有効成分とスルホベタインとを含む医薬組成物
本発明は、活性薬剤と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
有効医薬成分を含む医薬組成物は公知である。既存の医薬組成物は一般に医薬に許容される種々の賦形剤を含んでおり、これらの賦形剤は種々の特性（例えば、有効医薬成分の安定化、ｐＨの調整及び／または維持、有効医薬成分の溶解度に対する効果、医薬組成物の等張性の維持など）によって、有効医薬成分を医薬組成物に使用できるようにする。医薬に許容される賦形剤は多くの文献に記載されている。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａｉｎｌｅｙ Ｗａｄｅ ａｎｄ Ｐａｕｌ Ｊ．Ｗｅｌｌｅｒ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４参照。
【０００３】
治療有効タンパク質も医薬組成物中の有効医薬成分として記載されている。これらの医薬組成物も、治療有効タンパク質を含む安定な医薬組成物の調製を可能にするような特性を有している種々の医薬賦形剤を含んでいる。このような医薬組成物は多くの文献に記載されている。例えば、Ｙｕ−Ｃｈａｎｇ Ｊｏｈｎ Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｍｕｓｅｔｔａ Ａ．Ｈａｎｓｏｎ（１９８８），Ｊ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４２：Ｓ４−Ｓ２６；Ｗｏｎｇ Ｄ．＆ Ｐａｒａｓｒａｍｐｕｒｉａ Ｊ．（１９９７），Ｂｉｏｐｈａｒｍ：Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ５２−６１参照。
【０００４】
治療用タンパク質として顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を含む安定な医薬組成物は欧州特許ＥＰ３７３６７９に開示されており、低導電率及びｐＨ２．７５−４．０の範囲の酸性溶液中で主としてＧ−ＣＳＦを安定化すると記載されている。安定性を改善するために、種々の糖、アミノ酸、ポリマー及び界面活性剤が添加されている。Ｇ−ＣＳＦを含む組成物のｐＨは、凝集体の形成を抑えることによって安定性を増すために４未満でなければならないことが特に強調されている。４．０を上回るｐＨで凝集体の形成及び安定性の低下が生じることは従来技術の文献のデータに符合する。（Ｋｕｚｎｉａｒら（２００１），Ｐｈａｒｍ Ｄｅｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ ６（３）：４４１−７；Ｂａｒｔｋｏｗｓｋｉら（２００２），Ｊ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ ２１（３）：１３７−４３；Ｎａｒｈｉら（１９９１）， Ｊ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ １０ （４）：３５９−３６７；Ｗａｎｇ Ｗ（１９９９），Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ １８５：１２９−１８８．
【０００５】
特許及び科学文献に記載された別の医薬組成物では、医薬組成物中のＧ−ＣＳＦの安定性が種々の安定剤によって与えられており、例えば、スルフェートイオン（欧州特許ＥＰ１１２９７２０）、種々の保存剤、アミノ酸及び界面活性剤の混合物（欧州特許ＥＰ６０７１５６）、界面活性剤の存在下の種々のバッファ系（リン酸塩、クエン酸塩、アルギニン、酢酸塩）（欧州特許ＥＰ６７４５２５）、高分子化合物、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなど（英国特許ＧＢ２１９３６２１）、界面活性剤（欧州特許ＥＰ１０６０７４６）、種々のバッファ系（ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ）（欧州特許ＥＰ０９８８８６１）、糖例えばセロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、ラフィノース、トレハロースなど（欧州特許ＥＰ０６７４５２４）、及び、１種以上のアミノ酸（欧州特許ＥＰ１１９７２２１、国際特許ＷＯ５１６２９、欧州特許ＥＰ１２６０２３０及びＥＰ１３２９２２４、ＥＰ０９７５３３５）が添加されている。Ｇ−ＣＳＦを含む医薬組成物は低いイオン強度をもつことが好ましいにもかかわらず、大半の場合にはＧ−ＣＳＦを安定化するために種々の界面活性剤及びその他の安定剤が使用されている。尚、大半の場合にはｐＨを維持するために種々のバッファ系が更に使用されている。
【０００６】
タンパク質再生に伴う可溶化剤として非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）類を（溶液の約１Ｍという高濃度で）使用することは文献に記載されている（Ｃｈｏｎｇ Ｙ ａｎｄ Ｃｈｅｎ Ｈ．（２０００），Ｂｉｏｔｅｃｈｉｑｕｅｓ ２９（６）：１１６６−７；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９５），Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３０５：３３７−４３；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９５），Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １６（３）：２９５−７；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９８），Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５６：１２８−１３５；Ｇｏｌｄｂｅｒｇ Ｍ Ｅら（１９９５），Ｆｏｌｄｉｎｇ ＆ Ｄｅｓｉｇｎ １：２１−２７）。
【０００７】
安定化された医薬組成物を提供することは差し迫った要望である。医薬組成物中のＮＤＳＢの記載は科学文献にも特許文献にも見出されたことはない。
【発明の開示】
【０００８】
ＮＤＳＢが医薬組成物の賦形剤として使用できることが本発明によって知見された。ＮＤＳＢを使用することによって安定化された医薬組成物を提供できる。
【０００９】
従って本発明は、ＮＤＳＢを含む医薬組成物に関する。
【００１０】
本発明の第一の態様によれば、有効医薬成分と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００１１】
本発明の有効医薬成分は、治療的に有効な合成または天然の有機分子（例えば、水に難溶性の合成及び天然の有機分子）及び治療的に有効なタンパク質（例えば、水に難溶性及び／または疎水性のタンパク質）及び／または治療効果をもつその他の有効医薬成分から成るグループから選択される。有効医薬成分は好ましくは治療有効量で含まれている。本文中に使用した“治療有効量の有効医薬成分”という用語は、治療効果を有している量の有効医薬成分を意味する。
【００１２】
本発明の医薬組成物は、非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）を含む。
【００１３】
本文中で使用した“非界面活性スルホベタイン”という用語は、水溶液中でミセルを形成しないスルホベタインを意味する。
【００１４】
本発明の医薬組成物の好ましい実施態様では、ＮＤＳＢが第四アンモニウム塩であり、そのＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４−ＳＯ３−基が中心窒素原子に結合しており、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のすべての組合せが（ＣＨ２）ｎであり、ここにｎは１−６であり、最も好ましくはｎが３である。
【００１５】
第四窒素原子はまた脂肪族または芳香族環構造の一部でもよい。
【００１６】
従って、本発明の医薬組成物の好ましい実施態様では、ＮＤＳＢが式１：
【００１７】
【化２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は同じ基及び／または異なる基でよく、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体から成るグループから選択され、Ｒ４は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは１−６であり、最も好ましくはｎが３である］
の第四アンモニウム塩である。
【００１８】
好ましくは本発明の医薬組成物中に使用されるＮＤＳＢが、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ１９５，Ｖｕｉｌｌａｒｄら（１９９４） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３５３，２９４−２９６；Ｇｏｌｄｂｅｒｇら（１９９５／１９９６） Ｆｏｌｄｉｎｇ ＆ Ｄｅｓｉｇｎ，１，２１−２７）、３−（１−ピリジノ）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２０１）、ジメチルベンジルアンモニウムプロパンスルホネート（ＳＢ２５６）、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）、３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２２１）及びジメチル−（２−ヒドロキシエチル）−（スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ２１１；Ｖｕｉｌｌａｒｄら（１９９５） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２３０，２９０−２９４）から成るグループから選択される。
【００１９】
上記のＮＤＳＢの２種類以上をすべての可能な組合せで使用することもできる。好ましくは、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ１９５）及び３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２２１）が使用される。最も好ましくはジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）が使用される。
【００２０】
使用されるＮＤＳＢの濃度は調整及び／または維持すべきｐＨの値に従属する。濃度は、１−１０００ｍＭ、好ましくは５−１００ｍＭの範囲から選択される。本発明の医薬組成物のｐＨは、２−９、好ましくは３−８、最も好ましくは３．５−７．５の範囲である。
【００２１】
本発明の第二の態様によれば、治療有効タンパク質と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００２２】
