測定装置及び測定プログラム
【課題】試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よく呈色状態を測定することができる。
【解決手段】測定装置は、付着物の付着面に合焦して（ステップＳ１００）、付着面を撮影して第１の画像を取得し（ステップＳ１０２）、取得した第１の画像に基づいて付着物の位置を算出し（ステップＳ１０４）、試薬紙に合焦して（ステップＳ１０６）、試薬紙を撮影して第２の画像を取得し（ステップＳ１０８）、光源から付着物への仰角を算出し（ステップＳ１１０）、光源から影までの位置を算出し（ステップＳ１１２）、撮像素子の中心から影までの位置を算出し（ステップＳ１１４）、取得した第２の画像に基づいて、影を含む領域を除外してテストライン等の光学濃度を算出する（ステップＳ１１６）。
【解決手段】測定装置は、付着物の付着面に合焦して（ステップＳ１００）、付着面を撮影して第１の画像を取得し（ステップＳ１０２）、取得した第１の画像に基づいて付着物の位置を算出し（ステップＳ１０４）、試薬紙に合焦して（ステップＳ１０６）、試薬紙を撮影して第２の画像を取得し（ステップＳ１０８）、光源から付着物への仰角を算出し（ステップＳ１１０）、光源から影までの位置を算出し（ステップＳ１１２）、撮像素子の中心から影までの位置を算出し（ステップＳ１１４）、取得した第２の画像に基づいて、影を含む領域を除外してテストライン等の光学濃度を算出する（ステップＳ１１６）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、測定装置及び測定プログラムに係り、特に、クロマトグラフ法を利用したアッセイ用デバイスの測定を行うクロマトグラフ測定装置、特に、被検物質に対する特異的結合物質が固定されたテストラインと測定の終了時を判断するためのコントロールラインの呈色状態を測定して、被検物質を検査する測定装置及び測定プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、被検物質を含有する可能性のある試料（検体溶液）を担体に送液し、免疫学的測定等のアッセイ法を用い、この被検物質について簡便かつ迅速に検査するアッセイ用デバイスが数多く開発されており、体外診断薬や毒物等の検査のための各種デバイスが市販されている。このようなデバイスの一例として、特許文献１に示すようなイムノクロマトグラフ法を利用したものが挙げられる。イムノクロマトグラフ法を利用したデバイスを用いた場合には、その判定・測定に重厚な設備・機器を必要とせず操作が簡便であり、検体溶液を担体上に滴下した後、早いものであれば約５〜１０分間静置するだけで測定結果が得られる。そのため、免疫学的測定等のアッセイ法を用いた測定手法は、簡便かつ迅速な特異性の高い測定手法として、多くの場面、例えば病院における臨床検査あるいは研究室における検定試験等で広く使われている。
【０００３】
一方、医院や診療所あるいは在宅医療等の診療現場においては、臨床検査の専門家によらず簡便に検査を行うＰＯＣＴ（Point of Care Testing）診療向けの測定装置として、 イムノクロマトグラフ測定装置（イムノクロマトリーダー）が使用されている。このイムノクロマトグラフ測定装置は、装填されたデバイスの試薬の呈色状態を高感度に測定して、目視判定困難な低呈色状態においても高感度かつ信頼性の高い検査を行うことを可能とする。
【０００４】
この試薬の呈色状態を測定する際、測定装置内に入り込んだほこりやゴミ、試薬が収容された試薬ケース等についたほこりやゴミ等からの反射の影響により、誤判定する場合がある。特に、ほこりやゴミ等が試薬の反応ライン上にあり、呈色状態が閾値ぎりぎりの検体の場合、偽陽性、偽陰性となってしまう場合がある。
【０００５】
特許文献２には、クロマトグラフィー試験片上に設けた固定化試薬部に測定成分以外のゴミや標識物質の流れ残りなどが残留している場合でも、正確な呈色度を求めて測定成分の濃度を判定できる免疫クロマトグラフィー測定装置が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００８−１３９２９７号公報
【特許文献２】特開２００９−９８０８０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
試薬が収容された試薬ケースを測定装置にセットして試薬を撮影し、撮影画像に基づいて試薬の呈色状態を測定する場合、ほこりやゴミの付く場所としては、測定装置の試薬ケースがセットされるガラス面上や、試薬ケースの底面等が考えられる。このほこり等が付着する付着面は、試薬と撮像素子との間に存在するため、これらの付着面にほこり等が付着した場合は、その影が反応ライン上に投影される場合がある。この場合、ほこり等の影が反応ラインの濃度に影響を及ぼし、試薬の呈色状態を精度よく測定できない場合がある。
【０００８】
しかしながら、特許文献２に記載された技術は、上記のように試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合については想定されておらず、精度よく呈色状態を測定するのが困難である、という問題があった。
【０００９】
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであり、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よく呈色状態を測定することができる測定装置及び測定プログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するため、請求項１記載の発明の測定装置は、撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御する制御手段と、前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出する付着物位置算出手段と、前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出する影位置算出手段と、前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する光学濃度算出手段と、を備えたことを特徴とする。
【００１１】
この発明によれば、試料が試薬紙に供給された後に、付着面に焦点を合わせて撮像した第１の画像に基づいて付着物の位置を算出し、付着物の位置、光源の位置、付着面の位置、及び試薬紙の位置に基づいて、付着物の試薬紙上の影の位置を算出し、試薬紙に焦点を合わせて撮像した第２の画像に基づいてテストライン領域の光学濃度を算出すると共に、影の位置がテストライン領域内の場合に、テストライン領域のうち影を含む領域を除外してテストライン領域の光学濃度を算出する。このため、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よくテストライン領域の呈色状態を測定することができる。
【００１２】
なお、請求項２に記載したように、前記制御手段は、前記試料が前記試薬紙に供給された後、前記試薬の反応が終了するまでの間に、前記第１の画像を複数回取得し、前記影位置算出手段は、取得した複数の前記第１の画像に基づいて、前記影の位置を算出するようにしてもよい。
【００１３】
請求項３記載の発明の測定プログラムは、コンピュータを、請求項１又は請求項２記載の測定装置を構成する各手段として機能させるための測定プログラムである。
【００１４】
請求項４記載の発明の測定方法は、撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、を備えた測定装置により実行される測定方法であって、前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御し、前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出し、前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出し、前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よく呈色状態を測定することができる、という効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】クロマトグラフ測定装置を示す概略斜視図である。
【図２】図１のＩ−Ｉ線におけるクロマトグラフ測定装置の内部を示す概略図である。
【図３】（Ａ）はクロマトグラフ測定装置に装填されるアッセイ用デバイスを示す概略上面図、（Ｂ）はクロマトグラフ測定装置に装填されるアッセイ用デバイスを示す概略底面図、（Ｃ）は（Ａ）のII−II線におけるアッセイ用デバイスの断面を示す概略断面図である。
【図４】第１の測定部上にセットされたイムノクロマト用デバイスを示す図である。
【図５】試薬紙の平面図である。
【図６】制御部で実行される処理のフローチャートである。
【図７】影の位置の算出について説明するための図である。
【図８】コンピュータの構成図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態について図面を用いて説明するが、本発明はこれに限られるものではない。なお、視認しやすくするため、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜異ならせてある。
【００１８】
（クロマトグラフ測定装置）
【００１９】
まず、本実施形態に係るクロマトグラフ測定装置１１の構成について説明する。図１は本実施形態に係るクロマトグラフ測定装置１１の外観を示す概略斜視図であり、図２はイムノクロマト用デバイス１２０が装填され、図１におけるＩ−Ｉ線で切断した場合の内部を示す概略図である。また、図３（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれイムノクロマト用デバイス１２０の外観を示す概略上面図及び概略底面図、同図（Ｃ）は同図（Ａ）のII−II線における概略断面図である。
【００２０】
図１及び図２に示すように、クロマトグラフ測定装置１１は、筐体１１０と、筐体１１０の表面に配置された画面表示部１１１、画面表示部１１１に表示されたメニューの操作を行うためのメニュー操作部１１２及び電源スイッチ１１３と、イムノクロマト用デバイス１２０を装置内部に装填するためのデバイス装填部１１４と、さらに装置１の内部を構成する、イムノクロマト用デバイス１２０から情報を取得する第１の測定部１４０及び第２の測定部１５０と、第１の測定部１４０により取得された情報に基づいて被検物質の検査結果の有効性判定及び増幅要否判定を行う判定部１３２と、所定の動作処理を装置に行わせるための動作モードを選択可能とする動作モード選択部１３４と、処理プログラムや各種データを記憶する記憶部１３６と、イムノクロマト用デバイス１２０内の不溶性担体１２１に増幅溶液を展開する増幅溶液供給部１６０と、上記第１の測定部１４０、第２の測定部１５０、判定部１３２、動作モード選択部１３４及び増幅溶液供給部１６０を制御する制御部１３０とを備えている。
【００２１】
