気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法
【課題】ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、粘膜線毛運動を促進させ、これらの異物を除去する気道異物除去製剤及び気道異物除去方法を提供する。
【解決手段】揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
【解決手段】揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、気道異物除去用製剤及び気道異物に対する除去方法に関するものである。より詳細には、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、粘膜線毛運動を促進させ、これらの異物を除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
風邪等の感染症や花粉症等のアレルギー疾患は、外部からの異物侵入によって生じるが、こうした侵入した異物を気道から除去する役割を、粘膜線毛運動が担っている。すなわち、気道粘膜の表面に分泌される粘液のゲル層に捕捉された異物は、その下側の粘液ゾル層内で毎分９００〜１０００回の鞭打ち運動する線毛により、粘液と共に喉頭方向へ輸送され、痰として口腔外へ、あるいは、食道へと排出される。この異物が輸送される速度は、線毛運動の鞭打ち運動の周波数（ＣＢＦ）が高いほど速い。例えば、交感神経β受容体刺激薬はＣＢＦを上昇させる薬剤であるが、ＣＢＦを上昇させることにより粘膜線毛運動による移送を促進する（非特許文献１参照）。ところが、エアコン空調による室内空気の乾燥化及び冬季の室内外大気の温度低下によって、線毛運動の低下が起こり、また、ディーゼル排気等は線毛運動の低下した状態を加速化することが知られている。このため、粘膜線毛運動を促進させ、気管支炎や喘息における気道異物のクリアランスを促進する方法が開示されている（特許文献１〜３参照）。
【０００３】
一方、気道異物の除去剤としては、気道異物を痰として対外に排出する生体作用を促進する去痰剤が知られている（非特許文献２参照）。しかし、去痰剤の作用メカニズムは、主に粘液分泌を促進し粘液の流動性を高めることにあり、去痰剤単独では、気道異物除去作用は十分とはいえなかった。このことから、粘膜線毛運動を促進させ、簡便に気道に付着した異物を除去することができ、感染症、花粉症、アレルギーから身体を保護する、より効果の高い気道異物除去製剤や除去方法が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００１−５２６６３５号公報
【特許文献２】特表２００１−５０５５５３号公報
【特許文献３】特表２０００−５１２２８９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】玉置淳、呼吸器科、１１（６）：５８７−５９４、２００７
【非特許文献２】田中千賀子編、ＮＥＷ薬理学（改訂第５版）、南江堂、２００７年、Ｐ４１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、気道粘膜線毛運動を活性化させ、これらの異物を除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、特定の揮発性線毛運動促進剤と去痰剤との併用により、粘膜線毛運動を促進させ、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物を除去する顕著な効果を有することを知見し、本発明をなすに至ったものである。上記揮発性線毛運動促進剤とは、揮発または蒸発しやすい性質をもち、かつ、粘膜線毛運動を促進する物質のことをいう。
【０００８】
従って、本発明は下記気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供する。
［１］．揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
［２］．揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン又はγ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である［１］記載の気道異物除去用製剤。
［３］．去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である［１］又は［２］記載の気道異物除去用製剤。
［４］．揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を用いる気道異物除去方法。
［５］．揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン又はγ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である［４］記載の気道異物除去方法。
［６］．去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である［４］又は［５］記載の気道異物除去方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、気道粘膜線毛運動を促進させ、これらの異物を簡便に除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の気道異物除去用製剤および気道異物除去方法に用いる揮発性線毛運動促進剤は下記成分からなるものである。これらは単独で用いてもよいし、一種以上を組み合わせてもよい。
（１）２−トリデセン−１−オール（ＣＡＳＮｏ．６８４８０−２５−１、別名：トリデカ−２−エン‐１−オール、トリデセノール、トリデセニルアルコール）。
（２）テトラハイドロゲラニオール（ＣＡＳＮｏ．１０６−２１−８、別名：テトラヒドロゲラニオール、ジヒドロシトロネロール、３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−１−ｏｃｔａｎｏｌ）。
（３）デュピカル（ＣＡＳＮｏ．３０１６８−２３−１、別名：デュピカール、ドゥピカル、ドゥピカール、（４−（ｔｒｉｃｙｃｌｏ［５，２，１，０］−ｄｅｃｙｌｉｄｅｎｅ−８）ｂｕｔａｎａｌ）。
（４）イソシクレモン（ＣＡＳＮｏ．５４４６４−５７−２、別名：イソサイクレモン、イソＥスーパー、１−（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−ｈｅｘａｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ−２−ｙｌ）ｅｔｈａｎｏｎｅ）。
（５）シトラールジメチルアセタール（ＣＡＳＮｏ．７５４９−３７−３、別名：ｇｅｒａｎｉａｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｌ、（２Ｅ）−１，１−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｏｃｔａ−２，６−ｄｉｅｎｅ）。
