活性成分のための保護親水コロイド
部分的に脱アミド化されたイネ胚乳タンパク質または単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されているイネ胚乳タンパク質が、脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための新規の親水コロイドとして使用される。本発明はさらに、そのイネ胚乳タンパク質および少なくとも１つの脂溶性活性成分／着色剤を含む組成物ならびにそれらの製造、イネ胚乳タンパク質それ自体そしてその製造をも含む。これらの組成物は、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアまたは医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のために使用される。本発明は、これらの使用、およびそれぞれかかるイネ胚乳タンパク質およびかかる組成物を含有する、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物にも関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、イネ胚乳タンパク質が単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための新規の保護親水コロイドとしてのイネ胚乳タンパク質の使用に関する。さらに、本発明は、部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および少なくとも１つの脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む組成物およびそれらの製造、ならびに部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質それ自体およびその製造にも関する。さらに本発明は、それぞれかかる部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質およびかかる組成物を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための使用に関する。
【０００２】
活性成分、特に脂溶性活性成分または脂溶性着色剤は、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物に、それ自体で添加されないことが多いが、化学安定性、（水）溶解性、易流動性、および徐放などの特性を増強する理由で、ヒドロプロテクト性コロイド中の活性成分調合物の形態で添加される。既知のヒドロプロテクト性コロイドは、例えば異なる起源（家禽、ウシ、ブタ、魚）のゼラチンおよびデンプンである。動物起源のヒドロプロテクト性コロイドは、宗教上のまたはアレルゲン性の理由から所望されないことが多く、デンプンベースのヒドロプロテクト性コロイドは、グルテンおよびコーンを含まない製品に関心のある消費者に好まれないため、代案のヒドロプロテクト性コロイドに対する継続する必要性がある。
【０００３】
イネ胚乳タンパク質は、栄養的および低アレルギー性として認識され、したがって活性成分調合物のための保護親水コロイドの適切な代案の起源であることができる。しかし中性ｐＨにおけるイネ胚乳タンパク質の高い非溶解性および機能不良は、食物および医薬製品中の機能性成分としてのその産業上の利用を制限する。本発明はこれらの制限を克服し、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を、脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の調合物のための保護親水コロイドとして取込んでいる。
【０００４】
米タンパク質は、トウモロコシおよび小麦をはじめとするその他の穀類と比較して栄養価が上位にあり、したがって食物成分として莫大な潜在的用途を有すると考えられる。穀物タンパク質は、必須アミノ酸システインおよびメチオニンに富む。リジンは、穀物タンパク質中の主要な制限アミノ酸であるが、米はその他の穀物タンパク質（小麦２．３、トウモロコシ２．５ｇ／１６ｇＮ）よりも多くのリジン（３．８ｇ／１６ｇＮ）を含有する（下に引用する参考文献４を参照されたい）。米は概して一般的な穀物（小麦１０．６％、トウモロコシ９．８％、大麦１１．０％、雑穀１１．５％）中で、最も低いタンパク質含量（７．３％）を有すると見なされるが、米タンパク質の正味タンパク質利用率（７３．８％）は穀物中で最も高い（小麦５３．０％、トウモロコシ５８．０％、大麦６２．０％、雑穀５６．０％）。
【０００５】
米タンパク質の単離はその他の穀物タンパク質と比較して困難であり、したがって高価である。主要米タンパク質であるグルテリンは疎水性であり、ジスルフィド結合によって架橋している。抽出されるタンパク質は、本来高度に不溶性であり、タンパク質単離で使用される条件はそれらの溶解性をさらに低下させ、したがって機能性成分としての応用を制限してきた。高タンパク質米製品は、アルカリ抽出とそれに続くタンパク質の等電ｐＨでの沈殿によって、米粉から得ることができる。α−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、およびプルラナーゼなどのデンプン加水分解酵素を使用して、デンプンを可溶化および除去することで、米粉中のタンパク質を分離することが多い。デンプン加水分解酵素に加えて、米タンパク質濃縮物中のタンパク質含量をさらに増大させるために、セルラーゼおよびヘミセルラーゼ酵素が使われている。しかし適切な抽出方法、およびこのような単離物の機能性に関する情報は限られている。認可された食品等級酵素および薬品を使用した効率的な抽出方法は、米タンパク質の商業生産および応用にとって必須である。
【０００６】
この必要性は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む本発明の組成物により満たされる。
【０００７】
［背景技術］
１．「米国穀物化学者協会の承認方法（Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ）」，第８版，１９９０年度ＡＡＣＣ方法，４４〜１６頁および４６頁〜１２頁．Ｔｈｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：ミネソタ州セントポール（Ｓｔ．Ｐａｕｌ）．
２．アシュリ（Ａｃｈｏｕｒｉ），Ａ．，ジョイス・イレーヌ・ボウイ（Ｊｏｙｃｅ Ｉｒｅｎｅ Ｂｏｙｅ），Ｊ．Ｉ．，ヤイラヤン（Ｙａｙｌａｙａｎ）Ｖ．Ａ．，およびイエボア（Ｙｅｂｏａｈ），Ｆ．Ｋ．：「糖化大豆１１Ｓグリシニンの機能特性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｇｌｙｃａｔｅｄ Ｓｏｙ １１Ｓ Ｇｌｙｃｉｎｉｎ）」Ｊ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．２００５年，第７０号（４），２６９頁．
３．バニエル（Ｂａｎｉｅｌ），Ａ．，カエル（Ｃａｅｒ），Ｄ．，コラス（Ｃｏｌａｓ），Ｂ．およびグエグエン（Ｇｕｅｇｕｅｎ），Ｊ．：「エンドウ豆（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）由来の１１ｓ貯蔵たんぱく質のグリコシル化誘導体の機能特性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ｔｈｅ １ １ｓ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ｐｅａ（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．））」，Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９２年，第４０号，２００〜２０５頁．
４．ベラ（Ｂｅｒａ），Ｍ．Ｂ．；ムーカジ（Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ），Ｒ．Ｋ．，「米糠タンパク質濃縮物の溶解度、乳化、および起泡特性（Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ，ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ，ａｎｄ ｆｏａｍｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．１９８９年，第５４号（１），１４２〜１４５頁。
５．カブラ（Ｃａｂｒａ），Ｖ．アレグイン（Ａｒｒｅｇｕｉｎ），Ｒ．，（ヴァスケス・デュオー（Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｄｕｈａｌｔ），Ｒ．ファレス（Ｆａｒｒｅｓ），Ａ．：「アルカリ脱アミド化がＺ１９α−ゼインの構造、表面疎水性および乳化特性に及ぼす効果（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｕｒｆａｃｅ Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ，ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｚ１９ ａｌｐｈａ−Ｚｅｉｎ）Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２００７年，第５５号，４３９〜４４５頁．
６．加藤，Ａ．，佐々木，Ｙ．，古田，Ｒ．，および小林，Ｋ．：「オボアルブミン−デキストラン混合物の制御された乾燥加熱により調製される機能的タンパク質多糖類コンジュゲート（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｄｒｙ−ｈｅａｔｉｎｇ ｏｆ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ−ｄｅｘｔｒａｎ ｍｉｘｔｕｒｅｓ）」．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９０年，第５４号、１０７〜１１２頁．
７．加藤，Ａ．，下川，Ｋ．，および小林，Ｋ．：「プロナーゼ消化とそれに続くデキストラン共役による不溶性グルテンの機能特性の改善（Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ ｇｌｕｔｅｎ ｂｙ Ｐｒｏｎａｓｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｄｅｘｔｒａｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９１年，第３９号，１０５３〜１０５６頁．
８．加藤，Ｙ．，青木，Ｔ．，加藤，Ｎ．，中村，Ｒ．，および松田，Ｔ．：「アミノ−カルボニル反応によるグルコース−６−ホスフェートを用いたオボアルブミンの変性、タンパク質の熱安定性および乳化活性の改善（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｗｉｔｈ ｇｌｕｃｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｙ ａｍｉｎｏ−ｃａｒｂｏｎｙｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｅａｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９５年，第４３号，３０１〜３０５頁．
９．キンセラ（Ｋｉｎｓｅｌｌａ），Ｊ．Ｅ．：「食品中のタンパク質の機能特性：調査（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｆｏｏｄｓ：ａ ｓｕｒｖｅｙ）」．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｎｕｔｒ．１９７６年，第８号（４），１９〜８０頁．
１０．中村，Ｓ，加藤，Ａ，小林，Ｋ．：「優れた乳化特性と抗菌効果を有する二機能性リゾチーム−ガラクトマンナン共役物（Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｌｙｓｏｚｙｍｅ−ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｈａｖｉｎｇ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ）」．Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ １９９２年，第４０号，７３５〜９頁．
１１．中村，Ｓ．，斎藤，Ｍ．，後藤，Ｔ．，佐伯，Ｈ．，小川，Ｍ．，後藤，Ｇ．，ゴーヤ（Ｇｏｈｙａ），Ｙ．，およびフワン（Ｈｗａｎｇ），Ｊ．−Ｋ．：「天然に発生するメイラード反応を通したリゾチーム及びキシログリカン加水分解物からの生物学的に活性なネオ糖たんぱく質の急速形成（Ｒａｐｉｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｎｅｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｌｙｓｏｚｙｍｅ ａｎｄ ｘｙｌｏｇｌｕｃａｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｎｕｔｒ．２０００年，第５号，６５〜６９頁．
１２．ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ），Ｐ．Ｍ．，ペターセン（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ），Ｄ．，およびダンブマン（Ｄａｍｂｍａｎｎ），Ｃ．：「食品たんぱく質の加水分解度を判定するための改良型方法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．２００１年，第６６号（５），６４２〜６４６頁．
１３．ニールセン（Ｎｉｅｌｓｏｎ），Ｐ．Ｍ．：「タンパク質加水分解物の機能性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ）」．：ダモダラン（Ｄａｍｏｄａｒａｎ），Ｓ，パラフ（Ｐａｒａｆ），Ａ，編．「食品タンパク質とその応用（Ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」．第１版，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．１９９７年，４４３〜７２頁．
１４．オリバー（Ｏｌｉｖｅｒ），Ｃ．Ｍ．，メルトン（Ｍｅｌｔｏｎ），Ｌ Ｄ．，およびスタンレー（Ｓｔａｎｌｅｙ），Ｒ．Ａ．：「メイラード反応を介した新規の機能性を有するタンパク質の作成（Ｃｒｅａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｎｏｖｅｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｖｉａ ｔｈｅ Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）」．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ中のレビュー、２００６年，第４６号，３３７〜３５０頁．
１５．パラマン（Ｐａｒａｍａｎ，）Ｉ．，ヘティアラキ（Ｈｅｔｔｉａｒａｃｈｃｈｙ），Ｎ．Ｓ．，シーファー（Ｓｃｈａｅｆｅｒ），Ｃ．，およびベック（Ｂｅｃｋ）．Ｍ．Ｉ．：「酵素変性イネ胚乳タンパク質の疎水性、溶解度および乳化特性（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ，Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒｉｃｅ Ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ）」．Ｃｅｒｅａｌ ｃｈｅｍ．に提出、２００７年，原稿ＩＤ．ＣＣ１０−０６−０１２５
１６．ピアス（Ｐｅａｒｃｅ），Ｋ．Ｎ．；キンセラ（Ｋｉｎｓｅｌｌａ），Ｊ．Ｅ．「タンパク質の乳化特性：比濁法技術の評価（Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９７８年，第２６号，７１６〜７２２頁．
１７．ＳＡＳ（スタティスティカル・アナリシス・システム），２００２年，ＪＭＰ（登録商標）ユーザー・ガイド（Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ），バージョン５．ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．Ｃａｒｙ，ＮＣ．
１８．シュウェンク（Ｓｃｈｗｅｎｋｅ）Ｋ．Ｄ．：「［食品タンパク質とその応用］中、第１３章、タンパク質の酵素的および化学的変性（Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｈａｐｔｅｒ １３ ｉｎ“Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”）」Ａ．ダモダラン（Ｄａｍｏｄａｒａｎ）およびＡ．パラフ（Ｐａｒａｆ）編，１９９７年，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ．
１９．ウェン（Ｗｅｎ），Ｔ．Ｎ．；リュース（Ｌｕｔｈｅ），Ｄ．Ｓ．、「米グルテリンの生化学的特性決定（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｇｌｕｔｅｌｉｎ）」．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９８５年，７８，１７２〜１７７頁。
【０００８】
［発明の詳細な説明］
［発明の組成物］
本発明の組成物は、固体組成物、すなわち安定した水溶性または水分散性粉末であっても良く、またはそれらは液体組成物、すなわち前述の粉末の水性コロイド溶液または水中油分散体であってもよい。水中油エマルジョンであってもよく、または懸濁された、すなわち固体粒子、および乳化された、すなわち液体小滴の混合物を特徴としてもよい安定化水中油分散体は、下述の方法によって、または類似した様式によって調製されてもよい。
【０００９】
より詳細には、本発明は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質のマトリクス中に１つ以上の脂溶性活性成分および／または１つ以上の脂溶性着色剤を含む、粉末形態の安定した組成物に関する。
【００１０】
好ましくは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の量は、組成物総量を基準にして、１〜７０重量％、より好ましくは５〜５０重量％、さらにより好ましくは１０〜４０重量％、最も好ましくは１０〜２０重量％であり（２０重量％が最も好ましい量である）、かつ／または脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の量は０．１〜９０重量％、好ましくは１〜８０重量％、より好ましくは１〜２０重量％である。トコフェロールおよび／またはパルミチン酸アスコルビルなどの追加的アジュバントおよび／または賦形剤が存在する場合、それらは組成物総量を基準にして、０．０１〜５０重量％の量、好ましくは０．１〜３０重量％の量、より好ましくは０．５〜１０重量％の量で存在する。
【００１１】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質］
本発明の好ましい実施態様では、イネ胚乳タンパク質は、その製造について下述する変性イネ胚乳タンパク質である。
【００１２】
特に好ましい米タンパク質は、アルカリ抽出（特にアルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）での酵素変性）、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類からなる群から（特に単糖類および多糖類からなる群から）選択される少なくとも１つの化合物での部分的架橋、遠心分離および限外ろ過といったステップによって得られる米タンパク質である。さらに好ましい米タンパク質は、アルカリ抽出、（特にアルカラーゼでの酵素変性）、部分的脱アミド化、遠心分離および限外ろ過によって得られる米タンパク質である。
【００１３】
さらなる用途のために必要な場合は、このようにして得られた変性イネ胚乳タンパク質を乾燥させてもよい。
【００１４】
本発明の好ましい実施形態においては、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されている使用されるイネ胚乳タンパク質は、≧０．２、好ましくは≧０．４５、より好ましくは≧０．５、さらに一層好ましくは０．５〜１．０のエマルジョン活性を有する。エマルジョン活性の判定は、実施例１に記述される通りである。本発明は同様に、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているこれらのイネ胚乳タンパク質自体にも言及する。
【００１５】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の量は、以下で開示する通り組成物の総量を基準として１〜７０重量％、好ましくは５〜５０重量％、より好ましくは１０〜４０重量％、最も好ましくは１０〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００１６】
［脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤］
脂溶性活性成分は、好ましくは薬理学的効果のある成分、または一般にヒトまたは動物の身体に健康上の利点を提供する成分である。本発明に関連して「脂溶性」（脂溶性活性成分／脂溶性着色剤）は、その化合物が室温および大気圧下で水にほとんど溶解しないことを意味する。
【００１７】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤は、好ましくはカロテンおよび構造的に関連したポリエン化合物、脂溶性ビタミン、補酵素Ｑ１０、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの多価不飽和脂肪酸とそのエステル（（同一または異なる脂肪酸を含有する）エチルエステルまたはトリグリセリドなど）、ポリ不飽和脂肪酸に富んだモノ−、ジ−、トリグリセリド、脂溶性ＵＶ−Ａフィルター、ＵＶ−Ｂフィルター、ならびにそれらと特にＣ１〜２０炭酸とのエステルなどのそれらの生理学的に許容可能な誘導体、およびそれらの任意の混合物からなる群から選択される。
【００１８】
最も好ましい脂溶性ビタミンは、ビタミンＡまたはＥである。
【００１９】
カロテンおよび構造的に関連したポリエン化合物の好ましい例は、α−カロテン、β−カロテン、８’−アポ−β−カロテナール、エチルエステルなどの８’−アポ−β−カロテン酸エステル、カンタキサンチン、アスタキサンチン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、クロセチン、α−ゼアカロテン、β−ゼアカロテンなどのカロテノイド、ならびにそれらと特にＣ１〜２０炭酸とのエステルなどのそれらの生理学的に許容可能な誘導体、およびそれらの任意の混合物である。
【００２０】
最も好ましいカロテノイドはβ−カロテンである。
【００２１】
「β−カロテン」という用語は、全てのシスならびに全てのトランス異性体、および全ての可能な混合したシス−トランス−異性体を包含する。その他のカロテノイドについても同様である。
【００２２】
「ゼアキサンチン」という用語は、天然Ｒ，Ｒ−ゼアキサンチン、ならびにＳ，Ｓ−ゼアキサンチン、メソ−ゼアキサンチンおよびそれらの任意の混合物を包含する。ルテインについても同様である。
【００２３】
（脂溶性）活性成分は天然起源であってもよく、すなわち植物から単離／抽出されて純化および／または濃縮されてもよく、ならびに化学および／または微生物学的（発酵性）経路によって合成されるものであってもよい。
【００２４】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の量は、以下で開示する通り組成物の総量を基準として０．１〜９０重量％、好ましくは１〜８０重量％、より好ましくは１〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００２５】
［さらなる構成要素］
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および活性成分以外に、本発明の組成物は、好ましくはさらに、少なくとも１つの水溶性抗酸化剤および／または脂溶性抗酸化剤を含有していてよい。水溶性抗酸化剤および／または脂溶性抗酸化剤の量は、組成物の総量を基準として０．１〜１０．０重量％好ましくは０．５〜５．０重量％、より好ましくは０．５〜３．０重量％の範囲内にあってよい。
【００２６】
水溶性抗酸化剤は、例えばアスコルビン酸またはその塩、好ましくはアスコルビン酸ナトリウムであってもよく、ヒドロキシチロソール、およびオレウロペインアグリコンなどの水溶性ポリフェノールであっても、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）またはローズマリーまたはオリーブの抽出物であってもよい。
【００２７】
脂溶性抗酸化剤は、例えばｄｌ−α−トコフェロール（すなわち合成トコフェロール）、ｄ−α−トコフェロール（すなわち天然トコフェロール）、β−またはγ−トコフェロール、またはこれらの２つ以上の混合物などのトコフェロールと、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）と、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）と、エトキシキン、没食子酸プロピルと、ｔｅｒｔ．ブチルヒドロキシキノリンと、または６−エトキシ−１，２−ジ−ヒドロキシ−２，２，４−トリメチルキノリン（ＥＭＱ）、または好ましくはパルミチン酸アスコルビルまたはステアリン酸アスコルビルなどの脂肪酸のアスコルビン酸エステルであってもよい。
【００２８】
本発明の組成物は、脂肪酸のモノ−およびジグリセリド、脂肪酸のポリグリセロールエステル、レシチンと、Ｎ−アシル化アミノ酸およびそれらの誘導体、アルキルまたはアルケニルラジカルがあるＮ−アシル化ペプチド、およびそれらの塩と、硫酸アルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステル、およびそれらの誘導体および塩と、ポリオキシエチレン化アルキルまたはアルケニル脂肪エーテルまたはエステルと、ポリオキシエチレン化アルキルまたはアルケニルカルボン酸およびそれらの塩と、Ｎ−アルキルまたはＮ−アルケニルベタインと、アルキルトリメチルアンモニウムまたはアルケニルトリメチルアンモニウムおよびそれらの塩と、ポリオールアルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステルと、それらの混合物からなる群から選択される共乳化剤をさらに含有してもよい。
【００２９】
ポリオールアルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステルの好ましい例は、Ｓｅｐｐｉｃ社によりＭｏｎｔａｎｏｘ ４０ ＤＦの商品名の下に販売されるパルミチン酸ソルビタン２０ ＥＯまたはポリソルベート４０、ＩＣＩ社によりトウィーン（Ｔｗｅｅｎ）２０の商品名の下に販売されるラウリン酸ソルビタン２０ ＥＯまたはポリソルベート２０などの少なくとも２０単位の酸化エチレンでポリオキシエチレン化されたソルビタンアルキルまたはアルケニルエステル、およびモノステアリン酸ソルビタンである。
【００３０】
共乳化剤の量は、組成物の総量を基準として０〜９０重量％、好ましくは０〜５０重量％、より好ましくは０〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００３１】
本発明に従った調合物はさらに錠剤に圧搾されてもよく、単糖類、二糖類、オリゴ糖類および多糖類、グリセロール、およびトリグリセリドからなる群から選択される１つ以上の賦形剤および／またはアジュバントが添加されてもよい。
【００３２】
本発明の組成物中に存在してもよいモノ−および二糖類の好ましい例は、スクロース、転化糖、キシロース、グルコース、フルクトース、乳糖、マルトース、ショ糖および糖アルコールである。
【００３３】
オリゴ糖類および多糖類の好ましい例は、デンプン、加工デンプン、およびデンプン加水分解物である。デンプン加水分解物の好ましい例はデキストリンおよびマルトデキストリンであり、特に５〜６５個の範囲のデキストロース同等物（ＤＥ）を有するもの、および特に２０〜９５個の範囲のＤＥを有するようなグルコースシロップである。「デキストロース同等物（ＤＥ）」という用語は加水分解度を意味し、乾燥重量を基準にしてＤ−グルコースとして計算される還元糖量の基準である。尺度は、０に近いＤＥを有する天然デンプン、および１００のＤＥを有するグルコースを基準とする。
【００３４】
トリグリセリドは、適切には、植物油または脂肪、好ましくはトウモロコシ油、ヒマワリ油、ダイズ油、ベニバナ油、ナタネ油、落花生油、パーム油、パーム核油、綿実油、オリーブ油またはココナッツ油である。
【００３５】
１つまたは複数の賦形剤および／または１つまたは複数のアジュバントの量は組成物の総量を基準として０．１〜５０重量％、好ましくは０．１〜３０重量％、より好ましくは０．５〜１０重量％の範囲内にあってよい。
【００３６】
固体組成物は、ケイ酸またはリン酸三カルシウムなどの固化防止剤、および１０重量％までで通例２〜５重量％の水をさらに含んでもよい。
【００３７】
固化防止剤の量は、組成物の総量を基準として０〜５重量％、好ましくは０〜３重量％、より好ましくは０．２〜３．０重量％の範囲内であってよい。
【００３８】
［組成物の製造］
本発明の目的はまた、
Ｉ）単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の水溶液またはコロイド溶液（かかるイネ胚乳タンパク質の製造については以下で記述されている）を調製するステップと、
ＩＩ）場合によりステップＩ）で調製された溶液に、少なくとも水溶性賦形剤および／またはアジュバントを添加するステップと、
ＩＩＩ）少なくとも脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤、および場合により少なくとも脂溶性アジュバントおよび／または賦形剤の溶液または分散体を調製するステップと、