また、図３（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、イムノクロマト用デバイス１２０は、２つのテストライン（Ａ及びＢ）とコントロールラインＣとを有する不溶性担体１２１（試薬）と、不溶性担体１２１を収容するためのデバイス用筐体１２２と、不溶性担体１２１に試薬溶液を注入するための溶液注入口１２３と、デバイス用筐体１２２に収容された不溶性担体１２１の検査部位１２１ａを観察するための観察窓１２４とを備えており、デバイス用筐体１２２の表面には情報表示部１２５が設けられている。なお、観察窓１２４は、例えばガラスやプラスチック等の透明部材で構成されている。
【００２２】
以下、上記測定装置１１について説明する。
【００２３】
（判定部）
【００２４】
クロマトグラフ測定装置１１の判定部１３２は、第１の測定部１４０により測定された検査部位の呈色状態に基づいて、被検物質の検査結果の有効性判定及び増幅要否判定を行うものである。有効性判定により、検査の進行状態（溶液の展開状態、テストラインにおける被検物質及び標識物質の捕捉状態、及びコントロールラインにおける標識物質の捕捉状態等）が正常であり、その後得られる結果が信頼に足るか否か、または検査が正常に終了しその結果が信頼に足るか否かが判定される。これらの場合において、信頼に足る場合には有効判定が出され、信頼に足らない場合にはエラー判定が出される。一方、増幅要否判定により、検査部位の呈色状態を増幅させる必要があるか否かが判定され、必要がある場合には増幅必要判定が、必要がない場合には増幅不要判定が出される。
【００２５】
ここで、テストラインＡは、被検出物質Ａを検査するテストラインであり、テストラインＢは被検出物質Ａと異なる被検出物質Ｂを検査するテストラインであり、コントロールラインＣは検査の終了（標識物質が当該地点まで送液されていること）を示すコントロールラインである。そして、テストラインＡ及びテストラインＢはそれぞれ被検物質Ａ及びＢが検査されると呈色し、Ｃラインは被検物質の有無に関わらず、検査が終了すれば呈色する。
【００２６】
（有効性判定）
【００２７】
検査の進行段階において、判定部１３２よりエラー判定が出される場合としては、例えば、上記進行状態が正常でない恐れがあるため、何らかの検査結果が得られたとしてもその結果の信頼性が低いと判断された場合等が挙げられる。検査の進行状態が正常でない場合としては、例えばイムノクロマト用デバイス１２０を再使用しているために検査の初期段階にもかかわらずコントロールラインが呈色していた場合等が挙げられる。検査の終了段階において、判定部１３２より有効判定が出された場合には、判定部１３２は当該検査結果が陽性か陰性かの判定も行う。検査の終了段階において、判定部１３２よりエラー判定が出される場合としては、例えば、上記進行状態が正常でなかったため正常な検査結果を得ることができなかった場合が挙げられる。
【００２８】
（増幅要否判定）
【００２９】
判定部１３２より増幅必要判定が出される場合としては、例えば、もともと検体溶液中の被検物質の濃度が低いために、或いは検査ライン（テストライン及びコントロールライン）についての試薬等の性質上当該検査自体の反応完了時間が長いために、検査の進行状態が、そのまま検査を進行させたとしても相当の時間を要しなければ検査結果を得ることができない状態にあると予測された場合が挙げられる。ここで、上記進行状態のどのポイントで増幅要否判定を行うかについては、任意に設定することができる。相当の時間を要するか否かの予測は、経時的に計測した呈色状態の変化に基づいて予測することができ、例えば光学濃度の変化率に基づいて予測することができる。判定部１３２より増幅不要判定が出される場合としては、例えば、検体溶液中の被検物質の濃度が高いために或いは当該検査自体の反応完了時間が短いために、上記進行状態が、すでに検査結果を得ることができる状態にあると判断された場合、或いは相当の時間を要せずに検査結果を得ることができる状態にあると予測された場合が挙げられる。
【００３０】
有効性判定及び増幅要否判定を検査の進行上どのタイミングで行うかは特に制限されないが、最も基本的な検査工程としては、検体溶液注入から所定時間経過後、増幅要否判定、有効性判定の順に判定を行って最終的な検査結果を得るというものである。上記所定時間は、検査目的や検査結果取得の時間短縮等に応じて医師等の使用者によって適宜設定される。例えば、この所定時間を短く設定すれば、早い段階で増幅要否判定を行いかつ必要に応じて増幅工程を行えるため、検査結果を取得するまでの時間を短縮することができる。また、後述するように、検査初期段階における進行状態の異常を検知するために、例えば増幅要否判定の前に別途有効性判定を上記基本的な検査工程に追加することもできる。
【００３１】
（動作モード選択部）
【００３２】
動作モード選択部１３４は、予め設定された所定の動作処理を装置に行わせるための動作モードを格納している。そして、格納されている動作モードは制御部１３０を介して画面表示部１１１にメニューとして表示され、測定装置１１の使用者はメニュー操作部１１２を操作してこのメニューの中から動作モードを選択することができる。これにより使用者は検査目的に適合した測定を実施することができる。
【００３３】
動作モード選択部１３４は、例えば動作モードとして、検体溶液を不溶性担体に点着してから予め設定された所定時間の経過時に、テストライン及びコントロールラインの光学濃度及び色度を測定手段に測定させ、すべてのラインについての光学濃度及び色度が所定値に達した場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅不要と判定させて、増幅を行わず被検物質の検査結果について有効性判定を行わせ、それ以外の場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅必要と判定させて、増幅手段に呈色状態を増幅させ、増幅後、判定手段に被検物質の検査結果について有効性判定を行わせる動作モード（第１の動作モード）を格納している。このような動作モードによれば、１つのイムノクロマト用デバイス１２０に複数のテストラインがある場合に、すべてのテストラインについて信頼性の高い検査を行うことができる。
【００３４】
また、イムノクロマト用デバイス１２０にテストラインが２つ以上ある場合に、測定装置１１が、この２つ以上のテストラインの一部を検査対象として指定可能とする指定手段を備えている場合には、動作モード選択部１３４は、例えば他の動作モードとして、検体溶液を不溶性担体に点着してから予め設定された所定時間の経過時に、テストライン及びコントロールラインの光学濃度及び色度を測定手段に測定させ、指定手段に指定されたテストライン及びコントロールラインについての光学濃度及び色度が所定値に達した場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅不要と判定させて、増幅を行わず被検物質の検査結果について判定を行わせ、それ以外の場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅必要と判定させて、増幅手段に呈色状態を増幅させ、増幅後、判定手段に被検物質の検査結果について有効性判定を行わせる動作モード（第２の動作モード）を格納している。このような動作モードによれば、無駄な検査時間を低減し、指定したテストラインについて効率よく検査を行うことができる。
【００３５】
（測定部）
【００３６】
第１の測定部１４０は、イムノクロマト用デバイス１２０の観察窓１２４を通して検査部位１２１ａの呈色状態を測定し、検査部位１２１ａにおける光学的情報を取得するものである。第１の測定部１４０は、図２に示すように、イメージセンサ１４２、光源１４４、及び光学レンズ（図２では図示省略）を含んで構成され、イムノクロマト用デバイス１２０が測定装置１１に装填された際に、これらがイムノクロマト用デバイス１２０の下方に配して観察窓１２４に対向するように構成されている。そして、第１の測定部１４０によって取得された検査部位１２１ａにおける光学的情報、すなわち撮影画像に基づいて、検査部位１２１ａの呈色状態として光学濃度及び色度が算出される。なお、詳細は後述するが、本実施形態では、イメージセンサ１４２により撮影された撮影画像から、ほこり等の影響を除去した除去画像を求め、求めた除去画像に基づいて、検査部位１２１ａの呈色状態として光学濃度及び色度が算出される。
【００３７】
イメージセンサ１４２は、例えば複数のフォトダイオードがライン状に配列された構成、或いはエリアセンサといった光学センサを備える構成とされており、受光した光の輝度に応じた出力を生じる。イメージセンサ１４２の受光範囲は、イムノクロマト用デバイス１２０の長手方向に延びた帯状とされている。光源１４４は、例えばＬＥＤが内蔵されたモジュールであり、白色光を発するように構成されている。なお、光源１４４は、増幅前後の色度の区別が付けば例えば単色光を発するものでもよい。また光源１４４は、モジュールを複数備える場合には、異なる波長の単色光を発する複数のモジュールを用いることもできる。光源１４４から照射される光は、イムノクロマト用デバイス１２０の長手方向を照明可能とされている。
【００３８】
第２の測定部１５０は、イムノクロマト用デバイス１２０の情報表示部１２５に照明光を照射し、情報表示部１２５に表示された情報を取得するものである。情報表示部１２５は、手書きまたはシール添付等により検査に関する情報が表示されている。検査に関する情報とは例えば、被検物質を採取した患者に関する情報（氏名、年齢及び性別等）及び検査に使用される試料・試薬に関する情報（検査対象となる被検物質、洗浄液及び増幅溶液等の名称等）等が挙げられる。情報を取得する方法は、特に制限されず、情報表示部１２５をそのまま画像化したりバーコード化された情報から読み取ったりすることができる。第２の測定部１５０は、図２に示すようにイメージセンサ１５２と光源１５４とを備え、イムノクロマト用デバイス１２０が測定装置１１に装填された際に、これらがイムノクロマト用デバイス１２０の上方に配して情報表示部１２５に対向するように構成されている。そして、第２の測定部１５０によって取得された検査に関する情報と検査結果とが紐付けされて管理される。イメージセンサ１５２及び光源１５４については、上記イメージセンサ１４２及び光源１４４とそれぞれ同様である。
【００３９】
（光学濃度）
【００４０】
光学濃度は、アッセイ用デバイスの検査部位に入射された入射光の強度をＩ、検査部位からの反射光の強度をＩｒとしたとき、下記（１）式により定める。
【００４１】
光学濃度＝−ｌｏｇ１０（Ｉｒ／Ｉ） ・・・（１）
【００４２】
（色度）
【００４３】
また、色度は、色相と彩度を数量的に表示したものであり、イメージセンサで読み取ったＲＧＢ輝度信号から算出する。色度の表色系としては、一般的なＣＩＥ表色系を用いることができる。
【００４４】
（増幅溶液供給部）
【００４５】
