このような塩の形成は周知であり、当該技術分野において理解されている。
【００３２】
【化４】
スキームＩＩ、工程１において、保護ピペリジン−４−カルボキシアルデヒド（８）を酸触媒環化において置換フェニルヒドラジン（９）と反応させて、置換スピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］（１０）を得て、それを次いでアルキル化して式（Ｉ）の化合物を得ることができる。例えば、フェニルヒドラジン（９）およびトリフルオロ酢酸などの適切な酸に、窒素保護−４−ホルミル−ピペリジン（８）を加える。適切な反応時間の後、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤およびメタノールなどのアルコールを加えて、所望の置換スピロ｛インドリン−３，４’−保護ピペリジン］（１０）を得る。工程２において、例えば酢酸などの適切な酸およびメタノールなどのアルコール中で適切なアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を用いる還元的アルキル化によって、（１０）のインドリン窒素をアルキル化できる。ピペリジン窒素上の保護基を、水素化または酸性条件などの当該技術分野において周知の標準的な条件下で除去して、化合物（１１）を得ることができる。次いで工程３において化合物（１１）を、上記のスキームＩ、工程１ａに記載したように（１）でアルキル化して、化合物（１２）を得ることができ、工程４において上記のスキームＩ（工程１ａおよび２）において記載したように還元して、化合物（５’）を得ることができる。化合物（５’）を、実質的に化合物（５）と同様にスキームＩについて記載したように実施して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００３３】
【化５】
スキームＩＩＩにおいて、置換複素環酸を、ＤＩＢＡＬ−Ｈなどの還元剤を用いて当該技術分野において周知の条件下で還元して、工程１において化合物（２）を得ることができる。工程２において、メチルアルコール、化合物（２）を、イミダゾールおよびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシランなどの塩基を用いてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシランなどの保護基で保護して、（１４）を得ることができる。化合物（１４）を、炭酸カリウムなどの塩基を用いて化合物（７）でアルキル化し、脱保護して、工程３において化合物（１５）を得ることができる。化合物（１５）のメチルアルコールを、デス・マーチン・ペルヨージナンなどの酸化剤でアルデヒドに変換して、工程４において化合物（１６）を得ることができるか、または三臭化リンなどの臭素化条件を用いて臭化物に変換して、化合物（１６）を得ることができる。次いで化合物（１６）を、シアノ水素化ホウ素ナトリウムとの還元的アルキル化などの当該技術分野において周知の条件下（スキームＩ）で化合物（３）でアルキル化し、続く脱保護により、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。別法として、臭化物を、炭酸セシウムまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を用いて化合物（３）でアルキル化し、脱保護して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【実施例】
【００３４】
調製例および実施例
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表す。本発明の化合物についての名称は一般にＩＵＰＡＣＮＡＭＥ（商標）、ＡＣＤＬＡＢＳ（商標）またはＳｙｍｙｘ Ｄｒａｗ３．２によって提供される。
【００３５】
調製例１
ベンジルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【化６】
トルエン／アセトニトリルの４９／１溶液（５０ｍＬ）中のフェニルヒドラジン（１．２９ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）の溶液を３５℃にて加熱する。４−ホルミル−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（２．７ｇ、１０．９１ｍｍｏｌ）をトルエン／アセトニトリルの４９／１溶液（１０ｍＬ）に溶解し、混合物に滴下して加える（国際公開第２００５０４６６８２号パンフレット）。混合物を３５℃にて一晩攪拌する。得られた溶液を０℃に冷却し、メタノール（５ｍＬ）を加える。ＮａＢＨ４（０．６１９ｇ、１６．３８ｍｍｏｌ）を溶液にゆっくりと加え、混合物を４５分間攪拌する。混合物をＮＨ４ＯＨ水溶液（６％、２５ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、黄色の固体を得る。粗固体をＥｔＯＡｃから再結晶して、淡黄色の固体（１．２５ｇ、第１の収集物）を得る。母液を蒸発させ、ヘキサン：酢酸エチル（８：２）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、全収率（２．４ｇ、８４％）で淡黄色の固体（１．２ｇ、第２の収集物）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３６】
調製例２
ベンジル１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
メタノール（６．０Ｌ）中のベンジル１，２−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３１５ｇ、９７７．５ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド（４０％水溶液、１３８ｍＬ、４．９ｍｏｌ）および酢酸（２７９ｍＬ、４．９ｍｏｌ）の０℃の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１８４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を２時間にわたって一部ずつ加える（いくらかの泡立ちが観察される）。反応混合物を室温まで加温し、６時間攪拌する。混合物のｐＨを１０％ＮａＨＣＯ３溶液で約８に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×５．０Ｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水（２×２．５Ｌ）およびブライン（２．５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、淡黄色の固体（３１０ｇ、９８．３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３７】
調製例３
１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］
メタノール（５０ｍＬ）中のベンジル１−メチルスピロ［インドリン（ｉｎｄｏｌｅｉｎｅ）−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（０．８５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１０％、０．１５ｇ）を加え、混合物を１６時間バルーンで水素化する。反応混合物を珪藻土で濾過し、メタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（０．５ｇ、９８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３８】
調製例４
（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸
【化７】
３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸鏡像異性体を、キラルクロマトグラフィー［カラムキラルパックＩＡ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）］、移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン、移動相（Ｂ）０．０１％ＴＦＡを含むイソプロピルアルコール；組成（８５：１５）、流速１．０ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ）により分離して、標題化合物（４．２ｇ、５０．５８％）を得る（保持時間７．９６）。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３（Ｍ＋Ｈ）＋。鏡像異性体の混合物もまた、国際公開第２００５０８６６６１号パンフレットに記載されているものと同様の方法を用いるキラル分割により分離して、標題化合物を得る。
【００３９】
調製例５
メチル５−（ブロモメチル）−４−メチル−チオフェン−２−カルボキシレート
【化８】
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のメチル４−メチルチオフェン−２−カルボキシレート（２．７ｇ、６．４ｍｍｏｌ）の溶液に、０〜５℃にて、４８％ＨＢｒ水溶液（１２ｍＬ）、Ｈ２ＳＯ４（６ｍＬ）、ＺｎＢｒ２（５．４ｇ）、およびＨＣＨＯ（２．２ｍＬ、３７％）を加える。混合物を室温にて１６時間攪拌する。溶液を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、ＮａＨＣＯ３溶液、飽和ブライン溶液、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、オフホワイトの固体（３．５ｇ、８１％）として標題化合物を得る。
【００４０】
調製例６
エチル２−（２−ヒドロキシプロピルアミノ）−２−オキソ−アセテート
【化９】
ＤＣＭ（１５０．０ｍＬ）中の１−アミノ−プロパン−２−オール（１５．０ｇ、１９９．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃にてトリエチルアミン（４３．３０ｍＬ、２９９．５６ｍｍｏｌ）を加える。クロロ−オキソ−酢酸エチルエステル（２２．３５ｍＬ、１９９．７ｍｍｏｌ）を０℃にて反応混合物に滴下して加え、反応混合物を室温にて１６時間攪拌する。混合物を０℃にて水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗生成物を、ヘキサン：酢酸エチル（３．０：７．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色のゲル（１０．７ｇ、３１．０％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４１】
調製例７
エチル２−（アセトニルアミノ）−２−オキソ−アセテート
【化１０】
ＤＣＭ（１００．０ｍＬ）中のエチル２−（２−ヒドロキシプロピルアミノ）−２−オキソ−アセテート（１０．７ｇ、６１．０７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃にてデス・マーチン・ペルヨージナン（２５．９ｇ、６１．０７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、０℃にて水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（２×５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（１：１）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油（９．２ｇ、８７．０３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４２】
調製例８
エチル５−メチルオキサゾール−２−カルボキシレート
【化１１】
トルエン（１００．０ｍＬ）中のエチル２−（アセトニルアミノ）−２−オキソ−アセテート（９．２ｇ、５３．１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＰＯＣｌ３（４．９５ｍＬ、５３．１２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１６時間還流する。反応混合物を冷却し、少しずつ水（１００．０ｍＬ）に加え、激しく攪拌する。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（８．０：２．０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の油として標題化合物（５．１ｇ、６１．９％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １５６．２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４３】
調製例９
エチル５−（ブロモメチル）オキサゾール−２−カルボキシレート
四塩化炭素（５０．０ｍＬ）中のエチル５−メチルオキサゾール−２−カルボキシレート（５．１ｇ、３２．８７ｍｍｏｌ）およびＮＢＳ（８．１９ｇ、４６．０２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、過酸化ベンゾイル（０．７９ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１６時間還流する。混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過する。濾液を真空中で濃縮し、粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．２：０．８）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡褐色の油として（４．８ｇ、６２．３３％）の標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ （７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２３４．１／２３６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４４】
調製例１０
メチル３−メトキシチオフェン−２−カルボキシレート
アセトン（５０ｍＬ）中の３−ヒドロキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２２．２ｇ、１６１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＣＨ３Ｉ（１０．８ｍＬ、１７３ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下して加える。反応混合物を５５℃にて４時間加熱し、室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、濾液を真空下で濃縮する。残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させて、茶色の固体として標題化合物（５．９ｇ）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７３．１／２３６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
調製例１１
メチル５−（ブロモメチル）−３−メトキシ−チオフェン−２−カルボキシレート
無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の３−メトキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５ｇ、２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢｒ水溶液（２２ｍＬ、３７％）、９８％Ｈ２ＳＯ４（１１ｍＬ）、ＺｎＢｒ２（８．５ｇ）およびホルムアルデヒド水溶液（３７％、３．８ｍＬ）を０℃にて連続して加える。反応混合物を室温にて１４時間攪拌する。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．５：０．５）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（４．４ｇ、６０％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２６７．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４６】
調製例１２
（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イル）−メタノール
無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．４ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にて水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中に１Ｍ、２１．０ｍＬ、２１．１ｍｍｏｌ）を滴下して加える。添加の完了後、混合物を室温まで加温し、２時間攪拌する。反応混合物を−４０℃にて水（１５ｍＬ）でクエンチし、混合物を室温にて３０分間攪拌する。反応混合物を珪藻土で濾過する。濾液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、淡黄色の液体として標題化合物（１．２ｇ、９６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６ ＤＭＳＯ）７．４６（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ）。
【００４７】
調製例１３
［５−（ブロモメチル）−３−メトキシ−２−チエニル］メトキシ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン
【化１２】
無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イル）−メタノール（０．６ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてイミダゾール（０．５１６ｇ、７．５９ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．４１２ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、１時間攪拌する。反応混合物を水でクエンチし、濃縮する。残渣をＤＣＭに溶解し、水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（０．９ｇ）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ （７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３５１／３５３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
調製例１４
エチル３−［４−［［５−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル）オキシメチル］−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］−２−フルオロ−フェニル］プロパノエート
【化１３】