ＩＶ）ステップＩ）〜ＩＩＩ）で調製された溶液を互いに混合するステップと、
Ｖ）このようにして得られた混合物を均質化するステップと、
ＶＩ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を部分的に架橋するために架橋剤を添加するステップと、
ＶＩａ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を部分的に架橋するため、ステップＶＩ）を実施した後得られる混合物に酵素処理または熱処理を施すステップと、
ＶＩＩ）場合によりステップＶ）および／またはＶＩ）で得られた分散体を粉末に加工するステップと、
ＶＩＩＩ）場合によりステップＶＩＩ）で得られた粉末を乾燥するステップと、
ＩＸ）場合により乾燥粉末に酵素処理または熱処理を施して（変性）イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと
を含み、ただしステップＶＩ）が実施される場合、ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）の双方でなく片方のみが実施される、本発明の組成物を製造する方法である。
【００３９】
［ステップＩ］
このステップは、場合により撹拌下で、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質（製造については以下を参照のこと）に対し水を添加することによってかまたはその逆により単純に実施される。或いは、超音波処理を介して均質化を行なうことも可能であり得る。
【００４０】
好ましくは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質は、以上および以下で記述する通りの好適性で使用される。
【００４１】
［ステップＩＩ］
添加してもよい水溶性賦形剤および／またはアジュバントは、例えば単糖類、二糖類、オリゴ糖類および多糖類、グリセロールおよび水溶性抗酸化剤である。それらの例は上に示した。
【００４２】
［ステップＩＩＩ］
脂溶性活性成分および脂溶性着色剤は、上述したようなものである。
【００４３】
（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤および任意の脂溶性賦形剤およびアジュバント（ａｄｊｕｖｅｎｔｓ）は、それ自体として、またはトリグリセリドおよび／または（有機）溶剤に溶解または懸濁して使用される。
【００４４】
適切な有機溶剤は、ハロゲン化脂肪族炭化水素、脂肪族エーテル、脂肪族および環式炭酸塩、脂肪族エステルおよび環式エステル（ラクトン）、脂肪族および環式ケトン、脂肪族アルコール、およびそれらの混合物である。
【００４５】
ハロゲン化脂肪族炭化水素の例は、モノ−またはポリハロゲン化直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。特に好ましい例はモノ−またはポリ−塩素化または−ブロム化された直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。より好ましいのはモノ−またはポリ塩素化直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。最も好ましいのは塩化メチレンおよびクロロホルムである。
【００４６】
脂肪族エステルおよび環式エステル（ラクトン）の例は、酢酸エチル、酢酸イソプロピルおよびｎ−酢酸ブチル、およびγ−ブチロラクトンである。
【００４７】
脂肪族および環式ケトンの例は、アセトン、ジエチルケトンおよびイソブチルメチルケトン、およびシクロペンタノンおよびイソホロンである。
【００４８】
環式炭酸塩の例は、特に炭酸エチレンおよび炭酸プロピレンおよびそれらの混合物である。
【００４９】
脂肪族エーテルの例は、アルキル部分が１〜４個の炭素原子を有するジアルキルエーテルである。好ましい一例はジメチルエーテルである。
【００５０】
脂肪族アルコールの例は、エタノール、イソプロパノール、プロパノール、およびブタノールである。
【００５１】
さらに溶剤として、任意の油（トリグリセリド）、オレンジ油、リモネンなどおよび水が使用できる。
【００５２】
添加してもよい脂溶性賦形剤および／またはアジュバントは、例えばトウモロコシ油、モノ−または脂肪酸のジグリセリド、ポリグリセロール脂肪酸、および中鎖トリグリセリド（「ＭＣＴ」）である。
【００５３】
［ステップＩＶ］
本発明の代案の方法ではステップＩＩＩ）が実施されないが、脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤および任意の脂溶性賦形剤および／またはアジュバントが、ステップＩ）またはＩＩ）の溶液に直接添加される。
【００５４】
［ステップＶ」
均質化のためには、高圧均質化、高剪断乳化（ロータ・ステータシステム）、微粒子化（ｍｉｃｒｏｎｉｓａｔｉｏｎ）、湿潤製粉、マイクロチャネル（ｍｉｃｒｏｃｈａｎｅｌ）乳化、膜乳化または超音波処理などの従来の技術を応用できる。食物、飲料、動物飼料、化粧品または医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のために、（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤を含有する組成物の調製のために使用されるその他の技術については、その内容を参照によって本明細書に援用するＥＰ−Ａ ０ ９３７ ４１２号明細書（特に段落［０００８］、［００１４］、［００１５］、［００２２］から［００２８］）、ＥＰ−Ａ １ ００８ ３８０号明細書（特に段落［０００５］、［０００７］、［０００８］、［００１２］、［００２２］、［００２３］から［００３９］）および米国特許第６，０９３，３４８号明細書（特に２欄２４行から３欄３２行、３欄４８行から６５行、４欄行５３行から６欄６０行）で開示される。
【００５５】
［ステップＶＩ］
架橋剤は、好ましくは還元糖、糖タンパク質、およびグリコペプチドからなる群から選択される。したがって（変性）イネ胚乳タンパク質と、糖タンパク質／グリコペプチドの糖または糖部分との分子間架橋が形成する。架橋剤の好ましい例としては、単糖類（フルクトース、グルコース、ガラクトース、キシロース）、二糖類（しょ糖、乳糖）、オリゴ糖類（デキストリン）および多糖類（キサンタンガム、ペクチン）があり、最も好ましいのは、フルクトース、グルコースおよびキサンタンガムである。
【００５６】
糖タンパク質は、タンパク質に共有結合した炭水化物（またはグリカン）を含有する化合物である。炭水化物は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類またはそれらの誘導体（例えば、スルホまたはホスホ置換）の形をしていてよい。
【００５７】
糖タンパク質の好ましい例は、卵アルブミン、牛乳カゼインである。
【００５８】
糖ペプチドは、Ｌおよび／またはＤ−アミノ酸からなるオリゴペプチドに連結された炭水化物からなる化合物である。糖アミノ酸は、あらゆる種類の共有結合によって単一のアミノ酸に付着された糖類である。
【００５９】
糖ペプチドの好ましい例としては、鉄結合糖ペプチドである牛乳ラクトフェリンがある。
【００６０】
したがって、同時係属中のＰＣＴ／ＥＰ２００６／０１１８７３号明細書とは対照的に、ここでは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質は、さらに、還元糖、糖タンパク質または糖ペプチドからなる群から選択された少なくとも１つの化合物と部分的に架橋されていてよい。
【００６１】
［ステップＶＩａ］
架橋は、上述のように架橋剤をさらに含有する混合物を熱処理してメイラード型反応において糖とタンパク質との架橋を引き起こし、すなわち好ましくは約３０〜約１６０℃の温度、より好ましくは約７０〜約１００℃の温度、最も好ましくは約８０〜約９０℃の温度で熱的に処理して達成できる。
【００６２】
架橋は、タンパク質の利用可能なアミノ基と単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）のカルボニル基との間の初期縮合の結果として得られる酵素反応または非酵素反応である。架橋は、乳化、封入の改善といったようなタンパク質の物理化学特性および機能特性を改変させるために使用されている１つの特異的な型の変性である。
【００６３】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは架橋剤で部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質のさらなる部分的架橋は、架橋酵素（アシルトランスフェラーゼ、ＥＣ２．３、例えばトランスグルタミナーゼ、ＥＣ２．３．２．１３、タンパク質−グルタミン：γ−グルタミルトランスフェラーゼ）での処理によって、すなわち約０℃〜約７０℃好ましくは約２０℃〜約４０℃の温度で適切に実施される酵素処理によっても達成可能である。好ましくは、ステップＶＩａ）に従った酵素処理は、架橋酵素、特にトランスグルタミナーゼでの処理である。
【００６４】
トランスグルタミナーゼの場合、酵素的架橋はε−（γ−グルタミル）−リジンイソペプチド結合の形成によって、安定したタンパク質含有多糖類網目状組織をもたらす。酵素的架橋のためには、糖タンパク質またはグリコペプチドの使用が好ましい。
【００６５】
親油性部分の組み込みのため、メイラード型反応において糖とタンパク質の架橋を引き起こす熱処理、および酵素的架橋の双方の技術が使用でき、組成物の乾燥形態（ステップＩＸ）、または水溶液または懸濁液（ステップＶＩａ）中のどちらかで実施できる。酵素的架橋は、好ましくは水溶液または懸濁液中で実施される。
【００６６】
［ステップＶＩＩ］
水中油分散体であるこのようにして得られた分散体は、噴霧乾燥、流動床顆粒化と組み合わさった噴霧乾燥（後者の技術は一般に流動化噴霧乾燥またはＦＳＤとして知られている）によって、または噴霧されたエマルジョン小滴がデンプン、ケイ酸カルシウム、および二酸化ケイ素などの吸収材の床に捕捉されて引き続いて乾燥される粉末捕捉技術などの任意の従来の技術を使用して、有機溶剤（存在する場合）の除去後に、例えば乾燥粉末などの固体組成物に転換できる。
【００６７】
噴霧乾燥は、約１００〜約２５０℃、好ましくは約１５０℃〜約２００℃、より好ましくは約１６０〜約１９０℃の入口温度、および／または約４５〜約１６０℃、好ましくは約５５〜約１１０℃、より好ましくは約６５〜約９５℃の出口温度（製品温度）で実施されてもよい。
【００６８】
［ステップＶＩＩＩ］
ステップＶＩＩで得られた粉末の乾燥は、好ましくは≦１００℃の温度、好ましくは２０〜１００℃の温度、より好ましくは６０〜７０℃の温度で実施される。乾燥が真空中で実施される場合、温度はより低い。
【００６９】
［ステップＩＸ］
熱処理を通じた架橋は、ステップＶＩａについて既に上述したようにして実施される。酵素処理についても同様であるが、好ましくは溶液／懸濁液中で実施される。
【００７０】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の製造］
本発明は同様に、米糠が精粉前に除去されており、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されているかまたは粉砕米から出発して部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を製造する方法において、
ａ）粉砕米の水溶液または懸濁液を調製し、製粉前に米糠が除去されて溶液または懸濁液が好ましくは水溶液または懸濁液総量を基準にして０．１〜３０重量％、好ましくは１０〜１５重量％の乾燥質量含量を有するステップと、
ｂ）場合により粉砕米の非タンパク質部分またはタンパク質部分を除去してイネ胚乳タンパク質を得るステップであって、米糠が製粉前に除去されるステップと、
ｃ）精粉前に米糠が除去されている粉砕米のタンパク質部分を、メイラード型の反応において、粉砕米を単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に反応させるかまたは粉砕米のタンパク質部分を部分的に脱アミド化させることによって変性させて、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｄ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を単離するステップと、
ｅ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されるイネ胚乳タンパク質を固体形態へと加工するステップと；
を含む方法にも関する。
【００７１】
［ステップａ）］
製粉前に米糠が除去された粉砕米はまた、「米粉」の表現の下に知られている。
【００７２】
このステップは、場合により米粉が完全に分散するまで激しく（機械的撹拌機で）撹拌しながら、または米粉懸濁液をホモジナイザーで例えば室温で５分間均質化して、単に米粉に水を添加して、または水に米粉を添加して実施される。
【００７３】
［ステップｂ）］
ステップｂ）は、パラマン，Ｉ．，ヘティアラキ，Ｎ．Ｓ．，シーファー，Ｃ．，およびベック（Ｂｅｃｋ），Ｍ．Ｉ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．，２００６年，第８３号（６），６６３〜６６７頁：「化学および酵素法により抽出されたイネ胚乳タンパク質の物理化学特性（Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ）」により記述されている通りに実施してよい。
【００７４】
［非タンパク質部分の除去］
ステップｂ）は、好ましくは米粉をいかなるｐＨ調節もなしに（ｐＨ６〜７）非タンパク質分解酵素により、例えば０．５％ターマミル（Ｔｅｒｍａｍｙｌ）（登録商標）水性懸濁液により温度９０℃で２時間、次に０．１％セルラーゼ水性懸濁液により温度５０℃で３０分間処理して酵素を不活性化して、米粉のタンパク質部分から非タンパク質部分を分離し除去することによって行われてもよい。
【００７５】
好ましい非タンパク質分解酵素の例は、α−アミラーゼなどのデンプン分解酵素、およびセルラーゼ、すなわちセルロース分解酵素、およびそれらの混合物である。α−アミラーゼの好ましい例は、米国のノボ・ノルディスク・バイオケム・ノース・アメリカ・インコーポレーテッド（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．）から市販されるターマミル（登録商標）１２０、タイプＬである。その他の好ましい例は、米国のノボ・ノルディスク・バイオケム・ノース・アメリカ・インコーポレーテッドから市販されるＬｉｑｕｚｙｍｅ（登録商標）Ｓｕｐｒａ、日本国名古屋市（Ｎａｇｏｙａ，Ｊａｐａｎ）の天野製薬株式会社（Ａｍａｎｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）から市販されるアミラーゼＳ「アマノ」３５Ｇ、米国のジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッド（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ（ＵＳＡ））から市販されるＭｕｌｔｉｆｅｃｔセルラーゼ、および日本国名古屋市の天野製薬株式会社から市販されるセルラーゼＴ「アマノ」４である。
【００７６】
酵素反応は、無機機酸（例えば塩酸）または有機酸（例えばクエン酸）または塩基が使用される場合は溶液または懸濁液を中性化することで、または加熱して酵素を変性させることで停止できる。
【００７７】
変性は、溶液を８０〜９５℃の温度、好ましくは８０〜８５℃の温度に１０〜１５分加熱することで達成してもよい（特に３．５〜４．５の低ｐＨで）。その後溶液を５０℃に冷却してもよい。
【００７８】
非タンパク質部分の分離は、遠心分離（５０００ｇで１５分間）（非タンパク質部分は水相中に存在する）と、それに続く脱イオン水での洗浄によって達成されてもよい。イネ胚乳タンパク質はペレットのままである。
【００７９】
［タンパク質部分の除去］
あるいは、遠心分離または濾過前にいわゆる「アルカリ抽出」またはいわゆる「塩抽出」を実施してもよい。
【００８０】
「アルカリ抽出」とは、最初に４０〜６０℃で３時間、米粉溶液または懸濁液のｐＨを７〜１２の値、好ましくは８〜１０の値、より好ましくは約９の値に、アルカリ溶液（例えばＮａＯＨ水溶液）で調節することを意味する。
【００８１】
タンパク質収率がタンパク質機能性よりも重要な場合は、ｐＨを好ましくは８〜１２、より好ましくは９〜１２、さらにより好ましくは１０〜１２の値に調節することが有利であり得る。
【００８２】
好ましくはこのような塩基は、約０．１〜５Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。塩基は無機塩基であってもよい。無機塩基の例は、水酸化ナトリウム（好ましい）、水酸化カリウム、および水酸化カルシウムなどのアルカリ（土類）水酸化物である。
【００８３】
「塩抽出」は「アルカリ抽出」に類似するが、塩基に加えて塩化ナトリウムなどの塩が使用される。好ましい本発明の実施態様では、０．０８Ｍの塩化ナトリウム水溶液（ＮａＯＨでｐＨ１１に調節）が、抽出溶剤として使用される。
【００８４】
（アルカリまたは塩抽出）どちらの場合もタンパク質部分は、水相に移動される。次に遠心分離または濾過によって、非タンパク質部分からタンパク質部分を分離してもよい。
【００８５】
［タンパク質部分のさらなる変性］
米粉のさらなる変性は、（市販される）食品等級アルカリ性、中性および／または酸性タンパク質分解酵素で、それ（そのタンパク質部分）を処理することによって達成されてもよい。いくつかのタンパク質分解酵素について、酵素規格および最適条件を以下の表に示す。
【００８６】
【表１】
【００８７】
【表２】
【００８８】
【表３】
【００８９】
タンパク質分解酵素は、細菌または真菌由来ならびに果実由来であってよく、または動物由来であってもよい。
【００９０】
アルカリ性タンパク質分解酵素の例は、市販される米国ノースカロライナ州フランクリントン（Ｆｒａｎｋｌｉｎｔｏｎ，ＮＣ，ＵＳＡ）のノボ・ノルディスク・バイオケムからのアルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）（登録商標）、米国ニューヨーク州ニューヨーク（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）のＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＡｌｋａｌｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ（登録商標）、米国ニューヨーク州ロチェスター（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）のジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからのＰｒｏｔｅｘ ６Ｌ（登録商標）（ジェネンコア（登録商標）Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ）、および米国ニューヨーク州ロチェスターのジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからのジェネンコア（登録商標）Ｐｒｏｔｅａｓｅ ８９９である。
【００９１】
中性タンパク質分解酵素の例は、市販される米国ニューヨーク州ニューヨークのＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＢｒｏｍｅｌａｉｎ（ブロメライン）（登録商標）、米国ニューヨーク州ニューヨークのＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのリキパノール（Ｌｉｑｕｉｐａｎｏｌ）（登録商標）、および米国ニューヨーク州ロチェスターのジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからの細菌中性タンパク質分解酵素である。中性タンパク質分解酵素のさらなる例は、植物であるパパイヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ）からの製品、すなわち果実起源酵素である、オランダ国デルフト（Ｄｅｌｆｔ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＤＳＭ Ｆｏｏｄ Ｂｅｖｅｒａｇｅｓから市販されるＣｏｌｌｕｐｉｌｉｎ（登録商標）である。
【００９２】
酸性タンパク質分解酵素の例は、米国シグマ（Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ））からのペプシンおよび日本国名古屋市の天野製薬株式会社からの酸性タンパク質分解酵素である。
【００９３】
本発明の方法の好ましい実施態様では、米粉のタンパク質部分は、引き続いて７〜１０の範囲のｐＨにおいて４０〜６０℃で１０〜８０分、２つの異なるアルカリ性タンパク質分解酵素によって処理される。
【００９４】
好ましくはこれらのタンパク質分解酵素の１つは、アルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｘ ６Ｌ（登録商標）などのセリン特異的タンパク質分解酵素、またはアルカリ性タンパク質分解酵素（登録商標）であり、もう１つはリキパノール（登録商標）またはブロメライン（登録商標）などのシステイン特異的タンパク質分解酵素である。
【００９５】
この変性ステップはまた、酵素を一度に添加せず、それらを（引き続いてまたは同時に）小分けにして添加することで、修正されてもよい。
【００９６】
［ステップｃ）］
ステップｂ）で得られたタンパク質部分は、ステップｃ）すなわち単糖類（二糖類またはオリゴ糖類）または多糖類との部分的反応かまたは部分的脱アミド化を実施するための出発材料として使用される。
【００９７】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と粉砕米のタンパク質部分の部分的反応］
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類とタンパク質部分の反応は、メイラード型の反応の中で進行する。タンパク質部分の水性分散体とそれぞれ単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）の水溶液／分散体は、別々に調製しその後撹拌後に統合してよい。
【００９８】
通常は、最も好ましくは１０重量％という濃度を有する単糖類または多糖類（または二糖類またはオリゴ糖類）の水溶液を、撹拌しながら、最も好ましくは１０重量％という濃度を有するタンパク質部分の水溶液に対しゆっくりと添加して、溶液／分散体の両方の混合物を得た。この混合は、好ましくは、２０〜６０℃、好ましくは３０〜５０℃、より好ましくは３５〜４５℃の範囲内の温度で、１０分〜２時間、好ましくは３０分〜９０分、より好ましくは４５分〜６０分の範囲内の時間実施される。
【００９９】
次に、混合物のｐＨ値を、好ましくは水溶液の形で塩基を添加することにより、６．０〜９．０の範囲内の値まで、好ましくは６．５〜８．５の範囲内の値まで、好ましくは７．０〜８．０の範囲内の値まで調整する。好ましくは、かかる塩基は、約０．１〜３Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。
【０１００】
塩基は無機塩基であってよい。無機塩基の例としては、（土類）アルカリ性水酸化物例えば水酸化ナトリウム（最も好ましい）、水酸化カリウム（好ましい）および水酸化カルシウムがある。
【０１０１】
このようにして得られたアルカリ性混合物を次に、好ましくは噴霧乾燥によって乾燥させる。噴霧乾燥は、５０℃〜２５０℃、より好ましくは６０℃〜１００℃、最も好ましくは６０〜９０℃の範囲内の入口温度で実施される。
【０１０２】
次に、恒湿器内において３０〜７０℃、好ましくは４０〜６０℃、より好ましくは４５〜５５℃の温度まで乾燥済みタンパク質および単糖類または多糖類（または二糖類またはオリゴ糖類）混合物をインキュベートすることにより、反応（架橋）を実施してもよい。反応温度に応じて、反応時間は、２時間〜６０時間、好ましくは４時間〜４０時間、より好ましくは６時間〜３０時間の時間範囲内にある。相対湿度は、水活性を０．５〜０．８の範囲に維持するように、３９〜８５％、より好ましくは４４〜７９％、最も好ましくは５４〜６９％の範囲内で変動し得る。
【０１０３】
架橋は、ステップＶＩａについてすでに上述した通り、酵素処理により実施されてもよい。
【０１０４】
単糖類の好ましい例としてはペントース類およびヘキソース類（フルクトース、グルコース、ガラクトース、キシロース、特にフルクトースおよびグルコース）がある。
【０１０５】
多糖類の好ましい例は、キサンタンガムおよびペクチンである。
【０１０６】
単糖類または多糖類の代りに、二糖類（しょ糖、乳糖）およびオリゴ糖類（デキストリン）を使用してもよい。
【０１０７】
タンパク質部分と単糖の重量比は、０．５〜１２％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．１〜８％（ｗ、ｗ）、より好ましくは０．５〜４％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１０８】
タンパク質部分と多糖（または二糖またはオリゴ糖）の重量比は、０．１〜２０％（ｗ、ｗ）、好ましくは０．５〜２０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１０９】
単糖としてグルコースが使用される場合には、ステップｂ）で得られたタンパク質部分に対するグルコースの重量比は、好ましくは０．１〜８％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．５〜４％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１１０】
多糖としてキサンタンガムが用いられる場合、ステップｂ）で得られたタンパク質部分に対するキサンタンガムの重量比は、好ましくは、０．１〜２０％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１１１】
［粉砕米のタンパク質部分の部分的脱アミド化］
脱アミド化は、好ましくは水溶液の形で塩基を添加することにより、ステップｂ）で得たイネ胚乳タンパク質のタンパク質部分のコロイド水溶液のｐＨ値を９．０〜１３．０の範囲内の値、好ましくは９．５〜１２．５の範囲内の値、好ましくは１０．５〜１２の範囲内の値に調整することにより実施される。好ましくは、かかる塩基は、約０．１〜３Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。塩基は、無機塩基であってよい。無機塩基の例としては、（土類）アルカリ性水酸化物例えば水酸化ナトリウム（最も好ましい）、水酸化カリウム（好ましい）そして水酸化カルシウムがある。
【０１１２】
かくして結果として得られた混合物を次に２５〜９０℃、好ましくは３０〜８０℃、より好ましくは４０〜７０℃の範囲内の温度にする。
【０１１３】
脱アミド化温度に応じて、脱アミド化の持続時間は、０．５時間〜２４時間、好ましくは０．５〜１２時間、より好ましくは０．５〜６時間の時間範囲内にある。
【０１１４】
［ステップｄ）］
ステップｄ）は、タンパク質を単離するため当業者にとって公知のあらゆる方法によって実施され得る。
【０１１５】
ステップｄ）は例えば遠心分離および／またはろ過により実施され得る。
【０１１６】
通常、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているタンパク質を単離することは必要ではない。
【０１１７】
［ステップｅ）］
例えば乾燥粉末などの固体形態への変換は、当業者に知られている任意の乾燥法によって達成できる。好ましいのは噴霧乾燥または凍結乾燥である。噴霧乾燥は好ましくは約２００℃〜約２１０℃の入口温度、および約７０℃〜約７５℃の出口温度で実施される。凍結乾燥は好ましくは約−２０℃〜約−５０℃の温度で１０〜４８時間実施される。
【０１１８】
本発明の目的は同様に、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質自体、特に上述のようなあらゆる方法によって得ることのできるイネ胚乳タンパク質にもある。さらに一層好ましいのは、上述のようなあらゆる方法によって得られる単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質それ自体である。
【０１１９】
［産業上の利用可能性］
本発明は、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアまたは医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための上述のような組成物の使用、ならびにこのような上述のような組成物を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物それ自体に関する。
【０１２０】
本発明は同様に、上述の通り単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物、ならびに脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための保護親水コロイドとしてのかかるイネ胚乳タンパク質（前述の通りの選好性を有する）の使用にも関する。
【０１２１】
ヒトをはじめとする動物は、本発明の文脈でヒトの他に、特にヒツジ、雌牛、ウマ、家禽（ブロイラーおよび卵の着色）、エビおよび魚（特にサケおよびニジマス）などの飼育動物、ならびにネコ、イヌ、鳥（例えばフラミンゴ）、および魚などのペットを包含する。
【０１２２】
本発明の組成物が、特に着色剤または機能性成分として使用できる飲料は、例えば、着香天然発泡ミネラルウォーター、清涼飲料またはミネラル飲料などの炭酸飲料、ならびに例えば着香水、果汁、フルーツポンチ、およびこれらの飲料の濃縮形態などの非炭酸飲料であることができる。それらは天然果汁または野菜汁または人工香料をベースにしてもよい。アルコール飲料および即席飲料粉末もまた含まれる。糖含有飲料の他に、ノンカロリーおよび人工甘味料を用いたダイエット飲料もまた含まれる。
【０１２３】
さらに天然起源または合成から得られる乳製品は、本発明の組成物が、特に着色剤としてまたは機能性成分として使用できる食品の範囲内である。このような製品の典型的な例は、乳飲料、アイスクリーム、チーズ、ヨーグルトなどである。豆乳飲料および豆腐製品などの乳代替製品もまた、この応用範囲に含まれる。