増幅溶液供給部１６０は、銀イオン含有化合物を含む増幅溶液を貯蔵する増幅溶液貯蔵ポット１６２と、増幅溶液貯蔵ポット１６２から増幅溶液を注入する増幅溶液注入ノズル１６２ａと、上記増幅溶液に含まれる銀イオンを還元する還元剤を貯蔵する還元剤貯蔵ポット１６４と、還元剤貯蔵ポット１６４から還元剤を注入する還元剤注入ノズル１６４ａとを備え、増幅溶液貯蔵ポット１６２及び還元剤貯蔵ポット１６４のそれぞれに貯蔵された液体を、それぞれの注入ノズル１６２ａ・１６４ａを通して装填されたイムノクロマト用デバイス１２０の溶液注入口１２３に注入することができるように構成されている。液体の注入は、例えば増幅溶液供給部１６０を駆動装置により駆動させて順に或いは交互にそれぞれの注入ノズルから別個に注入するようにしてもよく、また２つのノズルを先端部で結合させてそれぞれの貯蔵ポットから供給された液体を同時に注入するようにしてもよい。
【００４６】
なお、増幅溶液供給部１６０は上記構成に限定されるものではない。例えば、それぞれの貯蔵ポットに貯蔵する溶液の組み合わせを増幅溶液及び洗浄液等の組み合わせにしてもよく、また増幅溶液を貯蔵するポット単独で構成してもよい。さらに、溶液を貯蔵する貯蔵ポットは、必ずしも測定装置１１の内部に備える必要はない。例えば、貯蔵ポットを測定装置（筐体１１０）の外部に設け、注入ノズルのみを操作して溶液注入口１２３に溶液を注入するように構成してもよい。
【００４７】
（クロマトグラフ測定方法）
【００４８】
次に本発明のクロマトグラフ測定方法について説明する。
【００４９】
本実施形態に係る測定方法は、被検物質に対する特異的結合物質が固定されたテストラインと、測定の終了時を判断するためのコントロールラインと、固定化された標識物質とを有する不溶性担体１２１を備えるイムノクロマト用デバイス１２０を用意し、このイムノクロマト用デバイス１２０の溶液注入口１２３に検査対象である被検物質を含有しうる検体溶液を注入し、不溶性担体１２１に検体溶液を点着してから所定時間経過後、検査部位１２１ａにおける呈色状態として光学濃度及び色度を測定し、この光学濃度及び色度に基づいて増幅要否判定（第１の判定）を行い、テストライン（Ａ及びＢ）及びコントロールラインＣの少なくとも１つの光学濃度及び色度が所定値に達しなかったため、増幅要否判定の結果、増幅必要判定が出された場合には、不溶性担体１２１に還元剤（ここで、還元剤は洗浄液としても機能する。）を展開することによりテストライン（Ａ及びＢ）及びコントロールラインＣを洗浄し（洗浄処理）、不溶性担体１２１に増幅溶液を展開することにより、銀イオンの還元により形成された銀微粒子を標識物質に沈着させて呈色状態を増幅させ（増幅処理）、増幅された呈色状態の光学濃度及び色度を測定して、この光学濃度及び色度に基づいて有効性判定（第２の判定）を行い、それ以外の場合には、上記増幅工程（洗浄処理、増幅処理を含む）を行わず、増幅要否判定（第１の判定）時の光学濃度及び色度に基づいて有効性判定（第２の判定）を行うものである。
【００５０】
そして、本発明に係るクロマトグラフ測定方法において、上記所定時間は５分〜２０分であることが好ましい。また、第２の判定を第１の判定後１分〜２０分以内に行うことが好ましい。つまり、このように時間設定をすることにより、早い段階で増幅の要否が判断できてより迅速に検査結果を得ることができる。
【００５１】
検体溶液の展開方向と洗浄液の展開方向との成す角は４５度から１７０度であることが好ましく、不溶性担体は多孔性担体であることが好ましい。
【００５２】
（検体溶液）
【００５３】
本発明のアッセイ用デバイスを用いて分析することのできる検体溶液としては、被検物質（天然物、毒素、ホルモンまたは農薬等の生理活性物質あるいは環境汚染物質等）を含む可能性のあるものである限り、特に限定されるものではなく、例えば、生物学的試料、特には動物（特にヒト）の体液（例えば、血液、血清、血漿、髄液、涙液、汗、尿、膿、鼻水、又は喀痰）若しくは排泄物（例えば、糞便）、臓器、組織、粘膜や皮膚、それらを含むと考えられる搾過検体（スワブ）、うがい液、又は動植物それ自体若しくはそれらの乾燥体を後述の希釈液で希釈したもの等を挙げることができる。
【００５４】
上記検体溶液はそのままで、あるいは、検体溶液を適当な抽出用溶媒を用いて抽出して得られる抽出液の形で、さらには、この抽出液を適当な希釈剤で希釈して得られる希釈液の形、若しくは抽出液を適当な方法で濃縮した形で用いることができる。
【００５５】
（標識物質）
【００５６】
本発明で使用することができる標識物質としては、一般的なイムノクロマトグラフ法で用いられるような金属微粒子（又は金属コロイド）、着色ラテックス粒子、酵素など、有色で視認できる、または、反応により検査できるようになる標識物であれば特に限定されることなく用いることができるが、標識物質を触媒とした金属イオンの還元反応によって、標識物質への金属の沈着でシグナルを増幅する場合には、その触媒活性の観点から金属微粒子が好ましい。
【００５７】
金属微粒子の材料としては、金属単体、金属硫化物、その他金属合金、または金属を含むポリマ−粒子標識を用いることができる。粒子（又はコロイド）の平均粒径は、１ｎｍ〜１０μｍの範囲が好ましい。ここで、平均粒径とは、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）により実測された複数の粒子の径（粒子の最長径）の平均値である。より詳細には、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、鉄コロイド、水酸化アルミニウムコロイド、及びこれらの複合コロイドなどが挙げられ、好ましくは、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、及びこれらの複合コロイドであることが望ましい。特に、金コロイドと銀コロイドが適当な粒径において、金コロイドは赤色、銀コロイドは黄色を示し視認度が高いという観点からより好ましい。金コロイドを用いることにより、銀イオン含有化合物を用いた増幅工程を行うことにより増幅の前後で標識の色度が変化する（金コロイドは赤く呈色し、増幅後は還元された銀イオンが金コロイドに沈着し黒くなる）ため、後述するようにこの変化を検査のエラー判定に用いることができるようになる。金属コロイドの平均粒径としては、約１〜５００ｎｍが好ましく、さらには１〜１００ｎｍがより好ましい。
【００５８】
（特異的結合物質）
【００５９】
特異的結合物質としては、被検物質に対して親和性を持つものならば特に限定されることはなく例えば、被検物質が抗原である場合には当該抗原に対する抗体、被検物質がたんぱく質、金属イオンまたは低分子量有機化合物である場合にはこれらに対するアプタマー、被検物質がＤＮＡやＲＮＡなど核酸である場合にはこれらに対して相補的な配列を持つＤＮＡやＲＮＡ等の核酸分子、被検物質がアビジンである場合にはビオチン、被検物質が特定のペプチドの場合にはこれに特異的に結合する錯体、等を挙げることができる。また、上記した例では特異的結合物質と被検物質との関係を入れ替えることもでき、例えば被検物質が抗体である場合には当該抗体に対する抗原を、特異的結合物質として用いることもできる。さらに、上記のような被検物質に対して親和性を持つ物質を一部に含有する化合物等を特異的結合物質として用いることもできる。
【００６０】
上記抗体としては具体的に、その被検物質によって免疫された動物の血清から調製する抗血清、抗血清から精製された免疫グロブリン画分、その被検物質によって免疫された動物の脾臓細胞を用いる細胞融合によって得られるモノクローナル抗体、あるいは、それらの断片［例えば、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦｖ］を用いることができる。これらの抗体の調製は、常法により行なうことができる。
【００６１】
（標識物質のシグナル増幅）
【００６２】
標識物質として金属コロイド標識、金属硫化物標識、その他金属合金標識、または金属を含むポリマ−粒子標識を用いるアッセイの場合には、金属系標識の信号を増幅させることができる。具体的には、被検物質と標識物質の複合体の形成後に、無機銀塩、有機銀塩などの銀を含む化合物から供給される銀イオン及び還元剤を接触させ、還元剤によって銀イオンを還元して銀粒子を生成させると、その銀粒子が金属系標識を核として金属系標識上に沈着するので、金属系標識が増幅され、被検物質の分析を高感度に実施することができる。
【００６３】
（不溶性担体）
【００６４】
不溶性担体１２１は、検体溶液を滴下する部分である試料添加パッド、被検物質と結合可能な標識物質が固定された標識物質保持パッド、被検物質に対する特異的結合物質が固定された検査部位を有するクロマトグラフ担体、及び送液された検体溶液等を吸収する吸収パッドを有している。検査部位には、それぞれ異なる特異的結合物質が固定された２つのテストラインを設けているが、テストラインの数はこれに限定されず、１つでもよいし３つ以上でもよい。テストラインを複数にすることによって検体溶液に複数の被検物質が含まれる場合に、効率よく一度に複数の被検物質を検査することが可能となる。不溶性担体１２１の材料は、多孔性であることが好ましく、例えば、ニトロセルロース膜、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましく挙げられる。
【００６５】
クロマトグラフ担体には、被検物質に対する特異的結合物質を固定化させて検査ラインや所望によりコントロール部位が作製される。特異的結合物質は、特異的結合物質をクロマトグラフ担体の一部に物理的または化学的結合により直接固定化させてもよいし、特異的結合物質をラテックス粒子などの微粒子に物理的または化学的に結合させ、この微粒子をクロマトグラフ担体の一部にトラップさせて固定化させてもよい。
【００６６】
標識物質保持パッドは、前述の標識物質を含む懸濁液を調製し、その懸濁液を適当なパッド（例えば、グラスファイバーパッド）に塗布した後、それを乾燥することにより調製したものである。これにより、不溶性担体に検体溶液が注入された場合、標識物質が被検物質と共に展開されながら当該被検物質に結合して、検査部位まで流される。
【００６７】
試料添加パッドは試料（検体溶液等）を点着する部分であって、試料中の不溶物粒子等を濾過する機能をも兼ねる部分である。なお、分析の際、検体溶液中の被検物質が試料添加部の材質に非特異的に吸着し、分析の精度を低下させることを防止するため、試料添加パッドは予め非特異的吸着防止処理されて用いられることもある。
【００６８】
吸収パッドは、添加された試料がクロマト移動により物理的に吸収されると共に、クロマトグラフ担体の検査ラインに不溶化されない未反応標識物質等を吸収除去する部位である。添加された試料のクロマト先端部が吸収部に届いてからのクロマトの速度は、吸収材の材質、大きさなどにより異なるので、その選定により被検物質の測定に合った速度を設定することができる。
【００６９】
（増幅溶液）
【００７０】
増幅溶液は、含まれる薬剤が標識物質や被検物質の触媒作用によって反応することにより、呈色或いは発光する化合物などを生じ、シグナルの増幅を起こすことができる溶液である。例えば、金属標識上で、物理現像により金属銀の析出を起こす銀イオン溶液である。詳細には、写真化学の分野での一般書物（例えば、「改訂写真工学の基礎-銀塩写真編-」（日本写真学会編、コロナ社）、「写真の化学」（笹井明、写真工業出版社）、「最新処方ハンドブック」（菊池真一他、アミコ出版社））に記載されているような、いわゆる現像液を用いることができる。例えば、増幅溶液として銀イオン含有化合物を含む物理現像液を用いれば、銀イオンの還元剤により液中の銀イオンを、現像の核となるような金属コロイド等を中心に還元させることができる。