本文中で使用した“治療有効タンパク質”という用語は、治療効果をもつタンパク質を意味する。本発明の医薬組成物に使用される治療有効タンパク質は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）類、例えば、ＩＦＮ−アルファ２ａ、ＩＮＦ−アルファ２ｂ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ１ｂ、インターロイキン（ＩＬ）類、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５からＩＬ−１０、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦまたはｂＦＧＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）及び腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦ−ベータ）、カルシトニン、ヘマトプロテイン、プラスミノーゲンアクチベーター及びそれらの前駆体（ｔ−ＰＡ、ウロキナーゼ、プロ−ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プロテインＣ）、サイトカイン、ＴＮＦリガンドファミリー（ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）、可溶性受容体（ｐ５５、ｐ７５）、成長ホルモン例えばヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン及び傍甲状腺ホルモン、リポタンパク質、アルファ−１−アンチトリプシン、インスリン、プロインスリン、インスリンのサブユニットＡ、インスリンのサブユニットＢ、グルカゴン、血液凝固因子例えばＶＩＩＩ因子、ＩＸ因子、組織因子、ホンビルブラント因子、ボンベシン、トロンビン、エンケファリナーゼ、マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ−１−アルファ）、リラキシンＡサブユニット、リラキシンＢサブユニット、プロリラキシン、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ホルモン受容体または成長因子受容体、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマトイド因子、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロピン−３、−４、−５または−６、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ１及びＩＧＦ２）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシドジスムターゼ、上記タンパク質の生物活性フラグメント、及び、その他の治療有効タンパク質から成るグループから選択される
【００２３】
本発明の治療有効タンパク質は治療有効量で使用される。
【００２４】
本文中で使用した“タンパク質の治療有効量”という用語は、治療効果をもつタンパク質の量を意味する。
【００２５】
最も好ましい有効医薬成分は、好ましくは治療有効量で使用されるＧ−ＣＳＦである。
本発明によればＧ−ＣＳＦと非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００２６】
本文中で使用した“Ｇ−ＣＳＦ”という用語は、哺乳動物の造血細胞の分化及び増殖、並びに、造血系の成熟細胞の活性化を調節するタンパク質を意味する。これらは、ヒトＧ−ＣＳＦ及び以下に定義するようなその誘導体及び類似体から成るグループから選択される。好ましくはＧ−ＣＳＦが、大腸菌中の発現によって産生させた組換えヒトＧ−ＣＳＦを表す。
【００２７】
本発明の医薬組成物はすべての種類のＧ−ＣＳＦに使用できる。特に、メチオニルＧ−ＣＳＦ（Ｍｅｔ−Ｇ−ＣＳＦ）、グリコライズした、または、酵素的及び化学的に修飾（例えばＰＥＧ付加）したＧ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ類似体及びＧ−ＣＳＦを含む融合タンパク質のようなＧ−ＣＳＦの誘導体化形態の単離の場合にも使用できる。
【００２８】
本文中に使用した“治療有効量のＧ−ＣＳＦ”という用語は、治療効果を発揮できるＧ−ＣＳＦの量を意味する。
【００２９】
本発明の医薬組成物は場合によっては更にポリオールを含む。
【００３０】
“ポリオール”という用語は、多価アルコール、即ち、分子あたり１個または複数のヒドロキシル基を含有している化学的化合物を意味する。
【００３１】
好ましくはポリオールが、ソルビトール、グリセロール、イノシトール、トレハロース及びマンニトールから成るグループから選択される。好ましいポリオール濃度は１％−１０％（ｍ／ｖ）の範囲である。
【００３２】
本発明の医薬組成物は場合によっては更に１種以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。
【００３３】
医薬的に許容される賦形剤は、金属カチオンスカベンジャー（例えば、ＥＤＴＡ及び同様のキレート化剤）、溶媒及びフリーラジカルスカベンジャー（例えば、ＤＭＳＯ）、種々の酸（例えば、酢酸、シトロン酸、メタンスルホン酸、リン酸、塩酸など）、種々の塩基（例えば、ＮａＯＨまたは有機Ｎ塩基、例えば、ＴＲＩＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳのようなグッドの緩衝剤）、種々のバッファ系（例えば、酢酸／酢酸塩、グルタミン酸／グルタミン酸塩、マレイン酸／マレイン酸塩、クエン酸／クエン酸塩、リン酸／リン酸塩など）、溶液の等張性を維持するための医薬的に許容される種々の賦形剤（例えば、ＣａＣｌ２及びＮａＣｌのような無機塩）、及び、タンパク質安定剤、から成るグループから選択され、タンパク質安定剤は、グリコール及びグリセロールエステル、マクロゴールエステル及びエーテル、ソルビタン誘導体またはポリソルベート（ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、アミノ酸、ポロキサマー（プルロニックＦ６８）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのような界面活性物質から成るグループから選択される。好ましくは医薬的に許容される賦形剤がＥＤＴＡ及びＤＭＳＯから成るグループから選択される。
【００３４】
本発明の医薬組成物中のＮＤＳＢは、上記に挙げた１種以上の医薬的に許容される賦形剤と組合せることができる。
【００３５】
本文中に使用した“安定剤”という用語は、有効医薬成分（例えば、Ｇ−ＣＳＦのようなタンパク質）を安定化し得る医薬に許容される賦形剤を意味する。
【００３６】
本文中に使用した“タンパク質安定剤”という用語は、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）を安定化し得る医薬的に許容される賦形剤を意味する。
【００３７】
本文中に使用した“タンパク質安定性”（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）という用語は、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の含量の維持、及び、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の生物活性の維持を意味する。タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の安定性の低下は、特に、容器壁へのタンパク質の吸着、タンパク質の変性または劣化、凝集体形成、例えばタンパク質ダイマー（例えば、Ｇ−ＣＳＦダイマー）及び／またはタンパク質マルチマー（例えば、Ｇ−ＣＳＦマルチマー）及び／または同様の高分子量分子の形成などのプロセスによる影響を受け易い。これらのプロセスは、温度上昇、不適切な容器、不適切なタンパク質安定剤の使用、光照射、凍結／解凍、不適切な製造手順及び／または不適切な保存のような種々の要因の結果であろう。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、冷蔵温度（２−８℃）よりも高温で、また、室温（即ち２５℃以下）で、また、もっと高い温度（例えば約４０℃）でタンパク質を安定化し得る。
【００３９】
本発明の医薬組成物はタンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）安定化及び溶液の適正ｐＨ維持のために医薬的に許容される賦形剤を１種類だけ、即ち、ＮＤＳＢだけを含んでいてもよい。
【００４０】
従って本発明の別の態様によれば、有効医薬成分（上記に概説）を含み、更に単一賦形剤としてＮＤＳＢを含む医薬組成物が提供される。
【００４１】
医薬組成物中のＮＤＳＢは、タンパク質を安定させる保護分子として機能し、従って、他の医薬組成物で使用されるタンパク質安定剤（例えば、糖、アミノ酸など）に代替でき、また、溶液を適正ｐＨに調整する分子として、他の医薬組成物で溶液を適正ｐＨに調整するために使用される酸（酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、リン酸、塩酸など）に代替できる。ＮＤＳＢはまた適正ｐＨを維持することができるので、他の医薬組成物に使用される種々のバッファ系及び／またはそれらの組合せ（例えば、酢酸／酢酸塩、グルタミン酸／グルタミン酸塩、マレイン酸／マレイン酸塩、クエン酸／クエン酸塩、リン酸／リン酸塩など）に代替できる。それぞれが異なる機能を有している２種類以上の分子の使用に比較して、異なる複数の機能を有している１種類の分子の使用は、製造コストを節減できる、医薬組成物をより容易にかつ迅速に製造できる、など経済面からも好ましく、また、添加物の体内摂取量を減少させるので患者自身にも好ましい。ＮＤＳＢの特徴は、光、温度、種々の酸化剤（例えば、空気酸素）及び加水分解に感受性でない簡単な分子であること、化学的反応性の分子でないこと、広いｐＨ範囲で双イオン性を有していること、即ち、広いｐＨ範囲で相互作用メカニズムが実質的に変化しないことであり、これらの特徴によって付加的な利点が得られる。
【００４２】
本発明の１つの態様は、医薬組成物の安定剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４３】
本発明の１つの態様は医薬組成物のタンパク質安定剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４４】
本発明の１つの態様は医薬組成物のｐＨ調整剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４５】
本発明の１つの態様は医薬組成物の緩衝剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４６】
本発明の好ましい医薬組成物は液体医薬組成物である。しかしながら本発明では凍結乾燥タンパク質含有医薬組成物中にＮＤＳＢを使用することも制限されない。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、再構成、希釈またはその他の事前準備を要せずに皮下、静脈内または筋肉内に非経口投与することが可能である。上記のような事前準備は、有効医薬成分例えばＧ−ＣＳＦのようなタンパク質の活性低下を招いたり、投与時の技術的問題を新たに生じたりし易い。
【００４８】
本発明の医薬組成物はウイルス汚染の可能性があるヒト血清タンパク質を含有しないのが好ましい。そうすれば、ヒト血清アルブミンの投与の結果として生じ得る種々のアレルギー反応の発生確率が低下する。組成物は、医薬的に許容されかつ望ましくない結果を生じない等張溶液として調製される。
【００４９】
本発明の医薬組成物中のタンパク質の治療有効量は、市場に存在するタンパク質の治療有効量に対応する。Ｇ−ＣＳＦを使用する場合、Ｇ−ＣＳＦの治療有効量は、０．３ｍｇ／ｍｌ−１．２ｍｇ／ｍｌの範囲から選択される。しかしながら、本発明はこの範囲に限定されない。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、上記に挙げたような治療有効タンパク質が処方される疾患（治療）用医薬の製造及びこれらの疾患の治療に使用できる。
【００５１】