【０１２４】
菓子製品や、キャンデーや、ガムや、例えばアイスクリーム、ゼリー、プディング、即席プディング粉末などのデザートなど、本発明の組成物を着色剤としてまたは機能性成分として含有する甘み食品もまた含まれる。
【０１２５】
本発明の組成物を着色剤としてまたは機能性成分として含有する、穀類、スナック、クッキー、パスタ、スープ、およびソース、マヨネーズ、サラダドレッシングなどもまた含まれる。さらに乳製品および穀類のために使用される果実調製品もまた含まれる。
【０１２６】
本発明の組成物を通じて食品に添加される（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤の最終濃度は、食物組成物の総重量を基準にして０．１〜５００ｐｐｍ、特に１〜５０ｐｐｍであってもよく、着色または強化される特定の食品、および意図される着色または強化の程度に左右される。
【０１２７】
本発明の食物組成物は、好ましくは食品に、本発明の組成物の形態の（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤を添加することによって得られる。食品または医薬品の着色または強化のために、本発明の組成物は、本発明の水分散性固体組成物の応用について知られている方法に従って使用できる。
【０１２８】
一般に組成物は、特定の応用に従って、水性原液、乾燥粉末混合物、またはその他の適切な食物成分とのプレブレンドのいずれかとして添加してもよい。混合は最終応用の配合次第で、例えば乾燥粉末ブレンダー、低剪断ミキサー、高圧ホモジナイザーまたは高剪断ミキサーを使用して実施できる。容易に明らかであるように、このような専門的事項は専門家の技能の範囲内である。
【０１２９】
組成物が着色剤として使用される錠剤またはカプセルなどの医薬組成物もまた、本発明の範囲内である。錠剤の着色は、錠剤コーティング混合物に液体または固体着色剤組成物の形態で本発明の組成物を別々に添加する、または錠剤コーティング混合物の構成要素の１つに着色剤組成物を添加することによって達成できる。着色硬質または軟質シェルカプセルは、着色剤組成物をカプセル塊水溶液に組み込むことによって調製できる。
【０１３０】
組成物が活性成分として使用される、チュアブル錠、発泡性錠剤またはフィルム被覆錠剤などの錠剤、または硬質シェルカプセルなどのカプセルのような医薬組成物もまた本発明の範囲内である。本発明の組成物は、典型的に錠剤化混合物に粉末として添加され、またはカプセルの製造について知られている様式でカプセル内に充填される。
【０１３１】
組成物が、例えば卵黄、食用家禽、ブロイラーまたは水産動物（特にエビ、サケ、ニジマス）を着色するための着色剤として、または活性成分として使用される、栄養成分プレミックス、複合飼料、ミルク代替え品、流動食または飼料調製品などの動物飼料製品もまた、本発明の範囲内である。
【０１３２】
組成物が着色剤として、または活性成分として使用される、化粧品、洗面用品、および皮膚用製品、すなわちクリーム、ローション、バス、リップスティック、シャンプー、コンディショナー、スプレーまたはジェルなどのスキンおよびヘアケア製品をはじめとするパーソナルケア組成物は、本発明の範囲内である。
【０１３３】
本発明を次の実施例によってさらに例示する。
【０１３４】
［実施例］
以下の略号が使用される：
ＤＨ＝加水分解度
ＤＩ水＝脱イオン水
ｄｗ＝乾燥重量基準
ＲＨ＝相対湿度
ｒｐｍ＝毎分回転数
ＳＤＳ＝硫酸ドデシルナトリウム
ｗ／ｖ＝重量／体積
【０１３５】
長粒米で作った米粉は、アーカンソー州スタットガートのライスランドフーズ（Ｒｉｃｅｌａｎｄ Ｆｏｏｄｓ）によって提供された。乳漿タンパク単離物は、Ｂｉｏｚａｔｅ（登録商標），ミネソタ州のダビスコフーズインターナショナル（Ｄａｖｉｓｃｏ Ｆｏｏｄｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＩＮＣ．，）から、乾燥重量を基準として８８．６％のタンパク質（Ｎ×６．２５）を含有するベンチマーク標準として入手した。バシラス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の細菌セリンプロテアーゼであるアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）２．４Ｌが、ノボ・ノルディスク・バイオケム（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ｂｉｏｃｈｅｍ．）（ノースカロライナ州フランクリントン、２．４ＡＵ単位／ｇ）により提供された。分析試薬は、フィッシャーサイエンティフィク（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（ペンシルバニア州ピッツバーグ）およびシグマケミカル（Ｓｉｇｍａ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）（ミズーリ州セントルイス）から購入した。
【０１３６】
［（Ａ）分析方法：実施例１〜５］
［実施例１：エマルジョン活性およびエマルジョン安定性の判定］
エマルジョン活性および安定性は、ピアスおよびキンセラ：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９７８年，第２６号，７１６〜７２２頁の比濁法により判定した。ｐＨ７．０の１０ｍＭのリン酸緩衝液中のイネ胚乳タンパク質の０．１％溶液６ｍＬおよびトウモロコシ油２ｍＬの混合物を設定６の超音波処理機（ビアティシア・テンペスト（Ｖｉｒｔｉｓｈｅａｒ Ｔｅｍｐｅｓｔ），米国ニューヨーク州のガーディナーのザ・ビアティス社（Ｔｈｅ Ｖｉｒｔｉｓ Ｃｏ．））を用いて１分間均質化した。均質化から０分および１０分後に、５０マイクロリットルの混合物をＳＤＳの０．１％水溶液（ｗ／ｖ）中に移した。５００ｎｍでの溶液の吸光度をスペクトロメータ（京都の島津製作所、ＵＶ−１６０１型）で判定した。均質化後時間０での吸光度が、イネ胚乳タンパク質のエマルジョン活性である。エマルジョン安定性を計算するために、時間的間隔（１０分）中の初期吸光度の濁度（吸光度）の減少を使用した。（ＥＳ）は、以下の通りに計算した。
エマルジョン安定性＝Ｔｏ×Δｔ／ΔＴ
ここで、ΔＴはΔｔ（１０分）という時間的間隔中の初期吸光度（Ｔｏ）の濁度（吸光度）の減少である。
【０１３７】
［実施例２：加水分解度の判定］
ニールセンらの方法（ニールセン，Ｐ．Ｍ．，ピーターソン（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ），Ｄ．およびダンブマン（Ｄａｍｂｍａｎｎ），Ｃ，「食物タンパク質加水分解度を判定するための改善された方法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）」．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１年，６６（５），６４２〜６４６頁）によってＤＨを判定した。次のようにしてｏ−フタルジアルデヒド（ＯＰＡ）試薬を調製した。７．６２０ｇの四ホウ酸二ナトリウム十水和物（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ）および２００ｍｇのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を１５０ｍＬの脱イオン水に溶解し、次に１６０ｍｇのＯＰＡ（４ｍＬのエタノールに事前溶解された９７％ＯＰＡ）および１７６ｍｇの９９％ジチオスレイトール（ＤＴＴ）と混合した。脱イオン水で最終溶液を２００ｍＬにした。凍結乾燥されたタンパク質サンプル０．１ｇを１０ｍＬの脱イオン水に可溶化した。吸光度を測定するために、３ｍＬのＯＰＡ試薬を１０ｍＬ試験管に入れ、次に４００μＬのサンプル溶液、セリン標準（１０ｍｇ／１００ｍＬ）、および脱イオン水を４本の試験管の各サンプル、標準、およびブランクにそれぞれ添加した。この後、５秒間混合し、正確に２分間保持した。日本国京都市の島津製作所からの分光光度計（モデルＵＶ−１６０１）によって、３４０ｎｍで吸光度を読み取った。ＤＨを次のようにして計算した。
【０１３８】
ＤＨ＝ｈ／ｈｔｏｔａｌ＊１００％
式中、ｈは加水分解された結合数であり、ｈｔｏｔａｌは、タンパク質当量あたりのペプチド結合の総数である。
ｈ＝（セリン−ＮＨ２−β）／α ｅｑｕｉｖ／ｇタンパク質
式中、ｈは加水分解された結合数であり、ｈｔｏｔａｌは、タンパク質当量あたりのペプチド結合の総数であり、穀物タンパク質ではαは１．００、βは０．４０、および、ｈｔｏｔａｌは８．０である。
【０１３９】
セリン−ＮＨ２＝［（Ａ３４０ｓａｍｐｌｅ−Ａ３４０ｂｌａｎｋ）／（Ａ３４０ｓｔａｎｄａｒｄ−Ａ３４０ｂｌａｎｋ）］＊０．９５１６ｍｅｑｖ／Ｌ＊０．０１＊１００／（Ｘ＊Ｐ）
式中、セリン−ＮＨ２＝ｍｅｑｖセリンＮＨ２／ｇタンパク質；Ｘ＝ｇサンプル；Ｐ＝サンプル中の％タンパク質；０．０１は１Ｌ中のサンプル体積である。
【０１４０】
［実施例３：タンパク質および総溶解度の判定］
タンパク質溶解度（またＮ−溶解度）は、いくつかの修正を加えて、ベラ，Ｍ．Ｂ．；ムーカジ（ベラ，Ｍ．Ｂ．；ムーカジ，Ｒ．Ｋ．、「米糠タンパク質濃縮物の溶解性、乳化、および起泡特性」．Ｊ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ １９８９年，５４（１）：１４２〜１４５頁）の方法によって判定した。２００ｍｇのタンパク質サンプルを１０ｍＬの脱イオン水中に分散し、１Ｎ ＨＣｌまたは１Ｎ ＮａＯＨでｐＨを７．０に調節した。分散体を連続的に３０分間撹拌し、米国カリフォルニア州（Ｃａｌｉｆ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）のＢｅｃｋｍａｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎからの（モデルＪ２−２１）によって５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上清を回収し、上清中のタンパク質含量を自動ケルダール法（ＡＡＣＣ １９９０）によって判定した。タンパク質溶解度の百分率を次の式によって計算した。
【数１】
【０１４１】
タンパク質溶解度は、上清中のタンパク質と最初のサンプル中の総タンパク質との％比率として計算した。
【０１４２】
総溶解度はオーブン乾燥法によって判定し、上清中の総可溶性部分と、タンパク質単離物総重量との％比率として表した。
【数２】
【０１４３】
［実施例４：粘度の判定］
室温（２６℃）で、ＭＶＤＩＮ測定紡錘体（半径＝１９．３６ｍｍ、高さ＝５８．０８ｍｍ）を装着した、独国（Ｇｅｒｍａｎｙ）のＨａａｋｅからの回転レオメータ（ＶＴ５５０）によって、タンパク質単離物の粘度を判定した。タンパク質単離物を脱イオン水と混合して１０％スラリーを形成し、分析前にスラリーを６０分間平衡状態に保った。サンプル（３０ｍｌ）を円柱状カップ（半径＝２１．０ｍｍ）に充填して、コンピューター制御プログラムを使用して、３分間かけて０から４００１／秒に変化する剪断速度をかけた。データを独国のＨａａｋｅ Ｍｅｓｓ ＴｅｃｈからのＲｈｅｏｗｉｎ Ｐｒｏデータ・マネージャ、バージョン２．８４によって分析した。
【０１４４】
［実施例５：タンパク質含量の判定］
タンパク質含量を、自動ケルダール（Ｋｊｅｌｄａｈｌ）法（ＡＡＣＣ、１９９０年）により判定した。１時間４２０℃で触媒としてケルダール（登録商標）錠を用いて濃硫酸中で試料を消化させるために、ケルダール２００６消化剤（スウェーデン、ホガナスのフォス・テカトール（Ｆｏｓｓ Ｔｅｃａｔｏｒ））を使用し、生成物の窒素含量を判定するために、ケルテック（Ｋｊｅｌｔｅｃ）（登録商標）２３００分析器ユニット（スウェーデン、ホガナスのフォス・テカトール）を使用した。タンパク質含量は、窒素含量に５．９５という係数を乗じることによって自動的に計算された。
【０１４５】
［（Ｂ）イネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）の製造（出発材料および比較例）］
［実施例６］
米粉１キログラムを、ホモジナイザー（米国ニューヨーク州ガーディナーのザ・ビアティス社、ビアティシア・テンペスト）内で１分間、８Ｌの脱イオン水（１：８、ｗ／ｖ）を用いて均質化した。１ＭのＮａＯＨにより、スラリーのｐＨを１１．０に調整し、懸濁液を４０℃で３時間撹拌した。溶液中の可溶性タンパク質を遠心分離により分離した（５，０００ｒｐｍ、１５分）。この手順を一回反復して残渣から付加的なタンパク質を抽出した。１回目および２回目の抽出の組合せ上清中のタンパク質をｐＨ４．５で等電点沈殿させ、１時間４℃に保った。沈殿物を２０分間５，０００ｒｐｍの遠心分離により回収し、脱イオン水（１：４、ｗ／ｖ、ｐＨ４．５）で洗浄し、ｐＨ７．０に調整した。抽出したタンパク質（ＲＰ）を、以下の変性（Ｃ）および（Ｄ）の調製のための出発材料として使用した。
【０１４６】
［実施例（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）の実験的設計］
本研究は、（１）米タンパク質グリコシル化の最適化および（２）米タンパク質の物理化学的特性に対する制御されたグリコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性方法の比較（比較例）という２つの実験セットを含んでいる。グリコシル化実験の最適化は、３レプリケートでの反復的測定（７つの反応時間）を伴う２×７の２因子要因設計（グルコースおよびキサンタンガム）で実施した。グリコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性方法の比較は、１因子の完全に無作為化された設計で実施され、これには、選択された変性方法の有効性を評価し比較するために対照（未変性）米タンパク質およびベンチマーク乳漿タンパクが含まれていた。
【０１４７】
したがって、イネ胚乳タンパク質は、（１）Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＧｌｕ）；（２）キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）；（３）アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）；（４）１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼによるイネ胚乳タンパク質の処理（ＲＰＡｌｃ）という方法によって変性された。タンパク質誘導体の物理化学的および機能特性を評価し、未変性イネ胚乳タンパク質（ＲＰ）のものと比較し、ベンチマークとして乳漿タンパク単離物と比較した。
【０１４８】
［（Ｃ）部分的に加水分解したイネ胚乳タンパク質の製造］
［実施例７（比較例）：１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼを用いたイネ胚乳タンパク質の処理（ＲＰＡｌｃ）］
アルカラーゼ処理のための条件は、先行研究（パラマンら、２００７年）および我々の予備データに基づいて選択した。イネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）をＤＩ水（８％ｗ／ｖ）で均質化し、ｐＨ６．５に調整した。タンパク質コロイド溶液を８．５分間４０℃で０．１％のアルカラーゼを用いて処理した。酵素を７分間８５℃で不活性化した。水を添加することにより加水分解物を直ちに３０℃まで冷却し、ｐＨを７．０に再調整した。タンパク質加水分解物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した（ＲＰＡｌｃ）。
【０１４９】
［（Ｄ）単糖類または多糖類と部分的に共役されたイネ胚乳タンパク質の製造］
［実施例８：イネ胚乳タンパク質の部分的グリコシル化のための最適な反応条件の評価］
抽出された米タンパク質ＲＰ（ｄｗで２０ｇ）を脱イオン水中に溶解させて、１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。１０ｍＬのＤＩ水中に溶解させたＤ−グルコース（０．４６５ｇ）を、３７℃でタンパク質溶液を撹拌させながらタンパク質溶液中に添加した。タンパク質グルコース混合物をｐＨ８．０に調整し、３７℃で１時間撹拌した。混合物を凍結乾燥させ、乾燥したタンパク質−糖混合物をアルミニウム皿内に入れ、相対湿度６５％に維持したインキュベータ内で５０℃でインキュベートした。およそ２．５ｇのタンパク質−グルコース混合物を試料として２４時間にわたり４時間間隔で取り出した。グルコシル化タンパク質を、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。
【０１５０】
タンパク質−キサンタンガム比が１００：１であり、タンパク質−キサンタンガム溶液のｐＨが７．０の値に調整されたという点を除いて、以上で記述されたタンパク質−グルコース最適化方法と本質的に類似した形で、米タンパク質−キサンタンガム最適化を実施した。
【０１５１】
［実施例９：Ｄ−グルコースを用いたイネ胚乳タンパク質のグルコシル化（ＲＰＧｌｕ）］
以下で記述するいくつかの修正を伴って、文献（加藤ら１９９０年、加藤ら１９９１年、アシュリ（Ａｃｈｏｕｒｉ）ら２００５年、オリバーら２００６年）から選択された条件および以上の最適化に基づいて、グリコシル化を実施した。アルカリ抽出された米タンパク質単離物ＲＰ（ｄｗで２００ｇ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。１００ｍＬのＤＩ水内に溶解させたＤ−グルコース（４．６５ｇ）を、３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながらタンパク質溶液に添加した。タンパク質−グルコース混合物をｐＨ８．０に調整し、３７℃で１時間撹拌した。混合物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−糖混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで８時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＧｌｕ）を、使用するまで５℃で保管した。
【０１５２】
［実施例１０：キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。キサンタンガム（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のキサンタンガム溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、キサンタンガム溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−キサンタンガム混合物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−キサンタンガム混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＸＧ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５３】
［実施例１１：ポテトデキストリンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＰＤ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。ポテトデキストリン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のポテトデキストリン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、ポテトデキストリン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−デキストリン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−デキストリン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＰＤ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５４】
［実施例１２：シクロデキストリンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＣＤ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。シクロデキストリン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、シクロデキストリン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−シクロデキストリン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−シクロデキストリン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＣＤ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５５】
［実施例１３：ペクチンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＰ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。ペクチン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のペクチン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、ペクチン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−ペクチン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−ペクチン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＰ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５６】
［（Ｅ）部分的に脱アミド化されたイネ胚乳タンパク質の製造］
実施例１４；アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）
以下で記述する通りのいくつかの修正を加えて、文献情報（シュウェンク（Ｓｃｈｗｅｎｋｅ）１９９７年，カブラ（Ｃａｂｒａ）ら２００７年）に基づいて脱アミド化条件を選択した。アルカリ抽出米タンパク質単離物をＤＩ水（８％ｗ／ｖ）と混合した。タンパク質コロイド溶液をｐＨ１１．０に調整し、１２時間２５℃で撹拌した。その後、タンパク質溶液の温度を７０℃で３０分間撹拌下にて上昇させた。氷を加えて溶液を直ちに３０℃まで冷却し、ｐＨを７．０まで再調整した。脱アミド化させたタンパク質溶液を噴霧乾燥させ、５℃で保管した（ＲＰＤＡ）。
【０１５７】
［（Ｆ）結果］
［統計分析］
全ての実験は、デュプリケートで実施された。ＪＭＰ６ソフトウェア（ＳＡＳＩｎｓｔ２００２）を用いて分散および多重平均比較のためデータを分析した。平均間の差異の有意性を、５％の有意性レベル（Ｐ＜０．０５）でＴｕｋｅｙ ＨＳＤ手順により判定した。
【０１５８】
［イネ胚乳タンパク質のグリコシル化の最適化］
Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムでの米タンパク質のグリコシル化を、上述のように最適化した。グリコシル化タンパク質の溶解度および乳化特性は、表３に提示されている。
【０１５９】
【表４】
【０１６０】
米タンパク質Ｄ−グルコース（２．２５％、ｗ／ｗ）および米タンパク質−キサンタンガム（１％、ｗ／ｗ）共役体のグリコシル化を、さまざまなインキュベーション時間（０〜２４時間）にわたって５０℃および相対湿度６５％で調製した。反応は非常に急速に開始することから、当初でさえ未処理のイネ胚乳タンパク質単離物と比較した差異が認められた。
【０１６１】
グリコシル化タンパク質の機能特性は、メイラード反応時間の一関数として有意な形で異なり、タンパク質をグリコシル化するために用いられた糖のタイプにより左右された。Ｄ−グルコースについては、最適メイラード反応時間は、５０℃および６５％ＲＨで８時間であった。グリコシル化タンパク質は、最高８時間までメイラード反応の一関数としての溶解度および乳化特性の漸進的改善を実証した。この傾向は、反応時間が０時間から８時間まで進むにつれて２３％から３４％までの溶解度の増加および０．３７１から０．７１２までのエマルジョン活性の増加により例示された。これらの特性は、８時間のインキュベーションを超えると減少した。ただし、グリコシル化タンパク質のエマルジョン安定性は、０から２４時間までのインキュベーション時間の関数として１５．４時間から２８時間まで漸進的に増大した。エマルジョン安定性の増分は、インキュベーション初期（０〜１２時間）において、後期（１２〜２４時間）よりも高く、これは、メイラード反応の進行に伴うアミノ基の利用可能性の低下に起因するものと考えられる。
【０１６２】
キサンタンガムでグリコシル化されたタンパク質においては、溶解度および乳化特性は、それぞれ最高１６時間および２０時間まで漸進的に増加した。溶解度は、１６時間のインキュベーションにおいて２６％から３３％まで増大し、乳化活性は、２０時間のインキュベーションにおいて０．４７９から０．６２９まで増大した。グルコースと比較して、キサンタンガム媒介型グリコシル化は、より低い速度で機能特性を改善し、メイラード反応のためにより長い時間を要した。１８〜２０時間というインキュベーション時間は、５０℃、６５％ＲＨおよび１：１００のキサンタンガム対タンパク質比でキサンタンガムにとって最適な時間であった。最適な反応時間は変動し、反応物質および反応条件により左右された（オリバー、２００６年）。単糖類は、多糖類に比べて早く反応することができ、短い時間しか必要としなかった。
【０１６３】
本研究においては、最適な反応時間は、以前に公開された研究よりもはるかに短かった。キサンタンガムでグリコシル化されたリゾチームは、７日間のメイラード反応の後より優れた乳化特性を実証した（中村ら、２０００年）。同様にして、グルコースと共役されたオボアルブミンは１日で最大のエマルジョン活性に達し、１４日間の反応時間でエマルジョン安定性に達した（加藤ら、１９９５年）。所要時間の差は、これらの実験で使用されたプレインキュベーション条件の差異に起因すると考えられる。例えば、これら２つの先行研究においては、タンパク質−糖混合物はｐＨ７．０に調整され、直ちに凍結乾燥された。しかしながら、本研究では、タンパク質−糖混合物を乾燥に先立ち１時間撹拌した。糖−米タンパク質混合物のｐＨは、ｐＨ８．０に維持された。わずかにアルカリ性の条件（ｐＨ８．０）およびより長い混合条件（１時間）が、液体段階におけるメイラード反応を促進したものと考えられる。
【０１６４】
０時間のインキュベーションでの天然タンパク質およびグリコシル化タンパク質の溶解度および乳化データが、この推測を裏付けた（表３）。０時間のインキュベーションでのグリコシル化タンパク質の溶解度および乳化特性は、天然米タンパク質対照のものよりも高い溶解度および乳化特性を示した。グルコース−米タンパク質共役体については、溶解度は１８％から２４％まで改善し、エマルジョン活性はいかなる乾燥段階反応もなく、０．２６６から０．３７１まで改善した（表３）；キサンタンガム米タンパク質共役体については、溶解度は１８％から２６％まで増加し、エマルジョン活性および安定性はそれぞれ０．２６６から０．４７９までおよび１４．７から１８．１分まで増大した。
【０１６５】
［グリコシル化架橋研究においては、Ｄ−グルコース、ポテト−デキストリン、シクロデキストリン、ペクチン、キサンタンガムで予備的実験が実施された］
（表４）に提示されている我々の予備データに基づくと、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガム共役は、イネ胚乳タンパク質およびポテトデキストリン、シクロデキストリンまたはペクチンと共役された米タンパク質に比べて溶解度および乳化特性の両方を有意に改善した。したがって、さらなるグリコシル化プロセス最適化用としては、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムが選択された。
【０１６６】
ポテトデキストリン、シクロデキストリンおよびペクチン共役は、胚乳タンパク質の安定性を改善させなかったものの、対照のイネ胚乳タンパク質に比べて乳化特性を改善した。
【０１６７】
【表５】
【０１６８】
タンパク質：この実験において使用される炭水化物比は、グルコースについて１００：２．２６５、ポテトデキストリン、シクロデキストリン、ペクチンおよびキサンタンガムについて１００：１であった。
【０１６９】
最適化されたグリコシル化米タンパク質を、制御された酵素加水分解およびアルカリ脱アミド化により変性されたタンパク質の物理化学特性および機能特性について、さらに比較し評価した。表５には、変性の処理および簡易方法がまとめられている。
【０１７０】
【表６】
【０１７１】
イネ胚乳タンパク質は、以上の方法すなわち、（１）Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＧｌｕ）；（２）キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）；（３）アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）；（４）溶解度および乳化特性を改善するための１．８％ＤＨに至るまでのイネ胚乳タンパク質の処理によって変性された。
【０１７２】
［制御されたグルコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性が米タンパク質の物理化学特性および機能特性に対して及ぼす影響］
［物理化学特性］
米タンパク質生成物のタンパク質および含水量が表６に提示されている。
【０１７３】
【表７】
【０１７４】
グリコシル化タンパク質、ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧは、その他のタンパク質よりも高い含水量（８．８〜９．０％）を有していた。これら２つの生成物、ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧは、それぞれ８時間および１８時間６５％ＲＨで実施されたグリコシル化プロセス中に水分を吸収した。タンパク質をグリコシル化するために低い割合のグルコース（２．２５％、ｗ／ｗ）およびキサンタンガム（１％、ｗ／ｗ）しか使用されなかったことから、グリコシル化タンパク質（ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧ）のタンパク質含量は、対照の米タンパク質単離物（ＲＰ）と差がなかった。
