液体クロマトグラフ
【課題】分析開始時のクロマトユニットの動作条件によって生じる分離カラムや反応装置の傷みを低減する。
【解決手段】液体クロマトグラフにおいて、データ処理装置は、第１のポンプ、第２のポンプ、第１の加熱装置のそれぞれを分析開始するための動作状態に制御するためのウォーミングアップ用動作条件データを有し、分析開始時に前記ウォーミングアップ用動作条件データに基づいた制御を行うことを特徴とする。ウォーミングアップ時の分離カラムや反応装置への負荷を最小限にできる。
【解決手段】液体クロマトグラフにおいて、データ処理装置は、第１のポンプ、第２のポンプ、第１の加熱装置のそれぞれを分析開始するための動作状態に制御するためのウォーミングアップ用動作条件データを有し、分析開始時に前記ウォーミングアップ用動作条件データに基づいた制御を行うことを特徴とする。ウォーミングアップ時の分離カラムや反応装置への負荷を最小限にできる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフに関し、例えば、ポストカラム誘導体化法を用いた反応系を有する装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポストカラム誘導体化法を用いた代表的な液体クロマトグラフとして、アミノ酸分析装置がある。特許文献１に述べられているように、従来のアミノ酸分析装置における分析は、緩衝液（溶離液）用ポンプによって送液した溶離液に、オートサンプラで試料を注入し、分離カラムでアミノ酸成分毎に分離した後に、反応試薬であるニンヒドリン試薬をニンヒドリンポンプによって送液して合流させ、その混合液を反応させるために反応コイルを通し、反応後の混合液を光度計により測定し、アミノ酸を検出している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平４−１９４７５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような装置において、分析を行う際、特に分析開始前、所謂ウォーミングアップ時のポンプによる溶離液や反応試薬の流量、および分離カラムや反応カラム（反応装置ともいう。以下、反応装置とする。）の温度の設定は重要である。
【０００５】
分離カラムに突然大量の溶離液を流すと、その圧力によってカラム充填材の分布が崩れてしまう。また、分離カラムを十分に加熱していない状態で溶離液を流すと、十分に加熱した状態に比べて高い圧力が分離カラムにかかってしまう。また、反応装置を十分に加熱していない状態でニンヒドリン試薬を流すと、ニンヒドリン試薬の液性によって反応装置が詰まってしまう。こうして分離カラムや反応装置が傷んでしまうと、安定した分析を行うことができなくなる。
【０００６】
したがって、上記のような液体クロマトグラフを用いて分析を行う場合は、分析開始できる状態であるか否かを十分に見極めた上でなければならず、熟練者でなければ、分析が困難であった。
【０００７】
本発明の目的は、分析開始時のクロマトユニットの動作条件によって生じる分離カラムや反応装置の傷みを低減し、安定した分析を行うことのできる液体クロマトグラフを提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、液体クロマトグラフを用いた分析の開始時に、溶離液を送液するポンプ、試薬や洗浄液を送液するポンプ、及び分離カラムを加熱する加熱装置を、所定のデータを用いて、分析を開始するための動作状態に制御することに関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、熟練者の操作に頼らずとも、最適な動作条件でウォーミングアップを行った後に分析を開始することができるため、分離カラムや反応装置への負荷を最小限にでき、安定した分析を実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の概略構成図である。
【図２】本発明の第１の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図３】反応装置８の温度とポンプ２の圧力の関係である。
【図４】反応装置８の室温２５℃時の温度上昇特性を示すデータである。
【図５】本発明の第２の実施例の動作説明図である。
【図６】本発明の第２の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図７】本発明の第３の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図８】本発明の第４の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図９】本発明の第５の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図１０】本発明の第６の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図１１】本発明の実施例と比較例１との理論段数変化率（ソレオニン）を比較するグラフである。
【図１２】本発明の実施例と比較例１との理論段数変化率（ロイシン）を比較するグラフである。
【図１３】本発明との一比較例を示すグラフである。
【図１４】本発明との他の比較例を示すグラフである。
【図１５】本発明との比較例における準備動作を示す図である。
【図１６】分離液（移動相）Ｂ１〜Ｂ５の組成例を示す図である。
【図１７】データ処理装置の動作を示すフローチャートである。
【図１８】分析用動作条件選択画面の例を示す図である。
【図１９】確認画面の例を示すである。
【図２０】分析用動作条件の値が設定されたウォーミングアップ用動作条件をグラフ化した例を示す図である。
【図２１】評価基準の設定画面の例を示す図である。
【図２２】エラー処理画面の例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施例を説明する。尚、実施例としてアミノ酸分析装置を用いる。
【実施例】
【００１２】
（第１の実施例）
図１はアミノ酸分析装置の構成図である。溶離液送液機構１１と、試料導入部３（オートサンプラー）と、分離機構１２と、反応液送液機構１３と、Ｔ字ジョイント７と、反応装置８と、可視検出器９と、これらをつなぐ流路１４と、データ処理装置１０を備える。
【００１３】
溶離液送液機構１１は、それぞれ異なる溶離液（移動相）が収容された複数の溶離液槽が設けられ、また、ポンプ１内または溶離液槽とポンプ１の間に電磁弁を有しており、データ処理装置１０からの信号またはポンプ１への直接入力により、電磁弁を切り替え、選択された溶離液をポンプ１により送液する。溶離液は試料を注入する試料導入部３を経由して分離機構１２へと送られる。
【００１４】
分離機構１２は、ガードカラム５と分離カラム６で構成されており、試料導入部３から導入された試料は、ガードカラム５を通過し、分離カラム６で分離される。分離カラム６は、図示しない恒温槽内に配置されており、分離カラム６を加熱し、その温度を制御することができる。
【００１５】
反応液送液機構１３は、反応液や洗浄液が収容された複数の反応液槽及び洗浄液槽が設けられ、また、反応液または洗浄液を送液するポンプ２と流路１５を備え、ポンプ２内または反応液・洗浄液槽とポンプ２の間に電磁弁を有している。反応液送液機構１３は、データ処理装置１０からの信号またはポンプへの直接入力により電磁弁を切り替え、選択された液をポンプ２により流路１５へと送液する。
【００１６】