本発明の医薬組成物はまた、Ｇ−ＣＳＦが処方されるすべての疾患の治療、及び、その治療用医薬の製造に使用できる。処方対象は、好中球減少症及びその臨床的後遺症、化学療法後の有熱性好中球減少症の入院期間短縮、造血胚細胞の可動化、ドナー白血球の代替注入、慢性好中球減少症、好中球減少性及び好中球非減少性感染症、移植受容者、慢性炎症疾患、敗血症及び敗血症ショック、好中球減少性及び好中球非減少性感染症の危険低減、罹患率低減、致死率低減及び入院日数のの短縮、好中球減少性及び好中球非減少性患者の感染症及び感染合併症の予防、院内感染の予防、院内感染の死亡率及び発生率の低減、新生児への経腸投与、新生児の免疫系強化、集中治療室の患者及び重態患者の臨床結果の改善、ワクチン接種、火傷、皮膚の潰瘍及び病変の管理、化学療法及び／または放射線療法の補強、汎血球減少症、抗炎症サイトカインの増加、Ｇ−ＣＳＦの予防使用による高用量化学療法のインタバル短縮、光動力学的治療の抗腫瘍効果の増強、種々の脳機能不全によって生じる疾患の予防及び管理、血栓症及びそれらの合併症の治療、放射線照射後の赤血球産生の回復、から成るグループから選択され得る。
【００５２】
本発明の１つの態様は医薬組成物を調製するためにＮＤＳＢを使用することである。
【００５３】
本発明の医薬組成物は、アンプル、注射器及びバイアルから成るグループから選択された医薬パッケージングに充填できる。この医薬パッケージングは、（一回の投与あたり）０．２ｍｌ−２ｍｌの範囲の容量を適用できる。
【００５４】
更に、本発明の態様はまた、本発明の医薬組成物の製造方法である。本発明の医薬組成物の製造方法は、ＮＤＳＢを治療有効量の有効医薬成分（例えば、タンパク質、例えばＧ−ＣＳＦ）と混合する段階を含む。
【００５５】
本発明を以下の実施例によって詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。具体的には実施例は本発明の好ましい実施態様に関する。
【００５６】
（実施例）
分析方法
本発明の医薬組成物を分析するために以下の方法を使用した：サイズ排除を伴う高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びｉｎ ｖｉｖｏ生物活性の測定。
【００５７】
ＳＥ−ＨＰＬＣ
ＳＥ−ＨＰＬＣはＧ−ＣＳＦ凝集体、特にダイマー及びより高分子の凝集体の濃度を測定するために使用する。ダイマー及びより高分子の凝集体の定量検出限界は０．０１％である。
【００５８】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＵＶデテクタ、オンライン脱ガス器、二連ポンプモジュール及び恒温制御オートサンプラーから成る（例えば、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム）。分析は以下の条件下で行う。
【００５９】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ＴＳＫ Ｇ３０００ ＳＷ，１０ｍ，３００×７．５ｍｍＩＤ
カラム温度：３０℃
移動相：リン酸塩バッファｐＨ７．０（５ｍＭのリン酸ナトリウム、５０ｍＭのＮａＣｌ）
流速：０．８ｍｌ／分、アイソクラチック式
検出：ＵＶデテクタ、波長２１５ｎｍ
注入量：２０μｌ（タンパク質の注入量：６−１２μｇ）
オートサンプラー温度：＋２から＋８℃
処理時間：２０分
【００６０】
ＲＰ−ＨＰＬＣ
ＲＰ−ＨＰＬＣはＧ−ＣＳＦ含量の測定及び疎水性の程度に応じて変化する不純物の定量に使用する。ＨＰＬＣシステムは、ＵＶデテクタ、オンライン脱ガス器、二連ポンプモジュール及び恒温制御オートサンプラー及び恒温制御カラム部から成る（例えばＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム）。分析は以下の条件下で行う。
【００６１】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ，２００Å，球形，３μｍ，１５０×４．６ｍｍｉ．ｄ
カラム温度：６５℃
移動相：相Ａ：水中に０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と
５０％アセトニトリル（ＡＣＮ）
相Ｂ：ＨＰＬＣ用水中に０．１％ＴＦＡと９５％ＡＣＮ
流速：１．０ｍＬ／分
勾配：
【００６２】
【表１】
【００６３】
検出：ＵＶデテクタ、波長２１５ｎｍ
注入量：１０μＬ（タンパク質の注入量：３−６μｇ）
オートサンプラー温度：＋２から＋８℃
処理時間：２５分
【００６４】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、存在するタンパク質ダイマー及び他の凝集形態（トライマー及びより高分子量の重合体）の目視検出に使用される。
【００６５】
充填サンプルは還元剤非含有の充填用バッファ中で調製する。
【００６６】
バーチカルＳＤＳ−ＰＡＧＥ，ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ１２％ゲル８×８ｃｍ，厚さ１．０ｍｍ，１５レーン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），ＭＯＰＳ ＳＤＳ電気泳動バッファ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。
【００６７】
電気泳動処理は２００Ｖの定電圧で１時間行う。サンプルをクーマシーブルー色素（０．１％ Ｐｈａｓｔ Ｇｅｌ Ｂｌｕｅ Ｒ ３５０、３０％メタノール中）で染色する。
【００６８】
Ｇ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性試験
Ｇ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は、公知方法（Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ， Ｕ．ら，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｎａｌ １３，９−２０（１９９５））を使用し、国際標準ヒト組換えＧ−ＣＳＦ（８８／５０２、酵母細胞由来；ＮＩＢＳＣ Ｐｏｔｔｅｒｓ Ｂａｒ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ，Ａ．Ｒら，ｖ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １７９，１１７−１２６（１９９５）参照）を使用して細胞増殖（ＮＦＳ−６０細胞）の刺激に基づく方法によって測定する。
【００６９】
ｐＨ値の測定
ｐＨはＭＡ ５７４１（Ｉｓｋｒａ）ｐＨ計及びＢｉｏｔｒｏｄｅ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）電極を使用して測定する。適当な新しい校正バッファでｐＨ計を３．０−５．０のｐＨ範囲に校正する。ｐＨを温度２５℃で測定する。ｐＨ測定値の標準偏差はｐＨ値の０．００３（０．３％）である。
【００７０】
医薬組成物中のＧ−ＣＳＦ安定性試験の条件
４℃：冷蔵温度（＋４℃−＋６℃の範囲）の冷蔵庫に保存
４０℃：４０℃±２℃で保存
２５℃：Ｖｉｂｒｏｍｉｘ３１４ＥＶＴシェーカーで７５ｒｐｍで振盪中の１ｍｌ充填注射器に入れたものを２５℃−３０℃の室温で保存。
【実施例１】
【００７１】
安定性試験
以下の液体医薬組成物を調製する。
ＦＰ１ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，３９ｍＭのＮＤＳＢ，５ｍＭのＮａ ＥＤＴ
Ａ，ｐＨ４．４
ＦＰ２ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，３９ｍＭのＮＤＳＢ，５ｍＭのＮａ ＥＤＴ
Ａ，５％のＤＭＳＯ ｐＨ４．４
ＦＰ３ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，７ｍＭのＮＤＳＢ，５％のソルビトール，ｐ
Ｈ４．４
ＦＰ４ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，６ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，ｐ
Ｈ４．６
ＦＰ５ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１３ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．３
ＦＰ６ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．５
ＦＰ７ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，５％のソルビトール，
ｐＨ４．４
ＦＰ８ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，１０％のソルビトール
，ｐＨ４．４
ＦＰ９ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のイノシトール，
ｐＨ４．４
ＦＰ１０ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のトレハロース，
ｐＨ４．４
ＦＰ１１ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，５０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．９。
【００７２】
対照医薬組成物：
Ａ（Ｓ１６−１０ＡＣＴ）：０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭの酢酸，５％（
ｍ／ｖ）のソルビトール、０．００４％のトゥイーン８０
、ＮａＯＨでｐＨを４．０に調整（Ｎｅｕｐｏｇｅｎと同
じ）。
【００７３】
Ｇ−ＣＳＦ濃度０．６ｍｇ／ｍｌのサンプルを４０℃で１ヶ月間保存する。
これらをＳＥ−ＨＰＬＣを使用して分析する。６μｇのＧ−ＣＳＦをカラムに充填する。図１はそれぞれの結果を示す（ＡＵ＝吸収単位）。
【００７４】
図１の記号の説明：
１ ＦＰ１
２ ＦＰ２
ＲＳ １６−１０ＡＣＴ
【００７５】
Ｇ−ＣＳＦ濃度０．６ｍｇ／ｍｌのサンプルを４０℃で１ヶ月間保存する。
これらをＳＥ−ＨＰＬＣを使用して分析する。カラムに充填したＧ−ＣＳＦは６μｇである。結果を図２に示す（ＡＵ＝吸収単位）。
【００７６】
図２の記号の説明：
４ ＦＰ４
５ ＦＰ５
９ ＦＰ９。
【００７７】
安定性試験の結果
４０℃で１ヶ月間保存したサンプルＦＰ１及びＦＰ２のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、凝集体及び疎水性分解産物の含量の目視できる増加がないのでサンプルが安定であることを示す（表１、図１）。安定性は、参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等である。参照サンプルは、市場で入手可能なＧ−ＣＳＦ含有医薬組成物（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ｇ−ＣＳＦ＝０．３ ｍｇ／ｍｌ）に等しい。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析でも安定性が確認され、保存期間後に不純物またはタンパク質含量の本質的な変化を示していない。これらの結果は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果（結果示さず）及びｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性測定の結果と符合する。試験に使用したＧ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は国際標準レベルである（Ｃａｔ．ｎｏ．８８／５０２；ＮＩＢＳＣ，ＵＫ）。サンプルＦＰ１及びＦＰ２のｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は試験条件下の保存後に変化しない（結果示さず）。
