林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法
【課題】 一種の林下人参と栽培人参の微量化学鑑別方法を提供する。
【解決手段】 まず、サンプル人参の中のボラタイルオイル成分を抽出し、ＧＣ−ＭＳ分析を行い、サンプルの指紋図譜を得て、その中から８〜９のピークを選び相似度計算を行い、計算値と標準相似度の値とを比較して、サンプルが林下人参であるかまたは栽培人参であるかを識別する。
【解決手段】 まず、サンプル人参の中のボラタイルオイル成分を抽出し、ＧＣ−ＭＳ分析を行い、サンプルの指紋図譜を得て、その中から８〜９のピークを選び相似度計算を行い、計算値と標準相似度の値とを比較して、サンプルが林下人参であるかまたは栽培人参であるかを識別する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は漢方薬技術分野に属して、具体的には林下山参（Ｗｏｏｄｓ ｇｒｏｗｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ）或いは栽培人参の微量化学鑑別方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
人参Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙ．は、五加科多年生植物であり、その乾燥した根は漢方薬になることができる。
【０００３】
漢方薬材料商品の市場では、人参は野生人参、林下山参、栽培人参（園参とも言う）に分けられているが、植物学では三者は同一の種源である。
【０００４】
「野生人参」は、「野山参」とも言われ、山奥の密林で自然的に生まれ、天然的な気候条件、土壌、勾配、森林密度、水分及び自然の随伴生長植物などの環境で生きて、いかなる人為的要素の妨害もなく、一定の生長年限を経て生きてきた人参は、国家の珍しい絶滅危惧植物である。『中国白書』の第一集では、野生人参を国家の一類保護物種にランクして、通常は商品として採集し流通することは許されていない。
【０００５】
「林下山参」は、「林下人参」又は「山参」とも言われ、破壊されていない自然森林生態環境条件で、人工的に山奥に播種し、野生状態で自然に生きてきたものである。生長期間は通常１５−２０年以上で、「種子海」人参とも言われる。このように天然の広葉林と針広葉混林の林下の肥沃な土壌及び温度、光、水資源を利用して、種を播種し人参を育てることは、山参の野生環境を模擬する半野生栽培方式であり、野生人参の品質と接近する人参を育てる可能性がある。野生人参が日増しに乏しくなって、絶滅危惧になる状況では、このような野生栽培を模倣する林下山参は、国内外の人参市場で一致した好評を受けられている。
【０００６】
「栽培人参」は、「園参」とも言われ、樹林が伐採された林間の適宜な山地で、人工的に栽培され、５−６年に育てた後に採集する人参である。
【０００７】
「林下人参」と「栽培人参」（「園参」）はすべて『中華人民共和国薬典』（２００５年版、第一部）の中に収録されている。２００６年５月２４日、中華人民共和国薬典委員会は、原の『中華人民共和国薬典』（２００５年版、第一部）の中の「林下人参」を「林下山参」に改訂した。
【０００８】
人参は、その生長年限と生長環境により、内在の有効的な活性物質が異なる。疾病の予防と治療及び医療保健の中では、野生人参と林下人参（林下山参）の品質と治療効果が著しく栽培人参（園参）より優れている。しかし、長期にわたり、人参の真偽及び優劣の鑑別には、主として人参の外見性状特徴と人参の組織粉末特徴を鑑別根拠にしていて、含有量の測定にしても栽培人参の基準達成の標準のみである。外見性状鑑別特徴とは、芦（芦頭）［Ｇｉｎｓｅｎｇ Ｒｈｉｚｏｍｅ］、▲てい▼（芦から生長した不定根）、体（主根）、紋（主根の肩部又は上の１／３部の環状紋）、須（支根から生長した細い根）など五形という形状特徴を経験鑑別根拠とすることである。しかし、外見性状特徴は、人参の内在品質を確かで全面的に反映することができない。外見性状特徴が人参の真偽及び優劣を鑑別する根拠であることを過当に強調し誇張したため、市場の混乱と消費者権益の損失になっていた。
【０００９】
人参の揮発油は、特有の香りを有する化学成分であり、１９３９年から報道があったが、より大量の研究報道は２０世紀６０年代からである。人参の揮発油に含まれる化学成分はとても複雑で、その中から分析されたものはもう２００種以上あり、化学構成によって下記の通り分類されている。
【００１０】
（１）テルペン類：モノテルペン類化合物（例えばα−ピネン、β−ピネン、ジヒドロカルボン、カルボン、カンフェン等）、セスキテルペン類成分（例えばリニアチェーン・セスキテルペン・ネロリドール、ｃｉｓ−ファルネセン、ｔｒａｎｓ−ファルネセン等）、単環セスキテルペン（例えばβ−ビサボレン、α−エレメン、β−エレメン等）、双環セスキテルペン（例えばα−セリネン、β−セリネン、β−カリオフィレン、β−サンタロール等）及び、人参の中の特徴性を有する双環セスキテルペンの一種のヒドロゲン・アズレン類化合物を含む。上記ヒドロゲン・アズレン類成分はアズレン類化合物の原始形式の一つであり、双環セスキテルペンが人参の揮発油における特有の形式である。
【００１１】
（２）脂肪族：アルカン、アルケン、アルキン、アルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、酸類、エステル等を含む。
【００１２】
（３）芳香族：例えばエチル・ベンゼン、ｔｅｒｔ−ブチルベンゼン、１，２−ジメチルベンゼン、ナフタリン、アルドール・ナフチルアミン等。
【００１３】
（４）複素環化合物：２−アミルフラン、５−メチル−２−フルフラルフラン、ベンゾ・フラン、テトラメチル・ピラジン、１，２−ジメチル・アントラキノン等。
【００１４】
人参の揮発油における各類の化学成分の数量及び含有量は、人参の栽培年限、産地及び採取部位により一定の差異があるので、これは化学手段で異なる種類の人参を鑑別することに根拠と可能性を提供してきた。
【００１５】
今、国家が公布した２０００年版又は２００５年版の『中華人民共和国薬典』には、皆揮発油成分で検査測定と鑑別の手段を人参の検査測定方法として記載されていない。
【００１６】
漢方薬クロマトグラム・フィンガー・プリント図譜（指紋図譜）は、漢方薬の含有する化学成分の全体表現であり、漢方薬材料の複雑混合体系における各種類の異なる化学成分の濃度分布の全体状況を表すことができ、構成要素濃度の変化・消長を反映することができて、総合的、全体的な鑑定手段になっている。フィンガー・プリント図譜に対して相似性の計算を行うことにより、１個又は２個のサンプルが化学成分全体上での差異性を表すことができて、フィンガー・プリント図譜の相似性を利用して、薬材料の真偽、優劣を鑑別し、薬材料の品質の均一性と安定性を評価することができる。
【００１７】
フィンガー・プリント図譜相似性の計算とは、量化の過程を通じて、各フィンガー・プリント図譜上の相互対応するプリント・ピークの異同を比較し、各フィンガー・プリント図譜の間の相似度を計算することである。それは下記二つの手順を含んでいる。
【００１８】
（１）フィンガー・プリント図譜情報のデータ化（プリント・ピーク測量パラメータ、例えばピーク面積、ピーク高等）
早期のフィンガー・プリント図譜の研究の中で、データ化の過程は、クロマトグラムの中の主要クロマトグラム・ピークのピーク高又はピーク面積を抽出して当該クロマトグラムの特徴を表すことにより実現されたが、このような方法はただ一部のクロマトグラム特徴でクロマトグラム・フィンガー・プリント図譜全体を表すので、いくつかの情報が紛失になり、最後ではフィンガー・プリント図譜の鑑別感度が降下させる。
【００１９】
現代のスペクトル或はクロマトグラムの分析器具により測定した図譜は、全てバイナリーでコンピュータに保存されたデータ組であり、このような一組のデータは１つのベクトルと称され、図譜全体のホログラフィー情報を表している。このようなベクトルで相似性度量を行った結果、化学サンプルの完備したクロマトグラム・フィンガー・プリント図譜の相似性が反映される。いかなる化学サンプルに対しても、１つのベクトルで表示できるので、化学サンプルの間の相似度は、２つのベクトルの間の相似性で度量を行うことができる。
【００２０】
（２）フィンガー・プリント図譜の間の相似度の計算
