月経困難症の治療用のＰＤＥ阻害剤及びバソプレッシン受容体アンタゴニストを含んでなる療法組合せ
ＰＤＥ阻害剤とバソプレッシン受容体ファミリーのアンタゴニストの相乗的な組合せについて記載する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＰＤＥ阻害剤とバソプレッシン受容体ファミリーのアンタゴニストの相乗的な組合せ、月経困難症の治療におけるそのような組合せの使用、そのような組合せを使用して月経困難症を治療する方法、及びそのような組合せを含有する医薬品に関する。
【０００２】
月経異常症の分野には高い未充足ニーズがあり、月経があるすべての女性の９０％までが幾分か影響を受けると推定されている。４２％までの女性が月経痛により仕事や他の活動に支障をきたし、この結果、米国では年間約６億の労働時間が失われていると評価されている｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］［30 refs］．American Family Physician, 60, 489-96｝。
【０００３】
月経困難症は、本態性と続発性の２つのクラスへ分類される場合がある。一般に、本態性月経困難症は、同定可能な骨盤疾患がないのに月経の開始時に生じる下腹部の痙攣痛と定義される。女性人口のほぼ５０％がこれに罹患している｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］［30 refs］．American Family Physician, 60, 489-96；Schroeder, B. & Sanfilippo, J. S. (1999).「青年期の月経困難症と骨盤痛（Dysmenorrhoea and pelvic pain in adolescents）［概説］［78 refs］．Pediatric Clinics of North America, 46, 555-71｝。
【０００４】
続発性月経困難症は、子宮内膜症、骨盤炎症疾患、子宮平滑筋腫、子宮内避妊用具、等のような特定の病理学的状態と関連した、月経痛と定義される。月経困難症の発生病理は不明であるが、これらの女性が感じる疼痛に伴った子宮筋層の機能亢進と子宮血流の減少の間には密接な関連があるようだ。続発性月経困難症は、月経困難症に罹患している女性のほぼ２５％でしか診断されない。月経困難症は、月経過多に伴って生じる場合もある。
【０００５】
健常な女性では、月経周期の間に子宮収縮性が変動する｛Akerlund, M. (1997).「非妊娠子宮における収縮性（Contractility in the non-pregnant uterus）」［概説］Annals of the New York Academy of Sciences, 828, 213-22｝。この変化は、卵巣ホルモンの血漿濃度の変動に従うわけではないが、両者の間にはタイムラグがあるので、組織レベルに関連する可能性がある。月経周期の最初の数日間、子宮収縮性は、子宮全体を通して調整され、規則的で、比較的高い振幅の収縮を伴い、収縮の間には十分に画定された弛緩がある。卵胞期の間、特に排卵期のあたりでは、より調整されない子宮収縮性が生じ、相対的に高い頻度で、低い振幅で、高い基底緊張の収縮を伴う。これが黄体期を通して、月経開始の２〜３日前まで続き、その後で子宮の活動は再びより調整される。この時点で、頚部の方向において、同時に子宮底に向かって、収縮の周期的な伝播が生じる。この方向は、ある患者では数分以内に変化する場合がある。頚部へ向かう伝播は、月経時の子宮内膜及び血液の排出に重要となる場合がある。対照的に、月経困難症の女性は、顕著な子宮の機能亢進を有する。彼女らの収縮パターンは不規則である。また、子宮血流が減少して、本質的には主として虚血性になる｛Akerlund, M. (1997).「非妊娠子宮における収縮性（Contractility in the non-pregnant uterus）」［概説］Annals of the New York Academy of Sciences, 828, 213-22｝。血流の減少は、おそらくは以下の両方の効果であろう：
・子宮圧力の増加により引き起こされる血管の圧縮（このことは、これらの女性が体験する仙痛の疼痛と関連する可能性があると考えられている）。
・より長く持続する血流の低下を引き起こす、動脈壁の平滑筋に対する血管作用剤の影響（このことは、これらの女性が経験する連続した疼痛の原因であるかもしれない）。
【０００６】
現在入手可能な月経困難症治療薬の中では、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、避妊も望まれる場合（この症例では、経口避妊薬を使用する）を除けば、第一選択薬となる傾向がある。
【０００７】
本態性月経困難症は、月経付近ではなく｛Lundstrom, V. & Green, K. (1978).「正常及び月経困難症の女性の血漿及び子宮内膜中のプロスタグランジンＦ２αとその主要代謝産物の内因性レベル（Endogenous levels of prostaglandin F2alpha and its main metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic women）」American Journal of Obstetrics and Gynecology, 130, 640-6｝、月経時のプロスタグランジンＦ２α（ＰＧＦ２α）の増加と関連づけられてきた｛Pickles, V. Hall, W. & Best F. (1965).「正常及び月経困難症の被検者由来の子宮内膜及び月経血中のプロスタグランジン（Prostaglandins in endometrium and menstrual fluid from normal and dysmenorrheic subjects）」BJOG: an International Journal of Obstetrics & Gynecology, 72, 185-｝。ＰＧＦ２αは、子宮収縮性を高めて、月経困難症様の疼痛を引き起こすことが知られている｛Roth-Brandel, J., Bygdeman, M. & Wiqvist, N. (1970). 「非妊娠ヒト子宮の in vivo 収縮に対するプロスタグランジンＥ１及びＦ２の静脈内投与の効果（Effect of intravenous administration of Prostaglandin E1, and F2 on the contractility of the non-pregnant human uterus in vivo）」Acta Obstetricia et Gynecologia Scandinavica - Supplement, 5, 19-25｝。プロスタグランジンはまた、疼痛受容体を増感させることによって直接の疼痛産生特性を有することも知られているが、これも月経時に感じられる疼痛に関与している可能性がある｛「プロスタグランジンとトロンボキサン：ＮＡＴＯ先端試験研究所によるプロスタグランジンの先端研究（Prostaglandins and Thromboxanes: NATO advanced study institute on advances on prostaglandins）」中 433-442 頁 Ferreira, S. (1976)「疼痛と発熱（Pain and Fever）」ニューヨーク：プレナム・プレス｝。ＮＳＡＩＤは、臨床試験において、ある種の月経困難症患者で疼痛を軽減して子宮運動性を回復させることが示された｛Pulkkinen, M. O. & Csapo A. I. (1978). 「月経困難症患者の子宮内圧及び月経痛に対するイブプロフェンの効果（The effect of ibuprofen on the intrauterine pressure and menstrual pain of dysmenorrhoeic patients）」Prostaglandins, 15, 1055-62｝。しかしながら、それはすべての月経困難症罹患者、特に重篤な月経困難症の罹患者に有効であるわけではない。さらに、それには、上部消化管症状、眠気、及び耳鳴が含まれる副作用がつきものである。これらの薬剤は、経口避妊薬に対して、１ヶ月に２〜３日間だけ投与するという利点を確かに有し、それらは、月経困難症に関連した副作用（めまい、吐き気、及び嘔吐）のいくらかを抑制する。
【０００８】
経口避妊薬は、避妊も望まれる場合であれば、ほとんどの女性にとって第二選択の療法である。それらは、月経周期を通して連続的に服用しなければならず、月経痛を顕著に消失させるには、３周期までかかる場合がある。ＮＳＡＩＤとは対照的に、経口避妊薬は、月経血の量を低下させること｛Nakano, R. & Takemura, H. (1971). 「機能性月経困難症の治療：二重盲検試験（Treatment of functional dysmenorrhoea; a double-blind study）」Acta Obstetrica et Gynaecologica Japonica, 18, 41-4｝、排卵を抑制すること、及び子宮内膜量を減少させることによって月経痛を予防する。このようにしてプロスタグランジン産生の減少をもたらす｛Chan, W. Y. & Hill, J. C. (1978). 「非月経困難症被検者及び月経困難症被検者における月経プロスタグランジンレベルの定量（Determination of menstrual prostaglandin levels in non-dysmenorrheic and dyamenorrheic subjects）」Prostaglandins, 15, 365-75｝。しかしながら、ＮＳＡＩＤと経口避妊薬では、特に重篤な月経困難症の患者で、不変の失敗率（１０〜１５％）があるという認知された問題がある｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］．American Family Physician, 60, 489-96；Schroeder, B. & Sanfilippo, J. S. (1999).「青年期の月経困難症と骨盤痛（Dysmenorrhoea and pelvic pain in adolescents）［概説］．Pediatric Clinics of North America, 46, 555-71｝。現在、より新しい、さほど十分に特性決定されていない治療法が研究されているが、それらはまだ現行の療法オプションとして利用可能ではない。これらには、Ｖ１ＡアンタゴニストとＮＯドナーを用いた治療が含まれる。
【０００９】
バソプレッシンに対する子宮の生理学的な応答は、月経周期を通して変化して、最大の感受性が月経前に観察される｛Bossmar, T., Akerlund, M., Szamatowicz, J., Laudanski, T., Fantoni, G. & Maggi, M. (1995).「非妊娠女性におけるバソプレッシン及びオキシトシンの受容体仲介性の子宮効果（Receptor-mediated uterine effects of vasopressin and oxytocin in non-pregnant women）」British Journal of Obstetrics & Gynaecology, 102, 907-12｝。血漿バソプレッシンレベルは、対照患者の月経周期の間、有意に変化しない｛Forsling, M. L., Akerlund, M. & Stromberg, P. (1981).「月経周期の間のバソプレッシン血漿濃度の変動（Variations in plasma concentrations of vasopressin duting the menstrual cycle）」Journal of Endocrinology, 89, 263-6｝。しかしながら、月経困難症の女性では、月経の前もその間もバソプレッシンレベルが上昇する｛Hauksson, A., Akerlund, M., Forsling, M. L. & Kindahl, H. (1987).「本態性月経困難症の女性における、組み合わせた経口避妊薬での治療の前とその間のバソプレッシン及びプロスタグランジンＦ２α代謝産物の血漿濃度（Plasma concentrations of vasopressin and a prostaglandin F2 alpha metabolite in women with primary dysmenorrhoea before and during treatment with a combined oral contraceptive）」Journal of Endocrinology, 115, 355-61｝。これは、疼痛の増加、子宮筋層の機能亢進、そして子宮血流の減少に伴って生じる｛Ekstrom, P., Akerlund, M., Forsling, M., Kindahl, H., Laudanski, T. & Mirugacz, G. (1992).「本態性月経困難症の女性における経口避妊薬治療後のバソプレッシン放出の刺激が子宮収縮に及ぼす効果（Stimulation of vasopressin release in women with primary dysmenorrhoea and after oral contraceptive treatment--effect on uterine contractility）」British Journal of Obstetrics & Gynaecology, 99, 680-4｝。月経及び月経困難症の機序におけるバソプレッシンの貢献の正確な詳細は依然として不明である。しかしながら、このペプチドは、Ｖ２型の腎臓調節機能とは異なるバソプレッシンＶ１Ａ受容体を介して、子宮筋層｛Bossmar, T., Brouard, R., Doberi, A. & Akerlund, M. (1997).「バソプレッシン誘発性の子宮収縮に対するＳＲ４９０５９、経口活性Ｖ１ａバソプレッシン受容体アンタゴニストの効果（Effects of SR49059, an orally active V1a vasopressin receptor antagonist, on vasopressin-induces uterine cntractions）」British Journal of Obstetrics & Gynecology, 104, 471-7｝と子宮動脈｛Kostrzewska, A., Laudanski, T., Steinwall, M., Bossmar T., Serradeli-Le Gal, C. & Akerlund, M. (1998).「バソプレッシンや他の血管活性物質へのヒト子宮動脈の応答に対するバソプレッシンＶ１ａ受容体アンタゴニスト、ＳＲ４９０５９の効果（Effects of the vasopressin V1a receptor antagonist, SR49059, on the response of human uterine arteries to vasopressin and other vasoactive substances）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 77, 3-7｝のいずれの平滑筋活性に対しても、顕著な収縮効果を有する。
【００１０】
経口活性Ｖ１Ａアンタゴニストが月経困難症の予防において有意な治療利益を有するという臨床証拠がある｛Akerlund, M. (1987).「本態性月経困難症はバソプレッシンアンタゴニストにより緩和し得るか？ パイロット試験の結果（Can primary dysmenorrhoea be alleviated by a vasopressin antagonist? Results of a pilot study）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 66, 459-61｝。二重盲検の無作為プラセボ対照交差試験において、Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ（ＳＲ４９０５９）は、月経を調節する機序に影響することなく、月経困難症の女性の疼痛の強度を用量依存的に抑制した｛Brouard, R., Bossmar, T., Fournie-Lioret, D., Chassard D., & Akerlund, M. (2000).「月経困難症の予防におけるＳＲ４９０５９、経口活性Ｖ１ａバソプレッシン受容体アンタゴニストの効果（Effect of SR49059, an orally active V1a vasopressin receptor antagonist, in the prevention of dysmenorrhoea）」BJOG: an international Journal of Obstetrics & Gynaecology, 107, 614-9｝。この化合物はまた、オキシトシン受容体で活性を明示する。ペプチドバソプレッシンＶ１Ａアンタゴニスト／オキシトシン受容体アンタゴニストの１−デアミノ−２−Ｄ−Ｔｙｒ （Ｏｅｔ）−４−Ｔｈｒ−８−Ｏｒｎ−オキシトシンは、静脈内で投与するとき、月経困難症の治療にも有効である｛Akerlund, M. (1987).「本態性月経困難症はバソプレッシンアンタゴニストにより緩和し得るか？ パイロット試験の結果（Can primary dysmenorrhoea be alleviated by a vasopressin antagonist? Results of a pilot study）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 66, 459-61｝。
【００１１】
酸化窒素は、平滑筋の弛緩及び血管拡張に仲介する。臨床試験は、早産｛Lees, C., Campbell, S., Jauniaux, E., Brown, R., Ramsay, B., Gibb, D., Moncada, S. & Martin, J. F. (1994).「三硝酸グリセリン、酸化窒素ドナーでの早産の阻止と妊娠の延長（Arrest of preterm labour and prolongation of gestation with glyceryl trinitrate, a nitric oxide donor）」［論評］．Lancet, 343, 1325-6｝と月経困難症｛Pittrof, R., Lees, C., Thompson, C., Pickles, A., Martin, J. F. & Campbell, S. (1996).「重症月経困難症の女性の疼痛を制御する三硝酸グリセリンパッチ製剤の交差試験（Crossover study of glyceryl trinitrate patches for controlling pain in women with severe dysmenorrhoea）」Bmj, 312, 884.｝の両方で子宮筋層の収縮を阻害することに対するＮＯドナーの有益な効果を示した。しかしながら、ＮＯドナーでは副作用が報告されていて、最も一般的であるのは、頭痛、めまい、及び潮紅である｛Ghazizaceh, S., Dadkhah, T. & Modarres, M. (2002).「本態性月経困難症への三硝酸グリセリン軟膏剤の局所適用（Local application of glyceryl trinitrate ointment for primary dysmenorrhoea）」International Journal of Gynaecology & Obstetrics, 79, 43-4｝。患者の１０％で適用部位に局所紅斑が見られ、収縮期及び弛緩期の血圧のわずかな降下が報告されているが、低血圧症や頻脈が注目された症例はない｛Ghazizadeh, S., Dadkhah, T. & Modarres, M. (2002).「本態性月経困難症への三硝酸グリセリン軟膏剤の局所適用（Local application of glyceryl trinitrate ointment for primary dysmenorrhoea）」International Journal of Gynaecology & Obstetrics, 79, 43-4｝。ＮＯドナーは、in vitro で非妊娠子宮筋層の自発収縮を阻害することが示されているが、可溶性のグアニル酸シクラーゼ阻害剤がＮＯドナー仲介性の弛緩を遮断することができないので、この応答は、ｃＧＭＰ経路を介して仲介されるわけではない。故に、ｃＧＭＰレベルを上昇させること（ＰＤＥ阻害剤を投与することによって）により子宮筋層の広汎な弛緩を引き起こすことはあり得ないと思われるので、それが月経困難症を治療するための明快なアプローチを提供することはないだろう。しかしながら、この応答は、カルシウム依存性カリウムチャネルブロッカーによって遮断することができる｛Bradley, K. K., Buxton, I. L., Barber, J. E., McGaw, T. & Bradley, M, E. (1998).「酸化窒素は、ｃＧＭＰ非依存性の機序によりヒト子宮筋層を弛緩させる（Nitric oxide relaxes human myometrium by a cGMP-independent mechanism）」American Journal of Physiology, 275, C1668-73；Buxton, I. L., Kaiser, R. A., Malmquist, N. A. & Tichenor, S. (2001).「分娩又は非分娩ヒト子宮筋層のＮＯ誘発性弛緩は、サイクリックＧＭＰにより仲介されない（NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human myometrium is not mediated by cyclic GMP）」British Journal of Pharmacology, 134, 206-14｝。
【００１２】
ｅＮＯＳとｉＮＯＳの両方がヒトの子宮筋層に存在することを示す免疫組織化学データはあるが｛Chwalisz, K. & Garfield, R. E. (2000).「着床及び月経における酸化窒素の役割（Role of nitric oxide in implantation and menstruation）」［概説］．Human Reproduction, 15, 96-111｝、機能組織実験では、自発性収縮とアゴニスト誘発性収縮の両方に対するＮＯの弛緩効果が、ｃＧＭＰ非依存性の経路を介することが示されている｛Bradley, K. K., Buxton, I. L., Barber, J. E., McGaw, T. & Bradley, M, E. (1998).「酸化窒素は、ｃＧＭＰ非依存性の機序によりヒト子宮筋層を弛緩させる（Nitric oxide relaxes human myometrium by a cGMP-independent mechanism）」American Journal of Physiology, 275, C1668-73；Buxton, I. L., Kaiser, R. A., Malmquist, N. A. & Tichenor, S. (2001).「分娩又は非分娩ヒト子宮筋層のＮＯ誘発性弛緩は、サイクリックＧＭＰにより仲介されない（NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human myometrium is not mediated by cyclic GMP）」British Journal of Pharmacology, 134, 206-14｝。故に、ｃＧＭＰレベルを上昇させること（ＰＤＥ阻害剤を投与することによって）により子宮筋層の広汎な弛緩を引き起こすことはあり得ないと思われるので、それが月経困難症を治療するための明快なアプローチを提供することはないだろう。このような仮説は、ＰＤＥ阻害剤（例えば、ＩＢＭＸ、ザプリナスト、ロリプラム、及びＭｉｌｒｉｎｏｎｅ）が１００μＭほどの高い濃度でさえ、帝王切開施行中の女性より採取した子宮筋層由来の子宮収縮に対して可変の抑制活性（２１〜９３％）を有することが示された知見により支持される｛Bardou, M., Cortijo, J., Loustalot, C., Taylor, S., Perales-Marin, A., Mercier, F. J., Dumas, M., Deneux-Tharaux, C., Frydman, R., Morcillo, E. J. & Advenier, C. (1999).「ヒト末端子宮筋層に対する選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤の効果に関する薬理学的及び生化学的研究（Pharmacological and biochemical study on the effects of selective phoshodiesterase inhibitors on human term myometrium）」Naunyn-Schmiedebergs Archives of Pharmacology, 360, 457-63｝。
【００１３】
我々は、子宮筋層への血流の低下に関連した低酸素疼痛が、動脈そのもの、並びに子宮平滑筋の収縮に対する血管作用剤（ＡＶＰのような）の直接効果の結果であり、子宮筋層の血管の閉塞を引き起こす可能性があるという仮説を設けた。従って、子宮の血流を高めること（ＰＤＥ阻害剤及び／又はＶ１Ａアンタゴニストを用いて）を介した低酸素状態の抑制と同時に子宮筋層の収縮を抑制（ＰＤＥ阻害剤及び／又はＶ１Ａアンタゴニストを用いて）することは、使用する薬剤の組合せの用量についてより低い必要量をもたらすだろう。換言すると、子宮筋層に見られるものに優るそれ以上の相加相乗効果が観察される可能性がある。
【００１４】
驚くべきことに、バソプレッシン受容体ファミリーのアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤を用いた組合せ療法が月経困難症の治療において予想外の相乗的な改善をもたらすことが今回見出された。同時的、連続的、又は分離的に投与するとき、バソプレッシンアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤には、有効成分間の相乗的な相互作用により、先行技術の化合物及び組合せよりも、それらがより強力で、より長い作用時間を有し、疾患進行とそれ故に外科的介入の必要性をより有効に抑え、より広範囲の活性を有し、より安定であり、より少ない副作用を有するか又はより選択的である（特に、それらは月経困難症において有益な効果を有する場合がある）、又は他のより有用な特性を有するという利点があるかもしれない。
【００１５】
本発明の組合せは、子宮筋層の過剰収縮、子宮動脈の血管収縮、そして後続の疼痛の治療法を提供するだけでなく、子宮筋層及び子宮動脈の基底緊張を抑えて、それらがより弛緩した状態であり続けることを可能にする治療法を提供する。月経困難症は周期性であるが、子宮筋層と子宮動脈がより弛緩した状態を毎月維持すれば、長期的には、これにより将来の症状緩和に必要とされる治療が抑えられる可能性があるという仮説を我々は設けている。
【００１６】