アセトニトリル（１５ｍＬ）中の３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−プロピオン酸エチルエステル（１．０３ｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温にて炭酸カリウム（２．３１ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）および（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イルメトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン（１．７ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間還流する。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．６：０．４）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．５ｇ、２１％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）δ７．５１（ｓ，１Ｈ），７．２６−７．２（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．８９（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．８３−６．８１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），４．９２（ｓ，２Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．１０−４．０５（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．８６−２．８２（ｔ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ），２．６１−２．５５（ｍ，２Ｈ），１．２１−１．１７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．１３（ｓ，６Ｈ）。
【００４９】
調製例１５
エチル３−［２−フルオロ−４−［［５−（ヒドロキシメチル）−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３−｛４−［５−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４−メトキシ−チオフェン−２−イルメトキシ］−２−フルオロ−フェニル｝−プロピオン酸エチルエステル（０．５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を０℃にて加え、反応混合物を２５℃にて３０分間攪拌する。反応混合物を水でクエンチし、残渣まで濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで抽出し、水（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（０．４ｇ）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ７．４１（ｓ，１Ｈ），７．１９−７．１５（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．７５（ｍ，２Ｈ），５．３２（ｂｒ，１Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），４．０４−４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，１Ｈ）３．１６−３．１２（ｔ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，３Ｈ），２．７９−２．７６（ｔ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５５−２．５１（ｔ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２８−１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５０】
調製例１６
エチル３−［２−フルオロ−４−［（５−ホルミル−４−メトキシ−２−チエニル）メトキシ］フェニル］プロパノエート
【化１４】
０℃に冷却した、無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のエチル３−［２−フルオロ−４−［［５−（ヒドロキシメチル）−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート（１．６ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、デス・マーチン・ペルヨージナン（２．７６ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、２時間攪拌する。反応混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出し、水（１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（８．８：１．２）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．８ｇ、５０％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６７．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５１】
調製例１７
エチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート
方法Ａ
【化１５】
エタノール（２８ｍＬ）中のスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］（１．４ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の溶液に、室温にて、メチル５−（ブロモメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１．７８ｇ、７．６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（３．３１ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９０℃にて１６時間攪拌する。混合物を濃縮し、水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．５ｇ、５８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３４０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５２】
方法Ｂ
スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］塩酸塩（１２８．０ｇ、５６０ｍｍｏｌ）を３０℃にて窒素雰囲気下でエタノール（１．５Ｌ）に溶解する。ジイソプロピルエチルアミン（４０７．４ｍＬ、１．６８ｍｏｌ）を３０℃にて１０分にわたって滴下して加え、２０分間攪拌する。メチル５−（ブロモメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（ＬＣＭＳにより約５０％純粋）（３００ｇ、１．２７ｍｏｌ）を３０℃にて加え、３０℃にて１０分間攪拌し、混合物を１時間４５分、６０℃で加熱する。出発物質の存在を示したＴＬＣにより、反応をモニターする。反応物を３０℃にて１３時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（１０Ｌ）に溶解する。ＨＣｌ（１Ｎ、１．５Ｌ）を絶えず攪拌しながら滴下して加え、白色の固体沈殿物を収集する。物質をＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、１０分間攪拌し、濾過し、真空下（４４℃）で乾燥させて、標題化合物（１５０．０ｇ、７６％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３４０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５３】
以下の化合物を調製例１７の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００５４】
【表１−１】
【表１−２】
ａ．粗生成物
ｂ．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．５３（ｓ，０．５Ｈ），７．２１−７．１２（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，１．５Ｈ），３．６５（ｓ，１Ｈ），２．８４−２．８２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．２６−２．２１（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），２．１６（ｓ，１．５Ｈ），１．９６−１．９２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），１．７９（ｓ，１Ｈ），１．４５−１．４２（ｍ，１Ｈ）。
【００５５】
調製例２８
［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール
方法Ａ
【化１６】
ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のエチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１．５ｇ、４．４ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてＤＩＢＡＬ−Ｈ（１１ｍＬ、１１．０６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて１時間加温し、その後、０℃にて水を滴下して加える。混合物を珪藻土で濾過し、ジクロロメタンで抽出し、乾燥するまで濃縮して、標題化合物（１．０５ｇ、７６％）を得る。ＥＳＩ／ＣＭＳ ｍ／ｚ ３１２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５６】
方法Ｂ
メチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１５０．０ｇ、４４６．０ｍｍｏｌ）を、３０℃にて窒素雰囲気下で無水ジクロロメタン（３Ｌ）に溶解する。混合物を−７８℃に冷却し、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（トルエン中の１．０Ｍ溶液）（１．２Ｌ、９６０ｍｍｏｌ）を、絶えず攪拌しながら１時間にわたって窒素雰囲気下、−７８℃にて滴下して加える。反応混合物を０℃まで徐々に加温し、０℃にて３時間、３０℃にて３時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、飽和ＮＨ４ＯＨ水溶液（１Ｌ）を滴下して加え、続いて、ＤＣＭ（５．０Ｌ）を滴下して加える。混合物を室温まで加温し、ＤＣＭで抽出し、水（２Ｌ）および飽和ブライン（２Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発する。ジエチルエーテル（５００ｍＬ）を残渣に加え、混合物を３０分間攪拌する。形成する沈殿物を濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発させ、固体と合わせて、白色の固体として標題化合物（８８．０ｇ、６４％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３１２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５７】
以下の化合物を調製例２８の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００５８】
【表２−１】
【表２−２】
【００５９】
調製例３９
４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール−２−カルバルデヒド
【化１７】
ＴＨＦ中の２−ブロモ−４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール（３．８ｇ、１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてｎ−ＢｕＬｉ（０．７１３ｇ、１１．１３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を−４５℃まで加温し、３０分間攪拌する。ＤＭＦ（１．５ｍＬ）を−７８℃にて混合物に滴下して加え、混合物を室温までゆっくり加温し、１時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、水、続いてＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈する。混合物を酢酸エチルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（２．８ｇ、８５％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
以下の化合物を調製例３９の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６１】
【表３】
【００６２】
調製例４１
５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン−‘イルメチル）−４−メチル−チアゾール−２−メタノール
【化１８】
ＤＣＭ（６ｍＬ）中の４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール−２−カルバルデヒド（０．６００ｇ、１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてＤＩＢＡＬ−Ｈ（ヘキサン中の１Ｍ溶液、０．５２ｇ、３．６ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温まで加温し、１時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、水でクエンチし、濾過し、ＤＣＭで抽出し、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（０．５００ｇ、８３％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６３】
以下の化合物を調製例４１の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６４】
【表４】
【００６５】
調製例４３
［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メチルメタンスルホネート
【化１９】
ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中の［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メタノール（０．１５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の０℃の攪拌溶液に、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．２６ｍｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（０．０５ｍＬ、０．６１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃にて１時間攪拌する。反応混合物を水（２０．０ｍＬ）およびブライン（１０．０ｍＬ）で洗浄し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、茶色の液体として粗生成物（０．１８ｇ）を得る。
【００６６】
以下の化合物を調製例４３の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６７】
【表５】
【００６８】
調製例４５
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート
方法Ａ
【化２０】
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジン（１．３０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてトリブチルホスフィン（１．２１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加える。０℃にて１５分後、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール（０．８ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を０℃にて１５分間攪拌し、続いてＴＨＦ（５ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（１．０７ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて１６時間攪拌し、濾過し、水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物を、ヘキサン：酢酸エチル（８．５：１．５）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．１ｇ、６１％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
方法Ｂ
エチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（３０．０ｇ、１２９．０ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下でＴＨＦ（６００ｍｌ）に溶解し、０℃まで冷却する。ＤＩＡＤ（３１．３ｇ、１５４．９ｍｏｌ）を０℃にてゆっくり加え、攪拌し、混合物を３０分間攪拌する。最小量のＴＨＦに溶解した、ＰＰｈ３（４０．６５ｇ、１５４．９ｍｍｏｌ）および（５−［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール（４８．２６ｇ、１５４．９ｍｍｏｌ）の溶液を０℃にて反応混合物に加え、その混合物を室温まで加温し、１２時間攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）に溶解し、水（２×１０容量）およびブライン（１０容量）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．０：１．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３３．０ｇ、４８．６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４４−７．４２（ｄ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２２−７．１２（ｍ，２Ｈ），７．０３−７．０２（ｄ，１Ｈ），６．９７−６．９２（ｍ，３Ｈ），６．８９−６．８８（ｄ，１Ｈ），６．７９−６７７（ｄ，１Ｈ），６．６９−６．６７（ｄ，１Ｈ），５．２１（ｓ，２Ｈ），４．０２−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），２．９４−２．９１（ｄ，２Ｈ），２．６８−２．６２（ｍ，３Ｈ），２．４１−２．３６（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１Ｈ），１．２７−１．１４（ｍ，４Ｈ），１．１３−１．１１（ｔ，３Ｈ）。