【００７８】
【表２】
【００７９】
結果は、ＮＤＳＢ含有医薬組成物の安定性が参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等であることを示す。ＮＤＳＢ濃度が高いほど安定性に有利な効果を与えることが判明した。
【００８０】
２５℃で１週間及び１ヶ月間保存したサンプルＦＰ４−ＦＰ１１のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、凝集体及び疎水性分解産物の顕著な増加がないのでサンプルが安定であることを示す（表２、図２）。安定性は、参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等である。参照サンプルは、市場で入手可能なＧ−ＣＳＦ含有医薬組成物（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ｇ−ＣＳＦ＝０．３ｍｇ／ｍｌ）に等しい。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析でも安定性が確認される。この分析では、保存期間後に不純物またはタンパク質の含量の本質的な変化を示していない。これらの結果は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果（結果示さず）及びｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性測定の結果と符合する。試験に使用したＧ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は国際標準のレベル（Ｃａｔ．ｎｏ．８８／５０２；ＮＩＢＳＣ，ＵＫ）である。サンプルＦＰ４−ＦＰ１１のｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は試験条件下の保存後に変化しない（結果示さず）。
【００８１】
【表３】
【００８２】
表２の結果は、ＮＤＳＢを添加した医薬組成物が安定であることを示す。より極端な条件（１ヶ月、４０℃）を与えたサンプルでは参照サンプルに比べて安定性がやや低下することが観察される（表１）。また、当業界で明らかなように４．０を上回るｐＨがＧ−ＣＳＦに好ましくないので安定性がやや低下したことも考えられる。参照サンプルはｐＨ４．０で調製されている。
【実施例２】
【００８３】
本発明のＧ−ＣＳＦ医薬組成物の組成
本発明の医薬組成物の組成を表３に示す。
【００８４】
【表４】
【００８５】
バルク濃縮物調製
バルク濃縮物を調製するためのＧ−ＣＳＦ出発材料は大腸菌中の発現によって産生させる。
【００８６】
バルク濃縮物は純酸（酢酸またはＨＣｌ）を含むｐＨ４．４の溶液中でＧ−ＣＳＦ濃度１．５ｍｇ／ｍｌを使用して調製する。バルク濃縮物のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、ダイマー及びそれ以上の高分子凝集体の含量が検出限界以下であることを示す。ＲＰ−ＨＰＬＣで測定した不純物のアッセイは２−４％の範囲である。（新しいＮｅｕｐｏｇｅｎサンプルの分析は不純物の量が同等であることを示す）。
【００８７】
材料品質
ＮＤＳＢ：分析用ＮＤＳＢ−１９５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ），ソルビトール： Ｐｈ．Ｅｕｒ．品質；グリセロール：Ｍｅｒｃｋ；分析用；イノシトール：ミオ−イノシトール（Ｆｌｕｋａ：＞９９．５％ＨＰＬＣ），トレハロース（Ｆｌｕｋａ：＞９９．５％ＨＰＬＣ），ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ：９９％），ＤＭＳＯ（Ｍｅｒｃｋ：＞９９．５％），トゥイーン８０（Ｓｉｇｍａ，低過酸化物レベル， 抗酸化剤としてＢＨＴ含有）；注射用水：Ｐｈ．Ｅｕｒ．品質；分析用水：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）．
【００８８】
参照医薬組成物の調製
Ａ（Ｓ１６−１０ＡＣＴ）：Ｇ−ＣＳＦモノマーを含むゲル濾過画分をプールし、１０ｍＭの酢酸と５％のソルビトールとを注射用水中に含むバッファで置換する。バッファのｐＨをＮａＯＨ溶液で３．９６に調整する。置換は、ＬａｂｓｃａｌｅＴＭ ＴＦＦシステム／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ上で３つのＵｌｔｒａｃｅｌ−５ ＰＬＣＣＣ膜を使用して行う。トゥイーン８０を０．００４％の濃度が得られるまで加える。置換後の最終溶液のｐＨは４．０、濃度は０．３０４ｍｇ／ｍｌである。
【００８９】
本発明の医薬組成物の調製
総論
本発明の医薬組成物は、０．２ＰＥＳ／Ｎａｌｇｅｎｅフィルターで予め濾過した適当な滅菌バッファ溶液でバルク濃縮物を希釈することによって調製する。最終Ｇ−ＣＳＦ濃度はそれぞれ０．３ｍｇ／ｍｌまたは０．６ｍｇ／ｍｌである。
【００９０】
医薬組成物ＦＰ１及びＦＰ２を無色ガラスから成る加水分解タイプ１の２ｍｌ容のバイアルに入れ、洗浄し、滅菌し、アルミニウム冠の付いたブロムブチルゴム栓で閉鎖する。
ＦＰ１、ＦＰ２、ＦＰ３：１部のバルク濃縮物に４部の適当なバッファ溶液を加える。表３に示した最終濃度が得られる。ｐＨの調整なし。
【００９１】
ＦＰ４−ＦＰ１１：４部の濃縮物に６部の適当なバッファ溶液を加える。表３に示した最終濃度が得られる。ｐＨの調整なし。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】４０℃（±２℃）で１ヶ月間（４０）保存した本発明サンプル及び基準サンプルのＳＥ−ＨＰＬＣ。
【図２】４０℃（±２℃）で１ヶ月間（４０）保存した本発明サンプルのＳＥ−ＨＰＬＣ。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
有効医薬成分を含む医薬組成物は公知である。既存の医薬組成物は一般に医薬に許容される種々の賦形剤を含んでおり、これらの賦形剤は種々の特性（例えば、有効医薬成分の安定化、ｐＨの調整及び／または維持、有効医薬成分の溶解度に対する効果、医薬組成物の等張性の維持など）によって、有効医薬成分を医薬組成物に使用できるようにする。医薬に許容される賦形剤は多くの文献に記載されている。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａｉｎｌｅｙ Ｗａｄｅ ａｎｄ Ｐａｕｌ Ｊ．Ｗｅｌｌｅｒ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４参照。
【０００３】
治療有効タンパク質も医薬組成物中の有効医薬成分として記載されている。これらの医薬組成物も、治療有効タンパク質を含む安定な医薬組成物の調製を可能にするような特性を有している種々の医薬賦形剤を含んでいる。このような医薬組成物は多くの文献に記載されている。例えば、Ｙｕ−Ｃｈａｎｇ Ｊｏｈｎ Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｍｕｓｅｔｔａ Ａ．Ｈａｎｓｏｎ（１９８８），Ｊ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４２：Ｓ４−Ｓ２６；Ｗｏｎｇ Ｄ．＆ Ｐａｒａｓｒａｍｐｕｒｉａ Ｊ．（１９９７），Ｂｉｏｐｈａｒｍ：Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ５２−６１参照。
【０００４】
治療用タンパク質として顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を含む安定な医薬組成物は欧州特許ＥＰ３７３６７９に開示されており、低導電率及びｐＨ２．７５−４．０の範囲の酸性溶液中で主としてＧ−ＣＳＦを安定化すると記載されている。安定性を改善するために、種々の糖、アミノ酸、ポリマー及び界面活性剤が添加されている。Ｇ−ＣＳＦを含む組成物のｐＨは、凝集体の形成を抑えることによって安定性を増すために４未満でなければならないことが特に強調されている。４．０を上回るｐＨで凝集体の形成及び安定性の低下が生じることは従来技術の文献のデータに符合する。（Ｋｕｚｎｉａｒら（２００１），Ｐｈａｒｍ Ｄｅｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ ６（３）：４４１−７；Ｂａｒｔｋｏｗｓｋｉら（２００２），Ｊ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ ２１（３）：１３７−４３；Ｎａｒｈｉら（１９９１）， Ｊ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ １０ （４）：３５９−３６７；Ｗａｎｇ Ｗ（１９９９），Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ １８５：１２９−１８８．
【０００５】
特許及び科学文献に記載された別の医薬組成物では、医薬組成物中のＧ−ＣＳＦの安定性が種々の安定剤によって与えられており、例えば、スルフェートイオン（欧州特許ＥＰ１１２９７２０）、種々の保存剤、アミノ酸及び界面活性剤の混合物（欧州特許ＥＰ６０７１５６）、界面活性剤の存在下の種々のバッファ系（リン酸塩、クエン酸塩、アルギニン、酢酸塩）（欧州特許ＥＰ６７４５２５）、高分子化合物、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなど（英国特許ＧＢ２１９３６２１）、界面活性剤（欧州特許ＥＰ１０６０７４６）、種々のバッファ系（ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ）（欧州特許ＥＰ０９８８８６１）、糖例えばセロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、ラフィノース、トレハロースなど（欧州特許ＥＰ０６７４５２４）、及び、１種以上のアミノ酸（欧州特許ＥＰ１１９７２２１、国際特許ＷＯ５１６２９、欧州特許ＥＰ１２６０２３０及びＥＰ１３２９２２４、ＥＰ０９７５３３５）が添加されている。Ｇ−ＣＳＦを含む医薬組成物は低いイオン強度をもつことが好ましいにもかかわらず、大半の場合にはＧ−ＣＳＦを安定化するために種々の界面活性剤及びその他の安定剤が使用されている。尚、大半の場合にはｐＨを維持するために種々のバッファ系が更に使用されている。
【０００６】
タンパク質再生に伴う可溶化剤として非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）類を（溶液の約１Ｍという高濃度で）使用することは文献に記載されている（Ｃｈｏｎｇ Ｙ ａｎｄ Ｃｈｅｎ Ｈ．（２０００），Ｂｉｏｔｅｃｈｉｑｕｅｓ ２９（６）：１１６６−７；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９５），Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３０５：３３７−４３；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９５），Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １６（３）：２９５−７；Ｖｕｉｌｌａｒｄ Ｌら（１９９８），Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５６：１２８−１３５；Ｇｏｌｄｂｅｒｇ Ｍ Ｅら（１９９５），Ｆｏｌｄｉｎｇ ＆ Ｄｅｓｉｇｎ １：２１−２７）。