従って、本発明によれば、（Ａ）ＰＤＥ阻害剤又はその医薬的に許容される誘導体と（Ｂ）バソプレッシン受容体アンタゴニスト又はその医薬的に許容される誘導体の組合せの、月経困難症の治療用医薬品の製造における使用が提供される。
【００１７】
さらに、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療への使用が提供される。
なおさらに、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療における（Ａ）及び（Ｂ）の同時、連続、又は分離投与による組合せ療法用医薬品の製造への使用が提供される。
【００１８】
あるいは、一緒になって有効である、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の量をそのような治療の必要な被検者へ投与することを含んでなる、月経困難症を治療する方法が提供される。
【００１９】
さらに、月経困難症を治療するときの同時、分離、又は連続使用のための組合せ調製物として、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）を含有する医薬品が提供される。
月経困難症は、本態性又は続発性の月経困難症であり得る。続発性月経困難症は、子宮平滑筋腫又は子宮内避妊用具のような、増加した子宮緊張の結果であり得る。
【００２０】
本発明の１つの側面において、ＰＤＥ標的は、以下のＰＤＥ酵素：ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５、ＰＤＥ７、ＰＤＥ８、ＰＤＥ９、ＰＤＥ１０、ＰＤＥ１１のいずれかの１以上より選択される。
【００２１】
本発明の１つの側面において、バソプレッシン受容体アンタゴニストは、バソプレッシン受容体ファミリーメンバーを阻害して、ここで該受容体は、以下のバソプレッシン受容体サブタイプ：Ｖ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ２、及びオキシトシンのいずれかの１以上より選択される。好ましくは、受容体は、Ｖ１ａ又はオキシトシンより選択される。より好ましくは、受容体はＶ１ａである。
【００２２】
目的の特別なＰＤＥ酵素は、以下の通りである：
【００２３】
【表１】
【００２４】
好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ４又はＰＤＥ５阻害剤である。より好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ５阻害剤である。
ｃＧＭＰ ＰＤＥ５酵素の阻害剤（「ＰＤＥ５阻害剤」）は、ＰＤＥ５酵素への高いアフィニティー及び選択性を有し、他のホスホジエステラーゼアイソフォームにはほとんど又は全くアフィニティーがない化合物を特徴とする。それらは、いくつかの適応症について記載されてきた。特に、シルデナフィル：（５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン）（ＶＩＡＧＲＡ（登録商標））は、いくつかの心臓血管障害について記載されて、男性の勃起不全（ＭＥＤ）に経口で有効な最初の治療薬として奏功することが証明されている。
【００２５】
ある特定のＰＤＥ５阻害剤の適格性は、標準の創薬実践に従った、文献の方法を使用するその効力及び選択性の評価に続く、その毒性、吸収、代謝、薬物動態、等の評価によって容易に決定することができる。
【００２６】
ＰＤＥ５阻害剤は、好ましくは１００ナノモル濃度未満、より好ましくは５０ナノモル濃度未満、なおより好ましくは１０ナノモル濃度未満のＩＣ５０を有する。
好ましくは、本発明による医薬組合せに使用するＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ５酵素に選択的である。それらは、好ましくは１００より高い、より好ましくは３００より高い、ＰＤＥ３に対するＰＤＥ５の選択性を有する。より好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ３とＰＤＥ４の両方に対して１００より高い、より好ましくは３００より高い選択性を有する。選択性の比は、当業者によって容易に決定することができる。ＰＤＥ３及びＰＤＥ４酵素へのＩＣ５０値は、確立された文献の方法論を使用して決定することができる。S. A. Ballard et al, Journal of Urology, 1998, 159巻, 2164-2171頁と以下の記載を参照のこと。
【００２７】
ＰＤＥ５、ＰＤＥ２、等の阻害の測定は、以下のアッセイによって例示する。
本発明による使用に適した化合物は、強力で選択的なＰＤＥ５阻害剤である。サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）及びサイクリックアデノシン３’，５’−一リン酸（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼに対する in vitro ＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要とされる化合物の濃度）の測定によって決定することができる。
【００２８】
必要とされるＰＤＥ酵素は、本質的には W. J. Thompson and M. M. Appleman (Biochem., 1971, 10, 311) の方法によって、ヒト海綿体、ヒト及びウサギの血小板、ヒト心室、ヒト骨格筋、及びウシ網膜が含まれる多様な供給源より、単離することができる。特に、ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ５）とｃＧＭＰ阻害性ｃＡＭＰ ＰＤＥ（ＰＤＥ３）は、ヒト海綿体組織、ヒト血小板、又はウサギ血小板より入手することができて；ｃＧＭＰ刺激性ＰＤＥ（ＰＤＥ２）は、ヒト海綿体より入手することができて；カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ（ＰＤＥ１）は、ヒト心室より；ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ４）は、ヒト骨格筋より；そして光受容体ＰＤＥ（ＰＤＥ６）は、ウシ網膜より入手することができる。ホスホジエステラーゼ７〜１１は、ＳＦ９細胞へトランスフェクトした全長のヒト組換えクローンより産生することができる。
【００２９】
アッセイは、W. J. Thompson et al. (Biochem., 1979, 18, 5228) の「バッチ」法の改良法を使用して実施しても、製品コードＴＲＫＱ７０９０／７１００のもとにアマーシャム社により記載されるプロトコールの改良法を使用するＡＭＰ／ＧＭＰの直接検出のシンチレーション近似アッセイを使用して実施してもよい。要約すると、ＰＤＥ阻害剤の効果は、様々な阻害剤濃度と少量の基質（ｃＧＭＰ又はｃＡＭＰ、３：１比の非標識：［３Ｈ］標識、ＩＣ５０≡Ｋｉとなるように、約１／３Ｋｉの濃度）の存在下に、一定量の酵素をアッセイすることによって検討することができる。最終アッセイ量は、１００μｌまでのアッセイ緩衝液［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４），５ｍＭ ＭｇＣｌ２，１ｍｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミン］からなる。酵素で反応を開始して、３０℃で３０〜６０分間インキュベートして、＜３０％の基質代謝回転を得て、５０μｌのケイ酸イットリウムＳＰＡビーズ（ＰＤＥ９及び１１についてそれぞれ３ｍＭの非標識サイクリックヌクレオチドを含有する）で終了させる。プレートを再びシールして、２０分間振り混ぜ、その後でこのビーズを暗所に３０分間静置してから、ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダー（パッカード、コネティカット州メリデン）で計数する。放射活性単位を非阻害対照（１００％）の％活性へ変換し、阻害剤濃度に対してプロットし、「Ｆｉｔ Ｃｕｒｖｅ」マイクロソフト Ｅｘｃｅｌ拡張プログラム（extension）を使用して、阻害剤のＩＣ５０値を得る。
【００３０】
機能アッセイ
これは、S. A. Ballard et al. (Brit. J. Pharmacol., 1996, 118 (suppl.), 抄録 153P）又は S. A. Ballard et al. (J. Urology, 1998, 159巻, 2164-2171) に記載されるように、予め収縮したウサギの海綿体組織切片のナトリウムニトロプルシド又は電場刺激誘導性の弛緩を高める、本発明のＰＤＥ５阻害剤の能力を決定することによって、in vitro で評価することができる。
【００３１】
in vitro ＰＤＥ阻害活性
サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）ホスホジエステラーゼに対する in vitro ＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要とされる化合物の濃度）の測定によって決定することができる。
【００３２】
本発明による使用に適したＰＤＥ５阻害剤は、上記に示す定義を満足させるものであればよく、国際特許出願公開公報番号ＷＯ０３／０００６９１；ＷＯ０２／６４５９０；ＷＯ０２／２８８６５；ＷＯ０２／２８８５９；ＷＯ０２／３８５６３；ＷＯ０２／３６５９３；ＷＯ０２／２８８５８；ＷＯ０２／００６５７；ＷＯ０２／００６５６；ＷＯ０２／１０１６６；ＷＯ０２／００６５８；ＷＯ０１／９４３４７；ＷＯ０１／９４３４５；ＷＯ００／１５６３９；及びＷＯ００／１５２２８；並びに米国特許第６，１４３，７４６；６，１４３，７４７；及び６，０４３，２５２号に言及されるＰＤＥ５阻害剤；ＥＰ−Ａ−０４６３７５６に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０５２６００４に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０６１０４に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１４９に開示される異性体のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／１２０９５に開示されるキナゾリン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９４／０５６６１に開示されるピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９４／００４５３に開示されるプリン−６−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９８／４９１６６に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９９／５４３３３に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５１に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ００／２４７４５に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５０に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１９９７８に開示されるヘキサヒドロピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；ＷＯ００／２７８４８に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；ＥＰ−Ａ−１０９２７１９と国際特許出願公開公報ＷＯ９９／２４４３３に開示されるイミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−オンと、国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１２４に開示される二環系化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０１／２７１１２に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ０１／２７１１３に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−１０９２７１８に開示される化合物とＥＰ−Ａ−１０９２７１９に開示される化合物；ＥＰ−Ａ−１２４１１７０に開示される三環系化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７４７７４に開示されるアルキルスルホン化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７２５８６に開示される化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７９２０３に開示される化合物と、ＷＯ０２／０７４３１２に開示される化合物を含めてよい。
【００３３】
上記の特許出願公開公報と学術論文の内容と、特にその中の特許請求項の治療活性化合物と例示化合物の一般式は、そのまま参照により本明細書に組み込まれる。
本発明による使用に好ましいＶ型ホスホジエステラーゼ阻害剤（ＰＤＥ５阻害剤）には：
１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジンとしても知られる、５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル、例えば、Ｖｉａｇｒａ（登録商標）として販売されている）（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６を参照のこと）； ５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９８／４９１６６を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
３−エチル−５−｛５−［４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル］−２−（［（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］オキシ）ピリジン−３−イル｝−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
１−｛６−エトキシ−５−［３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル］−３−ピリジニルスルホニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られる５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例８を参照のこと）；
５−［２−イソブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例１５を参照のこと）；
５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例６６を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１２４を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１３２を参照のこと）；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル、ＩＣ−３５１、Ｃｉａｌｉｓ（登録商標））、即ち国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びに実施例１、３、７、及び８の化合物；
１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］−ａｓ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−エチルピペラジンとしても知られる２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル、ＬＥＶＩＴＲＡ（登録商標））、即ち国際特許出願公開公報ＷＯ９９／２４４３３の実施例２０、１９、３３７、及び３３６の化合物；
国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１２４（エーザイ）の実施例１１の化合物；
Rotella D P, J. Med. Chem., 2000, 43, 1257 からの化合物３及び１４；
４−（４−クロロベンジル）アミノ−６，７，８−トリメトキシキナゾリン；
Ｎ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］−ピリミジン−５−イル）−４−プロポキシフェニル］スルホニル］−１−メチル−２−ピロリジンプロパンアミド［「ＤＡ−８１５９」（ＷＯ００／２７８４８の実施例６８）］；及び
７，８−ジヒドロ−８−オキソ−６−［２−プロポキシフェニル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｇ］キナゾリン、及び１−［３−［１−［（４−フルオロフェニル）メチル］−７．８−ジヒドロ−８−オキソ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｇ］キナゾリン−６−イル］−４−プロポキシフェニル］カルボキサミドが含まれる。
【００３４】
本発明と組み合わせて有用であり得るなお他のタイプのｃＧＭＰ ＰＤＥ５阻害剤には：４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、一ナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、一ナトリウム塩；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．４５１６（グラクソウェルカム）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０５１（バイエル）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６４（協和発酵；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６９（シェーリングプラウ）；ＧＦ−１９６９６０（グラクソウェルカム）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（エーザイ）；Ｂａｙ−３８−３０４５及び３８−９４５６（バイエル）；ＦＲ２２９９３４及びＦＲ２２６８０７（藤沢薬品）；及びＳｃｈ−５１８６６が含まれる。
【００３５】
より好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ＤＡ−８１５９、及び５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンより選択される。
【００３６】
最も好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、シルデナフィルとその医薬的に許容される塩である。クエン酸シルデナフィルが好ましい塩である。
バソプレッシン受容体ファミリーは、Ｖ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ２、及びオキシトシン受容体を含む｛Thibonnier M., Exp. Opin. Invest. Drugs (1998) 7(5), 729-740｝。本発明での使用のためのバソプレッシン受容体アンタゴニストは、好ましくは、Ｖ１ａ受容体とその近縁のオキシトシン受容体に選択的である。オキシトシン受容体での活性は、有益である場合がある。より好ましくは、本発明での使用のためのバソプレッシン受容体アンタゴニストは、Ｖ１ａ受容体に選択的である。
【００３７】
本発明における使用に適したバソプレッシン受容体アンタゴニストの例は、ＵＳ６，０９０，８１８；ＥＰ０８７３３０９；ＷＯ９８／２５９０１；ＷＯ０２／０８３６８５；ＪＰ２０００−６３３６３；及びＷＯ０２／３２８６４に開示される。
【００３８】
本発明での使用のためのＶ１ａ受容体アンタゴニストの例は、ＳＲ４９０４９（Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ）、アトシバン（Ｔｒａｃｔｏｃｉｌｅ（登録商標））、コニバプタン（ＹＭ−０８７）、及びＯＰＣ２１２６８である。さらに、ＷＯ０１／５８８８０に記載されるＶ１ａ受容体アンタゴニストは、本発明における使用に適している。
【００３９】
本発明での使用のためのＶ１ａアンタゴニストのさらなる例は、ＰＣＴ／ＩＢ０３／０４５８７（未公開）とＧＢ特許出願番号０２０２８５２．８（未公開）に開示され、特に、８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレン、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物が好ましい。
【００４０】
ＧＢ特許出願番号０２０２８５２．８は、式（Ｉ）：
【００４１】
【化１】
【００４２】
の化合物、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物を開示する［式中、
Ｗは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ａ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、フェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジル、−ＣＯＲ２、−ＣＯ２Ｒ２、−ＣＯ−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ２Ｒ３、−ＳＯ２Ｒ２、−（ＣＨ２）ｂ−ＯＲ２、−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ２Ｒ３、又はＯ、Ｎ、及びＳより選択される１以上のヘテロ原子を含有する３〜８原子の飽和複素環を表し；
ＸとＹは、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｒ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＮ−、−（ＣＨ２）ｄ−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＲ４ＳＯ２Ｍｅ、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＯＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＨＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＲ４ＣＯＲ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＯＲ６、又は−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯ２Ｒ６を表し；
環Ａは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、又はアゼチジニル基を表し；
環Ｂは、フェニル、ピリジニル、又はピリミジニル基（ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＮＨ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｒ７、及び−（ＣＨ２）ｆ−ＯＲ８より独立して選択される１以上の基で随意に置換される）を表し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ７は、独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｃ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、フェニル、ベンジル、ピリジル、又はピリミジルを表すか；
又は、Ｒ２とＲ３、又はＲ４とＲ５は、それらが付く窒素原子と一緒に、独立して、３〜８原子の複素環を表し；
Ｒ６とＲ８は、独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｃ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、−（ＣＨ２）ｅ−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｅ−ＯＲ４、フェニル、ベンジル、ピリジル、又はピリミジルを表し；
ｎ＝０、１、又は２であり；
ａ、ｃ、ｄ、及びｆは、いずれも独立して、０、１、２、又は３より選択され；
ｂとｅは、独立して、２又は３より選択される］。
【００４３】
以下のスキームは、式（Ｉ）の化合物の製法を例示し、その全体を通して、環Ａ及びＢと基：Ｗ、Ｘ、Ｙとｎは、他に述べなければ、上記に定義される通りである。（Ｉ’）は、ＷがＮＲ１であるときの（Ｉ）を表す。
【００４４】
【化２】
【００４５】
工程（ａ）：オキサジアゾール（ＩＩ）を酸触媒と反応させて、式（Ｖ）の化合物を得る。典型的には、この反応は、ｐ−ＴＳＡのような好適な酸性触媒、又は塩化マグネシウムのようなルイス酸触媒とともに、キシレンのような高沸点溶媒を随意に使用して、出発材料を１００〜１５０℃のような上昇温度まで１〜４８時間加熱することによって行う。
【００４６】
好ましい条件は：アミン（ＩＩ）と触媒Ｐ−ＴＳＡ、キシレン中、１４０℃で４８時間である。
Ｗ＝ＮＲ１であるとき：
【００４７】
【化３】
【００４８】
［Ｚ’は、ＯＨ又はハロ、典型的にはＣｌである］。
化合物（ＶＩ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
【００４９】
工程（ｂ）：アミン（Ｖ）の化合物（ＶＩ）との反応は、標準法によって行なうことができる。
Ｒ１＝ＣＯＲ２、ＣＯ２Ｒ２、ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ３Ｒ４、ＳＯ２Ｒ２であるとき、典型的には、このカップリングは：
（ｉ）好適な溶媒においてアシル／スルホニル／クロリド（ＶＩ）＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに；又は
（ｉｉ）好適な溶媒において、随意に触媒の存在下の酸（ＶＩ）と慣用のカップリング剤＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに；及び
（ｉｉｉ）Ｒ１がアリール基を表すときは、好適な溶媒において、随意に触媒の存在下のハロゲン化アリール（ＶＩ）＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに使用することによって実行することができる。