【００７０】
以下の化合物を調製例４５の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００７１】
【表６−１】
【表６−２】
【表６−３】
ａ．１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．１８−７．１４（ｍ，４Ｈ），７．１２−７．０８（ｍ，１Ｈ），６．９４−６．９３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７０−６．６６（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），４．１４−４．０９（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），２．９２−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．６０−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．０１−１．９０（ｍ，５Ｈ），１．２８−１．２３（ｍ，６Ｈ）。
ｂ．粗生成物
【００７２】
調製例６５
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート
【化２１】
アセトニトリル（１０．０ｍＬ）中の［５−（１Ｈ’−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−１，３−オキサゾール−２−イル］メチルメタンスルホネート（０．１８ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．３９ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（０．１３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を８０℃にて１時間攪拌し、珪藻土で濾過する。濾液を乾燥するまで蒸発させ、ヘキサン：酢酸エチル（６．０：４．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油（０．０７ｇ、２８．２％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５１１．５（Ｍ＋１）。
【００７３】
以下の化合物を調製例６５の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００７４】
【表７】
【００７５】
調製例６７
エチル３−［２−フルオロ−４−［［４−メトキシ−５−［（１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート
【化２２】
０℃にて、メタノール中のエチル３−［２−フルオロ−４−［（５−ホルミル−４−メトキシ−２−チエニル）メトキシ］フェニル］プロパノエート（０．４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン（０．２５８ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、およびＮａＣＮＢＨ３（０．２７３ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、１２時間攪拌する。混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機層を水（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を分取ＴＬＣにより精製して、無色の液体（０．２ｇ、３３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５５３．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７６】
以下の化合物を調製例６７の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００７７】
【表８】
【００７８】
実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イン酸
方法Ａ
【化２３】
エタノール（６ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（１．１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、５ＭのＮａＯＨ（０．８３ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、９０℃にて５分間、マイクロ波条件下で反応させる。混合物を濃縮し、水に溶解し、２ＮのＨＣｌで酸性化し、クロロホルム（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣO３（２×５ｍＬ）、ＮＨ４Ｃｌ（２×５ｍＬ）、水（２×５ｍＬ）および飽和ブライン（２×５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、オフホワイトの固体として標題化合物（０．７４６ｇ、７１％）を得る。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，４００ ＭＨｚ）δ１２．２（ｂｓ，１Ｈ），７．４３−７．４１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．２５（ｄｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），７．２１−７．１３（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．０２−７．０１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９６−６．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．９０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．８７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）６．７７−６．７６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）５．１９（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），２．９４−２．９０１（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５９−２．５７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４１−２．３６（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０８−２．０３（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｓ，２Ｈ），ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
方法Ｂ
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（３３．０ｇ、６２．７ｍｏｌ）をエタノール（６００ｍＬ）に溶解し、混合物を１０〜１５℃に冷却する。５ＭのＮａＯＨ（５．０２ｇ、１２５．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、混合物を１０分間攪拌し、その後、２時間８０℃で加熱する。溶媒を蒸発させ、混合物を最小量の水に溶解する。ｐＨを１ＮのＨＣｌ溶液で約７．０に調整する。溶液を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗物質に、メチルｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）および０．２％のメタノールを加え、混合物を３０分間攪拌する。得られた沈殿物を濾過し、４８℃にて真空下で乾燥させて、クリーム色の固体として標題化合物（２４．０ｇ、７６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２１７（ｓ，１Ｈ），７．４３８−７．４２１（ｄ，１Ｈ），７．３３０−７．２７１（ｍ，３Ｈ），７．２２８−７．１２６（ｍ，２Ｈ），７．０４６−７．０３９（ｄ，１Ｈ），６．９７８−６．９０６（ｍ，４Ｈ），６．７９５−６．７８１（ｄ，１Ｈ），５．２１３（ｓ，２Ｈ），３．９７２−３．９２８（ｍ，１Ｈ），３．７８８（ｂｓ，２Ｈ），２．９４５（ｍ，２Ｈ），２．６０８−２．５８９（ｄ，２Ｈ），２．４２２（ｍ，２Ｈ），２．１０７−２．０５１（ｍ，２Ｈ），１．７７８−１．７７２（ｓ，３Ｈ），１．２３３−１．１４８（ｍ，２Ｈ）。
【００８０】
以下の化合物を実施例１の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００８１】
【表９−１】
【表９−２】
【表９−３】
【表９−４】
【表９−５】
【００８２】
Ｔ２Ｄの原因は、２倍のインスリン抵抗性、および循環グルコースレベルを低下させるために適切な量のインスリンを生成する膵臓ベータ細胞の進行性破壊であると考えられている。正常なインスリンレベルが、骨格筋および脂肪組織を含む、標的組織内の循環血漿グルコースを処理できない場合、インスリン抵抗性が発達する。インスリン抵抗性に起因する過度に高いグルコースレベルを補償するために膵臓がさらにインスリンを生成するので、膵臓ベータ細胞は最終的に消耗し、分泌のためにさらにインスリンが利用できなくなる。時間が経つと、膵臓ベータ細胞は完全に機能しなくなり、Ｔ２Ｄを有するヒトは１型糖尿病を有するヒトと同様になる。高レベルの循環グルコースは糖尿病の特徴であり、心臓病および脳卒中、高血圧、失明、腎臓および神経障害、感染、ならびに歯周病などの重篤な合併症を最終的に導き得る。従って、運動；適切なダイエット；経口抗糖尿病治療；および最終的にインスリンにより、可能な限り早期にＴ２Ｄを抑制し、治療することが重要である。本発明によって特許請求される化合物は、さらなる薬理学的な治療選択を提供する。選択的にＧＰＲ４０を調節する化合物が特に好適であり得る。
【００８３】
ＧＰＲ４０：情報
最近、Ｎａｇａｓｕｍｉにより報告されているインスリンＩＩプロモーターの制御下でヒトＧＰＲ４０遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスを用いる研究の結果により、ＧＰＲ４０が、特にインスリン耐性の齧歯動物モデルにおいて、インビボでのＧＤＩＳおよび血漿グルコース濃度の調節において重要な役割を果たすことがさらに支持されている。Ｎａｇａｓｕｍｉ Ｋら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＰＲ４０ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ β−ｃｅｌｌｓ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５８：１０６７−１０７６，２００９。Ｂｒｉｓｃｏｅ ＣＰら，Ｔｈｅ ｏｒｐｈａｎ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＰＲ４０ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７８：１１３０３−１１３１１，２００３もまた参照のこと。これらの見解は、新規ＧＰＲ４０調節因子化合物の開発が特にＴ２Ｄの治療の使用に望まれ得ることをさらに支持している。
【００８４】
カルシウム流出一次アッセイ
本明細書に例示した化合物を以下に記載するように実質的に試験すると、カルシウム流出一次アッセイについて１μＭより低いＥＣ５０値示す。
【００８５】
このアッセイは、リガンドがＧＰＲ４０に結合し、活性化する場合に生じる細胞内カルシウム濃度の増加を測定することによって化合物をスクリーニングするために使用し、これにより、ＧＰＲ４０アゴニストの効果および有効性を実証する。３７℃および５％ＣＯ２にて１０％ＦＢＳおよび８００μｇ／ｍｌジェネティシンを添加した３：１の比のダルベッコ改変イーグル培地とＦ１２培地中に維持した、ＨＥＫ２９３細胞を過剰発現するヒトＧＰＲ４０ ｃＤＮＡをこの研究のために利用する。アゴニストアッセイを、アッセイバッファー（１×ＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩溶液）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）中の脂肪酸を含まないＢＳＡの存在（０．１％）または非存在下で、Ｃａｌｃｉｕｍ ４ Ｄｙｅアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて実施する。蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を用いて、受容体活性化を細胞内カルシウムの増加として測定する。ベースラインより上の蛍光の最大変化を用いて、アゴニスト反応を測定する。濃度対相対的蛍光単位（ＲＦＵ）をプロットすることによってエクセルフィットソフトウェア（バージョン４；ＩＤＢＳ）を用いて、化合物のＥＣ５０（最大反応の半分における有効濃度）値を計算する。天然のリガンドであるリノール酸と比較した化合物によって示される最大反応に基づいて有効性の割合を計算する。このアッセイにおいて試験した場合、実施例１の試験化合物は９１＋／−９％の有効性で１１４＋／−９３ｎＭのＥＣ５０を有する。これらの結果はさらに、ＧＰＲ４０アゴニストとしての所望の効果および有効性を実証する。
【００８６】
グルコース依存性インスリン分泌（ＧＤＩＳ）アッセイ
ＧＰＲ４０の活性化は高グルコース濃度に依存するインスリン分泌を生じることが知られているため、上記のＧＰＲ４０一次アッセイにおいて細胞内カルシウムを増加させることが知られている化合物をさらに特徴付けるために２つの別のアッセイ系（インスリノーマ細胞株および初代齧歯動物小島）を開発する。
【００８７】
マウスインスリノーマ細胞株Ｍｉｎ６を用いてＧＤＩＳアッセイを実施する。Ｍｉｎ６細胞を、３７℃および５％ＣＯ２にて非必須アミノ酸、１０％ＦＢＳ、５０ｍＭの２−メルカプトエタノールおよび１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に維持する。実験の日に、グルコースを含まない２００μｌの予熱したクレブスリンゲルバッファーで細胞を２回洗浄する。２．５ｍＭグルコースを含有する追加の２００μＬの予熱したクレブスリンゲルバッファーを使用して、細胞を飢餓し、その後、高濃度のグルコース（２５ｍＭ）の存在下で化合物を添加する。プレートを３７℃で２時間インキュベートする。２時間のインキュベーションの終わりに、上清をミリポアフィルタープレートに穏やかに移し、２００ｇ（重力）にて３分間回転させる。メルコディアインスリン測定キットを用いてインスリンをアッセイする。１μＭでの実施例１および２５ｍＭグルコースのＭｉｎ６細胞への添加により、２５ｍＭグルコース単独で達成されるものと比べてインスリン分泌の統計的に有意な２倍の増加が生じる。
【００８８】
初代齧歯動物膵臓ランゲルハンス島を用いるＧＤＩＳアッセイもまた、例示した化合物を特徴付けるために使用する。コラゲナーゼ消化およびＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ密度勾配分離によって膵島をオスのＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットから単離する。単離プロセスからの回収を容易にするために、ＧｌｕｔａＭＡＸｎ（安定化した、Ｌ−グルタミンのジペプチド形態（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号６１８７０−０１０））を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で小島を一晩培養する。４８ウェルプレート内のＥＢＳＳ（アール平衡塩溶液）バッファー中での９０分のインキュベーションによってインスリン分泌を測定する。手短に述べると、小島を最初に３０分間、２．８ｍＭグルコースを有するＥＢＳＳ中でプレインキュベートし、次いで、１５０μｌの２．８ｍＭグルコースを含有する４８ウェルプレート（４小島／ウェル）に移し、９０分間、試験化合物の存在下または非存在下で２．８または１１．２ｍＭのグルコースを含む１５０μｌのＥＢＳＳでインキュベートする。インキュベーションの終わりにウェルからバッファーを除去し、ラットインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いてインスリンレベルをアッセイする。このアッセイ系において、異なる濃度における実施例１の投与により、１１．２ｍＭグルコース単独で達成されるものと比べてインスリンの２〜４倍の増加が生じる。
【００８９】
選択性アッセイ：
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）α、δ、およびγ結合および機能アッセイ：
ＧＰＲ４０はＰＰＡＲγに対するリガンドにより活性化されることが知られているため、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ結合および機能アッセイにおいて例示した化合物を試験して、ＧＰＲ４０に対する例示した化合物の選択性を測定する。本明細書に例示した化合物を、ＰＰＡＲ結合について以下に記載するように実質的に試験すると、概して１０μＭ濃度の試験化合物で１０００ｎＭより高い結合値を有し、ＰＰＡＲ活性について陰性であるとみなされる。
【００９０】
シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）技術を用いて、ＰＰＡＲα、δ、およびγ受容体に対する化合物の結合親和性を評価する。受容体をケイ酸イットリウムストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズに結合させるために、ビオチン化オリゴヌクレオチドダイレクトリピート２（ＤＲ２）を使用する。ＰＰＡＲα、δ、γおよびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）αはＨＥＫ２９３細胞において過剰発現し、特異的受容体を含有する細胞溶解物を個々のアッセイにおいて用いる。１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．８、８０ｍＭのＫＣｌ、０．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％の３［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−プロパンスルホン酸（ＣＨＡＰＳ）、および４．４％のウシ血清を含有する結合バッファー中でＤＲ２を３０分にわたってＳＰＡビーズに結合させる。αおよびδ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３３．８μＣｉ３Ｈ）ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト基準化合物、およびγ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３７．３μＣｉ３Ｈ）ＰＰＡＲγアゴニスト基準化合物、１１０．３μｇのイットリウムＳＰＡストレプトアビジンコーティングビーズ、０．１２６ｎＭのＨＤオリゴＤＲ２、および上記の結合バッファー＋１４％グリセロール中の０．３μｇのＰＰＡＲαと０．５μｇのＲＸＲα、０．５μｇのＰＰＡＲδと０．５μｇのＲＸＲα、または１．２５μｇのＰＰＡＲγと３．０３μｇのＲＸＲαのいずれか、および５μｇの剪断したサケ精子ＤＮＡの存在下で１１の濃度の化合物のうちの１つを含む各ウェル中で細胞溶解物をインキュベートする。αおよびδ受容体アッセイについて、１０，０００ｎＭの非標識ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト基準化合物、およびγ受容体アッセイについてＰＰＡＲγアゴニスト基準化合物の存在下で非特異的結合を測定する。結合反応（９６ウェル［Ｃｏｓｔａｒ３６３２］プレート中に１００μｌ／ウェル）を１０時間インキュベートし、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａで壊変毎分（ｄｐｍ）をカウントする。４パラメーターロジスティック式を用いて１１点濃度反応曲線をフィッティングすることによって化合物に対する受容体結合親和性（ＩＣ５０）を測定する。チェン−プルソフ式を用いたＩＣ５０および飽和結合によって測定したＫｄからＫｉを測定する。実施例１の化合物に関して、１０μＭまでの濃度で３つのＰＰＡＲ結合アッセイのいずれも結合は検出されない。従って、本明細書に記載したアッセイは、実施例１の化合物が望ましくないＰＰＡＲ活性を回避しながら、ＧＰＲ４０を選択的に活性化することを支持する。例示した化合物の相対的ＩＣ５０は概してＰＰＡＲアイソフォームに関して１０μＭより高く、その化合物が望ましいＧＰＲ４０活性化をもたらしつつＰＰＡＲ活性を回避することを支持している。