フィンガー・プリント図譜の相似度は、一個又は数個のフィンガー・ピークで比較し計算をすることができ、また、フィンガー・プリント図譜における全てのフィンガー・ピークで比較し計算をすることもできる。漢方薬の化学構成の全体波動状況を全面的に度量をするため、普通は上記第２種の計算方法を採用する。スペクトル或はクロマトグラムの分析器具により測定した図譜はバイナリーで保存されたデータ組であるため、１つのベクトルとして、下記の公式でその相似度計算を行うことができる。
【００２１】
（数１）
関連係数計算法：
【００２２】
その中、
と
はそれぞれ両組のクロマトグラム・データの平均値を示し、ｘｉ，ｙｉは両組のクロマトグラム・データの対応点を示して、求められた関連係数はＳ∈［０，１］、この方法により両組のデータの相似程度を判断する。この方法により算出した相似度は、二つの化学サンプルの全体図譜の相似性を反映している。
【００２３】
ガス・クロマトグラフィー（ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ＧＣ）は一種の気体を流動相にしたクロマトグラフィーである。サンプルの中の各構成要素の固定相とキャリアガスにおける不同一の配分係数により分離を実現し、分離効能が高く、選択性がよく、分析速度が速く、応用が広いなどの利点があり、特に植物薬の揮発油成分及びその他の揮発性成分、又は揮発性成分に転換可能な成分の測定に最適である。
【００２４】
気相クロマトグラム・マス・スペクトロメトリー技術（ＧＣ−ＭＳ）は、マス・スペクトログラフを検出器としてＧＣと併用する技術である。この併用技術は、クロマトグラムの分離過程中で、各流出構成要素のマス・スペクトラム・データを同時に記録し、フィンガー・プリント図譜での各ピークの識別と鑑定に分子構造の化学情報を提供する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明が解决しようとする技術課題は、気相クロマトグラム・マス・スペクトロメトリー技術を利用して、人参の揮発油の化学成分を測定しフィンガー・プリント図譜を作成して、林下山参と栽培人参の鑑別に用いる。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は林下山参或いは栽培人参の微量化学の鑑別方法を提供した。
【００２７】
本発明の方法は下記の実験に基づいたものである。
【００２８】
１．試薬溶液の調製方法の確定：試薬溶液調製の抽出溶剤（ノルマル・ヘキサン、エーテル、アセトン）、抽出方法（超音波、冷浸）、抽出時間（３０ｍｉｎ，１ｈｒ，２ｈｒ）、抽出温度（室温、３０℃）及び純化方法（液液抽出）を比較して、下記の方法により試薬溶液を調製することを決めた。
【００２９】
各人参サンプルは、主根、側根及びひげ根という３つの部位に分かられ、それぞれ研磨して粉砕する。各部位の薬材料の粉末を約５０ｍｇを量り、精密に量って、１ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に入れ、０．５ｍｌのノルマル・ヘキサンを加え、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取ってＧＣ−ＭＳ分析を行う。
【００３０】
２．クロマトグラムの条件：クロマトグラム柱が固定し、サンプル注入量（１μＬ，３μＬ）、キャリヤーガス流速（１．０，１．２，１．３，１．５ｍＬ／ｍｉｎ）、温度昇温プログラム（１３温度昇温レベル）などを含むクロマトグラム条件を調整・比較・優良化して、最後に下記の通りクロマトグラム条件を決めた。Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラム温度昇温（表１を参照）。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００３１】
【表１】
【００３２】
上記の実験条件の選択により、本発明の検出条件を決定する。
【００３３】
（１）サンプルの調製
通常の方法により人参の試料を量り、ノルマル・ヘキサンを入れ、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取り、鑑別サンプルとする。
【００３４】
（２）気相クロマトグラムマス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析
気相クロマトグラム条件：Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラム温度昇温。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００３５】
マス・スペクトラム条件：イオン・ソース（ｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ）温度：２００℃。連結口温度：２５０℃。溶剤切断時間：５ｍｉｎ。質量スキャン範囲：ｍ／ｚ ３５〜３８０。スキャン間隔：０．５秒。
【００３６】
上記の条件でサンプルのＧＣ−ＭＳ図譜を検出する。
【００３７】
（３）サンプルの鑑別
手順（２）により取得したサンプルのフィンガー・プリント図譜から、８−９のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を標準相似度値と比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することできる。
【００３８】
林下山参：主根０．８８〜０．９１中間値・モード，０．７７〜０．８８平均値モード。
側根０．７８〜０．９６中間値・モード，０．７８〜０．９６平均値モード。
ひげ根０．８１〜０．９６中間値・モード，０．９０〜０．９２平均値モード。
【００３９】
栽培人参：主根０．３８〜０．５７中間値・モード，０．３６〜０．５４平均値モード。
側根０．２４〜０．５７中間値・モード，０．２４〜０．５８平均値モード。
ひげ根０．２５〜０．６１中間値・モード，０．２４〜０．７１平均値モード。
【発明の効果】
【００４０】
林下山参の主根、側根、ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜でフィンガー・プリント図譜の共有モードを作成し、検出しようとする人参サンプルとこの共有モードとの相似度値を利用して林下山参と栽培人参を区分することができる。
【００４１】
本発明に基づいて、薬材商品とする林下山参と栽培人参の中の揮発油成分を分析し、そして取得したクロマトグラム図全体に対して分析を行って、現行の国家薬典における人参単体サポニンによる通常検出方法とは異なるため、大きい実用価値を有する。
【００４２】
本発明は、通常方法により５０μｇの人参サンプルの中の揮発油成分を抽出して、本発明で設定されたテスト条件によりＧＣ−ＭＳ分析を行い、取得した揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜をベクトルとし、コンピュータ補助の相似性評価システムで処理し、商品薬材となる林下山参と栽培人参の相似度値を算出して、栽培人参と林下山参を鑑別する目的が達成でき、鑑別されるサンプルは人参のいかなる部位であってもよい。
【００４３】
本発明は、微量化学分析方法を利用して貴重な人参薬材を鑑別するので、資源の節約が可能になり、大きい経済効果と社会効果を有する。本発明の方法は、人参粉、林下山参及びその製品の鑑別に応用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
以下、図を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。
【実施例１】
【００４５】
林下山参と栽培人参の鑑別
１、器具と試薬
Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−ＭＳＭＳ−ＱＰ２０１０気相クロマトグラム・マス・スペクトログラフ
Ｃｒｅｓｔ超音波洗浄機（型番：１８７５ＨＴＡＧ）
Ｓｐｅｃｔｒａｆｕｇｅ １６Ｍ遠心機
ノルマル・ヘキサン：Ｌａｂ−Ｓｃａｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，残留農薬レベル
【００４６】
２、サンプルの出所
本発明で使用する人参及び林下山参のサンプルは、全て吉林省の各地から調達したものである。（表２を参照）
【００４７】
【表２】
【００４８】
３、実験用サンプルの調製
