本発明は、治療及びワクチン接種薬剤として使用するための、及び治療薬剤としての適用を包含する多数の適用に用いる抗体生成のための、構造的に拘束されたウィルス性ペプチドを提供する。本発明はさらに、本発明の構造的に拘束されたペプチド及び抗体を使用する方法及びキットを提供する。本発明は、少なくとも一部が、炭化水素架橋された螺旋ウィルス性ペプチドが、対応する非修飾ペプチドと比較して、優れたタンパク質分解、酸、及び熱安定性を示し、ペプチドの元の螺旋構造を回復して、ウィルスの融合過程を非常に効果的に妨害して、優れた薬物動態特性を保持することを明らかにしている、本明細書に提供される結果に基づいている。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＰＥＲドメインの３〜２２のアミノ酸を含有してなる、構造的に拘束されたペプチド。
【請求項２】
ＭＰＥＲドメインの３〜２２のアミノ酸が、炭化水素架橋、アミノ酸突然変異、及び非天然アミノ酸の取り込みからなる群由来の少なくとも１つの修飾を含有している、請求項１に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項３】
ＭＰＥＲドメインの３〜２２のアミノ酸が、少なくとも３連続のアミノ酸、又は少なくとも２つのアミノ酸を螺旋の単一面上に、又は少なくとも２つの相互作用面アミノ酸；又はそれらの同類置換を含有している、請求項１又は２に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項４】
螺旋の単一面が１つ、２つ、３つ、又は４つのアミノ酸の隣接するスタックドカラムを含有して、ここで、アミノ酸のスタックドカラムが２回転当り７個のアミノ酸を有するα螺旋中の、位置ａ、ｄ及びｇ；位置ｂ及びｅ；又は位置ｃ及びｆで定義され；ここでアミノ酸が、２回転当り２つのアミノ酸を有する３_１０螺旋中の位置ａ〜ｇ：及び位置ａ及びｄ：位置ｂ及びｅ；又は位置ｃ及びｆに連続して且つ一連に割当てられ；ここでアミノ酸は位置ａ〜ｆに連続して且つ一連に割当てられている、又はそれらの相同体を含有してなる、請求項３に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項５】
ペプチドが、位置１７及び２０の間に炭化水素架橋を、そして随意に位置３と７の間に炭化水素架橋を含有している配列番号１３７に記載の配列（ＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦＮＩＴＮＷＬＷＹＩＫ）の少なくとも１０〜２２のアミノ酸；配列番号１７〜２３に記載の配列の３７〜５７のアミノ酸、配列番号５０〜５７及び６４〜７０に記載の配列の１９〜３６のアミノ酸；配列番号２４〜２５、配列番号４１〜４３、及び配列番号７５〜１２８及び１３５〜１４０に記載の配列よりなる群から選ばれるアミノ酸配列の、少なくと３連続アミノ酸、螺旋の単一面上の少なくとも２つのアミノ酸、又は少なくとも２つの相互作用面アミノ酸の間に炭化水素架橋を含有している配列番号４５に記載の配列；よりなる群から選ばれるかペプチド；又はそれらの相同体を含有してなる、請求項１〜４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項６】
アミノ酸のスタックドｋラムが配列番号１に記載の配列上の位置に対応する位置によって定義され、ここでアミノ酸のスタックドカラムは、Ｇｌｕ−６６２、Ｌｙｓ−６６５、Ｔｒｐ−６６６、Ｌｅｕ−６６９、及びＴｒｐ−６７２；Ｌｅｕ−６６３、Ｔｒｐ−６６６、Ａｌａ−６６７、及びＴｒｐ−６７０；Ａｓｐ−６６４、Ａｌａ−６６７、Ｓｅｒ−６６８、及びＡｓｎ−６７１；Ｌｙｓ−６６５、Ｓｅｒ−６６８、Ｌｅｕ−６６９、及びＴｒｐ−６７２；Ｔｒｐ−６６６、Ｌｅｕ−６６９、及びＴｒｐ−６７０；Ａｌａ−６６７、Ｔｒｐ−６７０、及びＡｓｎ−６７１；Ｓｅｒ−６６８、Ａｓｎ−６７１、及びＴｒｐ−６７２；Ｉｌｅ−６７５、Ｔｒｐ−６７８、及びＴｙｒ−６８１；Ａｓｎ−６７６、Ｌｅｕ−６７９、及びＩｌｅ−６８２；Ｔｈｒ−６７７、Ｔｒｐ−６８０、及びＬｙｓ−６８３；Ｉｌｅ−６７５、Ｔｒｐ−６７８、Ｔｒｐ−６７９、及びＩｌｅ−６８２；Ｔｈｒ−６７６、Ｌｅｕ−６７９、Ｔｒｐ−６８０、及びＬｙｓ−６８３；Ａｓｎ−６７７、Ｔｒｐ−６８０、Ｔｙｒ−６８１；Ｔｒｐ−６７８、Ｔｙｒ−６８１、Ｉｌｅ−６８２；Ｌｅｕ−６７９、Ｉｌｅ−６８２、及びＬｙｓ−６８３；よりなる群から選ばれるアミノ酸の群又はそれらの相同体を含有している、請求項５に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項７】
配列番号１よりなる群から選ばれるペプチド配列由来の、少なくとも３つの相互作用面アミノ酸又は相互作用面アミノ酸の同類置換、又はそれらの相同体を含有してなり、ここで、相互作用面アミノ酸がＴｒｐ−６７２、Ｐｈｅ−６７３、Ａｓｎ−６７４、Ｉｌｅ−６７５、Ｔｈｒ−６７６、Ｌｅｕ−６７９、Ｗ−６８０よりなる群のアミノ酸と対応する位置から選ばれる、請求項３に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項８】