【００９１】
Ｇａｌ４ ＰＰＡＲα、Ｇａｌ４ ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ受容体機能アッセイも使用して、例示した化合物の選択性をモニターする。アフリカミドリザルの腎組織由来のＣＶ１細胞をＦｕｇｅｎｅを用いて種々の受容体およびレポータープラスミドにトランスフェクトする。Ｇａｌ４ ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδアッセイについて、アデノウイルスの主要後期プロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流でクローニングした、酵母転写タンパク質Ｇａｌ４反応エレメントの５つのタンデムコピーを含有するレポータープラスミドを、Ｇａｌ４ ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）を含有するハイブリッドタンパク質を構成的に発現するシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）により駆動されるプラスミドと一緒にトランスフェクトし、ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲδのいずれかのリガンドが結合する。ＰＰＡＲγアッセイに関して、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって駆動されるＰＰＡＲγおよびＲＸＲαの両方をコードするプラスミドを、ＴＫプロモーターおよび受容体反応エレメント（２×ＰＰＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡを含有するプラスミドと一緒にトランスフェクトする。５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地入りのＴ２２５ｃｍ２細胞培養フラスコ中で細胞をトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地入りの不透明な９６ウェルディッシュに播種し（１５，０００細胞／ウェル）、４時間インキュベートし、半対数希釈率（ｈａｌｆ ｌｏｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）で０．１７ｎＭ〜１０μＭの試験化合物または基準化合物に曝露する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解し、発光によって受容体活性化の尺度としてルシフェラーゼ活性を測定する。データを４パラメーターフィットロジスティックモデルにフィッティングして、ＥＣ５０値を測定する。最大刺激の割合を１０μＭの適切なＰＰＡＲアゴニスト基準化合物で得た最大刺激に対して測定する。上記の特異的ＰＰＡＲ共トランスフェクション（ＣＴＦ）／機能アッセイにおいて１０μＭ以下で試験した場合、実施例１の化合物を用いてＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、またはＰＰＡＲγの機能的活性化は検出されない。従って、このアッセイは、望まれるように、例示した化合物がＰＰＡＲアゴニスト活性を回避することを支持している。
【００９２】
インビボでの効果：腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）
抗糖尿病効果、すなわちインスリンの増加およびグルコース濃度の低下を生じる、インビボでＧＰＲ４０を活性化する例示した化合物の能力を試験するために、４日間の腹腔内グルコース耐性試験（ｉｐＧＴＴ）研究を、ＩＰＧＴＴにおいて試験した各化合物を用いて行う。
【００９３】
オスのＢａｌｂ／ｃ（アルビノマウス）マウス（８〜９週齢）を単一に収容し、通常の齧歯動物の食餌および水を自由に与える。動物を秤量し、体重により無作為化し、毎日、体重を記録する。研究開始後、１日に１回、３日間、メチルセルロースおよびｔｗｅｅｎ−８０を有する製剤を用いて動物に経口投与する。４日のＩＰＧＴＴ研究の前の晩に、クリーンケージ中で動物を一晩絶食させる。ＩＰＧＴＴ（４日）の朝、ＩＰＧＴＴ（グルコース２ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の６０分前に、動物に化合物またはビヒクル単独を経口投与する。グルコースチャレンジ後、０、３、７、１５、３０、および６０分に得た尾部の血液から血中グルコース濃度を測定する。血漿を単離し、それぞれのインスリン濃度を測定するために使用する。ｔ＝０からｔ＝６０分までの血糖可動域プロファイルを使用して、各処置についての濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を積分する。グルコース低下の割合を、ビヒクル群のＡＵＣに対して化合物のＡＵＣデータから算出する。０．１、０．３、１．０、３．０、または１０ｍｇ／ｋｇにて試験化合物を経口投与し、陽性対照を１０ｍｇ／ｋｇにて投与する。実施例１の化合物のいずれの濃度または陽性対照は、ＧＴＴの間、３分の時点でグルコース濃度を顕著に低下させない。対照的に、７分の時点での０．３、１．０、３．０、および１０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物および陽性対照、ならびに１５、３０、および６０分の時点での０．１、０．３、１．０、および３．０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物でグルコース濃度は顕著に低下する。陽性対照は３０および６０分の時点でグルコース濃度を顕著に低下させる。グルコース低下についてＡＵＣに基づいた実施例１の化合物についてのＥＣ５０は０．２１ｍｇ／ｋｇである。この研究において、インスリン濃度は、ＧＰＲ４０の活性化と一致する３．０および１０．０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物で顕著に増加した。この研究の結果は、実施例１によるＧＰＲ４０の活性化がインビボでの抗糖尿病効果を導くことを実証している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規スピロピペリジン化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病を治療するための現在承認されている医薬の投与は、時々、低血糖症、肝臓障害、胃腸疾患、体重増加を含む望ましくない副作用、またはＰＰＡＲγ活性と関連し得る他の望ましくない作用と関連している。
【０００３】
ＧＰＲ４０は、主に齧歯動物の膵臓ベータ細胞、インスリノーマ細胞株、およびヒトの小島において高レベルで発現すると報告されているＧタンパク質共役受容体である。この受容体は培地および長鎖脂肪酸により活性化されるので、その受容体はＦＦＡＲ１（遊離脂肪酸受容体１）としても知られている。インスリン分泌のグルコース依存性は、ＧＰＲ４０を活性化する重要な特徴であり、この受容体は２型糖尿病（「Ｔ２Ｄ」）の治療における使用を有効に開発するための優れた標的となる。
【０００４】
最近公開された特許文献１（「’９０８」）は概して、炭化水素スピロ基特性を有する化合物を開示し、Ｇタンパク質共役受容体４０（「ＧＰＲ４０」）調節因子として活性を有すると記載している。’９０８開示の化合物は、スピロ特性においてヘテロ原子を含まない炭化水素スピロ基を必要とする化合物である。対照的に、多くの現在特許請求されているスピロピペリジン化合物は、検出可能なＰＰＡＲ活性を有さないＧＰＲ４０の所望の選択的活性化を提供している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願第２００９／０１７０９０８Ａ１号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の化合物はＧＰＲ４０の有効な活性化因子である。本発明は、市販の治療剤と比べて特有な薬理学的機構を介して作用する所望の新規治療オプションを提供し、さらに、ＰＰＡＲガンマと比べてＧＰＲ４０を選択的に活性化する化合物を提供する。選択的ＧＰＲ４０活性化因子としての、本発明の化合物の薬理学的プロファイルは、特にＴ２Ｄの治療の使用に好適であり得る。加えて、選択的ＧＰＲ４０調節は、ＰＰＡＲガンマ調節に関連する作用を回避することによってＴ２Ｄの治療に使用するための特に好適な安全性プロファイルを提供できる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は下記式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈまたは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
Ｘは、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、および−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−からなる群より選択され、
Ｒ７は、ＨおよびＣ１−３アルキルからなる群より選択され、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｒ３）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
Ｚ２は、−Ｓ−および−Ｏ−からなる群より選択され、
Ｚ３は、−Ｃ（Ｒ４）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
ここで、Ｚ１およびＺ３からなる群より選択される少なくとも１つは−Ｃ（Ｒ３）−または−Ｃ（Ｒ４）−である）
またはその製薬的に許容し得る塩に関する。
【０００８】
本発明のさらなる実施形態は、医薬の製造に使用するための本発明によって特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明の別の実施形態は、糖尿病の治療に使用するための医薬である。本発明のさらなる実施形態は、治療として使用するための本明細書に特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用である。本発明のさらなる実施形態は、糖尿病の治療に使用するための本発明によって特許請求される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩である。さらに、本発明は、医薬として使用するための本発明によって特許請求される化合物に関する。
【０００９】
本発明のさらなる実施形態は、哺乳動物において糖尿病を治療するための方法であって、本発明によって特許請求される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１０】
別の実施形態において、本発明はまた、本発明によって特許請求される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩と、製薬的に許容し得る担体とを含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態は、第２の薬剤をさらに含む本発明の医薬組成物である。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ＰＰＡＲガンマと比べてＧＰＲ４０を選択的に活性化する。例示した化合物のＰＰＡＲ活性についての相対的ＩＣ５０は概して１０μＭより高く、このような化合物がＰＰＡＲアイソフォームを活性化しないことを示唆する。
【００１２】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、式Ｉの化合物はキラル中心を有する。本発明は、ラセミ化合物および個々の異性体の両方を意図する。Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、Ｓ異性体が通常好ましい。
【００１３】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である式Ｉの化合物が好ましい。加えて、Ｒ５がＨであり、Ｒ１がＦである化合物が好ましい。Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である場合、Ｒ１がＨである化合物が好ましい。Ｘが−ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ＝ＣＨ−から選択される化合物が好ましい。Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−である化合物が好ましい。Ｚ２が−Ｓ−である化合物が好ましい。Ｚ１が−Ｃ（Ｒ３）−である化合物が好ましい。Ｚ３が−Ｃ（Ｒ４）−である化合物が好ましい。Ｒ３がＨおよびＣＨ３から選択される化合物が好ましい。Ｒ４がＨである化合物が好ましい。Ｘが−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である化合物が好ましい。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−である）を提供する。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−Ｃ（Ｒ４）−である）を提供する。
【００１６】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−ＣＨ−である）を提供する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＦまたはＣｌであり、Ｒ５はＨであり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−である）を提供する。
【００１８】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＦであり、Ｒ５はＨであり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｚ１は−Ｃ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−Ｃ（Ｒ４）−である）を提供する。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ５がＨである場合、Ｒ１はＦまたはＣｌである）を提供する。
【００２０】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である）を提供する。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、Ｚ２は−Ｓ−であり、Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−であり、Ｚ１はＣ（Ｒ３）−であり、Ｚ３は−ＣＨ−である）を提供する。
【００２２】
本発明の別の好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ５は−Ｃ≡ＣＣＨ３である）のＳ異性体である。
【００２３】
本発明の好ましい化合物は下記式の化合物：
【化２】
またはその製薬的に許容し得る塩である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の化合物は好ましくは種々の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。
【００２５】
「製薬的に許容し得る塩」とは、臨床および／または獣医用途に受容可能であるとみなされる本発明の化合物の塩を指す。製薬的に許容し得る塩およびそれらを調製するための一般的方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９９７年１月を参照のこと。
【００２６】
用語「製薬的に許容し得る担体」とは、担体、希釈剤、賦形剤、および塩が、組成物の他の成分と医薬的に適合可能であることを意味する。
【００２７】
本明細書で使用する略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義する：「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＡＤＤＰ」は１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンを指し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＴＲ」は保持時間を指し；「ＩＣ５０」は薬剤について可能な最大阻害反応の５０％を生じるその薬剤の濃度を指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し；「Ｆ１２」はハムＦ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指し；「ＨＥＫ」はヒト胎児腎臓を指し；「ＰＰＡＲ」はペルオキシソーム増殖剤応答性受容体を指し；「ＰＰＲＥ」はペルオキシソーム増殖剤応答性エレメントを指し；「ＲＰＭＩ」はＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを指し；「ＴＫ」はチミジンキナーゼを指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化を指す。
【００２８】
以下のスキームにおいて、他に示さない限り、全ての置換基は上記に定義した通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。他のものは、既知の構造的に同様の化合物の合成と同様である有機化学および複素環化学の標準的な技術、ならびにいずれかの新規手順を含む、以下のスキーム、調製例、および実施例に記載される手順によって作製され得る。
【００２９】
【化３】
式Ｉの化合物はスキームＩに示すような反応に従って調製できる。スキームＩ（工程１ａ）は、適切な置換ピペリジン（３）を用いる置換または非置換芳香族複素環ブロモメチル化合物（１）のアルキル化により、工程２におけるエステルの還元後、置換芳香族複素環メチルアルコール（５）を得ることを示す。次いで化合物（５）はさらにヒドロキシルでの光延反応を介して伸長またはアルキル化され、脱保護されて、式Ｉの化合物を得ることができる。ＰＧ’’はエステルなどの酸ならびにまたカルバミン酸塩およびアミドなどのアミノ基のために開発された保護基である。そのような保護基は周知であり、当該技術分野において理解されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，上記を参照のこと。