各人参のサンプルは、主根、側根及びひげ根の３部位に分けられ、それぞれ研磨して粉砕する。各部位の薬材粉末を約５０ｍｇ量り、精密に量って、１ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に入れ、０．５ｍｌのノルマル・ヘキサン（ｎ−Ｈｅｘａｎｅ）を加え、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取ってＧＣ−ＭＳ分析を行う。
【００４９】
４、実験条件
４．１） クロマトグラム（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ）条件：Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラムに従って昇温（表１を参照）。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００５０】
４．２）マス・スペクトラム（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）条件
イオン・ソース温度：２００℃。連結口温度：２５０℃。溶剤切断時間：５ｍｉｎ。質量スキャン範囲：ｍ／ｚ ３５〜３８０。スキャン間隔：０．５秒。
【００５１】
５．クロマトグラム
上記の実験条件で取得した林下山参の主根の揮発油のＧＣ−ＭＳクロマトグラムは、図１を参照する。
林下山参の主根の揮発油の主要成分は、表３を参照する。
栽培人参の主根の揮発油のＧＣ−ＭＳクロマトグラムは、図２を参照する。
栽培人参の主根の揮発油の主要成分は、表４を参照する。
【００５２】
【表３】
【００５３】
【表４】
【００５４】
図の示すように、人参の揮発油の中の化学成分はとても複雑で、特に低沸点と高沸点の成分は数量が多くて、含有量も高い。その中、高沸点部分のポリイン・アルコール類（保留時間５０ｍｉｎ程度）は、各サンプルにおける含有量が最も高い。
【００５５】
本発明は、上記実験条件で５ロットの林下山参のサンプル及び５ロットの栽培人参のサンプルを検出した。その中、３ロットの林下山参のＧＣ−ＭＳ図譜は、図３、図４、図５、図６、図７、図８を参照し、２ロットの栽培人参のＧＣ−ＭＳ図譜は、図９、図１０、図１１、図１２、図１３、図１４を参照する。
【００５６】
上記測定により、同一の人参サンプルでも、異なる部位によって揮発油の成分は数量、含有量が大きい差異があることを表明した。この差異は異なる人参サンプルの同一部位の差異より大きい。接近しているサンプルは、同一部位の揮発油成分がより合致し、相似程度も高いので、同一部位間の揮発油成分は比較可能性を有することを表明している。異なる林下山参及び栽培人参の同一部位の揮発油成分を比較することによって、部位による差異が排除され、サンプル自体の差異が現れる。
【００５７】
上記実験で取得した３ロットの林下山参の主根、側根及びひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜で、平均値法及び中間値法により、それぞれ林下山参の主根、側根及びひげ根の共有ＧＣ−ＭＳモードを形成する。当共有モードを標準にし、２ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参の当該共有モードとの相似度を計算し、その結果は下記の通りである。
【００５８】
１．林下山参主根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００５９】
１．１）林下山参主根の共有モードの形成
【００６０】
サンプル：４，５，６番のサンプル、即ち、１１年生、１５年生、１８年生の林下山参
【００６１】
データの前処理：３ロットの林下山参のＧＣ−ＭＳ図譜から８つのピークを選定する。（図１５には数字で表記）ピーク選定の原則は下記の通りである。
【００６２】
１．１．１） ＧＣ−ＭＳ図譜で応答値の高くて主要なピークを選定する。これらのピークは識別しやすいため、校正にもやすくなる。
【００６３】
１．１．２ 選定されるピークは、すべてのサンプルにも共有で、こうすることで図譜ごとに校正することが可能になる。
【００６４】
１．１．３） 選定されたクロマトグラムピークは、クロマトグラム図に均一に分布されるものとする。当ソフトウェアは、最小二乗法でクロマトグラムピークの校正を行い、１つのクロマトグラムピークを校正する際に、隣接するクロマトグラムピークは同時に変位するため、クロマトグラム図全体に均一に分布されているピークを選定して校正すると、クロマトグラム図全体が校正される。
【００６５】
フィンガー・プリント図譜・ソフトウェアで時間校正を行われた図譜は図１６を、形成された共有モードは図１７、１８を参照する。
【００６６】
【表３】
【００６７】
１．２） 相似度の計算
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、３ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参（ＧＣ−ＭＳ図譜は図１０を参照）の当共有モードとの相似度を計算して、その結果は表４の通りである。
【００６８】
【表４】
【００６９】
２． 林下山参の側根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００７０】
２．１） 林下山参の側根共有モードの形成
【００７１】
サンプル：４，５，６番のサンプル、即ち、１１年生，１５年生，１８年生の林下山参
【００７２】
データの前処理：３ロットの林下山参の側根ＧＣ−ＭＳ図譜から８つのピークを選定して（図２０に数字で表記するピークを参照）時間校正を行い、校正後の図譜は図１９、２０を、形成された共有モードは図２１、２２を、３ロットの林下山参の組内相似度は表５を参照する。
【００７３】
【表５】
【００７４】
２．２）相似度の計算
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、２ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参の側根のＧＣ−ＭＳ図譜（図２３）の相似度を計算すると、その結果は下記（表６）の通りである。
【００７５】
【表６】
【００７６】
３．林下山参のひげ根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００７７】
３．１）林下山参のひげ根共有モードの形成
【００７８】
サンプル：１１年生，１５年生，１８年生の林下山参。
【００７９】
データの前処理：３ロットの林下山参ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜から９つのピーク（図２４には数字で表記するピークを参照）を選定して時間校正を行い、校正後の図譜は図２４を、形成された共有モードは図２５、２６を、組内相似度は表７を参照する。
【００８０】
【表７】
【００８１】
３．２）相似度の計算
【００８２】
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、林下山参及び栽培人参ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜（図２７）の相似度を計算すると、その結果は下記（表８）の通りである。
【００８３】
【表８】
【００８４】
４．鑑別効果
【００８５】
主根、側根及びひげ根のＧＣ−ＭＳフィンガー・プリント図譜の相似度により、林下山参と栽培人参のサンプルがよく区分される（表９，１０）。
【００８６】
【表９】
【００８７】
【表１０】
【００８８】
林下山参の主根、側根、ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜でフィンガー・プリント図譜の共有モードを形成し、相似度の値により林下山参と栽培人参が区分される。
【実施例２】
【００８９】
人参粉末サンプルの鑑別：サンプル：人参粉末サンプル２件、それぞれＡ、Ｂと表記する。当方法で述べた気相クロマトグラム条件により分析・検出を行い、取得したＧＣ−ＭＳ図譜に対して相似度計算を行う。人参サンプルの主根は、通常サンプル全体重量の７０〜９０％を占めているので、未知サンプルのＧＣ−ＭＳ図譜と林下山参主根のＧＣ−ＭＳ共有モードと比較することによって、相似度計算の結果は下記の通りである。
【表１１】
【００９０】