【０１７５】
タンパク質の粘度は、表６と図１に提示されている。
【０１７６】
図１は、１０％ｗ／ｖの濃度での米タンパク質単離物（−ＲＰｃｏｎｔｒｏｌ）、加水分解物（◆ＲＰＡｌｃ）、グリコシル化（●ＲＰＧｌｕおよび■ＲＰＸＧ）および脱アミド化（▲ＲＰＤＡ）米タンパク質についてのせん断応力（ｙ軸：Ｐａ単位）とせん断速度（ｘ軸；ｓｅｃ−１単位）の関係を示す；１Ｐａｓ（パスカル秒）＝１０００ｃＰ（センチポイズ＝ｍＰａｓ）。粘度は、直線のせん断応力とせん断速度の勾配であった。
【０１７７】
グリコシル化（ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧ）および脱アミド化（ＲＰＤＡ）タンパク質は、処理されたタンパク質分解酵素（ＲＰＡｌｃ）および対照米タンパク質（ＲＰ）よりもはるかに高い粘度を示した。粘度の増加は、グリコシル化されたものの親水性の増大を示すものである。詳細には、キサンタンガムでのグリコシル化は、生成物の粘度を３１．６ｍＰａｓまで増大させ、これはグルコース媒介型グリコシル化（１２．４ｍＰａｓ）および脱アミド化（１４．０ｍＰａｓ）方法の粘度よりも有意に高いものであった。キサンタンガムと共役されたタンパク質の粘度が比較的高いことは、グリコシル残基の複合サイズに起因すると思われる。一般に、グリコシル化タンパク質の粘度の増加は、タンパク質における構造の変化を示していた。グリコシル化タンパク質は、より大きな流体力学的体積を有し、表面親水性の増大およびタンパク質の四次構造の部分的アンフォールディングの増加に起因して水和特性を増大させる（バニエル（Ｂａｎｉｅｌ）ら、１９９２年）。
【０１７８】
脱アミド化はまた、８．７から１４．０ｍＰａｓまで粘度を増大させた。このことは、脱アミド化タンパク質の水和特性の改善を示していた。アミド基からカルボキシル基の脱アミド化は、タンパク質の電荷量を改変させる可能性があると思われ、水分子とタンパク質の相互作用を改善させた。しかしながら、脱アミド化を実施するのに用いられる条件を考慮すると、脱アミド化タンパク質の粘度が、脱アミド化、変性（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）およびペプチド結合開裂の最終的結果であったことは明白である。
【０１７９】
アルカラーゼ処理は、粘度をＲＰＡｌｃにおいて８．７から７．０ｍＰａｓまでわずかに減少させた。粘度の減少は、タンパク質の分子サイズに起因していた。しかしながら、タンパク質の加水分解は１．８％ＤＨに制御されたことから、粘度変化は小さかった。
【０１８０】
［タンパク質の溶解度］
タンパク質の溶解度および乳化特性は、表７に提示されている。
【０１８１】
【表８】
【０１８２】
グルコースとキサンタンガムでのグルコシル化が、米タンパク質の溶解度を約４０％まで増加させたが、グリコシル化による溶解度の増分は、予測されたレベルまで実質的なものではなかった。
【０１８３】
アルカラーゼ処理（１．８％、ＤＨ）は、溶解度を１８％から３３％まで改善した。溶解度の増加は、分子サイズの減少および極性基数の増大に起因していた（ニールセン、１９９７年）。先行研究では、アルカラーゼ酵素による１３．５％ＤＨの後でも高い割合の米タンパク質が不溶状態にとどまっていることが報告されており、このことは米タンパク質分解酵素により開裂されたいずれかのペプチドが、分子間疎水性またはスルフヒドリル相互作用を介して未加水分解タンパク質と会合されているかまたは唯一加水分解がアクセスできるタンパク質の無定形領域と会合されていることを示唆している。
【０１８４】
脱アミド化タンパク質は、その他のいずれの処理（２８〜３９％）よりも高い溶解度（６８％）を示した。脱アミド化タンパク質は、６８．３％の溶解度を示した。アルカリ性条件での脱アミド化は、アスパラギンおよびグルタミンアミノ酸の側鎖基を脱アミド化し、場合によってはタンパク質極性を改変させたと考えられる。脱アミド化は負の電荷を増大させ、疎水性および水素結合を分断できる（シュウェンク、１９９７年）。これらの構造的変化は、溶解度の増大に寄与し得る。詳細には、米グルテリン内に最も豊富なアミノ酸は、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、グルシンおよびアラニンである（ウェンおよびリュース１９８５年）。これらのアミノ酸残基の脱アミド化は、タンパク質の溶解度を促進でき、乳化特性の改善に寄与した。さらに、ペプチド結合の部分的開裂は、脱アミド化プロセスの中で可能であり得た。脱アミド化と加水分解の組合せ効果は、溶解度の大幅な改善に寄与したものと思われる。
【０１８５】
［乳化特性］
グリコシル化および脱アミド化タンパク質のエマルジョン活性および安定性は、米タンパク質分解酵素で処理された米タンパク質単離物のものよりも有意に高かった。グルコースでグリコシル化されたタンパク質は０．７２１のエマルジョン活性と２６．８分のエマルジョン安定性を示した。脱アミド化タンパク質は０．７７６のエマルジョン活性と２４．０分のエマルジョン安定性を示した。これら２つの米タンパク質単離物の乳化特性は、未変性の米タンパク質単離物および米タンパク質分解酵素で変性された米タンパク質単離物のものよりも高かった。グリコシル化は、タンパク質の親水性を高めた（加藤ら、１９９１年）。したがって、制御され制限された糖化は、乳化特性を改善させる。親水性の増加は、水和および溶解度を改善させ、かくして場合によってタンパク質の球状構造を開く。部分的アンフォールディングは、油水界面において安定した界面薄膜を形成するグリコシル化タンパク質の能力を改善させた。
【０１８６】
脱アミド化タンパク質の場合、エマルジョン特性の改善は、タンパク質の溶解度および極性を増大させることによってもたらされ得る（シュウェンク、１９９７年）。前述したような脱アミド化に加えて、ペプチド結合の部分的開裂もまた溶解度および乳化特性に寄与したと考えられる。脱アミド化タンパク質の溶解度の増大は、油水界面における安定した相互作用を生み出す一助となると考えられ、かくして、乳化特性を改善させた。脱アミド化およびペプチド結合開裂の適正な平衡は、脱アミド化により米タンパク質の乳化特性を改善させる上でのキーポイントであると考えられる。
【０１８７】
１．８％ＤＨに至るアルカラーゼ処理（ＲＰＡｌｃ）は、未変性米タンパク質（ＲＰ）と比べて、エマルジョン活性を０．２６６から０．４６８まで改善させ、エマルジョン安定性を１７．７から１７．５分まで改善した。一般に、食物タンパク質の機能性、特にエマルジョン安定性を改善させるためには、低い加水分解度が推奨される。限定的なタンパク質分解は、タンパク質の分子柔軟性および疎水性−親水性平衡を改善でき、その結果乳化はより良好になった（ニールセン１９９７年；シュウェンク、１９９７年）。ただし、溶解度および乳化特性の限定的な改善は、（１）高い疎水性およびスルフヒドリル相互作用に起因すると考えられ、高温酵素不活性化に随伴したタンパク質の埋没した疎水性領域の露出は、部分的に加水分解されたタンパク質の凝集および架橋を促したかもしれない（パラマンら、２００７年）。さらに、タンパク質のコンパクト性に起因して、酵素アルカラーゼには内部ペプチド結合に対するアクセスが限定されていると考えられ、このため場合によっては、ペプチドの不均等なサイズの形成がもたらされ、結果として得られる加水分解物の乳化特性が低減される可能性がある。
【０１８８】
［結論］
イネ胚乳タンパク質の溶解度および乳化特性を改善させるためには、１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼによるタンパク質分解変性よりも、グリコシル化および脱アミド化タイプの変性の効果の方が高かった。イネ胚乳タンパク質のグリコシル化においては、最適なメイラード反応時間は、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムについて５０℃および６５％ＲＨでそれぞれ８時間および２０時間であった。脱アミド化タンパク質は、この研究において評価されたタンパク質の中でも最高の溶解度（６８％）と乳化特性（０．７７６のエマルジョン活性、２４分のエマルジョン安定性）を示した。アルカラーゼによる制御された酵素加水分解１．８％ＤＨは、未変性の米タンパク質（ＲＰ）に比べ、エマルジョン活性を０．２６６から０．４６８まで、そしてエマルジョン安定性を１４．７分から１７．５分まで改善したにすぎなかった。脱アミド化タンパク質の最高の溶解度および乳化特性は、脱アミド化プロセス中に起こった脱アミド化、ペプチド結合開裂およびタンパク質変性（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）の最終的結果であった。
【０１８９】
［（Ｇ）本発明に従った脂溶性活性成分または脂溶性着色剤の組成物の製造］
［実施例１５：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９０】
［ａ）エマルジョンの調製］
実施例９に従ったＲＰＧｌｕ（Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８８．３ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．８６μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．８１μｍであった。
【０１９１】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流の内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に加工することができる。
【０１９２】
［実施例１６：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９３】
［ａ）エマルジョンの調製］
実施例１０に従ったＲＰＸＧ（キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８３．２ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．６５μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．６４μｍであった。
【０１９４】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に転換させることができる。
【０１９５】
［実施例１７：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９６】
［ａ）エマルジョンの調製：］
実施例１４に従ったＲＰＤＡ（アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８１．９ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．７７μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．６８μｍであった。
【０１９７】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に転換させることができる。
【０１９８】
［実施例１８：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０１９９】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２００】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製］
実施例９に従った３０ｇのＲＰＧｌｕ（Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグルコシル化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水中に再度溶解させた。
【０２０１】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョン調製：］
激しく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間激しく撹拌した。撹拌される分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃でしばらく穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ［３、２］）は、レーザー回析（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｅｒｓｉｚｅｒ）による測定で４４０ｎｍであった。
【０２０２】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンは、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してもよい。過剰なコーンスターチはふるいによって除去でき、得られた粉末は室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分をふるいにより収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度に関して特性決定することができる。
【０２０３】
【表９】
【０２０４】
［実施例１９：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０２０５】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２０６】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製：］
実施例１０に従った３０ｇのＲＰＸＧ（キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグルコシル化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水中に再度溶解させた。さらに１．８ｇのパルミチン酸アスコルビルおよび３６．６ｇのスクロースを添加した。ｐＨを７．３の値に調整するために０．５ｍｌの１Ｎの水性ＮａＯＨを添加した。
【０２０７】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョンの調製：］
勢いよく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間勢いよく撹拌した。撹拌された分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃で数分間穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ［３，２］）は、レーザー回析（マルバーン社マスターサイザー）により測定したところ３８０ｎｍであった。
【０２０８】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してよい。余剰のコーンスターチをふるいによって除去でき、得られた粉末を室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいによって収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度について特性決定することができる。
【０２０９】
【表１０】
【０２１０】
［実施例２０：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０２１１】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２１２】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製：］
実施例１６に従った３０ｇのＲＰＤＡ（アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水の中に再度溶解させた。さらに１．８ｇのパルミチン酸アスコルビルおよび３６．６ｇのスクロースを添加した。ｐＨを７．０の値に調整するために０．４ｍｌの水性１ＮのＮａＯＨを添加した。
【０２１３】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョンの調製：］
勢いよく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間勢いよく撹拌した。撹拌された分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃で数分間穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ［３，２］）は、レーザー回析（マルバーン社マスターサイザー）により測定したところ５００ｎｍであった。
【０２１４】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してよい。余剰のコーンスターチをふるいによって除去でき、得られた粉末を室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいによって収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度について特性決定することができる。
【０２１５】
【表１１】
【図面の簡単な説明】
【０２１６】
【図１】１０％ｗ／ｖの濃度での米タンパク質単離物（−ＲＰｃｏｎｔｒｏｌ）、加水分解物（◆ＲＰＡｌｃ）、グリコシル化（●ＲＰＧｌｕおよび■ＲＰＸＧ）および脱アミド化（▲ＲＰＤＡ）米タンパク質についてのせん断応力（ｙ軸：Ｐａ単位）とせん断速度（ｘ軸；ｓｅｃ−１単位）の関係を示す。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、イネ胚乳タンパク質が単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための新規の保護親水コロイドとしてのイネ胚乳タンパク質の使用に関する。さらに、本発明は、部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および少なくとも１つの脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む組成物およびそれらの製造、ならびに部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質それ自体およびその製造にも関する。さらに本発明は、それぞれかかる部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質およびかかる組成物を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための使用に関する。
【０００２】
活性成分、特に脂溶性活性成分または脂溶性着色剤は、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物に、それ自体で添加されないことが多いが、化学安定性、（水）溶解性、易流動性、および徐放などの特性を増強する理由で、ヒドロプロテクト性コロイド中の活性成分調合物の形態で添加される。既知のヒドロプロテクト性コロイドは、例えば異なる起源（家禽、ウシ、ブタ、魚）のゼラチンおよびデンプンである。動物起源のヒドロプロテクト性コロイドは、宗教上のまたはアレルゲン性の理由から所望されないことが多く、デンプンベースのヒドロプロテクト性コロイドは、グルテンおよびコーンを含まない製品に関心のある消費者に好まれないため、代案のヒドロプロテクト性コロイドに対する継続する必要性がある。
【０００３】
イネ胚乳タンパク質は、栄養的および低アレルギー性として認識され、したがって活性成分調合物のための保護親水コロイドの適切な代案の起源であることができる。しかし中性ｐＨにおけるイネ胚乳タンパク質の高い非溶解性および機能不良は、食物および医薬製品中の機能性成分としてのその産業上の利用を制限する。本発明はこれらの制限を克服し、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を、脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の調合物のための保護親水コロイドとして取込んでいる。
【０００４】
米タンパク質は、トウモロコシおよび小麦をはじめとするその他の穀類と比較して栄養価が上位にあり、したがって食物成分として莫大な潜在的用途を有すると考えられる。穀物タンパク質は、必須アミノ酸システインおよびメチオニンに富む。リジンは、穀物タンパク質中の主要な制限アミノ酸であるが、米はその他の穀物タンパク質（小麦２．３、トウモロコシ２．５ｇ／１６ｇＮ）よりも多くのリジン（３．８ｇ／１６ｇＮ）を含有する（下に引用する参考文献４を参照されたい）。米は概して一般的な穀物（小麦１０．６％、トウモロコシ９．８％、大麦１１．０％、雑穀１１．５％）中で、最も低いタンパク質含量（７．３％）を有すると見なされるが、米タンパク質の正味タンパク質利用率（７３．８％）は穀物中で最も高い（小麦５３．０％、トウモロコシ５８．０％、大麦６２．０％、雑穀５６．０％）。
【０００５】
米タンパク質の単離はその他の穀物タンパク質と比較して困難であり、したがって高価である。主要米タンパク質であるグルテリンは疎水性であり、ジスルフィド結合によって架橋している。抽出されるタンパク質は、本来高度に不溶性であり、タンパク質単離で使用される条件はそれらの溶解性をさらに低下させ、したがって機能性成分としての応用を制限してきた。高タンパク質米製品は、アルカリ抽出とそれに続くタンパク質の等電ｐＨでの沈殿によって、米粉から得ることができる。α−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、およびプルラナーゼなどのデンプン加水分解酵素を使用して、デンプンを可溶化および除去することで、米粉中のタンパク質を分離することが多い。デンプン加水分解酵素に加えて、米タンパク質濃縮物中のタンパク質含量をさらに増大させるために、セルラーゼおよびヘミセルラーゼ酵素が使われている。しかし適切な抽出方法、およびこのような単離物の機能性に関する情報は限られている。認可された食品等級酵素および薬品を使用した効率的な抽出方法は、米タンパク質の商業生産および応用にとって必須である。
【０００６】
この必要性は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む本発明の組成物により満たされる。
【０００７】
［背景技術］
１．「米国穀物化学者協会の承認方法（Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ）」，第８版，１９９０年度ＡＡＣＣ方法，４４〜１６頁および４６頁〜１２頁．Ｔｈｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：ミネソタ州セントポール（Ｓｔ．Ｐａｕｌ）．
２．アシュリ（Ａｃｈｏｕｒｉ），Ａ．，ジョイス・イレーヌ・ボウイ（Ｊｏｙｃｅ Ｉｒｅｎｅ Ｂｏｙｅ），Ｊ．Ｉ．，ヤイラヤン（Ｙａｙｌａｙａｎ）Ｖ．Ａ．，およびイエボア（Ｙｅｂｏａｈ），Ｆ．Ｋ．：「糖化大豆１１Ｓグリシニンの機能特性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｇｌｙｃａｔｅｄ Ｓｏｙ １１Ｓ Ｇｌｙｃｉｎｉｎ）」Ｊ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．２００５年，第７０号（４），２６９頁．
３．バニエル（Ｂａｎｉｅｌ），Ａ．，カエル（Ｃａｅｒ），Ｄ．，コラス（Ｃｏｌａｓ），Ｂ．およびグエグエン（Ｇｕｅｇｕｅｎ），Ｊ．：「エンドウ豆（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）由来の１１ｓ貯蔵たんぱく質のグリコシル化誘導体の機能特性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ｔｈｅ １ １ｓ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ｐｅａ（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．））」，Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９２年，第４０号，２００〜２０５頁．
４．ベラ（Ｂｅｒａ），Ｍ．Ｂ．；ムーカジ（Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ），Ｒ．Ｋ．，「米糠タンパク質濃縮物の溶解度、乳化、および起泡特性（Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ，ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ，ａｎｄ ｆｏａｍｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．１９８９年，第５４号（１），１４２〜１４５頁。
５．カブラ（Ｃａｂｒａ），Ｖ．アレグイン（Ａｒｒｅｇｕｉｎ），Ｒ．，（ヴァスケス・デュオー（Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｄｕｈａｌｔ），Ｒ．ファレス（Ｆａｒｒｅｓ），Ａ．：「アルカリ脱アミド化がＺ１９α−ゼインの構造、表面疎水性および乳化特性に及ぼす効果（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｕｒｆａｃｅ Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ，ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｚ１９ ａｌｐｈａ−Ｚｅｉｎ）Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２００７年，第５５号，４３９〜４４５頁．
６．加藤，Ａ．，佐々木，Ｙ．，古田，Ｒ．，および小林，Ｋ．：「オボアルブミン−デキストラン混合物の制御された乾燥加熱により調製される機能的タンパク質多糖類コンジュゲート（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｄｒｙ−ｈｅａｔｉｎｇ ｏｆ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ−ｄｅｘｔｒａｎ ｍｉｘｔｕｒｅｓ）」．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９０年，第５４号、１０７〜１１２頁．
７．加藤，Ａ．，下川，Ｋ．，および小林，Ｋ．：「プロナーゼ消化とそれに続くデキストラン共役による不溶性グルテンの機能特性の改善（Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ ｇｌｕｔｅｎ ｂｙ Ｐｒｏｎａｓｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｄｅｘｔｒａｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９１年，第３９号，１０５３〜１０５６頁．
８．加藤，Ｙ．，青木，Ｔ．，加藤，Ｎ．，中村，Ｒ．，および松田，Ｔ．：「アミノ−カルボニル反応によるグルコース−６−ホスフェートを用いたオボアルブミンの変性、タンパク質の熱安定性および乳化活性の改善（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｗｉｔｈ ｇｌｕｃｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｙ ａｍｉｎｏ−ｃａｒｂｏｎｙｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｅａｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９９５年，第４３号，３０１〜３０５頁．
９．キンセラ（Ｋｉｎｓｅｌｌａ），Ｊ．Ｅ．：「食品中のタンパク質の機能特性：調査（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｆｏｏｄｓ：ａ ｓｕｒｖｅｙ）」．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｎｕｔｒ．１９７６年，第８号（４），１９〜８０頁．
１０．中村，Ｓ，加藤，Ａ，小林，Ｋ．：「優れた乳化特性と抗菌効果を有する二機能性リゾチーム−ガラクトマンナン共役物（Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｌｙｓｏｚｙｍｅ−ｇａｌａｃｔｏｍａｎｎａｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｈａｖｉｎｇ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ）」．Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ １９９２年，第４０号，７３５〜９頁．
１１．中村，Ｓ．，斎藤，Ｍ．，後藤，Ｔ．，佐伯，Ｈ．，小川，Ｍ．，後藤，Ｇ．，ゴーヤ（Ｇｏｈｙａ），Ｙ．，およびフワン（Ｈｗａｎｇ），Ｊ．−Ｋ．：「天然に発生するメイラード反応を通したリゾチーム及びキシログリカン加水分解物からの生物学的に活性なネオ糖たんぱく質の急速形成（Ｒａｐｉｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｎｅｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｌｙｓｏｚｙｍｅ ａｎｄ ｘｙｌｏｇｌｕｃａｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｎｕｔｒ．２０００年，第５号，６５〜６９頁．
１２．ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ），Ｐ．Ｍ．，ペターセン（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ），Ｄ．，およびダンブマン（Ｄａｍｂｍａｎｎ），Ｃ．：「食品たんぱく質の加水分解度を判定するための改良型方法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）」．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．２００１年，第６６号（５），６４２〜６４６頁．