【００３０】
式（１）の化合物をアルキル化条件下で式（３）の化合物と反応させる（工程１ａ）。当業者は、複素環臭化物およびアミンの反応から得られるアミンアルキル化のための多くの方法および試薬が存在することを理解するだろう。例えば、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で、適切な式（１）の化合物と、式（３）のトリフルオロ酢酸塩またはＨＣｌ塩などの適切なアミンまたはアミン塩との反応により式（４）の化合物を得る。式４のエステルを、工程２において、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を用いてアルコールに還元させて、化合物（５）を得ることができる。次いで化合物（５）を光延条件下で式（７）の化合物でさらにアルキル化し、脱保護して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる（工程４ａ）。光延条件は当該技術分野において周知であり、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン、またはトリエチルホスフィンなどのホスフィンおよびＡＤＤＰなどのアゾジカルボニルまたはジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）などのアゾジカルボキシレートを用いる、アルコール（５）とフェノール（７）などの求核試薬との反応を含む。別法として、化合物（５）をメチルスルホニルなどの保護基で保護して、化合物（６、工程３）を得ることができる。次いで化合物６を、炭酸セシウムなどの塩基を用いて（７）と反応させ、続いて酸を脱保護して、式Ｉの化合物を得ることができる。別のバリエーションにおいて、式（１）の化合物を、工程１ｂに示すように、水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を用いてブロモメチル複素環メチルアルコール（２）に還元できるか、または化合物（２）は商業的に入手可能であり得、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で式（３、工程１ｃ）の適切なアミンまたはアミン塩でアルキル化して、化合物（５）を得て、次いで上記のように実施して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００３１】
任意選択の工程において、式（Ｉ）の化合物の製薬的に許容し得る塩は、標準的な条件下で適切な溶媒中での式（Ｉ）の適切な酸と、適切な製薬的に許容し得る塩基との反応により形成できる。加えて、このような塩の形成はエステルの加水分解と同時に起こり得る。このような塩の形成は周知であり、当該技術分野において理解されている。
【００３２】
【化４】
スキームＩＩ、工程１において、保護ピペリジン−４−カルボキシアルデヒド（８）を酸触媒環化において置換フェニルヒドラジン（９）と反応させて、置換スピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］（１０）を得て、それを次いでアルキル化して式（Ｉ）の化合物を得ることができる。例えば、フェニルヒドラジン（９）およびトリフルオロ酢酸などの適切な酸に、窒素保護−４−ホルミル−ピペリジン（８）を加える。適切な反応時間の後、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤およびメタノールなどのアルコールを加えて、所望の置換スピロ｛インドリン−３，４’−保護ピペリジン］（１０）を得る。工程２において、例えば酢酸などの適切な酸およびメタノールなどのアルコール中で適切なアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を用いる還元的アルキル化によって、（１０）のインドリン窒素をアルキル化できる。ピペリジン窒素上の保護基を、水素化または酸性条件などの当該技術分野において周知の標準的な条件下で除去して、化合物（１１）を得ることができる。次いで工程３において化合物（１１）を、上記のスキームＩ、工程１ａに記載したように（１）でアルキル化して、化合物（１２）を得ることができ、工程４において上記のスキームＩ（工程１ａおよび２）において記載したように還元して、化合物（５’）を得ることができる。化合物（５’）を、実質的に化合物（５）と同様にスキームＩについて記載したように実施して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００３３】
【化５】
スキームＩＩＩにおいて、置換複素環酸を、ＤＩＢＡＬ−Ｈなどの還元剤を用いて当該技術分野において周知の条件下で還元して、工程１において化合物（２）を得ることができる。工程２において、メチルアルコール、化合物（２）を、イミダゾールおよびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシランなどの塩基を用いてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシランなどの保護基で保護して、（１４）を得ることができる。化合物（１４）を、炭酸カリウムなどの塩基を用いて化合物（７）でアルキル化し、脱保護して、工程３において化合物（１５）を得ることができる。化合物（１５）のメチルアルコールを、デス・マーチン・ペルヨージナンなどの酸化剤でアルデヒドに変換して、工程４において化合物（１６）を得ることができるか、または三臭化リンなどの臭素化条件を用いて臭化物に変換して、化合物（１６）を得ることができる。次いで化合物（１６）を、シアノ水素化ホウ素ナトリウムとの還元的アルキル化などの当該技術分野において周知の条件下（スキームＩ）で化合物（３）でアルキル化し、続く脱保護により、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。別法として、臭化物を、炭酸セシウムまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を用いて化合物（３）でアルキル化し、脱保護して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【実施例】
【００３４】
調製例および実施例
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表す。本発明の化合物についての名称は一般にＩＵＰＡＣＮＡＭＥ（商標）、ＡＣＤＬＡＢＳ（商標）またはＳｙｍｙｘ Ｄｒａｗ３．２によって提供される。
【００３５】
調製例１
ベンジルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【化６】
トルエン／アセトニトリルの４９／１溶液（５０ｍＬ）中のフェニルヒドラジン（１．２９ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）の溶液を３５℃にて加熱する。４−ホルミル−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（２．７ｇ、１０．９１ｍｍｏｌ）をトルエン／アセトニトリルの４９／１溶液（１０ｍＬ）に溶解し、混合物に滴下して加える（国際公開第２００５０４６６８２号パンフレット）。混合物を３５℃にて一晩攪拌する。得られた溶液を０℃に冷却し、メタノール（５ｍＬ）を加える。ＮａＢＨ４（０．６１９ｇ、１６．３８ｍｍｏｌ）を溶液にゆっくりと加え、混合物を４５分間攪拌する。混合物をＮＨ４ＯＨ水溶液（６％、２５ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、黄色の固体を得る。粗固体をＥｔＯＡｃから再結晶して、淡黄色の固体（１．２５ｇ、第１の収集物）を得る。母液を蒸発させ、ヘキサン：酢酸エチル（８：２）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、全収率（２．４ｇ、８４％）で淡黄色の固体（１．２ｇ、第２の収集物）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３６】
調製例２
ベンジル１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
メタノール（６．０Ｌ）中のベンジル１，２−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３１５ｇ、９７７．５ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド（４０％水溶液、１３８ｍＬ、４．９ｍｏｌ）および酢酸（２７９ｍＬ、４．９ｍｏｌ）の０℃の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１８４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を２時間にわたって一部ずつ加える（いくらかの泡立ちが観察される）。反応混合物を室温まで加温し、６時間攪拌する。混合物のｐＨを１０％ＮａＨＣＯ３溶液で約８に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×５．０Ｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水（２×２．５Ｌ）およびブライン（２．５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、淡黄色の固体（３１０ｇ、９８．３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３７】
調製例３
１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］
メタノール（５０ｍＬ）中のベンジル１−メチルスピロ［インドリン（ｉｎｄｏｌｅｉｎｅ）−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（０．８５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１０％、０．１５ｇ）を加え、混合物を１６時間バルーンで水素化する。反応混合物を珪藻土で濾過し、メタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（０．５ｇ、９８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３８】
調製例４
（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸
【化７】
３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸鏡像異性体を、キラルクロマトグラフィー［カラムキラルパックＩＡ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）］、移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン、移動相（Ｂ）０．０１％ＴＦＡを含むイソプロピルアルコール；組成（８５：１５）、流速１．０ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ）により分離して、標題化合物（４．２ｇ、５０．５８％）を得る（保持時間７．９６）。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３（Ｍ＋Ｈ）＋。鏡像異性体の混合物もまた、国際公開第２００５０８６６６１号パンフレットに記載されているものと同様の方法を用いるキラル分割により分離して、標題化合物を得る。
【００３９】
調製例５
メチル５−（ブロモメチル）−４−メチル−チオフェン−２−カルボキシレート
【化８】
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のメチル４−メチルチオフェン−２−カルボキシレート（２．７ｇ、６．４ｍｍｏｌ）の溶液に、０〜５℃にて、４８％ＨＢｒ水溶液（１２ｍＬ）、Ｈ２ＳＯ４（６ｍＬ）、ＺｎＢｒ２（５．４ｇ）、およびＨＣＨＯ（２．２ｍＬ、３７％）を加える。混合物を室温にて１６時間攪拌する。溶液を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、ＮａＨＣＯ３溶液、飽和ブライン溶液、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、オフホワイトの固体（３．５ｇ、８１％）として標題化合物を得る。
【００４０】
調製例６
エチル２−（２−ヒドロキシプロピルアミノ）−２−オキソ−アセテート
【化９】
ＤＣＭ（１５０．０ｍＬ）中の１−アミノ−プロパン−２−オール（１５．０ｇ、１９９．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃にてトリエチルアミン（４３．３０ｍＬ、２９９．５６ｍｍｏｌ）を加える。クロロ−オキソ−酢酸エチルエステル（２２．３５ｍＬ、１９９．７ｍｍｏｌ）を０℃にて反応混合物に滴下して加え、反応混合物を室温にて１６時間攪拌する。混合物を０℃にて水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗生成物を、ヘキサン：酢酸エチル（３．０：７．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色のゲル（１０．７ｇ、３１．０％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４１】
調製例７
エチル２−（アセトニルアミノ）−２−オキソ−アセテート
【化１０】
ＤＣＭ（１００．０ｍＬ）中のエチル２−（２−ヒドロキシプロピルアミノ）−２−オキソ−アセテート（１０．７ｇ、６１．０７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃にてデス・マーチン・ペルヨージナン（２５．９ｇ、６１．０７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、０℃にて水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（２×５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（１：１）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油（９．２ｇ、８７．０３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４２】
調製例８
エチル５−メチルオキサゾール−２−カルボキシレート
【化１１】
トルエン（１００．０ｍＬ）中のエチル２−（アセトニルアミノ）−２−オキソ−アセテート（９．２ｇ、５３．１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＰＯＣｌ３（４．９５ｍＬ、５３．１２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１６時間還流する。反応混合物を冷却し、少しずつ水（１００．０ｍＬ）に加え、激しく攪拌する。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（８．０：２．０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の油として標題化合物（５．１ｇ、６１．９％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １５６．２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４３】
調製例９
エチル５−（ブロモメチル）オキサゾール−２−カルボキシレート
四塩化炭素（５０．０ｍＬ）中のエチル５−メチルオキサゾール−２−カルボキシレート（５．１ｇ、３２．８７ｍｍｏｌ）およびＮＢＳ（８．１９ｇ、４６．０２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、過酸化ベンゾイル（０．７９ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１６時間還流する。混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過する。濾液を真空中で濃縮し、粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．２：０．８）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡褐色の油として（４．８ｇ、６２．３３％）の標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ （７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２３４．１／２３６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４４】
調製例１０
メチル３−メトキシチオフェン−２−カルボキシレート
アセトン（５０ｍＬ）中の３−ヒドロキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２２．２ｇ、１６１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＣＨ３Ｉ（１０．８ｍＬ、１７３ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下して加える。反応混合物を５５℃にて４時間加熱し、室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、濾液を真空下で濃縮する。残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させて、茶色の固体として標題化合物（５．９ｇ）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ １７３．１／２３６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
調製例１１
メチル５−（ブロモメチル）−３−メトキシ−チオフェン−２−カルボキシレート
無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の３−メトキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５ｇ、２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢｒ水溶液（２２ｍＬ、３７％）、９８％Ｈ２ＳＯ４（１１ｍＬ）、ＺｎＢｒ２（８．５ｇ）およびホルムアルデヒド水溶液（３７％、３．８ｍＬ）を０℃にて連続して加える。反応混合物を室温にて１４時間攪拌する。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．５：０．５）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（４．４ｇ、６０％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２６７．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４６】
調製例１２
（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イル）−メタノール