【００７１】
また別の例としては、酵素反応を用いた例がある。例えば、ペルオキシダーゼ標識と過酸化水素の作用により色素となる、フェニレンジアミン化合物とナフトール化合物の溶液などが挙げられる。さらに、非特許文献「臨床検査 Ｖｏｌ．４１ ｎｏ．９ ｐ．１０２０ Ｈ２Ｏ２−ＰＯＤ系を利用した染色」に記載されているような、西洋わさびペルオキシダーゼ検出の発色基質などでもよい。また、特開２００９−１５６６１２に記載の発色基質は特に好ましく用いることができる。なお、酵素の代わりに白金微粒子などの金属触媒を用いる系でもよい。
【００７２】
別の酵素を用いた例としては、アルカリホスファターゼを標識とし、５−ブロモ−４クロロ−３−インドリル−リン酸二ナトリウム塩（ＢＣＩＰ）を基質として発色させるような系もある。以上、呈色する反応を代表に挙げたが、一般的にエンザイムイムノアッセイで用いられるような、酵素と基質の組み合わせであればなんでも良く、化学発光する基質であっても、蛍光を発する基質であってもよい。
【００７３】
（銀イオン含有化合物）
【００７４】
銀イオン含有化合物としては、有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物であり、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀等が挙げられる。無機銀塩、もしくは銀錯体は、銀として一般に０．００１モル／ｍ２〜０．２モル／ｍ２、好ましくは０．０１モル／ｍ２〜０．０５モル／ｍ２含有されることが好ましい。
【００７５】
（銀イオンの還元剤）
【００７６】
銀イオンの還元剤は、銀イオンを銀に還元することができれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。
【００７７】
無機還元剤としては、Ｆｅ２+、Ｖ２+、Ｔｉ３+、などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２+を還元剤として用いる系では、クエン酸やＥＤＴＡを用いて酸化物であるＦｅ３+の錯体を形成し、無害化することができる。本系ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、より好ましくはＦｅ２+の金属塩が好ましい。
【００７８】
なお、本実施形態に係るアッセイ用デバイスを用いて分析することのできる増幅要否判定等の具体例、光学濃度及び色度に基づいた増幅前後の詳細な判定等については詳細な説明は省略するが、例えば本出願人が出願した特願２００９−２２６０１０号に記載されたものや方法を用いることができる。
【００７９】
（ほこり等の影の位置の算出）
【００８０】
次に、イメージセンサ１４２で撮影された撮影画像からほこり等の影の位置を算出し、算出した影の位置に基づいてテストラインの光学濃度を算出する処理について説明する。
【００８１】
図４には、第１の測定部１４０上にイムノクロマト用デバイス１２０がセットされた状態を示した。図１〜３では図示は省略したが、第１の測定部１４０のイメージセンサ１４２及び光学レンズ１４３の上方はガラス面１４５で形成されており、このガラス面１４５上にイムノクロマト用デバイス１２０がセットされる。
【００８２】
なお、光学レンズ１４３は、制御部１３０の制御により図４において矢印Ｙ方向に移動可能であり、焦点を試薬紙Ｓ（不溶性担体１２１）、観察窓１２４、及びガラス面１４５に合わせることが可能なように構成されている。
【００８３】
このような構成の場合、第１の測定部１４０のガラス面１４５やイムノクロマト用デバイス１２０のガラスやプラスチック等の透明部材で構成された観察窓１２４に微小のほこりやゴミ等の付着物Ｇが付着する場合がある。この場合、撮影時に光源１４４から光が照射されると、図４に示すように、付着物Ｇの影Ｋが試薬紙Ｓ上に投影される。
【００８４】
そして、付着物Ｇの影Ｋが試薬紙Ｓ上に投影された状態で試薬紙Ｓを撮影すると、図５に示すように、影ＫがテストラインＡ、ＢやコントロールラインＣ上やその近傍に投影される場合がある。この場合、影Ｋの影響によって、テストラインＡ、Ｂ、コントロールラインＣの呈色状態を判定する際に、誤判定する虞がある。
【００８５】
このため、本実施形態では、付着物Ｇによる影Ｋの位置を算出し、この影ＫがテストラインＡ、ＢやコントロールラインＣ上に位置していた場合には、テストラインＡ、ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出する際に、影Ｋを含む領域を除外して算出する。
【００８６】
次に、制御部１３０で実行される処理について、図６に示すフローチャートを参照して説明する。
【００８７】
なお、図６に示す処理は、イムノクロマト用デバイス１２０がデバイス装填部１１４にセットされ、メニュー操作部１１２が操作されて動作モードが選択されて測定が指示され、検体溶液（試料）が不溶性担体１２１に点着されてから予め定めた時間の経過後、すなわちテストラインやコントロールラインの呈色状態を適切に測定できる状態になった場合に実行される。
【００８８】
まず、ステップＳ１００では、光学レンズ１４３を移動させ、図７に示すように付着物Ｇが付着した付着面Ｆに焦点を合わせる。なお、図７では、イムノクロマト用デバイス１２０の形状を簡略化して記載し、観察窓１２４やガラス面１４５をゴミ等が付着する付着面Ｆとして表している。
【００８９】
ステップＳ１０２では、付着面Ｆをイメージセンサ１４２により撮影し、撮影画像を第１の画像として取得する。
【００９０】
ステップＳ１０４では、第１の画像に基づいて、図７に示すように、イメージセンサ１４２の中心（光学レンズ１４３の光軸）から付着物Ｇまでの位置、すなわち距離Ｌ５を算出する。このイメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離Ｌ５は、以下のようにして得られる。まず、例えば第１の画像に対して二値化処理等の公知の画像処理施して付着物Ｇを抽出し、抽出した付着物Ｇの第１の画像の中心（イメージセンサ１４２の中心）からの画素数を求める。そして、求めた画素数を、画素数を距離に変換する予め定めた変換式により距離に変換する。これにより、イメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離Ｌ５を求めることができる。
【００９１】
ステップＳ１０６では、試薬紙Ｓに焦点が合うように光学レンズ１４３を移動させる。
【００９２】
ステップＳ１０８では、試薬紙Ｓをイメージセンサ１４２により撮影し、撮影画像を第２の画像として取得する。
【００９３】
ステップＳ１１０では、光源１４４から付着物Ｇへの仰角θを算出する。仰角θは、図７に示すように、光源１４４とイメージセンサ１４２とを結ぶ線と、光源１４４と付着物Ｇとを結ぶ線とが成す角度であり、次式により算出することができる。
【００９４】
θ＝ｔａｎ−１（Ｌ３／（Ｌ１−Ｌ５）） ・・・（１）
【００９５】
ここで、図７に示すように、Ｌ１は、イメージセンサ１４２の中心から光源１４４までの距離であり、Ｌ３は、イメージセンサ１４２から付着面Ｆまでの距離であり、Ｌ５は、ステップＳ１０４で求めたイメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離である。
【００９６】
ステップＳ１１２では、光源１４４から影Ｋまでの距離Ｌ２を求める。この距離Ｌ２は、次式により算出することができる。
【００９７】
Ｌ２＝Ｌ４×ｔａｎθ ・・・（２）
【００９８】
ここで、Ｌ４は、図７に示すように、イメージセンサ１４２から試薬紙Ｓまでの距離である。
【００９９】
ステップＳ１１４では、イメージセンサ１４２の中心から影Ｋまでの距離Ｌ６を算出する。この距離Ｌ６は、次式により算出できる。
【０１００】
Ｌ６＝Ｌ１−Ｌ２ ・・・（３）
【０１０１】
ステップＳ１１６では、試薬紙Ｓを撮影した第２の画像に基づいて、テストラインＡ，Ｂ、コントロールラインＣの光学濃度を算出する。このとき、図５に示すように、影ＫがテストラインＡ，Ｂ、コントロールラインＣ上やその近傍に存在するか否かを判断する。具体的には、ステップＳ１１４で算出した影Ｋの位置、すなわち画像の中心から距離Ｌ６に相当する画素数の位置が、テストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上又はその近傍にあるか否かを第２の画像に基づいて判断する。
【０１０２】
そして、影Ｋの位置がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上又はその近傍に存在する場合には、影Ｋが存在するラインのうち、影Ｋを含む領域を除外してそのラインの光学濃度を算出する。
【０１０３】
例えば図５に示すように、テストラインＢ上及びその近傍に影Ｋが存在する場合には、テストラインＢが形成された領域のうち、全ての影Ｋを含む領域Ｂａを、光学濃度を算出する領域から除外する。
【０１０４】
例えばテストラインＡについては影Ｋが存在しないため、テストラインＡが形成された全領域の濃度の例えば平均値をテストラインＡの光学濃度とする。
【０１０５】
テストラインＢについては、テストラインＢが形成された領域のうち影Ｋを全て含む領域Ｂａを除外して、その他の領域の光学濃度の例えば平均値をテストラインＢの光学濃度とする。
【０１０６】
コントロールラインＣについては、コントロールラインＣが形成された領域のうち影Ｋを含む領域Ｃａを除外して、その他の領域の光学濃度の例えば平均値をコントロールラインＣの光学濃度とする。そして、算出した光学濃度に基づいて、各ラインの呈色状態を判定する。
【０１０７】
このように、本実施形態では、付着面Ｆに焦点を合わせて撮像した第１の画像に基づいて付着物Ｇの位置を算出し、付着物Ｇの位置、光源１４４の位置、付着面Ｆの位置、及び試薬紙Ｓの位置に基づいて、付着物Ｇの試薬紙Ｓ上の影Ｋの位置を算出し、試薬紙Ｓに焦点を合わせて撮像した第２の画像に基づいてテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出すると共に、影Ｋの位置がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの領域内（その近傍を含む）の場合に、影Ｋを含む領域を除外してテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出する。このため、精度よくテストラインやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができる。
【０１０８】
なお、付着物Ｇが付着する付着面Ｆとしては、本実施形態ではガラス面１４５及び観察窓１２４の２つが考えられるため、ガラス面１４５及び観察窓１２４の両者について図６に示す処理を実行することが好ましい。これにより、何れの面にほこり等が付着していても、精度よくテストラインやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができる。
【０１０９】