結果によると、Ａは林下山参、Ｂは栽培人参である。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２】栽培人参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図３】林下山参（１５年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図４】林下山参（１５年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図５】林下山参（１５年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図６】林下山参（１８年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図７】林下山参（１８年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図８】林下山参（１８年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図９】栽培人参（集安市，４年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１０】栽培人参（集安市，４年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１１】栽培人参（集安市，４年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１２】栽培人参（靖宇県，６年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１３】栽培人参（靖宇県，６年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１４】栽培人参（靖宇県，６年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１５】３ロット林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜の時間校正に用いるピークを示す説明図である。
【図１６】校正後３ロット林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１７】３ロット林下山参の主根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図１８】３ロット林下山参の主根の揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図１９】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２０】校正後の３ロット林下山参の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２１】３ロット林下山参の側根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図２２】３ロット林下山参の側根の揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図２３】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２４】校正後の３ロット林下山参のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２５】３ロット林下山参のひげ根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図２６】３ロット林下山参ひげ根揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図２７】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参のひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は漢方薬技術分野に属して、具体的には林下山参（Ｗｏｏｄｓ ｇｒｏｗｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ）或いは栽培人参の微量化学鑑別方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
人参Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙ．は、五加科多年生植物であり、その乾燥した根は漢方薬になることができる。
【０００３】
漢方薬材料商品の市場では、人参は野生人参、林下山参、栽培人参（園参とも言う）に分けられているが、植物学では三者は同一の種源である。
【０００４】
「野生人参」は、「野山参」とも言われ、山奥の密林で自然的に生まれ、天然的な気候条件、土壌、勾配、森林密度、水分及び自然の随伴生長植物などの環境で生きて、いかなる人為的要素の妨害もなく、一定の生長年限を経て生きてきた人参は、国家の珍しい絶滅危惧植物である。『中国白書』の第一集では、野生人参を国家の一類保護物種にランクして、通常は商品として採集し流通することは許されていない。
【０００５】
「林下山参」は、「林下人参」又は「山参」とも言われ、破壊されていない自然森林生態環境条件で、人工的に山奥に播種し、野生状態で自然に生きてきたものである。生長期間は通常１５−２０年以上で、「種子海」人参とも言われる。このように天然の広葉林と針広葉混林の林下の肥沃な土壌及び温度、光、水資源を利用して、種を播種し人参を育てることは、山参の野生環境を模擬する半野生栽培方式であり、野生人参の品質と接近する人参を育てる可能性がある。野生人参が日増しに乏しくなって、絶滅危惧になる状況では、このような野生栽培を模倣する林下山参は、国内外の人参市場で一致した好評を受けられている。
【０００６】
「栽培人参」は、「園参」とも言われ、樹林が伐採された林間の適宜な山地で、人工的に栽培され、５−６年に育てた後に採集する人参である。
【０００７】
「林下人参」と「栽培人参」（「園参」）はすべて『中華人民共和国薬典』（２００５年版、第一部）の中に収録されている。２００６年５月２４日、中華人民共和国薬典委員会は、原の『中華人民共和国薬典』（２００５年版、第一部）の中の「林下人参」を「林下山参」に改訂した。
【０００８】
人参は、その生長年限と生長環境により、内在の有効的な活性物質が異なる。疾病の予防と治療及び医療保健の中では、野生人参と林下人参（林下山参）の品質と治療効果が著しく栽培人参（園参）より優れている。しかし、長期にわたり、人参の真偽及び優劣の鑑別には、主として人参の外見性状特徴と人参の組織粉末特徴を鑑別根拠にしていて、含有量の測定にしても栽培人参の基準達成の標準のみである。外見性状鑑別特徴とは、芦（芦頭）［Ｇｉｎｓｅｎｇ Ｒｈｉｚｏｍｅ］、▲てい▼（芦から生長した不定根）、体（主根）、紋（主根の肩部又は上の１／３部の環状紋）、須（支根から生長した細い根）など五形という形状特徴を経験鑑別根拠とすることである。しかし、外見性状特徴は、人参の内在品質を確かで全面的に反映することができない。外見性状特徴が人参の真偽及び優劣を鑑別する根拠であることを過当に強調し誇張したため、市場の混乱と消費者権益の損失になっていた。
【０００９】
人参の揮発油は、特有の香りを有する化学成分であり、１９３９年から報道があったが、より大量の研究報道は２０世紀６０年代からである。人参の揮発油に含まれる化学成分はとても複雑で、その中から分析されたものはもう２００種以上あり、化学構成によって下記の通り分類されている。
【００１０】
（１）テルペン類：モノテルペン類化合物（例えばα−ピネン、β−ピネン、ジヒドロカルボン、カルボン、カンフェン等）、セスキテルペン類成分（例えばリニアチェーン・セスキテルペン・ネロリドール、ｃｉｓ−ファルネセン、ｔｒａｎｓ−ファルネセン等）、単環セスキテルペン（例えばβ−ビサボレン、α−エレメン、β−エレメン等）、双環セスキテルペン（例えばα−セリネン、β−セリネン、β−カリオフィレン、β−サンタロール等）及び、人参の中の特徴性を有する双環セスキテルペンの一種のヒドロゲン・アズレン類化合物を含む。上記ヒドロゲン・アズレン類成分はアズレン類化合物の原始形式の一つであり、双環セスキテルペンが人参の揮発油における特有の形式である。
【００１１】