無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．４ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にて水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中に１Ｍ、２１．０ｍＬ、２１．１ｍｍｏｌ）を滴下して加える。添加の完了後、混合物を室温まで加温し、２時間攪拌する。反応混合物を−４０℃にて水（１５ｍＬ）でクエンチし、混合物を室温にて３０分間攪拌する。反応混合物を珪藻土で濾過する。濾液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、淡黄色の液体として標題化合物（１．２ｇ、９６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６ ＤＭＳＯ）７．４６（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ）。
【００４７】
調製例１３
［５−（ブロモメチル）−３−メトキシ−２−チエニル］メトキシ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン
【化１２】
無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イル）−メタノール（０．６ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてイミダゾール（０．５１６ｇ、７．５９ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．４１２ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、１時間攪拌する。反応混合物を水でクエンチし、濃縮する。残渣をＤＣＭに溶解し、水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（０．９ｇ）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ （７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３５１／３５３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
調製例１４
エチル３−［４−［［５−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル）オキシメチル］−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］−２−フルオロ−フェニル］プロパノエート
【化１３】
アセトニトリル（１５ｍＬ）中の３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−プロピオン酸エチルエステル（１．０３ｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温にて炭酸カリウム（２．３１ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）および（５−ブロモメチル−３−メトキシ−チオフェン−２−イルメトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン（１．７ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間還流する。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．６：０．４）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．５ｇ、２１％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）δ７．５１（ｓ，１Ｈ），７．２６−７．２（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．８９（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．８３−６．８１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），４．９２（ｓ，２Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．１０−４．０５（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．８６−２．８２（ｔ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ），２．６１−２．５５（ｍ，２Ｈ），１．２１−１．１７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．１３（ｓ，６Ｈ）。
【００４９】
調製例１５
エチル３−［２−フルオロ−４−［［５−（ヒドロキシメチル）−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３−｛４−［５−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４−メトキシ−チオフェン−２−イルメトキシ］−２−フルオロ−フェニル｝−プロピオン酸エチルエステル（０．５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を０℃にて加え、反応混合物を２５℃にて３０分間攪拌する。反応混合物を水でクエンチし、残渣まで濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで抽出し、水（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（０．４ｇ）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ６）δ７．４１（ｓ，１Ｈ），７．１９−７．１５（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．７５（ｍ，２Ｈ），５．３２（ｂｒ，１Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），４．０４−４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，１Ｈ）３．１６−３．１２（ｔ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，３Ｈ），２．７９−２．７６（ｔ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５５−２．５１（ｔ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２８−１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５０】
調製例１６
エチル３−［２−フルオロ−４−［（５−ホルミル−４−メトキシ−２−チエニル）メトキシ］フェニル］プロパノエート
【化１４】
０℃に冷却した、無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のエチル３−［２−フルオロ−４−［［５−（ヒドロキシメチル）−４−メトキシ−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート（１．６ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、デス・マーチン・ペルヨージナン（２．７６ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、２時間攪拌する。反応混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出し、水（１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（８．８：１．２）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．８ｇ、５０％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６７．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５１】
調製例１７
エチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート
方法Ａ
【化１５】
エタノール（２８ｍＬ）中のスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］（１．４ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の溶液に、室温にて、メチル５−（ブロモメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１．７８ｇ、７．６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（３．３１ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９０℃にて１６時間攪拌する。混合物を濃縮し、水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．５ｇ、５８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３４０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５２】
方法Ｂ
スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］塩酸塩（１２８．０ｇ、５６０ｍｍｏｌ）を３０℃にて窒素雰囲気下でエタノール（１．５Ｌ）に溶解する。ジイソプロピルエチルアミン（４０７．４ｍＬ、１．６８ｍｏｌ）を３０℃にて１０分にわたって滴下して加え、２０分間攪拌する。メチル５−（ブロモメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（ＬＣＭＳにより約５０％純粋）（３００ｇ、１．２７ｍｏｌ）を３０℃にて加え、３０℃にて１０分間攪拌し、混合物を１時間４５分、６０℃で加熱する。出発物質の存在を示したＴＬＣにより、反応をモニターする。反応物を３０℃にて１３時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（１０Ｌ）に溶解する。ＨＣｌ（１Ｎ、１．５Ｌ）を絶えず攪拌しながら滴下して加え、白色の固体沈殿物を収集する。物質をＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、１０分間攪拌し、濾過し、真空下（４４℃）で乾燥させて、標題化合物（１５０．０ｇ、７６％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３４０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５３】
以下の化合物を調製例１７の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００５４】
【表１−１】
【表１−２】
ａ．粗生成物
ｂ．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．５３（ｓ，０．５Ｈ），７．２１−７．１２（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，１．５Ｈ），３．６５（ｓ，１Ｈ），２．８４−２．８２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．２６−２．２１（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），２．１６（ｓ，１．５Ｈ），１．９６−１．９２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），１．７９（ｓ，１Ｈ），１．４５−１．４２（ｍ，１Ｈ）。
【００５５】
調製例２８
［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール
方法Ａ
【化１６】
ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のエチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１．５ｇ、４．４ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてＤＩＢＡＬ−Ｈ（１１ｍＬ、１１．０６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて１時間加温し、その後、０℃にて水を滴下して加える。混合物を珪藻土で濾過し、ジクロロメタンで抽出し、乾燥するまで濃縮して、標題化合物（１．０５ｇ、７６％）を得る。ＥＳＩ／ＣＭＳ ｍ／ｚ ３１２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５６】
方法Ｂ
メチル５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チオフェン−２−カルボキシレート（１５０．０ｇ、４４６．０ｍｍｏｌ）を、３０℃にて窒素雰囲気下で無水ジクロロメタン（３Ｌ）に溶解する。混合物を−７８℃に冷却し、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（トルエン中の１．０Ｍ溶液）（１．２Ｌ、９６０ｍｍｏｌ）を、絶えず攪拌しながら１時間にわたって窒素雰囲気下、−７８℃にて滴下して加える。反応混合物を０℃まで徐々に加温し、０℃にて３時間、３０℃にて３時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、飽和ＮＨ４ＯＨ水溶液（１Ｌ）を滴下して加え、続いて、ＤＣＭ（５．０Ｌ）を滴下して加える。混合物を室温まで加温し、ＤＣＭで抽出し、水（２Ｌ）および飽和ブライン（２Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発する。ジエチルエーテル（５００ｍＬ）を残渣に加え、混合物を３０分間攪拌する。形成する沈殿物を濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発させ、固体と合わせて、白色の固体として標題化合物（８８．０ｇ、６４％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３１２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５７】
以下の化合物を調製例２８の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００５８】
【表２−１】
【表２−２】
【００５９】
調製例３９
４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール−２−カルバルデヒド
【化１７】
ＴＨＦ中の２−ブロモ−４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール（３．８ｇ、１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてｎ−ＢｕＬｉ（０．７１３ｇ、１１．１３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を−４５℃まで加温し、３０分間攪拌する。ＤＭＦ（１．５ｍＬ）を−７８℃にて混合物に滴下して加え、混合物を室温までゆっくり加温し、１時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、水、続いてＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈する。混合物を酢酸エチルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（２．８ｇ、８５％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
以下の化合物を調製例３９の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６１】
【表３】
【００６２】
調製例４１
５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン−‘イルメチル）−４−メチル−チアゾール−２−メタノール
【化１８】
ＤＣＭ（６ｍＬ）中の４−メチル−５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）チアゾール−２−カルバルデヒド（０．６００ｇ、１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてＤＩＢＡＬ−Ｈ（ヘキサン中の１Ｍ溶液、０．５２ｇ、３．６ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温まで加温し、１時間攪拌する。混合物を−７８℃に冷却し、水でクエンチし、濾過し、ＤＣＭで抽出し、乾燥するまで蒸発させて、標題化合物（０．５００ｇ、８３％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６３】
以下の化合物を調製例４１の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６４】
【表４】
【００６５】
調製例４３
［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メチルメタンスルホネート
【化１９】
ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中の［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メタノール（０．１５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の０℃の攪拌溶液に、トリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．２６ｍｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（０．０５ｍＬ、０．６１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃にて１時間攪拌する。反応混合物を水（２０．０ｍＬ）およびブライン（１０．０ｍＬ）で洗浄し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、茶色の液体として粗生成物（０．１８ｇ）を得る。
【００６６】
以下の化合物を調製例４３の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００６７】
【表５】
【００６８】
調製例４５
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート
方法Ａ
【化２０】