また、溶液注入口１２３に投入された検体溶液（試料）は、図３において左側から右側へ向かって毛細管現象により試薬紙Ｓ上を流れていく。このため、流れてくる試料の先端がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上に存在するタイミングで第２の画像を撮影すると、これを影と誤判定してしまい、精度よくテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができなくなる虞がある。そこで、試料が試薬紙Ｓに供給された後、テストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの反応が終了するまでの間に、第１の画像を複数回取得し、取得した複数の第１の画像の全てにおいて、同じ位置に存在する同一濃度の領域を影として特定し、その位置を算出するようにしてもよい。これにより、流れてくる試料の先端を影と誤認識してしまうのを防ぐことができる。
【０１１０】
また、制御部１３０は、図８に示すようなコンピュータ１３０で構成できる。コンピュータ１３０は、ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）１３０Ａ、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）１３０Ｂ、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）１３０Ｃ、不揮発性メモリ１３０Ｄ、及び入出力インターフェース（Ｉ／Ｏ）１３０Ｅがバス１３０Ｆを介して各々接続された構成となっている。この場合、図６に示した処理のプログラムを記憶部１３６又は不揮発性メモリ１３０Ｄに書き込んでおき、これをＣＰＵ１３０Ａが読み込んで実行することにより、コンピュータ１３０が制御部１３０として機能する。
【０１１１】
上記実施形態においては、アッセイ法としてイムノクロマトグラフ法について説明したが、本発明のアッセイ法はこれに限定されない。いわゆる免疫反応を用いない系でもよく、例えば、抗体を用いずにＤＮＡやＲＮＡなどの核酸で被検物質を捕捉する系でもよいし、さらには被検物質に対する親和性を持つ別の小分子やペプチド、たんぱく質、錯体形成物質等、によって被検物質を捕捉する系であってもよい。
【符号の説明】
【０１１２】
１１ クロマトグラフ測定装置
１１４ デバイス装填部
１２０ イムノクロマト用デバイス
１２１ 不溶性担体
１２２ デバイス用筐体
１２４ 観察窓
１３０ 制御部
１３２ 判定部
１３４ 動作モード選択部
１３６ 記憶部
１４０ 測定部
１４２ イメージセンサ
１４３ 光学レンズ
１４４ 光源
１４５ ガラス面
【技術分野】
【０００１】
本発明は、測定装置及び測定プログラムに係り、特に、クロマトグラフ法を利用したアッセイ用デバイスの測定を行うクロマトグラフ測定装置、特に、被検物質に対する特異的結合物質が固定されたテストラインと測定の終了時を判断するためのコントロールラインの呈色状態を測定して、被検物質を検査する測定装置及び測定プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、被検物質を含有する可能性のある試料（検体溶液）を担体に送液し、免疫学的測定等のアッセイ法を用い、この被検物質について簡便かつ迅速に検査するアッセイ用デバイスが数多く開発されており、体外診断薬や毒物等の検査のための各種デバイスが市販されている。このようなデバイスの一例として、特許文献１に示すようなイムノクロマトグラフ法を利用したものが挙げられる。イムノクロマトグラフ法を利用したデバイスを用いた場合には、その判定・測定に重厚な設備・機器を必要とせず操作が簡便であり、検体溶液を担体上に滴下した後、早いものであれば約５〜１０分間静置するだけで測定結果が得られる。そのため、免疫学的測定等のアッセイ法を用いた測定手法は、簡便かつ迅速な特異性の高い測定手法として、多くの場面、例えば病院における臨床検査あるいは研究室における検定試験等で広く使われている。
【０００３】
一方、医院や診療所あるいは在宅医療等の診療現場においては、臨床検査の専門家によらず簡便に検査を行うＰＯＣＴ（Point of Care Testing）診療向けの測定装置として、 イムノクロマトグラフ測定装置（イムノクロマトリーダー）が使用されている。このイムノクロマトグラフ測定装置は、装填されたデバイスの試薬の呈色状態を高感度に測定して、目視判定困難な低呈色状態においても高感度かつ信頼性の高い検査を行うことを可能とする。
【０００４】
この試薬の呈色状態を測定する際、測定装置内に入り込んだほこりやゴミ、試薬が収容された試薬ケース等についたほこりやゴミ等からの反射の影響により、誤判定する場合がある。特に、ほこりやゴミ等が試薬の反応ライン上にあり、呈色状態が閾値ぎりぎりの検体の場合、偽陽性、偽陰性となってしまう場合がある。
【０００５】
特許文献２には、クロマトグラフィー試験片上に設けた固定化試薬部に測定成分以外のゴミや標識物質の流れ残りなどが残留している場合でも、正確な呈色度を求めて測定成分の濃度を判定できる免疫クロマトグラフィー測定装置が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００８−１３９２９７号公報
【特許文献２】特開２００９−９８０８０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
試薬が収容された試薬ケースを測定装置にセットして試薬を撮影し、撮影画像に基づいて試薬の呈色状態を測定する場合、ほこりやゴミの付く場所としては、測定装置の試薬ケースがセットされるガラス面上や、試薬ケースの底面等が考えられる。このほこり等が付着する付着面は、試薬と撮像素子との間に存在するため、これらの付着面にほこり等が付着した場合は、その影が反応ライン上に投影される場合がある。この場合、ほこり等の影が反応ラインの濃度に影響を及ぼし、試薬の呈色状態を精度よく測定できない場合がある。
【０００８】
しかしながら、特許文献２に記載された技術は、上記のように試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合については想定されておらず、精度よく呈色状態を測定するのが困難である、という問題があった。
【０００９】
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであり、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よく呈色状態を測定することができる測定装置及び測定プログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するため、請求項１記載の発明の測定装置は、撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御する制御手段と、前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出する付着物位置算出手段と、前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出する影位置算出手段と、前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する光学濃度算出手段と、を備えたことを特徴とする。
【００１１】
この発明によれば、試料が試薬紙に供給された後に、付着面に焦点を合わせて撮像した第１の画像に基づいて付着物の位置を算出し、付着物の位置、光源の位置、付着面の位置、及び試薬紙の位置に基づいて、付着物の試薬紙上の影の位置を算出し、試薬紙に焦点を合わせて撮像した第２の画像に基づいてテストライン領域の光学濃度を算出すると共に、影の位置がテストライン領域内の場合に、テストライン領域のうち影を含む領域を除外してテストライン領域の光学濃度を算出する。このため、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よくテストライン領域の呈色状態を測定することができる。
【００１２】
なお、請求項２に記載したように、前記制御手段は、前記試料が前記試薬紙に供給された後、前記試薬の反応が終了するまでの間に、前記第１の画像を複数回取得し、前記影位置算出手段は、取得した複数の前記第１の画像に基づいて、前記影の位置を算出するようにしてもよい。
【００１３】
請求項３記載の発明の測定プログラムは、コンピュータを、請求項１又は請求項２記載の測定装置を構成する各手段として機能させるための測定プログラムである。
【００１４】
請求項４記載の発明の測定方法は、撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、を備えた測定装置により実行される測定方法であって、前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御し、前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出し、前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出し、前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、試薬と撮像素子との間にほこり等が存在する場合においても、精度よく呈色状態を測定することができる、という効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】クロマトグラフ測定装置を示す概略斜視図である。
【図２】図１のＩ−Ｉ線におけるクロマトグラフ測定装置の内部を示す概略図である。
【図３】（Ａ）はクロマトグラフ測定装置に装填されるアッセイ用デバイスを示す概略上面図、（Ｂ）はクロマトグラフ測定装置に装填されるアッセイ用デバイスを示す概略底面図、（Ｃ）は（Ａ）のII−II線におけるアッセイ用デバイスの断面を示す概略断面図である。
【図４】第１の測定部上にセットされたイムノクロマト用デバイスを示す図である。
【図５】試薬紙の平面図である。
【図６】制御部で実行される処理のフローチャートである。
【図７】影の位置の算出について説明するための図である。
【図８】コンピュータの構成図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態について図面を用いて説明するが、本発明はこれに限られるものではない。なお、視認しやすくするため、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜異ならせてある。
【００１８】
（クロマトグラフ測定装置）
【００１９】
まず、本実施形態に係るクロマトグラフ測定装置１１の構成について説明する。図１は本実施形態に係るクロマトグラフ測定装置１１の外観を示す概略斜視図であり、図２はイムノクロマト用デバイス１２０が装填され、図１におけるＩ−Ｉ線で切断した場合の内部を示す概略図である。また、図３（Ａ）、（Ｂ）はそれぞれイムノクロマト用デバイス１２０の外観を示す概略上面図及び概略底面図、同図（Ｃ）は同図（Ａ）のII−II線における概略断面図である。