（２）脂肪族：アルカン、アルケン、アルキン、アルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、酸類、エステル等を含む。
【００１２】
（３）芳香族：例えばエチル・ベンゼン、ｔｅｒｔ−ブチルベンゼン、１，２−ジメチルベンゼン、ナフタリン、アルドール・ナフチルアミン等。
【００１３】
（４）複素環化合物：２−アミルフラン、５−メチル−２−フルフラルフラン、ベンゾ・フラン、テトラメチル・ピラジン、１，２−ジメチル・アントラキノン等。
【００１４】
人参の揮発油における各類の化学成分の数量及び含有量は、人参の栽培年限、産地及び採取部位により一定の差異があるので、これは化学手段で異なる種類の人参を鑑別することに根拠と可能性を提供してきた。
【００１５】
今、国家が公布した２０００年版又は２００５年版の『中華人民共和国薬典』には、皆揮発油成分で検査測定と鑑別の手段を人参の検査測定方法として記載されていない。
【００１６】
漢方薬クロマトグラム・フィンガー・プリント図譜（指紋図譜）は、漢方薬の含有する化学成分の全体表現であり、漢方薬材料の複雑混合体系における各種類の異なる化学成分の濃度分布の全体状況を表すことができ、構成要素濃度の変化・消長を反映することができて、総合的、全体的な鑑定手段になっている。フィンガー・プリント図譜に対して相似性の計算を行うことにより、１個又は２個のサンプルが化学成分全体上での差異性を表すことができて、フィンガー・プリント図譜の相似性を利用して、薬材料の真偽、優劣を鑑別し、薬材料の品質の均一性と安定性を評価することができる。
【００１７】
フィンガー・プリント図譜相似性の計算とは、量化の過程を通じて、各フィンガー・プリント図譜上の相互対応するプリント・ピークの異同を比較し、各フィンガー・プリント図譜の間の相似度を計算することである。それは下記二つの手順を含んでいる。
【００１８】
（１）フィンガー・プリント図譜情報のデータ化（プリント・ピーク測量パラメータ、例えばピーク面積、ピーク高等）
早期のフィンガー・プリント図譜の研究の中で、データ化の過程は、クロマトグラムの中の主要クロマトグラム・ピークのピーク高又はピーク面積を抽出して当該クロマトグラムの特徴を表すことにより実現されたが、このような方法はただ一部のクロマトグラム特徴でクロマトグラム・フィンガー・プリント図譜全体を表すので、いくつかの情報が紛失になり、最後ではフィンガー・プリント図譜の鑑別感度が降下させる。
【００１９】
現代のスペクトル或はクロマトグラムの分析器具により測定した図譜は、全てバイナリーでコンピュータに保存されたデータ組であり、このような一組のデータは１つのベクトルと称され、図譜全体のホログラフィー情報を表している。このようなベクトルで相似性度量を行った結果、化学サンプルの完備したクロマトグラム・フィンガー・プリント図譜の相似性が反映される。いかなる化学サンプルに対しても、１つのベクトルで表示できるので、化学サンプルの間の相似度は、２つのベクトルの間の相似性で度量を行うことができる。
【００２０】
（２）フィンガー・プリント図譜の間の相似度の計算
フィンガー・プリント図譜の相似度は、一個又は数個のフィンガー・ピークで比較し計算をすることができ、また、フィンガー・プリント図譜における全てのフィンガー・ピークで比較し計算をすることもできる。漢方薬の化学構成の全体波動状況を全面的に度量をするため、普通は上記第２種の計算方法を採用する。スペクトル或はクロマトグラムの分析器具により測定した図譜はバイナリーで保存されたデータ組であるため、１つのベクトルとして、下記の公式でその相似度計算を行うことができる。
【００２１】
（数１）
関連係数計算法：
【００２２】
その中、
と
はそれぞれ両組のクロマトグラム・データの平均値を示し、ｘｉ，ｙｉは両組のクロマトグラム・データの対応点を示して、求められた関連係数はＳ∈［０，１］、この方法により両組のデータの相似程度を判断する。この方法により算出した相似度は、二つの化学サンプルの全体図譜の相似性を反映している。
【００２３】
ガス・クロマトグラフィー（ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ＧＣ）は一種の気体を流動相にしたクロマトグラフィーである。サンプルの中の各構成要素の固定相とキャリアガスにおける不同一の配分係数により分離を実現し、分離効能が高く、選択性がよく、分析速度が速く、応用が広いなどの利点があり、特に植物薬の揮発油成分及びその他の揮発性成分、又は揮発性成分に転換可能な成分の測定に最適である。
【００２４】
気相クロマトグラム・マス・スペクトロメトリー技術（ＧＣ−ＭＳ）は、マス・スペクトログラフを検出器としてＧＣと併用する技術である。この併用技術は、クロマトグラムの分離過程中で、各流出構成要素のマス・スペクトラム・データを同時に記録し、フィンガー・プリント図譜での各ピークの識別と鑑定に分子構造の化学情報を提供する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明が解决しようとする技術課題は、気相クロマトグラム・マス・スペクトロメトリー技術を利用して、人参の揮発油の化学成分を測定しフィンガー・プリント図譜を作成して、林下山参と栽培人参の鑑別に用いる。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は林下山参或いは栽培人参の微量化学の鑑別方法を提供した。
【００２７】
本発明の方法は下記の実験に基づいたものである。
【００２８】
１．試薬溶液の調製方法の確定：試薬溶液調製の抽出溶剤（ノルマル・ヘキサン、エーテル、アセトン）、抽出方法（超音波、冷浸）、抽出時間（３０ｍｉｎ，１ｈｒ，２ｈｒ）、抽出温度（室温、３０℃）及び純化方法（液液抽出）を比較して、下記の方法により試薬溶液を調製することを決めた。
【００２９】
各人参サンプルは、主根、側根及びひげ根という３つの部位に分かられ、それぞれ研磨して粉砕する。各部位の薬材料の粉末を約５０ｍｇを量り、精密に量って、１ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に入れ、０．５ｍｌのノルマル・ヘキサンを加え、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取ってＧＣ−ＭＳ分析を行う。
【００３０】
２．クロマトグラムの条件：クロマトグラム柱が固定し、サンプル注入量（１μＬ，３μＬ）、キャリヤーガス流速（１．０，１．２，１．３，１．５ｍＬ／ｍｉｎ）、温度昇温プログラム（１３温度昇温レベル）などを含むクロマトグラム条件を調整・比較・優良化して、最後に下記の通りクロマトグラム条件を決めた。Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラム温度昇温（表１を参照）。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００３１】
【表１】
【００３２】
上記の実験条件の選択により、本発明の検出条件を決定する。
【００３３】
（１）サンプルの調製
通常の方法により人参の試料を量り、ノルマル・ヘキサンを入れ、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取り、鑑別サンプルとする。
【００３４】
（２）気相クロマトグラムマス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析
気相クロマトグラム条件：Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラム温度昇温。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００３５】
マス・スペクトラム条件：イオン・ソース（ｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ）温度：２００℃。連結口温度：２５０℃。溶剤切断時間：５ｍｉｎ。質量スキャン範囲：ｍ／ｚ ３５〜３８０。スキャン間隔：０．５秒。
【００３６】
上記の条件でサンプルのＧＣ−ＭＳ図譜を検出する。
【００３７】
（３）サンプルの鑑別
手順（２）により取得したサンプルのフィンガー・プリント図譜から、８−９のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を標準相似度値と比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することできる。