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジン（１．３０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてトリブチルホスフィン（１．２１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加える。０℃にて１５分後、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール（０．８ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を０℃にて１５分間攪拌し、続いてＴＨＦ（５ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（１．０７ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて１６時間攪拌し、濾過し、水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物を、ヘキサン：酢酸エチル（８．５：１．５）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．１ｇ、６１％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
方法Ｂ
エチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（３０．０ｇ、１２９．０ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下でＴＨＦ（６００ｍｌ）に溶解し、０℃まで冷却する。ＤＩＡＤ（３１．３ｇ、１５４．９ｍｏｌ）を０℃にてゆっくり加え、攪拌し、混合物を３０分間攪拌する。最小量のＴＨＦに溶解した、ＰＰｈ３（４０．６５ｇ、１５４．９ｍｍｏｌ）および（５−［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メタノール（４８．２６ｇ、１５４．９ｍｍｏｌ）の溶液を０℃にて反応混合物に加え、その混合物を室温まで加温し、１２時間攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）に溶解し、水（２×１０容量）およびブライン（１０容量）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．０：１．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３３．０ｇ、４８．６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４４−７．４２（ｄ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２２−７．１２（ｍ，２Ｈ），７．０３−７．０２（ｄ，１Ｈ），６．９７−６．９２（ｍ，３Ｈ），６．８９−６．８８（ｄ，１Ｈ），６．７９−６７７（ｄ，１Ｈ），６．６９−６．６７（ｄ，１Ｈ），５．２１（ｓ，２Ｈ），４．０２−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），２．９４−２．９１（ｄ，２Ｈ），２．６８−２．６２（ｍ，３Ｈ），２．４１−２．３６（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１Ｈ），１．２７−１．１４（ｍ，４Ｈ），１．１３−１．１１（ｔ，３Ｈ）。
【００７０】
以下の化合物を調製例４５の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００７１】
【表６−１】
【表６−２】
【表６−３】
ａ．１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．１８−７．１４（ｍ，４Ｈ），７．１２−７．０８（ｍ，１Ｈ），６．９４−６．９３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７０−６．６６（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），４．１４−４．０９（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），２．９２−２．８６（ｍ，６Ｈ），２．６０−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．０１−１．９０（ｍ，５Ｈ），１．２８−１．２３（ｍ，６Ｈ）。
ｂ．粗生成物
【００７２】
調製例６５
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）オキサゾール−２−イル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート
【化２１】
アセトニトリル（１０．０ｍＬ）中の［５−（１Ｈ’−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−１，３−オキサゾール−２−イル］メチルメタンスルホネート（０．１８ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．３９ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（０．１３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を８０℃にて１時間攪拌し、珪藻土で濾過する。濾液を乾燥するまで蒸発させ、ヘキサン：酢酸エチル（６．０：４．０）で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油（０．０７ｇ、２８．２％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５１１．５（Ｍ＋１）。
【００７３】
以下の化合物を調製例６５の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００７４】
【表７】
【００７５】
調製例６７
エチル３−［２−フルオロ−４−［［４−メトキシ−５−［（１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−２−チエニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート
【化２２】
０℃にて、メタノール中のエチル３−［２−フルオロ−４−［（５−ホルミル−４−メトキシ−２−チエニル）メトキシ］フェニル］プロパノエート（０．４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン（０．２５８ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、およびＮａＣＮＢＨ３（０．２７３ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温まで加温し、１２時間攪拌する。混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機層を水（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を分取ＴＬＣにより精製して、無色の液体（０．２ｇ、３３％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５５３．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７６】
以下の化合物を調製例６７の方法に記載されるように実質的に調製する。
【００７７】
【表８】
【００７８】
実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イン酸
方法Ａ
【化２３】
エタノール（６ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（１．１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、５ＭのＮａＯＨ（０．８３ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、９０℃にて５分間、マイクロ波条件下で反応させる。混合物を濃縮し、水に溶解し、２ＮのＨＣｌで酸性化し、クロロホルム（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣO３（２×５ｍＬ）、ＮＨ４Ｃｌ（２×５ｍＬ）、水（２×５ｍＬ）および飽和ブライン（２×５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、オフホワイトの固体として標題化合物（０．７４６ｇ、７１％）を得る。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，４００ ＭＨｚ）δ１２．２（ｂｓ，１Ｈ），７．４３−７．４１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．２５（ｄｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），７．２１−７．１３（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．０２−７．０１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９６−６．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．９０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．８７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）６．７７−６．７６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）５．１９（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），２．９４−２．９０１（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５９−２．５７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４１−２．３６（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０８−２．０３（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｓ，２Ｈ），ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ４９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
方法Ｂ
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［５−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’イルメチル）−２−チエニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（３３．０ｇ、６２．７ｍｏｌ）をエタノール（６００ｍＬ）に溶解し、混合物を１０〜１５℃に冷却する。５ＭのＮａＯＨ（５．０２ｇ、１２５．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、混合物を１０分間攪拌し、その後、２時間８０℃で加熱する。溶媒を蒸発させ、混合物を最小量の水に溶解する。ｐＨを１ＮのＨＣｌ溶液で約７．０に調整する。溶液を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させる。粗物質に、メチルｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）および０．２％のメタノールを加え、混合物を３０分間攪拌する。得られた沈殿物を濾過し、４８℃にて真空下で乾燥させて、クリーム色の固体として標題化合物（２４．０ｇ、７６％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２１７（ｓ，１Ｈ），７．４３８−７．４２１（ｄ，１Ｈ），７．３３０−７．２７１（ｍ，３Ｈ），７．２２８−７．１２６（ｍ，２Ｈ），７．０４６−７．０３９（ｄ，１Ｈ），６．９７８−６．９０６（ｍ，４Ｈ），６．７９５−６．７８１（ｄ，１Ｈ），５．２１３（ｓ，２Ｈ），３．９７２−３．９２８（ｍ，１Ｈ），３．７８８（ｂｓ，２Ｈ），２．９４５（ｍ，２Ｈ），２．６０８−２．５８９（ｄ，２Ｈ），２．４２２（ｍ，２Ｈ），２．１０７−２．０５１（ｍ，２Ｈ），１．７７８−１．７７２（ｓ，３Ｈ），１．２３３−１．１４８（ｍ，２Ｈ）。
【００８０】
以下の化合物を実施例１の方法（方法Ａ）に記載されるように実質的に調製する。
【００８１】
【表９−１】
【表９−２】
【表９−３】
【表９−４】
【表９−５】
【００８２】
Ｔ２Ｄの原因は、２倍のインスリン抵抗性、および循環グルコースレベルを低下させるために適切な量のインスリンを生成する膵臓ベータ細胞の進行性破壊であると考えられている。正常なインスリンレベルが、骨格筋および脂肪組織を含む、標的組織内の循環血漿グルコースを処理できない場合、インスリン抵抗性が発達する。インスリン抵抗性に起因する過度に高いグルコースレベルを補償するために膵臓がさらにインスリンを生成するので、膵臓ベータ細胞は最終的に消耗し、分泌のためにさらにインスリンが利用できなくなる。時間が経つと、膵臓ベータ細胞は完全に機能しなくなり、Ｔ２Ｄを有するヒトは１型糖尿病を有するヒトと同様になる。高レベルの循環グルコースは糖尿病の特徴であり、心臓病および脳卒中、高血圧、失明、腎臓および神経障害、感染、ならびに歯周病などの重篤な合併症を最終的に導き得る。従って、運動；適切なダイエット；経口抗糖尿病治療；および最終的にインスリンにより、可能な限り早期にＴ２Ｄを抑制し、治療することが重要である。本発明によって特許請求される化合物は、さらなる薬理学的な治療選択を提供する。選択的にＧＰＲ４０を調節する化合物が特に好適であり得る。
【００８３】
ＧＰＲ４０：情報
最近、Ｎａｇａｓｕｍｉにより報告されているインスリンＩＩプロモーターの制御下でヒトＧＰＲ４０遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスを用いる研究の結果により、ＧＰＲ４０が、特にインスリン耐性の齧歯動物モデルにおいて、インビボでのＧＤＩＳおよび血漿グルコース濃度の調節において重要な役割を果たすことがさらに支持されている。Ｎａｇａｓｕｍｉ Ｋら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＰＲ４０ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ β−ｃｅｌｌｓ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５８：１０６７−１０７６，２００９。Ｂｒｉｓｃｏｅ ＣＰら，Ｔｈｅ ｏｒｐｈａｎ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＰＲ４０ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７８：１１３０３−１１３１１，２００３もまた参照のこと。これらの見解は、新規ＧＰＲ４０調節因子化合物の開発が特にＴ２Ｄの治療の使用に望まれ得ることをさらに支持している。
【００８４】
カルシウム流出一次アッセイ
本明細書に例示した化合物を以下に記載するように実質的に試験すると、カルシウム流出一次アッセイについて１μＭより低いＥＣ５０値示す。
【００８５】
このアッセイは、リガンドがＧＰＲ４０に結合し、活性化する場合に生じる細胞内カルシウム濃度の増加を測定することによって化合物をスクリーニングするために使用し、これにより、ＧＰＲ４０アゴニストの効果および有効性を実証する。３７℃および５％ＣＯ２にて１０％ＦＢＳおよび８００μｇ／ｍｌジェネティシンを添加した３：１の比のダルベッコ改変イーグル培地とＦ１２培地中に維持した、ＨＥＫ２９３細胞を過剰発現するヒトＧＰＲ４０ ｃＤＮＡをこの研究のために利用する。アゴニストアッセイを、アッセイバッファー（１×ＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩溶液）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）中の脂肪酸を含まないＢＳＡの存在（０．１％）または非存在下で、Ｃａｌｃｉｕｍ ４ Ｄｙｅアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて実施する。蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を用いて、受容体活性化を細胞内カルシウムの増加として測定する。ベースラインより上の蛍光の最大変化を用いて、アゴニスト反応を測定する。濃度対相対的蛍光単位（ＲＦＵ）をプロットすることによってエクセルフィットソフトウェア（バージョン４；ＩＤＢＳ）を用いて、化合物のＥＣ５０（最大反応の半分における有効濃度）値を計算する。天然のリガンドであるリノール酸と比較した化合物によって示される最大反応に基づいて有効性の割合を計算する。このアッセイにおいて試験した場合、実施例１の試験化合物は９１＋／−９％の有効性で１１４＋／−９３ｎＭのＥＣ５０を有する。これらの結果はさらに、ＧＰＲ４０アゴニストとしての所望の効果および有効性を実証する。
【００８６】
グルコース依存性インスリン分泌（ＧＤＩＳ）アッセイ
ＧＰＲ４０の活性化は高グルコース濃度に依存するインスリン分泌を生じることが知られているため、上記のＧＰＲ４０一次アッセイにおいて細胞内カルシウムを増加させることが知られている化合物をさらに特徴付けるために２つの別のアッセイ系（インスリノーマ細胞株および初代齧歯動物小島）を開発する。
【００８７】
マウスインスリノーマ細胞株Ｍｉｎ６を用いてＧＤＩＳアッセイを実施する。Ｍｉｎ６細胞を、３７℃および５％ＣＯ２にて非必須アミノ酸、１０％ＦＢＳ、５０ｍＭの２−メルカプトエタノールおよび１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に維持する。実験の日に、グルコースを含まない２００μｌの予熱したクレブスリンゲルバッファーで細胞を２回洗浄する。２．５ｍＭグルコースを含有する追加の２００μＬの予熱したクレブスリンゲルバッファーを使用して、細胞を飢餓し、その後、高濃度のグルコース（２５ｍＭ）の存在下で化合物を添加する。プレートを３７℃で２時間インキュベートする。２時間のインキュベーションの終わりに、上清をミリポアフィルタープレートに穏やかに移し、２００ｇ（重力）にて３分間回転させる。メルコディアインスリン測定キットを用いてインスリンをアッセイする。１μＭでの実施例１および２５ｍＭグルコースのＭｉｎ６細胞への添加により、２５ｍＭグルコース単独で達成されるものと比べてインスリン分泌の統計的に有意な２倍の増加が生じる。
【００８８】
初代齧歯動物膵臓ランゲルハンス島を用いるＧＤＩＳアッセイもまた、例示した化合物を特徴付けるために使用する。コラゲナーゼ消化およびＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ密度勾配分離によって膵島をオスのＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットから単離する。単離プロセスからの回収を容易にするために、ＧｌｕｔａＭＡＸｎ（安定化した、Ｌ−グルタミンのジペプチド形態（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号６１８７０−０１０））を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で小島を一晩培養する。４８ウェルプレート内のＥＢＳＳ（アール平衡塩溶液）バッファー中での９０分のインキュベーションによってインスリン分泌を測定する。手短に述べると、小島を最初に３０分間、２．８ｍＭグルコースを有するＥＢＳＳ中でプレインキュベートし、次いで、１５０μｌの２．８ｍＭグルコースを含有する４８ウェルプレート（４小島／ウェル）に移し、９０分間、試験化合物の存在下または非存在下で２．８または１１．２ｍＭのグルコースを含む１５０μｌのＥＢＳＳでインキュベートする。インキュベーションの終わりにウェルからバッファーを除去し、ラットインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いてインスリンレベルをアッセイする。このアッセイ系において、異なる濃度における実施例１の投与により、１１．２ｍＭグルコース単独で達成されるものと比べてインスリンの２〜４倍の増加が生じる。