【０００７】
安定化された医薬組成物を提供することは差し迫った要望である。医薬組成物中のＮＤＳＢの記載は科学文献にも特許文献にも見出されたことはない。
【発明の開示】
【０００８】
ＮＤＳＢが医薬組成物の賦形剤として使用できることが本発明によって知見された。ＮＤＳＢを使用することによって安定化された医薬組成物を提供できる。
【０００９】
従って本発明は、ＮＤＳＢを含む医薬組成物に関する。
【００１０】
本発明の第一の態様によれば、有効医薬成分と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００１１】
本発明の有効医薬成分は、治療的に有効な合成または天然の有機分子（例えば、水に難溶性の合成及び天然の有機分子）及び治療的に有効なタンパク質（例えば、水に難溶性及び／または疎水性のタンパク質）及び／または治療効果をもつその他の有効医薬成分から成るグループから選択される。有効医薬成分は好ましくは治療有効量で含まれている。本文中に使用した“治療有効量の有効医薬成分”という用語は、治療効果を有している量の有効医薬成分を意味する。
【００１２】
本発明の医薬組成物は、非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）を含む。
【００１３】
本文中で使用した“非界面活性スルホベタイン”という用語は、水溶液中でミセルを形成しないスルホベタインを意味する。
【００１４】
本発明の医薬組成物の好ましい実施態様では、ＮＤＳＢが第四アンモニウム塩であり、そのＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４−ＳＯ３−基が中心窒素原子に結合しており、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のすべての組合せが（ＣＨ２）ｎであり、ここにｎは１−６であり、最も好ましくはｎが３である。
【００１５】
第四窒素原子はまた脂肪族または芳香族環構造の一部でもよい。
【００１６】
従って、本発明の医薬組成物の好ましい実施態様では、ＮＤＳＢが式１：
【００１７】
【化２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は同じ基及び／または異なる基でよく、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体から成るグループから選択され、Ｒ４は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは１−６であり、最も好ましくはｎが３である］
の第四アンモニウム塩である。
【００１８】
好ましくは本発明の医薬組成物中に使用されるＮＤＳＢが、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ１９５，Ｖｕｉｌｌａｒｄら（１９９４） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３５３，２９４−２９６；Ｇｏｌｄｂｅｒｇら（１９９５／１９９６） Ｆｏｌｄｉｎｇ ＆ Ｄｅｓｉｇｎ，１，２１−２７）、３−（１−ピリジノ）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２０１）、ジメチルベンジルアンモニウムプロパンスルホネート（ＳＢ２５６）、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）、３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２２１）及びジメチル−（２−ヒドロキシエチル）−（スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ２１１；Ｖｕｉｌｌａｒｄら（１９９５） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２３０，２９０−２９４）から成るグループから選択される。
【００１９】
上記のＮＤＳＢの２種類以上をすべての可能な組合せで使用することもできる。好ましくは、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩（ＳＢ１９５）及び３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート（ＳＢ２２１）が使用される。最も好ましくはジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩（ＳＢ２２２ｔ）が使用される。
【００２０】
使用されるＮＤＳＢの濃度は調整及び／または維持すべきｐＨの値に従属する。濃度は、１−１０００ｍＭ、好ましくは５−１００ｍＭの範囲から選択される。本発明の医薬組成物のｐＨは、２−９、好ましくは３−８、最も好ましくは３．５−７．５の範囲である。
【００２１】
本発明の第二の態様によれば、治療有効タンパク質と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００２２】
本文中で使用した“治療有効タンパク質”という用語は、治療効果をもつタンパク質を意味する。本発明の医薬組成物に使用される治療有効タンパク質は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）類、例えば、ＩＦＮ−アルファ２ａ、ＩＮＦ−アルファ２ｂ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ１ｂ、インターロイキン（ＩＬ）類、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５からＩＬ−１０、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリトロポエチン（ＥＰＯ）、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦまたはｂＦＧＦ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）及び腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦ−ベータ）、カルシトニン、ヘマトプロテイン、プラスミノーゲンアクチベーター及びそれらの前駆体（ｔ−ＰＡ、ウロキナーゼ、プロ−ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プロテインＣ）、サイトカイン、ＴＮＦリガンドファミリー（ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ、ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）、可溶性受容体（ｐ５５、ｐ７５）、成長ホルモン例えばヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン及び傍甲状腺ホルモン、リポタンパク質、アルファ−１−アンチトリプシン、インスリン、プロインスリン、インスリンのサブユニットＡ、インスリンのサブユニットＢ、グルカゴン、血液凝固因子例えばＶＩＩＩ因子、ＩＸ因子、組織因子、ホンビルブラント因子、ボンベシン、トロンビン、エンケファリナーゼ、マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ−１−アルファ）、リラキシンＡサブユニット、リラキシンＢサブユニット、プロリラキシン、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ホルモン受容体または成長因子受容体、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマトイド因子、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロピン−３、−４、−５または−６、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ１及びＩＧＦ２）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシドジスムターゼ、上記タンパク質の生物活性フラグメント、及び、その他の治療有効タンパク質から成るグループから選択される
【００２３】
本発明の治療有効タンパク質は治療有効量で使用される。
【００２４】
本文中で使用した“タンパク質の治療有効量”という用語は、治療効果をもつタンパク質の量を意味する。
【００２５】
最も好ましい有効医薬成分は、好ましくは治療有効量で使用されるＧ−ＣＳＦである。
本発明によればＧ−ＣＳＦと非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物が提供される。
【００２６】
本文中で使用した“Ｇ−ＣＳＦ”という用語は、哺乳動物の造血細胞の分化及び増殖、並びに、造血系の成熟細胞の活性化を調節するタンパク質を意味する。これらは、ヒトＧ−ＣＳＦ及び以下に定義するようなその誘導体及び類似体から成るグループから選択される。好ましくはＧ−ＣＳＦが、大腸菌中の発現によって産生させた組換えヒトＧ−ＣＳＦを表す。
【００２７】
本発明の医薬組成物はすべての種類のＧ−ＣＳＦに使用できる。特に、メチオニルＧ−ＣＳＦ（Ｍｅｔ−Ｇ−ＣＳＦ）、グリコライズした、または、酵素的及び化学的に修飾（例えばＰＥＧ付加）したＧ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ類似体及びＧ−ＣＳＦを含む融合タンパク質のようなＧ−ＣＳＦの誘導体化形態の単離の場合にも使用できる。
【００２８】
本文中に使用した“治療有効量のＧ−ＣＳＦ”という用語は、治療効果を発揮できるＧ−ＣＳＦの量を意味する。
【００２９】
本発明の医薬組成物は場合によっては更にポリオールを含む。
【００３０】
“ポリオール”という用語は、多価アルコール、即ち、分子あたり１個または複数のヒドロキシル基を含有している化学的化合物を意味する。
【００３１】
好ましくはポリオールが、ソルビトール、グリセロール、イノシトール、トレハロース及びマンニトールから成るグループから選択される。好ましいポリオール濃度は１％−１０％（ｍ／ｖ）の範囲である。
【００３２】
本発明の医薬組成物は場合によっては更に１種以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。
【００３３】
医薬的に許容される賦形剤は、金属カチオンスカベンジャー（例えば、ＥＤＴＡ及び同様のキレート化剤）、溶媒及びフリーラジカルスカベンジャー（例えば、ＤＭＳＯ）、種々の酸（例えば、酢酸、シトロン酸、メタンスルホン酸、リン酸、塩酸など）、種々の塩基（例えば、ＮａＯＨまたは有機Ｎ塩基、例えば、ＴＲＩＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳのようなグッドの緩衝剤）、種々のバッファ系（例えば、酢酸／酢酸塩、グルタミン酸／グルタミン酸塩、マレイン酸／マレイン酸塩、クエン酸／クエン酸塩、リン酸／リン酸塩など）、溶液の等張性を維持するための医薬的に許容される種々の賦形剤（例えば、ＣａＣｌ２及びＮａＣｌのような無機塩）、及び、タンパク質安定剤、から成るグループから選択され、タンパク質安定剤は、グリコール及びグリセロールエステル、マクロゴールエステル及びエーテル、ソルビタン誘導体またはポリソルベート（ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、アミノ酸、ポロキサマー（プルロニックＦ６８）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのような界面活性物質から成るグループから選択される。好ましくは医薬的に許容される賦形剤がＥＤＴＡ及びＤＭＳＯから成るグループから選択される。