ペプチドが更に、ＨＲ−２ペプチドの少なく３つの連続アミノ酸、又はＨＲ−２ペプチドの螺旋の単一面上の少なくとも２つのアミノ酸、又はＨＲ−２ペプチドの少なくとも２つの相互作用面アミノ酸、又はこれらの同類置換を含有してなる、請求項１〜４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項９】
ＨＲ−２ペプチドの螺旋の単一面が、アミノ酸の隣接スタックドカラムを１つ、２つ、３つ又は４つ；又はその相同体を含有してなり、ここでアミノ酸スタックドカラムはα螺旋内の位置ａ、ｄ、及びｇ；位置ｂ及びｅ；又は位置ｃ及びｆによって定義され、ここで位置ａは螺旋中のアミノ酸であり、そしてアミノ酸はα螺旋内でａからｇの文字を連続して且つ一連に割り当てられる、請求項８に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１０】
螺旋がα螺旋であって、ペプチドの単一面が、配列番号１０〜２３、配列番号２６〜４０、配列番号４５〜４８、配列番号５８〜６３、配列番号７１〜７４に記載の配列の位置１、４、５、８、１１、１２、１５、１８、１９、２２、２５、２６、２９、３２、及び３３；又は位置２、５、６、９、１２、１３、１６、１９、２０、２３、２６、２７、３０、３３、及び３４；又は位置３、６、７、１０、１３、１４、１７、２０、２１、２４、２７、２８、３１、及び３４；又は位置４、７、８、１１、１４、１５、１８、２１、２２、２５、２８、２９、３２、及び３５；又は位置５、８、９、１２、１５、１６、１９、２２、２３、２６、２９、３０、及び３３；又は位置６、９、１０、１３、１６、１７、２０、２３、２４、２７、３０、３１、及び３４；又は７、１０、１１、１４、１７、１８、２１、２４、２５、２８、３１、３２、及び３５；及び配列番号４９〜５７に記載の配列の１〜２５のアミノ酸、配列番号６４〜７０に記載の配列の１〜２５のアミノ酸；及び配列番号７６〜１２８及び１３５〜１４０に記載の配列、又はこれらの相同体として定義される、請求項３に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１１】
ＨＲ−２ペプチドの相互作用面アミノ酸が、配列番号１に記載の配列の位置Ｔｈｒ−６２７、Ｔｒｐ−６２８、Ｔｒｐ−６３１、Ａｓｐ−６３２、Ａｒｇ−６３３、Ｉｌｅ−６３５、Ｔｙｒ−６３８、Ｉｌｅ−６４２、Ｌｅｕ−６４５、Ｉｌｅ−６４６、Ｓｅｒ−６４９、Ｇｌｎ−６５０、Ｇｌｎ−６５２、Ｇｌｎ−６５３、Ｇｌｕ−６５４、Ｌｙｓ−６５５、Ａｓｎ−６５６、Ｇｌｕ−６５７、Ｇｌｕ−６５９、Ｌｅｕ−６６０、Ｇｌｕ−６６２、及びＬｅｕ−６６３に対応するアミノ酸よりなる群から選ばれる、請求項８〜１０の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１２】
ＨＲ−２ペプチドの相互作用面アミノ酸が、配列番号１に記載の配列の位置Ｔｒｐ−６２８、Ｔｒｐ−６３１、Ｉｌｅ−６３５、Ｔｙｒ−６３８、Ｉｌｅ−６４２、Ｌｅｕ−６４５、Ｓｅｒ−６４９、Ｇｌｎ−６５２、Ａｓｎ−６５６、Ｇｌｕ−６５９、及びＬｅｕ−６６３に対応するアミノ酸よりなる群から選らばれる、請求項８〜１１の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１３】
配列番号１７〜２３に記載の配列の３７〜５７のアミノ酸；配列番号５０〜５７及び６４〜７０に記載の配列の１９〜３６のアミノ酸；配列番号２４〜２５、配列番号４１〜４３、及び配列番号７５〜８９に記載の配列よりなる群から選ばれるアミノ酸配列の、少なくとも３つの連続アミノ酸、又は螺旋の単一面の少なくとも２つのアミノ酸、又は少なくとも２つの相互作用面アミノ酸を含有してなるペプチドが、配列番号１０〜２３、配列番号２６〜４０、配列番号４５〜４８、配列番号５８〜６３、配列番号７１〜７４に記載の配列、及び配列番号４９〜５７に記載の配列の１〜２５のアミノ酸、配列番号６４〜７０に記載の配列の１〜２５のアミノ酸、及び配列番号７６〜１２８及び１３５〜１４０に記載の配列よりなる群から選ばれる、少なくとも３つの連続アミノ酸、又は螺旋の単一面の少なくとも２つのアミノ酸、又はアミノ酸配列の少なくとも２つの相互作用面アミノ酸を含有しているペプチドのカルボキシ末端に直接又は間接的に操作可能に結合している、請求項８〜１２の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１４】
ＨＲ−２配列の３〜３８のアミノ酸を含有してなり、ここでペプチドがＨＲ−２ペプチドの少なくとも３つの連続アミノ酸、又はＨＲ−２ペプチドの螺旋の単一面上の少なくとも２つのアミノ酸、又はＨＲ−２ペプチドの少なくとも２つの相互作用面アミノ酸、又はその同類置換を含有してなる、構造的に拘束されたペプチド。
【請求項１５】
薬学的に許容される担体中の請求項１〜１４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容される担体がワクチンアジュバントを含有してなる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
組成物の構造的に拘束されたペプチドが担体タンパク質と機能的に結合している、請求項１５又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
組成物の構造的に拘束されたペプチドが担体タンパク質と、部位特異的結合によって確定されるように特定された配置で結合している、請求項１５〜１７の何れか一項に記載の組成物