【００５０】
典型的には、条件は、以下の通りである：
アシル化／スルホニル化、Ｚ＝Ｃｌ
（ｉ）過剰の塩化アシル／スルホニル（ＶＩ）（in situ 生成）、１当量のアミン（Ｖ）、随意に過剰の３級アミン（Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ（Hunig）塩基、又はＮＭＭのような）とともに、ＤＣＭ又はＴＨＦ中、加熱せずに１〜２４時間。
好ましい条件は：アミン（Ｖ）、１．５当量の酸／塩化スルホニル（ＶＩ）、１．５当量のＮＭＭ、ＤＣＭ中、室温で１６時間。
【００５１】
アミド結合形成、Ｚ＝ＯＨ
（ｉｉ）過剰の酸（ＶＩ）、ＷＳＣＤＩ／ＤＣＣ、及びＨＯＢＴ／ＨＯＡＴ、１当量のアミン（Ｖ）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜４８時間；又は
過剰の酸（ＶＩ）、ＰＹＢＯＰ（登録商標）／ＰｙＢｒＯＰ（登録商標）／Ｍｕｋａｉｙａｍａ（向山）試薬、１当量のアミン（Ｖ）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜２４時間。
【００５２】
アリール化（Ｒ１＝アリール、ヘテロアリール）、Ｚ＝ハロ
（ｉｉｉ）化合物（Ｖ）のアリール化は、好適な塩基（ｔ−ＢｕＯＮａ）、触媒量の好適な添加剤（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチルのような）と好適なパラジウム触媒を、トルエン中、上昇温度で１〜２４時間、不活性気体下に使用するパラジウム触媒化交差カップリング反応によって行って、化合物（Ｉ’）を得ることができる。あるいは、化合物（Ｉ’）は、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、又はヒューニッヒ塩基のような塩基とともに、ＤＭＦ、ＮＭＰ、又は１，４−ジオキサンのような好適な溶媒中、５０℃〜１４０℃のような上昇温度で約１〜４８時間加熱することによって、アミン（Ｉ）の化合物（ＶＩ）との反応により製造してよい。
【００５３】
好ましい条件は：１〜２．５当量のハロゲン化物（ＶＩ）、１〜２当量の炭酸カリウム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、５０℃で４〜１８時間；又は
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＶＩ）、２〜３当量のヒューニッヒ塩基、１，４−ジオキサン又はＮＭＰ中、還流で１８〜４８時間；又は
１当量のハロゲン化物（ＶＩ）、３．５当量のＮａＯｔ−Ｂｕ、０．０８当量のＢＩＮＡＰ、０．４当量のＰｄ（ｄｂａ）２、トルエン中、７０℃で８時間である。
【００５４】
あるいは、化合物（Ｉ’）は、以下のスキーム１．３に示す経路により製造してよい：
【００５５】
【化４】
【００５６】
化合物（ＶＩＩ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
工程（ｃ）：トリアセトキシホウ水素化ナトリウム又はシアノホウ水素化ナトリウムのような還元剤の存在下にアミン（Ｖ）を過剰のアルデヒド／ケトン（ＶＩＩ）と反応させて、式（Ｉ’）の化合物を得る。この反応は：
ジクロロメタンのような好適な溶媒において２０℃〜８０℃のような温度で１〜４８時間、出発材料を撹拌すること、又は
四塩化チタン又はチタンテトライソプロポキシドのような好適なルイス酸触媒とともに、ジクロロメタン又はエタノールのような好適な溶媒中５０℃〜１００℃のような温度で１〜１８時間アミン（Ｖ）を過剰の化合物（ＶＩＩ）と加熱することに続く、ホウ水素化ナトリウムのような好適な還元剤での中間体イミン／イミニウム分子種の還元、又は酸化白金又はパラジウム担持カーボンのような好適な触媒上での水素化分解によって行なうことができる。
【００５７】
好ましい条件は：アミン（Ｖ）、１．５当量のアルデヒド／ケトン（ＶＩＩ）、２．０当量のトリアセトキシホウ水素化ナトリウム、ジクロロメタン中、室温で２時間である。
環ＢがＮ原子を介して環Ａへ連結して、ＷがＯ又はＳを表すときは：
【００５８】
【化５】
【００５９】
［Ｐｒｏｔは、窒素に適した保護基、例えば、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はアリルカルバメートを表す。教科書（例えば、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著）に見出されるような、窒素保護基の標準的な方法論を使用する。Ｚは、ハロゲンのような脱離基を表す］。
【００６０】
化合物（ＩＶ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
化合物（ＩＩＩ）のアリール化は、上記の工程（ｂ）に記載のように行なってよい。好ましい条件は：
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＩＶ）、１〜２当量の炭酸カリウム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、５０℃で４〜１８時間；又は
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＩＶ）、２〜３当量のヒューニッヒ塩基、１，４−ジオキサン又はＮＭＰ中、還流で１８〜４８時間；又は
１当量のハロゲン化物（ＩＶ）、３．５当量のＮａＯｔ−Ｂｕ、０．０８当量のＢＩＮＡＰ、０．４当量のＰｄ（ｄｂａ）２、トルエン中、７０℃で８時間である。
【００６１】
工程（ｄ）：化合物（ＩＸ）の脱保護化は、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著に記載されるような、標準の方法論を使用して行う。
【００６２】
ＰｒｏｔがＢｏｃであるとき、好ましい方法は：
塩化水素、１，４−ジオキサンのような好適な溶媒中、室温で１〜１６時間；又は
トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液中、１〜２時間である。
【００６３】
ＰｒｏｔがＣＢｚであるとき、好ましい方法は、エタノールのような溶媒において好適なパラジウム触媒を使用する水素化分解である。
Ｐｒｏｔがアリルカルバメートであるとき、好ましい条件は、チオ安息香酸とＰｄ２（Ｄｂａ）３のような好適なパラジウム触媒、１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタンのような好適なホスフィン添加剤とともに、テトラヒドロフラン中２０分間である。
【００６４】
環ＢがＮ原子を介して環Ａへ連結して、ＷがＮＲ１を表すときは：
【００６５】
【化６】
【００６６】
［Ｐｒｏｔは、窒素に適した保護基、例えば、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はアリルカルバメートを表す。教科書（例えば、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著）に見出されるような、窒素保護基の標準的な方法論を使用する。Ｚは、ハロ（典型的には、Ｃｌ）を表す。Ｚ’は、脱離基（典型的には、Ｃｌ又はＯＨを表す］。
【００６７】
化合物（ＩＶ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
化合物（ＩＸ’’）は、典型的には、上記の工程（ｂ）及び工程（ｃ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＸ’）より製造することができる。
【００６８】
化合物（ＩＩＩ’）は、典型的には、上記の工程（ｄ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＸ’’）より製造することができる。
化合物（Ｉ’）は、典型的には、上記の工程（ｂ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＩＩ’）のアリール化によって製造することができる。
【００６９】
化合物（ＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又は以下のスキーム３．１及び３．２に示すように製造することができる。
【００７０】
【化７】
【００７１】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００７２】
【化８】
【００７３】
化合物（ＸＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又は標準の方法論：例えば、安息香酸又はベンゾニトリルの還元を使用して製造することができる。
ＷがＮＲ１を表すとき：
工程（ｅ）：化合物（Ｘ）／（ＸＩＩ）を、随意にトリエチルアミン、ヒューニッヒ塩基、又は炭酸カリウムのようなプロトンアクセプターとしての過剰の塩基の存在下に、ＴＨＦ、トルエン、又はＤＭＦのような好適な高沸点溶媒において、５０℃〜１００℃の温度で１〜４８時間、過剰の化合物（ＸＩ）と反応させて、それぞれ化合物（ＩＩ）／（ＶＩＩＩ）を得る。
【００７４】
好ましい条件は：２．５当量の化合物（ＸＩ）、ＴＨＦ中、５０℃で４８時間である。
ＷがＯ又はＳを表すとき：
工程（ｅ）：化合物（Ｘ）／（ＸＩＩ）を、水素化ナトリウム、カリウムヘキサメチルジシラジド、ｎブチルリチウム、又は塩化マグネシウムイソプロピルのような塩基の存在下に、ＴＨＦ、トルエン、又はＮＭＰのような好適な溶媒において、０℃〜５０℃の温度で１〜２４時間、過剰の化合物（ＸＩ）と反応させて、それぞれ化合物（ＩＩ）／（ＶＩＩＩ）を得る。
【００７５】
好ましい条件は：３当量の化合物（ＸＩ）と２．５当量のＮａＨ、ＴＨＦ中、２０℃で２時間である。
化合物（Ｘ）及び（ＸＩＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又はスキーム４．１及び４．２に示すように製造することができる。
【００７６】
【化９】
【００７７】
［Ｘ’は、ＯＨ又はハロを表し、好ましくはＣｌを表す。ＬＧは、脱離基、典型的にはハロ、好ましくはクロロ又はブロモを表す］。
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００７８】
【化１０】
【００７９】
［Ｘ’は、ＯＨ又はハロを表し、好ましくはＣｌを表す。ＬＧは、脱離基、典型的にはハロ、好ましくはクロロ又はブロモを表す］。
化合物（ＸＩＶ）は、市販されているか、又は文献に知られている。
【００８０】
工程（ｆ）：化合物（ＸＩＶ）とヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）の反応は、標準法によって行なうことができる。
カップリングは：
（ｉ）好適な溶媒において、塩化アシル（ＸＩＶ）＋ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を過剰の酸アクセプターとともに；又は
（ｉｉ）好適な溶媒において、随意に触媒の存在下の酸（ＸＩＶ）と慣用のカップリング剤＋ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を過剰の酸アクセプターとともに使用して、行ってよい。
【００８１】
典型的には、条件は、以下の通りである：
（ｉ）酸クロリド（ＸＩＶ）（in situ 生成）、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、随意にＥｔ３Ｎのような三級アミン、ヒューニッヒ塩基、又はＮＭＭの過剰とともに、ＤＣＭ又はＴＨＦ中、加熱せずに１〜２４時間；又は
（ｉｉ）酸（ＸＩＶ）、ＷＳＣＤＩ／ＤＣＣ、及びＨＯＢＴ／ＨＯＡＴ、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜４８時間；又は
（ｉｉｉ）酸（ＸＩＶ）、ＰＹＢＯＰ（登録商標）／ＰｙＢｒＯＰ（登録商標）／Ｍｕｋａｉｙａｍａ試薬、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜２４時間。
【００８２】
好ましい条件は：ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、１．５当量の塩化クロロアセチル（ＸＩＶ）、１．５当量のＮＭＭ、ＤＣＭ中、室温で１６時間である。
工程（ｇ）：化合物（ＸＶ／ＸＶ’）の環化は、好適な脱水条件下に、上昇温度で１８時間まで行う。典型的には、ポリリン酸、オキシ塩化リン、無水トリフル酸のような脱水剤を２０〜１２０℃の温度で５分〜１２時間使用する。随意に、この反応は、ピリジンのような塩基やジクロロメタン及びアセトニトリルのような好適な溶媒の存在下に行ってよい。あるいは、Rigo et al. Synth. Commun. 16(13), 1665, 1986 の方法に従ってオキサジアゾール（ＸＩＩ／Ｘ）を製造してよい。
【００８３】
好ましい条件は：オキシ塩化リン、１００℃で８時間、又は２．５当量の無水トリフル酸、５当量のピリジン、ジクロロメタン中、２０℃で３時間である。
化合物（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又はスキーム５．１及び５．２に示すように製造することができる。
【００８４】
【化１１】
【００８５】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００８６】
【化１２】
【００８７】
化合物（ＸＶＩ）／（ＸＶＩ’）と保護化ヒドラジンは、市販されているか、又は対応するエステルの加水分解のような標準の方法論に知られている。
（ＸＶ／ＸＶ’）の製法について上記に記載の条件を使用してカルボン酸（ＸＶＩ）／（ＸＶＩ’）と保護化ヒドラジン（ここで、ｐｒｏｔ＊は、典型的にはＢｏｃである）をカップリングして、それぞれ化合物（ＸＶＩＩ／ＸＶＩＩ’）を得ることができて、次いで、上記に記載のような工程（ｄ）に記載の標準の方法論を使用してｐｒｏｔ＊を外して、（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を得る。
【００８８】
化合物（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）への代替経路を以下のスキーム６．１及び６．２に示す。
【００８９】
【化１３】
【００９０】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００９１】
【化１４】
【００９２】
工程（ｈ）：エステル（ＸＶＩＩＩ／ＸＶＩＩＩ’）をメタノールのような好適な溶媒中のヒドラジンと上昇温度で反応させて、ヒドラジド（ＸＶＩＩ／ＸＶＩＩ’）を得ることができる。
【００９３】
好ましい条件は：３当量のヒドラジン、メタノール中、還流で１８時間である。
本発明に使用のバソプレッシン受容体アンタゴニストは、以下に説明するスクリーニングで試験することができる。
【００９４】
１．０ Ｖ１Ａフィルター結合アッセイ
１．１ 膜調製
ヒトＶ１Ａ受容体を安定的に発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ）より調製する細胞膜で受容体結合アッセイを実施した。ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞系は、ライセンス契約の下で、Marc Thibonnier（オハイオ州クリーブランド Case Western Reserve University 医学校、医学部）の厚意により提供された。１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物において、５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃でＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を定常的に維持した。細胞ペレットのバルク産生のために、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１５ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物の培地を含有する８５０ｃｍ３ローラーボトルにおいて、付着性のＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を９０〜１００％の集密度まで増殖させた。集密したＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、氷冷ＰＢＳ中へ採取して、１，０００ｒｐｍで遠心分離した。細胞ペレットを使用まで−８０℃に保存した。細胞ペレットを氷上で融かし、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２からなり、プロテアーゼ阻害剤カクテル（ロッシュ）を補充した膜調製緩衝液においてホモジェナイズした。この細胞ホモジェネートを１０００ｒｐｍ、１０分、４℃で遠心分離して、上清を除いて、氷上に保存した。残るペレットを、先と同じようにホモジェナイズして遠心分離した。上清をプールして、２５，０００ｘｇで、４℃で３０分間遠心分離した。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び２０％グリセロールからなる凍結緩衝液にペレットを再懸濁させて、使用まで少量ずつ−８０℃に保存した。Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬と標準品としてのＢＳＡを使用して、タンパク濃度を決定した。
【００９５】
１．２ Ｖ１Ａフィルター結合
それぞれの新しい膜のバッチに対して、タンパク線形性に続いて飽和結合試験を実施した。曲線の直線部分で特異的な結合を与える膜濃度を選択した。次いで、様々な濃度の［３Ｈ］−アルギニンバソプレッシン、［３Ｈ］−ＡＶＰ（０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ）を使用する飽和結合試験を実施して、ＫｄとＢｍａｘを決定した。
【００９６】
ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ膜への［３Ｈ］−ＡＶＰ結合に対する効果を化合物について試験した（３Ｈ−ＡＶＰ；比活性６５．５Ｃｉ／ミリモル；ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶化し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び０．０５％ ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝液で１０％ ＤＭＳＯの作業濃度へ希釈した。２５μｌの化合物と２５μｌの［３Ｈ］−ＡＶＰ（膜バッチで定量したＫｄ以下の最終濃度、典型的には０．５ｎＭ〜０．６ｎＭ）を９６ウェルの丸底ポリプロピレンプレートへ加えた。２００μｌの膜の添加により結合反応を開始して、プレートを室温で６０分間穏やかに振り混ぜた。ペプチド粘着を防ぐために０．５％ポリエチレンイミンに予め浸漬した９６ウェルＧＦ／Ｂ ＵｎｉＦｉｌｔｅｒ Ｐｌａｔｅを通すＦｉｌｔｅｒｍａｔｅ Ｃｅｌｌ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（パッカード・インスツルメンツ）を使用する迅速濾過によって、この反応を止めた。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）及び５ｍＭ ＭｇＣｌ２を含有する１ｍｌの氷冷洗浄緩衝液でフィルターを３回洗浄した。このプレートを乾燥させ、各ウェルへ５０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−０（パッカード・インスツルメンツ）を加えた。プレートにシールして、TopCount Microplate Scintillation Counter（パッカード・インスツルメンツ）で計数した。非特異結合（ＮＳＢ）は、１μＭの非標識ｄ（ＣＨ２）５Ｔｙｒ（Ｍｅ）ＡＶＰ（［β−メルカプト−β，β−シクロペンタメチレンプロピオニル、０−Ｍｅ−Ｔｙｒ２，Ａｒｇ８］−バソプレッシン）（βＭＣＰＶＰ）（シグマ）を使用して定量した。放射リガンド結合データは、最小値を０％へ強制する４変数ロジスティック式を使用して解析した。傾きを自由に適合させ、有効（valid）曲線用に−０．７５と−１．２５の間に落とした。特異結合は、平均トータルｃｐｍより平均ＮＳＢ ｃｐｍを差し引くことによって計算した。試験化合物では、受容体へ結合したリガンドの量を、結合（％）＝［（試料ｃｐｍ−平均ＮＳＢ ｃｐｍ）／特異結合ｃｐｍ］ｘ１００として表現した。試験化合物の濃度に対して結合（％）をプロットして、Ｓ字状曲線を適合させた。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式：Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ）（ここで［Ｌ］は、ウェル中に存在するリガンドの濃度であり、Ｋｄは、スキャッチャードプロット解析より得られる放射リガンドの解離定数である）を使用して、阻害解離定数（Ｋｉ）を計算した。
【００９７】
２．０ Ｖ１Ａ機能アッセイ：ＡＶＰ／Ｖ１Ａ−Ｒ仲介性Ｃａ２＋可動化の阻害、ＦＬＩＰＲ（蛍光造影プレートリーダー）（モレキュラー・デバイス）による
ＦＬＩＰＲを使用して、ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞における細胞内カルシウム放出を測定した。これにより、受容体活性化に続くカルシウムの迅速な検出が可能になる。ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞系は、ライセンス契約の下で、Marc Thibonnier（オハイオ州クリーブランド Case Western Reserve University 医学校、医学部）の厚意により提供された。１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物において、５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃でＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を定常的に維持した。アッセイ前の午後に、各ウェルの底からの細胞視察と蛍光測定を可能にする、底が澄明な黒い無菌の９６ウェルプレートへ、２０，０００細胞／ウェルの密度で細胞をプレート培養した。ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水（ＤＢＰＳ）及び２．５ｍＭプロベネシドを含有する洗浄緩衝液と、４μＭ Ｆｌｕｏ−３−ＡＭ（ＤＭＳＯ及びプルロン酸に溶かす）（モレキュラー・プローブズ）及び２．５ｍＭプロベネシドを含有する細胞培養基からなるローディング色素をアッセイの当日に用時調製した。化合物をＤＭＳＯに可溶化し、１％ ＤＭＳＯ、０．１％ ＢＳＡ、及び２．５ｍＭプロベネシドを含有するＤＰＢＳからなるアッセイ緩衝液に希釈した。５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃で１時間、ウェルあたり１００μｌのローディング色素とともに細胞をインキュベートした。色素ローディングの後で、Ｄｅｎｌｅｙプレート洗浄器を使用して、１００μｌの洗浄緩衝液に細胞を３回洗浄した。１００μｌの洗浄緩衝液を各ウェルに残した。ＦＬＩＰＲを使用して、細胞内の蛍光を測定した。５０μｌの試験化合物を３０秒後に加えて、２秒間隔で蛍光読み取りを得た。次いで、さらに１５５回の測定を２秒間隔で行って、化合物のアゴニスト活性を検出した。次いで、５０μｌのアルギニンバソプレッシン（ＡＶＰ）を加えて、最終アッセイ量を２００μｌとした。さらなる蛍光読み取りを１秒間隔で１２０秒間収集した。ピーク蛍光強度（ＦＩ）として応答を測定した。薬理学的な特性決定では、各蛍光応答より基底ＦＩを差し引いた。ＡＶＰ用量応答曲線では、その系列のＡＶＰの最高濃度に対する応答の百分率（％）として各応答を表した。ＩＣ５０決定では、ＡＶＰに対する応答の百分率（％）として各応答を表した。アゴニスト濃度、［Ａ］、アゴニストＥＣ５０、及び傾きを考慮するＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式：Ｋｂ＝ＩＣ５０／（２＋［Ａ］／Ａ５０）ｎ）１／ｎ−１（ここで、［Ａ］はＡＶＰの濃度であり、Ａ５０は用量応答曲線からのＡＶＰのＥＣ５０であり、ｎはＡＶＰ用量応答曲線の傾きである）を使用して、ＩＣ５０値を修正Ｋｂ値へ変換した。
【００９８】
本組合せ発明に使用の化合物は、非溶媒和型だけでなく、水和型が含まれる溶媒和型で存在する場合がある。一般に、水和型が含まれる溶媒和型は、同位体置換（例、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯ）を含有する場合があるが、非溶媒和型と同等であり、本発明の範囲内に含まれる。
【００９９】
本発明に使用の化合物は、１以上のキラル中心を保有する場合があり、各中心は、Ｒ（Ｄ）又はＳ（Ｌ）配置で存在する場合がある。本発明には、すべてのエナンチオマー型とエピマー型、並びにこれらの適切な混合物が含まれる。ジアステレオマー又はｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体の分離は、慣用の技術、例えば、本発明の化合物又はその好適な塩又は誘導体の立体異性混合物の分画結晶化、クロマトグラフィー、又はＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によって達成することができる。
【０１００】
本発明に使用の化合物の本範囲内にまた含まれるのは、その多形である。
さらなる側面において、上記に定義される（Ａ）と上記に定義される（Ｂ）の有効量の混合物を医薬的に許容される担体と随意に一緒に含んでなる、予防的に、又は疼痛が始まったときに投与するための医薬組成物が提供される。
【０１０１】
本発明の医薬組成物において、（Ａ）は、用量につき１ｍｇ〜１０００ｍｇまでの量で存在して、（Ｂ）は、用量につき１ｍｇ〜１０００ｍｇの量で存在する。どんな場合でも医師が個別の患者に最も適する実際量を決定し、それは、特別な患者の年齢、体重、及び応答で変動するものである。上記の投与量は、平均的な症例の例示である。当然ながら、より高いか又はより低い投与量の範囲が有利である個別の事例があり得て、そのような事例も本発明の範囲内にある。
【０１０２】
本発明の医薬組成物は、単独で投与してよいが、一般的には、１以上の医薬的に許容される賦形剤と一緒の製剤として投与される。用語「賦形剤」は、本明細書において、本発明の化合物以外のあらゆる成分を記載するために使用する。賦形剤の選択は、大部分は投与の特別な形式に依存するものである。
【０１０３】
本発明に使用の化合物は、経口投与することができる。経口投与は、化合物が胃腸管に入るような嚥下を伴っても、又は化合物が口から直接血流に入る頬内又は舌下投与を利用してもよい。
【０１０４】
経口投与に適した製剤には、錠剤、粒子を含有するカプセル剤、液剤、又は散剤、甘味入り錠剤（液体充填剤が含まれる）、噛み剤（chews）、多粒子剤及びナノ粒子剤、ゲル剤、フィルム剤（粘接着剤が含まれる）、丸剤（ovules）、スプレー剤のような固体製剤と液体製剤が含まれる。