Ｔ字ジョイント７は、分離カラム６と流路１５との間に設けられ、分離カラム６で分離された各アミノ酸は反応液送液機構１３から送液される反応液と混合される。この混合液は、反応装置８を通過する際に反応し呈色して、可視検出器９により検出される。反応装置８は、通常流路がコイル状に巻かれた形状をしており、図示しない加熱装置を備え、反応装置８の温度制御を行うことができる。尚、本実施例における反応装置８は、上記反応液にニンヒドリン試薬が用いられる場合、ウォーミングアップ時から１３５℃を目標に加熱、恒温される。
【００１７】
可視検出器９は分光光度計などが用いられ、検出信号をデータ処理装置１０に出力する。データ処理装置１０は、入力した信号を処理してクロマトグラムおよびデータとして出力、記録、保存する。
【００１８】
なお、図１６は、分離液（移動相）Ｂ１〜Ｂ５の組成例を示す図である。
【００１９】
図２に分析開始前のウォーミングアップ用動作条件の例を示す。このウォーミングアップ用動作条件は、室温２５℃の場合の標準的な動作条件であり、本実施例のアミノ酸分析装置が規定値（デフォルト）で備えるウォーミングアップ用動作条件データである。この動作条件では、ポンプ１の各溶離液の混合比率と流量、分離カラム６の温度、ポンプ２の各反応液の混合比率と流量を時間ごとに設定、変更可能である。
【００２０】
このウォーミングアップ用動作条件は、分離カラム６や反応装置８を傷めないよう考慮されている。例えば、ポンプ１の流量を段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。分離カラム６の温度は、最終的には分析実行時の温度にする。ポンプ２は、反応装置８の温度上昇を考慮してニンヒドリン試薬を流すように設定する。
【００２１】
具体的には、ポンプ１の流量は、０．１０ｍｌ／ｍｉｎを１５．０分まで維持した後、２５．０分で０．３０ｍｌ／ｍｉｎとなるように段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。ここでは、５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量を上限として設定される。標準的な分析用動作条件では、分析開始時のポンプ１の流量は０．４０ｍｌ／ｍｉｎ であるため、２５．０分から３０．０分にかけて０．１０ｍｌ／ｍｉｎ 増量することになる。仮に、分析実行時の流量が０．４０ｍｌ／ｍｉｎ以上である場合には、０．３０ｍｌ／ｍｉｎに到達する時間が２５．０分より前になるように設定される。５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量であれば分離カラム６や反応装置８への圧力は十分小さく、分離カラム６や反応装置８の傷みが低減できる。
【００２２】
分離カラム６の温度は、ウォーミングアップ用の条件としては５０℃で加熱するように設定される。５０℃という温度は、標準的な分析用動作条件と、分離カラム６の温度と圧力の関係に基づいている。標準的な分析用動作条件では、分析開始時の分離カラム６の温度は５７℃または３８℃であり、その中間は４７．５℃である。また、温度が上がると圧力が下がるという関係がある。５０℃であれば中間値に近く、また分離カラム６の圧力を下げるのに十分な温度であり、分離カラム６の傷みが低減できる。
【００２３】
ポンプ２の流量は、０．１０ｍｌ／ｍｉｎを１５．０分まで維持した後、２５．０分の０．２０ｍｌ／ｍｉｎへと段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。ここでも、５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量を上限として設定される。
【００２４】
標準的な分析用動作条件では、分析開始時のポンプ２の流量は０．３０ｍｌ／ｍｉｎであるため、２５．０分から３０．０分にかけて０．１０ｍｌ／ｍｉｎ増量することになる。
【００２５】
仮に、分析実行時の流量が０．３０ｍｌ／ｍｉｎ以上である場合には、０．２０ｍｌ／ｍｉｎに到達する時間が２５．０分より前になるように設定される。５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量であれば反応装置８への圧力は十分小さく、反応装置８の傷みが低減できる。
【００２６】
また、１５．０分まで洗浄液を流し、１５．１分からはニンヒドリン試薬を流し、最終的には分析実行時の混合比率にする。洗浄液からニンヒドリン試薬へ切り換える１５．１分という時間は、図３に示した反応装置８の温度とポンプ２の圧力の関係、図４に示した反応装置８の温度上昇の様子に基づいている。
【００２７】
図３は、ニンヒドリン試薬を流したときの反応装置８の温度とポンプ２の圧力を測定したものである。これは、ニンヒドリン試薬の温度と粘性の関係を間接的に示す。
【００２８】
室温は２５℃、ポンプ２の流量は０．２ｍｌ／ｍｉｎと０．３５ｍｌ／ｍｉｎ、圧力を測定した温度は３０℃、１００℃、１３５℃である。反応装置８の温度が１００℃以上では、どちらの流量においても、ニンヒドリン試薬の粘性が下がりポンプ２の圧力が安定することが分かる。
【００２９】
図４は、反応装置８を加熱した場合の温度上昇特性を２次曲線で近似したものである。室温は２５℃、設定温度は１３５℃、温度を測定した時間は０分、１２分、２０分、２５分、２７分、３０分、３５分、４０分である。
【００３０】
ここから、１２．３分辺りで１００℃に到達することが分かる。１５分時点での反応装置８の温度は約１０９℃である。上記のように、図３や図４で示される特性から、１５．１分に洗浄液からニンヒドリン試薬へ切り換えると、反応装置８が充分に１００℃に到達しているため、ニンヒドリン試薬の粘性は低く、反応装置８は詰まらない。つまり、反応装置８の傷みが低減できる。
【００３１】
（第２の実施例）
第２の実施例も、第１の実施例と同様に、アミノ酸分析装置に適用した場合の例であり、装置構成は図１に示した例と同様である。なお、以下の第３以降の実施例も、アミノ酸分析装置に適用した場合の例であり、装置構成は図１に示した例と同様である。
【００３２】
この第２の実施形態は、分離カラム６の劣化を防ぐために、液体クロマトグラフ装置の分析運転開始時における各種の条件設定において、流量を徐々に増加させる要素の機能を有するものである。
【００３３】
カラム初期化工程の基本構成は、図５において、ある時間範囲内で、流量を徐々に増加させる工程１、流量を一定にした状態で、一定時間カラムを安定させる工程２、次の分析工程に移行させるための平衡化工程３から構成される。
【００３４】
工程１の流量変化の範囲は、使用するカラムの定常分析流量範囲に対し、初期流量は、その５分の１から２分の１とし、およそ１分から２０分かけて、定常分析流量になるように流す。工程２の一定流量範囲は測定流量と同程度に増加させる。
【００３５】
工程３は、次の分析サイクルと同じ溶離液組成、カラム温度状態にするためにある。これら工程１から工程３からなる本発明の第２の実施例におけるウォーミングアップ用動作を実際の分析の前に実行することにより、分離カラムの劣化を防ぐ効果がある。
【００３６】
すなわち、流速を徐々に増加させると同時に、分離カラム６の温度を実際の分析温度またはそれ以上まで上昇させることで、分離カラム６内を流れる移動相（溶離液）の粘度を低下させることができ、結果的には分離カラム６の負荷圧力を低下させることが可能となる。
【００３７】
これにより、分離カラム６内の充填床の変化を軽減あるいは防止出来るので、分離カラム６の性能劣化を防ぐ効果が得られる。