【００２０】
図１及び図２に示すように、クロマトグラフ測定装置１１は、筐体１１０と、筐体１１０の表面に配置された画面表示部１１１、画面表示部１１１に表示されたメニューの操作を行うためのメニュー操作部１１２及び電源スイッチ１１３と、イムノクロマト用デバイス１２０を装置内部に装填するためのデバイス装填部１１４と、さらに装置１の内部を構成する、イムノクロマト用デバイス１２０から情報を取得する第１の測定部１４０及び第２の測定部１５０と、第１の測定部１４０により取得された情報に基づいて被検物質の検査結果の有効性判定及び増幅要否判定を行う判定部１３２と、所定の動作処理を装置に行わせるための動作モードを選択可能とする動作モード選択部１３４と、処理プログラムや各種データを記憶する記憶部１３６と、イムノクロマト用デバイス１２０内の不溶性担体１２１に増幅溶液を展開する増幅溶液供給部１６０と、上記第１の測定部１４０、第２の測定部１５０、判定部１３２、動作モード選択部１３４及び増幅溶液供給部１６０を制御する制御部１３０とを備えている。
【００２１】
また、図３（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、イムノクロマト用デバイス１２０は、２つのテストライン（Ａ及びＢ）とコントロールラインＣとを有する不溶性担体１２１（試薬）と、不溶性担体１２１を収容するためのデバイス用筐体１２２と、不溶性担体１２１に試薬溶液を注入するための溶液注入口１２３と、デバイス用筐体１２２に収容された不溶性担体１２１の検査部位１２１ａを観察するための観察窓１２４とを備えており、デバイス用筐体１２２の表面には情報表示部１２５が設けられている。なお、観察窓１２４は、例えばガラスやプラスチック等の透明部材で構成されている。
【００２２】
以下、上記測定装置１１について説明する。
【００２３】
（判定部）
【００２４】
クロマトグラフ測定装置１１の判定部１３２は、第１の測定部１４０により測定された検査部位の呈色状態に基づいて、被検物質の検査結果の有効性判定及び増幅要否判定を行うものである。有効性判定により、検査の進行状態（溶液の展開状態、テストラインにおける被検物質及び標識物質の捕捉状態、及びコントロールラインにおける標識物質の捕捉状態等）が正常であり、その後得られる結果が信頼に足るか否か、または検査が正常に終了しその結果が信頼に足るか否かが判定される。これらの場合において、信頼に足る場合には有効判定が出され、信頼に足らない場合にはエラー判定が出される。一方、増幅要否判定により、検査部位の呈色状態を増幅させる必要があるか否かが判定され、必要がある場合には増幅必要判定が、必要がない場合には増幅不要判定が出される。
【００２５】
ここで、テストラインＡは、被検出物質Ａを検査するテストラインであり、テストラインＢは被検出物質Ａと異なる被検出物質Ｂを検査するテストラインであり、コントロールラインＣは検査の終了（標識物質が当該地点まで送液されていること）を示すコントロールラインである。そして、テストラインＡ及びテストラインＢはそれぞれ被検物質Ａ及びＢが検査されると呈色し、Ｃラインは被検物質の有無に関わらず、検査が終了すれば呈色する。
【００２６】
（有効性判定）
【００２７】
検査の進行段階において、判定部１３２よりエラー判定が出される場合としては、例えば、上記進行状態が正常でない恐れがあるため、何らかの検査結果が得られたとしてもその結果の信頼性が低いと判断された場合等が挙げられる。検査の進行状態が正常でない場合としては、例えばイムノクロマト用デバイス１２０を再使用しているために検査の初期段階にもかかわらずコントロールラインが呈色していた場合等が挙げられる。検査の終了段階において、判定部１３２より有効判定が出された場合には、判定部１３２は当該検査結果が陽性か陰性かの判定も行う。検査の終了段階において、判定部１３２よりエラー判定が出される場合としては、例えば、上記進行状態が正常でなかったため正常な検査結果を得ることができなかった場合が挙げられる。
【００２８】
（増幅要否判定）
【００２９】
判定部１３２より増幅必要判定が出される場合としては、例えば、もともと検体溶液中の被検物質の濃度が低いために、或いは検査ライン（テストライン及びコントロールライン）についての試薬等の性質上当該検査自体の反応完了時間が長いために、検査の進行状態が、そのまま検査を進行させたとしても相当の時間を要しなければ検査結果を得ることができない状態にあると予測された場合が挙げられる。ここで、上記進行状態のどのポイントで増幅要否判定を行うかについては、任意に設定することができる。相当の時間を要するか否かの予測は、経時的に計測した呈色状態の変化に基づいて予測することができ、例えば光学濃度の変化率に基づいて予測することができる。判定部１３２より増幅不要判定が出される場合としては、例えば、検体溶液中の被検物質の濃度が高いために或いは当該検査自体の反応完了時間が短いために、上記進行状態が、すでに検査結果を得ることができる状態にあると判断された場合、或いは相当の時間を要せずに検査結果を得ることができる状態にあると予測された場合が挙げられる。
【００３０】
有効性判定及び増幅要否判定を検査の進行上どのタイミングで行うかは特に制限されないが、最も基本的な検査工程としては、検体溶液注入から所定時間経過後、増幅要否判定、有効性判定の順に判定を行って最終的な検査結果を得るというものである。上記所定時間は、検査目的や検査結果取得の時間短縮等に応じて医師等の使用者によって適宜設定される。例えば、この所定時間を短く設定すれば、早い段階で増幅要否判定を行いかつ必要に応じて増幅工程を行えるため、検査結果を取得するまでの時間を短縮することができる。また、後述するように、検査初期段階における進行状態の異常を検知するために、例えば増幅要否判定の前に別途有効性判定を上記基本的な検査工程に追加することもできる。
【００３１】
（動作モード選択部）
【００３２】
動作モード選択部１３４は、予め設定された所定の動作処理を装置に行わせるための動作モードを格納している。そして、格納されている動作モードは制御部１３０を介して画面表示部１１１にメニューとして表示され、測定装置１１の使用者はメニュー操作部１１２を操作してこのメニューの中から動作モードを選択することができる。これにより使用者は検査目的に適合した測定を実施することができる。
【００３３】
動作モード選択部１３４は、例えば動作モードとして、検体溶液を不溶性担体に点着してから予め設定された所定時間の経過時に、テストライン及びコントロールラインの光学濃度及び色度を測定手段に測定させ、すべてのラインについての光学濃度及び色度が所定値に達した場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅不要と判定させて、増幅を行わず被検物質の検査結果について有効性判定を行わせ、それ以外の場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅必要と判定させて、増幅手段に呈色状態を増幅させ、増幅後、判定手段に被検物質の検査結果について有効性判定を行わせる動作モード（第１の動作モード）を格納している。このような動作モードによれば、１つのイムノクロマト用デバイス１２０に複数のテストラインがある場合に、すべてのテストラインについて信頼性の高い検査を行うことができる。
【００３４】
また、イムノクロマト用デバイス１２０にテストラインが２つ以上ある場合に、測定装置１１が、この２つ以上のテストラインの一部を検査対象として指定可能とする指定手段を備えている場合には、動作モード選択部１３４は、例えば他の動作モードとして、検体溶液を不溶性担体に点着してから予め設定された所定時間の経過時に、テストライン及びコントロールラインの光学濃度及び色度を測定手段に測定させ、指定手段に指定されたテストライン及びコントロールラインについての光学濃度及び色度が所定値に達した場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅不要と判定させて、増幅を行わず被検物質の検査結果について判定を行わせ、それ以外の場合には、判定手段に増幅要否判定を増幅必要と判定させて、増幅手段に呈色状態を増幅させ、増幅後、判定手段に被検物質の検査結果について有効性判定を行わせる動作モード（第２の動作モード）を格納している。このような動作モードによれば、無駄な検査時間を低減し、指定したテストラインについて効率よく検査を行うことができる。
【００３５】
（測定部）
【００３６】
第１の測定部１４０は、イムノクロマト用デバイス１２０の観察窓１２４を通して検査部位１２１ａの呈色状態を測定し、検査部位１２１ａにおける光学的情報を取得するものである。第１の測定部１４０は、図２に示すように、イメージセンサ１４２、光源１４４、及び光学レンズ（図２では図示省略）を含んで構成され、イムノクロマト用デバイス１２０が測定装置１１に装填された際に、これらがイムノクロマト用デバイス１２０の下方に配して観察窓１２４に対向するように構成されている。そして、第１の測定部１４０によって取得された検査部位１２１ａにおける光学的情報、すなわち撮影画像に基づいて、検査部位１２１ａの呈色状態として光学濃度及び色度が算出される。なお、詳細は後述するが、本実施形態では、イメージセンサ１４２により撮影された撮影画像から、ほこり等の影響を除去した除去画像を求め、求めた除去画像に基づいて、検査部位１２１ａの呈色状態として光学濃度及び色度が算出される。
【００３７】
イメージセンサ１４２は、例えば複数のフォトダイオードがライン状に配列された構成、或いはエリアセンサといった光学センサを備える構成とされており、受光した光の輝度に応じた出力を生じる。イメージセンサ１４２の受光範囲は、イムノクロマト用デバイス１２０の長手方向に延びた帯状とされている。光源１４４は、例えばＬＥＤが内蔵されたモジュールであり、白色光を発するように構成されている。なお、光源１４４は、増幅前後の色度の区別が付けば例えば単色光を発するものでもよい。また光源１４４は、モジュールを複数備える場合には、異なる波長の単色光を発する複数のモジュールを用いることもできる。光源１４４から照射される光は、イムノクロマト用デバイス１２０の長手方向を照明可能とされている。
【００３８】
第２の測定部１５０は、イムノクロマト用デバイス１２０の情報表示部１２５に照明光を照射し、情報表示部１２５に表示された情報を取得するものである。情報表示部１２５は、手書きまたはシール添付等により検査に関する情報が表示されている。検査に関する情報とは例えば、被検物質を採取した患者に関する情報（氏名、年齢及び性別等）及び検査に使用される試料・試薬に関する情報（検査対象となる被検物質、洗浄液及び増幅溶液等の名称等）等が挙げられる。情報を取得する方法は、特に制限されず、情報表示部１２５をそのまま画像化したりバーコード化された情報から読み取ったりすることができる。第２の測定部１５０は、図２に示すようにイメージセンサ１５２と光源１５４とを備え、イムノクロマト用デバイス１２０が測定装置１１に装填された際に、これらがイムノクロマト用デバイス１２０の上方に配して情報表示部１２５に対向するように構成されている。そして、第２の測定部１５０によって取得された検査に関する情報と検査結果とが紐付けされて管理される。イメージセンサ１５２及び光源１５４については、上記イメージセンサ１４２及び光源１４４とそれぞれ同様である。