【０１０５】
液体製剤には、懸濁液剤、溶液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は、軟又は硬カプセル剤中の充填剤として利用してよく、典型的には、担体、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は好適なオイルと、１以上の乳化剤及び／又は懸濁剤を含む。液体製剤は、固形物の復元によって、例えば、サシェ剤より調製してもよい。
【０１０６】
本発明に使用の化合物は、Liang and Chen による Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11(6), 981-986 (2001) に記載されるような速溶解性、速崩壊性の剤形で使用してもよい。
【０１０７】
典型的な錠剤は、製剤化学者に知られた標準法を使用して、例えば、直接圧縮、造粒（乾式、湿式、又は融解）、融解凝結、又は押出しによって調製することができる。錠剤製剤は、１以上の層を含む場合があり、被覆しても被覆しなくてもよい。
【０１０８】
経口投与に適した賦形剤の例には、担体（例えば、セルロース、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、マンニトール、及びクエン酸ナトリウム）、造粒結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、及びゼラチン）、崩壊剤（例えば、ナトリウムデンプングリコラート、及びケイ酸塩）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、及びステアリン酸）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、保存剤、抗酸化剤、芳香剤、及び着色剤が含まれる。
【０１０９】
経口投与用の固体製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。高エネルギー分散剤、浸透及び被覆粒子のような好適な修飾放出技術の詳細は、Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001) に見出すことができる。他の修飾放出製剤は、米国特許第６，１０６，８６４号に記載されている。
【０１１０】
本発明に使用の化合物は、血流、筋肉、又は内臓へ直接投与してもよい。非経口投与に適した手段には、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、及び皮下投与が含まれる。非経口投与に適したデバイスには、針（ミクロ針が含まれる）注射器、無針注射器、及び注入技術が含まれる。
【０１１１】
非経口製剤は、典型的には、塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくは、３〜９のｐＨへ）のような賦形剤を含有し得る水溶液剤であるが、いくつかの応用では、それらは、より好適には、無菌の非水性溶液剤として、又は無菌の発熱物質を含まない水のような好適な担体と一緒に使用すべき乾燥型として製剤化してよい。
【０１１２】
非経口製剤の無菌条件下での、例えば凍結乾燥による調製は、当業者によく知られた標準の製剤技術を使用して、容易に達成することができる。
非経口溶液剤の調製に使用する式（Ｉ）の化合物の溶解性は、好適な処理、例えば高エネルギースプレー乾燥分散の使用（ＷＯ０１／４７４９５を参照のこと）によって、及び／又は溶解促進剤の使用のような適切な製剤技術の使用によって高めてよい。
【０１１３】
非経口投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１１４】
本発明に使用の化合物はまた、皮膚又は粘膜へ、皮膚からか又は経皮的に局所投与してよい。この目的のための典型的な製剤には、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、溶液剤、クリーム剤、軟膏剤、粒子散剤、包帯剤、フォーム剤、フィルム剤、皮膚パッチ剤、カシェ剤、インプラント、スポンジ、ファイバー、包帯、及びミクロエマルジョンが含まれる。リポソームも使用してよい。典型的な担体には、アルコール、水、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、及びプロピレングリコールが含まれる。浸透エンハンサーを取り込んでよく、例えば、Finnin 及び Morganによる J Pharm Sci, 88(10), 955-958 (1999年10月) を参照のこと。
【０１１５】
局所投与の他の手段には、イオン導入、エレクトロポレーション、ホノフォレーシス（phonophoresis）、超音波導入（sonophoresis）、及び、無針又はミクロ針注射による送達が含まれる。
【０１１６】
局所投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。このように、本発明に使用の化合物は、この活性化合物の長期放出を提供する埋込みデポー剤としての投与のためにより硬い形態に製剤化してよい。
【０１１７】
本発明に使用の化合物はまた、典型的には乾燥粉末の形態で（例えば乳糖との乾燥混和物中の混合物として単独で、又は、例えばリン脂質と混合した混合成分粒子として）、乾燥粉末吸入器からか、又は加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー（好ましくは、電気水力学を利用して微細粒子を産生するアトマイザー）、又はネブライザーより、ジクロロフルオロメタンのような好適な推進剤の使用を伴うか又は伴わずに、エアゾールスプレーとして鼻腔内又は吸入により投与してよい。
【０１１８】
加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、又はネブライザーは、例えば、エタノール（場合により、水性エタノール）、又は活性化合物を分散、可溶化、又はその放出を拡張するのに適した他の薬剤、溶媒としての推進剤、及びソルビタントリオレエート又はオリゴ乳酸のような随意の界面活性剤を含んでなる、活性化合物の溶液剤又は懸濁液剤を含有する。
【０１１９】
乾燥粉末又は懸濁製剤における使用に先立って、医薬生成物は、吸入による送達に適したサイズ（典型的には、５ミクロン未満）へ微小化する。このことは、らせんジェット粉砕、流動床ジェット粉砕、ナノ粒子を形成する超臨界流体処理、高圧均質化、又はスプレー乾燥のような、どの適切な粉砕法によっても達成してよい。
【０１２０】
電気水力学を利用して微細粒子を産生するアトマイザーにおける使用に適した溶液製剤は、１回の作動につき本発明の化合物の１μｇ〜１０ｍｇを含有してよく、この作動量は、１μｌ〜１００１μｌへ変動してよい。典型的な製剤は、式（Ｉ）の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノール、及び塩化ナトリウムを含む場合がある。プロピレングリコールの代わりに使用してよい代替溶媒には、グリセロールとポリエチレングリコールが含まれる。
【０１２１】
吸入器又は通気器における使用のカプセル剤、ブリスター剤、及びカートリッジ剤（例えば、ゼラチン又はＨＰＬＣより作製する）は、本発明の化合物の粉末混合物、乳糖又はデンプンのような好適な粉末基剤、及び、ｌ−ロイシン、マンニトール、又はステアリン酸マグネシウムのような性能修飾剤を含有するように製剤化してよい。
【０１２２】
吸入／鼻腔内投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２３】
本発明に使用の化合物は、例えば、坐剤、ペッサリー、又は浣腸剤の形態で、直腸、膣内、又は子宮内経路により投与してよい。ココア脂が従来の坐剤基剤であるが、様々な代替物を適宜使用してよい。
【０１２４】
直腸／膣投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２５】
本発明に使用の化合物は、典型的には、ｐＨ調節した等張の無菌生理食塩水中の微小化した懸濁液又は溶液の滴剤の形態で、眼又は耳へ直接投与してもよい。眼及び耳への投与に適した他の製剤には、軟膏剤、生物分解性（例、吸収ゲルスポンジ、コラーゲン）及び非生物分解性（例、シリコーン）のインプラント、カシェ剤、レンズ、及び粒子や、ニオソーム又はリポソームのような小胞系が含まれる。架橋結合性ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロースのポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はメチルセルロース）、又はヘテロ多糖ポリマー（例えば、ゼラチンゴム）のようなポリマーを、塩化ベンザルコニウムのような保存剤と一緒に取り込んでよい。このような製剤は、イオン導入によって送達してもよい。
【０１２６】
眼／耳からの投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２７】
本発明に使用の化合物は、シクロデキストリン又はポリエチレングリコール含有ポリマーのような可溶性の高分子実体と組み合わせて、その可溶性、溶解速度、味のマスキング、バイオアベイラビリティ、及び／又は安定性を改善してよい。
【０１２８】
例えば、薬物−シクロデキストリン複合体は、ほとんどの剤形及び投与経路に概ね有用であることが見出されている。封入と非封入の両方の複合体を使用してよい。薬物との直接複合化に代わるものとして、シクロデキストリンは、補助添加剤として、即ち、担体、希釈剤、又は可溶化剤として使用してよい。これらの目的に最も一般的に使用されるのは、α、β及びγ−シクロデキストリンであり、その例は、国際特許出願番号ＷＯ９１／１１１７２、ＷＯ９４／０２５１８、及びＷＯ９８／５５１４８に見出すことができる。
【０１２９】
本発明の組成物は、直接注射により投与してよい。ある適用では、好ましくは薬剤を経口投与する。ある適用では、好ましくは薬剤を局所投与する。
本発明による医薬組成物は、本発明の化合物の０．１％〜９５％、好ましくは１％〜７０％を含有してよい。
【０１３０】
本明細書に使用する「有効量」は、求められる生物学的又は医学的応答を引き起こす（Ａ）及び（Ｂ）の量である。治療の方法に利用する（Ａ）及び（Ｂ）の１日用量は、上記に記載の医薬組成物における使用に記載の用量に類似している。本発明による治療の方法において、（Ａ）と（Ｂ）は単一の剤形で一緒に組み合わせて投与しても、それらは、それぞれがそれ自身の剤形であるが、同じ療法治療プログラムの一部として、別々に、本質的には同時に投与してもよく、（Ａ）と（Ｂ）を異なる時期に、異なる経路により別々に投与する場合があると想定される。
【０１３１】
実施例：
子宮筋層シナジー試験
方法論：
Ｖ１Ａアンタゴニスト／ＰＤＥ阻害剤の組合せ治療の子宮筋層収縮性に対する効果は、in vitro 機能臓器浴試験を使用して検討することができる。子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の平滑筋調製物）、例えば、子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋にクレブス緩衝液中３７℃で１ｇの張力をかける（試験によっては、この組織の自発収縮を抑えるために、異なる実験条件、例えば３２℃で、あるいは異なる変数でカルシウムを減らして実施する必要があり得ることに留意すること）。各組織においてその生存能力を確認するためにＫＣｌに対する収縮応答を得て、今後のデータをこの収縮応答の百分率として表すことができる。次いで、２種類の実験を実施することができる：
１．ＰＤＥ阻害剤（例、３−エチル−５−｛５−［（４−エチルピペラジノ）スルホニル］−２−プロポキシフェニル｝−２−（２−ピリジルメチル）−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン）を単独で、又はＶ１Ａアンタゴニスト（例、ＳＲ４９０５９）と組み合わせて投与して、基底の緊張に対する効果を検査する。引き続き、アルギニンバソプレッシン（ＡＶＰ）に対する濃度依存性の用量応答曲線を作成する。後続のＡＶＰ用量応答曲線を解析するときには、基底の緊張におけるあらゆる変化を考慮する。この実験の各部分に適切な調整を含める。
【０１３２】
２．組織をＡＶＰで収縮させる。定常的な収縮応答に達したときに、単一用量、又はＰＤＥ阻害剤に対する濃度応答曲線、Ｖ１Ａアンタゴニスト又は２剤の組合せを投与することができる。この実験の各部分に適切な調整を含める。
【０１３３】
【化１５】
【０１３４】
ヒト子宮筋層は、内因性の収縮活性を有する。ＡＶＰの存在下で、固有の子宮収縮の回数は、患者で有意に増加する（Akerlund, 1997）。ＡＶＰを子宮平滑筋切片上へ ex vivo 投与するとき、子宮収縮の増加も見られる（曲線下面積により測定されるように）。１００ｎＭのＰＤＥ５阻害剤の存在下ではＡＤＰ誘発収縮の回数に有意な変化はないが、Ｖ１Ａアンタゴニストの存在下では、ＡＵＣの７６％低下がある（患者でも見られる効果（Bossmar et al 1997））。ＰＤＥ５ｉとＶ１Ａアンタゴニストを組み合わせて投与するとき、子宮収縮を阻害することに対して顕著な相乗効果がある。アゴニスト（ＡＶＰ）誘発性の収縮活性がすべて阻害されるだけでなく、基底の子宮筋層収縮の緊張も抑制される。故に、Ｖ１ＡアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤の組合せが、月経困難症の女性に見られるような子宮筋層の過剰収縮を有効に抑制するだけでなく、基底の子宮筋層緊張を予想外に減少させることが明瞭に証明されている。従って、疾患進行を遅らせる、長期の有益な効果がもたらされる。
【０１３５】
上記の組合せにより明示される相乗作用により、そのような療法は、最も重篤な症例における効力の増加が含まれる、効力の増加の可能性に加えて、効果をもたらすのに必要とされるそれぞれの個別薬剤の用量を減らすことができて、それにより副作用の機会を減少させるという可能性を開く。さらに、子宮筋層と子宮動脈がその弛緩状態を維持するならば、必要とされる治療の期間の短縮も起こり得る。
【０１３６】
子宮動脈シナジー試験
動脈シナジー試験の方法論：
前臨床的に、in vitro 機能臓器浴試験を使用して、増加血流に対するＰＤＥ５ｉの効果と子宮平滑筋収縮を抑えるＶ１Ａアンタゴニストの効果を示すことができる。
【０１３７】
１．子宮摘出術を受けている女性由来の子宮動脈（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の動脈調製物）にクレブス緩衝液中３７℃ではじめは２ｇの張力をかけて、次いで１ｇへ再調整する。この組織をフェニレフリンで収縮して、アセチルコリンに対する濃度用量応答曲線を得る。動脈が＞６０％弛緩するならば、動脈の内皮は、インタクトであるとみなされる。インタクトな内皮のある動脈輪をフェニレフリンで再収縮させて、ＰＤＥ阻害剤に対する濃度応答曲線を得る。
【０１３８】
２．子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の平滑筋調製物）にクレブス緩衝液（カルシウムを減らした）中３２℃で１ｇの張力をかける（この組織の自発収縮を低下させるには、温度とカルシウムの抑制が必要とされる）。各組織においてその生存能力を確認するためにＫＣｌに対する収縮応答を得て、今後のデータをこの収縮応答の百分率として表すことができる。Ｖ１Ａアンタゴニストを投与した後で、ＡＶＰに対する濃度応答曲線を得る。あるいは、子宮筋層シナジー試験の方法論を使用してよい。
【０１３９】
子宮筋層及び子宮動脈におけるシナジーを検討する臨床試験：
本態性月経困難症に罹患している女性において経口療法を使用して、個別成分と組合せ療法をともに臨床的に試験する。本態性月経困難症の履歴がある１２名の女性を活用する、無作為二重盲検プラセボ対照試験において、ＰＤＥ阻害剤又はＶ１Ａアンタゴニスト（例、ＳＲ４９０５９）のそれ自身の効果、又は組合せにおける効果を検証する。実験は、３回の、通常は連続した月経周期の最初の３日以内の３回の場合に実施しなければならない。３次元ドップラー速度測定、２次元色ドップラー（出力ドップラーシグナル強度として測定する）、又は対比増強ＭＲＩのいずれかを使用して子宮動脈の血流を測定して、子宮内子宮圧カテーテル（子宮内圧曲線下の面積（ＡＵＣ）として測定する）の挿入、３次元超音波検査法、又は虚血バイオマーカーのいずれかによって子宮平滑筋収縮を測定する。患者への薬物投与の前及び後の時間間隔で子宮血流と子宮筋層収縮の両方を試験する。下腹部の疼痛も、「痛みなし」〜「最大の痛み」へ段階付ける１０ｃｍ目視アナログ尺度（ＶＡＳ）で連続的に記録することができる。
【０１４０】
８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレンの合成
製法１：３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸ヒドラジド
【０１４１】
【化１６】
【０１４２】
ヒドラジン水和物（６２０μｌ，２０ミリモル）を含有するメタノール（２０ｍｌ）に３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸エチルエステル（１ｇ，４．３ミリモル）（参考文献、Farmaco, 1993, 48(10), 1439 を参照のこと）を溶かし、還流で１８時間加熱した。この混合物を室温へ冷やし、減圧で蒸発させた。生じた固形物をプロパン−２−オールで摩砕して、表題化合物（４９３ｍｇ）を白い固形物として得た。
【０１４３】
ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２２１［Ｍ＋Ｈ］＋．
製法２：３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸Ｎ’−（２−クロロ−アセチル）−ヒドラジド
【０１４４】
【化１７】
【０１４５】
製法１のヒドラジド（２３．６ｇ，０．１１モル）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に懸濁させて、４−メチルモルホリン（１７．７ｍｌ，０．１６モル）を加えた。氷浴を使用してこの混合物を冷やして、塩化クロロアセチル（１２．８ｍｌ，０．１６モル）を滴下した。この反応物を室温へ温めて、３時間撹拌した。生じた固形物を濾過により単離し、ジクロロメタンとジエチルエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物（２０．４ｇ）を得た。
【０１４６】
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ ＥＳ＋ ２９７［Ｍ＋Ｈ］＋．
製法３：４−（５−クロロメチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル
【０１４７】
【化１８】
【０１４８】
製法２のヒドラジド（２０．４ｇ，６９ミリモル）をオキシ塩化リン（１５０ｍｌ）に１００℃で４時間懸濁させた。この混合物を冷やして、溶媒を減圧で蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶かして、水へ加えた。水層を固体炭酸水素ナトリウムの添加により塩基性にして、相を分離させた。水相を酢酸エチル（ｘ２）で抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させて、減圧で蒸発させた。単離した材料をジエチルエーテルで摩砕して、表題化合物（１５ｇ）をベージュ色の固形物として得た。
【０１４９】
【化１９】
【０１５０】
製法４：２−アミノメチル−４−クロロ−フェニルアミン
【０１５１】
【化２０】
【０１５２】
水素化アルミニウムリチウムの氷冷１モル濃度テトラヒドロフラン溶液（１００ｍｌ）へテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）中の２−アミノ−５−クロロ−ベンゾニトリル（９．０ｇ，５９ミリモル）を滴下して、この反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水（１０ｍｌ）を滴下した。生じるエマルジョンを硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧で蒸発させて、表題化合物（４．５６ｇ）を白い固形物として得た。
【０１５３】
【化２１】
【０１５４】
製法５：４−クロロ−２−（｛［５−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルメチル］−アミノ｝−メチル）−フェニルアミン
【０１５５】
【化２２】
【０１５６】
製法３のオキサジアゾール（４．５６ｇ，１６ミリモル）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液へ製法４のアミン（６．４ｇ，４１ミリモル）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液を加えて、この混合物を５０℃まで１８時間加熱した。この反応混合物を減圧で蒸発させて、ジクロロメタン中メタノール（５：９５）を溶出液として使用するシルカゲルのクロマトグラフィーにより残渣を精製して、表題化合物（４．６５ｇ）を白い固形物として得た。
【０１５７】
【化２３】
【０１５８】
製法６：８−クロロ−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン
【０１５９】
【化２４】
【０１６０】
製法５のオキサジアゾール（４．６５ｇ，１２ミリモル）の溶液へトルエン−４−スルホン酸（１００ｍｇ，０．５８ミリモル）を加えて、１４０℃まで１８時間加熱した。この混合物を冷やし、ジクロロメタン中メタノール及び水酸化アンモニウム（５：０．５：９５）を溶出液として使用するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２．０ｇ）をオフホワイトの固形物として得た。
【０１６１】
【化２５】
【０１６２】
実測値；Ｃ，５９．９０；Ｈ，５．４８；Ｎ，２０．５０；Ｃ２０Ｈ２１Ｎ６Ｃｌ・０．３３ＣＨ２Ｃｌ２の理論値；Ｃ，５９．７２；Ｈ，５．３４；Ｎ，２０．５５％．
【０１６３】
実施例１：８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン三塩酸塩
【０１６４】
【化２６】
【０１６５】
製法６のアミン（２００ｍｇ，０．５３ミリモル）のジクロロメタン（５ｍｌ）溶液へホルムアルデヒド（３７％（ｗ／ｖ）水溶液、０．１ｍｌ，１．２ミリモル）を加えた。この混合物を室温で０．２５時間撹拌した後で、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（５００ｍｇ，２．４ミリモル）を加え、この反応混合物をさらに１８時間撹拌した。この反応混合物を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）とジクロロメタン（１０ｍｌ）の間に分画した。有機層を減圧で蒸発させ、ジクロロメタン中メタノール（５：９５）を溶出液として使用するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製した。残渣をジクロロメタン（２ｍｌ）に溶かし、塩酸（ジエチルエーテル中１Ｍ，２ｍｌ）を加えた。溶媒を減圧で蒸発させて、表題化合物（９６ｍｇ）を茶褐色のフォームとして得た。
【０１６６】
【化２７】
【０１６７】
実測値；Ｃ，４４．３０；Ｈ，５．５２；Ｎ，１４．６５；Ｃ２１Ｈ２３Ｎ６Ｃｌ・０．３３ＣＨ２Ｃｌ２・３ＨＣｌ・２．５Ｈ２Ｏの理論値；Ｃ，４４．３７；Ｈ，５．５３；Ｎ，１４．５３％．
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＰＤＥ阻害剤とバソプレッシン受容体ファミリーのアンタゴニストの相乗的な組合せ、月経困難症の治療におけるそのような組合せの使用、そのような組合せを使用して月経困難症を治療する方法、及びそのような組合せを含有する医薬品に関する。
【０００２】
月経異常症の分野には高い未充足ニーズがあり、月経があるすべての女性の９０％までが幾分か影響を受けると推定されている。４２％までの女性が月経痛により仕事や他の活動に支障をきたし、この結果、米国では年間約６億の労働時間が失われていると評価されている｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］［30 refs］．American Family Physician, 60, 489-96｝。
【０００３】
月経困難症は、本態性と続発性の２つのクラスへ分類される場合がある。一般に、本態性月経困難症は、同定可能な骨盤疾患がないのに月経の開始時に生じる下腹部の痙攣痛と定義される。女性人口のほぼ５０％がこれに罹患している｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］［30 refs］．American Family Physician, 60, 489-96；Schroeder, B. & Sanfilippo, J. S. (1999).「青年期の月経困難症と骨盤痛（Dysmenorrhoea and pelvic pain in adolescents）［概説］［78 refs］．Pediatric Clinics of North America, 46, 555-71｝。
【０００４】
続発性月経困難症は、子宮内膜症、骨盤炎症疾患、子宮平滑筋腫、子宮内避妊用具、等のような特定の病理学的状態と関連した、月経痛と定義される。月経困難症の発生病理は不明であるが、これらの女性が感じる疼痛に伴った子宮筋層の機能亢進と子宮血流の減少の間には密接な関連があるようだ。続発性月経困難症は、月経困難症に罹患している女性のほぼ２５％でしか診断されない。月経困難症は、月経過多に伴って生じる場合もある。
【０００５】
健常な女性では、月経周期の間に子宮収縮性が変動する｛Akerlund, M. (1997).「非妊娠子宮における収縮性（Contractility in the non-pregnant uterus）」［概説］Annals of the New York Academy of Sciences, 828, 213-22｝。この変化は、卵巣ホルモンの血漿濃度の変動に従うわけではないが、両者の間にはタイムラグがあるので、組織レベルに関連する可能性がある。月経周期の最初の数日間、子宮収縮性は、子宮全体を通して調整され、規則的で、比較的高い振幅の収縮を伴い、収縮の間には十分に画定された弛緩がある。卵胞期の間、特に排卵期のあたりでは、より調整されない子宮収縮性が生じ、相対的に高い頻度で、低い振幅で、高い基底緊張の収縮を伴う。これが黄体期を通して、月経開始の２〜３日前まで続き、その後で子宮の活動は再びより調整される。この時点で、頚部の方向において、同時に子宮底に向かって、収縮の周期的な伝播が生じる。この方向は、ある患者では数分以内に変化する場合がある。頚部へ向かう伝播は、月経時の子宮内膜及び血液の排出に重要となる場合がある。対照的に、月経困難症の女性は、顕著な子宮の機能亢進を有する。彼女らの収縮パターンは不規則である。また、子宮血流が減少して、本質的には主として虚血性になる｛Akerlund, M. (1997).「非妊娠子宮における収縮性（Contractility in the non-pregnant uterus）」［概説］Annals of the New York Academy of Sciences, 828, 213-22｝。血流の減少は、おそらくは以下の両方の効果であろう：