【００３８】
図６は、徐々に上昇させる流速と、温度と、５種類の移動相とにおける実施例を示す図である。なお、移動相は単一ではなく全種類Ｂ１〜Ｂ５を用いた。また、流速は０〜０．１分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．１１ｍＬ／ｍｉｎというように、８分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎに徐々に増加するように構成した。
【００３９】
このような準備動作を行なうと、図１１に示すような、理論段数変化率（ソレオニン）が得られ、後述する比較例１と比べて、カラム６の長寿命化を図ることができる。
【００４０】
（第３の実施例）
第３の実施例では、図７に示すように、流速を１分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作（ウォーミングアップ用動作）を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）になるが、十分、実際の分析に使用することが出来る。
【００４１】
ここで、この第３の実施例と２の実施例とを比較すると、初期の理論段数変化率の低下が大きいが、４０回目の分析サイクルでは第２の実施例と同等のカラム６の長寿命化を図ることができた。
【００４２】
（第４の実施例）
第４の実施例では、図８に示すように、流速を４分間で０．１から０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）となり、第１の実施例と同等の効果が得られた。
【００４３】
（第５の実施例）
第５の実施例では、図９に示すように、流速を２０分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）であり、第１の実施例と同等のカラムの長寿命化を図ることができた。
【００４４】
（第６の実施例）
第６の実施例では、図１０に示すように、流速を第１の実施例と同じく８分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。また、用いる移動相は、第１の実施例は５種類であるが、この第６の実施例では１種類のみを用いた。
【００４５】
この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）になるが、十分、実際の分析に使用出来る。
【００４６】
なお、理論段数の低下は第２、３、４、５、６の実施例とも、ほぼ同等で、十分分析には使用できる範囲であるが、第３の実施例は、初期の理論段数の低下が著しい。
【００４７】
また、第５の実施例のように、流速を上昇させるための所要時間が長ければ長いほど、分離カラム６に対する圧力負荷がより少ないものになるのは明らかである。
【００４８】
しかし、溶離液あるいは反応液等の移動相をいたずらに消費するのみであり、経済的損失、時間的損失が大きく、実際的ではないので、上限は２０分程度が望ましい。
【００４９】
これら実施例から、流速は１分から２０分の範囲で、所定の分析流速にするのが望ましいが、より好ましくは５分から１０分程度の時間範囲で上昇させるほうが良い。第６の実施例は、図１１から明らかなように、ソレオニンの理論段数変化率は第２の実施例とほぼ同等であるが、図１２に示すように、他のアミノ酸としてロイシンの理論段数の低下が早く、また、大きい。
【００５０】
このため、第２〜５の実施例のように、単一の移動相だけではなく、カラムのコンディショニングおよびシステム全体の安定化を図る目的で、分析で用いる移動相をすべて用いるほうが良い。
【００５１】
（比較例１）
本発明と異なり、分析をスタートする時、徐々に設定された分析流速に上昇させずに、急激に設定分析流速にすると、当然、分離カラムに急激な圧力負荷を与えることになる。このように、急激に設定分析流速にすることを繰り返すと、分離カラムは圧力負荷の影響で、分離カラム入口部分に空間が生成し、その性能を低下させてしまうと推定される。
【００５２】
上記推定を模擬的に実証するための測定を行なった。分離カラムに急激な圧力負荷を与えるために、流速を０．０２ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎに０．１分で変化させる（以下ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗと呼ぶ）ことを繰り返し、アミノ酸標準液の分離クロマトグラム図１３および図１４を得た。
【００５３】
図１３はＳＴＯＰ−ｆｌｏｗなしのクロマトグラムである。図１４はＳＴＯＰ−ｆｌｏｗを４１回繰り返した後のクロマトグラムである。
【００５４】
図１３および図１４から、明らかなように、分離性能が悪化しており、特にソレオニン（Ｔｈｒ）とセリン（Ｓｅｒ）の分離が著しく低下している。
【００５５】
また、図１１には、ソレオニンの理論段数の変化を示した。ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗを４０回繰り返すと、理論段数は５０％以下に減少し、使用不可状態になった。これら、ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗの繰り返し後のクロマトグラムや理論段数の変化から、分離カラムへの急激な圧力負荷は、分離カラムの性能低下すなわち寿命に悪影響を与えることが実証された。
【００５６】
つまり、この悪影響を低減させるためには、本発明のように、徐々に設定された分析流速に上昇させることが、分離カラムの寿命を長くするには必要不可欠であることが実証されたといえる。
【００５７】
なお、今回の実験の繰り返し回数は、実際の分析検体の使用回数の１００倍相当であり、現実には使用回数４０回後は、４０００検体に相当する。
【００５８】
（比較例２）
分析をスタートする時、分離カラムが設定されたカラム温度に十分に達していない状態で、分析を開始すると、溶離液温度が低いため、その粘度は大きく、結果的には、分離カラムへの圧力負荷は大きくなる。分離カラムが十分にカラム温度に達していないまま、分析を開始することを繰り返すと、分離カラムは圧力負荷の影響で、その性能を低下させてしまうと推定される。
【００５９】
上記推定を模擬的に実証するための測定を行なった。図１５に示す動作、すなわち、流速上昇勾配および用いる移動相は、第１の実施例と同じであるが、カラム温度を３０℃にした動作を４回繰り返し、アミノ酸標準液の分離クロマトグラムを得た。
【００６０】
このクロマトグラムと動作実行前のクロマトグラムとを比較すると明らかに分離性能が低下していることが確認された。
【００６１】
すなわち、図１５に示した動作実行後のソレオニン理論段数変化率は約５０％となり、また圧力は約２倍に上昇し、分析使用不可になった。
【００６２】
この比較例２から、本発明によるカラム温度は分析温度付近であることが必要不可欠であることが実証された。分離カラム温度を高くすれば粘度が小さくなり、圧力負荷が軽減されるが、一方で、移動相の組成によっては（有機溶剤が含まれる場合等）、発泡等により分離カラムに性能低下の悪影響を及ぼすことが懸念されるため、上限は７０℃が望ましい。
【００６３】
次に、図１７〜図２２を用いて、上述した第１〜第６の実施例のうち、第１の実施例を用いて処理シーケンスを説明する。
【００６４】
図１７のステップ５０１において、データ処理装置１０には１つ以上の分析用動作条件が保存されており、分析する試料によって動作条件が選択できる。データ処理装置１０に備えられたディスプレイに図１８のウインドウを表示し、ユーザに分析に用いる動作条件を選択させ、分析の実行を要求させる。
