有用リン脂質組成物を含む機能性素材及び機能性食品
【課題】有用リン脂質と機能性物質とを有効成分とし、その相乗機能を有効に活用して、生理活性を向上させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を提供する。
【解決手段】有用リン脂質組成物を含む機能性素材１は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする。機能性物質３を、有用リン脂質組成物からなるリポソーム２に内包させてもよい。有用リン脂質に水中でリポソームを形成させ、その際に機能性物質を同時に配合し、機能性物質の生理活性成分を内包した有用リン脂質リポソームとすることにより、機能性物質の体内吸収効率を向上させ、少量で同等以上の生理機能を発揮させ得る。
【解決手段】有用リン脂質組成物を含む機能性素材１は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする。機能性物質３を、有用リン脂質組成物からなるリポソーム２に内包させてもよい。有用リン脂質に水中でリポソームを形成させ、その際に機能性物質を同時に配合し、機能性物質の生理活性成分を内包した有用リン脂質リポソームとすることにより、機能性物質の体内吸収効率を向上させ、少量で同等以上の生理機能を発揮させ得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有用リン脂質組成物を含む機能性素材とこの機能性素材を添加した機能性食品に関する。さらに詳しくは、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする機能性素材及び有用リン脂質組成物によって形成されるリポソーム中に機能性物質を内包した機能性素材と、この機能性材料を含む機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、健康志向の高まりに伴って、様々な機能性食品が注目を集めている。それら多くの中のひとつとして、魚介類から取れる有用リン脂質がある（特許文献１，非特許文献１参照）。これはヒトの健康に有用なＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）やＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）などの高度不飽和脂肪酸エステルを豊富に含むため、これ自体が機能性食品の素材として注目を集め、商品化もされている。
【０００３】
人体に有用な様々な機能性物質を構成する成分は種々あるが、例えば、新油性成分は、水、血液などからなる人体体液に難溶性であるため、人体への吸収効率は必ずしも高くなく、高価な、また貴重な素材を無駄にする場合がある。これらの親油性成分や親水性成分の吸収効率を向上させるための様々な製剤技術が考案され、食品、医薬品分野での重要な要素技術となっている。
【０００４】
主として機能性食品の範疇に属する素材として、天然由来の各種機能性食品素材を経口摂取することにより、生活習慣の乱れに由来する身体の変調（メタボリックシンドローム等）の改善に近年広く利用されるようになったものがある。これらの中には原料入手が難しく、生産量に限界がある、などの理由から供給量の少ない高価な素材が多い。例えば、アガリクス（非特許文献２）、コエンザイムＱ１０（非特許文献３）、ブルーベリー、ルテイン、アスタキサンチン等を挙げることができる。これら高価な、また貴重な機能性物質の生物学的利用能を向上させる、すなわち、より少量で同等以上の効能を図ることが望まれている。
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１２３０５２号公報
【特許文献２】特開２００２−２７２４９３号公報
【非特許文献１】井上良計、食品と開発、３１、１，ｐ．４９
【非特許文献２】アガリクス インターネット＜ＵＲＬ： HYPERLINK "http://www.aicplus.com/about" http://www.aicplus.com/about agaricus/index.html, ２００５年８月１９日検索
【非特許文献３】日本コエンザイムＱ協会 インターネット＜ＵＲＬ： HYPERLINK "http://www.coenzymeq-jp.com/enterprise.html#q10" http://www.coenzymeq-jp.com/enterprise.html#q10，２００５年８月１９日検索
【非特許文献４】フレグランスジャーナル、Ｎｏ．１５、ｐ．６８−７６、１９６５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、人体に有用で高価な機能性物質を、より効率的に吸収することができる機能性食品や製剤などに使用可能な機能性素材が得られていないという課題がある。
【０００７】
本発明は、上記課題に鑑み、有用リン脂質と機能性物質とを有効成分とし、その相乗機能を有効に活用して、生理活性を向上させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材とこれを含む機能性食品を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、鋭意研究行ない、有用リン脂質と機能性物質とを組み合わせて一緒に投与するか、又は、有用リン脂質のリポソーム内に機能性物質を内包させた有用リン脂質組成物を含む機能性素材により、機能性物質単独投与の場合よりもその生理機能を高めることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
上記目的を達成するため、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としたことを特徴とする。
上記構成によれば、人体に有用なリン脂質組成物と機能性物質の生理活性機能の相乗効果により極めて生理活性機能の高い、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を提供することができる。
【００１０】
また、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物からなるリポソームと機能性物質とから成り、機能性物質を、リポソーム内に内包したことを特徴とする。
この構成によれば、人体に有用な機能性物質は乳化性に優れた有用リン脂質から形成されるリポソームに内包され、体内における生物学的利用能を高めることによって、生理活性機能を向上させることができる。
【００１１】
上記構成において、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は、好ましくは、リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上がＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及び／又はＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）である。
また、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は、好ましくは、エステル交換によってオメガ−３高度不飽和脂肪酸含有量を高めた有用リン脂質組成物である。
また、機能性物質は、好ましくは、機能性食品素材である。また、好ましくは機能性物質は医薬品素材である。また、機能性物質は、好ましくは、アガリクス又はコエンザイムＱ１０である。
また、好ましくは、前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は水産生物由来であり、水産生物は、魚卵、水産動物の生殖巣、イカ、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物の何れかである。
【００１２】
上記構成によれば、有用リン脂質が天然由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質であり、その内部に機能性物質として、食品素材や医薬品素材を含有するか、又は、これらの機能性物質を内包する有用リン脂質組成物を含む機能性素材を提供することができる。特に、機能性物質がアガリクスやコエンザイムＱ１０である場合、その効果は著しく、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質又はアガリクスの何れの単体よりも、高い生理活性機能を発現することができる。
【００１３】
また、本発明の機能性食品は、好ましくは、上記有用リン脂質組成物を含む機能性素材を添加している。この場合、機能性食品は、好ましくは飲料である。
上記構成によれば、機能性物質を内包する有用リン脂質組成物を含む機能性素材を、固形の食品や飲料などから摂取し得る機能性食品を提供することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、有用なリン脂質組成物及び機能性物質を含むか、又は有用なリン脂質組成物からなるリポソームに機能性物質を内包し、その生物学的利用能を向上させることができる機能性素材及び機能性素材を含有した食品を提供することができる。特に、飲用した場合には、機能性物質の体内吸収効率を向上させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、図面に基づいて本発明の実施の形態を詳細に説明する。
最初に、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材について説明する。