【００３８】
林下山参：主根０．８８〜０．９１中間値・モード，０．７７〜０．８８平均値モード。
側根０．７８〜０．９６中間値・モード，０．７８〜０．９６平均値モード。
ひげ根０．８１〜０．９６中間値・モード，０．９０〜０．９２平均値モード。
【００３９】
栽培人参：主根０．３８〜０．５７中間値・モード，０．３６〜０．５４平均値モード。
側根０．２４〜０．５７中間値・モード，０．２４〜０．５８平均値モード。
ひげ根０．２５〜０．６１中間値・モード，０．２４〜０．７１平均値モード。
【発明の効果】
【００４０】
林下山参の主根、側根、ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜でフィンガー・プリント図譜の共有モードを作成し、検出しようとする人参サンプルとこの共有モードとの相似度値を利用して林下山参と栽培人参を区分することができる。
【００４１】
本発明に基づいて、薬材商品とする林下山参と栽培人参の中の揮発油成分を分析し、そして取得したクロマトグラム図全体に対して分析を行って、現行の国家薬典における人参単体サポニンによる通常検出方法とは異なるため、大きい実用価値を有する。
【００４２】
本発明は、通常方法により５０μｇの人参サンプルの中の揮発油成分を抽出して、本発明で設定されたテスト条件によりＧＣ−ＭＳ分析を行い、取得した揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜をベクトルとし、コンピュータ補助の相似性評価システムで処理し、商品薬材となる林下山参と栽培人参の相似度値を算出して、栽培人参と林下山参を鑑別する目的が達成でき、鑑別されるサンプルは人参のいかなる部位であってもよい。
【００４３】
本発明は、微量化学分析方法を利用して貴重な人参薬材を鑑別するので、資源の節約が可能になり、大きい経済効果と社会効果を有する。本発明の方法は、人参粉、林下山参及びその製品の鑑別に応用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
以下、図を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。
【実施例１】
【００４５】
林下山参と栽培人参の鑑別
１、器具と試薬
Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−ＭＳＭＳ−ＱＰ２０１０気相クロマトグラム・マス・スペクトログラフ
Ｃｒｅｓｔ超音波洗浄機（型番：１８７５ＨＴＡＧ）
Ｓｐｅｃｔｒａｆｕｇｅ １６Ｍ遠心機
ノルマル・ヘキサン：Ｌａｂ−Ｓｃａｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，残留農薬レベル
【００４６】
２、サンプルの出所
本発明で使用する人参及び林下山参のサンプルは、全て吉林省の各地から調達したものである。（表２を参照）
【００４７】
【表２】
【００４８】
３、実験用サンプルの調製
各人参のサンプルは、主根、側根及びひげ根の３部位に分けられ、それぞれ研磨して粉砕する。各部位の薬材粉末を約５０ｍｇ量り、精密に量って、１ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に入れ、０．５ｍｌのノルマル・ヘキサン（ｎ−Ｈｅｘａｎｅ）を加え、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取ってＧＣ−ＭＳ分析を行う。
【００４９】
４、実験条件
４．１） クロマトグラム（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ）条件：Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱。柱温度：１００℃。サンプル注入口温度：２７０℃。プログラムに従って昇温（表１を参照）。サンプル注入量：１μＬ。サンプル注入方式：分流，分流比２．０。キャリヤーガス流速：１．３０ｍＬ／ｍｉｎ。
【００５０】
４．２）マス・スペクトラム（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）条件
イオン・ソース温度：２００℃。連結口温度：２５０℃。溶剤切断時間：５ｍｉｎ。質量スキャン範囲：ｍ／ｚ ３５〜３８０。スキャン間隔：０．５秒。
【００５１】
５．クロマトグラム
上記の実験条件で取得した林下山参の主根の揮発油のＧＣ−ＭＳクロマトグラムは、図１を参照する。
林下山参の主根の揮発油の主要成分は、表３を参照する。
栽培人参の主根の揮発油のＧＣ−ＭＳクロマトグラムは、図２を参照する。
栽培人参の主根の揮発油の主要成分は、表４を参照する。
【００５２】
【表３】
【００５３】
【表４】
【００５４】
図の示すように、人参の揮発油の中の化学成分はとても複雑で、特に低沸点と高沸点の成分は数量が多くて、含有量も高い。その中、高沸点部分のポリイン・アルコール類（保留時間５０ｍｉｎ程度）は、各サンプルにおける含有量が最も高い。
【００５５】
本発明は、上記実験条件で５ロットの林下山参のサンプル及び５ロットの栽培人参のサンプルを検出した。その中、３ロットの林下山参のＧＣ−ＭＳ図譜は、図３、図４、図５、図６、図７、図８を参照し、２ロットの栽培人参のＧＣ−ＭＳ図譜は、図９、図１０、図１１、図１２、図１３、図１４を参照する。
【００５６】
上記測定により、同一の人参サンプルでも、異なる部位によって揮発油の成分は数量、含有量が大きい差異があることを表明した。この差異は異なる人参サンプルの同一部位の差異より大きい。接近しているサンプルは、同一部位の揮発油成分がより合致し、相似程度も高いので、同一部位間の揮発油成分は比較可能性を有することを表明している。異なる林下山参及び栽培人参の同一部位の揮発油成分を比較することによって、部位による差異が排除され、サンプル自体の差異が現れる。
【００５７】
上記実験で取得した３ロットの林下山参の主根、側根及びひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜で、平均値法及び中間値法により、それぞれ林下山参の主根、側根及びひげ根の共有ＧＣ−ＭＳモードを形成する。当共有モードを標準にし、２ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参の当該共有モードとの相似度を計算し、その結果は下記の通りである。
【００５８】
１．林下山参主根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００５９】
１．１）林下山参主根の共有モードの形成
【００６０】
サンプル：４，５，６番のサンプル、即ち、１１年生、１５年生、１８年生の林下山参
【００６１】
データの前処理：３ロットの林下山参のＧＣ−ＭＳ図譜から８つのピークを選定する。（図１５には数字で表記）ピーク選定の原則は下記の通りである。
【００６２】
１．１．１） ＧＣ−ＭＳ図譜で応答値の高くて主要なピークを選定する。これらのピークは識別しやすいため、校正にもやすくなる。
【００６３】
１．１．２ 選定されるピークは、すべてのサンプルにも共有で、こうすることで図譜ごとに校正することが可能になる。
【００６４】
１．１．３） 選定されたクロマトグラムピークは、クロマトグラム図に均一に分布されるものとする。当ソフトウェアは、最小二乗法でクロマトグラムピークの校正を行い、１つのクロマトグラムピークを校正する際に、隣接するクロマトグラムピークは同時に変位するため、クロマトグラム図全体に均一に分布されているピークを選定して校正すると、クロマトグラム図全体が校正される。
【００６５】
フィンガー・プリント図譜・ソフトウェアで時間校正を行われた図譜は図１６を、形成された共有モードは図１７、１８を参照する。
【００６６】
【表３】
【００６７】
１．２） 相似度の計算
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、３ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参（ＧＣ−ＭＳ図譜は図１０を参照）の当共有モードとの相似度を計算して、その結果は表４の通りである。
【００６８】
【表４】
【００６９】