【００６５】
図１７のステップ５０２、５０３において、図１９に示すウォーミングアップ実行確認画面を表示し、上述したウォーミングアップ用動作条件を動作させるか否かを選択させる。“はい”ボタンが押されると、ステップ５０４へ移行して、上述した動作条件に変更する。“いいえ”ボタンが押されると、ステップ５０９へ移行して分析用動作条件に沿って分析を実行する。
【００６６】
図１７のステップ５０４において、データ処理装置１０は、ステップ５０１で選択された分析用動作条件の０．０分におけるポンプ１の混合比率と流量、分離カラムの温度、ポンプ２の混合比率と流量を抽出し、図２に示したウォーミングアップ用動作条件の３０．０分時の条件に設定する。
【００６７】
これにより、図２のウォーミングアップ用動作条件は、３０．０分までに分析実行時の混合比率、流量、温度へと段階的に変化し、それを４０．０分まで維持する動作条件となる。
【００６８】
分析用動作条件は、４０．０分の後に実行されることになる。ここで、３０．０分から４０．０分という時間は、動作条件を安定させるための猶予時間であり、主に反応装置８の温度を安定性を確保するための時間である。図４に示した反応装置８の温度上昇特性から分かるように、反応装置８の温度は２７分に１３５℃へ達し、その後、４０分まで１３５℃を安定維持している。
【００６９】
例えば、ステップ５０１で選択された分析用動作条件の０．０分におけるポンプ１の混合比率がＢ１＝５０、Ｂ２＝５０、Ｂ３＝０、Ｂ４＝０、Ｂ５＝０、ポンプ１の流量が０．４０とする。これらを、図２のウォーミングアップ用動作条件の３０．０分に設定すると図２０を得る。混合比率は２５．０分から３０．０分にかけて変化し、以後はその混合比率を維持する。流量は１５．０分から３０．０分にかけて上昇し、以後はその流量を維持する。
【００７０】
また、本発明によるアミノ酸分析装置は、設置場所の温度を検出する温度検出器を備えており（図示せず）、データ処理装置１０は、この温度検出器からの得られる周辺温度を基に、反応装置８の温度上昇特性を考慮してウォーミングアップ用動作条件の時間列の値を変更する機能を有する。
【００７１】
つまり、設置場所の温度が低ければ時間列の値を大きくしてウォーミングアップ開示時間から分析開始時間までの間隔を長くし、設置場所の温度が高ければ時間列の値を小さくしてウォーミングアップ開示時間から分析開始時間までの間隔を短くする。
【００７２】
そのために、データ処理装置１０は、図４で示される反応装置８の温度上昇特性に関するデータを備えており、検出した周辺温度と温度上昇特性データを比較して、ウォーミングアップ開始時間を算出する。例えば、設置場所の温度が０℃の場合、図４の２５℃における温度上昇特性データを参照し、時間が−４．１分のときに反応装置８の温度が約０℃となることを算出できる。
【００７３】
図２のウォーミングアップ用動作条件は２５℃の場合の設定値であるため、この時間を全体的に４．１分加算する。即ち、“１５．０分”を“１９．１分”に、“１５．１分”を“１９．２分”に、“２５．０分”を“２９．１分”に、“３０．０分”を“３４．１分”に変更する。従って、この場合、分析開始時間が４４．１分からとなる。
【００７４】
図１７のステップ５０５、５０６において、次に、図２１に示した評価基準設定ウインドウをディスプレイ上に表示し、ステップ５０４のウォーミングアップ用動作条件で動作させた結果を評価するための評価基準を設定させる。ここでは、「ポンプ１混合比率」、「ポンプ１流量」、「分離カラム温度」、「ポンプ２混合比率」、「ポンプ２流量」が設定対象項目候補としてある。
【００７５】
各項目の左側にある白四角はチェックボタンであり、ボタンごとに選択できる。評価にはチェックボタンが選択された基準だけを用い、そうでない基準は無視する。チェックボタンの既定値（デフォルト）は“選択”である。
【００７６】
チェックボタンを選択すると、それに付するテキストボックスが入力可能になる。チェックボタンを非選択すると、それに付するテキストボックスが入力不可能になる。テキストボックスの既定値（デフォルト）は、ステップ５０４の動作条件で動作させた期待結果、つまり図２の３０．０分に設定した動作条件とする。また、“±”に続くテキストボックスは、基準値に幅を持たせるための設定枠である。
【００７７】
“ＯＫ”ボタンが押されると、ステップ５０４の動作条件でウォーミングアップ動作を実行する。
【００７８】
図１７のステップ５０７、５０において、ウォーミングアップ動作が終了した後、その結果を評価する。評価に先立ち、ポンプ１の混合比率と流量、分離カラム６の温度、ポンプ２の混合比率と流量のそれぞれの現在値を取得する。次に、現在値とステップ５０５で設定した評価基準を比較する。
【００７９】
図１７のステップ５０９、５１０において、評価が成功だった場合、つまりステップ５０５の評価基準を満たした場合、分析を実行する。
【００８０】
図１７のステップ５１１において、評価が失敗だった場合、図２２に示したエラー処理ウインドウをディスプレイ上に表示し、処理をユーザに選択させる。“中断”ボタンが押されると、ステップ５１０へ移行して分析を開始せずに終了する。“リトライ”ボタンが押されると、ステップ５０５へ移行して評価基準を再度設定させる。“分析開始”ボタンが押されると、評価にかかわらずステップ５０９へ移行して分析を実行する。
【００８１】
分析が実行されることで、本実施例の処理を終了する（ステップ５１０）。
【００８２】
上記ステップ５１１では、ステップ５０５へ戻る例を示したが、別の実施例として、ステップ５１１で“リトライ”ボタンが押されると、ステップ５０６へ移行してステップ５０４の動作条件でウォーミングアップ動作を実行しても良い。
【００８３】
さらに、別の実施例として、ステップ５１１で図２２に示したウインドウを表示しなくても良い。替わりに、図２２に示したウインドウの機能を図２１に示したウインドウに組み込み、評価が失敗だった場合の処理を事前に選択させる。
【００８４】
つまり、図２１に示したウインドウに中断、リトライ、分析開始という３つのラジオボタンを設ける。ラジオボタンでは、１つのボタンだけが選択できる。データ処理装置１０はラジオボタンの選択を記憶し、次回、図２１に示したウインドウを表示するときは、記憶した選択を既定値とする。
【符号の説明】
【００８５】
１、２…ポンプ、３…試料導入部、５…ガードカラム、６…分離カラム、７…Ｔ字ジョイント、８…反応装置、９…可視検出器、１０…データ処理装置
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフに関し、例えば、ポストカラム誘導体化法を用いた反応系を有する装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポストカラム誘導体化法を用いた代表的な液体クロマトグラフとして、アミノ酸分析装置がある。特許文献１に述べられているように、従来のアミノ酸分析装置における分析は、緩衝液（溶離液）用ポンプによって送液した溶離液に、オートサンプラで試料を注入し、分離カラムでアミノ酸成分毎に分離した後に、反応試薬であるニンヒドリン試薬をニンヒドリンポンプによって送液して合流させ、その混合液を反応させるために反応コイルを通し、反応後の混合液を光度計により測定し、アミノ酸を検出している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平４−１９４７５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような装置において、分析を行う際、特に分析開始前、所謂ウォーミングアップ時のポンプによる溶離液や反応試薬の流量、および分離カラムや反応カラム（反応装置ともいう。以下、反応装置とする。）の温度の設定は重要である。