【００３４】
本発明の医薬組成物中のＮＤＳＢは、上記に挙げた１種以上の医薬的に許容される賦形剤と組合せることができる。
【００３５】
本文中に使用した“安定剤”という用語は、有効医薬成分（例えば、Ｇ−ＣＳＦのようなタンパク質）を安定化し得る医薬に許容される賦形剤を意味する。
【００３６】
本文中に使用した“タンパク質安定剤”という用語は、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）を安定化し得る医薬的に許容される賦形剤を意味する。
【００３７】
本文中に使用した“タンパク質安定性”（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）という用語は、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の含量の維持、及び、タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の生物活性の維持を意味する。タンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）の安定性の低下は、特に、容器壁へのタンパク質の吸着、タンパク質の変性または劣化、凝集体形成、例えばタンパク質ダイマー（例えば、Ｇ−ＣＳＦダイマー）及び／またはタンパク質マルチマー（例えば、Ｇ−ＣＳＦマルチマー）及び／または同様の高分子量分子の形成などのプロセスによる影響を受け易い。これらのプロセスは、温度上昇、不適切な容器、不適切なタンパク質安定剤の使用、光照射、凍結／解凍、不適切な製造手順及び／または不適切な保存のような種々の要因の結果であろう。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、冷蔵温度（２−８℃）よりも高温で、また、室温（即ち２５℃以下）で、また、もっと高い温度（例えば約４０℃）でタンパク質を安定化し得る。
【００３９】
本発明の医薬組成物はタンパク質（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）安定化及び溶液の適正ｐＨ維持のために医薬的に許容される賦形剤を１種類だけ、即ち、ＮＤＳＢだけを含んでいてもよい。
【００４０】
従って本発明の別の態様によれば、有効医薬成分（上記に概説）を含み、更に単一賦形剤としてＮＤＳＢを含む医薬組成物が提供される。
【００４１】
医薬組成物中のＮＤＳＢは、タンパク質を安定させる保護分子として機能し、従って、他の医薬組成物で使用されるタンパク質安定剤（例えば、糖、アミノ酸など）に代替でき、また、溶液を適正ｐＨに調整する分子として、他の医薬組成物で溶液を適正ｐＨに調整するために使用される酸（酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、リン酸、塩酸など）に代替できる。ＮＤＳＢはまた適正ｐＨを維持することができるので、他の医薬組成物に使用される種々のバッファ系及び／またはそれらの組合せ（例えば、酢酸／酢酸塩、グルタミン酸／グルタミン酸塩、マレイン酸／マレイン酸塩、クエン酸／クエン酸塩、リン酸／リン酸塩など）に代替できる。それぞれが異なる機能を有している２種類以上の分子の使用に比較して、異なる複数の機能を有している１種類の分子の使用は、製造コストを節減できる、医薬組成物をより容易にかつ迅速に製造できる、など経済面からも好ましく、また、添加物の体内摂取量を減少させるので患者自身にも好ましい。ＮＤＳＢの特徴は、光、温度、種々の酸化剤（例えば、空気酸素）及び加水分解に感受性でない簡単な分子であること、化学的反応性の分子でないこと、広いｐＨ範囲で双イオン性を有していること、即ち、広いｐＨ範囲で相互作用メカニズムが実質的に変化しないことであり、これらの特徴によって付加的な利点が得られる。
【００４２】
本発明の１つの態様は、医薬組成物の安定剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４３】
本発明の１つの態様は医薬組成物のタンパク質安定剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４４】
本発明の１つの態様は医薬組成物のｐＨ調整剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４５】
本発明の１つの態様は医薬組成物の緩衝剤としてＮＤＳＢを使用することである。
【００４６】
本発明の好ましい医薬組成物は液体医薬組成物である。しかしながら本発明では凍結乾燥タンパク質含有医薬組成物中にＮＤＳＢを使用することも制限されない。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、再構成、希釈またはその他の事前準備を要せずに皮下、静脈内または筋肉内に非経口投与することが可能である。上記のような事前準備は、有効医薬成分例えばＧ−ＣＳＦのようなタンパク質の活性低下を招いたり、投与時の技術的問題を新たに生じたりし易い。
【００４８】
本発明の医薬組成物はウイルス汚染の可能性があるヒト血清タンパク質を含有しないのが好ましい。そうすれば、ヒト血清アルブミンの投与の結果として生じ得る種々のアレルギー反応の発生確率が低下する。組成物は、医薬的に許容されかつ望ましくない結果を生じない等張溶液として調製される。
【００４９】
本発明の医薬組成物中のタンパク質の治療有効量は、市場に存在するタンパク質の治療有効量に対応する。Ｇ−ＣＳＦを使用する場合、Ｇ−ＣＳＦの治療有効量は、０．３ｍｇ／ｍｌ−１．２ｍｇ／ｍｌの範囲から選択される。しかしながら、本発明はこの範囲に限定されない。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、上記に挙げたような治療有効タンパク質が処方される疾患（治療）用医薬の製造及びこれらの疾患の治療に使用できる。
【００５１】
本発明の医薬組成物はまた、Ｇ−ＣＳＦが処方されるすべての疾患の治療、及び、その治療用医薬の製造に使用できる。処方対象は、好中球減少症及びその臨床的後遺症、化学療法後の有熱性好中球減少症の入院期間短縮、造血胚細胞の可動化、ドナー白血球の代替注入、慢性好中球減少症、好中球減少性及び好中球非減少性感染症、移植受容者、慢性炎症疾患、敗血症及び敗血症ショック、好中球減少性及び好中球非減少性感染症の危険低減、罹患率低減、致死率低減及び入院日数のの短縮、好中球減少性及び好中球非減少性患者の感染症及び感染合併症の予防、院内感染の予防、院内感染の死亡率及び発生率の低減、新生児への経腸投与、新生児の免疫系強化、集中治療室の患者及び重態患者の臨床結果の改善、ワクチン接種、火傷、皮膚の潰瘍及び病変の管理、化学療法及び／または放射線療法の補強、汎血球減少症、抗炎症サイトカインの増加、Ｇ−ＣＳＦの予防使用による高用量化学療法のインタバル短縮、光動力学的治療の抗腫瘍効果の増強、種々の脳機能不全によって生じる疾患の予防及び管理、血栓症及びそれらの合併症の治療、放射線照射後の赤血球産生の回復、から成るグループから選択され得る。
【００５２】
本発明の１つの態様は医薬組成物を調製するためにＮＤＳＢを使用することである。
【００５３】
本発明の医薬組成物は、アンプル、注射器及びバイアルから成るグループから選択された医薬パッケージングに充填できる。この医薬パッケージングは、（一回の投与あたり）０．２ｍｌ−２ｍｌの範囲の容量を適用できる。
【００５４】
更に、本発明の態様はまた、本発明の医薬組成物の製造方法である。本発明の医薬組成物の製造方法は、ＮＤＳＢを治療有効量の有効医薬成分（例えば、タンパク質、例えばＧ−ＣＳＦ）と混合する段階を含む。
【００５５】
本発明を以下の実施例によって詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。具体的には実施例は本発明の好ましい実施態様に関する。
【００５６】
（実施例）
分析方法
本発明の医薬組成物を分析するために以下の方法を使用した：サイズ排除を伴う高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びｉｎ ｖｉｖｏ生物活性の測定。
【００５７】
ＳＥ−ＨＰＬＣ
ＳＥ−ＨＰＬＣはＧ−ＣＳＦ凝集体、特にダイマー及びより高分子の凝集体の濃度を測定するために使用する。ダイマー及びより高分子の凝集体の定量検出限界は０．０１％である。
【００５８】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＵＶデテクタ、オンライン脱ガス器、二連ポンプモジュール及び恒温制御オートサンプラーから成る（例えば、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム）。分析は以下の条件下で行う。
【００５９】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ＴＳＫ Ｇ３０００ ＳＷ，１０ｍ，３００×７．５ｍｍＩＤ
カラム温度：３０℃
移動相：リン酸塩バッファｐＨ７．０（５ｍＭのリン酸ナトリウム、５０ｍＭのＮａＣｌ）
流速：０．８ｍｌ／分、アイソクラチック式
検出：ＵＶデテクタ、波長２１５ｎｍ
注入量：２０μｌ（タンパク質の注入量：６−１２μｇ）
オートサンプラー温度：＋２から＋８℃
処理時間：２０分
【００６０】
ＲＰ−ＨＰＬＣ
ＲＰ−ＨＰＬＣはＧ−ＣＳＦ含量の測定及び疎水性の程度に応じて変化する不純物の定量に使用する。ＨＰＬＣシステムは、ＵＶデテクタ、オンライン脱ガス器、二連ポンプモジュール及び恒温制御オートサンプラー及び恒温制御カラム部から成る（例えばＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム）。分析は以下の条件下で行う。
【００６１】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ，２００Å，球形，３μｍ，１５０×４．６ｍｍｉ．ｄ
カラム温度：６５℃
移動相：相Ａ：水中に０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と
５０％アセトニトリル（ＡＣＮ）
相Ｂ：ＨＰＬＣ用水中に０．１％ＴＦＡと９５％ＡＣＮ
流速：１．０ｍＬ／分
勾配：
【００６２】
【表１】
【００６３】
検出：ＵＶデテクタ、波長２１５ｎｍ
注入量：１０μＬ（タンパク質の注入量：３−６μｇ）
オートサンプラー温度：＋２から＋８℃
処理時間：２５分
【００６４】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、存在するタンパク質ダイマー及び他の凝集形態（トライマー及びより高分子量の重合体）の目視検出に使用される。
【００６５】
充填サンプルは還元剤非含有の充填用バッファ中で調製する。
【００６６】
バーチカルＳＤＳ−ＰＡＧＥ，ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ１２％ゲル８×８ｃｍ，厚さ１．０ｍｍ，１５レーン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），ＭＯＰＳ ＳＤＳ電気泳動バッファ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。
【００６７】
電気泳動処理は２００Ｖの定電圧で１時間行う。サンプルをクーマシーブルー色素（０．１％ Ｐｈａｓｔ Ｇｅｌ Ｂｌｕｅ Ｒ ３５０、３０％メタノール中）で染色する。
【００６８】
Ｇ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性試験