・子宮圧力の増加により引き起こされる血管の圧縮（このことは、これらの女性が体験する仙痛の疼痛と関連する可能性があると考えられている）。
・より長く持続する血流の低下を引き起こす、動脈壁の平滑筋に対する血管作用剤の影響（このことは、これらの女性が経験する連続した疼痛の原因であるかもしれない）。
【０００６】
現在入手可能な月経困難症治療薬の中では、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、避妊も望まれる場合（この症例では、経口避妊薬を使用する）を除けば、第一選択薬となる傾向がある。
【０００７】
本態性月経困難症は、月経付近ではなく｛Lundstrom, V. & Green, K. (1978).「正常及び月経困難症の女性の血漿及び子宮内膜中のプロスタグランジンＦ２αとその主要代謝産物の内因性レベル（Endogenous levels of prostaglandin F2alpha and its main metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic women）」American Journal of Obstetrics and Gynecology, 130, 640-6｝、月経時のプロスタグランジンＦ２α（ＰＧＦ２α）の増加と関連づけられてきた｛Pickles, V. Hall, W. & Best F. (1965).「正常及び月経困難症の被検者由来の子宮内膜及び月経血中のプロスタグランジン（Prostaglandins in endometrium and menstrual fluid from normal and dysmenorrheic subjects）」BJOG: an International Journal of Obstetrics & Gynecology, 72, 185-｝。ＰＧＦ２αは、子宮収縮性を高めて、月経困難症様の疼痛を引き起こすことが知られている｛Roth-Brandel, J., Bygdeman, M. & Wiqvist, N. (1970). 「非妊娠ヒト子宮の in vivo 収縮に対するプロスタグランジンＥ１及びＦ２の静脈内投与の効果（Effect of intravenous administration of Prostaglandin E1, and F2 on the contractility of the non-pregnant human uterus in vivo）」Acta Obstetricia et Gynecologia Scandinavica - Supplement, 5, 19-25｝。プロスタグランジンはまた、疼痛受容体を増感させることによって直接の疼痛産生特性を有することも知られているが、これも月経時に感じられる疼痛に関与している可能性がある｛「プロスタグランジンとトロンボキサン：ＮＡＴＯ先端試験研究所によるプロスタグランジンの先端研究（Prostaglandins and Thromboxanes: NATO advanced study institute on advances on prostaglandins）」中 433-442 頁 Ferreira, S. (1976)「疼痛と発熱（Pain and Fever）」ニューヨーク：プレナム・プレス｝。ＮＳＡＩＤは、臨床試験において、ある種の月経困難症患者で疼痛を軽減して子宮運動性を回復させることが示された｛Pulkkinen, M. O. & Csapo A. I. (1978). 「月経困難症患者の子宮内圧及び月経痛に対するイブプロフェンの効果（The effect of ibuprofen on the intrauterine pressure and menstrual pain of dysmenorrhoeic patients）」Prostaglandins, 15, 1055-62｝。しかしながら、それはすべての月経困難症罹患者、特に重篤な月経困難症の罹患者に有効であるわけではない。さらに、それには、上部消化管症状、眠気、及び耳鳴が含まれる副作用がつきものである。これらの薬剤は、経口避妊薬に対して、１ヶ月に２〜３日間だけ投与するという利点を確かに有し、それらは、月経困難症に関連した副作用（めまい、吐き気、及び嘔吐）のいくらかを抑制する。
【０００８】
経口避妊薬は、避妊も望まれる場合であれば、ほとんどの女性にとって第二選択の療法である。それらは、月経周期を通して連続的に服用しなければならず、月経痛を顕著に消失させるには、３周期までかかる場合がある。ＮＳＡＩＤとは対照的に、経口避妊薬は、月経血の量を低下させること｛Nakano, R. & Takemura, H. (1971). 「機能性月経困難症の治療：二重盲検試験（Treatment of functional dysmenorrhoea; a double-blind study）」Acta Obstetrica et Gynaecologica Japonica, 18, 41-4｝、排卵を抑制すること、及び子宮内膜量を減少させることによって月経痛を予防する。このようにしてプロスタグランジン産生の減少をもたらす｛Chan, W. Y. & Hill, J. C. (1978). 「非月経困難症被検者及び月経困難症被検者における月経プロスタグランジンレベルの定量（Determination of menstrual prostaglandin levels in non-dysmenorrheic and dyamenorrheic subjects）」Prostaglandins, 15, 365-75｝。しかしながら、ＮＳＡＩＤと経口避妊薬では、特に重篤な月経困難症の患者で、不変の失敗率（１０〜１５％）があるという認知された問題がある｛Coco, A. S. (1999).「本態性月経困難症（Primary dysmenorrhoea）」［概説］．American Family Physician, 60, 489-96；Schroeder, B. & Sanfilippo, J. S. (1999).「青年期の月経困難症と骨盤痛（Dysmenorrhoea and pelvic pain in adolescents）［概説］．Pediatric Clinics of North America, 46, 555-71｝。現在、より新しい、さほど十分に特性決定されていない治療法が研究されているが、それらはまだ現行の療法オプションとして利用可能ではない。これらには、Ｖ１ＡアンタゴニストとＮＯドナーを用いた治療が含まれる。
【０００９】
バソプレッシンに対する子宮の生理学的な応答は、月経周期を通して変化して、最大の感受性が月経前に観察される｛Bossmar, T., Akerlund, M., Szamatowicz, J., Laudanski, T., Fantoni, G. & Maggi, M. (1995).「非妊娠女性におけるバソプレッシン及びオキシトシンの受容体仲介性の子宮効果（Receptor-mediated uterine effects of vasopressin and oxytocin in non-pregnant women）」British Journal of Obstetrics & Gynaecology, 102, 907-12｝。血漿バソプレッシンレベルは、対照患者の月経周期の間、有意に変化しない｛Forsling, M. L., Akerlund, M. & Stromberg, P. (1981).「月経周期の間のバソプレッシン血漿濃度の変動（Variations in plasma concentrations of vasopressin duting the menstrual cycle）」Journal of Endocrinology, 89, 263-6｝。しかしながら、月経困難症の女性では、月経の前もその間もバソプレッシンレベルが上昇する｛Hauksson, A., Akerlund, M., Forsling, M. L. & Kindahl, H. (1987).「本態性月経困難症の女性における、組み合わせた経口避妊薬での治療の前とその間のバソプレッシン及びプロスタグランジンＦ２α代謝産物の血漿濃度（Plasma concentrations of vasopressin and a prostaglandin F2 alpha metabolite in women with primary dysmenorrhoea before and during treatment with a combined oral contraceptive）」Journal of Endocrinology, 115, 355-61｝。これは、疼痛の増加、子宮筋層の機能亢進、そして子宮血流の減少に伴って生じる｛Ekstrom, P., Akerlund, M., Forsling, M., Kindahl, H., Laudanski, T. & Mirugacz, G. (1992).「本態性月経困難症の女性における経口避妊薬治療後のバソプレッシン放出の刺激が子宮収縮に及ぼす効果（Stimulation of vasopressin release in women with primary dysmenorrhoea and after oral contraceptive treatment--effect on uterine contractility）」British Journal of Obstetrics & Gynaecology, 99, 680-4｝。月経及び月経困難症の機序におけるバソプレッシンの貢献の正確な詳細は依然として不明である。しかしながら、このペプチドは、Ｖ２型の腎臓調節機能とは異なるバソプレッシンＶ１Ａ受容体を介して、子宮筋層｛Bossmar, T., Brouard, R., Doberi, A. & Akerlund, M. (1997).「バソプレッシン誘発性の子宮収縮に対するＳＲ４９０５９、経口活性Ｖ１ａバソプレッシン受容体アンタゴニストの効果（Effects of SR49059, an orally active V1a vasopressin receptor antagonist, on vasopressin-induces uterine cntractions）」British Journal of Obstetrics & Gynecology, 104, 471-7｝と子宮動脈｛Kostrzewska, A., Laudanski, T., Steinwall, M., Bossmar T., Serradeli-Le Gal, C. & Akerlund, M. (1998).「バソプレッシンや他の血管活性物質へのヒト子宮動脈の応答に対するバソプレッシンＶ１ａ受容体アンタゴニスト、ＳＲ４９０５９の効果（Effects of the vasopressin V1a receptor antagonist, SR49059, on the response of human uterine arteries to vasopressin and other vasoactive substances）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 77, 3-7｝のいずれの平滑筋活性に対しても、顕著な収縮効果を有する。
【００１０】
経口活性Ｖ１Ａアンタゴニストが月経困難症の予防において有意な治療利益を有するという臨床証拠がある｛Akerlund, M. (1987).「本態性月経困難症はバソプレッシンアンタゴニストにより緩和し得るか？ パイロット試験の結果（Can primary dysmenorrhoea be alleviated by a vasopressin antagonist? Results of a pilot study）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 66, 459-61｝。二重盲検の無作為プラセボ対照交差試験において、Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ（ＳＲ４９０５９）は、月経を調節する機序に影響することなく、月経困難症の女性の疼痛の強度を用量依存的に抑制した｛Brouard, R., Bossmar, T., Fournie-Lioret, D., Chassard D., & Akerlund, M. (2000).「月経困難症の予防におけるＳＲ４９０５９、経口活性Ｖ１ａバソプレッシン受容体アンタゴニストの効果（Effect of SR49059, an orally active V1a vasopressin receptor antagonist, in the prevention of dysmenorrhoea）」BJOG: an international Journal of Obstetrics & Gynaecology, 107, 614-9｝。この化合物はまた、オキシトシン受容体で活性を明示する。ペプチドバソプレッシンＶ１Ａアンタゴニスト／オキシトシン受容体アンタゴニストの１−デアミノ−２−Ｄ−Ｔｙｒ （Ｏｅｔ）−４−Ｔｈｒ−８−Ｏｒｎ−オキシトシンは、静脈内で投与するとき、月経困難症の治療にも有効である｛Akerlund, M. (1987).「本態性月経困難症はバソプレッシンアンタゴニストにより緩和し得るか？ パイロット試験の結果（Can primary dysmenorrhoea be alleviated by a vasopressin antagonist? Results of a pilot study）」Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 66, 459-61｝。
【００１１】
酸化窒素は、平滑筋の弛緩及び血管拡張に仲介する。臨床試験は、早産｛Lees, C., Campbell, S., Jauniaux, E., Brown, R., Ramsay, B., Gibb, D., Moncada, S. & Martin, J. F. (1994).「三硝酸グリセリン、酸化窒素ドナーでの早産の阻止と妊娠の延長（Arrest of preterm labour and prolongation of gestation with glyceryl trinitrate, a nitric oxide donor）」［論評］．Lancet, 343, 1325-6｝と月経困難症｛Pittrof, R., Lees, C., Thompson, C., Pickles, A., Martin, J. F. & Campbell, S. (1996).「重症月経困難症の女性の疼痛を制御する三硝酸グリセリンパッチ製剤の交差試験（Crossover study of glyceryl trinitrate patches for controlling pain in women with severe dysmenorrhoea）」Bmj, 312, 884.｝の両方で子宮筋層の収縮を阻害することに対するＮＯドナーの有益な効果を示した。しかしながら、ＮＯドナーでは副作用が報告されていて、最も一般的であるのは、頭痛、めまい、及び潮紅である｛Ghazizaceh, S., Dadkhah, T. & Modarres, M. (2002).「本態性月経困難症への三硝酸グリセリン軟膏剤の局所適用（Local application of glyceryl trinitrate ointment for primary dysmenorrhoea）」International Journal of Gynaecology & Obstetrics, 79, 43-4｝。患者の１０％で適用部位に局所紅斑が見られ、収縮期及び弛緩期の血圧のわずかな降下が報告されているが、低血圧症や頻脈が注目された症例はない｛Ghazizadeh, S., Dadkhah, T. & Modarres, M. (2002).「本態性月経困難症への三硝酸グリセリン軟膏剤の局所適用（Local application of glyceryl trinitrate ointment for primary dysmenorrhoea）」International Journal of Gynaecology & Obstetrics, 79, 43-4｝。ＮＯドナーは、in vitro で非妊娠子宮筋層の自発収縮を阻害することが示されているが、可溶性のグアニル酸シクラーゼ阻害剤がＮＯドナー仲介性の弛緩を遮断することができないので、この応答は、ｃＧＭＰ経路を介して仲介されるわけではない。故に、ｃＧＭＰレベルを上昇させること（ＰＤＥ阻害剤を投与することによって）により子宮筋層の広汎な弛緩を引き起こすことはあり得ないと思われるので、それが月経困難症を治療するための明快なアプローチを提供することはないだろう。しかしながら、この応答は、カルシウム依存性カリウムチャネルブロッカーによって遮断することができる｛Bradley, K. K., Buxton, I. L., Barber, J. E., McGaw, T. & Bradley, M, E. (1998).「酸化窒素は、ｃＧＭＰ非依存性の機序によりヒト子宮筋層を弛緩させる（Nitric oxide relaxes human myometrium by a cGMP-independent mechanism）」American Journal of Physiology, 275, C1668-73；Buxton, I. L., Kaiser, R. A., Malmquist, N. A. & Tichenor, S. (2001).「分娩又は非分娩ヒト子宮筋層のＮＯ誘発性弛緩は、サイクリックＧＭＰにより仲介されない（NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human myometrium is not mediated by cyclic GMP）」British Journal of Pharmacology, 134, 206-14｝。
【００１２】
ｅＮＯＳとｉＮＯＳの両方がヒトの子宮筋層に存在することを示す免疫組織化学データはあるが｛Chwalisz, K. & Garfield, R. E. (2000).「着床及び月経における酸化窒素の役割（Role of nitric oxide in implantation and menstruation）」［概説］．Human Reproduction, 15, 96-111｝、機能組織実験では、自発性収縮とアゴニスト誘発性収縮の両方に対するＮＯの弛緩効果が、ｃＧＭＰ非依存性の経路を介することが示されている｛Bradley, K. K., Buxton, I. L., Barber, J. E., McGaw, T. & Bradley, M, E. (1998).「酸化窒素は、ｃＧＭＰ非依存性の機序によりヒト子宮筋層を弛緩させる（Nitric oxide relaxes human myometrium by a cGMP-independent mechanism）」American Journal of Physiology, 275, C1668-73；Buxton, I. L., Kaiser, R. A., Malmquist, N. A. & Tichenor, S. (2001).「分娩又は非分娩ヒト子宮筋層のＮＯ誘発性弛緩は、サイクリックＧＭＰにより仲介されない（NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human myometrium is not mediated by cyclic GMP）」British Journal of Pharmacology, 134, 206-14｝。故に、ｃＧＭＰレベルを上昇させること（ＰＤＥ阻害剤を投与することによって）により子宮筋層の広汎な弛緩を引き起こすことはあり得ないと思われるので、それが月経困難症を治療するための明快なアプローチを提供することはないだろう。このような仮説は、ＰＤＥ阻害剤（例えば、ＩＢＭＸ、ザプリナスト、ロリプラム、及びＭｉｌｒｉｎｏｎｅ）が１００μＭほどの高い濃度でさえ、帝王切開施行中の女性より採取した子宮筋層由来の子宮収縮に対して可変の抑制活性（２１〜９３％）を有することが示された知見により支持される｛Bardou, M., Cortijo, J., Loustalot, C., Taylor, S., Perales-Marin, A., Mercier, F. J., Dumas, M., Deneux-Tharaux, C., Frydman, R., Morcillo, E. J. & Advenier, C. (1999).「ヒト末端子宮筋層に対する選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤の効果に関する薬理学的及び生化学的研究（Pharmacological and biochemical study on the effects of selective phoshodiesterase inhibitors on human term myometrium）」Naunyn-Schmiedebergs Archives of Pharmacology, 360, 457-63｝。
【００１３】
我々は、子宮筋層への血流の低下に関連した低酸素疼痛が、動脈そのもの、並びに子宮平滑筋の収縮に対する血管作用剤（ＡＶＰのような）の直接効果の結果であり、子宮筋層の血管の閉塞を引き起こす可能性があるという仮説を設けた。従って、子宮の血流を高めること（ＰＤＥ阻害剤及び／又はＶ１Ａアンタゴニストを用いて）を介した低酸素状態の抑制と同時に子宮筋層の収縮を抑制（ＰＤＥ阻害剤及び／又はＶ１Ａアンタゴニストを用いて）することは、使用する薬剤の組合せの用量についてより低い必要量をもたらすだろう。換言すると、子宮筋層に見られるものに優るそれ以上の相加相乗効果が観察される可能性がある。
【００１４】
驚くべきことに、バソプレッシン受容体ファミリーのアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤を用いた組合せ療法が月経困難症の治療において予想外の相乗的な改善をもたらすことが今回見出された。同時的、連続的、又は分離的に投与するとき、バソプレッシンアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤には、有効成分間の相乗的な相互作用により、先行技術の化合物及び組合せよりも、それらがより強力で、より長い作用時間を有し、疾患進行とそれ故に外科的介入の必要性をより有効に抑え、より広範囲の活性を有し、より安定であり、より少ない副作用を有するか又はより選択的である（特に、それらは月経困難症において有益な効果を有する場合がある）、又は他のより有用な特性を有するという利点があるかもしれない。
【００１５】
本発明の組合せは、子宮筋層の過剰収縮、子宮動脈の血管収縮、そして後続の疼痛の治療法を提供するだけでなく、子宮筋層及び子宮動脈の基底緊張を抑えて、それらがより弛緩した状態であり続けることを可能にする治療法を提供する。月経困難症は周期性であるが、子宮筋層と子宮動脈がより弛緩した状態を毎月維持すれば、長期的には、これにより将来の症状緩和に必要とされる治療が抑えられる可能性があるという仮説を我々は設けている。
【００１６】
従って、本発明によれば、（Ａ）ＰＤＥ阻害剤又はその医薬的に許容される誘導体と（Ｂ）バソプレッシン受容体アンタゴニスト又はその医薬的に許容される誘導体の組合せの、月経困難症の治療用医薬品の製造における使用が提供される。
【００１７】
さらに、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療への使用が提供される。
なおさらに、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療における（Ａ）及び（Ｂ）の同時、連続、又は分離投与による組合せ療法用医薬品の製造への使用が提供される。
【００１８】
あるいは、一緒になって有効である、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の量をそのような治療の必要な被検者へ投与することを含んでなる、月経困難症を治療する方法が提供される。
【００１９】
さらに、月経困難症を治療するときの同時、分離、又は連続使用のための組合せ調製物として、上記に定義される（Ａ）及び（Ｂ）を含有する医薬品が提供される。
月経困難症は、本態性又は続発性の月経困難症であり得る。続発性月経困難症は、子宮平滑筋腫又は子宮内避妊用具のような、増加した子宮緊張の結果であり得る。
【００２０】
本発明の１つの側面において、ＰＤＥ標的は、以下のＰＤＥ酵素：ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５、ＰＤＥ７、ＰＤＥ８、ＰＤＥ９、ＰＤＥ１０、ＰＤＥ１１のいずれかの１以上より選択される。
【００２１】
本発明の１つの側面において、バソプレッシン受容体アンタゴニストは、バソプレッシン受容体ファミリーメンバーを阻害して、ここで該受容体は、以下のバソプレッシン受容体サブタイプ：Ｖ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ２、及びオキシトシンのいずれかの１以上より選択される。好ましくは、受容体は、Ｖ１ａ又はオキシトシンより選択される。より好ましくは、受容体はＶ１ａである。
【００２２】
目的の特別なＰＤＥ酵素は、以下の通りである：
【００２３】
【表１】
【００２４】
好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ４又はＰＤＥ５阻害剤である。より好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ５阻害剤である。
ｃＧＭＰ ＰＤＥ５酵素の阻害剤（「ＰＤＥ５阻害剤」）は、ＰＤＥ５酵素への高いアフィニティー及び選択性を有し、他のホスホジエステラーゼアイソフォームにはほとんど又は全くアフィニティーがない化合物を特徴とする。それらは、いくつかの適応症について記載されてきた。特に、シルデナフィル：（５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン）（ＶＩＡＧＲＡ（登録商標））は、いくつかの心臓血管障害について記載されて、男性の勃起不全（ＭＥＤ）に経口で有効な最初の治療薬として奏功することが証明されている。
【００２５】
ある特定のＰＤＥ５阻害剤の適格性は、標準の創薬実践に従った、文献の方法を使用するその効力及び選択性の評価に続く、その毒性、吸収、代謝、薬物動態、等の評価によって容易に決定することができる。
【００２６】
ＰＤＥ５阻害剤は、好ましくは１００ナノモル濃度未満、より好ましくは５０ナノモル濃度未満、なおより好ましくは１０ナノモル濃度未満のＩＣ５０を有する。