１３．ニールセン（Ｎｉｅｌｓｏｎ），Ｐ．Ｍ．：「タンパク質加水分解物の機能性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ）」．：ダモダラン（Ｄａｍｏｄａｒａｎ），Ｓ，パラフ（Ｐａｒａｆ），Ａ，編．「食品タンパク質とその応用（Ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」．第１版，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．１９９７年，４４３〜７２頁．
１４．オリバー（Ｏｌｉｖｅｒ），Ｃ．Ｍ．，メルトン（Ｍｅｌｔｏｎ），Ｌ Ｄ．，およびスタンレー（Ｓｔａｎｌｅｙ），Ｒ．Ａ．：「メイラード反応を介した新規の機能性を有するタンパク質の作成（Ｃｒｅａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｎｏｖｅｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｖｉａ ｔｈｅ Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）」．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ中のレビュー、２００６年，第４６号，３３７〜３５０頁．
１５．パラマン（Ｐａｒａｍａｎ，）Ｉ．，ヘティアラキ（Ｈｅｔｔｉａｒａｃｈｃｈｙ），Ｎ．Ｓ．，シーファー（Ｓｃｈａｅｆｅｒ），Ｃ．，およびベック（Ｂｅｃｋ）．Ｍ．Ｉ．：「酵素変性イネ胚乳タンパク質の疎水性、溶解度および乳化特性（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ，Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒｉｃｅ Ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ）」．Ｃｅｒｅａｌ ｃｈｅｍ．に提出、２００７年，原稿ＩＤ．ＣＣ１０−０６−０１２５
１６．ピアス（Ｐｅａｒｃｅ），Ｋ．Ｎ．；キンセラ（Ｋｉｎｓｅｌｌａ），Ｊ．Ｅ．「タンパク質の乳化特性：比濁法技術の評価（Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）」．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９７８年，第２６号，７１６〜７２２頁．
１７．ＳＡＳ（スタティスティカル・アナリシス・システム），２００２年，ＪＭＰ（登録商標）ユーザー・ガイド（Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ），バージョン５．ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．Ｃａｒｙ，ＮＣ．
１８．シュウェンク（Ｓｃｈｗｅｎｋｅ）Ｋ．Ｄ．：「［食品タンパク質とその応用］中、第１３章、タンパク質の酵素的および化学的変性（Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｈａｐｔｅｒ １３ ｉｎ“Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”）」Ａ．ダモダラン（Ｄａｍｏｄａｒａｎ）およびＡ．パラフ（Ｐａｒａｆ）編，１９９７年，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ．
１９．ウェン（Ｗｅｎ），Ｔ．Ｎ．；リュース（Ｌｕｔｈｅ），Ｄ．Ｓ．、「米グルテリンの生化学的特性決定（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｇｌｕｔｅｌｉｎ）」．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９８５年，７８，１７２〜１７７頁。
【０００８】
［発明の詳細な説明］
［発明の組成物］
本発明の組成物は、固体組成物、すなわち安定した水溶性または水分散性粉末であっても良く、またはそれらは液体組成物、すなわち前述の粉末の水性コロイド溶液または水中油分散体であってもよい。水中油エマルジョンであってもよく、または懸濁された、すなわち固体粒子、および乳化された、すなわち液体小滴の混合物を特徴としてもよい安定化水中油分散体は、下述の方法によって、または類似した様式によって調製されてもよい。
【０００９】
より詳細には、本発明は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質のマトリクス中に１つ以上の脂溶性活性成分および／または１つ以上の脂溶性着色剤を含む、粉末形態の安定した組成物に関する。
【００１０】
好ましくは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の量は、組成物総量を基準にして、１〜７０重量％、より好ましくは５〜５０重量％、さらにより好ましくは１０〜４０重量％、最も好ましくは１０〜２０重量％であり（２０重量％が最も好ましい量である）、かつ／または脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の量は０．１〜９０重量％、好ましくは１〜８０重量％、より好ましくは１〜２０重量％である。トコフェロールおよび／またはパルミチン酸アスコルビルなどの追加的アジュバントおよび／または賦形剤が存在する場合、それらは組成物総量を基準にして、０．０１〜５０重量％の量、好ましくは０．１〜３０重量％の量、より好ましくは０．５〜１０重量％の量で存在する。
【００１１】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質］
本発明の好ましい実施態様では、イネ胚乳タンパク質は、その製造について下述する変性イネ胚乳タンパク質である。
【００１２】
特に好ましい米タンパク質は、アルカリ抽出（特にアルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）での酵素変性）、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類からなる群から（特に単糖類および多糖類からなる群から）選択される少なくとも１つの化合物での部分的架橋、遠心分離および限外ろ過といったステップによって得られる米タンパク質である。さらに好ましい米タンパク質は、アルカリ抽出、（特にアルカラーゼでの酵素変性）、部分的脱アミド化、遠心分離および限外ろ過によって得られる米タンパク質である。
【００１３】
さらなる用途のために必要な場合は、このようにして得られた変性イネ胚乳タンパク質を乾燥させてもよい。
【００１４】
本発明の好ましい実施形態においては、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されている使用されるイネ胚乳タンパク質は、≧０．２、好ましくは≧０．４５、より好ましくは≧０．５、さらに一層好ましくは０．５〜１．０のエマルジョン活性を有する。エマルジョン活性の判定は、実施例１に記述される通りである。本発明は同様に、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているこれらのイネ胚乳タンパク質自体にも言及する。
【００１５】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の量は、以下で開示する通り組成物の総量を基準として１〜７０重量％、好ましくは５〜５０重量％、より好ましくは１０〜４０重量％、最も好ましくは１０〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００１６】
［脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤］
脂溶性活性成分は、好ましくは薬理学的効果のある成分、または一般にヒトまたは動物の身体に健康上の利点を提供する成分である。本発明に関連して「脂溶性」（脂溶性活性成分／脂溶性着色剤）は、その化合物が室温および大気圧下で水にほとんど溶解しないことを意味する。
【００１７】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤は、好ましくはカロテンおよび構造的に関連したポリエン化合物、脂溶性ビタミン、補酵素Ｑ１０、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの多価不飽和脂肪酸とそのエステル（（同一または異なる脂肪酸を含有する）エチルエステルまたはトリグリセリドなど）、ポリ不飽和脂肪酸に富んだモノ−、ジ−、トリグリセリド、脂溶性ＵＶ−Ａフィルター、ＵＶ−Ｂフィルター、ならびにそれらと特にＣ１〜２０炭酸とのエステルなどのそれらの生理学的に許容可能な誘導体、およびそれらの任意の混合物からなる群から選択される。
【００１８】
最も好ましい脂溶性ビタミンは、ビタミンＡまたはＥである。
【００１９】
カロテンおよび構造的に関連したポリエン化合物の好ましい例は、α−カロテン、β−カロテン、８’−アポ−β−カロテナール、エチルエステルなどの８’−アポ−β−カロテン酸エステル、カンタキサンチン、アスタキサンチン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、クロセチン、α−ゼアカロテン、β−ゼアカロテンなどのカロテノイド、ならびにそれらと特にＣ１〜２０炭酸とのエステルなどのそれらの生理学的に許容可能な誘導体、およびそれらの任意の混合物である。
【００２０】
最も好ましいカロテノイドはβ−カロテンである。
【００２１】
「β−カロテン」という用語は、全てのシスならびに全てのトランス異性体、および全ての可能な混合したシス−トランス−異性体を包含する。その他のカロテノイドについても同様である。
【００２２】
「ゼアキサンチン」という用語は、天然Ｒ，Ｒ−ゼアキサンチン、ならびにＳ，Ｓ−ゼアキサンチン、メソ−ゼアキサンチンおよびそれらの任意の混合物を包含する。ルテインについても同様である。
【００２３】
（脂溶性）活性成分は天然起源であってもよく、すなわち植物から単離／抽出されて純化および／または濃縮されてもよく、ならびに化学および／または微生物学的（発酵性）経路によって合成されるものであってもよい。
【００２４】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤の量は、以下で開示する通り組成物の総量を基準として０．１〜９０重量％、好ましくは１〜８０重量％、より好ましくは１〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００２５】
［さらなる構成要素］
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および活性成分以外に、本発明の組成物は、好ましくはさらに、少なくとも１つの水溶性抗酸化剤および／または脂溶性抗酸化剤を含有していてよい。水溶性抗酸化剤および／または脂溶性抗酸化剤の量は、組成物の総量を基準として０．１〜１０．０重量％好ましくは０．５〜５．０重量％、より好ましくは０．５〜３．０重量％の範囲内にあってよい。
【００２６】
水溶性抗酸化剤は、例えばアスコルビン酸またはその塩、好ましくはアスコルビン酸ナトリウムであってもよく、ヒドロキシチロソール、およびオレウロペインアグリコンなどの水溶性ポリフェノールであっても、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）またはローズマリーまたはオリーブの抽出物であってもよい。
【００２７】
脂溶性抗酸化剤は、例えばｄｌ−α−トコフェロール（すなわち合成トコフェロール）、ｄ−α−トコフェロール（すなわち天然トコフェロール）、β−またはγ−トコフェロール、またはこれらの２つ以上の混合物などのトコフェロールと、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）と、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）と、エトキシキン、没食子酸プロピルと、ｔｅｒｔ．ブチルヒドロキシキノリンと、または６−エトキシ−１，２−ジ−ヒドロキシ−２，２，４−トリメチルキノリン（ＥＭＱ）、または好ましくはパルミチン酸アスコルビルまたはステアリン酸アスコルビルなどの脂肪酸のアスコルビン酸エステルであってもよい。
【００２８】
本発明の組成物は、脂肪酸のモノ−およびジグリセリド、脂肪酸のポリグリセロールエステル、レシチンと、Ｎ−アシル化アミノ酸およびそれらの誘導体、アルキルまたはアルケニルラジカルがあるＮ−アシル化ペプチド、およびそれらの塩と、硫酸アルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステル、およびそれらの誘導体および塩と、ポリオキシエチレン化アルキルまたはアルケニル脂肪エーテルまたはエステルと、ポリオキシエチレン化アルキルまたはアルケニルカルボン酸およびそれらの塩と、Ｎ−アルキルまたはＮ−アルケニルベタインと、アルキルトリメチルアンモニウムまたはアルケニルトリメチルアンモニウムおよびそれらの塩と、ポリオールアルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステルと、それらの混合物からなる群から選択される共乳化剤をさらに含有してもよい。
【００２９】
ポリオールアルキルまたはアルケニルエーテルまたはエステルの好ましい例は、Ｓｅｐｐｉｃ社によりＭｏｎｔａｎｏｘ ４０ ＤＦの商品名の下に販売されるパルミチン酸ソルビタン２０ ＥＯまたはポリソルベート４０、ＩＣＩ社によりトウィーン（Ｔｗｅｅｎ）２０の商品名の下に販売されるラウリン酸ソルビタン２０ ＥＯまたはポリソルベート２０などの少なくとも２０単位の酸化エチレンでポリオキシエチレン化されたソルビタンアルキルまたはアルケニルエステル、およびモノステアリン酸ソルビタンである。
【００３０】
共乳化剤の量は、組成物の総量を基準として０〜９０重量％、好ましくは０〜５０重量％、より好ましくは０〜２０重量％の範囲内にあってよい。
【００３１】
本発明に従った調合物はさらに錠剤に圧搾されてもよく、単糖類、二糖類、オリゴ糖類および多糖類、グリセロール、およびトリグリセリドからなる群から選択される１つ以上の賦形剤および／またはアジュバントが添加されてもよい。
【００３２】
本発明の組成物中に存在してもよいモノ−および二糖類の好ましい例は、スクロース、転化糖、キシロース、グルコース、フルクトース、乳糖、マルトース、ショ糖および糖アルコールである。
【００３３】
オリゴ糖類および多糖類の好ましい例は、デンプン、加工デンプン、およびデンプン加水分解物である。デンプン加水分解物の好ましい例はデキストリンおよびマルトデキストリンであり、特に５〜６５個の範囲のデキストロース同等物（ＤＥ）を有するもの、および特に２０〜９５個の範囲のＤＥを有するようなグルコースシロップである。「デキストロース同等物（ＤＥ）」という用語は加水分解度を意味し、乾燥重量を基準にしてＤ−グルコースとして計算される還元糖量の基準である。尺度は、０に近いＤＥを有する天然デンプン、および１００のＤＥを有するグルコースを基準とする。
【００３４】
トリグリセリドは、適切には、植物油または脂肪、好ましくはトウモロコシ油、ヒマワリ油、ダイズ油、ベニバナ油、ナタネ油、落花生油、パーム油、パーム核油、綿実油、オリーブ油またはココナッツ油である。
【００３５】
１つまたは複数の賦形剤および／または１つまたは複数のアジュバントの量は組成物の総量を基準として０．１〜５０重量％、好ましくは０．１〜３０重量％、より好ましくは０．５〜１０重量％の範囲内にあってよい。
【００３６】
固体組成物は、ケイ酸またはリン酸三カルシウムなどの固化防止剤、および１０重量％までで通例２〜５重量％の水をさらに含んでもよい。
【００３７】
固化防止剤の量は、組成物の総量を基準として０〜５重量％、好ましくは０〜３重量％、より好ましくは０．２〜３．０重量％の範囲内であってよい。
【００３８】
［組成物の製造］
本発明の目的はまた、
Ｉ）単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の水溶液またはコロイド溶液（かかるイネ胚乳タンパク質の製造については以下で記述されている）を調製するステップと、
ＩＩ）場合によりステップＩ）で調製された溶液に、少なくとも水溶性賦形剤および／またはアジュバントを添加するステップと、
ＩＩＩ）少なくとも脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤、および場合により少なくとも脂溶性アジュバントおよび／または賦形剤の溶液または分散体を調製するステップと、
ＩＶ）ステップＩ）〜ＩＩＩ）で調製された溶液を互いに混合するステップと、
Ｖ）このようにして得られた混合物を均質化するステップと、
ＶＩ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を部分的に架橋するために架橋剤を添加するステップと、
ＶＩａ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を部分的に架橋するため、ステップＶＩ）を実施した後得られる混合物に酵素処理または熱処理を施すステップと、
ＶＩＩ）場合によりステップＶ）および／またはＶＩ）で得られた分散体を粉末に加工するステップと、
ＶＩＩＩ）場合によりステップＶＩＩ）で得られた粉末を乾燥するステップと、
ＩＸ）場合により乾燥粉末に酵素処理または熱処理を施して（変性）イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと
を含み、ただしステップＶＩ）が実施される場合、ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）の双方でなく片方のみが実施される、本発明の組成物を製造する方法である。
【００３９】
［ステップＩ］
このステップは、場合により撹拌下で、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質（製造については以下を参照のこと）に対し水を添加することによってかまたはその逆により単純に実施される。或いは、超音波処理を介して均質化を行なうことも可能であり得る。
【００４０】
好ましくは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質は、以上および以下で記述する通りの好適性で使用される。
【００４１】
［ステップＩＩ］
添加してもよい水溶性賦形剤および／またはアジュバントは、例えば単糖類、二糖類、オリゴ糖類および多糖類、グリセロールおよび水溶性抗酸化剤である。それらの例は上に示した。
【００４２】
［ステップＩＩＩ］
脂溶性活性成分および脂溶性着色剤は、上述したようなものである。
【００４３】
（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤および任意の脂溶性賦形剤およびアジュバント（ａｄｊｕｖｅｎｔｓ）は、それ自体として、またはトリグリセリドおよび／または（有機）溶剤に溶解または懸濁して使用される。
【００４４】
適切な有機溶剤は、ハロゲン化脂肪族炭化水素、脂肪族エーテル、脂肪族および環式炭酸塩、脂肪族エステルおよび環式エステル（ラクトン）、脂肪族および環式ケトン、脂肪族アルコール、およびそれらの混合物である。
【００４５】
ハロゲン化脂肪族炭化水素の例は、モノ−またはポリハロゲン化直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。特に好ましい例はモノ−またはポリ−塩素化または−ブロム化された直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。より好ましいのはモノ−またはポリ塩素化直鎖、分枝または環式Ｃ１〜Ｃ１５−アルカンである。最も好ましいのは塩化メチレンおよびクロロホルムである。
【００４６】
脂肪族エステルおよび環式エステル（ラクトン）の例は、酢酸エチル、酢酸イソプロピルおよびｎ−酢酸ブチル、およびγ−ブチロラクトンである。
【００４７】
脂肪族および環式ケトンの例は、アセトン、ジエチルケトンおよびイソブチルメチルケトン、およびシクロペンタノンおよびイソホロンである。
【００４８】
環式炭酸塩の例は、特に炭酸エチレンおよび炭酸プロピレンおよびそれらの混合物である。
【００４９】
脂肪族エーテルの例は、アルキル部分が１〜４個の炭素原子を有するジアルキルエーテルである。好ましい一例はジメチルエーテルである。
【００５０】
脂肪族アルコールの例は、エタノール、イソプロパノール、プロパノール、およびブタノールである。
【００５１】
さらに溶剤として、任意の油（トリグリセリド）、オレンジ油、リモネンなどおよび水が使用できる。
【００５２】
添加してもよい脂溶性賦形剤および／またはアジュバントは、例えばトウモロコシ油、モノ−または脂肪酸のジグリセリド、ポリグリセロール脂肪酸、および中鎖トリグリセリド（「ＭＣＴ」）である。
【００５３】
［ステップＩＶ］
本発明の代案の方法ではステップＩＩＩ）が実施されないが、脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤および任意の脂溶性賦形剤および／またはアジュバントが、ステップＩ）またはＩＩ）の溶液に直接添加される。
【００５４】
［ステップＶ」
均質化のためには、高圧均質化、高剪断乳化（ロータ・ステータシステム）、微粒子化（ｍｉｃｒｏｎｉｓａｔｉｏｎ）、湿潤製粉、マイクロチャネル（ｍｉｃｒｏｃｈａｎｅｌ）乳化、膜乳化または超音波処理などの従来の技術を応用できる。食物、飲料、動物飼料、化粧品または医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のために、（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤を含有する組成物の調製のために使用されるその他の技術については、その内容を参照によって本明細書に援用するＥＰ−Ａ ０ ９３７ ４１２号明細書（特に段落［０００８］、［００１４］、［００１５］、［００２２］から［００２８］）、ＥＰ−Ａ １ ００８ ３８０号明細書（特に段落［０００５］、［０００７］、［０００８］、［００１２］、［００２２］、［００２３］から［００３９］）および米国特許第６，０９３，３４８号明細書（特に２欄２４行から３欄３２行、３欄４８行から６５行、４欄行５３行から６欄６０行）で開示される。
【００５５】
［ステップＶＩ］
架橋剤は、好ましくは還元糖、糖タンパク質、およびグリコペプチドからなる群から選択される。したがって（変性）イネ胚乳タンパク質と、糖タンパク質／グリコペプチドの糖または糖部分との分子間架橋が形成する。架橋剤の好ましい例としては、単糖類（フルクトース、グルコース、ガラクトース、キシロース）、二糖類（しょ糖、乳糖）、オリゴ糖類（デキストリン）および多糖類（キサンタンガム、ペクチン）があり、最も好ましいのは、フルクトース、グルコースおよびキサンタンガムである。
【００５６】
糖タンパク質は、タンパク質に共有結合した炭水化物（またはグリカン）を含有する化合物である。炭水化物は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類またはそれらの誘導体（例えば、スルホまたはホスホ置換）の形をしていてよい。
【００５７】
糖タンパク質の好ましい例は、卵アルブミン、牛乳カゼインである。
【００５８】
糖ペプチドは、Ｌおよび／またはＤ−アミノ酸からなるオリゴペプチドに連結された炭水化物からなる化合物である。糖アミノ酸は、あらゆる種類の共有結合によって単一のアミノ酸に付着された糖類である。
【００５９】
糖ペプチドの好ましい例としては、鉄結合糖ペプチドである牛乳ラクトフェリンがある。
【００６０】
したがって、同時係属中のＰＣＴ／ＥＰ２００６／０１１８７３号明細書とは対照的に、ここでは、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質は、さらに、還元糖、糖タンパク質または糖ペプチドからなる群から選択された少なくとも１つの化合物と部分的に架橋されていてよい。
【００６１】
［ステップＶＩａ］
架橋は、上述のように架橋剤をさらに含有する混合物を熱処理してメイラード型反応において糖とタンパク質との架橋を引き起こし、すなわち好ましくは約３０〜約１６０℃の温度、より好ましくは約７０〜約１００℃の温度、最も好ましくは約８０〜約９０℃の温度で熱的に処理して達成できる。
【００６２】
架橋は、タンパク質の利用可能なアミノ基と単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）のカルボニル基との間の初期縮合の結果として得られる酵素反応または非酵素反応である。架橋は、乳化、封入の改善といったようなタンパク質の物理化学特性および機能特性を改変させるために使用されている１つの特異的な型の変性である。
【００６３】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは架橋剤で部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質のさらなる部分的架橋は、架橋酵素（アシルトランスフェラーゼ、ＥＣ２．３、例えばトランスグルタミナーゼ、ＥＣ２．３．２．１３、タンパク質−グルタミン：γ−グルタミルトランスフェラーゼ）での処理によって、すなわち約０℃〜約７０℃好ましくは約２０℃〜約４０℃の温度で適切に実施される酵素処理によっても達成可能である。好ましくは、ステップＶＩａ）に従った酵素処理は、架橋酵素、特にトランスグルタミナーゼでの処理である。
【００６４】
トランスグルタミナーゼの場合、酵素的架橋はε−（γ−グルタミル）−リジンイソペプチド結合の形成によって、安定したタンパク質含有多糖類網目状組織をもたらす。酵素的架橋のためには、糖タンパク質またはグリコペプチドの使用が好ましい。
【００６５】
親油性部分の組み込みのため、メイラード型反応において糖とタンパク質の架橋を引き起こす熱処理、および酵素的架橋の双方の技術が使用でき、組成物の乾燥形態（ステップＩＸ）、または水溶液または懸濁液（ステップＶＩａ）中のどちらかで実施できる。酵素的架橋は、好ましくは水溶液または懸濁液中で実施される。
【００６６】
［ステップＶＩＩ］
水中油分散体であるこのようにして得られた分散体は、噴霧乾燥、流動床顆粒化と組み合わさった噴霧乾燥（後者の技術は一般に流動化噴霧乾燥またはＦＳＤとして知られている）によって、または噴霧されたエマルジョン小滴がデンプン、ケイ酸カルシウム、および二酸化ケイ素などの吸収材の床に捕捉されて引き続いて乾燥される粉末捕捉技術などの任意の従来の技術を使用して、有機溶剤（存在する場合）の除去後に、例えば乾燥粉末などの固体組成物に転換できる。
【００６７】
噴霧乾燥は、約１００〜約２５０℃、好ましくは約１５０℃〜約２００℃、より好ましくは約１６０〜約１９０℃の入口温度、および／または約４５〜約１６０℃、好ましくは約５５〜約１１０℃、より好ましくは約６５〜約９５℃の出口温度（製品温度）で実施されてもよい。
【００６８】
［ステップＶＩＩＩ］
ステップＶＩＩで得られた粉末の乾燥は、好ましくは≦１００℃の温度、好ましくは２０〜１００℃の温度、より好ましくは６０〜７０℃の温度で実施される。乾燥が真空中で実施される場合、温度はより低い。
【００６９】
［ステップＩＸ］
熱処理を通じた架橋は、ステップＶＩａについて既に上述したようにして実施される。酵素処理についても同様であるが、好ましくは溶液／懸濁液中で実施される。
【００７０】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の製造］
本発明は同様に、米糠が精粉前に除去されており、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されているかまたは粉砕米から出発して部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を製造する方法において、
ａ）粉砕米の水溶液または懸濁液を調製し、製粉前に米糠が除去されて溶液または懸濁液が好ましくは水溶液または懸濁液総量を基準にして０．１〜３０重量％、好ましくは１０〜１５重量％の乾燥質量含量を有するステップと、
ｂ）場合により粉砕米の非タンパク質部分またはタンパク質部分を除去してイネ胚乳タンパク質を得るステップであって、米糠が製粉前に除去されるステップと、
ｃ）精粉前に米糠が除去されている粉砕米のタンパク質部分を、メイラード型の反応において、粉砕米を単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に反応させるかまたは粉砕米のタンパク質部分を部分的に脱アミド化させることによって変性させて、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｄ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を単離するステップと、
ｅ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されるイネ胚乳タンパク質を固体形態へと加工するステップと；
を含む方法にも関する。
【００７１】
［ステップａ）］
製粉前に米糠が除去された粉砕米はまた、「米粉」の表現の下に知られている。
【００７２】
このステップは、場合により米粉が完全に分散するまで激しく（機械的撹拌機で）撹拌しながら、または米粉懸濁液をホモジナイザーで例えば室温で５分間均質化して、単に米粉に水を添加して、または水に米粉を添加して実施される。
【００７３】
［ステップｂ）］
ステップｂ）は、パラマン，Ｉ．，ヘティアラキ，Ｎ．Ｓ．，シーファー，Ｃ．，およびベック（Ｂｅｃｋ），Ｍ．Ｉ．，Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ．，２００６年，第８３号（６），６６３〜６６７頁：「化学および酵素法により抽出されたイネ胚乳タンパク質の物理化学特性（Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ）」により記述されている通りに実施してよい。
【００７４】
［非タンパク質部分の除去］