【０００５】
分離カラムに突然大量の溶離液を流すと、その圧力によってカラム充填材の分布が崩れてしまう。また、分離カラムを十分に加熱していない状態で溶離液を流すと、十分に加熱した状態に比べて高い圧力が分離カラムにかかってしまう。また、反応装置を十分に加熱していない状態でニンヒドリン試薬を流すと、ニンヒドリン試薬の液性によって反応装置が詰まってしまう。こうして分離カラムや反応装置が傷んでしまうと、安定した分析を行うことができなくなる。
【０００６】
したがって、上記のような液体クロマトグラフを用いて分析を行う場合は、分析開始できる状態であるか否かを十分に見極めた上でなければならず、熟練者でなければ、分析が困難であった。
【０００７】
本発明の目的は、分析開始時のクロマトユニットの動作条件によって生じる分離カラムや反応装置の傷みを低減し、安定した分析を行うことのできる液体クロマトグラフを提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、液体クロマトグラフを用いた分析の開始時に、溶離液を送液するポンプ、試薬や洗浄液を送液するポンプ、及び分離カラムを加熱する加熱装置を、所定のデータを用いて、分析を開始するための動作状態に制御することに関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、熟練者の操作に頼らずとも、最適な動作条件でウォーミングアップを行った後に分析を開始することができるため、分離カラムや反応装置への負荷を最小限にでき、安定した分析を実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の概略構成図である。
【図２】本発明の第１の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図３】反応装置８の温度とポンプ２の圧力の関係である。
【図４】反応装置８の室温２５℃時の温度上昇特性を示すデータである。
【図５】本発明の第２の実施例の動作説明図である。
【図６】本発明の第２の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図７】本発明の第３の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図８】本発明の第４の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図９】本発明の第５の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図１０】本発明の第６の実施例におけるウォーミングアップ用動作条件の設定値の例である。
【図１１】本発明の実施例と比較例１との理論段数変化率（ソレオニン）を比較するグラフである。
【図１２】本発明の実施例と比較例１との理論段数変化率（ロイシン）を比較するグラフである。
【図１３】本発明との一比較例を示すグラフである。
【図１４】本発明との他の比較例を示すグラフである。
【図１５】本発明との比較例における準備動作を示す図である。
【図１６】分離液（移動相）Ｂ１〜Ｂ５の組成例を示す図である。
【図１７】データ処理装置の動作を示すフローチャートである。
【図１８】分析用動作条件選択画面の例を示す図である。
【図１９】確認画面の例を示すである。
【図２０】分析用動作条件の値が設定されたウォーミングアップ用動作条件をグラフ化した例を示す図である。
【図２１】評価基準の設定画面の例を示す図である。
【図２２】エラー処理画面の例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施例を説明する。尚、実施例としてアミノ酸分析装置を用いる。
【実施例】
【００１２】
（第１の実施例）
図１はアミノ酸分析装置の構成図である。溶離液送液機構１１と、試料導入部３（オートサンプラー）と、分離機構１２と、反応液送液機構１３と、Ｔ字ジョイント７と、反応装置８と、可視検出器９と、これらをつなぐ流路１４と、データ処理装置１０を備える。
【００１３】
溶離液送液機構１１は、それぞれ異なる溶離液（移動相）が収容された複数の溶離液槽が設けられ、また、ポンプ１内または溶離液槽とポンプ１の間に電磁弁を有しており、データ処理装置１０からの信号またはポンプ１への直接入力により、電磁弁を切り替え、選択された溶離液をポンプ１により送液する。溶離液は試料を注入する試料導入部３を経由して分離機構１２へと送られる。
【００１４】
分離機構１２は、ガードカラム５と分離カラム６で構成されており、試料導入部３から導入された試料は、ガードカラム５を通過し、分離カラム６で分離される。分離カラム６は、図示しない恒温槽内に配置されており、分離カラム６を加熱し、その温度を制御することができる。
【００１５】
反応液送液機構１３は、反応液や洗浄液が収容された複数の反応液槽及び洗浄液槽が設けられ、また、反応液または洗浄液を送液するポンプ２と流路１５を備え、ポンプ２内または反応液・洗浄液槽とポンプ２の間に電磁弁を有している。反応液送液機構１３は、データ処理装置１０からの信号またはポンプへの直接入力により電磁弁を切り替え、選択された液をポンプ２により流路１５へと送液する。
【００１６】
Ｔ字ジョイント７は、分離カラム６と流路１５との間に設けられ、分離カラム６で分離された各アミノ酸は反応液送液機構１３から送液される反応液と混合される。この混合液は、反応装置８を通過する際に反応し呈色して、可視検出器９により検出される。反応装置８は、通常流路がコイル状に巻かれた形状をしており、図示しない加熱装置を備え、反応装置８の温度制御を行うことができる。尚、本実施例における反応装置８は、上記反応液にニンヒドリン試薬が用いられる場合、ウォーミングアップ時から１３５℃を目標に加熱、恒温される。
【００１７】
可視検出器９は分光光度計などが用いられ、検出信号をデータ処理装置１０に出力する。データ処理装置１０は、入力した信号を処理してクロマトグラムおよびデータとして出力、記録、保存する。
【００１８】
なお、図１６は、分離液（移動相）Ｂ１〜Ｂ５の組成例を示す図である。
【００１９】
図２に分析開始前のウォーミングアップ用動作条件の例を示す。このウォーミングアップ用動作条件は、室温２５℃の場合の標準的な動作条件であり、本実施例のアミノ酸分析装置が規定値（デフォルト）で備えるウォーミングアップ用動作条件データである。この動作条件では、ポンプ１の各溶離液の混合比率と流量、分離カラム６の温度、ポンプ２の各反応液の混合比率と流量を時間ごとに設定、変更可能である。
【００２０】
このウォーミングアップ用動作条件は、分離カラム６や反応装置８を傷めないよう考慮されている。例えば、ポンプ１の流量を段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。分離カラム６の温度は、最終的には分析実行時の温度にする。ポンプ２は、反応装置８の温度上昇を考慮してニンヒドリン試薬を流すように設定する。
【００２１】