好ましくは、本発明による医薬組合せに使用するＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ５酵素に選択的である。それらは、好ましくは１００より高い、より好ましくは３００より高い、ＰＤＥ３に対するＰＤＥ５の選択性を有する。より好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、ＰＤＥ３とＰＤＥ４の両方に対して１００より高い、より好ましくは３００より高い選択性を有する。選択性の比は、当業者によって容易に決定することができる。ＰＤＥ３及びＰＤＥ４酵素へのＩＣ５０値は、確立された文献の方法論を使用して決定することができる。S. A. Ballard et al, Journal of Urology, 1998, 159巻, 2164-2171頁と以下の記載を参照のこと。
【００２７】
ＰＤＥ５、ＰＤＥ２、等の阻害の測定は、以下のアッセイによって例示する。
本発明による使用に適した化合物は、強力で選択的なＰＤＥ５阻害剤である。サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）及びサイクリックアデノシン３’，５’−一リン酸（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼに対する in vitro ＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要とされる化合物の濃度）の測定によって決定することができる。
【００２８】
必要とされるＰＤＥ酵素は、本質的には W. J. Thompson and M. M. Appleman (Biochem., 1971, 10, 311) の方法によって、ヒト海綿体、ヒト及びウサギの血小板、ヒト心室、ヒト骨格筋、及びウシ網膜が含まれる多様な供給源より、単離することができる。特に、ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ５）とｃＧＭＰ阻害性ｃＡＭＰ ＰＤＥ（ＰＤＥ３）は、ヒト海綿体組織、ヒト血小板、又はウサギ血小板より入手することができて；ｃＧＭＰ刺激性ＰＤＥ（ＰＤＥ２）は、ヒト海綿体より入手することができて；カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ（ＰＤＥ１）は、ヒト心室より；ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ４）は、ヒト骨格筋より；そして光受容体ＰＤＥ（ＰＤＥ６）は、ウシ網膜より入手することができる。ホスホジエステラーゼ７〜１１は、ＳＦ９細胞へトランスフェクトした全長のヒト組換えクローンより産生することができる。
【００２９】
アッセイは、W. J. Thompson et al. (Biochem., 1979, 18, 5228) の「バッチ」法の改良法を使用して実施しても、製品コードＴＲＫＱ７０９０／７１００のもとにアマーシャム社により記載されるプロトコールの改良法を使用するＡＭＰ／ＧＭＰの直接検出のシンチレーション近似アッセイを使用して実施してもよい。要約すると、ＰＤＥ阻害剤の効果は、様々な阻害剤濃度と少量の基質（ｃＧＭＰ又はｃＡＭＰ、３：１比の非標識：［３Ｈ］標識、ＩＣ５０≡Ｋｉとなるように、約１／３Ｋｉの濃度）の存在下に、一定量の酵素をアッセイすることによって検討することができる。最終アッセイ量は、１００μｌまでのアッセイ緩衝液［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４），５ｍＭ ＭｇＣｌ２，１ｍｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミン］からなる。酵素で反応を開始して、３０℃で３０〜６０分間インキュベートして、＜３０％の基質代謝回転を得て、５０μｌのケイ酸イットリウムＳＰＡビーズ（ＰＤＥ９及び１１についてそれぞれ３ｍＭの非標識サイクリックヌクレオチドを含有する）で終了させる。プレートを再びシールして、２０分間振り混ぜ、その後でこのビーズを暗所に３０分間静置してから、ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダー（パッカード、コネティカット州メリデン）で計数する。放射活性単位を非阻害対照（１００％）の％活性へ変換し、阻害剤濃度に対してプロットし、「Ｆｉｔ Ｃｕｒｖｅ」マイクロソフト Ｅｘｃｅｌ拡張プログラム（extension）を使用して、阻害剤のＩＣ５０値を得る。
【００３０】
機能アッセイ
これは、S. A. Ballard et al. (Brit. J. Pharmacol., 1996, 118 (suppl.), 抄録 153P）又は S. A. Ballard et al. (J. Urology, 1998, 159巻, 2164-2171) に記載されるように、予め収縮したウサギの海綿体組織切片のナトリウムニトロプルシド又は電場刺激誘導性の弛緩を高める、本発明のＰＤＥ５阻害剤の能力を決定することによって、in vitro で評価することができる。
【００３１】
in vitro ＰＤＥ阻害活性
サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）ホスホジエステラーゼに対する in vitro ＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要とされる化合物の濃度）の測定によって決定することができる。
【００３２】
本発明による使用に適したＰＤＥ５阻害剤は、上記に示す定義を満足させるものであればよく、国際特許出願公開公報番号ＷＯ０３／０００６９１；ＷＯ０２／６４５９０；ＷＯ０２／２８８６５；ＷＯ０２／２８８５９；ＷＯ０２／３８５６３；ＷＯ０２／３６５９３；ＷＯ０２／２８８５８；ＷＯ０２／００６５７；ＷＯ０２／００６５６；ＷＯ０２／１０１６６；ＷＯ０２／００６５８；ＷＯ０１／９４３４７；ＷＯ０１／９４３４５；ＷＯ００／１５６３９；及びＷＯ００／１５２２８；並びに米国特許第６，１４３，７４６；６，１４３，７４７；及び６，０４３，２５２号に言及されるＰＤＥ５阻害剤；ＥＰ−Ａ−０４６３７５６に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０５２６００４に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０６１０４に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１４９に開示される異性体のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９３／１２０９５に開示されるキナゾリン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９４／０５６６１に開示されるピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９４／００４５３に開示されるプリン−６−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９８／４９１６６に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９９／５４３３３に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５１に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ００／２４７４５に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５０に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１９９７８に開示されるヘキサヒドロピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；ＷＯ００／２７８４８に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；ＥＰ−Ａ−１０９２７１９と国際特許出願公開公報ＷＯ９９／２４４３３に開示されるイミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−オンと、国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１２４に開示される二環系化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０１／２７１１２に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；国際特許出願公開公報ＷＯ０１／２７１１３に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−１０９２７１８に開示される化合物とＥＰ−Ａ−１０９２７１９に開示される化合物；ＥＰ−Ａ−１２４１１７０に開示される三環系化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７４７７４に開示されるアルキルスルホン化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７２５８６に開示される化合物；国際特許出願公開公報ＷＯ０２／０７９２０３に開示される化合物と、ＷＯ０２／０７４３１２に開示される化合物を含めてよい。
【００３３】
上記の特許出願公開公報と学術論文の内容と、特にその中の特許請求項の治療活性化合物と例示化合物の一般式は、そのまま参照により本明細書に組み込まれる。
本発明による使用に好ましいＶ型ホスホジエステラーゼ阻害剤（ＰＤＥ５阻害剤）には：
１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジンとしても知られる、５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル、例えば、Ｖｉａｇｒａ（登録商標）として販売されている）（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６を参照のこと）； ５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９８／４９１６６を参照のこと）；
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
３−エチル−５−｛５−［４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル］−２−（［（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］オキシ）ピリジン−３−イル｝−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３を参照のこと）；
１−｛６−エトキシ−５−［３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル］−３−ピリジニルスルホニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られる５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例８を参照のこと）；
５−［２−イソブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例１５を参照のこと）；
５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例６６を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１２４を参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１３２を参照のこと）；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（タダラフィル、ＩＣ−３５１、Ｃｉａｌｉｓ（登録商標））、即ち国際特許出願公開公報ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８及び９５の化合物、並びに実施例１、３、７、及び８の化合物；
１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］−ａｓ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−エチルピペラジンとしても知られる２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル、ＬＥＶＩＴＲＡ（登録商標））、即ち国際特許出願公開公報ＷＯ９９／２４４３３の実施例２０、１９、３３７、及び３３６の化合物；
国際特許出願公開公報ＷＯ９３／０７１２４（エーザイ）の実施例１１の化合物；
Rotella D P, J. Med. Chem., 2000, 43, 1257 からの化合物３及び１４；
４−（４−クロロベンジル）アミノ−６，７，８−トリメトキシキナゾリン；
Ｎ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］−ピリミジン−５−イル）−４−プロポキシフェニル］スルホニル］−１−メチル−２−ピロリジンプロパンアミド［「ＤＡ−８１５９」（ＷＯ００／２７８４８の実施例６８）］；及び
７，８−ジヒドロ−８−オキソ−６−［２−プロポキシフェニル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｇ］キナゾリン、及び１−［３−［１−［（４−フルオロフェニル）メチル］−７．８−ジヒドロ−８−オキソ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｇ］キナゾリン−６−イル］−４−プロポキシフェニル］カルボキサミドが含まれる。
【００３４】
本発明と組み合わせて有用であり得るなお他のタイプのｃＧＭＰ ＰＤＥ５阻害剤には：４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、一ナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、一ナトリウム塩；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．４５１６（グラクソウェルカム）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０５１（バイエル）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６４（協和発酵；ＷＯ９６／２６９４０を参照のこと）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６９（シェーリングプラウ）；ＧＦ−１９６９６０（グラクソウェルカム）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（エーザイ）；Ｂａｙ−３８−３０４５及び３８−９４５６（バイエル）；ＦＲ２２９９３４及びＦＲ２２６８０７（藤沢薬品）；及びＳｃｈ−５１８６６が含まれる。
【００３５】
より好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ＤＡ−８１５９、及び５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンより選択される。
【００３６】
最も好ましくは、ＰＤＥ５阻害剤は、シルデナフィルとその医薬的に許容される塩である。クエン酸シルデナフィルが好ましい塩である。
バソプレッシン受容体ファミリーは、Ｖ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ２、及びオキシトシン受容体を含む｛Thibonnier M., Exp. Opin. Invest. Drugs (1998) 7(5), 729-740｝。本発明での使用のためのバソプレッシン受容体アンタゴニストは、好ましくは、Ｖ１ａ受容体とその近縁のオキシトシン受容体に選択的である。オキシトシン受容体での活性は、有益である場合がある。より好ましくは、本発明での使用のためのバソプレッシン受容体アンタゴニストは、Ｖ１ａ受容体に選択的である。
【００３７】
本発明における使用に適したバソプレッシン受容体アンタゴニストの例は、ＵＳ６，０９０，８１８；ＥＰ０８７３３０９；ＷＯ９８／２５９０１；ＷＯ０２／０８３６８５；ＪＰ２０００−６３３６３；及びＷＯ０２／３２８６４に開示される。
【００３８】
本発明での使用のためのＶ１ａ受容体アンタゴニストの例は、ＳＲ４９０４９（Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ）、アトシバン（Ｔｒａｃｔｏｃｉｌｅ（登録商標））、コニバプタン（ＹＭ−０８７）、及びＯＰＣ２１２６８である。さらに、ＷＯ０１／５８８８０に記載されるＶ１ａ受容体アンタゴニストは、本発明における使用に適している。
【００３９】
本発明での使用のためのＶ１ａアンタゴニストのさらなる例は、ＰＣＴ／ＩＢ０３／０４５８７（未公開）とＧＢ特許出願番号０２０２８５２．８（未公開）に開示され、特に、８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレン、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物が好ましい。
【００４０】
ＧＢ特許出願番号０２０２８５２．８は、式（Ｉ）：
【００４１】
【化１】
【００４２】
の化合物、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物を開示する［式中、
Ｗは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ａ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、フェニル、ベンジル、ピリジル、ピリミジル、−ＣＯＲ２、−ＣＯ２Ｒ２、−ＣＯ−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ２Ｒ３、−ＳＯ２Ｒ２、−（ＣＨ２）ｂ−ＯＲ２、−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ２Ｒ３、又はＯ、Ｎ、及びＳより選択される１以上のヘテロ原子を含有する３〜８原子の飽和複素環を表し；
ＸとＹは、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｒ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＮ−、−（ＣＨ２）ｄ−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＲ４ＳＯ２Ｍｅ、−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＯＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＨＣＯＲ４、−（ＣＨ２）ｄ−ＮＲ４ＣＯＲ５、−（ＣＨ２）ｄ−ＯＲ６、又は−（ＣＨ２）ｄ−ＣＯ２Ｒ６を表し；
環Ａは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、又はアゼチジニル基を表し；
環Ｂは、フェニル、ピリジニル、又はピリミジニル基（ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＮＨ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｒ７、及び−（ＣＨ２）ｆ−ＯＲ８より独立して選択される１以上の基で随意に置換される）を表し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ７は、独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｃ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、フェニル、ベンジル、ピリジル、又はピリミジルを表すか；
又は、Ｒ２とＲ３、又はＲ４とＲ５は、それらが付く窒素原子と一緒に、独立して、３〜８原子の複素環を表し；
Ｒ６とＲ８は、独立して、Ｈ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｃ−［Ｃ３−８シクロアルキル］、−（ＣＨ２）ｅ−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｅ−ＯＲ４、フェニル、ベンジル、ピリジル、又はピリミジルを表し；
ｎ＝０、１、又は２であり；
ａ、ｃ、ｄ、及びｆは、いずれも独立して、０、１、２、又は３より選択され；
ｂとｅは、独立して、２又は３より選択される］。
【００４３】
以下のスキームは、式（Ｉ）の化合物の製法を例示し、その全体を通して、環Ａ及びＢと基：Ｗ、Ｘ、Ｙとｎは、他に述べなければ、上記に定義される通りである。（Ｉ’）は、ＷがＮＲ１であるときの（Ｉ）を表す。
【００４４】
【化２】
【００４５】
工程（ａ）：オキサジアゾール（ＩＩ）を酸触媒と反応させて、式（Ｖ）の化合物を得る。典型的には、この反応は、ｐ−ＴＳＡのような好適な酸性触媒、又は塩化マグネシウムのようなルイス酸触媒とともに、キシレンのような高沸点溶媒を随意に使用して、出発材料を１００〜１５０℃のような上昇温度まで１〜４８時間加熱することによって行う。
【００４６】
好ましい条件は：アミン（ＩＩ）と触媒Ｐ−ＴＳＡ、キシレン中、１４０℃で４８時間である。
Ｗ＝ＮＲ１であるとき：
【００４７】
【化３】
【００４８】
［Ｚ’は、ＯＨ又はハロ、典型的にはＣｌである］。
化合物（ＶＩ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
【００４９】
工程（ｂ）：アミン（Ｖ）の化合物（ＶＩ）との反応は、標準法によって行なうことができる。
Ｒ１＝ＣＯＲ２、ＣＯ２Ｒ２、ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ３Ｒ４、ＳＯ２Ｒ２であるとき、典型的には、このカップリングは：
（ｉ）好適な溶媒においてアシル／スルホニル／クロリド（ＶＩ）＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに；又は
（ｉｉ）好適な溶媒において、随意に触媒の存在下の酸（ＶＩ）と慣用のカップリング剤＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに；及び
（ｉｉｉ）Ｒ１がアリール基を表すときは、好適な溶媒において、随意に触媒の存在下のハロゲン化アリール（ＶＩ）＋アミン（Ｖ）を過剰の酸アクセプターとともに使用することによって実行することができる。
【００５０】
典型的には、条件は、以下の通りである：
アシル化／スルホニル化、Ｚ＝Ｃｌ
（ｉ）過剰の塩化アシル／スルホニル（ＶＩ）（in situ 生成）、１当量のアミン（Ｖ）、随意に過剰の３級アミン（Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ（Hunig）塩基、又はＮＭＭのような）とともに、ＤＣＭ又はＴＨＦ中、加熱せずに１〜２４時間。
好ましい条件は：アミン（Ｖ）、１．５当量の酸／塩化スルホニル（ＶＩ）、１．５当量のＮＭＭ、ＤＣＭ中、室温で１６時間。
【００５１】
アミド結合形成、Ｚ＝ＯＨ
（ｉｉ）過剰の酸（ＶＩ）、ＷＳＣＤＩ／ＤＣＣ、及びＨＯＢＴ／ＨＯＡＴ、１当量のアミン（Ｖ）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜４８時間；又は
過剰の酸（ＶＩ）、ＰＹＢＯＰ（登録商標）／ＰｙＢｒＯＰ（登録商標）／Ｍｕｋａｉｙａｍａ（向山）試薬、１当量のアミン（Ｖ）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜２４時間。
【００５２】
アリール化（Ｒ１＝アリール、ヘテロアリール）、Ｚ＝ハロ
（ｉｉｉ）化合物（Ｖ）のアリール化は、好適な塩基（ｔ−ＢｕＯＮａ）、触媒量の好適な添加剤（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチルのような）と好適なパラジウム触媒を、トルエン中、上昇温度で１〜２４時間、不活性気体下に使用するパラジウム触媒化交差カップリング反応によって行って、化合物（Ｉ’）を得ることができる。あるいは、化合物（Ｉ’）は、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、又はヒューニッヒ塩基のような塩基とともに、ＤＭＦ、ＮＭＰ、又は１，４−ジオキサンのような好適な溶媒中、５０℃〜１４０℃のような上昇温度で約１〜４８時間加熱することによって、アミン（Ｉ）の化合物（ＶＩ）との反応により製造してよい。
【００５３】
好ましい条件は：１〜２．５当量のハロゲン化物（ＶＩ）、１〜２当量の炭酸カリウム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、５０℃で４〜１８時間；又は
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＶＩ）、２〜３当量のヒューニッヒ塩基、１，４−ジオキサン又はＮＭＰ中、還流で１８〜４８時間；又は
１当量のハロゲン化物（ＶＩ）、３．５当量のＮａＯｔ−Ｂｕ、０．０８当量のＢＩＮＡＰ、０．４当量のＰｄ（ｄｂａ）２、トルエン中、７０℃で８時間である。
【００５４】
あるいは、化合物（Ｉ’）は、以下のスキーム１．３に示す経路により製造してよい：
【００５５】
【化４】
【００５６】
化合物（ＶＩＩ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
工程（ｃ）：トリアセトキシホウ水素化ナトリウム又はシアノホウ水素化ナトリウムのような還元剤の存在下にアミン（Ｖ）を過剰のアルデヒド／ケトン（ＶＩＩ）と反応させて、式（Ｉ’）の化合物を得る。この反応は：
ジクロロメタンのような好適な溶媒において２０℃〜８０℃のような温度で１〜４８時間、出発材料を撹拌すること、又は
四塩化チタン又はチタンテトライソプロポキシドのような好適なルイス酸触媒とともに、ジクロロメタン又はエタノールのような好適な溶媒中５０℃〜１００℃のような温度で１〜１８時間アミン（Ｖ）を過剰の化合物（ＶＩＩ）と加熱することに続く、ホウ水素化ナトリウムのような好適な還元剤での中間体イミン／イミニウム分子種の還元、又は酸化白金又はパラジウム担持カーボンのような好適な触媒上での水素化分解によって行なうことができる。
【００５７】
好ましい条件は：アミン（Ｖ）、１．５当量のアルデヒド／ケトン（ＶＩＩ）、２．０当量のトリアセトキシホウ水素化ナトリウム、ジクロロメタン中、室温で２時間である。
環ＢがＮ原子を介して環Ａへ連結して、ＷがＯ又はＳを表すときは：
【００５８】
【化５】
【００５９】
［Ｐｒｏｔは、窒素に適した保護基、例えば、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はアリルカルバメートを表す。教科書（例えば、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著）に見出されるような、窒素保護基の標準的な方法論を使用する。Ｚは、ハロゲンのような脱離基を表す］。