（６）アセトフェノン（ＣＡＳＮｏ．９８−８６−２、別名：メチルフェニルケトン、１−Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｎｅ、Ａｃｅｔｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）。
（７）カルボン（ＣＡＳＮｏ．６４８５−４０−１、別名：ｌ−カルボン、カルボール、２−ｍｅｔｈｙｌ−５−ｐｒｏｐ−１−ｅｎ−２−ｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ）。
（８）ヘキシルシクロペンタノン（ＣＡＳＮｏ．１３０７４−６５−２、別名：２−ｈｅｘｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎ−１−ｏｎｅ）。
（９）メントフラン（ＣＡＳＮｏ．４９４−９０−６、別名：メンソフラン、３，９−ｅｐｏｘｙ−ｐ−Ｍｅｎｔｈａ−３，８−ｄｉｅｎｅ、３，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−４，５，６，７−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１−ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ）。
（１０）ブルボーネン（ＣＡＳＮｏ．５２０８−５９−３、別名：β−ブルボネン、β−ブルボーネン）。
（１１）β−メチル−デカラクトン（ＣＡＳＮｏ．７０１１−８３−８、別名：β−メチル−γ−デカラクトン、５−ｈｅｘｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌｏｘｏｌａｎ−２−ｏｎｅ、５−ｈｅｘｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌｄｉｈｙｄｒｏ−２（３Ｈ）−ｆｕｒａｎｏｎｅ）。
（１２）ムスコン（ＣＡＳＮｏ．５４１−９１−３、別名：３−ｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｄｅｃａｎ−１−ｏｎｅ）。
（１３）イソオイゲノール（ＣＡＳＮｏ．９７−５４−１、別名：２−ｍｅｔｈｏｘｙ−４−［（Ｅ）−ｐｒｏｐ−１−ｅｎｙｌ］ｐｈｅｎｏｌ）。
（１４）γ−ドデカラクトン（ＣＡＳＮｏ．２３０５−０５−７、別名：４−ドデカノライド）。
（１５）γ−ヘキサデカラクトン（ＣＡＳＮｏ．７３０−４６−１、別名：４−ヘキサデカノライド）。
上記揮発性線毛運動促進剤は、精製品を用いてもよく、これらを含む精油などの混合物を用いてもよい。また市販されているものをそのまま用いてもよいし、市販品を加工精製して用いてもよい。
上記揮発性線毛運動促進剤の中でも、２−トリデセン−１−オール、テトラヒドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンが好ましく、２−トリデセン−１−オールがより好ましい。
上記揮発性繊毛運動促進剤は、揮発性を持つ物質であるが、このほかにも揮発性を持つことが知られる物質は多く存在する。しかしながら、それらが必ずしも線毛運動促進効果をもつものとは限らない。
本発明の気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法に用いる去痰剤としては、医薬成分や生薬をあげることができる。これらは単体としてそのまま用いることができるし、一種単独または二種以上を組み合わせて用いてもよい。
医薬成分としては、例えば、Ｌ‐カルボシステイン、アセチルシステイン、フドステイン、エチルシステイン塩酸塩、メチルシステイン塩酸塩、アンブロキソールまたはその塩、ブロムヘキシンまたはその塩、グアヤコールスルホン酸カリウム、グアイフェネシン、ヨウ化カリウム、炭酸水素ナトリウム、塩酸エプラジノン、アミノフィリン、テオフィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、塩化アンモニウム、クレゾールスルホン酸カリウム、ｌ−メントール、塩酸トリメトキノール、塩酸フェニルプロパノールアミン、テルピン水和物、塩酸メトキシフェナミン等が挙げられるが、これらに限定されない。
これらのうち、アンブロキソールの塩やブロムヘキシンの塩としては、塩酸塩、硝酸塩、炭酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等を挙げることができる。これらの医薬成分は、一般的な合成法により合成することもできるし、市販品を用いることもできる。
生薬としては、生薬末およびそのエキス等を用いることができ、例えば、カンゾウ（甘草）、マオウ（麻黄）、キキョウ（桔梗）、アセンヤク（阿仙薬）、キョウニン（杏仁）、セネガ（セネガ）、ニンジン（人参）、ウイキョウ（茴香）、ナンテンジツ（南天実）、セキサン（石蒜）、トコン（吐根）、バイモ（貝母）、オンジ（遠志）、ゴオウ（牛黄）、ブクリョウ（茯苓）、オウヒ（桜皮）、オウゴン（黄ゴン）、チンピ（陳皮）、ソウハクヒ（桑白皮）、チクセツニンジン（竹節人参）、シオン（紫苑）、シャゼンシ（車前子）、ゴミシ（五味子）、ハンゲ（半夏）、シャジン（沙参）、バクモンドウ（麦門冬）、シャゼンソウ（車前草）、ショウキョウ（生姜）、ソヨウ（蘇葉）、ケイヒ（桂皮）、フキタンポポ（蕗蒲公英）、ソウキョウ（皀莢）、ビャクゴウ（百合）、キッピ（橘皮）、トウガシ（冬瓜子）、ゼンコ（前胡）、ビワヨウ（枇杷葉）等があげられる。
生薬を用いる場合には、生薬本体をそのまま用いてもよいが、植物抽出物を得る一般の抽出法により、生薬エキスとして用いてもよい。また、これらは一種以上を組み合わせてもよい。また、これら生薬や生薬末、生薬エキスは、市販品を用いることもできる。
上記去痰剤では、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンが好ましく、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、ニンジン、セネガがより好ましい。
【００１１】
一般に、鼻、喉といった気道の粘膜は常に外気に接していることから、いろいろなトラブルのリスクに曝されている。本発明において、気道とは、鼻から鼻腔、鼻咽腔、咽頭及び喉頭等の上気道、ならびに肺側の気管、気管支等の下気道をいう。気道異物の除去剤は、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、粘膜線毛運動を促進させて異物を除去する。粘膜線毛運動促進効果は、線毛を含む気道粘膜層を用いた培養系での線毛運動周波数（ＣＢＦ値）において、例えば、通常の培養液等に対し、これに試料を添加したものが、線毛運動活性が向上することにより確認することができる。本発明の上記特定の揮発性線毛運動促進剤が、いかなる作用機序で粘膜線毛運動を促進させ、気道異物の除去効果を示すかは明確ではないが、気道リスクの低減効果に対して有効である。
【００１２】
上記線毛を含む気道粘膜層を用いた培養系での線毛運動周波数（ＣＢＦ値）とは、後述の試験例において示すように、ウサギから摘出、調製した粘膜層を１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ 社製Ｄ６０４６）で培養し、この培養物の線毛部分を顕微鏡観察し、その画像情報の輝度変化を数値データとして保存した後、フーリエ変換することで線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を解析し、算出したものである。