ステップｂ）は、好ましくは米粉をいかなるｐＨ調節もなしに（ｐＨ６〜７）非タンパク質分解酵素により、例えば０．５％ターマミル（Ｔｅｒｍａｍｙｌ）（登録商標）水性懸濁液により温度９０℃で２時間、次に０．１％セルラーゼ水性懸濁液により温度５０℃で３０分間処理して酵素を不活性化して、米粉のタンパク質部分から非タンパク質部分を分離し除去することによって行われてもよい。
【００７５】
好ましい非タンパク質分解酵素の例は、α−アミラーゼなどのデンプン分解酵素、およびセルラーゼ、すなわちセルロース分解酵素、およびそれらの混合物である。α−アミラーゼの好ましい例は、米国のノボ・ノルディスク・バイオケム・ノース・アメリカ・インコーポレーテッド（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．）から市販されるターマミル（登録商標）１２０、タイプＬである。その他の好ましい例は、米国のノボ・ノルディスク・バイオケム・ノース・アメリカ・インコーポレーテッドから市販されるＬｉｑｕｚｙｍｅ（登録商標）Ｓｕｐｒａ、日本国名古屋市（Ｎａｇｏｙａ，Ｊａｐａｎ）の天野製薬株式会社（Ａｍａｎｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）から市販されるアミラーゼＳ「アマノ」３５Ｇ、米国のジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッド（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ（ＵＳＡ））から市販されるＭｕｌｔｉｆｅｃｔセルラーゼ、および日本国名古屋市の天野製薬株式会社から市販されるセルラーゼＴ「アマノ」４である。
【００７６】
酵素反応は、無機機酸（例えば塩酸）または有機酸（例えばクエン酸）または塩基が使用される場合は溶液または懸濁液を中性化することで、または加熱して酵素を変性させることで停止できる。
【００７７】
変性は、溶液を８０〜９５℃の温度、好ましくは８０〜８５℃の温度に１０〜１５分加熱することで達成してもよい（特に３．５〜４．５の低ｐＨで）。その後溶液を５０℃に冷却してもよい。
【００７８】
非タンパク質部分の分離は、遠心分離（５０００ｇで１５分間）（非タンパク質部分は水相中に存在する）と、それに続く脱イオン水での洗浄によって達成されてもよい。イネ胚乳タンパク質はペレットのままである。
【００７９】
［タンパク質部分の除去］
あるいは、遠心分離または濾過前にいわゆる「アルカリ抽出」またはいわゆる「塩抽出」を実施してもよい。
【００８０】
「アルカリ抽出」とは、最初に４０〜６０℃で３時間、米粉溶液または懸濁液のｐＨを７〜１２の値、好ましくは８〜１０の値、より好ましくは約９の値に、アルカリ溶液（例えばＮａＯＨ水溶液）で調節することを意味する。
【００８１】
タンパク質収率がタンパク質機能性よりも重要な場合は、ｐＨを好ましくは８〜１２、より好ましくは９〜１２、さらにより好ましくは１０〜１２の値に調節することが有利であり得る。
【００８２】
好ましくはこのような塩基は、約０．１〜５Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。塩基は無機塩基であってもよい。無機塩基の例は、水酸化ナトリウム（好ましい）、水酸化カリウム、および水酸化カルシウムなどのアルカリ（土類）水酸化物である。
【００８３】
「塩抽出」は「アルカリ抽出」に類似するが、塩基に加えて塩化ナトリウムなどの塩が使用される。好ましい本発明の実施態様では、０．０８Ｍの塩化ナトリウム水溶液（ＮａＯＨでｐＨ１１に調節）が、抽出溶剤として使用される。
【００８４】
（アルカリまたは塩抽出）どちらの場合もタンパク質部分は、水相に移動される。次に遠心分離または濾過によって、非タンパク質部分からタンパク質部分を分離してもよい。
【００８５】
［タンパク質部分のさらなる変性］
米粉のさらなる変性は、（市販される）食品等級アルカリ性、中性および／または酸性タンパク質分解酵素で、それ（そのタンパク質部分）を処理することによって達成されてもよい。いくつかのタンパク質分解酵素について、酵素規格および最適条件を以下の表に示す。
【００８６】
【表１】
【００８７】
【表２】
【００８８】
【表３】
【００８９】
タンパク質分解酵素は、細菌または真菌由来ならびに果実由来であってよく、または動物由来であってもよい。
【００９０】
アルカリ性タンパク質分解酵素の例は、市販される米国ノースカロライナ州フランクリントン（Ｆｒａｎｋｌｉｎｔｏｎ，ＮＣ，ＵＳＡ）のノボ・ノルディスク・バイオケムからのアルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）（登録商標）、米国ニューヨーク州ニューヨーク（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）のＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＡｌｋａｌｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ（登録商標）、米国ニューヨーク州ロチェスター（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）のジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからのＰｒｏｔｅｘ ６Ｌ（登録商標）（ジェネンコア（登録商標）Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ）、および米国ニューヨーク州ロチェスターのジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからのジェネンコア（登録商標）Ｐｒｏｔｅａｓｅ ８９９である。
【００９１】
中性タンパク質分解酵素の例は、市販される米国ニューヨーク州ニューヨークのＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＢｒｏｍｅｌａｉｎ（ブロメライン）（登録商標）、米国ニューヨーク州ニューヨークのＥｎｚｙｍｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのリキパノール（Ｌｉｑｕｉｐａｎｏｌ）（登録商標）、および米国ニューヨーク州ロチェスターのジェネンコア・インターナショナル・インコーポレーテッドからの細菌中性タンパク質分解酵素である。中性タンパク質分解酵素のさらなる例は、植物であるパパイヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ）からの製品、すなわち果実起源酵素である、オランダ国デルフト（Ｄｅｌｆｔ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＤＳＭ Ｆｏｏｄ Ｂｅｖｅｒａｇｅｓから市販されるＣｏｌｌｕｐｉｌｉｎ（登録商標）である。
【００９２】
酸性タンパク質分解酵素の例は、米国シグマ（Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ））からのペプシンおよび日本国名古屋市の天野製薬株式会社からの酸性タンパク質分解酵素である。
【００９３】
本発明の方法の好ましい実施態様では、米粉のタンパク質部分は、引き続いて７〜１０の範囲のｐＨにおいて４０〜６０℃で１０〜８０分、２つの異なるアルカリ性タンパク質分解酵素によって処理される。
【００９４】
好ましくはこれらのタンパク質分解酵素の１つは、アルカラーゼ（Ａｌｋａｌａｓｅ）（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｘ ６Ｌ（登録商標）などのセリン特異的タンパク質分解酵素、またはアルカリ性タンパク質分解酵素（登録商標）であり、もう１つはリキパノール（登録商標）またはブロメライン（登録商標）などのシステイン特異的タンパク質分解酵素である。
【００９５】
この変性ステップはまた、酵素を一度に添加せず、それらを（引き続いてまたは同時に）小分けにして添加することで、修正されてもよい。
【００９６】
［ステップｃ）］
ステップｂ）で得られたタンパク質部分は、ステップｃ）すなわち単糖類（二糖類またはオリゴ糖類）または多糖類との部分的反応かまたは部分的脱アミド化を実施するための出発材料として使用される。
【００９７】
［単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と粉砕米のタンパク質部分の部分的反応］
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類とタンパク質部分の反応は、メイラード型の反応の中で進行する。タンパク質部分の水性分散体とそれぞれ単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）の水溶液／分散体は、別々に調製しその後撹拌後に統合してよい。
【００９８】
通常は、最も好ましくは１０重量％という濃度を有する単糖類または多糖類（または二糖類またはオリゴ糖類）の水溶液を、撹拌しながら、最も好ましくは１０重量％という濃度を有するタンパク質部分の水溶液に対しゆっくりと添加して、溶液／分散体の両方の混合物を得た。この混合は、好ましくは、２０〜６０℃、好ましくは３０〜５０℃、より好ましくは３５〜４５℃の範囲内の温度で、１０分〜２時間、好ましくは３０分〜９０分、より好ましくは４５分〜６０分の範囲内の時間実施される。
【００９９】
次に、混合物のｐＨ値を、好ましくは水溶液の形で塩基を添加することにより、６．０〜９．０の範囲内の値まで、好ましくは６．５〜８．５の範囲内の値まで、好ましくは７．０〜８．０の範囲内の値まで調整する。好ましくは、かかる塩基は、約０．１〜３Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。
【０１００】
塩基は無機塩基であってよい。無機塩基の例としては、（土類）アルカリ性水酸化物例えば水酸化ナトリウム（最も好ましい）、水酸化カリウム（好ましい）および水酸化カルシウムがある。
【０１０１】
このようにして得られたアルカリ性混合物を次に、好ましくは噴霧乾燥によって乾燥させる。噴霧乾燥は、５０℃〜２５０℃、より好ましくは６０℃〜１００℃、最も好ましくは６０〜９０℃の範囲内の入口温度で実施される。
【０１０２】
次に、恒湿器内において３０〜７０℃、好ましくは４０〜６０℃、より好ましくは４５〜５５℃の温度まで乾燥済みタンパク質および単糖類または多糖類（または二糖類またはオリゴ糖類）混合物をインキュベートすることにより、反応（架橋）を実施してもよい。反応温度に応じて、反応時間は、２時間〜６０時間、好ましくは４時間〜４０時間、より好ましくは６時間〜３０時間の時間範囲内にある。相対湿度は、水活性を０．５〜０．８の範囲に維持するように、３９〜８５％、より好ましくは４４〜７９％、最も好ましくは５４〜６９％の範囲内で変動し得る。
【０１０３】
架橋は、ステップＶＩａについてすでに上述した通り、酵素処理により実施されてもよい。
【０１０４】
単糖類の好ましい例としてはペントース類およびヘキソース類（フルクトース、グルコース、ガラクトース、キシロース、特にフルクトースおよびグルコース）がある。
【０１０５】
多糖類の好ましい例は、キサンタンガムおよびペクチンである。
【０１０６】
単糖類または多糖類の代りに、二糖類（しょ糖、乳糖）およびオリゴ糖類（デキストリン）を使用してもよい。
【０１０７】
タンパク質部分と単糖の重量比は、０．５〜１２％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．１〜８％（ｗ、ｗ）、より好ましくは０．５〜４％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１０８】
タンパク質部分と多糖（または二糖またはオリゴ糖）の重量比は、０．１〜２０％（ｗ、ｗ）、好ましくは０．５〜２０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１０９】
単糖としてグルコースが使用される場合には、ステップｂ）で得られたタンパク質部分に対するグルコースの重量比は、好ましくは０．１〜８％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．５〜４％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１１０】
多糖としてキサンタンガムが用いられる場合、ステップｂ）で得られたタンパク質部分に対するキサンタンガムの重量比は、好ましくは、０．１〜２０％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
【０１１１】
［粉砕米のタンパク質部分の部分的脱アミド化］
脱アミド化は、好ましくは水溶液の形で塩基を添加することにより、ステップｂ）で得たイネ胚乳タンパク質のタンパク質部分のコロイド水溶液のｐＨ値を９．０〜１３．０の範囲内の値、好ましくは９．５〜１２．５の範囲内の値、好ましくは１０．５〜１２の範囲内の値に調整することにより実施される。好ましくは、かかる塩基は、約０．１〜３Ｍ、好ましくは約０．５〜約２Ｍの濃度を有する。塩基は、無機塩基であってよい。無機塩基の例としては、（土類）アルカリ性水酸化物例えば水酸化ナトリウム（最も好ましい）、水酸化カリウム（好ましい）そして水酸化カルシウムがある。
【０１１２】
かくして結果として得られた混合物を次に２５〜９０℃、好ましくは３０〜８０℃、より好ましくは４０〜７０℃の範囲内の温度にする。
【０１１３】
脱アミド化温度に応じて、脱アミド化の持続時間は、０．５時間〜２４時間、好ましくは０．５〜１２時間、より好ましくは０．５〜６時間の時間範囲内にある。
【０１１４】
［ステップｄ）］
ステップｄ）は、タンパク質を単離するため当業者にとって公知のあらゆる方法によって実施され得る。
【０１１５】
ステップｄ）は例えば遠心分離および／またはろ過により実施され得る。
【０１１６】
通常、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているタンパク質を単離することは必要ではない。
【０１１７】
［ステップｅ）］
例えば乾燥粉末などの固体形態への変換は、当業者に知られている任意の乾燥法によって達成できる。好ましいのは噴霧乾燥または凍結乾燥である。噴霧乾燥は好ましくは約２００℃〜約２１０℃の入口温度、および約７０℃〜約７５℃の出口温度で実施される。凍結乾燥は好ましくは約−２０℃〜約−５０℃の温度で１０〜４８時間実施される。
【０１１８】
本発明の目的は同様に、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質自体、特に上述のようなあらゆる方法によって得ることのできるイネ胚乳タンパク質にもある。さらに一層好ましいのは、上述のようなあらゆる方法によって得られる単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質それ自体である。
【０１１９】
［産業上の利用可能性］
本発明は、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアまたは医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための上述のような組成物の使用、ならびにこのような上述のような組成物を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物それ自体に関する。
【０１２０】
本発明は同様に、上述の通り単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類（特に単糖類または多糖類）と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を含有する食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物、ならびに脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための保護親水コロイドとしてのかかるイネ胚乳タンパク質（前述の通りの選好性を有する）の使用にも関する。
【０１２１】
ヒトをはじめとする動物は、本発明の文脈でヒトの他に、特にヒツジ、雌牛、ウマ、家禽（ブロイラーおよび卵の着色）、エビおよび魚（特にサケおよびニジマス）などの飼育動物、ならびにネコ、イヌ、鳥（例えばフラミンゴ）、および魚などのペットを包含する。
【０１２２】
本発明の組成物が、特に着色剤または機能性成分として使用できる飲料は、例えば、着香天然発泡ミネラルウォーター、清涼飲料またはミネラル飲料などの炭酸飲料、ならびに例えば着香水、果汁、フルーツポンチ、およびこれらの飲料の濃縮形態などの非炭酸飲料であることができる。それらは天然果汁または野菜汁または人工香料をベースにしてもよい。アルコール飲料および即席飲料粉末もまた含まれる。糖含有飲料の他に、ノンカロリーおよび人工甘味料を用いたダイエット飲料もまた含まれる。
【０１２３】
さらに天然起源または合成から得られる乳製品は、本発明の組成物が、特に着色剤としてまたは機能性成分として使用できる食品の範囲内である。このような製品の典型的な例は、乳飲料、アイスクリーム、チーズ、ヨーグルトなどである。豆乳飲料および豆腐製品などの乳代替製品もまた、この応用範囲に含まれる。
【０１２４】
菓子製品や、キャンデーや、ガムや、例えばアイスクリーム、ゼリー、プディング、即席プディング粉末などのデザートなど、本発明の組成物を着色剤としてまたは機能性成分として含有する甘み食品もまた含まれる。
【０１２５】
本発明の組成物を着色剤としてまたは機能性成分として含有する、穀類、スナック、クッキー、パスタ、スープ、およびソース、マヨネーズ、サラダドレッシングなどもまた含まれる。さらに乳製品および穀類のために使用される果実調製品もまた含まれる。
【０１２６】
本発明の組成物を通じて食品に添加される（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤の最終濃度は、食物組成物の総重量を基準にして０．１〜５００ｐｐｍ、特に１〜５０ｐｐｍであってもよく、着色または強化される特定の食品、および意図される着色または強化の程度に左右される。
【０１２７】
本発明の食物組成物は、好ましくは食品に、本発明の組成物の形態の（脂溶性）活性成分および／または脂溶性着色剤を添加することによって得られる。食品または医薬品の着色または強化のために、本発明の組成物は、本発明の水分散性固体組成物の応用について知られている方法に従って使用できる。
【０１２８】
一般に組成物は、特定の応用に従って、水性原液、乾燥粉末混合物、またはその他の適切な食物成分とのプレブレンドのいずれかとして添加してもよい。混合は最終応用の配合次第で、例えば乾燥粉末ブレンダー、低剪断ミキサー、高圧ホモジナイザーまたは高剪断ミキサーを使用して実施できる。容易に明らかであるように、このような専門的事項は専門家の技能の範囲内である。
【０１２９】
組成物が着色剤として使用される錠剤またはカプセルなどの医薬組成物もまた、本発明の範囲内である。錠剤の着色は、錠剤コーティング混合物に液体または固体着色剤組成物の形態で本発明の組成物を別々に添加する、または錠剤コーティング混合物の構成要素の１つに着色剤組成物を添加することによって達成できる。着色硬質または軟質シェルカプセルは、着色剤組成物をカプセル塊水溶液に組み込むことによって調製できる。
【０１３０】
組成物が活性成分として使用される、チュアブル錠、発泡性錠剤またはフィルム被覆錠剤などの錠剤、または硬質シェルカプセルなどのカプセルのような医薬組成物もまた本発明の範囲内である。本発明の組成物は、典型的に錠剤化混合物に粉末として添加され、またはカプセルの製造について知られている様式でカプセル内に充填される。
【０１３１】
組成物が、例えば卵黄、食用家禽、ブロイラーまたは水産動物（特にエビ、サケ、ニジマス）を着色するための着色剤として、または活性成分として使用される、栄養成分プレミックス、複合飼料、ミルク代替え品、流動食または飼料調製品などの動物飼料製品もまた、本発明の範囲内である。
【０１３２】
組成物が着色剤として、または活性成分として使用される、化粧品、洗面用品、および皮膚用製品、すなわちクリーム、ローション、バス、リップスティック、シャンプー、コンディショナー、スプレーまたはジェルなどのスキンおよびヘアケア製品をはじめとするパーソナルケア組成物は、本発明の範囲内である。
【０１３３】
本発明を次の実施例によってさらに例示する。
【０１３４】
［実施例］
以下の略号が使用される：
ＤＨ＝加水分解度
ＤＩ水＝脱イオン水
ｄｗ＝乾燥重量基準
ＲＨ＝相対湿度
ｒｐｍ＝毎分回転数
ＳＤＳ＝硫酸ドデシルナトリウム
ｗ／ｖ＝重量／体積
【０１３５】
長粒米で作った米粉は、アーカンソー州スタットガートのライスランドフーズ（Ｒｉｃｅｌａｎｄ Ｆｏｏｄｓ）によって提供された。乳漿タンパク単離物は、Ｂｉｏｚａｔｅ（登録商標），ミネソタ州のダビスコフーズインターナショナル（Ｄａｖｉｓｃｏ Ｆｏｏｄｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＩＮＣ．，）から、乾燥重量を基準として８８．６％のタンパク質（Ｎ×６．２５）を含有するベンチマーク標準として入手した。バシラス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の細菌セリンプロテアーゼであるアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）２．４Ｌが、ノボ・ノルディスク・バイオケム（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ｂｉｏｃｈｅｍ．）（ノースカロライナ州フランクリントン、２．４ＡＵ単位／ｇ）により提供された。分析試薬は、フィッシャーサイエンティフィク（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（ペンシルバニア州ピッツバーグ）およびシグマケミカル（Ｓｉｇｍａ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）（ミズーリ州セントルイス）から購入した。
【０１３６】
［（Ａ）分析方法：実施例１〜５］
［実施例１：エマルジョン活性およびエマルジョン安定性の判定］
エマルジョン活性および安定性は、ピアスおよびキンセラ：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．１９７８年，第２６号，７１６〜７２２頁の比濁法により判定した。ｐＨ７．０の１０ｍＭのリン酸緩衝液中のイネ胚乳タンパク質の０．１％溶液６ｍＬおよびトウモロコシ油２ｍＬの混合物を設定６の超音波処理機（ビアティシア・テンペスト（Ｖｉｒｔｉｓｈｅａｒ Ｔｅｍｐｅｓｔ），米国ニューヨーク州のガーディナーのザ・ビアティス社（Ｔｈｅ Ｖｉｒｔｉｓ Ｃｏ．））を用いて１分間均質化した。均質化から０分および１０分後に、５０マイクロリットルの混合物をＳＤＳの０．１％水溶液（ｗ／ｖ）中に移した。５００ｎｍでの溶液の吸光度をスペクトロメータ（京都の島津製作所、ＵＶ−１６０１型）で判定した。均質化後時間０での吸光度が、イネ胚乳タンパク質のエマルジョン活性である。エマルジョン安定性を計算するために、時間的間隔（１０分）中の初期吸光度の濁度（吸光度）の減少を使用した。（ＥＳ）は、以下の通りに計算した。
エマルジョン安定性＝Ｔｏ×Δｔ／ΔＴ
ここで、ΔＴはΔｔ（１０分）という時間的間隔中の初期吸光度（Ｔｏ）の濁度（吸光度）の減少である。
【０１３７】
［実施例２：加水分解度の判定］
ニールセンらの方法（ニールセン，Ｐ．Ｍ．，ピーターソン（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ），Ｄ．およびダンブマン（Ｄａｍｂｍａｎｎ），Ｃ，「食物タンパク質加水分解度を判定するための改善された方法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）」．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１年，６６（５），６４２〜６４６頁）によってＤＨを判定した。次のようにしてｏ−フタルジアルデヒド（ＯＰＡ）試薬を調製した。７．６２０ｇの四ホウ酸二ナトリウム十水和物（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ）および２００ｍｇのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を１５０ｍＬの脱イオン水に溶解し、次に１６０ｍｇのＯＰＡ（４ｍＬのエタノールに事前溶解された９７％ＯＰＡ）および１７６ｍｇの９９％ジチオスレイトール（ＤＴＴ）と混合した。脱イオン水で最終溶液を２００ｍＬにした。凍結乾燥されたタンパク質サンプル０．１ｇを１０ｍＬの脱イオン水に可溶化した。吸光度を測定するために、３ｍＬのＯＰＡ試薬を１０ｍＬ試験管に入れ、次に４００μＬのサンプル溶液、セリン標準（１０ｍｇ／１００ｍＬ）、および脱イオン水を４本の試験管の各サンプル、標準、およびブランクにそれぞれ添加した。この後、５秒間混合し、正確に２分間保持した。日本国京都市の島津製作所からの分光光度計（モデルＵＶ−１６０１）によって、３４０ｎｍで吸光度を読み取った。ＤＨを次のようにして計算した。
【０１３８】
ＤＨ＝ｈ／ｈｔｏｔａｌ＊１００％
式中、ｈは加水分解された結合数であり、ｈｔｏｔａｌは、タンパク質当量あたりのペプチド結合の総数である。
ｈ＝（セリン−ＮＨ２−β）／α ｅｑｕｉｖ／ｇタンパク質
式中、ｈは加水分解された結合数であり、ｈｔｏｔａｌは、タンパク質当量あたりのペプチド結合の総数であり、穀物タンパク質ではαは１．００、βは０．４０、および、ｈｔｏｔａｌは８．０である。
【０１３９】
セリン−ＮＨ２＝［（Ａ３４０ｓａｍｐｌｅ−Ａ３４０ｂｌａｎｋ）／（Ａ３４０ｓｔａｎｄａｒｄ−Ａ３４０ｂｌａｎｋ）］＊０．９５１６ｍｅｑｖ／Ｌ＊０．０１＊１００／（Ｘ＊Ｐ）
式中、セリン−ＮＨ２＝ｍｅｑｖセリンＮＨ２／ｇタンパク質；Ｘ＝ｇサンプル；Ｐ＝サンプル中の％タンパク質；０．０１は１Ｌ中のサンプル体積である。
【０１４０】
［実施例３：タンパク質および総溶解度の判定］
タンパク質溶解度（またＮ−溶解度）は、いくつかの修正を加えて、ベラ，Ｍ．Ｂ．；ムーカジ（ベラ，Ｍ．Ｂ．；ムーカジ，Ｒ．Ｋ．、「米糠タンパク質濃縮物の溶解性、乳化、および起泡特性」．Ｊ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ １９８９年，５４（１）：１４２〜１４５頁）の方法によって判定した。２００ｍｇのタンパク質サンプルを１０ｍＬの脱イオン水中に分散し、１Ｎ ＨＣｌまたは１Ｎ ＮａＯＨでｐＨを７．０に調節した。分散体を連続的に３０分間撹拌し、米国カリフォルニア州（Ｃａｌｉｆ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）のＢｅｃｋｍａｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎからの（モデルＪ２−２１）によって５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上清を回収し、上清中のタンパク質含量を自動ケルダール法（ＡＡＣＣ １９９０）によって判定した。タンパク質溶解度の百分率を次の式によって計算した。
【数１】
【０１４１】
タンパク質溶解度は、上清中のタンパク質と最初のサンプル中の総タンパク質との％比率として計算した。
【０１４２】
総溶解度はオーブン乾燥法によって判定し、上清中の総可溶性部分と、タンパク質単離物総重量との％比率として表した。
【数２】
【０１４３】
［実施例４：粘度の判定］
室温（２６℃）で、ＭＶＤＩＮ測定紡錘体（半径＝１９．３６ｍｍ、高さ＝５８．０８ｍｍ）を装着した、独国（Ｇｅｒｍａｎｙ）のＨａａｋｅからの回転レオメータ（ＶＴ５５０）によって、タンパク質単離物の粘度を判定した。タンパク質単離物を脱イオン水と混合して１０％スラリーを形成し、分析前にスラリーを６０分間平衡状態に保った。サンプル（３０ｍｌ）を円柱状カップ（半径＝２１．０ｍｍ）に充填して、コンピューター制御プログラムを使用して、３分間かけて０から４００１／秒に変化する剪断速度をかけた。データを独国のＨａａｋｅ Ｍｅｓｓ ＴｅｃｈからのＲｈｅｏｗｉｎ Ｐｒｏデータ・マネージャ、バージョン２．８４によって分析した。
【０１４４】
［実施例５：タンパク質含量の判定］
タンパク質含量を、自動ケルダール（Ｋｊｅｌｄａｈｌ）法（ＡＡＣＣ、１９９０年）により判定した。１時間４２０℃で触媒としてケルダール（登録商標）錠を用いて濃硫酸中で試料を消化させるために、ケルダール２００６消化剤（スウェーデン、ホガナスのフォス・テカトール（Ｆｏｓｓ Ｔｅｃａｔｏｒ））を使用し、生成物の窒素含量を判定するために、ケルテック（Ｋｊｅｌｔｅｃ）（登録商標）２３００分析器ユニット（スウェーデン、ホガナスのフォス・テカトール）を使用した。タンパク質含量は、窒素含量に５．９５という係数を乗じることによって自動的に計算された。
【０１４５】
［（Ｂ）イネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）の製造（出発材料および比較例）］
［実施例６］
米粉１キログラムを、ホモジナイザー（米国ニューヨーク州ガーディナーのザ・ビアティス社、ビアティシア・テンペスト）内で１分間、８Ｌの脱イオン水（１：８、ｗ／ｖ）を用いて均質化した。１ＭのＮａＯＨにより、スラリーのｐＨを１１．０に調整し、懸濁液を４０℃で３時間撹拌した。溶液中の可溶性タンパク質を遠心分離により分離した（５，０００ｒｐｍ、１５分）。この手順を一回反復して残渣から付加的なタンパク質を抽出した。１回目および２回目の抽出の組合せ上清中のタンパク質をｐＨ４．５で等電点沈殿させ、１時間４℃に保った。沈殿物を２０分間５，０００ｒｐｍの遠心分離により回収し、脱イオン水（１：４、ｗ／ｖ、ｐＨ４．５）で洗浄し、ｐＨ７．０に調整した。抽出したタンパク質（ＲＰ）を、以下の変性（Ｃ）および（Ｄ）の調製のための出発材料として使用した。
【０１４６】
［実施例（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）の実験的設計］
本研究は、（１）米タンパク質グリコシル化の最適化および（２）米タンパク質の物理化学的特性に対する制御されたグリコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性方法の比較（比較例）という２つの実験セットを含んでいる。グリコシル化実験の最適化は、３レプリケートでの反復的測定（７つの反応時間）を伴う２×７の２因子要因設計（グルコースおよびキサンタンガム）で実施した。グリコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性方法の比較は、１因子の完全に無作為化された設計で実施され、これには、選択された変性方法の有効性を評価し比較するために対照（未変性）米タンパク質およびベンチマーク乳漿タンパクが含まれていた。