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としている。有用リン脂質を主成分とする有用リン脂質組成物において、リン脂質は、一例として、化学式（１）で表されるようなグリセリンリン酸エステルであり、魚介類をはじめ、卵黄、大豆などに多く含まれ、抽出利用されている。
【化１】
ここで、Ｒ1 ＣＯＯ，Ｒ2 ＣＯＯは脂肪酸残基であり、Ｘはコリン（ＰＣ）、エタノールアミン（ＰＥ）、イノシトール（ＰＩ）、セリン（ＰＳ）、及びグリセロール（ＰＧ）のうちから選ばれるアルコールアミン基などである。この基Ｘとしては、多価アルコールをエステル結合させた基であってもよい。
【００１６】
このようなグリセリンリン酸エステルの例として、化学式（２）で表されるホスファチジルコリンや、化学式（３）で表されるホスファチジルセリンなどが挙げられる。
【化２】
【化３】
ここで、Ｒ1 ＣＯＯ、Ｒ2 ＣＯＯは脂肪酸残基であり、化学式（１）で表されるグリセリンリン酸エステルのＸがコリン（ＰＣ）またはセリン（ＰＳ）である。
【００１７】
Ｒ1 ＣＯＯである脂肪酸残基が、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）基、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）基である場合の化学構造式を下記（４）式及び（５）式に示す。これらＤＨＡ，ＥＰＡは、何れも末端から３番目に位置する炭素が不飽和結合を有していることから、オメガ（ω）−３高度不飽和脂肪酸と呼ばれており、このようなオメガ−３高度不飽和脂肪酸を含むリン脂質が、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質である。本発明においては、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を、有用リン脂質、又は、単にオメガ−３結合リン脂質あるいはｎ−３系リン脂質と呼ぶ。
【化４】
【化５】
【００１８】
有用リン脂質は、親水基としてのリン酸部と親油基としてのアルキル基、アルケニル基部をバランスよく有する構造であるので、界面活性剤的な機能を持ち、水中、人体体液中、人体細胞内などで乳化微粒子であるリポソームを形成して、その内部に親水成分及び親油成分を取り込む性質を示す。
【００１９】
なお、上記有用リン脂質のリン酸部分にエステル結合する化学物質は、コリンであるホスファチジルコリンが主要成分であるが、セリンの結合したリン脂質であるホスファチジルセリンを共存させることにより、リポソームの表面に正電荷を持たせることで、液中で相互に電気的に反発させ、分散液中でのリポソームの安定性を著しく高めることができる。共存濃度は、５重量％以上で安定性が顕著であり、６０重量％以下が好ましい。また、有用リン脂質中でエステル結合する脂肪酸には、オメガ−３高度不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及び／又はＥＰＡが含まれていることが必須である。オメガ−３高度不飽和脂肪酸は、少量でも含まれていれば本発明の効果を得ることができるが、高濃度であるほど有効である。具体的には、有用リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上で明瞭な効果を示し、好ましくは２０重量％以上が望ましい。
ここで、ホスファチジルセリンは、水産生物由来のリン脂質から抽出製造しても良いし、ホスファチジルコリンなどのリン脂質をＬ−セリン存在下にホスファチジル基転移反応により、変換することにより製造することができる（特許文献２参照）。また、酵素法等によるエステル交換によって抽出してもよい。さらにコレステロールを１重量％〜５０重量％の範囲で適宜加えることで、リポソーム膜の強度が増し、分散安定性を高めることができる。
【００２０】
機能性物質２は、機能性食品素材や医薬品素材であれば何でもよい。このような機能性食品素材としては、アガリクス、メシマコブ、ハナビラタケなどのキノコ抽出エキス類や、コエンザイムＱ１０、水溶性ペプチド、カロチンなどカロチノイド類、ポリフェノール、茶カテキン、イチョウ葉エキス、各種ハーブ類、イソフラボン等のフラボノイド類、葉酸、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類、トコフェロール、グルコサミン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、コラーゲン、フコイダン、キチン、キトサン、ブルーベリー、ルテイン、アスタキサンチン等、それにＤＨＡ，ＥＰＡなどのオメガ−３系脂肪酸、共役脂肪酸（ＣＬＡ）などが挙げられる。これらの中で、アガリクスは顕著な抗がん作用を示すことが知られている。また、コエンザイムＱ１０は、人体細胞中でも生成して人体の“元気の素”と呼ばれる物質であり、健康、美容、体力増進の補助剤として多くの商品が販売されている。
【００２１】
一般に医薬品は、食品と異なり不都合な副作用を伴っている。例えば、アドレアマイシン、シスプラチン、タキソール等の抗がん剤は、優れた殺がん細胞効果を示すので広くがんの治療に用いられている。しかしながら、効果を高めるために使用量を増すと、脱毛、吐き気などの副作用が強くなり、治療の障害となっている。本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材により、これら医薬品の効能を高めると、医薬品の使用量を低下させ、副作用のレベルも大幅に低減化することができる。その結果、患者の生活の質（Ｑuality of Ｌife)を著しく高めることができる点も、本発明の優れた効果である。
【００２２】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材によれば、人体に有用なリン脂質組成物と機能性物質の生理活性機能の相乗効果により、極めて生理活性機能の高い機能性食品を提供することができる。
特に、機能性物質がアガリクスである場合、その効果は著しく、リン脂質組成物又は機能性物質の単体のいずれより高い生理活性機能を発現することができる。
【００２３】
次に、本発明のさらに別の機能性素材として、オメガ−３結合リン脂質からなるリポソームに機能性物質を内包させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材について説明する。
図１は、本発明の別の有用リン脂質組成物を含む機能性素材の構造を模式的に示すものである。図において、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材１は、有用リン脂質からなるリポソーム２内に、機能性食品素材や医薬品素材の有効成分からなる機能性物質３が内包されている。機能性物質を内包するリポソーム２は、有用リン脂質が水中で乳化凝集して微粒子を形成している。このリポソーム２の粒径はリポソーム化条件によって異なり、通常１０μｍ以下であり、より好ましくは１μｍ以下である。
ここで、有用リン脂質及び機能性物質としては、上記の機能性素材と同様の材料を好適に用いることができる。さらに、有用リン脂質としては、オメガが結合し、リポソーム効果を有するリン脂質の修飾又は誘導体であってもよい。このような、脂質としては、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）のような糖脂質であってもよい。
なお、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材１を、適宜、機能性物質３を内包するリポソーム製剤１又は単にリポソーム製剤１とも呼ぶ。
【００２４】
上記リポソームは、有用リン脂質よりなる二分子膜を形成し、その内部に水相を有する閉鎖小胞のことである。水と油など混じり合わない二液の一方が細粒となって他方の相に分散する系、乳化（エマルジョン）とは異なる。通常の乳化は界面活性剤などを用いてエマルジョンの安定化がなされている。有用リン脂質自体も界面活性剤の作用はあるが、本発明ではリポソームの二分子膜等として使用している。リポソームの形態としては、多膜リポソーム（０．１〜数μｍ) と一枚膜リポソーム（０．０１〜数μｍ）が知られている。前者には、多重層リポソーム（ＭＬＶ）、数枚膜リポソーム（ＯＬＶ）、多相リポソームがあり、後者には小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）、大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ）、それに巨大一枚膜リポソーム（ＧＵＶ）がある。内部水相乃至二重膜相に機能性物質を必要量保持できさえすれば、そのいずれでも良いが、好ましくは一枚膜リポソームである。
ここで、リポソームの調製・製造方法としては、vortexing 法、sonication法、reverse-phase evaporation 法、などを用いることができる（非特許文献４参照）。大量生産法としては、多価アルコール法、加温法、噴霧乾燥法、メカノケミカル法などでもよい。
【００２５】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材においては、有用リン脂質からなるリポソーム形成の際に、リポソーム内に機能性物質３を内包させることで製造することができる。この場合、機能性物質は、リポソームの内部に１〜９０重量％、好ましくは、２０〜７０重量％添加されることが好ましい。
【００２６】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材によれば、図１に示すように、有用リン脂質でリポソーム２を形成し、その内部に機能性物質３を内包させているので、種々の生物学的利用能を向上させる機能性物質を内包する有用リン脂質のリポソームからなる機能性素材１を提供することができる。したがって、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材に用いる場合には、機能性物質を単独で投与する以上の生理機能を発揮させることができる。