気道異物除去用製剤の処理量は、揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤の有効量であり、適宜選定される。例えば、１回の処理量は、揮発性線毛運動促進剤を作用させる場合には、通常０．１ｍｇ〜１０ｍｇであり、１日１回〜５回である。去痰剤を作用させる場合には、基本的に去痰剤の使用方法に準ずるが、通常、成人の１日量として１ｍｇ〜３０００ｍｇであり、好ましくは、成人の１日量として６ｍｇ〜２０００ｍｇである。例えば、カルボシステインの場合は、1回５００ｍｇを１日３回使用する。生薬の使用量は、通常、成人の１日量として、エキス（原生薬換算量）では０．０１ｇ〜３００ｇ、粉末では０．０００１ｇ〜６０ｇであり、好ましくは、成人の１日量としてエキス（原生薬換算量）では０．０５ｇ〜３０ｇ程度、粉末では０．００２ｇ〜６ｇ程度である。処理の方法としては、去痰剤は内服すればよく、揮発性線毛運動促進剤は、揮発性線毛運動促進剤を含有する気体を気道へ導入し、気道に接触できればよい。あるいは内服し、血液を介して作用させてもよい。
【００１３】
気道異物除去用製剤としては、医薬品、医薬部外品、食品等の分野の製剤があげられる。具体的には、鼻・喉洗浄剤（うがい薬）、点鼻薬、点喉薬、内服薬、ネブライザ−、吸入薬、ミスト、キャンディ、グミ、飲料水等が挙げられる。
【００１４】
上記揮発性線毛運動促進剤の気道異物除去用製剤中の配合濃度は特に限定されるものではなく、製剤の設計に影響がなければ任意の濃度の配合が可能であるが、気道異物の除去効果の点から、粘膜に直接適用する液体製剤の場合では、０．０００１〜０．１質量％が好ましく、０．００１〜０．０５質量％がより好ましい。揮発性線毛運動促進剤を吸入して作用させる場合には、揮発させる空間の体積や揮発させる手段にもよるが、製剤中に０．００１〜１０質量％、あるいは気相中に０．００１〜１００ｐｐｍ（体積）となることが好ましく、０．００５〜１００ｐｐｍがより好ましく、０．０１〜５０ｐｐｍが更に好ましく、０．１〜１０ｐｐｍが特に好ましい。揮発性線毛運動促進剤濃度が高すぎると、臭いを不快に感じて使用感が損なわれるおそれがある。
気道異物除去方法としては、医薬品、医薬部外品、食品等の分野の製剤として同一の組成内に配合した形態、例えば、シロップ、ドライシロップ、のように１剤の形にして用いることもできる。
また、去痰剤と揮発性線毛運動促進剤とをそれぞれ別の製剤として、化粧品、日用品等と組合せた形態、例えば、去痰剤がカプセルであり、揮発性線毛運動促進剤が肌等に塗布し、呼吸することにより気道に導入される揮発性製剤、上記成分を含む水溶液を蒸気にして鼻・喉から吸引する蒸気吸引性製剤、上記成分を含む水溶液を含浸させたマスク、ティッシュ等の日用品であるように別々に用いてもよい。
【００１５】
本発明の気道異物除去用製剤には、本発明の効果を損なわない範囲において、既知の薬効成分や通常製剤に配合される任意成分を必要に応じて適宜配合することができ、これらは１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて、適量用いることができる。これらの成分としては、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、両性界面活性剤、油分、アルコール類、ポリオール類、殺菌剤、抗炎症剤、鎮咳薬、鎮痛剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、糖類、ビタミン類、アミノ酸類、生薬類、水等が挙げられる。
【実施例】
【００１６】
以下、試験例、実施例、比較例及び参考例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００１７】
［試験例１］（実施例１〜２２、比較例１〜３１、参考例１〜２）
[線毛運動機能評価試験（去痰剤（培地）＋揮発性線毛運動促進剤（気相））]
（１）評価液の調製：
コントロール溶液：１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ社製：Ｄ６０４６）
去痰剤評価液：コントロール溶液０．９９ｇに対し、試験物質を０．００１質量％から０．１質量％含有するエタノール溶液０．０１ｇを添加して被検液（試験物質濃度は０．１質量ｐｐｍから１０質量ｐｐｍ）とした。なお、生薬エキスの場合、エタノールの代わりに水を用い同様に調製した。
試験物質が医薬成分の場合は、カルボシステイン（和光純薬工業株式会社製）を用いた。生薬エキスの場合は生薬より精製して用いた。生薬そのものは市販品を用いてもよく、各生薬粉末５０ｇに対して５０体積％エタノールを５０ｍＬ加え、常温で一週間静置した。３回の抽出作業を繰り返し、３回分の抽出液をまとめて吸引ろ過により、残渣を除去した。上清の溶媒はエバポレーターを用いて除去（エタノールを除去）し、溶媒が水だけになったら、冷メタノールを用いて、上清を凍結させ、濃縮乾固した。調製された粉末は速やかにバイアル瓶に入れ、デシケーター内で保存した。
揮発性線毛運動促進剤評価液：試験物質（市販品）をエタノールに１質量％溶解させた。
揮発性物質評価液：試験物質（精製試薬：市販品）をエタノールに１質量％溶解させた。
（２）粘膜片調製
ウサギ（ＮＺＷ、１６−２１週齢、オス）から摘出した気管を生理食塩水中でシート状に切り開き、ピンセットを用いて粘膜片を剥離した。得られた粘膜片を、メスを用いて適度な大きさに細片化し、１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ社製：Ｄ６０４６）の中に入れ、５体積％炭酸ガス条件にて、３７℃でインキュベートした。
（３）線毛運動解析：
得られた前培養した粘膜片を６穴培養皿の連続する２つのウェルの片側に入れ、気相と粘膜片が接するように量を調整しながら、コントロール液を加え密封し、３０℃で１０分程度馴化させた。６穴培養皿のウェルのうち、空の４つのウェルはポリエチレンフィルムで蓋をした。
その後、２０倍の対物レンズを用いた透過型倒立顕微鏡（オリンパスＩＸ７０）にて線毛部分を観察し、アクアコスモス（浜松ホトニクス製）を用いて一定区画の画像情報を７０Ｈｚ程度の頻度で連続的にコンピューターに取り込んだ。すなわちアクアコスモス（浜松ホトニクス製）は、カメラ（Ｃ−４７４２−９５（浜松ホトニクス製））をオリンパスＩＸ７０に取り付けたものであり、以下の設定で観察した。
露光時間:０．０００５〜０．００１秒
ゲイン:２５５（最大）
サブアレイ：６４×６４（最小）
サブアレイ内ビニング：１×１
サンプリング間隔：０．０１４ｓｅｃ（約７１Ｈｚ）
サンプリング数：１０２４（約１５秒間）
周波数解析用ＲＯＩ：２５ヵ所（サイズ：３×３ｐｉｘｅｌ）
１０２４点の画像情報の輝度変化を数値データとして保存した後、フーリエ変換することで線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を測定した。
去痰剤単独の効果を評価する場合、まずコントロール溶液にて測定し（コントロールＣＢＦ）、続いて去痰剤評価液に交換し、１０分間静置した後、同様にＣＢＦを測定した（去痰剤ＣＢＦ）。