【００８９】
選択性アッセイ：
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）α、δ、およびγ結合および機能アッセイ：
ＧＰＲ４０はＰＰＡＲγに対するリガンドにより活性化されることが知られているため、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ結合および機能アッセイにおいて例示した化合物を試験して、ＧＰＲ４０に対する例示した化合物の選択性を測定する。本明細書に例示した化合物を、ＰＰＡＲ結合について以下に記載するように実質的に試験すると、概して１０μＭ濃度の試験化合物で１０００ｎＭより高い結合値を有し、ＰＰＡＲ活性について陰性であるとみなされる。
【００９０】
シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）技術を用いて、ＰＰＡＲα、δ、およびγ受容体に対する化合物の結合親和性を評価する。受容体をケイ酸イットリウムストレプトアビジンコーティングＳＰＡビーズに結合させるために、ビオチン化オリゴヌクレオチドダイレクトリピート２（ＤＲ２）を使用する。ＰＰＡＲα、δ、γおよびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）αはＨＥＫ２９３細胞において過剰発現し、特異的受容体を含有する細胞溶解物を個々のアッセイにおいて用いる。１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．８、８０ｍＭのＫＣｌ、０．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％の３［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−プロパンスルホン酸（ＣＨＡＰＳ）、および４．４％のウシ血清を含有する結合バッファー中でＤＲ２を３０分にわたってＳＰＡビーズに結合させる。αおよびδ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３３．８μＣｉ３Ｈ）ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト基準化合物、およびγ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３７．３μＣｉ３Ｈ）ＰＰＡＲγアゴニスト基準化合物、１１０．３μｇのイットリウムＳＰＡストレプトアビジンコーティングビーズ、０．１２６ｎＭのＨＤオリゴＤＲ２、および上記の結合バッファー＋１４％グリセロール中の０．３μｇのＰＰＡＲαと０．５μｇのＲＸＲα、０．５μｇのＰＰＡＲδと０．５μｇのＲＸＲα、または１．２５μｇのＰＰＡＲγと３．０３μｇのＲＸＲαのいずれか、および５μｇの剪断したサケ精子ＤＮＡの存在下で１１の濃度の化合物のうちの１つを含む各ウェル中で細胞溶解物をインキュベートする。αおよびδ受容体アッセイについて、１０，０００ｎＭの非標識ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト基準化合物、およびγ受容体アッセイについてＰＰＡＲγアゴニスト基準化合物の存在下で非特異的結合を測定する。結合反応（９６ウェル［Ｃｏｓｔａｒ３６３２］プレート中に１００μｌ／ウェル）を１０時間インキュベートし、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａで壊変毎分（ｄｐｍ）をカウントする。４パラメーターロジスティック式を用いて１１点濃度反応曲線をフィッティングすることによって化合物に対する受容体結合親和性（ＩＣ５０）を測定する。チェン−プルソフ式を用いたＩＣ５０および飽和結合によって測定したＫｄからＫｉを測定する。実施例１の化合物に関して、１０μＭまでの濃度で３つのＰＰＡＲ結合アッセイのいずれも結合は検出されない。従って、本明細書に記載したアッセイは、実施例１の化合物が望ましくないＰＰＡＲ活性を回避しながら、ＧＰＲ４０を選択的に活性化することを支持する。例示した化合物の相対的ＩＣ５０は概してＰＰＡＲアイソフォームに関して１０μＭより高く、その化合物が望ましいＧＰＲ４０活性化をもたらしつつＰＰＡＲ活性を回避することを支持している。
【００９１】
Ｇａｌ４ ＰＰＡＲα、Ｇａｌ４ ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ受容体機能アッセイも使用して、例示した化合物の選択性をモニターする。アフリカミドリザルの腎組織由来のＣＶ１細胞をＦｕｇｅｎｅを用いて種々の受容体およびレポータープラスミドにトランスフェクトする。Ｇａｌ４ ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδアッセイについて、アデノウイルスの主要後期プロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流でクローニングした、酵母転写タンパク質Ｇａｌ４反応エレメントの５つのタンデムコピーを含有するレポータープラスミドを、Ｇａｌ４ ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）を含有するハイブリッドタンパク質を構成的に発現するシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）により駆動されるプラスミドと一緒にトランスフェクトし、ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲδのいずれかのリガンドが結合する。ＰＰＡＲγアッセイに関して、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって駆動されるＰＰＡＲγおよびＲＸＲαの両方をコードするプラスミドを、ＴＫプロモーターおよび受容体反応エレメント（２×ＰＰＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡを含有するプラスミドと一緒にトランスフェクトする。５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地入りのＴ２２５ｃｍ２細胞培養フラスコ中で細胞をトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地入りの不透明な９６ウェルディッシュに播種し（１５，０００細胞／ウェル）、４時間インキュベートし、半対数希釈率（ｈａｌｆ ｌｏｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）で０．１７ｎＭ〜１０μＭの試験化合物または基準化合物に曝露する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解し、発光によって受容体活性化の尺度としてルシフェラーゼ活性を測定する。データを４パラメーターフィットロジスティックモデルにフィッティングして、ＥＣ５０値を測定する。最大刺激の割合を１０μＭの適切なＰＰＡＲアゴニスト基準化合物で得た最大刺激に対して測定する。上記の特異的ＰＰＡＲ共トランスフェクション（ＣＴＦ）／機能アッセイにおいて１０μＭ以下で試験した場合、実施例１の化合物を用いてＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、またはＰＰＡＲγの機能的活性化は検出されない。従って、このアッセイは、望まれるように、例示した化合物がＰＰＡＲアゴニスト活性を回避することを支持している。
【００９２】
インビボでの効果：腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）
抗糖尿病効果、すなわちインスリンの増加およびグルコース濃度の低下を生じる、インビボでＧＰＲ４０を活性化する例示した化合物の能力を試験するために、４日間の腹腔内グルコース耐性試験（ｉｐＧＴＴ）研究を、ＩＰＧＴＴにおいて試験した各化合物を用いて行う。
【００９３】
オスのＢａｌｂ／ｃ（アルビノマウス）マウス（８〜９週齢）を単一に収容し、通常の齧歯動物の食餌および水を自由に与える。動物を秤量し、体重により無作為化し、毎日、体重を記録する。研究開始後、１日に１回、３日間、メチルセルロースおよびｔｗｅｅｎ−８０を有する製剤を用いて動物に経口投与する。４日のＩＰＧＴＴ研究の前の晩に、クリーンケージ中で動物を一晩絶食させる。ＩＰＧＴＴ（４日）の朝、ＩＰＧＴＴ（グルコース２ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の６０分前に、動物に化合物またはビヒクル単独を経口投与する。グルコースチャレンジ後、０、３、７、１５、３０、および６０分に得た尾部の血液から血中グルコース濃度を測定する。血漿を単離し、それぞれのインスリン濃度を測定するために使用する。ｔ＝０からｔ＝６０分までの血糖可動域プロファイルを使用して、各処置についての濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を積分する。グルコース低下の割合を、ビヒクル群のＡＵＣに対して化合物のＡＵＣデータから算出する。０．１、０．３、１．０、３．０、または１０ｍｇ／ｋｇにて試験化合物を経口投与し、陽性対照を１０ｍｇ／ｋｇにて投与する。実施例１の化合物のいずれの濃度または陽性対照は、ＧＴＴの間、３分の時点でグルコース濃度を顕著に低下させない。対照的に、７分の時点での０．３、１．０、３．０、および１０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物および陽性対照、ならびに１５、３０、および６０分の時点での０．１、０．３、１．０、および３．０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物でグルコース濃度は顕著に低下する。陽性対照は３０および６０分の時点でグルコース濃度を顕著に低下させる。グルコース低下についてＡＵＣに基づいた実施例１の化合物についてのＥＣ５０は０．２１ｍｇ／ｋｇである。この研究において、インスリン濃度は、ＧＰＲ４０の活性化と一致する３．０および１０．０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物で顕著に増加した。この研究の結果は、実施例１によるＧＰＲ４０の活性化がインビボでの抗糖尿病効果を導くことを実証している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈまたは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
Ｘは、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、および−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−からなる群より選択され、
Ｒ７は、ＨおよびＣ１−３アルキルからなる群より選択され、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｒ３）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
Ｚ２は、−Ｓ−および−Ｏ−からなる群より選択され、
Ｚ３は、−Ｃ（Ｒ４）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
ここで、Ｚ１およびＺ３からなる群より選択される少なくとも１つは−Ｃ（Ｒ３）−または−Ｃ（Ｒ４）−である）
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ１がＨである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である、請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記化合物がＳ異性体である、請求項３に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｒ１がＦであり、Ｒ５がＨである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｚ２が−Ｓ−である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｚ１が−Ｃ（Ｒ３）−である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｒ３がＨまたはＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
Ｚ３が−Ｃ（Ｒ４）−である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
Ｒ４がＨである、請求項９に記載の化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
Ｘが−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１３】
Ｒ７がＣＨ３である、請求項１２に記載の化合物またはその塩。
【請求項１４】
前記化合物は製薬的に許容し得る塩である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
下記の式の化合物
【化２】
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１６】
製薬的に許容し得る担体と、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物またはその製薬的に許容し得る塩とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
別の薬剤をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物における糖尿病を治療する方法。
【請求項１９】
治療に使用するための請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２０】
糖尿病の治療に使用するための請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１】
下記の式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され、
Ｒ５は、Ｈまたは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
Ｘは、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、および−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−からなる群より選択され、
Ｒ７は、ＨおよびＣ１−３アルキルからなる群より選択され、
Ｚ１は、−Ｃ（Ｒ３）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
Ｚ２は、−Ｓ−および−Ｏ−からなる群より選択され、
Ｚ３は、−Ｃ（Ｒ４）−および−Ｎ−からなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＣＨ３、およびＣＨ３からなる群より選択され、
ここで、Ｚ１およびＺ３からなる群より選択される少なくとも１つは−Ｃ（Ｒ３）−または−Ｃ（Ｒ４）−である）
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ１がＨである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｒ５が−Ｃ≡ＣＣＨ３である、請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記化合物がＳ異性体である、請求項３に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｒ１がＦであり、Ｒ５がＨである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｚ２が−Ｓ−である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｚ１が−Ｃ（Ｒ３）−である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｒ３がＨまたはＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
Ｚ３が−Ｃ（Ｒ４）−である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
Ｒ４がＨである、請求項９に記載の化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
Ｘが−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
【請求項１３】
Ｒ７がＣＨ３である、請求項１２に記載の化合物またはその塩。
【請求項１４】
前記化合物は製薬的に許容し得る塩である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
下記の式の化合物
【化２】
またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１６】
製薬的に許容し得る担体と、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物またはその製薬的に許容し得る塩とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
別の薬剤をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物における糖尿病を治療する方法。
【請求項１９】
治療に使用するための請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２０】
糖尿病の治療に使用するための請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【公表番号】特表２０１３−５１２２７７（Ｐ２０１３−５１２２７７Ａ）
【公表日】平成２５年４月１１日（２０１３．４．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４２０７６（Ｐ２０１２−５４２０７６）
【出願日】平成２２年１１月１９日（２０１０．１１．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７３５９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６６１８３
【国際公開日】平成２３年６月３日（２０１１．６．３）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月１１日（２０１３．４．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１９日（２０１０．１１．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７３５９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６６１８３
【国際公開日】平成２３年６月３日（２０１１．６．３）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
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