この場合、有用リン脂質は、単独でも多くの生理活性があることが知られており、良好な界面活性剤でもある。したがって、有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部に機能性素材を内包させた機能性素材は、その他の特別な界面活性剤などの添加物を使用せずに分散化できる。このため、有用リン脂質を水に添加して、リン脂質の脂質二重膜を形成する処理を施すことにより、リポソーム２を効率良く形成することができる。
【００２７】
さらに、有用リン脂質は、例えば、肝機能改善、血圧降下、抗アレルギー、記憶力などの学習機能向上、制がんなどの生理活性があるので、機能性物質３の有効成分と有用リン脂質中の生理活性成分との相乗効果によっても、全体としての生理機能を向上させることができる。
【００２８】
ここで、生理活性機能を向上させる機構としては、小腸における吸収性を高めたり、腸内や体内での機能性物質の分解を抑えたり、徐放性による血中濃度の維持、生体膜と類似構造であることから細胞との相互作用を促進したりすることに起因すると考えられる。また、生体の特定部位（疾患のターゲット部位）に機能性物質を、濃度高く集積したりできるものと推定される。さらに、腸管のパイエル板の免疫細胞の活性化や、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質で作成したリポソームが、がん細胞の増殖抑制効果がある場合や、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質そのものの他の生理機能との相乗効果などのいずれか、又はその複合効果などの種々の要因が考えられるが、詳細は不明である。
【００２９】
次に、本発明の有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部に機能性素材を内包させた有用リン脂質組成物を含む機能性素材の製造方法を説明する。
有用リン脂質組成物と所定の機能性物質との混合物を、水中で乳化することによって、機能性物質を内包するリポソーム製剤を調製することができる。この乳化は、水、有用リン脂質組成物及び機能性物質を強力に撹拌し、又は、微細孔を通して噴射することによって行なうことができる。特に、機能性物質が親水性である場合には、機能性物質がリポソームのリン脂質二重膜内部に取り込まれて、均一な乳液となり易い（図１参照）。さらに、機能性物質が親油性である場合には、その一部又は全部がリポソーム内部のリン脂質二重膜の層間に挟まれて、リン脂質の内部に保持、即ち内包される。乳化により形成されるリポソームの粒径は、１０μｍ以下である。粒径が小さいほど水性媒体中でリポソームは安定であり、また有用リン脂質中のリン酸部分にエステル結合する化学物質として、５重量％以上のセリンが含まれる場合、安定性は向上する。またリポソーム化の方法によって粒径分布は、適宜調製することができる。粒径および粒径分布は用途に応じて適宜設計すればよい。
【００３０】
有用リン脂質としては、イクラなどの魚卵、カツオ、マグロなどの解体加工屑や生殖巣、イカ、ヒトデや、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物等の水産生物由来の油分から抽出し、精製したオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を用いることができる。
【００３１】
上記製造方法によれば、本発明の有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部又はリン脂質二重膜間に機能性素材を内包させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を効率良く製造することができる。
【実施例１】
【００３２】
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１として、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を製造した。
具体的には、へキサンに溶解したイカミール由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質をナス型フラスコに入れ、窒素ガス気流下にて、その側壁にリン脂質が薄膜を形成するようにして乾固させ、さらに、減圧下で放置して溶媒を完全に留去して乾固物を得た。この乾固物０．４ｇを、純水１０００ｃｍ3 に分散させた。一方、アガリクス（健康科学株式会社製、AICPLUS ）の水抽出エキス凍結乾燥粉末１ｇを純水１０００ｃｍ3 に溶解させた。
次に、上記乾固物の水分散液とアガリクス水溶液とを等量混合し、実施例１の機能性素材を調製した。
【実施例２】
【００３３】
実施例２として、リポソーム２の原料としてイカ由来のＤＨＡ結合リン脂質を用い、機能性物質３としてアガリクス（健康科学株式会社製、AICPLUS ）を用い、機能性物質を内包するリポソーム製剤１を調製した。
イカ由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質によるリポソームに、アガリクスを下記の手順により内包させた。
最初に、実施例１と同様の手順で、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質の乾固物を得た。
次に、アガリクスエキス凍結乾燥粉末０．５ｇを純水１０００ｃｍ3 に溶かし、さらに、上記乾固物０．２ｇを加え、ボルテックスミキサーで２０分間攪拌して、リポソーム化を行なった。
次に、孔径０．４μｍのメンブランフィルターに２０回通し、サイジング及び除菌を行ない、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１を調製した。実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１において、その乳化液１ｃｍ3 当りのＤＨＡ（オメガ−３）リン脂質含有量は、０．２ｍｇ／ｃｍ3 であり、乳化液１ｃｍ3 当たりのアガリクス含有量は、０．５ｍｇであった。ここで、リポソームに電荷を持たせて安定化させる場合には、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びコレステロールを乾固物の調製時に適宜加えればよい。
【００３４】
次に、比較例について説明する。
（比較例１）
アガリクスを配合しない以外は実施例２と同様の操作で、比較例１のイカ由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を調製した。比較例１のリポソーム製剤１において、乳化液１ｃｍ3 当たりのＤＨＡを主成分とするオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質の含有量は、０．２ｍｇ／ｃｍ3 である。
【００３５】
（比較例２）
アガリクス単体を比較例２とした。
【００３６】
次に、実施例１，２及び比較例１，２で調製した各組成物の効果について説明する。
各組成物を水に混ぜてマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）に飲料として自由摂取させ、マウスに接種したがん細胞（ＳＰ２ｔｕｍｏｒｓ）に及ぼす影響を調べた。上記飲料は、がん細胞接種後７日目以降毎日与えた。
ここで、試験に使用したマウスは、ＢＡＬＢ／ｃの雄（ｎｕ／ｎｕ）、５週齢で入室馴化飼育後、６週齢から試験を開始した。がん細胞ＳＰ２は、７頭のマウス（試料数ｎ＝７）に、各頭３０万細胞を右脇下に皮下投与した。マウスは、日本クレア製の飼料ＣＥ２で飼育した。また、実施例１，２及び比較例１，２で調製した各組成物の水への添加濃度は０．４ｍｇ／ｃｍ3 とした。
【００３７】
最初に、実施例１と比較例１，２との比較について説明する。
図２は、実施例１及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の大きさを示す。図２において、横軸はがん細胞接種以後の日数を、縦軸はがん細胞の大きさ（ｍｍ3 ）を示す。図には、実施例１及び比較例１，２に対して、比較対照のために上記組成物を何も入れない水を自由摂取させたマウスのデータも合わせて示している（図１の無投与参照）。
図２から明らかなように、２１日目のがん細胞量は、実施例１、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、２ｍｍ3 、４ｍｍ3 、３．５ｍｍ3 、７ｍｍ3 となり、実施例１の場合には、無投与の場合と比較して、約３０％しか増殖しなかった。これから、実施例１の場合には、がん細胞の増殖を抑圧している効果が、顕著に認められた。
【００３８】
図３は、実施例１及び比較例１，２において、２１日目のがん細胞の体重に対する重量％を示した図である。図において、縦軸はがん細胞の重量％を示す。
図３から明らかなように、がん細胞の重量％は、実施例１、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、８％（無投与の約２４％）、２０％、１７％、３３％となり、実施例１の組成物の場合には、がん細胞の重量％は無投与の約２４％であり、がん細胞の増殖を抑圧している効果が顕著に認められた。
【００３９】
次に、実施例２と比較例１，２との比較について説明する。
図４は、実施例２及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の重量を示す図である。図において、横軸はがん細胞接種以後の日数を示し、縦軸はがん細胞の重量（ｇ）を示す。図には、実施例２及び比較例１，２に対して、比較対照のために上記組成物を何も入れない水を自由摂取させたマウスのデータも合わせて示している（図４の無投与参照）。
