本願は、ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルス（ＷＮＶ）ポリペプチドおよびそのフラグメントに関する多様な組成物、ならびに本明細書に記載のＷＮＶポリペプチドの発現をコード、指令するか、またはＷＮＶポリペプチドを産生するポリヌクレオチド、ベクターおよび形質転換された宿主細胞を提供する。本明細書では、個体における免疫応答を起こすためにポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用する方法、またはＷＮＶ特異的もしくは中和抗体の存在を検出する方法も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ） 配列番号５、９、１１、１３もしくは１５を含んでなる単離された、精製された、および／または組み換えポリペプチド；
ｂ） 配列番号５、９、１１、１３、１５に記載のポリペプチドのフラグメント、または「ＹからＺ」である配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のフラグメントであって、Ｙは指定配列のＮ−末端アミノ酸であり、そしてＺは表９、１０、１１、もしくは１２のいずれか１つに記載の特定の配列のＣ−末端アミノ酸であるフラグメント、または表１５もしくは１６に記載のポリペプチドのフラグメント；
ｃ） 個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；
ｄ） 異種ポリペプチド配列をさらに含んでなる、ａ）、ｂ）またはｃ）に記載のポリペプチド；
ｅ） ａ）、ｂ）、ｃ）またはｄ）に記載の植物由来のポリペプチド；
ｆ） キャリア、およびａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）またはｅ）のいずれか１つに記載のポリペプチドを含んでなる組成物であって、前記キャリアは、緩衝液中に懸濁されていてもよい植物、哺乳動物もしくは細菌発現系由来の細胞材料、アジュバントまたは薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる組成物；
ｇ） 配列番号５、９、１１、１３もしくは１５を含んでなるポリペプチドをコードするか、または（ｂ）または（ｃ）に記載の配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の１つもしくはそれ以上のポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列であって、前記ポリヌクレオチド配列は、少なくとも４０％かつ５０％未満のＧ＋Ｃ含有量または表１３に記載のＧ＋Ｃ含有量を有してもよいポリヌクレオチド配列；
ｈ） 配列番号１に少なくとも７０％（または表１４において特定されるパーセンテージ）同一であり、配列番号２を含んでなるポリペプチドをコードし、そして約４０％〜約５０％の間のＧ＋Ｃ含有量（または表１３において特定される特定のＧ＋Ｃ含有量）を有するポリヌクレオチド配列；
ｉ） （ｇ）または（ｈ）に記載のポリヌクレオチド配列のポリヌクレオチド配列少なくとも８連続ヌクレオチド；
ｊ） 配列番号３、４、６、７、８、１０、１２、もしくは１４、または配列番号３、４、６、７、８、１０、１２、もしくは１４の少なくとも８連続ヌクレオチドのフラグメントを含んでなるポリヌクレオチド配列；
ｋ） （ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、または（ｊ）に記載のポリヌクレオチドに相補的であるポリヌクレオチド；
ｌ）低、中もしくは高ストリンジェンシー下で、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｉ）または（ｋ）に記載のポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするポリヌクレオチド；
ｍ） （ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｉ）または（ｋ）に記載のポリヌクレオチド配列を含んでなる遺伝子構築物；
ｎ） （ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）もしくは（ｌ）に記載のポリヌクレオチドまたは遺伝子構築物を含んでなるベクター；
ｏ） （ｎ）に記載のベクター、（ｍ）に記載の遺伝子構築物、または（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）もしくは（ｋ）のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含んでなる宿主細胞；
ｐ） （ｎ）に記載のベクター、（ｍ）に記載の遺伝子構築物、または（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）もしくは（ｋ）のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含んでなるトランスジェニック植物、植物細胞、または植物部分；あるいは
ｑ） （ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）もしくは（ｌ）に記載のポリヌクレオチド、および任意選択的に、標識またはマーカーを含んでなるプローブ、
を含んでなる、組成物。
【請求項２】
前記ポリペプチドが植物細胞において産生され、
ａ） 前記ポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含んでなる組み換えベクターで植物細胞を形質転換して、形質転換植物細胞を形成すること；
ｂ） 前記ポリペプチドの発現に適切な条件下で前記形質転換植物細胞を培養すること；および
ｃ） 前記形質転換植物細胞から前記ポリペプチドを回収すること
を含んでなる、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