【０１４７】
したがって、イネ胚乳タンパク質は、（１）Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＧｌｕ）；（２）キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）；（３）アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）；（４）１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼによるイネ胚乳タンパク質の処理（ＲＰＡｌｃ）という方法によって変性された。タンパク質誘導体の物理化学的および機能特性を評価し、未変性イネ胚乳タンパク質（ＲＰ）のものと比較し、ベンチマークとして乳漿タンパク単離物と比較した。
【０１４８】
［（Ｃ）部分的に加水分解したイネ胚乳タンパク質の製造］
［実施例７（比較例）：１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼを用いたイネ胚乳タンパク質の処理（ＲＰＡｌｃ）］
アルカラーゼ処理のための条件は、先行研究（パラマンら、２００７年）および我々の予備データに基づいて選択した。イネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）をＤＩ水（８％ｗ／ｖ）で均質化し、ｐＨ６．５に調整した。タンパク質コロイド溶液を８．５分間４０℃で０．１％のアルカラーゼを用いて処理した。酵素を７分間８５℃で不活性化した。水を添加することにより加水分解物を直ちに３０℃まで冷却し、ｐＨを７．０に再調整した。タンパク質加水分解物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した（ＲＰＡｌｃ）。
【０１４９】
［（Ｄ）単糖類または多糖類と部分的に共役されたイネ胚乳タンパク質の製造］
［実施例８：イネ胚乳タンパク質の部分的グリコシル化のための最適な反応条件の評価］
抽出された米タンパク質ＲＰ（ｄｗで２０ｇ）を脱イオン水中に溶解させて、１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。１０ｍＬのＤＩ水中に溶解させたＤ−グルコース（０．４６５ｇ）を、３７℃でタンパク質溶液を撹拌させながらタンパク質溶液中に添加した。タンパク質グルコース混合物をｐＨ８．０に調整し、３７℃で１時間撹拌した。混合物を凍結乾燥させ、乾燥したタンパク質−糖混合物をアルミニウム皿内に入れ、相対湿度６５％に維持したインキュベータ内で５０℃でインキュベートした。およそ２．５ｇのタンパク質−グルコース混合物を試料として２４時間にわたり４時間間隔で取り出した。グルコシル化タンパク質を、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。
【０１５０】
タンパク質−キサンタンガム比が１００：１であり、タンパク質−キサンタンガム溶液のｐＨが７．０の値に調整されたという点を除いて、以上で記述されたタンパク質−グルコース最適化方法と本質的に類似した形で、米タンパク質−キサンタンガム最適化を実施した。
【０１５１】
［実施例９：Ｄ−グルコースを用いたイネ胚乳タンパク質のグルコシル化（ＲＰＧｌｕ）］
以下で記述するいくつかの修正を伴って、文献（加藤ら１９９０年、加藤ら１９９１年、アシュリ（Ａｃｈｏｕｒｉ）ら２００５年、オリバーら２００６年）から選択された条件および以上の最適化に基づいて、グリコシル化を実施した。アルカリ抽出された米タンパク質単離物ＲＰ（ｄｗで２００ｇ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。１００ｍＬのＤＩ水内に溶解させたＤ−グルコース（４．６５ｇ）を、３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながらタンパク質溶液に添加した。タンパク質−グルコース混合物をｐＨ８．０に調整し、３７℃で１時間撹拌した。混合物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−糖混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで８時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＧｌｕ）を、使用するまで５℃で保管した。
【０１５２】
［実施例１０：キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。キサンタンガム（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のキサンタンガム溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、キサンタンガム溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−キサンタンガム混合物を噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−キサンタンガム混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＸＧ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５３】
［実施例１１：ポテトデキストリンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＰＤ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。ポテトデキストリン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のポテトデキストリン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、ポテトデキストリン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−デキストリン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−デキストリン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＰＤ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５４】
［実施例１２：シクロデキストリンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＣＤ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。シクロデキストリン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のシクロデキストリン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、シクロデキストリン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−シクロデキストリン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−シクロデキストリン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＣＤ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５５】
［実施例１３：ペクチンでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＰ）］
ｄｗ基準で２００ｇのイネ胚乳タンパク質単離物（ＲＰ）を水中に溶解させて１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質コロイド溶液を得た。ペクチン（２ｇ）を水中に別途溶解させて１％（ｗ／ｖ）のペクチン溶液を得た。３７℃でタンパク質溶液を撹拌しながら、ペクチン溶液をタンパク質溶液中に添加した。タンパク質−ペクチン混合物をｐＨ７．０に調整し、３７℃で１時間攪拌し、噴霧乾燥させ、使用するまで気密容器内に５℃で保管した。噴霧乾燥したタンパク質−ペクチン混合物をアルミニウム皿内に入れ、５０℃および６５％ＲＨで２０時間インキュベートした。グリコシル化したタンパク質（ＲＰＰ）を、分析するまで５℃で保管した。
【０１５６】
［（Ｅ）部分的に脱アミド化されたイネ胚乳タンパク質の製造］
実施例１４；アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）
以下で記述する通りのいくつかの修正を加えて、文献情報（シュウェンク（Ｓｃｈｗｅｎｋｅ）１９９７年，カブラ（Ｃａｂｒａ）ら２００７年）に基づいて脱アミド化条件を選択した。アルカリ抽出米タンパク質単離物をＤＩ水（８％ｗ／ｖ）と混合した。タンパク質コロイド溶液をｐＨ１１．０に調整し、１２時間２５℃で撹拌した。その後、タンパク質溶液の温度を７０℃で３０分間撹拌下にて上昇させた。氷を加えて溶液を直ちに３０℃まで冷却し、ｐＨを７．０まで再調整した。脱アミド化させたタンパク質溶液を噴霧乾燥させ、５℃で保管した（ＲＰＤＡ）。
【０１５７】
［（Ｆ）結果］
［統計分析］
全ての実験は、デュプリケートで実施された。ＪＭＰ６ソフトウェア（ＳＡＳＩｎｓｔ２００２）を用いて分散および多重平均比較のためデータを分析した。平均間の差異の有意性を、５％の有意性レベル（Ｐ＜０．０５）でＴｕｋｅｙ ＨＳＤ手順により判定した。
【０１５８】
［イネ胚乳タンパク質のグリコシル化の最適化］
Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムでの米タンパク質のグリコシル化を、上述のように最適化した。グリコシル化タンパク質の溶解度および乳化特性は、表３に提示されている。
【０１５９】
【表４】
【０１６０】
米タンパク質Ｄ−グルコース（２．２５％、ｗ／ｗ）および米タンパク質−キサンタンガム（１％、ｗ／ｗ）共役体のグリコシル化を、さまざまなインキュベーション時間（０〜２４時間）にわたって５０℃および相対湿度６５％で調製した。反応は非常に急速に開始することから、当初でさえ未処理のイネ胚乳タンパク質単離物と比較した差異が認められた。
【０１６１】
グリコシル化タンパク質の機能特性は、メイラード反応時間の一関数として有意な形で異なり、タンパク質をグリコシル化するために用いられた糖のタイプにより左右された。Ｄ−グルコースについては、最適メイラード反応時間は、５０℃および６５％ＲＨで８時間であった。グリコシル化タンパク質は、最高８時間までメイラード反応の一関数としての溶解度および乳化特性の漸進的改善を実証した。この傾向は、反応時間が０時間から８時間まで進むにつれて２３％から３４％までの溶解度の増加および０．３７１から０．７１２までのエマルジョン活性の増加により例示された。これらの特性は、８時間のインキュベーションを超えると減少した。ただし、グリコシル化タンパク質のエマルジョン安定性は、０から２４時間までのインキュベーション時間の関数として１５．４時間から２８時間まで漸進的に増大した。エマルジョン安定性の増分は、インキュベーション初期（０〜１２時間）において、後期（１２〜２４時間）よりも高く、これは、メイラード反応の進行に伴うアミノ基の利用可能性の低下に起因するものと考えられる。
【０１６２】
キサンタンガムでグリコシル化されたタンパク質においては、溶解度および乳化特性は、それぞれ最高１６時間および２０時間まで漸進的に増加した。溶解度は、１６時間のインキュベーションにおいて２６％から３３％まで増大し、乳化活性は、２０時間のインキュベーションにおいて０．４７９から０．６２９まで増大した。グルコースと比較して、キサンタンガム媒介型グリコシル化は、より低い速度で機能特性を改善し、メイラード反応のためにより長い時間を要した。１８〜２０時間というインキュベーション時間は、５０℃、６５％ＲＨおよび１：１００のキサンタンガム対タンパク質比でキサンタンガムにとって最適な時間であった。最適な反応時間は変動し、反応物質および反応条件により左右された（オリバー、２００６年）。単糖類は、多糖類に比べて早く反応することができ、短い時間しか必要としなかった。
【０１６３】
本研究においては、最適な反応時間は、以前に公開された研究よりもはるかに短かった。キサンタンガムでグリコシル化されたリゾチームは、７日間のメイラード反応の後より優れた乳化特性を実証した（中村ら、２０００年）。同様にして、グルコースと共役されたオボアルブミンは１日で最大のエマルジョン活性に達し、１４日間の反応時間でエマルジョン安定性に達した（加藤ら、１９９５年）。所要時間の差は、これらの実験で使用されたプレインキュベーション条件の差異に起因すると考えられる。例えば、これら２つの先行研究においては、タンパク質−糖混合物はｐＨ７．０に調整され、直ちに凍結乾燥された。しかしながら、本研究では、タンパク質−糖混合物を乾燥に先立ち１時間撹拌した。糖−米タンパク質混合物のｐＨは、ｐＨ８．０に維持された。わずかにアルカリ性の条件（ｐＨ８．０）およびより長い混合条件（１時間）が、液体段階におけるメイラード反応を促進したものと考えられる。
【０１６４】
０時間のインキュベーションでの天然タンパク質およびグリコシル化タンパク質の溶解度および乳化データが、この推測を裏付けた（表３）。０時間のインキュベーションでのグリコシル化タンパク質の溶解度および乳化特性は、天然米タンパク質対照のものよりも高い溶解度および乳化特性を示した。グルコース−米タンパク質共役体については、溶解度は１８％から２４％まで改善し、エマルジョン活性はいかなる乾燥段階反応もなく、０．２６６から０．３７１まで改善した（表３）；キサンタンガム米タンパク質共役体については、溶解度は１８％から２６％まで増加し、エマルジョン活性および安定性はそれぞれ０．２６６から０．４７９までおよび１４．７から１８．１分まで増大した。
【０１６５】
［グリコシル化架橋研究においては、Ｄ−グルコース、ポテト−デキストリン、シクロデキストリン、ペクチン、キサンタンガムで予備的実験が実施された］
（表４）に提示されている我々の予備データに基づくと、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガム共役は、イネ胚乳タンパク質およびポテトデキストリン、シクロデキストリンまたはペクチンと共役された米タンパク質に比べて溶解度および乳化特性の両方を有意に改善した。したがって、さらなるグリコシル化プロセス最適化用としては、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムが選択された。
【０１６６】
ポテトデキストリン、シクロデキストリンおよびペクチン共役は、胚乳タンパク質の安定性を改善させなかったものの、対照のイネ胚乳タンパク質に比べて乳化特性を改善した。
【０１６７】
【表５】
【０１６８】
タンパク質：この実験において使用される炭水化物比は、グルコースについて１００：２．２６５、ポテトデキストリン、シクロデキストリン、ペクチンおよびキサンタンガムについて１００：１であった。
【０１６９】
最適化されたグリコシル化米タンパク質を、制御された酵素加水分解およびアルカリ脱アミド化により変性されたタンパク質の物理化学特性および機能特性について、さらに比較し評価した。表５には、変性の処理および簡易方法がまとめられている。
【０１７０】
【表６】
【０１７１】
イネ胚乳タンパク質は、以上の方法すなわち、（１）Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＧｌｕ）；（２）キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化（ＲＰＸＧ）；（３）アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化（ＲＰＤＡ）；（４）溶解度および乳化特性を改善するための１．８％ＤＨに至るまでのイネ胚乳タンパク質の処理によって変性された。
【０１７２】
［制御されたグルコシル化、脱アミド化およびアルカラーゼ変性が米タンパク質の物理化学特性および機能特性に対して及ぼす影響］
［物理化学特性］
米タンパク質生成物のタンパク質および含水量が表６に提示されている。
【０１７３】
【表７】
【０１７４】
グリコシル化タンパク質、ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧは、その他のタンパク質よりも高い含水量（８．８〜９．０％）を有していた。これら２つの生成物、ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧは、それぞれ８時間および１８時間６５％ＲＨで実施されたグリコシル化プロセス中に水分を吸収した。タンパク質をグリコシル化するために低い割合のグルコース（２．２５％、ｗ／ｗ）およびキサンタンガム（１％、ｗ／ｗ）しか使用されなかったことから、グリコシル化タンパク質（ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧ）のタンパク質含量は、対照の米タンパク質単離物（ＲＰ）と差がなかった。
【０１７５】
タンパク質の粘度は、表６と図１に提示されている。
【０１７６】
図１は、１０％ｗ／ｖの濃度での米タンパク質単離物（−ＲＰｃｏｎｔｒｏｌ）、加水分解物（◆ＲＰＡｌｃ）、グリコシル化（●ＲＰＧｌｕおよび■ＲＰＸＧ）および脱アミド化（▲ＲＰＤＡ）米タンパク質についてのせん断応力（ｙ軸：Ｐａ単位）とせん断速度（ｘ軸；ｓｅｃ−１単位）の関係を示す；１Ｐａｓ（パスカル秒）＝１０００ｃＰ（センチポイズ＝ｍＰａｓ）。粘度は、直線のせん断応力とせん断速度の勾配であった。
【０１７７】
グリコシル化（ＲＰＧｌｕ、ＲＰＸＧ）および脱アミド化（ＲＰＤＡ）タンパク質は、処理されたタンパク質分解酵素（ＲＰＡｌｃ）および対照米タンパク質（ＲＰ）よりもはるかに高い粘度を示した。粘度の増加は、グリコシル化されたものの親水性の増大を示すものである。詳細には、キサンタンガムでのグリコシル化は、生成物の粘度を３１．６ｍＰａｓまで増大させ、これはグルコース媒介型グリコシル化（１２．４ｍＰａｓ）および脱アミド化（１４．０ｍＰａｓ）方法の粘度よりも有意に高いものであった。キサンタンガムと共役されたタンパク質の粘度が比較的高いことは、グリコシル残基の複合サイズに起因すると思われる。一般に、グリコシル化タンパク質の粘度の増加は、タンパク質における構造の変化を示していた。グリコシル化タンパク質は、より大きな流体力学的体積を有し、表面親水性の増大およびタンパク質の四次構造の部分的アンフォールディングの増加に起因して水和特性を増大させる（バニエル（Ｂａｎｉｅｌ）ら、１９９２年）。
【０１７８】
脱アミド化はまた、８．７から１４．０ｍＰａｓまで粘度を増大させた。このことは、脱アミド化タンパク質の水和特性の改善を示していた。アミド基からカルボキシル基の脱アミド化は、タンパク質の電荷量を改変させる可能性があると思われ、水分子とタンパク質の相互作用を改善させた。しかしながら、脱アミド化を実施するのに用いられる条件を考慮すると、脱アミド化タンパク質の粘度が、脱アミド化、変性（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）およびペプチド結合開裂の最終的結果であったことは明白である。
【０１７９】
アルカラーゼ処理は、粘度をＲＰＡｌｃにおいて８．７から７．０ｍＰａｓまでわずかに減少させた。粘度の減少は、タンパク質の分子サイズに起因していた。しかしながら、タンパク質の加水分解は１．８％ＤＨに制御されたことから、粘度変化は小さかった。
【０１８０】
［タンパク質の溶解度］
タンパク質の溶解度および乳化特性は、表７に提示されている。
【０１８１】
【表８】
【０１８２】
グルコースとキサンタンガムでのグルコシル化が、米タンパク質の溶解度を約４０％まで増加させたが、グリコシル化による溶解度の増分は、予測されたレベルまで実質的なものではなかった。
【０１８３】
アルカラーゼ処理（１．８％、ＤＨ）は、溶解度を１８％から３３％まで改善した。溶解度の増加は、分子サイズの減少および極性基数の増大に起因していた（ニールセン、１９９７年）。先行研究では、アルカラーゼ酵素による１３．５％ＤＨの後でも高い割合の米タンパク質が不溶状態にとどまっていることが報告されており、このことは米タンパク質分解酵素により開裂されたいずれかのペプチドが、分子間疎水性またはスルフヒドリル相互作用を介して未加水分解タンパク質と会合されているかまたは唯一加水分解がアクセスできるタンパク質の無定形領域と会合されていることを示唆している。
【０１８４】
脱アミド化タンパク質は、その他のいずれの処理（２８〜３９％）よりも高い溶解度（６８％）を示した。脱アミド化タンパク質は、６８．３％の溶解度を示した。アルカリ性条件での脱アミド化は、アスパラギンおよびグルタミンアミノ酸の側鎖基を脱アミド化し、場合によってはタンパク質極性を改変させたと考えられる。脱アミド化は負の電荷を増大させ、疎水性および水素結合を分断できる（シュウェンク、１９９７年）。これらの構造的変化は、溶解度の増大に寄与し得る。詳細には、米グルテリン内に最も豊富なアミノ酸は、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、グルシンおよびアラニンである（ウェンおよびリュース１９８５年）。これらのアミノ酸残基の脱アミド化は、タンパク質の溶解度を促進でき、乳化特性の改善に寄与した。さらに、ペプチド結合の部分的開裂は、脱アミド化プロセスの中で可能であり得た。脱アミド化と加水分解の組合せ効果は、溶解度の大幅な改善に寄与したものと思われる。
【０１８５】
［乳化特性］
グリコシル化および脱アミド化タンパク質のエマルジョン活性および安定性は、米タンパク質分解酵素で処理された米タンパク質単離物のものよりも有意に高かった。グルコースでグリコシル化されたタンパク質は０．７２１のエマルジョン活性と２６．８分のエマルジョン安定性を示した。脱アミド化タンパク質は０．７７６のエマルジョン活性と２４．０分のエマルジョン安定性を示した。これら２つの米タンパク質単離物の乳化特性は、未変性の米タンパク質単離物および米タンパク質分解酵素で変性された米タンパク質単離物のものよりも高かった。グリコシル化は、タンパク質の親水性を高めた（加藤ら、１９９１年）。したがって、制御され制限された糖化は、乳化特性を改善させる。親水性の増加は、水和および溶解度を改善させ、かくして場合によってタンパク質の球状構造を開く。部分的アンフォールディングは、油水界面において安定した界面薄膜を形成するグリコシル化タンパク質の能力を改善させた。
【０１８６】
脱アミド化タンパク質の場合、エマルジョン特性の改善は、タンパク質の溶解度および極性を増大させることによってもたらされ得る（シュウェンク、１９９７年）。前述したような脱アミド化に加えて、ペプチド結合の部分的開裂もまた溶解度および乳化特性に寄与したと考えられる。脱アミド化タンパク質の溶解度の増大は、油水界面における安定した相互作用を生み出す一助となると考えられ、かくして、乳化特性を改善させた。脱アミド化およびペプチド結合開裂の適正な平衡は、脱アミド化により米タンパク質の乳化特性を改善させる上でのキーポイントであると考えられる。
【０１８７】
１．８％ＤＨに至るアルカラーゼ処理（ＲＰＡｌｃ）は、未変性米タンパク質（ＲＰ）と比べて、エマルジョン活性を０．２６６から０．４６８まで改善させ、エマルジョン安定性を１７．７から１７．５分まで改善した。一般に、食物タンパク質の機能性、特にエマルジョン安定性を改善させるためには、低い加水分解度が推奨される。限定的なタンパク質分解は、タンパク質の分子柔軟性および疎水性−親水性平衡を改善でき、その結果乳化はより良好になった（ニールセン１９９７年；シュウェンク、１９９７年）。ただし、溶解度および乳化特性の限定的な改善は、（１）高い疎水性およびスルフヒドリル相互作用に起因すると考えられ、高温酵素不活性化に随伴したタンパク質の埋没した疎水性領域の露出は、部分的に加水分解されたタンパク質の凝集および架橋を促したかもしれない（パラマンら、２００７年）。さらに、タンパク質のコンパクト性に起因して、酵素アルカラーゼには内部ペプチド結合に対するアクセスが限定されていると考えられ、このため場合によっては、ペプチドの不均等なサイズの形成がもたらされ、結果として得られる加水分解物の乳化特性が低減される可能性がある。
【０１８８】
［結論］
イネ胚乳タンパク質の溶解度および乳化特性を改善させるためには、１．８％ＤＨに至るまでのアルカラーゼによるタンパク質分解変性よりも、グリコシル化および脱アミド化タイプの変性の効果の方が高かった。イネ胚乳タンパク質のグリコシル化においては、最適なメイラード反応時間は、Ｄ−グルコースおよびキサンタンガムについて５０℃および６５％ＲＨでそれぞれ８時間および２０時間であった。脱アミド化タンパク質は、この研究において評価されたタンパク質の中でも最高の溶解度（６８％）と乳化特性（０．７７６のエマルジョン活性、２４分のエマルジョン安定性）を示した。アルカラーゼによる制御された酵素加水分解１．８％ＤＨは、未変性の米タンパク質（ＲＰ）に比べ、エマルジョン活性を０．２６６から０．４６８まで、そしてエマルジョン安定性を１４．７分から１７．５分まで改善したにすぎなかった。脱アミド化タンパク質の最高の溶解度および乳化特性は、脱アミド化プロセス中に起こった脱アミド化、ペプチド結合開裂およびタンパク質変性（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）の最終的結果であった。
【０１８９】
［（Ｇ）本発明に従った脂溶性活性成分または脂溶性着色剤の組成物の製造］
［実施例１５：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９０】
［ａ）エマルジョンの調製］
実施例９に従ったＲＰＧｌｕ（Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８８．３ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．８６μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．８１μｍであった。
【０１９１】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流の内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に加工することができる。
【０１９２】
［実施例１６：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９３】
［ａ）エマルジョンの調製］
実施例１０に従ったＲＰＸＧ（キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグリコシル化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８３．２ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．６５μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．６４μｍであった。
【０１９４】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に転換させることができる。
【０１９５】
［実施例１７：ビタミンＥ調合物（酢酸塩）の製造］
イネ胚乳タンパク質とビタミンＥを含む調合物を以下の通りに調製してよい：
【０１９６】
［ａ）エマルジョンの調製：］
実施例１４に従ったＲＰＤＡ（アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化）２０ｇを、６０ｇのスクロースと混合し、１５分間７５℃で撹拌することによって１４０ｍｌの水中に再度溶解させた。８１．９ｇのｄｌ−α−酢酸トコフェロールを７０℃まで加熱し、勢いよく撹拌しながら水溶液に加えた。分散体をさらに１５分間勢いよく撹拌した。穏やかな撹拌下で、さらなる２２５ｍＬの水を加え、このように得られたエマルジョンを内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）社、マスターサイザー（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）によって測定したところ、１．７７μｍであった。１２時間保管した後、エマルジョンを再度、内部相の粒度に関して特性決定した。保管後のエマルジョンの内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ〔３，２〕）は、レーザー回折（マルバーン社マスターサイザー）によって測定したところ１．６８μｍであった。
【０１９７】
［ｂ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床の中に噴霧してよい。ふるいにより余剰のコーンスターチを除去することができ、得られた粉末を室温で空気流内で乾燥させることができる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいにより収集することができる。或いは、かかる噴霧乾燥のさらなる周知の乾燥技術を用いることにより、エマルジョンを固体形態に転換させることができる。
【０１９８】
［実施例１８：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０１９９】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２００】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製］
実施例９に従った３０ｇのＲＰＧｌｕ（Ｄ−グルコースでのイネ胚乳タンパク質のグルコシル化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水中に再度溶解させた。
【０２０１】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョン調製：］
激しく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間激しく撹拌した。撹拌される分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃でしばらく穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター（Ｓａｕｔｅｒ）径、Ｄ［３、２］）は、レーザー回析（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｅｒｓｉｚｅｒ）による測定で４４０ｎｍであった。