１９日目のがん細胞量は無投与２０ｇ、リポソームのみ（比較例１）１５ｇ、アガリクスのみ（比較例２）３ｇ、に対して、実施例では１ｇ（無投与の５％）と抑制効果が認められた。
図４から明らかなように、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１を含む水を自由摂取させたマウスは、１９日目からがん細胞の成長が徐々に認められ、３５日目に２７ｇになったが、生存していた。
【００４０】
比較例１のイカ由来のＤＨＡ（オメガ−３）リン脂質リポソームを含む水を自由摂取させたマウスは、１２日目からがん細胞の成長が認められ、１９日目で死亡し、そのときのがん細胞の重量は３０ｇであった。
【００４１】
比較例２のアガリクスを含む水を自由摂取させたマウスは、１３日目からがん細胞の成長が徐々に認められ、３５日目には４０ｇになったが、生存していた。
【００４２】
一方、組成物を何も投与しない無投与の場合には、１２日目からがん細胞の成長が認められ、１９日目で死亡し、そのときのがん細胞の重量は３８ｇであった。
【００４３】
上記実施例２及び比較例によれば、１９日目に死亡した無投与や比較例１に対して、比較例２、実施例２の順に、がん細胞の成長が遅くなり、明瞭にがん細胞成長抑制効果が認められた。さらに、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１の場合には、比較例２のアガリクス単独投与の場合よりもさらに、がん細胞成長抑制効果が認められた。また、比較例１のイカ由来のＤＨＡ（オメガ−３）結合リン脂質リポソームのみからなる組成物の場合には、無投与の場合に比較して、がん細胞の成長が遅いことが分かった。
【実施例３】
【００４４】
実施例３として、機能性物質３としてコエンザイムＱ１０（日清ファルマ製）を用いた以外は、実施例２と同様にして、機能性物質を内包するリポソーム製剤１を調製した。
全量で２５ｍｇの実施例３の機能性素材を分散させた飲料（１００ｃｍ3 ）を健常人男性３名に飲ませた。
比較例として、健常人３名に、ノイキノン１０ｍｇ錠（エーザイ株式会社製のコエンザイムＱ１０製剤）１０錠を単回経口投与した。この場合のコエンザイムＱ１０の投与量は１００ｍｇである。両群より経時的に採血して、血漿注のコエンザイムＱ１０濃度を測定した。実施例３群および比較例群とも血漿中のコエンザイムＱ１０濃度の経時変化カーブはほぼ同一であった。両群ともに投与６時間後に最高血漿中濃度（０．５５−０．７０μｇ／ｃｍ3 ）に達し、以後緩やかに減少した。
以上により、実施例３のコエンザイムＱ１０を有用リン脂質に内包させた機能性素材１を含有させた飲料は、市販コエンザイムＱ１０製剤（ノイキノン）の１／４の量で、効率良く体内に取り込まれ、コエンザイムＱ１０の血漿中濃度を高めることができた。
【実施例４】
【００４５】
後述するホタテ由来のリン脂質を用いた以外は実施例２と同様にして、実施例４の有用リン脂質を含む機能性素材１の調製を行った。
【００４６】
上記ホタテ由来のリン脂質は以下のようにして調製した。
出発原料としてホタテウロを用い、実施例４の有用リン脂質組成物を製造した。出発原料のホタテウロの重量は１０００ｋｇであり、一応の水切りはしてあるが特に乾燥していない状態（以下、湿潤基準と呼ぶ）である。その内訳は、固形分２３重量％で、水分が７７０ｋｇである。この固形分中の蛋白質は、ホタテウロの場合には約１３．５％程度である。
最初に、出発原料を連続的に投入し、第１の蒸煮工程及び第２の固液分離工程を連続して行なった。具体的には、出発原料１に水２０００リットルを加え、スチームジャケット加熱式連続蒸煮管で、９５〜１００℃、２０分の滞留時間で加熱煮沸した。
【００４７】
続いて、第２の固液分離工程として、連続式遠心分離機に通し、２０００Ｇの回転を掛け、固形物及び液相を得た。この液相は、廃棄物として回収した。この工程で得た固形物の重量は４７０ｋｇあり、カールフィッシャー測定により含水量は６１．７重量％であった。
【００４８】
有機溶剤抽出工程として、上記固形物のうち１００ｋｇ（乾燥固形分約３８ｋｇ）を、ステンレススティール製の円筒状抽出装置（直径０．５ｍ、高さ１．５ｍ、容量２００リットル）に充填し、９５％エタノール３００リットルを流通速度１００リットル／時で流通して抽出操作を行なった。最後に、空気で残留液相を押出して、これも有機溶剤抽出液に加え、約４００リットルの有機溶剤抽出液を得た。このときに得られた抽出残渣固形物は、３５ｋｇであった。
【００４９】
第４工程として、約４００リットルの有機溶剤抽出液を、５０℃、６５０ｍｍＨｇ（約、８．７×１０4 Ｐａ）で減圧蒸留して有機溶剤を除去回収した。ここで得られた抽出液は、褐色粘ちょうな液体で、その重量は１５．５ｋｇであった。
【００５０】
第５工程として、上記抽出液を直径５０ｃｍ、高さ１．５ｍのステンレススティール製クロマトカラムに通した。クロマトカラム中には、シリカゲルを充填してある。粒径２５０〜５００μｍのシリカゲル（ヒシゲル、洞海化学製）を用いた。分離には９５重量％エタノールで展開した。流出液相のうち、濃黒褐色の初期画分を分離廃棄し、その後淡褐色になった流出液相を目的画分として回収した。
【００５１】
次に、第６工程として、上記精製液から、第４工程と同条件でエタノールを蒸留除去すると、有用リン脂質組成物として油相７．８ｋｇを得た。この有用リン脂質組成物は、黒褐色の外観とオイル状の性状とを呈していた。
【００５２】
実施例１及び２と同様に、マウスへの飲料水添加試験を行なった。その結果、１９日目のがん細胞量は、実施例４、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、１．２ｇ、３０ｇ、４ｇ、３９ｇとなった。実施例４の場合には、がん細胞量は無投与の３％と非常に小さく、高いがん細胞抑圧効果を示した。
【００５３】
上記実施例１〜４及び比較例１、２から、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、高いがん細胞抑圧効果を示すことが判明した。
【００５４】
本発明は、上記実施例に限定されることなく、特許請求の範囲に記載した発明の範囲内で種々の変形が可能であり、それらも本発明の範囲内に含まれることはいうまでもない。例えば、上記機能性物質を内包するリポソーム製剤の製造工程におけるｐＨや、クロマト法による精製工程のクロマトカラムなどは、適宜に設計でき、また、魚介類の部位は、上記実施例のホタテやイカ由来に限らないことはいうまでもない。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】本発明の別の機能性素材の構造を模式的に示す図である。
【図２】実施例１及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の大きさを示す図である。
【図３】実施例１及び比較例１，２において、２１日目のがん細胞の体重に対する重量％を示した図である。
【図４】実施例２及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の重量を示す図である。
【符号の説明】
【００５６】
１：機能性物質を内包するリポソーム製剤（リポソーム製剤）
２：有用リン脂質からなるリポソーム
３：機能性物質
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有用リン脂質組成物を含む機能性素材とこの機能性素材を添加した機能性食品に関する。さらに詳しくは、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする機能性素材及び有用リン脂質組成物によって形成されるリポソーム中に機能性物質を内包した機能性素材と、この機能性材料を含む機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、健康志向の高まりに伴って、様々な機能性食品が注目を集めている。それら多くの中のひとつとして、魚介類から取れる有用リン脂質がある（特許文献１，非特許文献１参照）。これはヒトの健康に有用なＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）やＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）などの高度不飽和脂肪酸エステルを豊富に含むため、これ自体が機能性食品の素材として注目を集め、商品化もされている。
【０００３】
人体に有用な様々な機能性物質を構成する成分は種々あるが、例えば、新油性成分は、水、血液などからなる人体体液に難溶性であるため、人体への吸収効率は必ずしも高くなく、高価な、また貴重な素材を無駄にする場合がある。これらの親油性成分や親水性成分の吸収効率を向上させるための様々な製剤技術が考案され、食品、医薬品分野での重要な要素技術となっている。
【０００４】
主として機能性食品の範疇に属する素材として、天然由来の各種機能性食品素材を経口摂取することにより、生活習慣の乱れに由来する身体の変調（メタボリックシンドローム等）の改善に近年広く利用されるようになったものがある。これらの中には原料入手が難しく、生産量に限界がある、などの理由から供給量の少ない高価な素材が多い。例えば、アガリクス（非特許文献２）、コエンザイムＱ１０（非特許文献３）、ブルーベリー、ルテイン、アスタキサンチン等を挙げることができる。これら高価な、また貴重な機能性物質の生物学的利用能を向上させる、すなわち、より少量で同等以上の効能を図ることが望まれている。
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１２３０５２号公報