具体的には、ポンプ１の流量は、０．１０ｍｌ／ｍｉｎを１５．０分まで維持した後、２５．０分で０．３０ｍｌ／ｍｉｎとなるように段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。ここでは、５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量を上限として設定される。標準的な分析用動作条件では、分析開始時のポンプ１の流量は０．４０ｍｌ／ｍｉｎ であるため、２５．０分から３０．０分にかけて０．１０ｍｌ／ｍｉｎ 増量することになる。仮に、分析実行時の流量が０．４０ｍｌ／ｍｉｎ以上である場合には、０．３０ｍｌ／ｍｉｎに到達する時間が２５．０分より前になるように設定される。５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量であれば分離カラム６や反応装置８への圧力は十分小さく、分離カラム６や反応装置８の傷みが低減できる。
【００２２】
分離カラム６の温度は、ウォーミングアップ用の条件としては５０℃で加熱するように設定される。５０℃という温度は、標準的な分析用動作条件と、分離カラム６の温度と圧力の関係に基づいている。標準的な分析用動作条件では、分析開始時の分離カラム６の温度は５７℃または３８℃であり、その中間は４７．５℃である。また、温度が上がると圧力が下がるという関係がある。５０℃であれば中間値に近く、また分離カラム６の圧力を下げるのに十分な温度であり、分離カラム６の傷みが低減できる。
【００２３】
ポンプ２の流量は、０．１０ｍｌ／ｍｉｎを１５．０分まで維持した後、２５．０分の０．２０ｍｌ／ｍｉｎへと段階的に増量し、最終的には分析実行時の流量にする。ここでも、５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量を上限として設定される。
【００２４】
標準的な分析用動作条件では、分析開始時のポンプ２の流量は０．３０ｍｌ／ｍｉｎであるため、２５．０分から３０．０分にかけて０．１０ｍｌ／ｍｉｎ増量することになる。
【００２５】
仮に、分析実行時の流量が０．３０ｍｌ／ｍｉｎ以上である場合には、０．２０ｍｌ／ｍｉｎに到達する時間が２５．０分より前になるように設定される。５分間で０．１０ｍｌ／ｍｉｎの増量であれば反応装置８への圧力は十分小さく、反応装置８の傷みが低減できる。
【００２６】
また、１５．０分まで洗浄液を流し、１５．１分からはニンヒドリン試薬を流し、最終的には分析実行時の混合比率にする。洗浄液からニンヒドリン試薬へ切り換える１５．１分という時間は、図３に示した反応装置８の温度とポンプ２の圧力の関係、図４に示した反応装置８の温度上昇の様子に基づいている。
【００２７】
図３は、ニンヒドリン試薬を流したときの反応装置８の温度とポンプ２の圧力を測定したものである。これは、ニンヒドリン試薬の温度と粘性の関係を間接的に示す。
【００２８】
室温は２５℃、ポンプ２の流量は０．２ｍｌ／ｍｉｎと０．３５ｍｌ／ｍｉｎ、圧力を測定した温度は３０℃、１００℃、１３５℃である。反応装置８の温度が１００℃以上では、どちらの流量においても、ニンヒドリン試薬の粘性が下がりポンプ２の圧力が安定することが分かる。
【００２９】
図４は、反応装置８を加熱した場合の温度上昇特性を２次曲線で近似したものである。室温は２５℃、設定温度は１３５℃、温度を測定した時間は０分、１２分、２０分、２５分、２７分、３０分、３５分、４０分である。
【００３０】
ここから、１２．３分辺りで１００℃に到達することが分かる。１５分時点での反応装置８の温度は約１０９℃である。上記のように、図３や図４で示される特性から、１５．１分に洗浄液からニンヒドリン試薬へ切り換えると、反応装置８が充分に１００℃に到達しているため、ニンヒドリン試薬の粘性は低く、反応装置８は詰まらない。つまり、反応装置８の傷みが低減できる。
【００３１】
（第２の実施例）
第２の実施例も、第１の実施例と同様に、アミノ酸分析装置に適用した場合の例であり、装置構成は図１に示した例と同様である。なお、以下の第３以降の実施例も、アミノ酸分析装置に適用した場合の例であり、装置構成は図１に示した例と同様である。
【００３２】
この第２の実施形態は、分離カラム６の劣化を防ぐために、液体クロマトグラフ装置の分析運転開始時における各種の条件設定において、流量を徐々に増加させる要素の機能を有するものである。
【００３３】
カラム初期化工程の基本構成は、図５において、ある時間範囲内で、流量を徐々に増加させる工程１、流量を一定にした状態で、一定時間カラムを安定させる工程２、次の分析工程に移行させるための平衡化工程３から構成される。
【００３４】
工程１の流量変化の範囲は、使用するカラムの定常分析流量範囲に対し、初期流量は、その５分の１から２分の１とし、およそ１分から２０分かけて、定常分析流量になるように流す。工程２の一定流量範囲は測定流量と同程度に増加させる。
【００３５】
工程３は、次の分析サイクルと同じ溶離液組成、カラム温度状態にするためにある。これら工程１から工程３からなる本発明の第２の実施例におけるウォーミングアップ用動作を実際の分析の前に実行することにより、分離カラムの劣化を防ぐ効果がある。
【００３６】
すなわち、流速を徐々に増加させると同時に、分離カラム６の温度を実際の分析温度またはそれ以上まで上昇させることで、分離カラム６内を流れる移動相（溶離液）の粘度を低下させることができ、結果的には分離カラム６の負荷圧力を低下させることが可能となる。
【００３７】
これにより、分離カラム６内の充填床の変化を軽減あるいは防止出来るので、分離カラム６の性能劣化を防ぐ効果が得られる。
【００３８】
図６は、徐々に上昇させる流速と、温度と、５種類の移動相とにおける実施例を示す図である。なお、移動相は単一ではなく全種類Ｂ１〜Ｂ５を用いた。また、流速は０〜０．１分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．１１ｍＬ／ｍｉｎというように、８分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎに徐々に増加するように構成した。
【００３９】
このような準備動作を行なうと、図１１に示すような、理論段数変化率（ソレオニン）が得られ、後述する比較例１と比べて、カラム６の長寿命化を図ることができる。
【００４０】
（第３の実施例）
第３の実施例では、図７に示すように、流速を１分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作（ウォーミングアップ用動作）を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）になるが、十分、実際の分析に使用することが出来る。
【００４１】
ここで、この第３の実施例と２の実施例とを比較すると、初期の理論段数変化率の低下が大きいが、４０回目の分析サイクルでは第２の実施例と同等のカラム６の長寿命化を図ることができた。
【００４２】
（第４の実施例）
第４の実施例では、図８に示すように、流速を４分間で０．１から０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）となり、第１の実施例と同等の効果が得られた。
【００４３】
（第５の実施例）
第５の実施例では、図９に示すように、流速を２０分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）であり、第１の実施例と同等のカラムの長寿命化を図ることができた。
【００４４】
（第６の実施例）