揮発性線毛運動促進剤単独の効果を評価する場合、コントロールＣＢＦを測定後、粘膜片の隣のウェルに、密封状態のまま揮発性線毛運動促進剤評価液を５０ｍｇ滴下した。試験物質を気化させ、粘膜片を入れたウェルまで充満させた。本試験例における培養皿内の空間体積は、約５０ｍＬであることから、エタノールに溶解した試験物質がすべて気化した場合の濃度は、例えばエタノールに１質量％溶解した場合には１０ｐｐｍである。１５分後、同様に線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を測定した（揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦ）。
【００１８】
コントロールＣＢＦ値に対する去痰剤ＣＢＦ、あるいは揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦの比率を線毛運動活性比として評価した。得られた線毛運動活性比は表中に示した。
【００１９】
線毛運動活性比（去痰剤）＝去痰剤ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
線毛運動活性比（揮発性線毛運動促進剤）＝揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
去痰剤と揮発性線毛運動促進剤の併用効果は、コントロールＣＢＦを測定後、去痰剤評価液に交換して密封後、密封状態のまま揮発性線毛運動促進剤評価液を５０ｍｇ滴下した。１５分後、ＣＢＦを測定した（併用ＣＢＦ）。その場合の線毛運動活性比（併用）は、コントロールＣＢＦに対する相対値で評価した。得られた線毛運動活性比は表中に示した。
線毛運動活性比（併用）＝併用ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
【００２０】
【表１】
【００２１】
表１に示すように、去痰剤のカルボシステイン単独、あるいは揮発性線毛運動促進剤の２−トリデセン−１−オール単独では線毛運動活性比が頭打ちとなる濃度において、両者を併用すると、さらに高い線毛運動活性比が得られた。
【００２２】
【表２】
【００２３】
さらに、表２に示すように、去痰剤のカルボシステインと揮発性線毛運動促進剤のテトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンとを併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００２４】
【表３】
【００２５】
一方、表３に示すように、揮発性物質であるリラールの線毛運動活性比は、単独では０．９０、カルボシステインとの併用系でも０．９９であり、比較例１のコントロールの線毛運動活性比１．００よりも低い値であった。
【００２６】
【表４】
【００２７】
去痰剤は、線毛運動とは異なる薬理作用（粘液分泌促進など）により気道異物を除去するものもあり、必ずしも線毛運動を高めるわけではない。表４に示すように、生薬エキスの去痰剤である、カンゾウエキス、マオウエキス、キキョウエキス、アセンヤクエキスでは線毛運動促進効果はごくわずかであったが、２−トリデセン−１−オールと併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００２８】
【表５】
【００２９】
表５に示すように、比較例２９〜３１の去痰剤単独では、線毛運動を高めるものではなく、線毛運動を抑制するものであった。しかしながら、実施例２０〜２２に示すように、去痰剤に揮発性線毛運動促進剤を併用することにより線毛運動活性比を顕著に高める、あるいは、線毛運動を抑制する去痰剤と揮発性線毛運動促進剤を併用することにより線毛運動活性比の低下を防ぐことを確認した。
【００３０】
［試験例２］（実施例２３〜４１、比較例３２〜５１）
[線毛運動機能評価試験（去痰剤（培地）＋揮発性線毛運動促進剤（培地））]
（１）被検液の調製：
コントロール溶液：試験例１と同様
被検液：コントロール溶液０．９９ｇに対し、去痰剤０．０１質量％または０．１質量％と揮発性線毛運動促進剤０．１質量％を含有するエタノール溶液０．０１ｇを添加して被検液（去痰剤濃度は、１質量ｐｐｍ（表６）または１０質量ｐｐｍ（表７）、揮発性線毛運動促進剤濃度はそれぞれ１０質量ｐｐｍ）とした。なお、生薬エキスの場合、エタノールの代わりに水を用い同様に調製した。生薬エキスは、試験例１に記載した方法と同様に調製した。すなわち、各生薬粉末５０ｇに対して５０体積％エタノールを５０ｍＬ加え、常温で一週間静置した。３回の抽出作業を繰り返し、３回分の抽出液をまとめて吸引ろ過により、残渣を除去した。上清の溶媒をエバポレーターを用いて除去（エタノールを除去）し、溶媒が水だけになったら、冷メタノールを用いて、上清を凍結させ、濃縮乾固した。調製された粉末は速やかにバイアル瓶に入れ、デシケーター内で保存した。
（２）線毛運動解析：
試験例１（２）と同様に調製した粘膜片を３５ｍｍシャーレに移し、コントロール液中に３０℃のステージ上で約１０分馴化させた。その後、試験例１（３）と同様にＣＢＦを測定した（コントロールＣＢＦ）、続いて被検液に交換し、１０分間静置した後、同様にＣＢＦを測定した（被検液ＣＢＦ）。
（３）線毛運動活性比の算出
コントロールＣＢＦに対する被検液ＣＢＦの比率を線毛運動活性比
（線毛運動活性比＝被検液ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ）
とした。得られた線毛運動活性比を表中に示した。
【００３１】
【表６】
【００３２】
表６に示すように、線毛運動を促進する揮発性線毛運動促進剤とカルボシステインを併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００３３】
【表７】
【００３４】
表７に示すように、本発明の揮発性線毛運動促進剤は、液中で去痰剤と同時に作用させることによっても、線毛運動促進効果が確認された。
【００３５】
以下に、本発明の気道異物除去製剤を配合したキャンディの処方例を示す。処方例１、処方例２は、いずれも優れた気道異物除去効果が確認された。
【００３６】
処方例１ キャンディ
【表８】
【００３７】
処方例２ キャンディ
【表９】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、気道異物除去用製剤及び気道異物に対する除去方法に関するものである。より詳細には、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、粘膜線毛運動を促進させ、これらの異物を除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
風邪等の感染症や花粉症等のアレルギー疾患は、外部からの異物侵入によって生じるが、こうした侵入した異物を気道から除去する役割を、粘膜線毛運動が担っている。すなわち、気道粘膜の表面に分泌される粘液のゲル層に捕捉された異物は、その下側の粘液ゾル層内で毎分９００〜１０００回の鞭打ち運動する線毛により、粘液と共に喉頭方向へ輸送され、痰として口腔外へ、あるいは、食道へと排出される。この異物が輸送される速度は、線毛運動の鞭打ち運動の周波数（ＣＢＦ）が高いほど速い。例えば、交感神経β受容体刺激薬はＣＢＦを上昇させる薬剤であるが、ＣＢＦを上昇させることにより粘膜線毛運動による移送を促進する（非特許文献１参照）。ところが、エアコン空調による室内空気の乾燥化及び冬季の室内外大気の温度低下によって、線毛運動の低下が起こり、また、ディーゼル排気等は線毛運動の低下した状態を加速化することが知られている。このため、粘膜線毛運動を促進させ、気管支炎や喘息における気道異物のクリアランスを促進する方法が開示されている（特許文献１〜３参照）。