【００６０】
化合物（ＩＶ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
化合物（ＩＩＩ）のアリール化は、上記の工程（ｂ）に記載のように行なってよい。好ましい条件は：
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＩＶ）、１〜２当量の炭酸カリウム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、５０℃で４〜１８時間；又は
１〜２．５当量のハロゲン化物（ＩＶ）、２〜３当量のヒューニッヒ塩基、１，４−ジオキサン又はＮＭＰ中、還流で１８〜４８時間；又は
１当量のハロゲン化物（ＩＶ）、３．５当量のＮａＯｔ−Ｂｕ、０．０８当量のＢＩＮＡＰ、０．４当量のＰｄ（ｄｂａ）２、トルエン中、７０℃で８時間である。
【００６１】
工程（ｄ）：化合物（ＩＸ）の脱保護化は、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著に記載されるような、標準の方法論を使用して行う。
【００６２】
ＰｒｏｔがＢｏｃであるとき、好ましい方法は：
塩化水素、１，４−ジオキサンのような好適な溶媒中、室温で１〜１６時間；又は
トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液中、１〜２時間である。
【００６３】
ＰｒｏｔがＣＢｚであるとき、好ましい方法は、エタノールのような溶媒において好適なパラジウム触媒を使用する水素化分解である。
Ｐｒｏｔがアリルカルバメートであるとき、好ましい条件は、チオ安息香酸とＰｄ２（Ｄｂａ）３のような好適なパラジウム触媒、１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタンのような好適なホスフィン添加剤とともに、テトラヒドロフラン中２０分間である。
【００６４】
環ＢがＮ原子を介して環Ａへ連結して、ＷがＮＲ１を表すときは：
【００６５】
【化６】
【００６６】
［Ｐｒｏｔは、窒素に適した保護基、例えば、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はアリルカルバメートを表す。教科書（例えば、「有機合成の保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」T. W. Greene 及び P. Wutz 著）に見出されるような、窒素保護基の標準的な方法論を使用する。Ｚは、ハロ（典型的には、Ｃｌ）を表す。Ｚ’は、脱離基（典型的には、Ｃｌ又はＯＨを表す］。
【００６７】
化合物（ＩＶ）としての使用に適した化合物は、市販されているか又は文献に知られている。
化合物（ＩＸ’’）は、典型的には、上記の工程（ｂ）及び工程（ｃ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＸ’）より製造することができる。
【００６８】
化合物（ＩＩＩ’）は、典型的には、上記の工程（ｄ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＸ’’）より製造することができる。
化合物（Ｉ’）は、典型的には、上記の工程（ｂ）に記載の方法論を使用して、化合物（ＩＩＩ’）のアリール化によって製造することができる。
【００６９】
化合物（ＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又は以下のスキーム３．１及び３．２に示すように製造することができる。
【００７０】
【化７】
【００７１】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００７２】
【化８】
【００７３】
化合物（ＸＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又は標準の方法論：例えば、安息香酸又はベンゾニトリルの還元を使用して製造することができる。
ＷがＮＲ１を表すとき：
工程（ｅ）：化合物（Ｘ）／（ＸＩＩ）を、随意にトリエチルアミン、ヒューニッヒ塩基、又は炭酸カリウムのようなプロトンアクセプターとしての過剰の塩基の存在下に、ＴＨＦ、トルエン、又はＤＭＦのような好適な高沸点溶媒において、５０℃〜１００℃の温度で１〜４８時間、過剰の化合物（ＸＩ）と反応させて、それぞれ化合物（ＩＩ）／（ＶＩＩＩ）を得る。
【００７４】
好ましい条件は：２．５当量の化合物（ＸＩ）、ＴＨＦ中、５０℃で４８時間である。
ＷがＯ又はＳを表すとき：
工程（ｅ）：化合物（Ｘ）／（ＸＩＩ）を、水素化ナトリウム、カリウムヘキサメチルジシラジド、ｎブチルリチウム、又は塩化マグネシウムイソプロピルのような塩基の存在下に、ＴＨＦ、トルエン、又はＮＭＰのような好適な溶媒において、０℃〜５０℃の温度で１〜２４時間、過剰の化合物（ＸＩ）と反応させて、それぞれ化合物（ＩＩ）／（ＶＩＩＩ）を得る。
【００７５】
好ましい条件は：３当量の化合物（ＸＩ）と２．５当量のＮａＨ、ＴＨＦ中、２０℃で２時間である。
化合物（Ｘ）及び（ＸＩＩ）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又はスキーム４．１及び４．２に示すように製造することができる。
【００７６】
【化９】
【００７７】
［Ｘ’は、ＯＨ又はハロを表し、好ましくはＣｌを表す。ＬＧは、脱離基、典型的にはハロ、好ましくはクロロ又はブロモを表す］。
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００７８】
【化１０】
【００７９】
［Ｘ’は、ＯＨ又はハロを表し、好ましくはＣｌを表す。ＬＧは、脱離基、典型的にはハロ、好ましくはクロロ又はブロモを表す］。
化合物（ＸＩＶ）は、市販されているか、又は文献に知られている。
【００８０】
工程（ｆ）：化合物（ＸＩＶ）とヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）の反応は、標準法によって行なうことができる。
カップリングは：
（ｉ）好適な溶媒において、塩化アシル（ＸＩＶ）＋ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を過剰の酸アクセプターとともに；又は
（ｉｉ）好適な溶媒において、随意に触媒の存在下の酸（ＸＩＶ）と慣用のカップリング剤＋ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を過剰の酸アクセプターとともに使用して、行ってよい。
【００８１】
典型的には、条件は、以下の通りである：
（ｉ）酸クロリド（ＸＩＶ）（in situ 生成）、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、随意にＥｔ３Ｎのような三級アミン、ヒューニッヒ塩基、又はＮＭＭの過剰とともに、ＤＣＭ又はＴＨＦ中、加熱せずに１〜２４時間；又は
（ｉｉ）酸（ＸＩＶ）、ＷＳＣＤＩ／ＤＣＣ、及びＨＯＢＴ／ＨＯＡＴ、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜４８時間；又は
（ｉｉｉ）酸（ＸＩＶ）、ＰＹＢＯＰ（登録商標）／ＰｙＢｒＯＰ（登録商標）／Ｍｕｋａｉｙａｍａ試薬、過剰のヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、過剰のＮＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、ヒューニッヒ塩基とともに、ＴＨＦ、ＤＣＭ、又はＥｔＯＡｃ中、室温で４〜２４時間。
【００８２】
好ましい条件は：ヒドラジド（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）、１．５当量の塩化クロロアセチル（ＸＩＶ）、１．５当量のＮＭＭ、ＤＣＭ中、室温で１６時間である。
工程（ｇ）：化合物（ＸＶ／ＸＶ’）の環化は、好適な脱水条件下に、上昇温度で１８時間まで行う。典型的には、ポリリン酸、オキシ塩化リン、無水トリフル酸のような脱水剤を２０〜１２０℃の温度で５分〜１２時間使用する。随意に、この反応は、ピリジンのような塩基やジクロロメタン及びアセトニトリルのような好適な溶媒の存在下に行ってよい。あるいは、Rigo et al. Synth. Commun. 16(13), 1665, 1986 の方法に従ってオキサジアゾール（ＸＩＩ／Ｘ）を製造してよい。
【００８３】
好ましい条件は：オキシ塩化リン、１００℃で８時間、又は２．５当量の無水トリフル酸、５当量のピリジン、ジクロロメタン中、２０℃で３時間である。
化合物（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）としての使用に適した化合物は、文献に知られているか、又はスキーム５．１及び５．２に示すように製造することができる。
【００８４】
【化１１】
【００８５】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００８６】
【化１２】
【００８７】
化合物（ＸＶＩ）／（ＸＶＩ’）と保護化ヒドラジンは、市販されているか、又は対応するエステルの加水分解のような標準の方法論に知られている。
（ＸＶ／ＸＶ’）の製法について上記に記載の条件を使用してカルボン酸（ＸＶＩ）／（ＸＶＩ’）と保護化ヒドラジン（ここで、ｐｒｏｔ＊は、典型的にはＢｏｃである）をカップリングして、それぞれ化合物（ＸＶＩＩ／ＸＶＩＩ’）を得ることができて、次いで、上記に記載のような工程（ｄ）に記載の標準の方法論を使用してｐｒｏｔ＊を外して、（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）を得る。
【００８８】
化合物（ＸＩＩＩ／ＸＩＩＩ’）への代替経路を以下のスキーム６．１及び６．２に示す。
【００８９】
【化１３】
【００９０】
環Ａ及びＢがＮ原子により連結するとき：
【００９１】
【化１４】
【００９２】
工程（ｈ）：エステル（ＸＶＩＩＩ／ＸＶＩＩＩ’）をメタノールのような好適な溶媒中のヒドラジンと上昇温度で反応させて、ヒドラジド（ＸＶＩＩ／ＸＶＩＩ’）を得ることができる。
【００９３】
好ましい条件は：３当量のヒドラジン、メタノール中、還流で１８時間である。
本発明に使用のバソプレッシン受容体アンタゴニストは、以下に説明するスクリーニングで試験することができる。
【００９４】
１．０ Ｖ１Ａフィルター結合アッセイ
１．１ 膜調製
ヒトＶ１Ａ受容体を安定的に発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ）より調製する細胞膜で受容体結合アッセイを実施した。ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞系は、ライセンス契約の下で、Marc Thibonnier（オハイオ州クリーブランド Case Western Reserve University 医学校、医学部）の厚意により提供された。１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物において、５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃でＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を定常的に維持した。細胞ペレットのバルク産生のために、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１５ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物の培地を含有する８５０ｃｍ３ローラーボトルにおいて、付着性のＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を９０〜１００％の集密度まで増殖させた。集密したＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、氷冷ＰＢＳ中へ採取して、１，０００ｒｐｍで遠心分離した。細胞ペレットを使用まで−８０℃に保存した。細胞ペレットを氷上で融かし、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２からなり、プロテアーゼ阻害剤カクテル（ロッシュ）を補充した膜調製緩衝液においてホモジェナイズした。この細胞ホモジェネートを１０００ｒｐｍ、１０分、４℃で遠心分離して、上清を除いて、氷上に保存した。残るペレットを、先と同じようにホモジェナイズして遠心分離した。上清をプールして、２５，０００ｘｇで、４℃で３０分間遠心分離した。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び２０％グリセロールからなる凍結緩衝液にペレットを再懸濁させて、使用まで少量ずつ−８０℃に保存した。Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬と標準品としてのＢＳＡを使用して、タンパク濃度を決定した。
【００９５】
１．２ Ｖ１Ａフィルター結合
それぞれの新しい膜のバッチに対して、タンパク線形性に続いて飽和結合試験を実施した。曲線の直線部分で特異的な結合を与える膜濃度を選択した。次いで、様々な濃度の［３Ｈ］−アルギニンバソプレッシン、［３Ｈ］−ＡＶＰ（０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ）を使用する飽和結合試験を実施して、ＫｄとＢｍａｘを決定した。
【００９６】
ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ膜への［３Ｈ］−ＡＶＰ結合に対する効果を化合物について試験した（３Ｈ−ＡＶＰ；比活性６５．５Ｃｉ／ミリモル；ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶化し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び０．０５％ ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝液で１０％ ＤＭＳＯの作業濃度へ希釈した。２５μｌの化合物と２５μｌの［３Ｈ］−ＡＶＰ（膜バッチで定量したＫｄ以下の最終濃度、典型的には０．５ｎＭ〜０．６ｎＭ）を９６ウェルの丸底ポリプロピレンプレートへ加えた。２００μｌの膜の添加により結合反応を開始して、プレートを室温で６０分間穏やかに振り混ぜた。ペプチド粘着を防ぐために０．５％ポリエチレンイミンに予め浸漬した９６ウェルＧＦ／Ｂ ＵｎｉＦｉｌｔｅｒ Ｐｌａｔｅを通すＦｉｌｔｅｒｍａｔｅ Ｃｅｌｌ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（パッカード・インスツルメンツ）を使用する迅速濾過によって、この反応を止めた。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）及び５ｍＭ ＭｇＣｌ２を含有する１ｍｌの氷冷洗浄緩衝液でフィルターを３回洗浄した。このプレートを乾燥させ、各ウェルへ５０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−０（パッカード・インスツルメンツ）を加えた。プレートにシールして、TopCount Microplate Scintillation Counter（パッカード・インスツルメンツ）で計数した。非特異結合（ＮＳＢ）は、１μＭの非標識ｄ（ＣＨ２）５Ｔｙｒ（Ｍｅ）ＡＶＰ（［β−メルカプト−β，β−シクロペンタメチレンプロピオニル、０−Ｍｅ−Ｔｙｒ２，Ａｒｇ８］−バソプレッシン）（βＭＣＰＶＰ）（シグマ）を使用して定量した。放射リガンド結合データは、最小値を０％へ強制する４変数ロジスティック式を使用して解析した。傾きを自由に適合させ、有効（valid）曲線用に−０．７５と−１．２５の間に落とした。特異結合は、平均トータルｃｐｍより平均ＮＳＢ ｃｐｍを差し引くことによって計算した。試験化合物では、受容体へ結合したリガンドの量を、結合（％）＝［（試料ｃｐｍ−平均ＮＳＢ ｃｐｍ）／特異結合ｃｐｍ］ｘ１００として表現した。試験化合物の濃度に対して結合（％）をプロットして、Ｓ字状曲線を適合させた。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式：Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ）（ここで［Ｌ］は、ウェル中に存在するリガンドの濃度であり、Ｋｄは、スキャッチャードプロット解析より得られる放射リガンドの解離定数である）を使用して、阻害解離定数（Ｋｉ）を計算した。
【００９７】
２．０ Ｖ１Ａ機能アッセイ：ＡＶＰ／Ｖ１Ａ−Ｒ仲介性Ｃａ２＋可動化の阻害、ＦＬＩＰＲ（蛍光造影プレートリーダー）（モレキュラー・デバイス）による
ＦＬＩＰＲを使用して、ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞における細胞内カルシウム放出を測定した。これにより、受容体活性化に続くカルシウムの迅速な検出が可能になる。ＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞系は、ライセンス契約の下で、Marc Thibonnier（オハイオ州クリーブランド Case Western Reserve University 医学校、医学部）の厚意により提供された。１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、及び４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充したＤＭＥＭ／Ｈａｍｓ Ｆ１２栄養混合物において、５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃でＣＨＯ−ｈＶ１Ａ細胞を定常的に維持した。アッセイ前の午後に、各ウェルの底からの細胞視察と蛍光測定を可能にする、底が澄明な黒い無菌の９６ウェルプレートへ、２０，０００細胞／ウェルの密度で細胞をプレート培養した。ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水（ＤＢＰＳ）及び２．５ｍＭプロベネシドを含有する洗浄緩衝液と、４μＭ Ｆｌｕｏ−３−ＡＭ（ＤＭＳＯ及びプルロン酸に溶かす）（モレキュラー・プローブズ）及び２．５ｍＭプロベネシドを含有する細胞培養基からなるローディング色素をアッセイの当日に用時調製した。化合物をＤＭＳＯに可溶化し、１％ ＤＭＳＯ、０．１％ ＢＳＡ、及び２．５ｍＭプロベネシドを含有するＤＰＢＳからなるアッセイ緩衝液に希釈した。５％ ＣＯ２入り加湿空気中３７℃で１時間、ウェルあたり１００μｌのローディング色素とともに細胞をインキュベートした。色素ローディングの後で、Ｄｅｎｌｅｙプレート洗浄器を使用して、１００μｌの洗浄緩衝液に細胞を３回洗浄した。１００μｌの洗浄緩衝液を各ウェルに残した。ＦＬＩＰＲを使用して、細胞内の蛍光を測定した。５０μｌの試験化合物を３０秒後に加えて、２秒間隔で蛍光読み取りを得た。次いで、さらに１５５回の測定を２秒間隔で行って、化合物のアゴニスト活性を検出した。次いで、５０μｌのアルギニンバソプレッシン（ＡＶＰ）を加えて、最終アッセイ量を２００μｌとした。さらなる蛍光読み取りを１秒間隔で１２０秒間収集した。ピーク蛍光強度（ＦＩ）として応答を測定した。薬理学的な特性決定では、各蛍光応答より基底ＦＩを差し引いた。ＡＶＰ用量応答曲線では、その系列のＡＶＰの最高濃度に対する応答の百分率（％）として各応答を表した。ＩＣ５０決定では、ＡＶＰに対する応答の百分率（％）として各応答を表した。アゴニスト濃度、［Ａ］、アゴニストＥＣ５０、及び傾きを考慮するＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式：Ｋｂ＝ＩＣ５０／（２＋［Ａ］／Ａ５０）ｎ）１／ｎ−１（ここで、［Ａ］はＡＶＰの濃度であり、Ａ５０は用量応答曲線からのＡＶＰのＥＣ５０であり、ｎはＡＶＰ用量応答曲線の傾きである）を使用して、ＩＣ５０値を修正Ｋｂ値へ変換した。
【００９８】
本組合せ発明に使用の化合物は、非溶媒和型だけでなく、水和型が含まれる溶媒和型で存在する場合がある。一般に、水和型が含まれる溶媒和型は、同位体置換（例、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯ）を含有する場合があるが、非溶媒和型と同等であり、本発明の範囲内に含まれる。
【００９９】
本発明に使用の化合物は、１以上のキラル中心を保有する場合があり、各中心は、Ｒ（Ｄ）又はＳ（Ｌ）配置で存在する場合がある。本発明には、すべてのエナンチオマー型とエピマー型、並びにこれらの適切な混合物が含まれる。ジアステレオマー又はｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体の分離は、慣用の技術、例えば、本発明の化合物又はその好適な塩又は誘導体の立体異性混合物の分画結晶化、クロマトグラフィー、又はＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によって達成することができる。
【０１００】
本発明に使用の化合物の本範囲内にまた含まれるのは、その多形である。
さらなる側面において、上記に定義される（Ａ）と上記に定義される（Ｂ）の有効量の混合物を医薬的に許容される担体と随意に一緒に含んでなる、予防的に、又は疼痛が始まったときに投与するための医薬組成物が提供される。
【０１０１】
本発明の医薬組成物において、（Ａ）は、用量につき１ｍｇ〜１０００ｍｇまでの量で存在して、（Ｂ）は、用量につき１ｍｇ〜１０００ｍｇの量で存在する。どんな場合でも医師が個別の患者に最も適する実際量を決定し、それは、特別な患者の年齢、体重、及び応答で変動するものである。上記の投与量は、平均的な症例の例示である。当然ながら、より高いか又はより低い投与量の範囲が有利である個別の事例があり得て、そのような事例も本発明の範囲内にある。
【０１０２】
本発明の医薬組成物は、単独で投与してよいが、一般的には、１以上の医薬的に許容される賦形剤と一緒の製剤として投与される。用語「賦形剤」は、本明細書において、本発明の化合物以外のあらゆる成分を記載するために使用する。賦形剤の選択は、大部分は投与の特別な形式に依存するものである。
【０１０３】
本発明に使用の化合物は、経口投与することができる。経口投与は、化合物が胃腸管に入るような嚥下を伴っても、又は化合物が口から直接血流に入る頬内又は舌下投与を利用してもよい。
【０１０４】
経口投与に適した製剤には、錠剤、粒子を含有するカプセル剤、液剤、又は散剤、甘味入り錠剤（液体充填剤が含まれる）、噛み剤（chews）、多粒子剤及びナノ粒子剤、ゲル剤、フィルム剤（粘接着剤が含まれる）、丸剤（ovules）、スプレー剤のような固体製剤と液体製剤が含まれる。
【０１０５】
液体製剤には、懸濁液剤、溶液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は、軟又は硬カプセル剤中の充填剤として利用してよく、典型的には、担体、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は好適なオイルと、１以上の乳化剤及び／又は懸濁剤を含む。液体製剤は、固形物の復元によって、例えば、サシェ剤より調製してもよい。
【０１０６】
本発明に使用の化合物は、Liang and Chen による Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11(6), 981-986 (2001) に記載されるような速溶解性、速崩壊性の剤形で使用してもよい。
【０１０７】
典型的な錠剤は、製剤化学者に知られた標準法を使用して、例えば、直接圧縮、造粒（乾式、湿式、又は融解）、融解凝結、又は押出しによって調製することができる。錠剤製剤は、１以上の層を含む場合があり、被覆しても被覆しなくてもよい。
【０１０８】
経口投与に適した賦形剤の例には、担体（例えば、セルロース、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、マンニトール、及びクエン酸ナトリウム）、造粒結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、及びゼラチン）、崩壊剤（例えば、ナトリウムデンプングリコラート、及びケイ酸塩）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、及びステアリン酸）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、保存剤、抗酸化剤、芳香剤、及び着色剤が含まれる。
【０１０９】
経口投与用の固体製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。高エネルギー分散剤、浸透及び被覆粒子のような好適な修飾放出技術の詳細は、Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001) に見出すことができる。他の修飾放出製剤は、米国特許第６，１０６，８６４号に記載されている。
【０１１０】
本発明に使用の化合物は、血流、筋肉、又は内臓へ直接投与してもよい。非経口投与に適した手段には、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、及び皮下投与が含まれる。非経口投与に適したデバイスには、針（ミクロ針が含まれる）注射器、無針注射器、及び注入技術が含まれる。
【０１１１】
非経口製剤は、典型的には、塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくは、３〜９のｐＨへ）のような賦形剤を含有し得る水溶液剤であるが、いくつかの応用では、それらは、より好適には、無菌の非水性溶液剤として、又は無菌の発熱物質を含まない水のような好適な担体と一緒に使用すべき乾燥型として製剤化してよい。
【０１１２】
非経口製剤の無菌条件下での、例えば凍結乾燥による調製は、当業者によく知られた標準の製剤技術を使用して、容易に達成することができる。
非経口溶液剤の調製に使用する式（Ｉ）の化合物の溶解性は、好適な処理、例えば高エネルギースプレー乾燥分散の使用（ＷＯ０１／４７４９５を参照のこと）によって、及び／又は溶解促進剤の使用のような適切な製剤技術の使用によって高めてよい。
【０１１３】
非経口投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１１４】
本発明に使用の化合物はまた、皮膚又は粘膜へ、皮膚からか又は経皮的に局所投与してよい。この目的のための典型的な製剤には、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、溶液剤、クリーム剤、軟膏剤、粒子散剤、包帯剤、フォーム剤、フィルム剤、皮膚パッチ剤、カシェ剤、インプラント、スポンジ、ファイバー、包帯、及びミクロエマルジョンが含まれる。リポソームも使用してよい。典型的な担体には、アルコール、水、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、及びプロピレングリコールが含まれる。浸透エンハンサーを取り込んでよく、例えば、Finnin 及び Morganによる J Pharm Sci, 88(10), 955-958 (1999年10月) を参照のこと。