第６の実施例では、図１０に示すように、流速を第１の実施例と同じく８分間で０．１ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎになるようにした。また、用いる移動相は、第１の実施例は５種類であるが、この第６の実施例では１種類のみを用いた。
【００４５】
この準備動作を繰り返すと、図１１に示すような理論段数変化率（ソレオニン）になるが、十分、実際の分析に使用出来る。
【００４６】
なお、理論段数の低下は第２、３、４、５、６の実施例とも、ほぼ同等で、十分分析には使用できる範囲であるが、第３の実施例は、初期の理論段数の低下が著しい。
【００４７】
また、第５の実施例のように、流速を上昇させるための所要時間が長ければ長いほど、分離カラム６に対する圧力負荷がより少ないものになるのは明らかである。
【００４８】
しかし、溶離液あるいは反応液等の移動相をいたずらに消費するのみであり、経済的損失、時間的損失が大きく、実際的ではないので、上限は２０分程度が望ましい。
【００４９】
これら実施例から、流速は１分から２０分の範囲で、所定の分析流速にするのが望ましいが、より好ましくは５分から１０分程度の時間範囲で上昇させるほうが良い。第６の実施例は、図１１から明らかなように、ソレオニンの理論段数変化率は第２の実施例とほぼ同等であるが、図１２に示すように、他のアミノ酸としてロイシンの理論段数の低下が早く、また、大きい。
【００５０】
このため、第２〜５の実施例のように、単一の移動相だけではなく、カラムのコンディショニングおよびシステム全体の安定化を図る目的で、分析で用いる移動相をすべて用いるほうが良い。
【００５１】
（比較例１）
本発明と異なり、分析をスタートする時、徐々に設定された分析流速に上昇させずに、急激に設定分析流速にすると、当然、分離カラムに急激な圧力負荷を与えることになる。このように、急激に設定分析流速にすることを繰り返すと、分離カラムは圧力負荷の影響で、分離カラム入口部分に空間が生成し、その性能を低下させてしまうと推定される。
【００５２】
上記推定を模擬的に実証するための測定を行なった。分離カラムに急激な圧力負荷を与えるために、流速を０．０２ｍＬ／ｍｉｎから０．４ｍＬ／ｍｉｎに０．１分で変化させる（以下ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗと呼ぶ）ことを繰り返し、アミノ酸標準液の分離クロマトグラム図１３および図１４を得た。
【００５３】
図１３はＳＴＯＰ−ｆｌｏｗなしのクロマトグラムである。図１４はＳＴＯＰ−ｆｌｏｗを４１回繰り返した後のクロマトグラムである。
【００５４】
図１３および図１４から、明らかなように、分離性能が悪化しており、特にソレオニン（Ｔｈｒ）とセリン（Ｓｅｒ）の分離が著しく低下している。
【００５５】
また、図１１には、ソレオニンの理論段数の変化を示した。ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗを４０回繰り返すと、理論段数は５０％以下に減少し、使用不可状態になった。これら、ＳＴＯＰ−ｆｌｏｗの繰り返し後のクロマトグラムや理論段数の変化から、分離カラムへの急激な圧力負荷は、分離カラムの性能低下すなわち寿命に悪影響を与えることが実証された。
【００５６】
つまり、この悪影響を低減させるためには、本発明のように、徐々に設定された分析流速に上昇させることが、分離カラムの寿命を長くするには必要不可欠であることが実証されたといえる。
【００５７】
なお、今回の実験の繰り返し回数は、実際の分析検体の使用回数の１００倍相当であり、現実には使用回数４０回後は、４０００検体に相当する。
【００５８】
（比較例２）
分析をスタートする時、分離カラムが設定されたカラム温度に十分に達していない状態で、分析を開始すると、溶離液温度が低いため、その粘度は大きく、結果的には、分離カラムへの圧力負荷は大きくなる。分離カラムが十分にカラム温度に達していないまま、分析を開始することを繰り返すと、分離カラムは圧力負荷の影響で、その性能を低下させてしまうと推定される。
【００５９】
上記推定を模擬的に実証するための測定を行なった。図１５に示す動作、すなわち、流速上昇勾配および用いる移動相は、第１の実施例と同じであるが、カラム温度を３０℃にした動作を４回繰り返し、アミノ酸標準液の分離クロマトグラムを得た。
【００６０】
このクロマトグラムと動作実行前のクロマトグラムとを比較すると明らかに分離性能が低下していることが確認された。
【００６１】
すなわち、図１５に示した動作実行後のソレオニン理論段数変化率は約５０％となり、また圧力は約２倍に上昇し、分析使用不可になった。
【００６２】
この比較例２から、本発明によるカラム温度は分析温度付近であることが必要不可欠であることが実証された。分離カラム温度を高くすれば粘度が小さくなり、圧力負荷が軽減されるが、一方で、移動相の組成によっては（有機溶剤が含まれる場合等）、発泡等により分離カラムに性能低下の悪影響を及ぼすことが懸念されるため、上限は７０℃が望ましい。
【００６３】
次に、図１７〜図２２を用いて、上述した第１〜第６の実施例のうち、第１の実施例を用いて処理シーケンスを説明する。
【００６４】
図１７のステップ５０１において、データ処理装置１０には１つ以上の分析用動作条件が保存されており、分析する試料によって動作条件が選択できる。データ処理装置１０に備えられたディスプレイに図１８のウインドウを表示し、ユーザに分析に用いる動作条件を選択させ、分析の実行を要求させる。
【００６５】
図１７のステップ５０２、５０３において、図１９に示すウォーミングアップ実行確認画面を表示し、上述したウォーミングアップ用動作条件を動作させるか否かを選択させる。“はい”ボタンが押されると、ステップ５０４へ移行して、上述した動作条件に変更する。“いいえ”ボタンが押されると、ステップ５０９へ移行して分析用動作条件に沿って分析を実行する。
【００６６】
図１７のステップ５０４において、データ処理装置１０は、ステップ５０１で選択された分析用動作条件の０．０分におけるポンプ１の混合比率と流量、分離カラムの温度、ポンプ２の混合比率と流量を抽出し、図２に示したウォーミングアップ用動作条件の３０．０分時の条件に設定する。
【００６７】
これにより、図２のウォーミングアップ用動作条件は、３０．０分までに分析実行時の混合比率、流量、温度へと段階的に変化し、それを４０．０分まで維持する動作条件となる。
【００６８】
分析用動作条件は、４０．０分の後に実行されることになる。ここで、３０．０分から４０．０分という時間は、動作条件を安定させるための猶予時間であり、主に反応装置８の温度を安定性を確保するための時間である。図４に示した反応装置８の温度上昇特性から分かるように、反応装置８の温度は２７分に１３５℃へ達し、その後、４０分まで１３５℃を安定維持している。
【００６９】
例えば、ステップ５０１で選択された分析用動作条件の０．０分におけるポンプ１の混合比率がＢ１＝５０、Ｂ２＝５０、Ｂ３＝０、Ｂ４＝０、Ｂ５＝０、ポンプ１の流量が０．４０とする。これらを、図２のウォーミングアップ用動作条件の３０．０分に設定すると図２０を得る。混合比率は２５．０分から３０．０分にかけて変化し、以後はその混合比率を維持する。流量は１５．０分から３０．０分にかけて上昇し、以後はその流量を維持する。
【００７０】
また、本発明によるアミノ酸分析装置は、設置場所の温度を検出する温度検出器を備えており（図示せず）、データ処理装置１０は、この温度検出器からの得られる周辺温度を基に、反応装置８の温度上昇特性を考慮してウォーミングアップ用動作条件の時間列の値を変更する機能を有する。
【００７１】