【０００３】
一方、気道異物の除去剤としては、気道異物を痰として対外に排出する生体作用を促進する去痰剤が知られている（非特許文献２参照）。しかし、去痰剤の作用メカニズムは、主に粘液分泌を促進し粘液の流動性を高めることにあり、去痰剤単独では、気道異物除去作用は十分とはいえなかった。このことから、粘膜線毛運動を促進させ、簡便に気道に付着した異物を除去することができ、感染症、花粉症、アレルギーから身体を保護する、より効果の高い気道異物除去製剤や除去方法が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００１−５２６６３５号公報
【特許文献２】特表２００１−５０５５５３号公報
【特許文献３】特表２０００−５１２２８９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】玉置淳、呼吸器科、１１（６）：５８７−５９４、２００７
【非特許文献２】田中千賀子編、ＮＥＷ薬理学（改訂第５版）、南江堂、２００７年、Ｐ４１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、気道粘膜線毛運動を活性化させ、これらの異物を除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、特定の揮発性線毛運動促進剤と去痰剤との併用により、粘膜線毛運動を促進させ、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物を除去する顕著な効果を有することを知見し、本発明をなすに至ったものである。上記揮発性線毛運動促進剤とは、揮発または蒸発しやすい性質をもち、かつ、粘膜線毛運動を促進する物質のことをいう。
【０００８】
従って、本発明は下記気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供する。
［１］．揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
［２］．揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン又はγ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である［１］記載の気道異物除去用製剤。
［３］．去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である［１］又は［２］記載の気道異物除去用製剤。
［４］．揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を用いる気道異物除去方法。
［５］．揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン又はγ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である［４］記載の気道異物除去方法。
［６］．去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である［４］又は［５］記載の気道異物除去方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、気道粘膜線毛運動を促進させ、これらの異物を簡便に除去する気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の気道異物除去用製剤および気道異物除去方法に用いる揮発性線毛運動促進剤は下記成分からなるものである。これらは単独で用いてもよいし、一種以上を組み合わせてもよい。
（１）２−トリデセン−１−オール（ＣＡＳＮｏ．６８４８０−２５−１、別名：トリデカ−２−エン‐１−オール、トリデセノール、トリデセニルアルコール）。
（２）テトラハイドロゲラニオール（ＣＡＳＮｏ．１０６−２１−８、別名：テトラヒドロゲラニオール、ジヒドロシトロネロール、３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−１−ｏｃｔａｎｏｌ）。
（３）デュピカル（ＣＡＳＮｏ．３０１６８−２３−１、別名：デュピカール、ドゥピカル、ドゥピカール、（４−（ｔｒｉｃｙｃｌｏ［５，２，１，０］−ｄｅｃｙｌｉｄｅｎｅ−８）ｂｕｔａｎａｌ）。
（４）イソシクレモン（ＣＡＳＮｏ．５４４６４−５７−２、別名：イソサイクレモン、イソＥスーパー、１−（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−ｈｅｘａｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ−２−ｙｌ）ｅｔｈａｎｏｎｅ）。
（５）シトラールジメチルアセタール（ＣＡＳＮｏ．７５４９−３７−３、別名：ｇｅｒａｎｉａｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｌ、（２Ｅ）−１，１−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｏｃｔａ−２，６−ｄｉｅｎｅ）。
（６）アセトフェノン（ＣＡＳＮｏ．９８−８６−２、別名：メチルフェニルケトン、１−Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｎｅ、Ａｃｅｔｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）。
（７）カルボン（ＣＡＳＮｏ．６４８５−４０−１、別名：ｌ−カルボン、カルボール、２−ｍｅｔｈｙｌ−５−ｐｒｏｐ−１−ｅｎ−２−ｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ）。
（８）ヘキシルシクロペンタノン（ＣＡＳＮｏ．１３０７４−６５−２、別名：２−ｈｅｘｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎ−１−ｏｎｅ）。
（９）メントフラン（ＣＡＳＮｏ．４９４−９０−６、別名：メンソフラン、３，９−ｅｐｏｘｙ−ｐ−Ｍｅｎｔｈａ−３，８−ｄｉｅｎｅ、３，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−４，５，６，７−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１−ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ）。
（１０）ブルボーネン（ＣＡＳＮｏ．５２０８−５９−３、別名：β−ブルボネン、β−ブルボーネン）。
（１１）β−メチル−デカラクトン（ＣＡＳＮｏ．７０１１−８３−８、別名：β−メチル−γ−デカラクトン、５−ｈｅｘｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌｏｘｏｌａｎ−２−ｏｎｅ、５−ｈｅｘｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌｄｉｈｙｄｒｏ−２（３Ｈ）−ｆｕｒａｎｏｎｅ）。