Ｇ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は、公知方法（Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ， Ｕ．ら，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｎａｌ １３，９−２０（１９９５））を使用し、国際標準ヒト組換えＧ−ＣＳＦ（８８／５０２、酵母細胞由来；ＮＩＢＳＣ Ｐｏｔｔｅｒｓ Ｂａｒ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ，Ａ．Ｒら，ｖ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １７９，１１７−１２６（１９９５）参照）を使用して細胞増殖（ＮＦＳ−６０細胞）の刺激に基づく方法によって測定する。
【００６９】
ｐＨ値の測定
ｐＨはＭＡ ５７４１（Ｉｓｋｒａ）ｐＨ計及びＢｉｏｔｒｏｄｅ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）電極を使用して測定する。適当な新しい校正バッファでｐＨ計を３．０−５．０のｐＨ範囲に校正する。ｐＨを温度２５℃で測定する。ｐＨ測定値の標準偏差はｐＨ値の０．００３（０．３％）である。
【００７０】
医薬組成物中のＧ−ＣＳＦ安定性試験の条件
４℃：冷蔵温度（＋４℃−＋６℃の範囲）の冷蔵庫に保存
４０℃：４０℃±２℃で保存
２５℃：Ｖｉｂｒｏｍｉｘ３１４ＥＶＴシェーカーで７５ｒｐｍで振盪中の１ｍｌ充填注射器に入れたものを２５℃−３０℃の室温で保存。
【実施例１】
【００７１】
安定性試験
以下の液体医薬組成物を調製する。
ＦＰ１ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，３９ｍＭのＮＤＳＢ，５ｍＭのＮａ ＥＤＴ
Ａ，ｐＨ４．４
ＦＰ２ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，３９ｍＭのＮＤＳＢ，５ｍＭのＮａ ＥＤＴ
Ａ，５％のＤＭＳＯ ｐＨ４．４
ＦＰ３ ０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，７ｍＭのＮＤＳＢ，５％のソルビトール，ｐ
Ｈ４．４
ＦＰ４ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，６ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，ｐ
Ｈ４．６
ＦＰ５ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１３ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．３
ＦＰ６ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．５
ＦＰ７ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，５％のソルビトール，
ｐＨ４．４
ＦＰ８ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，１０％のソルビトール
，ｐＨ４．４
ＦＰ９ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のイノシトール，
ｐＨ４．４
ＦＰ１０ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のトレハロース，
ｐＨ４．４
ＦＰ１１ ０．６ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，５０ｍＭのＮＤＳＢ，８％のソルビトール，
ｐＨ４．９。
【００７２】
対照医薬組成物：
Ａ（Ｓ１６−１０ＡＣＴ）：０．３ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ，１０ｍＭの酢酸，５％（
ｍ／ｖ）のソルビトール、０．００４％のトゥイーン８０
、ＮａＯＨでｐＨを４．０に調整（Ｎｅｕｐｏｇｅｎと同
じ）。
【００７３】
Ｇ−ＣＳＦ濃度０．６ｍｇ／ｍｌのサンプルを４０℃で１ヶ月間保存する。
これらをＳＥ−ＨＰＬＣを使用して分析する。６μｇのＧ−ＣＳＦをカラムに充填する。図１はそれぞれの結果を示す（ＡＵ＝吸収単位）。
【００７４】
図１の記号の説明：
１ ＦＰ１
２ ＦＰ２
ＲＳ １６−１０ＡＣＴ
【００７５】
Ｇ−ＣＳＦ濃度０．６ｍｇ／ｍｌのサンプルを４０℃で１ヶ月間保存する。
これらをＳＥ−ＨＰＬＣを使用して分析する。カラムに充填したＧ−ＣＳＦは６μｇである。結果を図２に示す（ＡＵ＝吸収単位）。
【００７６】
図２の記号の説明：
４ ＦＰ４
５ ＦＰ５
９ ＦＰ９。
【００７７】
安定性試験の結果
４０℃で１ヶ月間保存したサンプルＦＰ１及びＦＰ２のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、凝集体及び疎水性分解産物の含量の目視できる増加がないのでサンプルが安定であることを示す（表１、図１）。安定性は、参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等である。参照サンプルは、市場で入手可能なＧ−ＣＳＦ含有医薬組成物（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ｇ−ＣＳＦ＝０．３ ｍｇ／ｍｌ）に等しい。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析でも安定性が確認され、保存期間後に不純物またはタンパク質含量の本質的な変化を示していない。これらの結果は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果（結果示さず）及びｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性測定の結果と符合する。試験に使用したＧ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は国際標準レベルである（Ｃａｔ．ｎｏ．８８／５０２；ＮＩＢＳＣ，ＵＫ）。サンプルＦＰ１及びＦＰ２のｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は試験条件下の保存後に変化しない（結果示さず）。
【００７８】
【表２】
【００７９】
結果は、ＮＤＳＢ含有医薬組成物の安定性が参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等であることを示す。ＮＤＳＢ濃度が高いほど安定性に有利な効果を与えることが判明した。
【００８０】
２５℃で１週間及び１ヶ月間保存したサンプルＦＰ４−ＦＰ１１のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、凝集体及び疎水性分解産物の顕著な増加がないのでサンプルが安定であることを示す（表２、図２）。安定性は、参照サンプル（ＡＳ１６−１０ＡＣＴ）と同等である。参照サンプルは、市場で入手可能なＧ−ＣＳＦ含有医薬組成物（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ｇ−ＣＳＦ＝０．３ｍｇ／ｍｌ）に等しい。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析でも安定性が確認される。この分析では、保存期間後に不純物またはタンパク質の含量の本質的な変化を示していない。これらの結果は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果（結果示さず）及びｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性測定の結果と符合する。試験に使用したＧ−ＣＳＦのｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は国際標準のレベル（Ｃａｔ．ｎｏ．８８／５０２；ＮＩＢＳＣ，ＵＫ）である。サンプルＦＰ４−ＦＰ１１のｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性は試験条件下の保存後に変化しない（結果示さず）。
【００８１】
【表３】
【００８２】
表２の結果は、ＮＤＳＢを添加した医薬組成物が安定であることを示す。より極端な条件（１ヶ月、４０℃）を与えたサンプルでは参照サンプルに比べて安定性がやや低下することが観察される（表１）。また、当業界で明らかなように４．０を上回るｐＨがＧ−ＣＳＦに好ましくないので安定性がやや低下したことも考えられる。参照サンプルはｐＨ４．０で調製されている。
【実施例２】
【００８３】
本発明のＧ−ＣＳＦ医薬組成物の組成
本発明の医薬組成物の組成を表３に示す。
【００８４】
【表４】
【００８５】
バルク濃縮物調製
バルク濃縮物を調製するためのＧ−ＣＳＦ出発材料は大腸菌中の発現によって産生させる。
【００８６】
バルク濃縮物は純酸（酢酸またはＨＣｌ）を含むｐＨ４．４の溶液中でＧ−ＣＳＦ濃度１．５ｍｇ／ｍｌを使用して調製する。バルク濃縮物のＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、ダイマー及びそれ以上の高分子凝集体の含量が検出限界以下であることを示す。ＲＰ−ＨＰＬＣで測定した不純物のアッセイは２−４％の範囲である。（新しいＮｅｕｐｏｇｅｎサンプルの分析は不純物の量が同等であることを示す）。
【００８７】
材料品質
ＮＤＳＢ：分析用ＮＤＳＢ−１９５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ），ソルビトール： Ｐｈ．Ｅｕｒ．品質；グリセロール：Ｍｅｒｃｋ；分析用；イノシトール：ミオ−イノシトール（Ｆｌｕｋａ：＞９９．５％ＨＰＬＣ），トレハロース（Ｆｌｕｋａ：＞９９．５％ＨＰＬＣ），ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ：９９％），ＤＭＳＯ（Ｍｅｒｃｋ：＞９９．５％），トゥイーン８０（Ｓｉｇｍａ，低過酸化物レベル， 抗酸化剤としてＢＨＴ含有）；注射用水：Ｐｈ．Ｅｕｒ．品質；分析用水：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）．
【００８８】
参照医薬組成物の調製
Ａ（Ｓ１６−１０ＡＣＴ）：Ｇ−ＣＳＦモノマーを含むゲル濾過画分をプールし、１０ｍＭの酢酸と５％のソルビトールとを注射用水中に含むバッファで置換する。バッファのｐＨをＮａＯＨ溶液で３．９６に調整する。置換は、ＬａｂｓｃａｌｅＴＭ ＴＦＦシステム／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ上で３つのＵｌｔｒａｃｅｌ−５ ＰＬＣＣＣ膜を使用して行う。トゥイーン８０を０．００４％の濃度が得られるまで加える。置換後の最終溶液のｐＨは４．０、濃度は０．３０４ｍｇ／ｍｌである。
【００８９】
本発明の医薬組成物の調製
総論
本発明の医薬組成物は、０．２ＰＥＳ／Ｎａｌｇｅｎｅフィルターで予め濾過した適当な滅菌バッファ溶液でバルク濃縮物を希釈することによって調製する。最終Ｇ−ＣＳＦ濃度はそれぞれ０．３ｍｇ／ｍｌまたは０．６ｍｇ／ｍｌである。
【００９０】
医薬組成物ＦＰ１及びＦＰ２を無色ガラスから成る加水分解タイプ１の２ｍｌ容のバイアルに入れ、洗浄し、滅菌し、アルミニウム冠の付いたブロムブチルゴム栓で閉鎖する。
ＦＰ１、ＦＰ２、ＦＰ３：１部のバルク濃縮物に４部の適当なバッファ溶液を加える。表３に示した最終濃度が得られる。ｐＨの調整なし。
【００９１】