２． 林下山参の側根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００７０】
２．１） 林下山参の側根共有モードの形成
【００７１】
サンプル：４，５，６番のサンプル、即ち、１１年生，１５年生，１８年生の林下山参
【００７２】
データの前処理：３ロットの林下山参の側根ＧＣ−ＭＳ図譜から８つのピークを選定して（図２０に数字で表記するピークを参照）時間校正を行い、校正後の図譜は図１９、２０を、形成された共有モードは図２１、２２を、３ロットの林下山参の組内相似度は表５を参照する。
【００７３】
【表５】
【００７４】
２．２）相似度の計算
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、２ロットの林下山参及び５ロットの栽培人参の側根のＧＣ−ＭＳ図譜（図２３）の相似度を計算すると、その結果は下記（表６）の通りである。
【００７５】
【表６】
【００７６】
３．林下山参のひげ根揮発油の共有ＧＣ−ＭＳモード及び相似度の計算
【００７７】
３．１）林下山参のひげ根共有モードの形成
【００７８】
サンプル：１１年生，１５年生，１８年生の林下山参。
【００７９】
データの前処理：３ロットの林下山参ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜から９つのピーク（図２４には数字で表記するピークを参照）を選定して時間校正を行い、校正後の図譜は図２４を、形成された共有モードは図２５、２６を、組内相似度は表７を参照する。
【００８０】
【表７】
【００８１】
３．２）相似度の計算
【００８２】
上記方法で形成された林下山参共有モードを標準にし、林下山参及び栽培人参ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜（図２７）の相似度を計算すると、その結果は下記（表８）の通りである。
【００８３】
【表８】
【００８４】
４．鑑別効果
【００８５】
主根、側根及びひげ根のＧＣ−ＭＳフィンガー・プリント図譜の相似度により、林下山参と栽培人参のサンプルがよく区分される（表９，１０）。
【００８６】
【表９】
【００８７】
【表１０】
【００８８】
林下山参の主根、側根、ひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜でフィンガー・プリント図譜の共有モードを形成し、相似度の値により林下山参と栽培人参が区分される。
【実施例２】
【００８９】
人参粉末サンプルの鑑別：サンプル：人参粉末サンプル２件、それぞれＡ、Ｂと表記する。当方法で述べた気相クロマトグラム条件により分析・検出を行い、取得したＧＣ−ＭＳ図譜に対して相似度計算を行う。人参サンプルの主根は、通常サンプル全体重量の７０〜９０％を占めているので、未知サンプルのＧＣ−ＭＳ図譜と林下山参主根のＧＣ−ＭＳ共有モードと比較することによって、相似度計算の結果は下記の通りである。
【表１１】
【００９０】
結果によると、Ａは林下山参、Ｂは栽培人参である。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２】栽培人参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図３】林下山参（１５年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図４】林下山参（１５年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図５】林下山参（１５年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図６】林下山参（１８年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図７】林下山参（１８年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図８】林下山参（１８年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図９】栽培人参（集安市，４年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１０】栽培人参（集安市，４年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１１】栽培人参（集安市，４年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１２】栽培人参（靖宇県，６年生）の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１３】栽培人参（靖宇県，６年生）の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１４】栽培人参（靖宇県，６年生）のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１５】３ロット林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜の時間校正に用いるピークを示す説明図である。
【図１６】校正後３ロット林下山参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図１７】３ロット林下山参の主根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図１８】３ロット林下山参の主根の揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図１９】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参の主根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２０】校正後の３ロット林下山参の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２１】３ロット林下山参の側根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図２２】３ロット林下山参の側根の揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図２３】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参の側根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２４】校正後の３ロット林下山参のひげ根の揮発油ＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【図２５】３ロット林下山参のひげ根の揮発油共有モード図譜（平均値を取る）を示す説明図である。
【図２６】３ロット林下山参ひげ根揮発油共有モード図譜（中間値を取る）を示す説明図である。
【図２７】校正後の３ロット林下山参及び５ロット栽培人参のひげ根のＧＣ−ＭＳ図譜を示す説明図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法であって、
手順（１）サンプルの調製と、手順（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析と、手順（３）サンプルの鑑別とを含み、
前記（１）サンプルの調製において、通常の方法で人参試料を量り、ノルマル−ヘキサンを入れ、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取って鑑別用サンプルを取得し、
前記（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析において、気相クロマトグラム条件及びマス・スペクトラム条件を用いてサンプルのＧＣ−ＭＳ図譜を検出し、
その中、気相クロマトグラム条件として、Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱と、１００℃の柱温度と、２７０℃のサンプル注入口温度と、プログラムに基づく昇温と、１μＬのサンプル注入量と、分流のサンプル注入方式と、２．０の分流比と、１．３０ｍＬ／ｍｉｎのキャリヤーガス流速を採用し、