（１２）ムスコン（ＣＡＳＮｏ．５４１−９１−３、別名：３−ｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｄｅｃａｎ−１−ｏｎｅ）。
（１３）イソオイゲノール（ＣＡＳＮｏ．９７−５４−１、別名：２−ｍｅｔｈｏｘｙ−４−［（Ｅ）−ｐｒｏｐ−１−ｅｎｙｌ］ｐｈｅｎｏｌ）。
（１４）γ−ドデカラクトン（ＣＡＳＮｏ．２３０５−０５−７、別名：４−ドデカノライド）。
（１５）γ−ヘキサデカラクトン（ＣＡＳＮｏ．７３０−４６−１、別名：４−ヘキサデカノライド）。
上記揮発性線毛運動促進剤は、精製品を用いてもよく、これらを含む精油などの混合物を用いてもよい。また市販されているものをそのまま用いてもよいし、市販品を加工精製して用いてもよい。
上記揮発性線毛運動促進剤の中でも、２−トリデセン−１−オール、テトラヒドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンが好ましく、２−トリデセン−１−オールがより好ましい。
上記揮発性繊毛運動促進剤は、揮発性を持つ物質であるが、このほかにも揮発性を持つことが知られる物質は多く存在する。しかしながら、それらが必ずしも線毛運動促進効果をもつものとは限らない。
本発明の気道異物除去用製剤及び気道異物除去方法に用いる去痰剤としては、医薬成分や生薬をあげることができる。これらは単体としてそのまま用いることができるし、一種単独または二種以上を組み合わせて用いてもよい。
医薬成分としては、例えば、Ｌ‐カルボシステイン、アセチルシステイン、フドステイン、エチルシステイン塩酸塩、メチルシステイン塩酸塩、アンブロキソールまたはその塩、ブロムヘキシンまたはその塩、グアヤコールスルホン酸カリウム、グアイフェネシン、ヨウ化カリウム、炭酸水素ナトリウム、塩酸エプラジノン、アミノフィリン、テオフィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、塩化アンモニウム、クレゾールスルホン酸カリウム、ｌ−メントール、塩酸トリメトキノール、塩酸フェニルプロパノールアミン、テルピン水和物、塩酸メトキシフェナミン等が挙げられるが、これらに限定されない。
これらのうち、アンブロキソールの塩やブロムヘキシンの塩としては、塩酸塩、硝酸塩、炭酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等を挙げることができる。これらの医薬成分は、一般的な合成法により合成することもできるし、市販品を用いることもできる。
生薬としては、生薬末およびそのエキス等を用いることができ、例えば、カンゾウ（甘草）、マオウ（麻黄）、キキョウ（桔梗）、アセンヤク（阿仙薬）、キョウニン（杏仁）、セネガ（セネガ）、ニンジン（人参）、ウイキョウ（茴香）、ナンテンジツ（南天実）、セキサン（石蒜）、トコン（吐根）、バイモ（貝母）、オンジ（遠志）、ゴオウ（牛黄）、ブクリョウ（茯苓）、オウヒ（桜皮）、オウゴン（黄ゴン）、チンピ（陳皮）、ソウハクヒ（桑白皮）、チクセツニンジン（竹節人参）、シオン（紫苑）、シャゼンシ（車前子）、ゴミシ（五味子）、ハンゲ（半夏）、シャジン（沙参）、バクモンドウ（麦門冬）、シャゼンソウ（車前草）、ショウキョウ（生姜）、ソヨウ（蘇葉）、ケイヒ（桂皮）、フキタンポポ（蕗蒲公英）、ソウキョウ（皀莢）、ビャクゴウ（百合）、キッピ（橘皮）、トウガシ（冬瓜子）、ゼンコ（前胡）、ビワヨウ（枇杷葉）等があげられる。
生薬を用いる場合には、生薬本体をそのまま用いてもよいが、植物抽出物を得る一般の抽出法により、生薬エキスとして用いてもよい。また、これらは一種以上を組み合わせてもよい。また、これら生薬や生薬末、生薬エキスは、市販品を用いることもできる。
上記去痰剤では、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンが好ましく、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、ニンジン、セネガがより好ましい。
【００１１】
一般に、鼻、喉といった気道の粘膜は常に外気に接していることから、いろいろなトラブルのリスクに曝されている。本発明において、気道とは、鼻から鼻腔、鼻咽腔、咽頭及び喉頭等の上気道、ならびに肺側の気管、気管支等の下気道をいう。気道異物の除去剤は、ウイルスや、ほこり、雑菌、花粉等のアレルゲン等の異物に対して、粘膜線毛運動を促進させて異物を除去する。粘膜線毛運動促進効果は、線毛を含む気道粘膜層を用いた培養系での線毛運動周波数（ＣＢＦ値）において、例えば、通常の培養液等に対し、これに試料を添加したものが、線毛運動活性が向上することにより確認することができる。本発明の上記特定の揮発性線毛運動促進剤が、いかなる作用機序で粘膜線毛運動を促進させ、気道異物の除去効果を示すかは明確ではないが、気道リスクの低減効果に対して有効である。
【００１２】
上記線毛を含む気道粘膜層を用いた培養系での線毛運動周波数（ＣＢＦ値）とは、後述の試験例において示すように、ウサギから摘出、調製した粘膜層を１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ 社製Ｄ６０４６）で培養し、この培養物の線毛部分を顕微鏡観察し、その画像情報の輝度変化を数値データとして保存した後、フーリエ変換することで線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を解析し、算出したものである。
気道異物除去用製剤の処理量は、揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤の有効量であり、適宜選定される。例えば、１回の処理量は、揮発性線毛運動促進剤を作用させる場合には、通常０．１ｍｇ〜１０ｍｇであり、１日１回〜５回である。去痰剤を作用させる場合には、基本的に去痰剤の使用方法に準ずるが、通常、成人の１日量として１ｍｇ〜３０００ｍｇであり、好ましくは、成人の１日量として６ｍｇ〜２０００ｍｇである。例えば、カルボシステインの場合は、1回５００ｍｇを１日３回使用する。生薬の使用量は、通常、成人の１日量として、エキス（原生薬換算量）では０．０１ｇ〜３００ｇ、粉末では０．０００１ｇ〜６０ｇであり、好ましくは、成人の１日量としてエキス（原生薬換算量）では０．０５ｇ〜３０ｇ程度、粉末では０．００２ｇ〜６ｇ程度である。処理の方法としては、去痰剤は内服すればよく、揮発性線毛運動促進剤は、揮発性線毛運動促進剤を含有する気体を気道へ導入し、気道に接触できればよい。あるいは内服し、血液を介して作用させてもよい。
【００１３】
気道異物除去用製剤としては、医薬品、医薬部外品、食品等の分野の製剤があげられる。具体的には、鼻・喉洗浄剤（うがい薬）、点鼻薬、点喉薬、内服薬、ネブライザ−、吸入薬、ミスト、キャンディ、グミ、飲料水等が挙げられる。
【００１４】