ＦＰ４−ＦＰ１１：４部の濃縮物に６部の適当なバッファ溶液を加える。表３に示した最終濃度が得られる。ｐＨの調整なし。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】４０℃（±２℃）で１ヶ月間（４０）保存した本発明サンプル及び基準サンプルのＳＥ−ＨＰＬＣ。
【図２】４０℃（±２℃）で１ヶ月間（４０）保存した本発明サンプルのＳＥ−ＨＰＬＣ。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効医薬成分と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物。
【請求項２】
有効医薬成分が治療的に有効な合成または天然の有機分子及び治療有効タンパク質から成るグループから選択される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
治療有効タンパク質が、顆粒球コロニー刺激因子、インターフェロン、インターロイキン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、上皮増殖因子、エリトロポエチン、濾胞刺激ホルモン、ヒト血清アルブミン、デオキシリボヌクレアーゼ、線維芽細胞カルシトニン、ヘマトプロテイン、プラスミノーゲンアクチベーター及びそれらの前駆体、サイトカイン、ＴＮＦリガンドファミリー、可溶性受容体、成長ホルモン、リポタンパク質、アルファ−１−アンチトリプシン、インスリン、プロインスリン、インスリンのサブユニットＡ、インスリンのサブユニットＢ、グルカゴン、血液凝固因子、ボンベシン、トロンビン、エンケファリナーゼ、マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ−１−アルファ）、リラキシンＡサブユニット、リラキシンＢサブユニット、プロリラキシン、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子、ホルモン受容体または成長因子受容体、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマトイド因子、骨由来神経栄養因子、ニューロトロピン−３、−４、−５または−６、神経成長因子、血小板由来増殖因子、線維芽細胞増殖因子、形質転換増殖因子、インスリン様増殖因子、トロンボポエチン、骨形成タンパク質、及び、スーパーオキシドジスムターゼから成るグループから選択される請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
治療有効タンパク質がＧ−ＣＳＦである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＮＤＳＢが式１：
【化１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は同じ基及び／または異なる基でよく、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体から成るグループから選択され、Ｒ４は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは１乃至６の値である］
の第四アンモニウム塩である請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＮＤＳＢが、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩、３−（１−ピリジノ）−１−プロパンスルホネート、ジメチルベンジルアンモニウムプロパンスルホネート、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩、３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート及びジメチル−（２−ヒドロキシエチル）−（スルホプロピル）−アンモニウム塩から成るグループから選択される請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＮＤＳＢがジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が場合によっては更にポリオールを含む請求項１から７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ポリオールがソルビトール、グリセロール、イノシトール、トレハロース及びマンニトールから成るグループから選択される請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が場合によっては更に１種以上の医薬に許容される賦形剤を含む請求項１から９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医薬に許容される賦形剤がＥＤＴＡ及びＤＭＳＯから成るグループから選択される請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬組成物が好ましくはＮＤＳＢと治療有効量の有効医薬成分とを混合することによって調製される医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
医薬組成物を製造するためのＮＤＳＢの使用。
【請求項１４】
医薬組成物中の安定剤としてのＮＤＳＢの使用。
【請求項１５】
医薬組成物中の緩衝剤としてのＮＤＳＢの使用。
【請求項１６】
医薬組成物中のｐＨ調整剤としてのＮＤＳＢの使用。
【請求項１】
有効医薬成分と非界面活性スルホベタイン（ＮＤＳＢ）とを含む医薬組成物。
【請求項２】
有効医薬成分が治療的に有効な合成または天然の有機分子及び治療有効タンパク質から成るグループから選択される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
治療有効タンパク質が、顆粒球コロニー刺激因子、インターフェロン、インターロイキン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、上皮増殖因子、エリトロポエチン、濾胞刺激ホルモン、ヒト血清アルブミン、デオキシリボヌクレアーゼ、線維芽細胞カルシトニン、ヘマトプロテイン、プラスミノーゲンアクチベーター及びそれらの前駆体、サイトカイン、ＴＮＦリガンドファミリー、可溶性受容体、成長ホルモン、リポタンパク質、アルファ−１−アンチトリプシン、インスリン、プロインスリン、インスリンのサブユニットＡ、インスリンのサブユニットＢ、グルカゴン、血液凝固因子、ボンベシン、トロンビン、エンケファリナーゼ、マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ−１−アルファ）、リラキシンＡサブユニット、リラキシンＢサブユニット、プロリラキシン、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子、ホルモン受容体または成長因子受容体、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマトイド因子、骨由来神経栄養因子、ニューロトロピン−３、−４、−５または−６、神経成長因子、血小板由来増殖因子、線維芽細胞増殖因子、形質転換増殖因子、インスリン様増殖因子、トロンボポエチン、骨形成タンパク質、及び、スーパーオキシドジスムターゼから成るグループから選択される請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
治療有効タンパク質がＧ−ＣＳＦである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＮＤＳＢが式１：
【化１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は同じ基及び／または異なる基でよく、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはそれらの誘導体から成るグループから選択され、Ｒ４は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは１乃至６の値である］
の第四アンモニウム塩である請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＮＤＳＢが、ジメチルエチル−（３−スルホプロピル）−アンモニウム塩、３−（１−ピリジノ）−１−プロパンスルホネート、ジメチルベンジルアンモニウムプロパンスルホネート、ジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩、３−（１−メチルピペリジン）−１−プロパンスルホネート及びジメチル−（２−ヒドロキシエチル）−（スルホプロピル）−アンモニウム塩から成るグループから選択される請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＮＤＳＢがジメチル−ｔ−ブチル−（３−スルホプロピル）アンモニウム塩である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が場合によっては更にポリオールを含む請求項１から７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ポリオールがソルビトール、グリセロール、イノシトール、トレハロース及びマンニトールから成るグループから選択される請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が場合によっては更に１種以上の医薬に許容される賦形剤を含む請求項１から９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医薬に許容される賦形剤がＥＤＴＡ及びＤＭＳＯから成るグループから選択される請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬組成物が好ましくはＮＤＳＢと治療有効量の有効医薬成分とを混合することによって調製される医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
医薬組成物を製造するためのＮＤＳＢの使用。
【請求項１４】
医薬組成物中の安定剤としてのＮＤＳＢの使用。
【請求項１５】
医薬組成物中の緩衝剤としてのＮＤＳＢの使用。
【請求項１６】
医薬組成物中のｐＨ調整剤としてのＮＤＳＢの使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００７−５１６２８１（Ｐ２００７−５１６２８１Ａ）
【公表日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４６９３３（Ｐ２００６−５４６９３３）
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＳＩ２００４／００００４３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６０９８９
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（５０４３５９２９３）レツク・フアーマシユーテイカルズ・デー・デー (60)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＳＩ２００４／００００４３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６０９８９
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（５０４３５９２９３）レツク・フアーマシユーテイカルズ・デー・デー (60)
【Ｆターム（参考）】
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