前記ポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントが異種ポリペプチド配列に融合される、請求項２または３に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対して個体を免疫するための方法であって、前記個体において免疫応答を誘導するのに十分な量の組成物を投与することを含んでなり、前記組成物は：キャリア、および（ｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の少なくとも５連続アミノ酸のフラグメント；あるいは（ｉｖ）表９、１０、１１、１２、１５、もしくは１６に記載のフラグメントを含んでなるポリペプチドを含んでなり、前記ポリペプチドもしくはフラグメントは、感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する免疫防御応答または感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスを中和する抗体応答を誘導する、方法。
【請求項５】
前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドフラグメントが異種ポリペプチド配列に融合される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドまたはそのフラグメントが、植物産生ポリペプチドまたは植物産生ポリペプチドフラグメントである、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルス（ＷＮＶ）株に対する免疫応答を誘導する方法であって：（Ａ）：（ｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の少なくとも５連続アミノ酸のフラグメント；あるいは（ｉｖ）表９、１０、１１、１２、１５、もしくは１６に記載のフラグメントを含んでなるポリペプチドをコードする核酸配列（ここで、前記ポリペプチドもしくはフラグメントは、感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する免疫防御応答または感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する中和抗体応答を誘導する）；（Ｂ）：配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の少なくとも５連続アミノ酸のフラグメント；または（ｉｖ）表９、１０、１１、１２、１５、もしくは１６に記載のフラグメントを含んでなるポリペプチドをコードする核酸配列を含んでなるウイルスベクター（ここで、前記ポリペプチドもしくはフラグメントは、感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する免疫防御応答または感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する中和抗体応答を誘導する）；あるいは（Ｃ）：配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の少なくとも５連続アミノ酸のフラグメント；または（ｉｖ）表９、１０、１１、１２、１５、もしくは１６に記載のフラグメントを含んでなる少なくとも１つのポリペプチド（ここで、前記ポリペプチドもしくはフラグメントは、感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する免疫防御応答または感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する中和抗体応答を誘導する）を個体に、前記動物において免疫応答を誘導するのに十分な量で投与することを含んでなる、方法。
【請求項８】
前記方法が、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５の少なくとも５連続アミノ酸のフラグメント；あるいは（ｉｖ）表９、１０、１１、１２、１５、もしくは１６に記載のフラグメントを含んでなるポリペプチドを含んでなる組成物の投与によって、前記動物の免疫応答を追加免疫することをさらに含んでなり、前記ポリペプチドもしくはフラグメントは、感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する免疫防御応答または感染性ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）ウイルスに対する中和抗体応答を誘導する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドのフラグメントが、異種ポリペプチド配列に融合される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリペプチドの前記ポリペプチドまたはフラグメントが植物由来であるか、またはトランスジェニック植物もしくは植物部分から得られる、請求項７、８または９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが原核細胞または真核細胞において調製される、請求項４、５、８または９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗体をポリペプチドに結合させる方法であって、抗体を含有するサンプルと、ａ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５を含んでなる単離された、精製された、および／または組み換えポリペプチド；ｂ）配列番号５、９、１１、１３、１５に記載のポリペプチドのフラグメント、または「ＹからＺ」である配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のフラグメント（ここで、Ｙは指定配列のＮ−末端アミノ酸であり、そしてＺは表９、１０、１１、もしくは１２のいずれか１つに記載の指定配列のＣ−末端アミノ酸である）、表１５もしくは１６に記載のポリペプチドのフラグメント；ｃ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；あるいはｄ）抗体−抗原複合体の形成を可能にする条件下で異種ポリペプチド配列をさらに含んでなるａ）、ｂ）またはｃ）のいずれか１つに記載のポリペプチドを含んでなるポリペプチドとを接触させることを含んでなる、方法。