また、マス・スペクトラム条件として、２００℃イオン・ソース温度と、２５０℃の連結口温度と、５ｍｉｎの溶剤切断時間と、ｍ／ｚ ３５〜３８０の質量スキャン範囲と、：０．５秒のスキャン間隔を採用し、
前記（３）サンプルの鑑別において、手順（２）で獲得したサンプルのフィンガー・プリント図譜から、８−９のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を標準相似度値と比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することを特徴とする林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項２】
前記標準相似度は、以下の通りからなり、即ち、
林下山参について、主根は、中間値が０．８８〜０．９１であるモード及び平均値が０．７７〜０．８８であるモードを採用し、側根は、中間値が０．７８〜０．９６であるモード及び平均値が０．７８〜０．９６であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が０．８１〜０．９６であるモード及び平均値が０．９０〜０．９２であるモードを採用し、
栽培人参について、主根は、中間値が０．３８〜０．５７であるモード及び平均値が０．３６〜０．５４であるモードを採用し、側根は、中間値が０．２４〜０．５７であるモード及び平均値が０．２４〜０．５８であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が０．２５〜０．６１であるモード及び平均値が０．２４〜０．７１であるモードを採用することを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項３】
前記手順（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラム分析で、気相クロマトグラムの温度昇温プログラムは、まず１００．０℃から１７０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は１．５℃／ｍｉｎ、それから、１７０℃から１９０．０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は８．０℃／ｍｉｎ、最後に、１９０．０℃から２４０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は２．０℃／ｍｉｎとすることを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項４】
前記手順（３）サンプルの鑑別において、前記選定されるピークは図譜の中で応答値が比較的に高い主要なピークであり、且つ、全てのサンプルに共有するピークであることを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項１】
林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法であって、
手順（１）サンプルの調製と、手順（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析と、手順（３）サンプルの鑑別とを含み、
前記（１）サンプルの調製において、通常の方法で人参試料を量り、ノルマル−ヘキサンを入れ、超音波で１時間抽出し、遠心を行い、上澄み液を吸い取って鑑別用サンプルを取得し、
前記（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラムＧＣ−ＭＳ分析において、気相クロマトグラム条件及びマス・スペクトラム条件を用いてサンプルのＧＣ−ＭＳ図譜を検出し、
その中、気相クロマトグラム条件として、Ｄｉｋｍａ ＤＭ−１（３０ｍｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）毛細管柱と、１００℃の柱温度と、２７０℃のサンプル注入口温度と、プログラムに基づく昇温と、１μＬのサンプル注入量と、分流のサンプル注入方式と、２．０の分流比と、１．３０ｍＬ／ｍｉｎのキャリヤーガス流速を採用し、
また、マス・スペクトラム条件として、２００℃イオン・ソース温度と、２５０℃の連結口温度と、５ｍｉｎの溶剤切断時間と、ｍ／ｚ ３５〜３８０の質量スキャン範囲と、：０．５秒のスキャン間隔を採用し、
前記（３）サンプルの鑑別において、手順（２）で獲得したサンプルのフィンガー・プリント図譜から、８−９のピークを選定して相似度の計算を行い、それから当該計算値を標準相似度値と比較することによって、当該サンプルが林下山参であるかまたは栽培人参であるかを鑑別することを特徴とする林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項２】
前記標準相似度は、以下の通りからなり、即ち、
林下山参について、主根は、中間値が０．８８〜０．９１であるモード及び平均値が０．７７〜０．８８であるモードを採用し、側根は、中間値が０．７８〜０．９６であるモード及び平均値が０．７８〜０．９６であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が０．８１〜０．９６であるモード及び平均値が０．９０〜０．９２であるモードを採用し、
栽培人参について、主根は、中間値が０．３８〜０．５７であるモード及び平均値が０．３６〜０．５４であるモードを採用し、側根は、中間値が０．２４〜０．５７であるモード及び平均値が０．２４〜０．５８であるモードを採用し、ひげ根は、中間値が０．２５〜０．６１であるモード及び平均値が０．２４〜０．７１であるモードを採用することを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項３】
前記手順（２）気相クロマトグラム−マス・スペクトラム分析で、気相クロマトグラムの温度昇温プログラムは、まず１００．０℃から１７０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は１．５℃／ｍｉｎ、それから、１７０℃から１９０．０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は８．０℃／ｍｉｎ、最後に、１９０．０℃から２４０℃に温度を昇温させ、温度昇温速度は２．０℃／ｍｉｎとすることを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【請求項４】
前記手順（３）サンプルの鑑別において、前記選定されるピークは図譜の中で応答値が比較的に高い主要なピークであり、且つ、全てのサンプルに共有するピークであることを特徴とする請求項１記載の林下山参と栽培人参の微量化学鑑別方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【公表番号】特表２００９−５１０４０７（Ｐ２００９−５１０４０７Ａ）
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３２５６４（Ｐ２００８−５３２５６４）
【出願日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００６／００２３１９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３６１３２
【国際公開日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【出願人】（５０８０９２６７９）
【出願人】（５０８０９２６８０）
【出願人】（５０８０９２６９１）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００６／００２３１９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３６１３２
【国際公開日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【出願人】（５０８０９２６７９）
【出願人】（５０８０９２６８０）
【出願人】（５０８０９２６９１）
【Ｆターム（参考）】
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