【０２０２】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンは、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してもよい。過剰なコーンスターチはふるいによって除去でき、得られた粉末は室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分をふるいにより収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度に関して特性決定することができる。
【０２０３】
【表９】
【０２０４】
［実施例１９：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０２０５】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２０６】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製：］
実施例１０に従った３０ｇのＲＰＸＧ（キサンタンガムでのイネ胚乳タンパク質のグルコシル化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水中に再度溶解させた。さらに１．８ｇのパルミチン酸アスコルビルおよび３６．６ｇのスクロースを添加した。ｐＨを７．３の値に調整するために０．５ｍｌの１Ｎの水性ＮａＯＨを添加した。
【０２０７】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョンの調製：］
勢いよく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間勢いよく撹拌した。撹拌された分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃で数分間穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ［３，２］）は、レーザー回析（マルバーン社マスターサイザー）により測定したところ３８０ｎｍであった。
【０２０８】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してよい。余剰のコーンスターチをふるいによって除去でき、得られた粉末を室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいによって収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度について特性決定することができる。
【０２０９】
【表１０】
【０２１０】
［実施例２０：β−カロテンの調合物の製造］
イネ胚乳タンパク質とβ−カロテンを含む調合物を以下のように調製してよい：
【０２１１】
［ａ）（ｎ油−ベースの）溶液１の調製：］
６．６ｇのトウモロコシ油と１．２ｇのｄｌ−α−トコフェロールを混合した。１３．８ｇの結晶性β−カロテンを１８０ｍｌのクロロホルム（トリクロロメタン）中に分散させ、得られた分散体をトウモロコシ油とトコフェロールの混合物に添加した。混合物を穏やかに撹拌し、同時に約６０℃まで加熱することにより、溶液を得た。
【０２１２】
［ｂ）（ｎ水）溶液２の調製：］
実施例１６に従った３０ｇのＲＰＤＡ（アルカリ処理を用いたイネ胚乳タンパク質の脱アミド化）を、６０℃で撹拌することによって１２０ｍｌの水の中に再度溶解させた。さらに１．８ｇのパルミチン酸アスコルビルおよび３６．６ｇのスクロースを添加した。ｐＨを７．０の値に調整するために０．４ｍｌの水性１ＮのＮａＯＨを添加した。
【０２１３】
［ｃ）溶液１および２からのエマルジョンの調製：］
勢いよく撹拌しながら、５３℃で溶液１を溶液２に添加し、分散体をさらに３０分間勢いよく撹拌した。撹拌された分散体を５０〜５５℃に３０分間保った。残留トリクロロメタンを５０〜５５℃で除去した。閉じこめられた気泡を遠心分離によって除去した後、エマルジョンを５０〜５５℃で数分間穏やかに撹拌し、次に内部相の粒度に関して特性決定した。エマルジョン内部相の平均粒度（ザウター径、Ｄ［３，２］）は、レーザー回析（マルバーン社マスターサイザー）により測定したところ５００ｎｍであった。
【０２１４】
［ｄ）エマルジョンからの固体調合物の調製：］
エマルジョンを、予冷したコーンスターチの流動床中に噴霧してよい。余剰のコーンスターチをふるいによって除去でき、得られた粉末を室温において気流中で乾燥できる。０．１６〜０．６３ｍｍの範囲内の粉末粒子画分を、ふるいによって収集し、カロテノイド含量、水性分散体中の色強度および色調、コーンスターチ含量、および残留湿度について特性決定することができる。
【０２１５】
【表１１】
【図面の簡単な説明】
【０２１６】
【図１】１０％ｗ／ｖの濃度での米タンパク質単離物（−ＲＰｃｏｎｔｒｏｌ）、加水分解物（◆ＲＰＡｌｃ）、グリコシル化（●ＲＰＧｌｕおよび■ＲＰＸＧ）および脱アミド化（▲ＲＰＤＡ）米タンパク質についてのせん断応力（ｙ軸：Ｐａ単位）とせん断速度（ｘ軸；ｓｅｃ−１単位）の関係を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精粉前に米糠が除去されており、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されているかまたは粉砕米から出発して部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を製造する方法において、
ａ）精粉前に米糠が除去されており、溶液または懸濁液が水溶液または懸濁液の総量を基準にして好ましくは０．１〜３０重量％の乾燥質量含量を有する、粉砕米の水溶液または懸濁液を調製するステップと、
ｂ）場合により、精粉前に米糠が除去されている粉砕米の非タンパク質部分またはタンパク質部分を除去してイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｃ）精粉前に米糠が除去されている粉砕米のタンパク質部分を、メイラード型の反応において、粉砕米のタンパク質部分を単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に反応させるかまたは粉砕米のタンパク質部分を部分的に脱アミド化させることによって変性させて、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｄ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を単離するステップと、
ｅ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されるイネ胚乳タンパク質を固体形態へと加工するステップと；
を含む方法。
【請求項２】
前記非タンパク質部分の除去（ステップｂ）が、非タンパク質分解酵素で粉砕米を処理し、酵素を非活性化し、粉砕米の非タンパク質部分をタンパク質部分から分離して除去することによって達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非タンパク質分解酵素が、デンプン分解酵素、セルロース分解酵素またはそれらの混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記非タンパク質部分の分離が、遠心分離とそれに続くその洗い落としによって行われる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
ステップｃ）が、前記粉砕米のタンパク質部分をアルカリ性、中性および／または酸性タンパク質分解酵素で処理することによって行われる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記粉砕米のタンパク質部分が、２つの異なるアルカリ性タンパク質分解酵素によって引き続いて処理される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
これらのタンパク質分解酵素の１つがセリン特異的タンパク質分解酵素であり、もう１つがシステイン特異的タンパク質分解酵素である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質部分の除去（ステップｂ）が「粉砕米」溶液または懸濁液のｐＨを７〜１２の値に調節することによって行われる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップｅ）が、乾燥によって、好ましくは凍結乾燥または噴霧乾燥によって行われる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップｃ）における単糖または多糖類との共役が、グルコースまたはキサンタンガムとの反応によって達成される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記脱アミド化が、２５〜９０℃の範囲内の温度で、ステップｂ）で得られたイネ胚乳タンパク質のタンパク質部分のコロイド水溶液のｐＨ値を９．０〜１３．０の範囲内の値に調整することによって達成される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０または１１のいずれか一項に記載の方法によって得ることのできる、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質。
【請求項１３】
≧０．６、好ましくは≧０．６２、より好ましくは≧０．７のエマルジョン活性を有するイネ胚乳タンパク質。
【請求項１４】
≧２０分、好ましくは≧２３分、より好ましくは≧２５分のエマルジョン安定性を有するイネ胚乳タンパク質。
【請求項１５】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む、組成物。
【請求項１６】
前記脂溶性活性成分および／または着色剤が、カロテンまたは構造的に関連したポリエン化合物、脂溶性ビタミン、多価不飽和脂肪酸に富んだトリグリセリド、油溶性ＵＶ−Ａフィルター、ＵＶ−Ｂフィルターまたはその混合物である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記カロテンまたは構造的に関連したポリエン化合物が、α−カロテン、β−カロテン、８’−アポ−β−カロテナール、８’−アポ−β−カロテン酸エステル類、カンタキサンチン、アスタキサンチン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、クロセチン、α−ゼアカロテン、β−ゼアカロテンまたはその混合物などのカロテノイドである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記カロテノイドがβ−カロテンである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記脂溶性ビタミンがビタミンＡまたはＥである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、グリセロール、トリグリセリド類、水溶性抗酸化剤、および脂溶性抗酸化剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物がさらに存在する、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記単糖類または二糖類が、スクロース、転化糖、キシロース、グルコース、フルクトース、乳糖、マルトース、ショ糖、および糖アルコールである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記オリゴ糖類または多糖類が、デンプン、デンプン加水分解物または加工デンプンである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記デンプン加水分解物が、デキストリン、マルトデキストリンまたはグルコースシロップである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記トリグリセリドが植物油または脂肪である、請求項１６または２０に記載の組成物。
【請求項２５】
脂肪酸のモノ−およびジグリセリド類、脂肪酸のポリグリセロールエステル類、レシチン類、およびモノステアリン酸ソルビタンからなる群から選択される共乳化剤がさらに存在する、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記イネ胚乳タンパク質が、≧０．６、好ましくは≧０．６２、より好ましくは≧０．７のエマルジョン活性を有する、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記イネ胚乳タンパク質が、≧２０分、好ましくは≧２３分、より好ましくは≧２５分のエマルジョン安定性を有する、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質の量が、組成物の総量を基準として約１〜約７０重量％であり、かつ／または前記脂溶性活性成分および／または前記脂溶性着色剤の量が約０．１〜約９０重量％である、請求項１５〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
粉末の形態をした請求項１５〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
Ｉ）単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の水溶液またはコロイド溶液を調製するステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）で調製された前記溶液に、少なくとも水溶性賦形剤および／またはアジュバントを添加するステップと、
ＩＩＩ）少なくとも脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤、そして場合により少なくとも脂溶性アジュバントおよび／または賦形剤の溶液または分散体を調製するステップと、
ＩＶ）ステップＩ）〜ＩＩＩ）で調製された前記溶液を互いに混合するステップと、
Ｖ）このようにして得られた前記混合物を均質化するステップと、
ＶＩ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質を（さらに）架橋するための架橋剤を添加するステップと、
ＶＩａ）場合により、ステップＶＩ）を実施した後に得られた混合物に酵素処理または熱処理を施して前記（変性）イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと、
ＶＩＩ）場合により、ステップＶ）および／またはＶＩ）で得られた前記分散体を粉末に加工するステップと、
ＶＩＩＩ）場合により、ステップＶＩＩ）で得られた前記粉末を乾燥するステップと、
ＩＸ）場合により、前記（乾燥）粉末に熱処理または酵素処理を施して、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと、
を含み、ただしステップＶＩ）が実施される場合、ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）の両方でなく一方のみが実施される、請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物を製造する方法。
【請求項３１】
ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）に記載の前記酵素処理が、架橋酵素、特にトランスグルタミナーゼによる処理である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質が請求項１３および／または１４で定義されているものである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアまたは医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３４】
請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物を含有する、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケア、および医薬組成物。
【請求項３５】
請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のイネ胚乳タンパク質を含有する、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物。
【請求項３６】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための保護親水コロイドとしての請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のイネ胚乳タンパク質の使用。
【請求項１】
精粉前に米糠が除去されており、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されているかまたは粉砕米から出発して部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を製造する方法において、
ａ）精粉前に米糠が除去されており、溶液または懸濁液が水溶液または懸濁液の総量を基準にして好ましくは０．１〜３０重量％の乾燥質量含量を有する、粉砕米の水溶液または懸濁液を調製するステップと、
ｂ）場合により、精粉前に米糠が除去されている粉砕米の非タンパク質部分またはタンパク質部分を除去してイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｃ）精粉前に米糠が除去されている粉砕米のタンパク質部分を、メイラード型の反応において、粉砕米のタンパク質部分を単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に反応させるかまたは粉砕米のタンパク質部分を部分的に脱アミド化させることによって変性させて、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を得るステップと、
ｄ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質を単離するステップと、
ｅ）場合により、部分的に単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と共役されるかまたは部分的に脱アミド化されるイネ胚乳タンパク質を固体形態へと加工するステップと；
を含む方法。
【請求項２】
前記非タンパク質部分の除去（ステップｂ）が、非タンパク質分解酵素で粉砕米を処理し、酵素を非活性化し、粉砕米の非タンパク質部分をタンパク質部分から分離して除去することによって達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非タンパク質分解酵素が、デンプン分解酵素、セルロース分解酵素またはそれらの混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記非タンパク質部分の分離が、遠心分離とそれに続くその洗い落としによって行われる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
ステップｃ）が、前記粉砕米のタンパク質部分をアルカリ性、中性および／または酸性タンパク質分解酵素で処理することによって行われる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記粉砕米のタンパク質部分が、２つの異なるアルカリ性タンパク質分解酵素によって引き続いて処理される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
これらのタンパク質分解酵素の１つがセリン特異的タンパク質分解酵素であり、もう１つがシステイン特異的タンパク質分解酵素である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質部分の除去（ステップｂ）が「粉砕米」溶液または懸濁液のｐＨを７〜１２の値に調節することによって行われる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップｅ）が、乾燥によって、好ましくは凍結乾燥または噴霧乾燥によって行われる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップｃ）における単糖または多糖類との共役が、グルコースまたはキサンタンガムとの反応によって達成される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記脱アミド化が、２５〜９０℃の範囲内の温度で、ステップｂ）で得られたイネ胚乳タンパク質のタンパク質部分のコロイド水溶液のｐＨ値を９．０〜１３．０の範囲内の値に調整することによって達成される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０または１１のいずれか一項に記載の方法によって得ることのできる、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質。
【請求項１３】
≧０．６、好ましくは≧０．６２、より好ましくは≧０．７のエマルジョン活性を有するイネ胚乳タンパク質。
【請求項１４】
≧２０分、好ましくは≧２３分、より好ましくは≧２５分のエマルジョン安定性を有するイネ胚乳タンパク質。
【請求項１５】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質および脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤を含む、組成物。
【請求項１６】
前記脂溶性活性成分および／または着色剤が、カロテンまたは構造的に関連したポリエン化合物、脂溶性ビタミン、多価不飽和脂肪酸に富んだトリグリセリド、油溶性ＵＶ−Ａフィルター、ＵＶ−Ｂフィルターまたはその混合物である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記カロテンまたは構造的に関連したポリエン化合物が、α−カロテン、β−カロテン、８’−アポ−β−カロテナール、８’−アポ−β−カロテン酸エステル類、カンタキサンチン、アスタキサンチン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、クロセチン、α−ゼアカロテン、β−ゼアカロテンまたはその混合物などのカロテノイドである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記カロテノイドがβ−カロテンである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記脂溶性ビタミンがビタミンＡまたはＥである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、グリセロール、トリグリセリド類、水溶性抗酸化剤、および脂溶性抗酸化剤からなる群から選択される少なくとも１つの化合物がさらに存在する、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記単糖類または二糖類が、スクロース、転化糖、キシロース、グルコース、フルクトース、乳糖、マルトース、ショ糖、および糖アルコールである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記オリゴ糖類または多糖類が、デンプン、デンプン加水分解物または加工デンプンである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記デンプン加水分解物が、デキストリン、マルトデキストリンまたはグルコースシロップである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記トリグリセリドが植物油または脂肪である、請求項１６または２０に記載の組成物。
【請求項２５】
脂肪酸のモノ−およびジグリセリド類、脂肪酸のポリグリセロールエステル類、レシチン類、およびモノステアリン酸ソルビタンからなる群から選択される共乳化剤がさらに存在する、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記イネ胚乳タンパク質が、≧０．６、好ましくは≧０．６２、より好ましくは≧０．７のエマルジョン活性を有する、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記イネ胚乳タンパク質が、≧２０分、好ましくは≧２３分、より好ましくは≧２５分のエマルジョン安定性を有する、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質の量が、組成物の総量を基準として約１〜約７０重量％であり、かつ／または前記脂溶性活性成分および／または前記脂溶性着色剤の量が約０．１〜約９０重量％である、請求項１５〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
粉末の形態をした請求項１５〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
Ｉ）単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されているイネ胚乳タンパク質の水溶液またはコロイド溶液を調製するステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）で調製された前記溶液に、少なくとも水溶性賦形剤および／またはアジュバントを添加するステップと、
ＩＩＩ）少なくとも脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤、そして場合により少なくとも脂溶性アジュバントおよび／または賦形剤の溶液または分散体を調製するステップと、
ＩＶ）ステップＩ）〜ＩＩＩ）で調製された前記溶液を互いに混合するステップと、
Ｖ）このようにして得られた前記混合物を均質化するステップと、
ＶＩ）場合により、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質を（さらに）架橋するための架橋剤を添加するステップと、
ＶＩａ）場合により、ステップＶＩ）を実施した後に得られた混合物に酵素処理または熱処理を施して前記（変性）イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと、
ＶＩＩ）場合により、ステップＶ）および／またはＶＩ）で得られた前記分散体を粉末に加工するステップと、
ＶＩＩＩ）場合により、ステップＶＩＩ）で得られた前記粉末を乾燥するステップと、
ＩＸ）場合により、前記（乾燥）粉末に熱処理または酵素処理を施して、単糖類、二糖類、オリゴ糖類または二糖類と部分的に共役されているかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質を架橋するステップと、
を含み、ただしステップＶＩ）が実施される場合、ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）の両方でなく一方のみが実施される、請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物を製造する方法。
【請求項３１】
ステップＶＩａ）またはステップＩＸ）に記載の前記酵素処理が、架橋酵素、特にトランスグルタミナーゼによる処理である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
単糖類、二糖類、オリゴ糖類または多糖類と部分的に共役されるかまたは部分的に脱アミド化されている前記イネ胚乳タンパク質が請求項１３および／または１４で定義されているものである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアまたは医薬組成物の富栄養化、強化および／または着色のための請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３４】
請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の組成物を含有する、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケア、および医薬組成物。
【請求項３５】
請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のイネ胚乳タンパク質を含有する、食物、飲料、動物飼料、パーソナルケアおよび医薬組成物。
【請求項３６】
脂溶性活性成分および／または脂溶性着色剤のための保護親水コロイドとしての請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のイネ胚乳タンパク質の使用。
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５２２５４３（Ｐ２０１０−５２２５４３Ａ）
【公表日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５００１２８（Ｐ２０１０−５００１２８）
【出願日】平成２０年３月２２日（２００８．３．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００２３１５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１９４８２
【国際公開日】平成２０年１０月９日（２００８．１０．９）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２２日（２００８．３．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００２３１５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１９４８２
【国際公開日】平成２０年１０月９日（２００８．１０．９）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【Ｆターム（参考）】
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