【特許文献２】特開２００２−２７２４９３号公報
【非特許文献１】井上良計、食品と開発、３１、１，ｐ．４９
【非特許文献２】アガリクス インターネット＜ＵＲＬ： HYPERLINK "http://www.aicplus.com/about" http://www.aicplus.com/about agaricus/index.html, ２００５年８月１９日検索
【非特許文献３】日本コエンザイムＱ協会 インターネット＜ＵＲＬ： HYPERLINK "http://www.coenzymeq-jp.com/enterprise.html#q10" http://www.coenzymeq-jp.com/enterprise.html#q10，２００５年８月１９日検索
【非特許文献４】フレグランスジャーナル、Ｎｏ．１５、ｐ．６８−７６、１９６５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、人体に有用で高価な機能性物質を、より効率的に吸収することができる機能性食品や製剤などに使用可能な機能性素材が得られていないという課題がある。
【０００７】
本発明は、上記課題に鑑み、有用リン脂質と機能性物質とを有効成分とし、その相乗機能を有効に活用して、生理活性を向上させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材とこれを含む機能性食品を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、鋭意研究行ない、有用リン脂質と機能性物質とを組み合わせて一緒に投与するか、又は、有用リン脂質のリポソーム内に機能性物質を内包させた有用リン脂質組成物を含む機能性素材により、機能性物質単独投与の場合よりもその生理機能を高めることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
上記目的を達成するため、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としたことを特徴とする。
上記構成によれば、人体に有用なリン脂質組成物と機能性物質の生理活性機能の相乗効果により極めて生理活性機能の高い、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を提供することができる。
【００１０】
また、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物からなるリポソームと機能性物質とから成り、機能性物質を、リポソーム内に内包したことを特徴とする。
この構成によれば、人体に有用な機能性物質は乳化性に優れた有用リン脂質から形成されるリポソームに内包され、体内における生物学的利用能を高めることによって、生理活性機能を向上させることができる。
【００１１】
上記構成において、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は、好ましくは、リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上がＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及び／又はＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）である。
また、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は、好ましくは、エステル交換によってオメガ−３高度不飽和脂肪酸含有量を高めた有用リン脂質組成物である。
また、機能性物質は、好ましくは、機能性食品素材である。また、好ましくは機能性物質は医薬品素材である。また、機能性物質は、好ましくは、アガリクス又はコエンザイムＱ１０である。
また、好ましくは、前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質は水産生物由来であり、水産生物は、魚卵、水産動物の生殖巣、イカ、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物の何れかである。
【００１２】
上記構成によれば、有用リン脂質が天然由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質であり、その内部に機能性物質として、食品素材や医薬品素材を含有するか、又は、これらの機能性物質を内包する有用リン脂質組成物を含む機能性素材を提供することができる。特に、機能性物質がアガリクスやコエンザイムＱ１０である場合、その効果は著しく、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質又はアガリクスの何れの単体よりも、高い生理活性機能を発現することができる。
【００１３】
また、本発明の機能性食品は、好ましくは、上記有用リン脂質組成物を含む機能性素材を添加している。この場合、機能性食品は、好ましくは飲料である。
上記構成によれば、機能性物質を内包する有用リン脂質組成物を含む機能性素材を、固形の食品や飲料などから摂取し得る機能性食品を提供することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、有用なリン脂質組成物及び機能性物質を含むか、又は有用なリン脂質組成物からなるリポソームに機能性物質を内包し、その生物学的利用能を向上させることができる機能性素材及び機能性素材を含有した食品を提供することができる。特に、飲用した場合には、機能性物質の体内吸収効率を向上させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、図面に基づいて本発明の実施の形態を詳細に説明する。
最初に、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材について説明する。
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としている。有用リン脂質を主成分とする有用リン脂質組成物において、リン脂質は、一例として、化学式（１）で表されるようなグリセリンリン酸エステルであり、魚介類をはじめ、卵黄、大豆などに多く含まれ、抽出利用されている。
【化１】
ここで、Ｒ1 ＣＯＯ，Ｒ2 ＣＯＯは脂肪酸残基であり、Ｘはコリン（ＰＣ）、エタノールアミン（ＰＥ）、イノシトール（ＰＩ）、セリン（ＰＳ）、及びグリセロール（ＰＧ）のうちから選ばれるアルコールアミン基などである。この基Ｘとしては、多価アルコールをエステル結合させた基であってもよい。
【００１６】
このようなグリセリンリン酸エステルの例として、化学式（２）で表されるホスファチジルコリンや、化学式（３）で表されるホスファチジルセリンなどが挙げられる。
【化２】
【化３】
ここで、Ｒ1 ＣＯＯ、Ｒ2 ＣＯＯは脂肪酸残基であり、化学式（１）で表されるグリセリンリン酸エステルのＸがコリン（ＰＣ）またはセリン（ＰＳ）である。
【００１７】
Ｒ1 ＣＯＯである脂肪酸残基が、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）基、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）基である場合の化学構造式を下記（４）式及び（５）式に示す。これらＤＨＡ，ＥＰＡは、何れも末端から３番目に位置する炭素が不飽和結合を有していることから、オメガ（ω）−３高度不飽和脂肪酸と呼ばれており、このようなオメガ−３高度不飽和脂肪酸を含むリン脂質が、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質である。本発明においては、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を、有用リン脂質、又は、単にオメガ−３結合リン脂質あるいはｎ−３系リン脂質と呼ぶ。
【化４】
【化５】
【００１８】
有用リン脂質は、親水基としてのリン酸部と親油基としてのアルキル基、アルケニル基部をバランスよく有する構造であるので、界面活性剤的な機能を持ち、水中、人体体液中、人体細胞内などで乳化微粒子であるリポソームを形成して、その内部に親水成分及び親油成分を取り込む性質を示す。
【００１９】
なお、上記有用リン脂質のリン酸部分にエステル結合する化学物質は、コリンであるホスファチジルコリンが主要成分であるが、セリンの結合したリン脂質であるホスファチジルセリンを共存させることにより、リポソームの表面に正電荷を持たせることで、液中で相互に電気的に反発させ、分散液中でのリポソームの安定性を著しく高めることができる。共存濃度は、５重量％以上で安定性が顕著であり、６０重量％以下が好ましい。また、有用リン脂質中でエステル結合する脂肪酸には、オメガ−３高度不飽和脂肪酸であるＤＨＡ及び／又はＥＰＡが含まれていることが必須である。オメガ−３高度不飽和脂肪酸は、少量でも含まれていれば本発明の効果を得ることができるが、高濃度であるほど有効である。具体的には、有用リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上で明瞭な効果を示し、好ましくは２０重量％以上が望ましい。
ここで、ホスファチジルセリンは、水産生物由来のリン脂質から抽出製造しても良いし、ホスファチジルコリンなどのリン脂質をＬ−セリン存在下にホスファチジル基転移反応により、変換することにより製造することができる（特許文献２参照）。また、酵素法等によるエステル交換によって抽出してもよい。さらにコレステロールを１重量％〜５０重量％の範囲で適宜加えることで、リポソーム膜の強度が増し、分散安定性を高めることができる。
【００２０】