【請求項１９】
請求項１〜１４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチドの何れかを特異的に結合する抗体。
【請求項２０】
抗体が中和抗体を含有してなる、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
抗体が広範囲中和抗体を含有してなる、請求項１９又は２０に記載の抗体。
【請求項２２】
抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ分子、Ｆａｂタンパク質、一価抗体、二重特異性抗体、及びヒト化抗体よりなる群から選ばれる、請求項１９〜２１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
請求項１〜１４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド又は請求項１５〜１８の何れか一項に記載の組成物を、免疫応答を促進するのに有効な用量で対象に投与することを含有してなる、抗体を作成する方法。
【請求項２４】
抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ分子、Ｆａｂタンパク質、一価抗体、二重特異性抗体、及びヒト化抗体よりなる群から選ばれる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
対象から抗体を単離することを更に含有してなる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
対象からの抗体の単離が、対象から抗体を発現しているＢ細胞を単離することを含有してなる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜１４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド、請求項１５〜１８の何れか一項に記載の組成物、又は請求項１９〜２２に記載の抗体を治療有効量で投与することを含有してなる、ウィルス感染の予防、改善、又は治療の方法。
【請求項２８】
対象がウィルス感染の予防、改善、又は治療を必要としていることを確認することを更に含有してなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ウィルス感染の予防、改善、又は治療について対象をモニタリングすることを更に含有してなる、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
ウィルス感染がＨＩＶ感染を含有してなる、請求項２７〜２９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
方法が、ウィルス融合又はウィルス感染性の阻害又は抑制のうちの少なくとも１つを含有してなる、請求項２７〜３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜１４の何れか一項に記載の構造的に拘束されたペプチド、請求項１５〜１８の何れか一項に記載の組成物、又は請求項１９〜２２に記載の抗体の少なくとも１つ、及び使用説明書を含有してなる、キット。
【請求項３３】
炭化水素架橋がＲ３−Ｓ６対合、Ｒ６−Ｓ３対合、Ｒ３−Ｓ５対合及びＲ５−Ｓ３対合よりなる群から選ばれる対合を含有してなる、請求項１〜１８の何れか一項に記載の組成物。

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８−１】

【図８−２】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ−１】

【図１０Ｂ−２】

【図１１】

【図１２−１】

【図１２−２】

【図１３Ａ−１】

【図１３Ａ−２】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５−１】

【図１５−２】

【図１５−３】

【図１６−１】

【図１６−２】

【図１６−３】

【図１６−４】

【図１６−５】

【図１６−６】

【図１７−１】

【図１７−２】

【図１７−３】

【図１７−４】

【図１７−５】

【図１７−６】

【図１８】

【図１９−１】

【図１９−２】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【公表番号】特表２０１２−５３０７２０（Ｐ２０１２−５３０７２０Ａ）
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１６３４６（Ｐ２０１２−５１６３４６）
【出願日】平成２２年６月１８日（２０１０．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９２２３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４８３３５
【国際公開日】平成２２年１２月２３日（２０１０．１２．２３）
【出願人】（５１００８４１４９）ダナ　ファーバー　キャンサー　インスティテュート　インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】