【０１１５】
局所投与の他の手段には、イオン導入、エレクトロポレーション、ホノフォレーシス（phonophoresis）、超音波導入（sonophoresis）、及び、無針又はミクロ針注射による送達が含まれる。
【０１１６】
局所投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。このように、本発明に使用の化合物は、この活性化合物の長期放出を提供する埋込みデポー剤としての投与のためにより硬い形態に製剤化してよい。
【０１１７】
本発明に使用の化合物はまた、典型的には乾燥粉末の形態で（例えば乳糖との乾燥混和物中の混合物として単独で、又は、例えばリン脂質と混合した混合成分粒子として）、乾燥粉末吸入器からか、又は加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー（好ましくは、電気水力学を利用して微細粒子を産生するアトマイザー）、又はネブライザーより、ジクロロフルオロメタンのような好適な推進剤の使用を伴うか又は伴わずに、エアゾールスプレーとして鼻腔内又は吸入により投与してよい。
【０１１８】
加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、又はネブライザーは、例えば、エタノール（場合により、水性エタノール）、又は活性化合物を分散、可溶化、又はその放出を拡張するのに適した他の薬剤、溶媒としての推進剤、及びソルビタントリオレエート又はオリゴ乳酸のような随意の界面活性剤を含んでなる、活性化合物の溶液剤又は懸濁液剤を含有する。
【０１１９】
乾燥粉末又は懸濁製剤における使用に先立って、医薬生成物は、吸入による送達に適したサイズ（典型的には、５ミクロン未満）へ微小化する。このことは、らせんジェット粉砕、流動床ジェット粉砕、ナノ粒子を形成する超臨界流体処理、高圧均質化、又はスプレー乾燥のような、どの適切な粉砕法によっても達成してよい。
【０１２０】
電気水力学を利用して微細粒子を産生するアトマイザーにおける使用に適した溶液製剤は、１回の作動につき本発明の化合物の１μｇ〜１０ｍｇを含有してよく、この作動量は、１μｌ〜１００１μｌへ変動してよい。典型的な製剤は、式（Ｉ）の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノール、及び塩化ナトリウムを含む場合がある。プロピレングリコールの代わりに使用してよい代替溶媒には、グリセロールとポリエチレングリコールが含まれる。
【０１２１】
吸入器又は通気器における使用のカプセル剤、ブリスター剤、及びカートリッジ剤（例えば、ゼラチン又はＨＰＬＣより作製する）は、本発明の化合物の粉末混合物、乳糖又はデンプンのような好適な粉末基剤、及び、ｌ−ロイシン、マンニトール、又はステアリン酸マグネシウムのような性能修飾剤を含有するように製剤化してよい。
【０１２２】
吸入／鼻腔内投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２３】
本発明に使用の化合物は、例えば、坐剤、ペッサリー、又は浣腸剤の形態で、直腸、膣内、又は子宮内経路により投与してよい。ココア脂が従来の坐剤基剤であるが、様々な代替物を適宜使用してよい。
【０１２４】
直腸／膣投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２５】
本発明に使用の化合物は、典型的には、ｐＨ調節した等張の無菌生理食塩水中の微小化した懸濁液又は溶液の滴剤の形態で、眼又は耳へ直接投与してもよい。眼及び耳への投与に適した他の製剤には、軟膏剤、生物分解性（例、吸収ゲルスポンジ、コラーゲン）及び非生物分解性（例、シリコーン）のインプラント、カシェ剤、レンズ、及び粒子や、ニオソーム又はリポソームのような小胞系が含まれる。架橋結合性ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロースのポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はメチルセルロース）、又はヘテロ多糖ポリマー（例えば、ゼラチンゴム）のようなポリマーを、塩化ベンザルコニウムのような保存剤と一緒に取り込んでよい。このような製剤は、イオン導入によって送達してもよい。
【０１２６】
眼／耳からの投与用の製剤は、即時及び／又は修飾放出であるように製剤化してよい。修飾放出製剤には、遅延、持続、拍動、制御二重、標的化、及びプログラムされた放出が含まれる。
【０１２７】
本発明に使用の化合物は、シクロデキストリン又はポリエチレングリコール含有ポリマーのような可溶性の高分子実体と組み合わせて、その可溶性、溶解速度、味のマスキング、バイオアベイラビリティ、及び／又は安定性を改善してよい。
【０１２８】
例えば、薬物−シクロデキストリン複合体は、ほとんどの剤形及び投与経路に概ね有用であることが見出されている。封入と非封入の両方の複合体を使用してよい。薬物との直接複合化に代わるものとして、シクロデキストリンは、補助添加剤として、即ち、担体、希釈剤、又は可溶化剤として使用してよい。これらの目的に最も一般的に使用されるのは、α、β及びγ−シクロデキストリンであり、その例は、国際特許出願番号ＷＯ９１／１１１７２、ＷＯ９４／０２５１８、及びＷＯ９８／５５１４８に見出すことができる。
【０１２９】
本発明の組成物は、直接注射により投与してよい。ある適用では、好ましくは薬剤を経口投与する。ある適用では、好ましくは薬剤を局所投与する。
本発明による医薬組成物は、本発明の化合物の０．１％〜９５％、好ましくは１％〜７０％を含有してよい。
【０１３０】
本明細書に使用する「有効量」は、求められる生物学的又は医学的応答を引き起こす（Ａ）及び（Ｂ）の量である。治療の方法に利用する（Ａ）及び（Ｂ）の１日用量は、上記に記載の医薬組成物における使用に記載の用量に類似している。本発明による治療の方法において、（Ａ）と（Ｂ）は単一の剤形で一緒に組み合わせて投与しても、それらは、それぞれがそれ自身の剤形であるが、同じ療法治療プログラムの一部として、別々に、本質的には同時に投与してもよく、（Ａ）と（Ｂ）を異なる時期に、異なる経路により別々に投与する場合があると想定される。
【０１３１】
実施例：
子宮筋層シナジー試験
方法論：
Ｖ１Ａアンタゴニスト／ＰＤＥ阻害剤の組合せ治療の子宮筋層収縮性に対する効果は、in vitro 機能臓器浴試験を使用して検討することができる。子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の平滑筋調製物）、例えば、子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋にクレブス緩衝液中３７℃で１ｇの張力をかける（試験によっては、この組織の自発収縮を抑えるために、異なる実験条件、例えば３２℃で、あるいは異なる変数でカルシウムを減らして実施する必要があり得ることに留意すること）。各組織においてその生存能力を確認するためにＫＣｌに対する収縮応答を得て、今後のデータをこの収縮応答の百分率として表すことができる。次いで、２種類の実験を実施することができる：
１．ＰＤＥ阻害剤（例、３−エチル−５−｛５−［（４−エチルピペラジノ）スルホニル］−２−プロポキシフェニル｝−２−（２−ピリジルメチル）−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン）を単独で、又はＶ１Ａアンタゴニスト（例、ＳＲ４９０５９）と組み合わせて投与して、基底の緊張に対する効果を検査する。引き続き、アルギニンバソプレッシン（ＡＶＰ）に対する濃度依存性の用量応答曲線を作成する。後続のＡＶＰ用量応答曲線を解析するときには、基底の緊張におけるあらゆる変化を考慮する。この実験の各部分に適切な調整を含める。
【０１３２】
２．組織をＡＶＰで収縮させる。定常的な収縮応答に達したときに、単一用量、又はＰＤＥ阻害剤に対する濃度応答曲線、Ｖ１Ａアンタゴニスト又は２剤の組合せを投与することができる。この実験の各部分に適切な調整を含める。
【０１３３】
【化１５】
【０１３４】
ヒト子宮筋層は、内因性の収縮活性を有する。ＡＶＰの存在下で、固有の子宮収縮の回数は、患者で有意に増加する（Akerlund, 1997）。ＡＶＰを子宮平滑筋切片上へ ex vivo 投与するとき、子宮収縮の増加も見られる（曲線下面積により測定されるように）。１００ｎＭのＰＤＥ５阻害剤の存在下ではＡＤＰ誘発収縮の回数に有意な変化はないが、Ｖ１Ａアンタゴニストの存在下では、ＡＵＣの７６％低下がある（患者でも見られる効果（Bossmar et al 1997））。ＰＤＥ５ｉとＶ１Ａアンタゴニストを組み合わせて投与するとき、子宮収縮を阻害することに対して顕著な相乗効果がある。アゴニスト（ＡＶＰ）誘発性の収縮活性がすべて阻害されるだけでなく、基底の子宮筋層収縮の緊張も抑制される。故に、Ｖ１ＡアンタゴニストとＰＤＥ阻害剤の組合せが、月経困難症の女性に見られるような子宮筋層の過剰収縮を有効に抑制するだけでなく、基底の子宮筋層緊張を予想外に減少させることが明瞭に証明されている。従って、疾患進行を遅らせる、長期の有益な効果がもたらされる。
【０１３５】
上記の組合せにより明示される相乗作用により、そのような療法は、最も重篤な症例における効力の増加が含まれる、効力の増加の可能性に加えて、効果をもたらすのに必要とされるそれぞれの個別薬剤の用量を減らすことができて、それにより副作用の機会を減少させるという可能性を開く。さらに、子宮筋層と子宮動脈がその弛緩状態を維持するならば、必要とされる治療の期間の短縮も起こり得る。
【０１３６】
子宮動脈シナジー試験
動脈シナジー試験の方法論：
前臨床的に、in vitro 機能臓器浴試験を使用して、増加血流に対するＰＤＥ５ｉの効果と子宮平滑筋収縮を抑えるＶ１Ａアンタゴニストの効果を示すことができる。
【０１３７】
１．子宮摘出術を受けている女性由来の子宮動脈（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の動脈調製物）にクレブス緩衝液中３７℃ではじめは２ｇの張力をかけて、次いで１ｇへ再調整する。この組織をフェニレフリンで収縮して、アセチルコリンに対する濃度用量応答曲線を得る。動脈が＞６０％弛緩するならば、動脈の内皮は、インタクトであるとみなされる。インタクトな内皮のある動脈輪をフェニレフリンで再収縮させて、ＰＤＥ阻害剤に対する濃度応答曲線を得る。
【０１３８】
２．子宮摘出術を受けている女性より入手した子宮平滑筋（又は、Ｖ１Ａ受容体を含有するヒト又は動物の平滑筋調製物）にクレブス緩衝液（カルシウムを減らした）中３２℃で１ｇの張力をかける（この組織の自発収縮を低下させるには、温度とカルシウムの抑制が必要とされる）。各組織においてその生存能力を確認するためにＫＣｌに対する収縮応答を得て、今後のデータをこの収縮応答の百分率として表すことができる。Ｖ１Ａアンタゴニストを投与した後で、ＡＶＰに対する濃度応答曲線を得る。あるいは、子宮筋層シナジー試験の方法論を使用してよい。
【０１３９】
子宮筋層及び子宮動脈におけるシナジーを検討する臨床試験：
本態性月経困難症に罹患している女性において経口療法を使用して、個別成分と組合せ療法をともに臨床的に試験する。本態性月経困難症の履歴がある１２名の女性を活用する、無作為二重盲検プラセボ対照試験において、ＰＤＥ阻害剤又はＶ１Ａアンタゴニスト（例、ＳＲ４９０５９）のそれ自身の効果、又は組合せにおける効果を検証する。実験は、３回の、通常は連続した月経周期の最初の３日以内の３回の場合に実施しなければならない。３次元ドップラー速度測定、２次元色ドップラー（出力ドップラーシグナル強度として測定する）、又は対比増強ＭＲＩのいずれかを使用して子宮動脈の血流を測定して、子宮内子宮圧カテーテル（子宮内圧曲線下の面積（ＡＵＣ）として測定する）の挿入、３次元超音波検査法、又は虚血バイオマーカーのいずれかによって子宮平滑筋収縮を測定する。患者への薬物投与の前及び後の時間間隔で子宮血流と子宮筋層収縮の両方を試験する。下腹部の疼痛も、「痛みなし」〜「最大の痛み」へ段階付ける１０ｃｍ目視アナログ尺度（ＶＡＳ）で連続的に記録することができる。
【０１４０】
８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレンの合成
製法１：３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸ヒドラジド
【０１４１】
【化１６】
【０１４２】
ヒドラジン水和物（６２０μｌ，２０ミリモル）を含有するメタノール（２０ｍｌ）に３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸エチルエステル（１ｇ，４．３ミリモル）（参考文献、Farmaco, 1993, 48(10), 1439 を参照のこと）を溶かし、還流で１８時間加熱した。この混合物を室温へ冷やし、減圧で蒸発させた。生じた固形物をプロパン−２−オールで摩砕して、表題化合物（４９３ｍｇ）を白い固形物として得た。
【０１４３】
ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２２１［Ｍ＋Ｈ］＋．
製法２：３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−カルボン酸Ｎ’−（２−クロロ−アセチル）−ヒドラジド
【０１４４】
【化１７】
【０１４５】
製法１のヒドラジド（２３．６ｇ，０．１１モル）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に懸濁させて、４−メチルモルホリン（１７．７ｍｌ，０．１６モル）を加えた。氷浴を使用してこの混合物を冷やして、塩化クロロアセチル（１２．８ｍｌ，０．１６モル）を滴下した。この反応物を室温へ温めて、３時間撹拌した。生じた固形物を濾過により単離し、ジクロロメタンとジエチルエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物（２０．４ｇ）を得た。
【０１４６】
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ ＥＳ＋ ２９７［Ｍ＋Ｈ］＋．
製法３：４−（５−クロロメチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル
【０１４７】
【化１８】
【０１４８】
製法２のヒドラジド（２０．４ｇ，６９ミリモル）をオキシ塩化リン（１５０ｍｌ）に１００℃で４時間懸濁させた。この混合物を冷やして、溶媒を減圧で蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶かして、水へ加えた。水層を固体炭酸水素ナトリウムの添加により塩基性にして、相を分離させた。水相を酢酸エチル（ｘ２）で抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させて、減圧で蒸発させた。単離した材料をジエチルエーテルで摩砕して、表題化合物（１５ｇ）をベージュ色の固形物として得た。
【０１４９】
【化１９】
【０１５０】
製法４：２−アミノメチル−４−クロロ−フェニルアミン
【０１５１】
【化２０】
【０１５２】
水素化アルミニウムリチウムの氷冷１モル濃度テトラヒドロフラン溶液（１００ｍｌ）へテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）中の２−アミノ−５−クロロ−ベンゾニトリル（９．０ｇ，５９ミリモル）を滴下して、この反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水（１０ｍｌ）を滴下した。生じるエマルジョンを硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧で蒸発させて、表題化合物（４．５６ｇ）を白い固形物として得た。
【０１５３】
【化２１】
【０１５４】
製法５：４−クロロ−２−（｛［５−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルメチル］−アミノ｝−メチル）−フェニルアミン
【０１５５】
【化２２】
【０１５６】
製法３のオキサジアゾール（４．５６ｇ，１６ミリモル）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液へ製法４のアミン（６．４ｇ，４１ミリモル）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液を加えて、この混合物を５０℃まで１８時間加熱した。この反応混合物を減圧で蒸発させて、ジクロロメタン中メタノール（５：９５）を溶出液として使用するシルカゲルのクロマトグラフィーにより残渣を精製して、表題化合物（４．６５ｇ）を白い固形物として得た。
【０１５７】
【化２３】
【０１５８】
製法６：８−クロロ−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン
【０１５９】
【化２４】
【０１６０】
製法５のオキサジアゾール（４．６５ｇ，１２ミリモル）の溶液へトルエン−４−スルホン酸（１００ｍｇ，０．５８ミリモル）を加えて、１４０℃まで１８時間加熱した。この混合物を冷やし、ジクロロメタン中メタノール及び水酸化アンモニウム（５：０．５：９５）を溶出液として使用するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２．０ｇ）をオフホワイトの固形物として得た。
【０１６１】
【化２５】
【０１６２】
実測値；Ｃ，５９．９０；Ｈ，５．４８；Ｎ，２０．５０；Ｃ２０Ｈ２１Ｎ６Ｃｌ・０．３３ＣＨ２Ｃｌ２の理論値；Ｃ，５９．７２；Ｈ，５．３４；Ｎ，２０．５５％．
【０１６３】
実施例１：８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン三塩酸塩
【０１６４】
【化２６】
【０１６５】
製法６のアミン（２００ｍｇ，０．５３ミリモル）のジクロロメタン（５ｍｌ）溶液へホルムアルデヒド（３７％（ｗ／ｖ）水溶液、０．１ｍｌ，１．２ミリモル）を加えた。この混合物を室温で０．２５時間撹拌した後で、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（５００ｍｇ，２．４ミリモル）を加え、この反応混合物をさらに１８時間撹拌した。この反応混合物を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）とジクロロメタン（１０ｍｌ）の間に分画した。有機層を減圧で蒸発させ、ジクロロメタン中メタノール（５：９５）を溶出液として使用するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製した。残渣をジクロロメタン（２ｍｌ）に溶かし、塩酸（ジエチルエーテル中１Ｍ，２ｍｌ）を加えた。溶媒を減圧で蒸発させて、表題化合物（９６ｍｇ）を茶褐色のフォームとして得た。
【０１６６】
【化２７】
【０１６７】
実測値；Ｃ，４４．３０；Ｈ，５．５２；Ｎ，１４．６５；Ｃ２１Ｈ２３Ｎ６Ｃｌ・０．３３ＣＨ２Ｃｌ２・３ＨＣｌ・２．５Ｈ２Ｏの理論値；Ｃ，４４．３７；Ｈ，５．５３；Ｎ，１４．５３％．
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ＰＤＥ阻害剤又はその医薬的に許容される誘導体と（Ｂ）バソプレッシン受容体ファミリーアンタゴニスト又はその医薬的に許容される誘導体の組合せの、月経困難症の治療用医薬の製造における使用。
【請求項２】
請求項１に定義される組合せの、月経困難症の治療への使用。
【請求項３】
請求項１に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療における（Ａ）及び（Ｂ）の同時、連続、又は分離投与による組合せ療法用医薬の製造への使用。
【請求項４】
（Ａ）がＰＤＥ５阻害剤である、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
ＰＤＥ５阻害剤が：
シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ＤＡ−８１５９、及び５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンより選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
（Ｂ）がＶ１ａ受容体アンタゴニストである、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
（Ｂ）が、ＳＲ４９０４９（Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ）、アトシバン（Ｔｒａｃｔｏｃｉｌｅ（登録商標））、コニバプタン（ＹＭ−０８７）；ＯＰＣ２１２６８、及び８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレン、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物より選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
月経困難症が本態性月経困難症である、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
月経困難症が続発性月経困難症である、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
続発性月経困難症が、子宮平滑筋腫又は子宮内避妊用具のような、増加した子宮緊張の結果である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
月経困難症を治療するときの同時、分離、又は連続使用のための組合せ調製物として請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）を含有する医薬品。
【請求項１２】
請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の有効量の混合物を医薬的に許容される担体と随意に一緒に含んでなる、予防的にか又は疼痛が始まったときのいずれかで投与するための医薬組成物。
【請求項１３】
月経困難症を治療する方法であって、一緒になって有効である、請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の量をそのような治療の必要な対象へ投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１】
（Ａ）ＰＤＥ阻害剤又はその医薬的に許容される誘導体と（Ｂ）バソプレッシン受容体ファミリーアンタゴニスト又はその医薬的に許容される誘導体の組合せの、月経困難症の治療用医薬の製造における使用。
【請求項２】
請求項１に定義される組合せの、月経困難症の治療への使用。
【請求項３】
請求項１に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の組合せの、月経困難症の治療における（Ａ）及び（Ｂ）の同時、連続、又は分離投与による組合せ療法用医薬の製造への使用。
【請求項４】
（Ａ）がＰＤＥ５阻害剤である、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
ＰＤＥ５阻害剤が：
シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ＤＡ−８１５９、及び５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンより選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
（Ｂ）がＶ１ａ受容体アンタゴニストである、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
（Ｂ）が、ＳＲ４９０４９（Ｒｅｌｃｏｖａｐｔａｎ）、アトシバン（Ｔｒａｃｔｏｃｉｌｅ（登録商標））、コニバプタン（ＹＭ−０８７）；ＯＰＣ２１２６８、及び８−クロロ−５−メチル−１−（３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，３，５，１０ｂ−テトラアゾ−ベンゾ［ｅ］アズレン、又はその医薬的に許容される塩又は溶媒和物より選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
月経困難症が本態性月経困難症である、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
月経困難症が続発性月経困難症である、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
続発性月経困難症が、子宮平滑筋腫又は子宮内避妊用具のような、増加した子宮緊張の結果である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
月経困難症を治療するときの同時、分離、又は連続使用のための組合せ調製物として請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）を含有する医薬品。
【請求項１２】
請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の有効量の混合物を医薬的に許容される担体と随意に一緒に含んでなる、予防的にか又は疼痛が始まったときのいずれかで投与するための医薬組成物。
【請求項１３】
月経困難症を治療する方法であって、一緒になって有効である、請求項１〜７に定義される（Ａ）及び（Ｂ）の量をそのような治療の必要な対象へ投与することを含んでなる、前記方法。
【公表番号】特表２００６−５２７２５７（Ｐ２００６−５２７２５７Ａ）
【公表日】平成１８年１１月３０日（２００６．１１．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１６５０６（Ｐ２００６−５１６５０６）
【出願日】平成１６年６月１日（２００４．６．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００１８４８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１０８１３８
【国際公開日】平成１６年１２月１６日（２００４．１２．１６）
【出願人】（５９３１４１９５３）ファイザー・インク (302)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１１月３０日（２００６．１１．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月１日（２００４．６．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００１８４８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１０８１３８
【国際公開日】平成１６年１２月１６日（２００４．１２．１６）
【出願人】（５９３１４１９５３）ファイザー・インク (302)
【Ｆターム（参考）】
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