機能性物質２は、機能性食品素材や医薬品素材であれば何でもよい。このような機能性食品素材としては、アガリクス、メシマコブ、ハナビラタケなどのキノコ抽出エキス類や、コエンザイムＱ１０、水溶性ペプチド、カロチンなどカロチノイド類、ポリフェノール、茶カテキン、イチョウ葉エキス、各種ハーブ類、イソフラボン等のフラボノイド類、葉酸、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類、トコフェロール、グルコサミン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、コラーゲン、フコイダン、キチン、キトサン、ブルーベリー、ルテイン、アスタキサンチン等、それにＤＨＡ，ＥＰＡなどのオメガ−３系脂肪酸、共役脂肪酸（ＣＬＡ）などが挙げられる。これらの中で、アガリクスは顕著な抗がん作用を示すことが知られている。また、コエンザイムＱ１０は、人体細胞中でも生成して人体の“元気の素”と呼ばれる物質であり、健康、美容、体力増進の補助剤として多くの商品が販売されている。
【００２１】
一般に医薬品は、食品と異なり不都合な副作用を伴っている。例えば、アドレアマイシン、シスプラチン、タキソール等の抗がん剤は、優れた殺がん細胞効果を示すので広くがんの治療に用いられている。しかしながら、効果を高めるために使用量を増すと、脱毛、吐き気などの副作用が強くなり、治療の障害となっている。本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材により、これら医薬品の効能を高めると、医薬品の使用量を低下させ、副作用のレベルも大幅に低減化することができる。その結果、患者の生活の質（Ｑuality of Ｌife)を著しく高めることができる点も、本発明の優れた効果である。
【００２２】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材によれば、人体に有用なリン脂質組成物と機能性物質の生理活性機能の相乗効果により、極めて生理活性機能の高い機能性食品を提供することができる。
特に、機能性物質がアガリクスである場合、その効果は著しく、リン脂質組成物又は機能性物質の単体のいずれより高い生理活性機能を発現することができる。
【００２３】
次に、本発明のさらに別の機能性素材として、オメガ−３結合リン脂質からなるリポソームに機能性物質を内包させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材について説明する。
図１は、本発明の別の有用リン脂質組成物を含む機能性素材の構造を模式的に示すものである。図において、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材１は、有用リン脂質からなるリポソーム２内に、機能性食品素材や医薬品素材の有効成分からなる機能性物質３が内包されている。機能性物質を内包するリポソーム２は、有用リン脂質が水中で乳化凝集して微粒子を形成している。このリポソーム２の粒径はリポソーム化条件によって異なり、通常１０μｍ以下であり、より好ましくは１μｍ以下である。
ここで、有用リン脂質及び機能性物質としては、上記の機能性素材と同様の材料を好適に用いることができる。さらに、有用リン脂質としては、オメガが結合し、リポソーム効果を有するリン脂質の修飾又は誘導体であってもよい。このような、脂質としては、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）のような糖脂質であってもよい。
なお、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材１を、適宜、機能性物質３を内包するリポソーム製剤１又は単にリポソーム製剤１とも呼ぶ。
【００２４】
上記リポソームは、有用リン脂質よりなる二分子膜を形成し、その内部に水相を有する閉鎖小胞のことである。水と油など混じり合わない二液の一方が細粒となって他方の相に分散する系、乳化（エマルジョン）とは異なる。通常の乳化は界面活性剤などを用いてエマルジョンの安定化がなされている。有用リン脂質自体も界面活性剤の作用はあるが、本発明ではリポソームの二分子膜等として使用している。リポソームの形態としては、多膜リポソーム（０．１〜数μｍ) と一枚膜リポソーム（０．０１〜数μｍ）が知られている。前者には、多重層リポソーム（ＭＬＶ）、数枚膜リポソーム（ＯＬＶ）、多相リポソームがあり、後者には小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）、大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ）、それに巨大一枚膜リポソーム（ＧＵＶ）がある。内部水相乃至二重膜相に機能性物質を必要量保持できさえすれば、そのいずれでも良いが、好ましくは一枚膜リポソームである。
ここで、リポソームの調製・製造方法としては、vortexing 法、sonication法、reverse-phase evaporation 法、などを用いることができる（非特許文献４参照）。大量生産法としては、多価アルコール法、加温法、噴霧乾燥法、メカノケミカル法などでもよい。
【００２５】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材においては、有用リン脂質からなるリポソーム形成の際に、リポソーム内に機能性物質３を内包させることで製造することができる。この場合、機能性物質は、リポソームの内部に１〜９０重量％、好ましくは、２０〜７０重量％添加されることが好ましい。
【００２６】
本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材によれば、図１に示すように、有用リン脂質でリポソーム２を形成し、その内部に機能性物質３を内包させているので、種々の生物学的利用能を向上させる機能性物質を内包する有用リン脂質のリポソームからなる機能性素材１を提供することができる。したがって、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材に用いる場合には、機能性物質を単独で投与する以上の生理機能を発揮させることができる。
この場合、有用リン脂質は、単独でも多くの生理活性があることが知られており、良好な界面活性剤でもある。したがって、有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部に機能性素材を内包させた機能性素材は、その他の特別な界面活性剤などの添加物を使用せずに分散化できる。このため、有用リン脂質を水に添加して、リン脂質の脂質二重膜を形成する処理を施すことにより、リポソーム２を効率良く形成することができる。
【００２７】
さらに、有用リン脂質は、例えば、肝機能改善、血圧降下、抗アレルギー、記憶力などの学習機能向上、制がんなどの生理活性があるので、機能性物質３の有効成分と有用リン脂質中の生理活性成分との相乗効果によっても、全体としての生理機能を向上させることができる。
【００２８】
ここで、生理活性機能を向上させる機構としては、小腸における吸収性を高めたり、腸内や体内での機能性物質の分解を抑えたり、徐放性による血中濃度の維持、生体膜と類似構造であることから細胞との相互作用を促進したりすることに起因すると考えられる。また、生体の特定部位（疾患のターゲット部位）に機能性物質を、濃度高く集積したりできるものと推定される。さらに、腸管のパイエル板の免疫細胞の活性化や、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質で作成したリポソームが、がん細胞の増殖抑制効果がある場合や、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質そのものの他の生理機能との相乗効果などのいずれか、又はその複合効果などの種々の要因が考えられるが、詳細は不明である。
【００２９】
次に、本発明の有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部に機能性素材を内包させた有用リン脂質組成物を含む機能性素材の製造方法を説明する。
有用リン脂質組成物と所定の機能性物質との混合物を、水中で乳化することによって、機能性物質を内包するリポソーム製剤を調製することができる。この乳化は、水、有用リン脂質組成物及び機能性物質を強力に撹拌し、又は、微細孔を通して噴射することによって行なうことができる。特に、機能性物質が親水性である場合には、機能性物質がリポソームのリン脂質二重膜内部に取り込まれて、均一な乳液となり易い（図１参照）。さらに、機能性物質が親油性である場合には、その一部又は全部がリポソーム内部のリン脂質二重膜の層間に挟まれて、リン脂質の内部に保持、即ち内包される。乳化により形成されるリポソームの粒径は、１０μｍ以下である。粒径が小さいほど水性媒体中でリポソームは安定であり、また有用リン脂質中のリン酸部分にエステル結合する化学物質として、５重量％以上のセリンが含まれる場合、安定性は向上する。またリポソーム化の方法によって粒径分布は、適宜調製することができる。粒径および粒径分布は用途に応じて適宜設計すればよい。
【００３０】
有用リン脂質としては、イクラなどの魚卵、カツオ、マグロなどの解体加工屑や生殖巣、イカ、ヒトデや、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物等の水産生物由来の油分から抽出し、精製したオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を用いることができる。
【００３１】
上記製造方法によれば、本発明の有用リン脂質自体をリポソーム化し、その内部又はリン脂質二重膜間に機能性素材を内包させた、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を効率良く製造することができる。