つまり、設置場所の温度が低ければ時間列の値を大きくしてウォーミングアップ開示時間から分析開始時間までの間隔を長くし、設置場所の温度が高ければ時間列の値を小さくしてウォーミングアップ開示時間から分析開始時間までの間隔を短くする。
【００７２】
そのために、データ処理装置１０は、図４で示される反応装置８の温度上昇特性に関するデータを備えており、検出した周辺温度と温度上昇特性データを比較して、ウォーミングアップ開始時間を算出する。例えば、設置場所の温度が０℃の場合、図４の２５℃における温度上昇特性データを参照し、時間が−４．１分のときに反応装置８の温度が約０℃となることを算出できる。
【００７３】
図２のウォーミングアップ用動作条件は２５℃の場合の設定値であるため、この時間を全体的に４．１分加算する。即ち、“１５．０分”を“１９．１分”に、“１５．１分”を“１９．２分”に、“２５．０分”を“２９．１分”に、“３０．０分”を“３４．１分”に変更する。従って、この場合、分析開始時間が４４．１分からとなる。
【００７４】
図１７のステップ５０５、５０６において、次に、図２１に示した評価基準設定ウインドウをディスプレイ上に表示し、ステップ５０４のウォーミングアップ用動作条件で動作させた結果を評価するための評価基準を設定させる。ここでは、「ポンプ１混合比率」、「ポンプ１流量」、「分離カラム温度」、「ポンプ２混合比率」、「ポンプ２流量」が設定対象項目候補としてある。
【００７５】
各項目の左側にある白四角はチェックボタンであり、ボタンごとに選択できる。評価にはチェックボタンが選択された基準だけを用い、そうでない基準は無視する。チェックボタンの既定値（デフォルト）は“選択”である。
【００７６】
チェックボタンを選択すると、それに付するテキストボックスが入力可能になる。チェックボタンを非選択すると、それに付するテキストボックスが入力不可能になる。テキストボックスの既定値（デフォルト）は、ステップ５０４の動作条件で動作させた期待結果、つまり図２の３０．０分に設定した動作条件とする。また、“±”に続くテキストボックスは、基準値に幅を持たせるための設定枠である。
【００７７】
“ＯＫ”ボタンが押されると、ステップ５０４の動作条件でウォーミングアップ動作を実行する。
【００７８】
図１７のステップ５０７、５０において、ウォーミングアップ動作が終了した後、その結果を評価する。評価に先立ち、ポンプ１の混合比率と流量、分離カラム６の温度、ポンプ２の混合比率と流量のそれぞれの現在値を取得する。次に、現在値とステップ５０５で設定した評価基準を比較する。
【００７９】
図１７のステップ５０９、５１０において、評価が成功だった場合、つまりステップ５０５の評価基準を満たした場合、分析を実行する。
【００８０】
図１７のステップ５１１において、評価が失敗だった場合、図２２に示したエラー処理ウインドウをディスプレイ上に表示し、処理をユーザに選択させる。“中断”ボタンが押されると、ステップ５１０へ移行して分析を開始せずに終了する。“リトライ”ボタンが押されると、ステップ５０５へ移行して評価基準を再度設定させる。“分析開始”ボタンが押されると、評価にかかわらずステップ５０９へ移行して分析を実行する。
【００８１】
分析が実行されることで、本実施例の処理を終了する（ステップ５１０）。
【００８２】
上記ステップ５１１では、ステップ５０５へ戻る例を示したが、別の実施例として、ステップ５１１で“リトライ”ボタンが押されると、ステップ５０６へ移行してステップ５０４の動作条件でウォーミングアップ動作を実行しても良い。
【００８３】
さらに、別の実施例として、ステップ５１１で図２２に示したウインドウを表示しなくても良い。替わりに、図２２に示したウインドウの機能を図２１に示したウインドウに組み込み、評価が失敗だった場合の処理を事前に選択させる。
【００８４】
つまり、図２１に示したウインドウに中断、リトライ、分析開始という３つのラジオボタンを設ける。ラジオボタンでは、１つのボタンだけが選択できる。データ処理装置１０はラジオボタンの選択を記憶し、次回、図２１に示したウインドウを表示するときは、記憶した選択を既定値とする。
【符号の説明】
【００８５】
１、２…ポンプ、３…試料導入部、５…ガードカラム、６…分離カラム、７…Ｔ字ジョイント、８…反応装置、９…可視検出器、１０…データ処理装置
【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶離液を送液する第１のポンプ、試料成分を分離する分離カラム、試薬や洗浄液を送液する第２のポンプ、前記分離カラム通過後の溶液と前記第２のポンプから送液された溶液を反応させる反応装置、前記分離カラムを加熱する第１の加熱装置と、前記反応装置を加熱する第２の加熱装置、試料成分を検出するための検出器、および前記検出器からの検出値を収集し、且つ前記第１及び第２のポンプや加熱装置の動作を制御するデータ処理装置を備える液体クロマトグラフにおいて、
前記データ処理装置は、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、前記第１の加熱装置のそれぞれを分析を開始するための動作状態に制御するためのウォーミングアップ用動作条件データを有し、
分析開始時に前記ウォーミングアップ用動作条件データに基づいた制御を行うことを特徴とする液体クロマトグラフ。
【請求項１】
溶離液を送液する第１のポンプ、試料成分を分離する分離カラム、試薬や洗浄液を送液する第２のポンプ、前記分離カラム通過後の溶液と前記第２のポンプから送液された溶液を反応させる反応装置、前記分離カラムを加熱する第１の加熱装置と、前記反応装置を加熱する第２の加熱装置、試料成分を検出するための検出器、および前記検出器からの検出値を収集し、且つ前記第１及び第２のポンプや加熱装置の動作を制御するデータ処理装置を備える液体クロマトグラフにおいて、
前記データ処理装置は、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、前記第１の加熱装置のそれぞれを分析を開始するための動作状態に制御するためのウォーミングアップ用動作条件データを有し、
分析開始時に前記ウォーミングアップ用動作条件データに基づいた制御を行うことを特徴とする液体クロマトグラフ。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公開番号】特開２０１２−５３０６３（Ｐ２０１２−５３０６３Ａ）
【公開日】平成２４年３月１５日（２０１２．３．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２４３７８１（Ｐ２０１１−２４３７８１）
【出願日】平成２３年１１月７日（２０１１．１１．７）
【分割の表示】特願２００５−１３６３５４（Ｐ２００５−１３６３５４）の分割
【原出願日】平成１７年５月９日（２００５．５．９）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
【公開日】平成２４年３月１５日（２０１２．３．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１１月７日（２０１１．１１．７）
【分割の表示】特願２００５−１３６３５４（Ｐ２００５−１３６３５４）の分割
【原出願日】平成１７年５月９日（２００５．５．９）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
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