上記揮発性線毛運動促進剤の気道異物除去用製剤中の配合濃度は特に限定されるものではなく、製剤の設計に影響がなければ任意の濃度の配合が可能であるが、気道異物の除去効果の点から、粘膜に直接適用する液体製剤の場合では、０．０００１〜０．１質量％が好ましく、０．００１〜０．０５質量％がより好ましい。揮発性線毛運動促進剤を吸入して作用させる場合には、揮発させる空間の体積や揮発させる手段にもよるが、製剤中に０．００１〜１０質量％、あるいは気相中に０．００１〜１００ｐｐｍ（体積）となることが好ましく、０．００５〜１００ｐｐｍがより好ましく、０．０１〜５０ｐｐｍが更に好ましく、０．１〜１０ｐｐｍが特に好ましい。揮発性線毛運動促進剤濃度が高すぎると、臭いを不快に感じて使用感が損なわれるおそれがある。
気道異物除去方法としては、医薬品、医薬部外品、食品等の分野の製剤として同一の組成内に配合した形態、例えば、シロップ、ドライシロップ、のように１剤の形にして用いることもできる。
また、去痰剤と揮発性線毛運動促進剤とをそれぞれ別の製剤として、化粧品、日用品等と組合せた形態、例えば、去痰剤がカプセルであり、揮発性線毛運動促進剤が肌等に塗布し、呼吸することにより気道に導入される揮発性製剤、上記成分を含む水溶液を蒸気にして鼻・喉から吸引する蒸気吸引性製剤、上記成分を含む水溶液を含浸させたマスク、ティッシュ等の日用品であるように別々に用いてもよい。
【００１５】
本発明の気道異物除去用製剤には、本発明の効果を損なわない範囲において、既知の薬効成分や通常製剤に配合される任意成分を必要に応じて適宜配合することができ、これらは１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて、適量用いることができる。これらの成分としては、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、両性界面活性剤、油分、アルコール類、ポリオール類、殺菌剤、抗炎症剤、鎮咳薬、鎮痛剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、糖類、ビタミン類、アミノ酸類、生薬類、水等が挙げられる。
【実施例】
【００１６】
以下、試験例、実施例、比較例及び参考例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００１７】
［試験例１］（実施例１〜２２、比較例１〜３１、参考例１〜２）
[線毛運動機能評価試験（去痰剤（培地）＋揮発性線毛運動促進剤（気相））]
（１）評価液の調製：
コントロール溶液：１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ社製：Ｄ６０４６）
去痰剤評価液：コントロール溶液０．９９ｇに対し、試験物質を０．００１質量％から０．１質量％含有するエタノール溶液０．０１ｇを添加して被検液（試験物質濃度は０．１質量ｐｐｍから１０質量ｐｐｍ）とした。なお、生薬エキスの場合、エタノールの代わりに水を用い同様に調製した。
試験物質が医薬成分の場合は、カルボシステイン（和光純薬工業株式会社製）を用いた。生薬エキスの場合は生薬より精製して用いた。生薬そのものは市販品を用いてもよく、各生薬粉末５０ｇに対して５０体積％エタノールを５０ｍＬ加え、常温で一週間静置した。３回の抽出作業を繰り返し、３回分の抽出液をまとめて吸引ろ過により、残渣を除去した。上清の溶媒はエバポレーターを用いて除去（エタノールを除去）し、溶媒が水だけになったら、冷メタノールを用いて、上清を凍結させ、濃縮乾固した。調製された粉末は速やかにバイアル瓶に入れ、デシケーター内で保存した。
揮発性線毛運動促進剤評価液：試験物質（市販品）をエタノールに１質量％溶解させた。
揮発性物質評価液：試験物質（精製試薬：市販品）をエタノールに１質量％溶解させた。
（２）粘膜片調製
ウサギ（ＮＺＷ、１６−２１週齢、オス）から摘出した気管を生理食塩水中でシート状に切り開き、ピンセットを用いて粘膜片を剥離した。得られた粘膜片を、メスを用いて適度な大きさに細片化し、１０質量％子牛血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコイーグルＭＥＭ（シグマ社製：Ｄ６０４６）の中に入れ、５体積％炭酸ガス条件にて、３７℃でインキュベートした。
（３）線毛運動解析：
得られた前培養した粘膜片を６穴培養皿の連続する２つのウェルの片側に入れ、気相と粘膜片が接するように量を調整しながら、コントロール液を加え密封し、３０℃で１０分程度馴化させた。６穴培養皿のウェルのうち、空の４つのウェルはポリエチレンフィルムで蓋をした。
その後、２０倍の対物レンズを用いた透過型倒立顕微鏡（オリンパスＩＸ７０）にて線毛部分を観察し、アクアコスモス（浜松ホトニクス製）を用いて一定区画の画像情報を７０Ｈｚ程度の頻度で連続的にコンピューターに取り込んだ。すなわちアクアコスモス（浜松ホトニクス製）は、カメラ（Ｃ−４７４２−９５（浜松ホトニクス製））をオリンパスＩＸ７０に取り付けたものであり、以下の設定で観察した。
露光時間:０．０００５〜０．００１秒
ゲイン:２５５（最大）
サブアレイ：６４×６４（最小）
サブアレイ内ビニング：１×１
サンプリング間隔：０．０１４ｓｅｃ（約７１Ｈｚ）
サンプリング数：１０２４（約１５秒間）
周波数解析用ＲＯＩ：２５ヵ所（サイズ：３×３ｐｉｘｅｌ）
１０２４点の画像情報の輝度変化を数値データとして保存した後、フーリエ変換することで線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を測定した。
去痰剤単独の効果を評価する場合、まずコントロール溶液にて測定し（コントロールＣＢＦ）、続いて去痰剤評価液に交換し、１０分間静置した後、同様にＣＢＦを測定した（去痰剤ＣＢＦ）。
揮発性線毛運動促進剤単独の効果を評価する場合、コントロールＣＢＦを測定後、粘膜片の隣のウェルに、密封状態のまま揮発性線毛運動促進剤評価液を５０ｍｇ滴下した。試験物質を気化させ、粘膜片を入れたウェルまで充満させた。本試験例における培養皿内の空間体積は、約５０ｍＬであることから、エタノールに溶解した試験物質がすべて気化した場合の濃度は、例えばエタノールに１質量％溶解した場合には１０ｐｐｍである。１５分後、同様に線毛の運動周波数（ＣＢＦ値）を測定した（揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦ）。
【００１８】
コントロールＣＢＦ値に対する去痰剤ＣＢＦ、あるいは揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦの比率を線毛運動活性比として評価した。得られた線毛運動活性比は表中に示した。
【００１９】
線毛運動活性比（去痰剤）＝去痰剤ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
線毛運動活性比（揮発性線毛運動促進剤）＝揮発性線毛運動促進剤ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
去痰剤と揮発性線毛運動促進剤の併用効果は、コントロールＣＢＦを測定後、去痰剤評価液に交換して密封後、密封状態のまま揮発性線毛運動促進剤評価液を５０ｍｇ滴下した。１５分後、ＣＢＦを測定した（併用ＣＢＦ）。その場合の線毛運動活性比（併用）は、コントロールＣＢＦに対する相対値で評価した。得られた線毛運動活性比は表中に示した。
線毛運動活性比（併用）＝併用ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ
【００２０】
【表１】
【００２１】