【実施例１】
【００３２】
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１として、有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材を製造した。
具体的には、へキサンに溶解したイカミール由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質をナス型フラスコに入れ、窒素ガス気流下にて、その側壁にリン脂質が薄膜を形成するようにして乾固させ、さらに、減圧下で放置して溶媒を完全に留去して乾固物を得た。この乾固物０．４ｇを、純水１０００ｃｍ3 に分散させた。一方、アガリクス（健康科学株式会社製、AICPLUS ）の水抽出エキス凍結乾燥粉末１ｇを純水１０００ｃｍ3 に溶解させた。
次に、上記乾固物の水分散液とアガリクス水溶液とを等量混合し、実施例１の機能性素材を調製した。
【実施例２】
【００３３】
実施例２として、リポソーム２の原料としてイカ由来のＤＨＡ結合リン脂質を用い、機能性物質３としてアガリクス（健康科学株式会社製、AICPLUS ）を用い、機能性物質を内包するリポソーム製剤１を調製した。
イカ由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質によるリポソームに、アガリクスを下記の手順により内包させた。
最初に、実施例１と同様の手順で、オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質の乾固物を得た。
次に、アガリクスエキス凍結乾燥粉末０．５ｇを純水１０００ｃｍ3 に溶かし、さらに、上記乾固物０．２ｇを加え、ボルテックスミキサーで２０分間攪拌して、リポソーム化を行なった。
次に、孔径０．４μｍのメンブランフィルターに２０回通し、サイジング及び除菌を行ない、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１を調製した。実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１において、その乳化液１ｃｍ3 当りのＤＨＡ（オメガ−３）リン脂質含有量は、０．２ｍｇ／ｃｍ3 であり、乳化液１ｃｍ3 当たりのアガリクス含有量は、０．５ｍｇであった。ここで、リポソームに電荷を持たせて安定化させる場合には、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びコレステロールを乾固物の調製時に適宜加えればよい。
【００３４】
次に、比較例について説明する。
（比較例１）
アガリクスを配合しない以外は実施例２と同様の操作で、比較例１のイカ由来のオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を調製した。比較例１のリポソーム製剤１において、乳化液１ｃｍ3 当たりのＤＨＡを主成分とするオメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質の含有量は、０．２ｍｇ／ｃｍ3 である。
【００３５】
（比較例２）
アガリクス単体を比較例２とした。
【００３６】
次に、実施例１，２及び比較例１，２で調製した各組成物の効果について説明する。
各組成物を水に混ぜてマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）に飲料として自由摂取させ、マウスに接種したがん細胞（ＳＰ２ｔｕｍｏｒｓ）に及ぼす影響を調べた。上記飲料は、がん細胞接種後７日目以降毎日与えた。
ここで、試験に使用したマウスは、ＢＡＬＢ／ｃの雄（ｎｕ／ｎｕ）、５週齢で入室馴化飼育後、６週齢から試験を開始した。がん細胞ＳＰ２は、７頭のマウス（試料数ｎ＝７）に、各頭３０万細胞を右脇下に皮下投与した。マウスは、日本クレア製の飼料ＣＥ２で飼育した。また、実施例１，２及び比較例１，２で調製した各組成物の水への添加濃度は０．４ｍｇ／ｃｍ3 とした。
【００３７】
最初に、実施例１と比較例１，２との比較について説明する。
図２は、実施例１及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の大きさを示す。図２において、横軸はがん細胞接種以後の日数を、縦軸はがん細胞の大きさ（ｍｍ3 ）を示す。図には、実施例１及び比較例１，２に対して、比較対照のために上記組成物を何も入れない水を自由摂取させたマウスのデータも合わせて示している（図１の無投与参照）。
図２から明らかなように、２１日目のがん細胞量は、実施例１、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、２ｍｍ3 、４ｍｍ3 、３．５ｍｍ3 、７ｍｍ3 となり、実施例１の場合には、無投与の場合と比較して、約３０％しか増殖しなかった。これから、実施例１の場合には、がん細胞の増殖を抑圧している効果が、顕著に認められた。
【００３８】
図３は、実施例１及び比較例１，２において、２１日目のがん細胞の体重に対する重量％を示した図である。図において、縦軸はがん細胞の重量％を示す。
図３から明らかなように、がん細胞の重量％は、実施例１、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、８％（無投与の約２４％）、２０％、１７％、３３％となり、実施例１の組成物の場合には、がん細胞の重量％は無投与の約２４％であり、がん細胞の増殖を抑圧している効果が顕著に認められた。
【００３９】
次に、実施例２と比較例１，２との比較について説明する。
図４は、実施例２及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の重量を示す図である。図において、横軸はがん細胞接種以後の日数を示し、縦軸はがん細胞の重量（ｇ）を示す。図には、実施例２及び比較例１，２に対して、比較対照のために上記組成物を何も入れない水を自由摂取させたマウスのデータも合わせて示している（図４の無投与参照）。
１９日目のがん細胞量は無投与２０ｇ、リポソームのみ（比較例１）１５ｇ、アガリクスのみ（比較例２）３ｇ、に対して、実施例では１ｇ（無投与の５％）と抑制効果が認められた。
図４から明らかなように、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１を含む水を自由摂取させたマウスは、１９日目からがん細胞の成長が徐々に認められ、３５日目に２７ｇになったが、生存していた。
【００４０】
比較例１のイカ由来のＤＨＡ（オメガ−３）リン脂質リポソームを含む水を自由摂取させたマウスは、１２日目からがん細胞の成長が認められ、１９日目で死亡し、そのときのがん細胞の重量は３０ｇであった。
【００４１】
比較例２のアガリクスを含む水を自由摂取させたマウスは、１３日目からがん細胞の成長が徐々に認められ、３５日目には４０ｇになったが、生存していた。
【００４２】
一方、組成物を何も投与しない無投与の場合には、１２日目からがん細胞の成長が認められ、１９日目で死亡し、そのときのがん細胞の重量は３８ｇであった。
【００４３】
上記実施例２及び比較例によれば、１９日目に死亡した無投与や比較例１に対して、比較例２、実施例２の順に、がん細胞の成長が遅くなり、明瞭にがん細胞成長抑制効果が認められた。さらに、実施例２のアガリクスを内包するリポソーム製剤１の場合には、比較例２のアガリクス単独投与の場合よりもさらに、がん細胞成長抑制効果が認められた。また、比較例１のイカ由来のＤＨＡ（オメガ−３）結合リン脂質リポソームのみからなる組成物の場合には、無投与の場合に比較して、がん細胞の成長が遅いことが分かった。
【実施例３】
【００４４】
実施例３として、機能性物質３としてコエンザイムＱ１０（日清ファルマ製）を用いた以外は、実施例２と同様にして、機能性物質を内包するリポソーム製剤１を調製した。
全量で２５ｍｇの実施例３の機能性素材を分散させた飲料（１００ｃｍ3 ）を健常人男性３名に飲ませた。
比較例として、健常人３名に、ノイキノン１０ｍｇ錠（エーザイ株式会社製のコエンザイムＱ１０製剤）１０錠を単回経口投与した。この場合のコエンザイムＱ１０の投与量は１００ｍｇである。両群より経時的に採血して、血漿注のコエンザイムＱ１０濃度を測定した。実施例３群および比較例群とも血漿中のコエンザイムＱ１０濃度の経時変化カーブはほぼ同一であった。両群ともに投与６時間後に最高血漿中濃度（０．５５−０．７０μｇ／ｃｍ3 ）に達し、以後緩やかに減少した。
以上により、実施例３のコエンザイムＱ１０を有用リン脂質に内包させた機能性素材１を含有させた飲料は、市販コエンザイムＱ１０製剤（ノイキノン）の１／４の量で、効率良く体内に取り込まれ、コエンザイムＱ１０の血漿中濃度を高めることができた。
【実施例４】
【００４５】
後述するホタテ由来のリン脂質を用いた以外は実施例２と同様にして、実施例４の有用リン脂質を含む機能性素材１の調製を行った。
【００４６】
上記ホタテ由来のリン脂質は以下のようにして調製した。
出発原料としてホタテウロを用い、実施例４の有用リン脂質組成物を製造した。出発原料のホタテウロの重量は１０００ｋｇであり、一応の水切りはしてあるが特に乾燥していない状態（以下、湿潤基準と呼ぶ）である。その内訳は、固形分２３重量％で、水分が７７０ｋｇである。この固形分中の蛋白質は、ホタテウロの場合には約１３．５％程度である。
最初に、出発原料を連続的に投入し、第１の蒸煮工程及び第２の固液分離工程を連続して行なった。具体的には、出発原料１に水２０００リットルを加え、スチームジャケット加熱式連続蒸煮管で、９５〜１００℃、２０分の滞留時間で加熱煮沸した。
【００４７】
続いて、第２の固液分離工程として、連続式遠心分離機に通し、２０００Ｇの回転を掛け、固形物及び液相を得た。この液相は、廃棄物として回収した。この工程で得た固形物の重量は４７０ｋｇあり、カールフィッシャー測定により含水量は６１．７重量％であった。