【００３９】
（光学濃度）
【００４０】
光学濃度は、アッセイ用デバイスの検査部位に入射された入射光の強度をＩ、検査部位からの反射光の強度をＩｒとしたとき、下記（１）式により定める。
【００４１】
光学濃度＝−ｌｏｇ１０（Ｉｒ／Ｉ） ・・・（１）
【００４２】
（色度）
【００４３】
また、色度は、色相と彩度を数量的に表示したものであり、イメージセンサで読み取ったＲＧＢ輝度信号から算出する。色度の表色系としては、一般的なＣＩＥ表色系を用いることができる。
【００４４】
（増幅溶液供給部）
【００４５】
増幅溶液供給部１６０は、銀イオン含有化合物を含む増幅溶液を貯蔵する増幅溶液貯蔵ポット１６２と、増幅溶液貯蔵ポット１６２から増幅溶液を注入する増幅溶液注入ノズル１６２ａと、上記増幅溶液に含まれる銀イオンを還元する還元剤を貯蔵する還元剤貯蔵ポット１６４と、還元剤貯蔵ポット１６４から還元剤を注入する還元剤注入ノズル１６４ａとを備え、増幅溶液貯蔵ポット１６２及び還元剤貯蔵ポット１６４のそれぞれに貯蔵された液体を、それぞれの注入ノズル１６２ａ・１６４ａを通して装填されたイムノクロマト用デバイス１２０の溶液注入口１２３に注入することができるように構成されている。液体の注入は、例えば増幅溶液供給部１６０を駆動装置により駆動させて順に或いは交互にそれぞれの注入ノズルから別個に注入するようにしてもよく、また２つのノズルを先端部で結合させてそれぞれの貯蔵ポットから供給された液体を同時に注入するようにしてもよい。
【００４６】
なお、増幅溶液供給部１６０は上記構成に限定されるものではない。例えば、それぞれの貯蔵ポットに貯蔵する溶液の組み合わせを増幅溶液及び洗浄液等の組み合わせにしてもよく、また増幅溶液を貯蔵するポット単独で構成してもよい。さらに、溶液を貯蔵する貯蔵ポットは、必ずしも測定装置１１の内部に備える必要はない。例えば、貯蔵ポットを測定装置（筐体１１０）の外部に設け、注入ノズルのみを操作して溶液注入口１２３に溶液を注入するように構成してもよい。
【００４７】
（クロマトグラフ測定方法）
【００４８】
次に本発明のクロマトグラフ測定方法について説明する。
【００４９】
本実施形態に係る測定方法は、被検物質に対する特異的結合物質が固定されたテストラインと、測定の終了時を判断するためのコントロールラインと、固定化された標識物質とを有する不溶性担体１２１を備えるイムノクロマト用デバイス１２０を用意し、このイムノクロマト用デバイス１２０の溶液注入口１２３に検査対象である被検物質を含有しうる検体溶液を注入し、不溶性担体１２１に検体溶液を点着してから所定時間経過後、検査部位１２１ａにおける呈色状態として光学濃度及び色度を測定し、この光学濃度及び色度に基づいて増幅要否判定（第１の判定）を行い、テストライン（Ａ及びＢ）及びコントロールラインＣの少なくとも１つの光学濃度及び色度が所定値に達しなかったため、増幅要否判定の結果、増幅必要判定が出された場合には、不溶性担体１２１に還元剤（ここで、還元剤は洗浄液としても機能する。）を展開することによりテストライン（Ａ及びＢ）及びコントロールラインＣを洗浄し（洗浄処理）、不溶性担体１２１に増幅溶液を展開することにより、銀イオンの還元により形成された銀微粒子を標識物質に沈着させて呈色状態を増幅させ（増幅処理）、増幅された呈色状態の光学濃度及び色度を測定して、この光学濃度及び色度に基づいて有効性判定（第２の判定）を行い、それ以外の場合には、上記増幅工程（洗浄処理、増幅処理を含む）を行わず、増幅要否判定（第１の判定）時の光学濃度及び色度に基づいて有効性判定（第２の判定）を行うものである。
【００５０】
そして、本発明に係るクロマトグラフ測定方法において、上記所定時間は５分〜２０分であることが好ましい。また、第２の判定を第１の判定後１分〜２０分以内に行うことが好ましい。つまり、このように時間設定をすることにより、早い段階で増幅の要否が判断できてより迅速に検査結果を得ることができる。
【００５１】
検体溶液の展開方向と洗浄液の展開方向との成す角は４５度から１７０度であることが好ましく、不溶性担体は多孔性担体であることが好ましい。
【００５２】
（検体溶液）
【００５３】
本発明のアッセイ用デバイスを用いて分析することのできる検体溶液としては、被検物質（天然物、毒素、ホルモンまたは農薬等の生理活性物質あるいは環境汚染物質等）を含む可能性のあるものである限り、特に限定されるものではなく、例えば、生物学的試料、特には動物（特にヒト）の体液（例えば、血液、血清、血漿、髄液、涙液、汗、尿、膿、鼻水、又は喀痰）若しくは排泄物（例えば、糞便）、臓器、組織、粘膜や皮膚、それらを含むと考えられる搾過検体（スワブ）、うがい液、又は動植物それ自体若しくはそれらの乾燥体を後述の希釈液で希釈したもの等を挙げることができる。
【００５４】
上記検体溶液はそのままで、あるいは、検体溶液を適当な抽出用溶媒を用いて抽出して得られる抽出液の形で、さらには、この抽出液を適当な希釈剤で希釈して得られる希釈液の形、若しくは抽出液を適当な方法で濃縮した形で用いることができる。
【００５５】
（標識物質）
【００５６】
本発明で使用することができる標識物質としては、一般的なイムノクロマトグラフ法で用いられるような金属微粒子（又は金属コロイド）、着色ラテックス粒子、酵素など、有色で視認できる、または、反応により検査できるようになる標識物であれば特に限定されることなく用いることができるが、標識物質を触媒とした金属イオンの還元反応によって、標識物質への金属の沈着でシグナルを増幅する場合には、その触媒活性の観点から金属微粒子が好ましい。
【００５７】
金属微粒子の材料としては、金属単体、金属硫化物、その他金属合金、または金属を含むポリマ−粒子標識を用いることができる。粒子（又はコロイド）の平均粒径は、１ｎｍ〜１０μｍの範囲が好ましい。ここで、平均粒径とは、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）により実測された複数の粒子の径（粒子の最長径）の平均値である。より詳細には、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、鉄コロイド、水酸化アルミニウムコロイド、及びこれらの複合コロイドなどが挙げられ、好ましくは、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、及びこれらの複合コロイドであることが望ましい。特に、金コロイドと銀コロイドが適当な粒径において、金コロイドは赤色、銀コロイドは黄色を示し視認度が高いという観点からより好ましい。金コロイドを用いることにより、銀イオン含有化合物を用いた増幅工程を行うことにより増幅の前後で標識の色度が変化する（金コロイドは赤く呈色し、増幅後は還元された銀イオンが金コロイドに沈着し黒くなる）ため、後述するようにこの変化を検査のエラー判定に用いることができるようになる。金属コロイドの平均粒径としては、約１〜５００ｎｍが好ましく、さらには１〜１００ｎｍがより好ましい。
【００５８】
（特異的結合物質）
【００５９】
特異的結合物質としては、被検物質に対して親和性を持つものならば特に限定されることはなく例えば、被検物質が抗原である場合には当該抗原に対する抗体、被検物質がたんぱく質、金属イオンまたは低分子量有機化合物である場合にはこれらに対するアプタマー、被検物質がＤＮＡやＲＮＡなど核酸である場合にはこれらに対して相補的な配列を持つＤＮＡやＲＮＡ等の核酸分子、被検物質がアビジンである場合にはビオチン、被検物質が特定のペプチドの場合にはこれに特異的に結合する錯体、等を挙げることができる。また、上記した例では特異的結合物質と被検物質との関係を入れ替えることもでき、例えば被検物質が抗体である場合には当該抗体に対する抗原を、特異的結合物質として用いることもできる。さらに、上記のような被検物質に対して親和性を持つ物質を一部に含有する化合物等を特異的結合物質として用いることもできる。
【００６０】
上記抗体としては具体的に、その被検物質によって免疫された動物の血清から調製する抗血清、抗血清から精製された免疫グロブリン画分、その被検物質によって免疫された動物の脾臓細胞を用いる細胞融合によって得られるモノクローナル抗体、あるいは、それらの断片［例えば、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦｖ］を用いることができる。これらの抗体の調製は、常法により行なうことができる。
【００６１】
（標識物質のシグナル増幅）
【００６２】
標識物質として金属コロイド標識、金属硫化物標識、その他金属合金標識、または金属を含むポリマ−粒子標識を用いるアッセイの場合には、金属系標識の信号を増幅させることができる。具体的には、被検物質と標識物質の複合体の形成後に、無機銀塩、有機銀塩などの銀を含む化合物から供給される銀イオン及び還元剤を接触させ、還元剤によって銀イオンを還元して銀粒子を生成させると、その銀粒子が金属系標識を核として金属系標識上に沈着するので、金属系標識が増幅され、被検物質の分析を高感度に実施することができる。
【００６３】
（不溶性担体）
【００６４】
不溶性担体１２１は、検体溶液を滴下する部分である試料添加パッド、被検物質と結合可能な標識物質が固定された標識物質保持パッド、被検物質に対する特異的結合物質が固定された検査部位を有するクロマトグラフ担体、及び送液された検体溶液等を吸収する吸収パッドを有している。検査部位には、それぞれ異なる特異的結合物質が固定された２つのテストラインを設けているが、テストラインの数はこれに限定されず、１つでもよいし３つ以上でもよい。テストラインを複数にすることによって検体溶液に複数の被検物質が含まれる場合に、効率よく一度に複数の被検物質を検査することが可能となる。不溶性担体１２１の材料は、多孔性であることが好ましく、例えば、ニトロセルロース膜、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましく挙げられる。
【００６５】
クロマトグラフ担体には、被検物質に対する特異的結合物質を固定化させて検査ラインや所望によりコントロール部位が作製される。特異的結合物質は、特異的結合物質をクロマトグラフ担体の一部に物理的または化学的結合により直接固定化させてもよいし、特異的結合物質をラテックス粒子などの微粒子に物理的または化学的に結合させ、この微粒子をクロマトグラフ担体の一部にトラップさせて固定化させてもよい。
【００６６】
標識物質保持パッドは、前述の標識物質を含む懸濁液を調製し、その懸濁液を適当なパッド（例えば、グラスファイバーパッド）に塗布した後、それを乾燥することにより調製したものである。これにより、不溶性担体に検体溶液が注入された場合、標識物質が被検物質と共に展開されながら当該被検物質に結合して、検査部位まで流される。
【００６７】
試料添加パッドは試料（検体溶液等）を点着する部分であって、試料中の不溶物粒子等を濾過する機能をも兼ねる部分である。なお、分析の際、検体溶液中の被検物質が試料添加部の材質に非特異的に吸着し、分析の精度を低下させることを防止するため、試料添加パッドは予め非特異的吸着防止処理されて用いられることもある。