【請求項１３】
前記抗体−抗原複合体の形成を検出する工程をさらに含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法がイムノアッセイである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記イムノアッセイが、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、側方流動アッセイ、免疫クロマトグラフストラップアッセイ、自動化流動分析、ウエスタンブロット、免疫沈降アッセイ、逆流クロマトグラフィー結合アッセイ、凝集アッセイ、およびバイオセンサからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法が、同じポリペプチドを含んでなるポリペプチド、あるいは他のウイルスから誘導されるポリペプチドを含んでなるポリペプチドと、ａ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５を含んでなる単離された、精製された、および／または組み換えポリペプチド；ｂ）配列番号５、９、１１、１３、１５に記載のポリペプチドのフラグメント、または「ＹからＺ」である配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のフラグメント（ここで、Ｙは指定配列のＮ−末端アミノ酸であり、そしてＺは表９、１０、１１、もしくは１２のいずれか１つに記載の指定配列のＣ−末端アミノ酸である）、表１５もしくは１６に記載のポリペプチドのフラグメント；ｃ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；あるいはｄ）異種ポリペプチド配列をさらに含んでなるａ）、ｂ）またはｃ）のいずれか１つに記載のポリペプチドから選択される１つもしくはそれ以上のポリペプチドとの組み合わせのアレイを使用して実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
ポリペプチドを製造する方法であって：
ａ） （ｉ）配列番号５、９、１１、１３もしくは１５；（ｉｉ）配列番号５、９、１１、１３、１５に記載のポリペプチドのフラグメント、または「ＹからＺ」である配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のフラグメント（ここで、Ｙは指定配列のＮ−末端アミノ酸であり、そしてＺは表９、１０、１１、もしくは１２のいずれか１つに記載の指定配列のＣ−末端アミノ酸である）、または表１５もしくは１６に記載のポリペプチドのフラグメント；（ｉｉｉ）個体に投与する場合中和抗体応答を生じる、配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチド、または配列番号５、９、１１、１３もしくは１５のいずれか１つに記載のＥ−ペプチドのフラグメント；あるいはｉｖ）異種ポリペプチド配列をさらに含んでなる（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のいずれか１つに記載のポリペプチドを含んでなる少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで細胞を形質転換すること；
ｂ） 前記形質転換植物細胞の増殖および前記ポリペプチドの蓄積を可能にする条件下で、前記形質転換細胞を培養すること；ならびに
ｃ） 前記細胞から前記少なくとも１つのポリペプチドを回収または精製すること
を含んでなる、方法。
【請求項１８】
細胞が、下等植物細胞、単子葉植物細胞、および双子葉植物細胞；原核細胞；または哺乳動物細胞系統からなる群から選択される形質転換植物細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
形質転換植物細胞がタバコ細胞系統である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記タバコ細胞系統がＮＴ−１である、請求項１９に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【公表番号】特表２０１０−５１４６９８（Ｐ２０１０−５１４６９８Ａ）
【公表日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４３２４９（Ｐ２００９−５４３２４９）
【出願日】平成１９年１２月２１日（２００７．１２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８５１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１４３７１３
【国際公開日】平成２０年１１月２７日（２００８．１１．２７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＰＹＲＥＸ
【出願人】（３９００３９１９２）ダウ・アグロサイエンス・エル・エル・シー (20)
【氏名又は名称原語表記】Ｄｏｗ　ＡｇｒｏＳｃｉｅｎｃｅｓ　ＬＬＣ
【出願人】（５０９１７５４２５）
【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　ａｓ　Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
【Ｆターム（参考）】