【００４８】
有機溶剤抽出工程として、上記固形物のうち１００ｋｇ（乾燥固形分約３８ｋｇ）を、ステンレススティール製の円筒状抽出装置（直径０．５ｍ、高さ１．５ｍ、容量２００リットル）に充填し、９５％エタノール３００リットルを流通速度１００リットル／時で流通して抽出操作を行なった。最後に、空気で残留液相を押出して、これも有機溶剤抽出液に加え、約４００リットルの有機溶剤抽出液を得た。このときに得られた抽出残渣固形物は、３５ｋｇであった。
【００４９】
第４工程として、約４００リットルの有機溶剤抽出液を、５０℃、６５０ｍｍＨｇ（約、８．７×１０4 Ｐａ）で減圧蒸留して有機溶剤を除去回収した。ここで得られた抽出液は、褐色粘ちょうな液体で、その重量は１５．５ｋｇであった。
【００５０】
第５工程として、上記抽出液を直径５０ｃｍ、高さ１．５ｍのステンレススティール製クロマトカラムに通した。クロマトカラム中には、シリカゲルを充填してある。粒径２５０〜５００μｍのシリカゲル（ヒシゲル、洞海化学製）を用いた。分離には９５重量％エタノールで展開した。流出液相のうち、濃黒褐色の初期画分を分離廃棄し、その後淡褐色になった流出液相を目的画分として回収した。
【００５１】
次に、第６工程として、上記精製液から、第４工程と同条件でエタノールを蒸留除去すると、有用リン脂質組成物として油相７．８ｋｇを得た。この有用リン脂質組成物は、黒褐色の外観とオイル状の性状とを呈していた。
【００５２】
実施例１及び２と同様に、マウスへの飲料水添加試験を行なった。その結果、１９日目のがん細胞量は、実施例４、比較例１、比較例２、無投与の場合、それぞれ、１．２ｇ、３０ｇ、４ｇ、３９ｇとなった。実施例４の場合には、がん細胞量は無投与の３％と非常に小さく、高いがん細胞抑圧効果を示した。
【００５３】
上記実施例１〜４及び比較例１、２から、本発明の有用リン脂質組成物を含む機能性素材は、高いがん細胞抑圧効果を示すことが判明した。
【００５４】
本発明は、上記実施例に限定されることなく、特許請求の範囲に記載した発明の範囲内で種々の変形が可能であり、それらも本発明の範囲内に含まれることはいうまでもない。例えば、上記機能性物質を内包するリポソーム製剤の製造工程におけるｐＨや、クロマト法による精製工程のクロマトカラムなどは、適宜に設計でき、また、魚介類の部位は、上記実施例のホタテやイカ由来に限らないことはいうまでもない。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】本発明の別の機能性素材の構造を模式的に示す図である。
【図２】実施例１及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の大きさを示す図である。
【図３】実施例１及び比較例１，２において、２１日目のがん細胞の体重に対する重量％を示した図である。
【図４】実施例２及び比較例１，２の組成物を含む水を自由摂取させたときの、マウスに接種したがん細胞の重量を示す図である。
【符号の説明】
【００５６】
１：機能性物質を内包するリポソーム製剤（リポソーム製剤）
２：有用リン脂質からなるリポソーム
３：機能性物質
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としたことを特徴とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項２】
オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物からなるリポソームと、機能性物質と、から成り、
上記機能性物質を、上記リポソーム内に内包したことを特徴とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項３】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が、リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上がＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及び／又はＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項４】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が、エステル交換によってオメガ−３高度不飽和脂肪酸含有量を高めた有用リン脂質組成物であることを特徴とする、請求項３に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項５】
前記機能性物質が機能性食品素材であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項６】
前記機能性物質が医薬品素材であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項７】
前記機能性物質が、アガリクスであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項８】
前記機能性物質が、コエンザイムＱ１０であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項９】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が水産生物由来であり、該水産生物が、魚卵、水産動物の生殖巣、イカ、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物の何れかであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れかに記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材を、添加したことを特徴とする、機能性食品。
【請求項１１】
前記機能性食品が、飲料であることを特徴とする、請求項１０に記載の機能性食品。
【請求項１】
オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物と機能性物質とを有効成分としたことを特徴とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項２】
オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質を含む有用リン脂質組成物からなるリポソームと、機能性物質と、から成り、
上記機能性物質を、上記リポソーム内に内包したことを特徴とする、有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項３】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が、リン脂質中にエステル結合する脂肪酸の１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上がＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）及び／又はＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項４】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が、エステル交換によってオメガ−３高度不飽和脂肪酸含有量を高めた有用リン脂質組成物であることを特徴とする、請求項３に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項５】
前記機能性物質が機能性食品素材であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項６】
前記機能性物質が医薬品素材であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項７】
前記機能性物質が、アガリクスであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項８】
前記機能性物質が、コエンザイムＱ１０であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項９】
前記オメガ−３高度不飽和脂肪酸結合リン脂質が水産生物由来であり、該水産生物が、魚卵、水産動物の生殖巣、イカ、ホタテ貝、ヒトデ、海藻、微生物の何れかであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れかに記載の有用リン脂質組成物を含む機能性素材を、添加したことを特徴とする、機能性食品。
【請求項１１】
前記機能性食品が、飲料であることを特徴とする、請求項１０に記載の機能性食品。
【図２】
【図３】
【図４】
【図１】
【図３】
【図４】
【図１】
【公開番号】特開２００７−１１０９０４（Ｐ２００７−１１０９０４Ａ）
【公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３０２３３９（Ｐ２００５−３０２３３９）
【出願日】平成１７年１０月１７日（２００５．１０．１７）
【出願人】（３９３０１７５３５）コスモ食品株式会社 (18)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月１７日（２００５．１０．１７）
【出願人】（３９３０１７５３５）コスモ食品株式会社 (18)
【Ｆターム（参考）】
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