表１に示すように、去痰剤のカルボシステイン単独、あるいは揮発性線毛運動促進剤の２−トリデセン−１−オール単独では線毛運動活性比が頭打ちとなる濃度において、両者を併用すると、さらに高い線毛運動活性比が得られた。
【００２２】
【表２】
【００２３】
さらに、表２に示すように、去痰剤のカルボシステインと揮発性線毛運動促進剤のテトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンとを併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００２４】
【表３】
【００２５】
一方、表３に示すように、揮発性物質であるリラールの線毛運動活性比は、単独では０．９０、カルボシステインとの併用系でも０．９９であり、比較例１のコントロールの線毛運動活性比１．００よりも低い値であった。
【００２６】
【表４】
【００２７】
去痰剤は、線毛運動とは異なる薬理作用（粘液分泌促進など）により気道異物を除去するものもあり、必ずしも線毛運動を高めるわけではない。表４に示すように、生薬エキスの去痰剤である、カンゾウエキス、マオウエキス、キキョウエキス、アセンヤクエキスでは線毛運動促進効果はごくわずかであったが、２−トリデセン−１−オールと併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００２８】
【表５】
【００２９】
表５に示すように、比較例２９〜３１の去痰剤単独では、線毛運動を高めるものではなく、線毛運動を抑制するものであった。しかしながら、実施例２０〜２２に示すように、去痰剤に揮発性線毛運動促進剤を併用することにより線毛運動活性比を顕著に高める、あるいは、線毛運動を抑制する去痰剤と揮発性線毛運動促進剤を併用することにより線毛運動活性比の低下を防ぐことを確認した。
【００３０】
［試験例２］（実施例２３〜４１、比較例３２〜５１）
[線毛運動機能評価試験（去痰剤（培地）＋揮発性線毛運動促進剤（培地））]
（１）被検液の調製：
コントロール溶液：試験例１と同様
被検液：コントロール溶液０．９９ｇに対し、去痰剤０．０１質量％または０．１質量％と揮発性線毛運動促進剤０．１質量％を含有するエタノール溶液０．０１ｇを添加して被検液（去痰剤濃度は、１質量ｐｐｍ（表６）または１０質量ｐｐｍ（表７）、揮発性線毛運動促進剤濃度はそれぞれ１０質量ｐｐｍ）とした。なお、生薬エキスの場合、エタノールの代わりに水を用い同様に調製した。生薬エキスは、試験例１に記載した方法と同様に調製した。すなわち、各生薬粉末５０ｇに対して５０体積％エタノールを５０ｍＬ加え、常温で一週間静置した。３回の抽出作業を繰り返し、３回分の抽出液をまとめて吸引ろ過により、残渣を除去した。上清の溶媒をエバポレーターを用いて除去（エタノールを除去）し、溶媒が水だけになったら、冷メタノールを用いて、上清を凍結させ、濃縮乾固した。調製された粉末は速やかにバイアル瓶に入れ、デシケーター内で保存した。
（２）線毛運動解析：
試験例１（２）と同様に調製した粘膜片を３５ｍｍシャーレに移し、コントロール液中に３０℃のステージ上で約１０分馴化させた。その後、試験例１（３）と同様にＣＢＦを測定した（コントロールＣＢＦ）、続いて被検液に交換し、１０分間静置した後、同様にＣＢＦを測定した（被検液ＣＢＦ）。
（３）線毛運動活性比の算出
コントロールＣＢＦに対する被検液ＣＢＦの比率を線毛運動活性比
（線毛運動活性比＝被検液ＣＢＦ／コントロールＣＢＦ）
とした。得られた線毛運動活性比を表中に示した。
【００３１】
【表６】
【００３２】
表６に示すように、線毛運動を促進する揮発性線毛運動促進剤とカルボシステインを併用すると高い線毛運動活性比が得られた。
【００３３】
【表７】
【００３４】
表７に示すように、本発明の揮発性線毛運動促進剤は、液中で去痰剤と同時に作用させることによっても、線毛運動促進効果が確認された。
【００３５】
以下に、本発明の気道異物除去製剤を配合したキャンディの処方例を示す。処方例１、処方例２は、いずれも優れた気道異物除去効果が確認された。
【００３６】
処方例１ キャンディ
【表８】
【００３７】
処方例２ キャンディ
【表９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
【請求項２】
揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１記載の気道異物除去用製剤。
【請求項３】
去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は２記載の気道異物除去用製剤。
【請求項４】
揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を用いる気道異物除去方法。
【請求項５】
揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である請求項４記載の気道異物除去方法。
【請求項６】
去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である請求項４又は５記載の気道異物除去方法。
【請求項１】
揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を含有する気道異物除去用製剤。
【請求項２】
揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１記載の気道異物除去用製剤。
【請求項３】
去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は２記載の気道異物除去用製剤。
【請求項４】
揮発性線毛運動促進剤及び去痰剤を用いる気道異物除去方法。
【請求項５】
揮発性線毛運動促進剤が、２−トリデセン−１−オール、テトラハイドロゲラニオール、デュピカル、イソシクレモン、シトラールジメチルアセタール、アセトフェノン、カルボン、ヘキシルシクロペンタノン、メントフラン、ブルボーネン、β−メチル−デカラクトン、ムスコン、イソオイゲノール、γ−ドデカラクトン、γ−ヘキサデカラクトンからなる群より選ばれる１種以上である請求項４記載の気道異物除去方法。
【請求項６】
去痰剤が、アセチルシステイン、エチルシステイン、メチルシステイン、カルボシステイン、カンゾウ、マオウ、キキョウ、アセンヤク、キョウニン、セネガ、ニンジンからなる群より選ばれる１種以上である請求項４又は５記載の気道異物除去方法。
【公開番号】特開２０１１−２５６１５１（Ｐ２０１１−２５６１５１Ａ）
【公開日】平成２３年１２月２２日（２０１１．１２．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１３４０７６（Ｐ２０１０−１３４０７６）
【出願日】平成２２年６月１１日（２０１０．６．１１）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１２月２２日（２０１１．１２．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月１１日（２０１０．６．１１）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
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