【００６８】
吸収パッドは、添加された試料がクロマト移動により物理的に吸収されると共に、クロマトグラフ担体の検査ラインに不溶化されない未反応標識物質等を吸収除去する部位である。添加された試料のクロマト先端部が吸収部に届いてからのクロマトの速度は、吸収材の材質、大きさなどにより異なるので、その選定により被検物質の測定に合った速度を設定することができる。
【００６９】
（増幅溶液）
【００７０】
増幅溶液は、含まれる薬剤が標識物質や被検物質の触媒作用によって反応することにより、呈色或いは発光する化合物などを生じ、シグナルの増幅を起こすことができる溶液である。例えば、金属標識上で、物理現像により金属銀の析出を起こす銀イオン溶液である。詳細には、写真化学の分野での一般書物（例えば、「改訂写真工学の基礎-銀塩写真編-」（日本写真学会編、コロナ社）、「写真の化学」（笹井明、写真工業出版社）、「最新処方ハンドブック」（菊池真一他、アミコ出版社））に記載されているような、いわゆる現像液を用いることができる。例えば、増幅溶液として銀イオン含有化合物を含む物理現像液を用いれば、銀イオンの還元剤により液中の銀イオンを、現像の核となるような金属コロイド等を中心に還元させることができる。
【００７１】
また別の例としては、酵素反応を用いた例がある。例えば、ペルオキシダーゼ標識と過酸化水素の作用により色素となる、フェニレンジアミン化合物とナフトール化合物の溶液などが挙げられる。さらに、非特許文献「臨床検査 Ｖｏｌ．４１ ｎｏ．９ ｐ．１０２０ Ｈ２Ｏ２−ＰＯＤ系を利用した染色」に記載されているような、西洋わさびペルオキシダーゼ検出の発色基質などでもよい。また、特開２００９−１５６６１２に記載の発色基質は特に好ましく用いることができる。なお、酵素の代わりに白金微粒子などの金属触媒を用いる系でもよい。
【００７２】
別の酵素を用いた例としては、アルカリホスファターゼを標識とし、５−ブロモ−４クロロ−３−インドリル−リン酸二ナトリウム塩（ＢＣＩＰ）を基質として発色させるような系もある。以上、呈色する反応を代表に挙げたが、一般的にエンザイムイムノアッセイで用いられるような、酵素と基質の組み合わせであればなんでも良く、化学発光する基質であっても、蛍光を発する基質であってもよい。
【００７３】
（銀イオン含有化合物）
【００７４】
銀イオン含有化合物としては、有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物であり、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀等が挙げられる。無機銀塩、もしくは銀錯体は、銀として一般に０．００１モル／ｍ２〜０．２モル／ｍ２、好ましくは０．０１モル／ｍ２〜０．０５モル／ｍ２含有されることが好ましい。
【００７５】
（銀イオンの還元剤）
【００７６】
銀イオンの還元剤は、銀イオンを銀に還元することができれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。
【００７７】
無機還元剤としては、Ｆｅ２+、Ｖ２+、Ｔｉ３+、などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２+を還元剤として用いる系では、クエン酸やＥＤＴＡを用いて酸化物であるＦｅ３+の錯体を形成し、無害化することができる。本系ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、より好ましくはＦｅ２+の金属塩が好ましい。
【００７８】
なお、本実施形態に係るアッセイ用デバイスを用いて分析することのできる増幅要否判定等の具体例、光学濃度及び色度に基づいた増幅前後の詳細な判定等については詳細な説明は省略するが、例えば本出願人が出願した特願２００９−２２６０１０号に記載されたものや方法を用いることができる。
【００７９】
（ほこり等の影の位置の算出）
【００８０】
次に、イメージセンサ１４２で撮影された撮影画像からほこり等の影の位置を算出し、算出した影の位置に基づいてテストラインの光学濃度を算出する処理について説明する。
【００８１】
図４には、第１の測定部１４０上にイムノクロマト用デバイス１２０がセットされた状態を示した。図１〜３では図示は省略したが、第１の測定部１４０のイメージセンサ１４２及び光学レンズ１４３の上方はガラス面１４５で形成されており、このガラス面１４５上にイムノクロマト用デバイス１２０がセットされる。
【００８２】
なお、光学レンズ１４３は、制御部１３０の制御により図４において矢印Ｙ方向に移動可能であり、焦点を試薬紙Ｓ（不溶性担体１２１）、観察窓１２４、及びガラス面１４５に合わせることが可能なように構成されている。
【００８３】
このような構成の場合、第１の測定部１４０のガラス面１４５やイムノクロマト用デバイス１２０のガラスやプラスチック等の透明部材で構成された観察窓１２４に微小のほこりやゴミ等の付着物Ｇが付着する場合がある。この場合、撮影時に光源１４４から光が照射されると、図４に示すように、付着物Ｇの影Ｋが試薬紙Ｓ上に投影される。
【００８４】
そして、付着物Ｇの影Ｋが試薬紙Ｓ上に投影された状態で試薬紙Ｓを撮影すると、図５に示すように、影ＫがテストラインＡ、ＢやコントロールラインＣ上やその近傍に投影される場合がある。この場合、影Ｋの影響によって、テストラインＡ、Ｂ、コントロールラインＣの呈色状態を判定する際に、誤判定する虞がある。
【００８５】
このため、本実施形態では、付着物Ｇによる影Ｋの位置を算出し、この影ＫがテストラインＡ、ＢやコントロールラインＣ上に位置していた場合には、テストラインＡ、ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出する際に、影Ｋを含む領域を除外して算出する。
【００８６】
次に、制御部１３０で実行される処理について、図６に示すフローチャートを参照して説明する。
【００８７】
なお、図６に示す処理は、イムノクロマト用デバイス１２０がデバイス装填部１１４にセットされ、メニュー操作部１１２が操作されて動作モードが選択されて測定が指示され、検体溶液（試料）が不溶性担体１２１に点着されてから予め定めた時間の経過後、すなわちテストラインやコントロールラインの呈色状態を適切に測定できる状態になった場合に実行される。
【００８８】
まず、ステップＳ１００では、光学レンズ１４３を移動させ、図７に示すように付着物Ｇが付着した付着面Ｆに焦点を合わせる。なお、図７では、イムノクロマト用デバイス１２０の形状を簡略化して記載し、観察窓１２４やガラス面１４５をゴミ等が付着する付着面Ｆとして表している。
【００８９】
ステップＳ１０２では、付着面Ｆをイメージセンサ１４２により撮影し、撮影画像を第１の画像として取得する。
【００９０】
ステップＳ１０４では、第１の画像に基づいて、図７に示すように、イメージセンサ１４２の中心（光学レンズ１４３の光軸）から付着物Ｇまでの位置、すなわち距離Ｌ５を算出する。このイメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離Ｌ５は、以下のようにして得られる。まず、例えば第１の画像に対して二値化処理等の公知の画像処理施して付着物Ｇを抽出し、抽出した付着物Ｇの第１の画像の中心（イメージセンサ１４２の中心）からの画素数を求める。そして、求めた画素数を、画素数を距離に変換する予め定めた変換式により距離に変換する。これにより、イメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離Ｌ５を求めることができる。
【００９１】
ステップＳ１０６では、試薬紙Ｓに焦点が合うように光学レンズ１４３を移動させる。
【００９２】
ステップＳ１０８では、試薬紙Ｓをイメージセンサ１４２により撮影し、撮影画像を第２の画像として取得する。
【００９３】
ステップＳ１１０では、光源１４４から付着物Ｇへの仰角θを算出する。仰角θは、図７に示すように、光源１４４とイメージセンサ１４２とを結ぶ線と、光源１４４と付着物Ｇとを結ぶ線とが成す角度であり、次式により算出することができる。
【００９４】
θ＝ｔａｎ−１（Ｌ３／（Ｌ１−Ｌ５）） ・・・（１）
【００９５】
ここで、図７に示すように、Ｌ１は、イメージセンサ１４２の中心から光源１４４までの距離であり、Ｌ３は、イメージセンサ１４２から付着面Ｆまでの距離であり、Ｌ５は、ステップＳ１０４で求めたイメージセンサ１４２の中心から付着物Ｇまでの距離である。
【００９６】
ステップＳ１１２では、光源１４４から影Ｋまでの距離Ｌ２を求める。この距離Ｌ２は、次式により算出することができる。
【００９７】
Ｌ２＝Ｌ４×ｔａｎθ ・・・（２）
【００９８】
ここで、Ｌ４は、図７に示すように、イメージセンサ１４２から試薬紙Ｓまでの距離である。
【００９９】
ステップＳ１１４では、イメージセンサ１４２の中心から影Ｋまでの距離Ｌ６を算出する。この距離Ｌ６は、次式により算出できる。
【０１００】
Ｌ６＝Ｌ１−Ｌ２ ・・・（３）
【０１０１】
ステップＳ１１６では、試薬紙Ｓを撮影した第２の画像に基づいて、テストラインＡ，Ｂ、コントロールラインＣの光学濃度を算出する。このとき、図５に示すように、影ＫがテストラインＡ，Ｂ、コントロールラインＣ上やその近傍に存在するか否かを判断する。具体的には、ステップＳ１１４で算出した影Ｋの位置、すなわち画像の中心から距離Ｌ６に相当する画素数の位置が、テストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上又はその近傍にあるか否かを第２の画像に基づいて判断する。
【０１０２】
そして、影Ｋの位置がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上又はその近傍に存在する場合には、影Ｋが存在するラインのうち、影Ｋを含む領域を除外してそのラインの光学濃度を算出する。
【０１０３】
例えば図５に示すように、テストラインＢ上及びその近傍に影Ｋが存在する場合には、テストラインＢが形成された領域のうち、全ての影Ｋを含む領域Ｂａを、光学濃度を算出する領域から除外する。
【０１０４】
例えばテストラインＡについては影Ｋが存在しないため、テストラインＡが形成された全領域の濃度の例えば平均値をテストラインＡの光学濃度とする。
【０１０５】
テストラインＢについては、テストラインＢが形成された領域のうち影Ｋを全て含む領域Ｂａを除外して、その他の領域の光学濃度の例えば平均値をテストラインＢの光学濃度とする。
【０１０６】
コントロールラインＣについては、コントロールラインＣが形成された領域のうち影Ｋを含む領域Ｃａを除外して、その他の領域の光学濃度の例えば平均値をコントロールラインＣの光学濃度とする。そして、算出した光学濃度に基づいて、各ラインの呈色状態を判定する。
【０１０７】
このように、本実施形態では、付着面Ｆに焦点を合わせて撮像した第１の画像に基づいて付着物Ｇの位置を算出し、付着物Ｇの位置、光源１４４の位置、付着面Ｆの位置、及び試薬紙Ｓの位置に基づいて、付着物Ｇの試薬紙Ｓ上の影Ｋの位置を算出し、試薬紙Ｓに焦点を合わせて撮像した第２の画像に基づいてテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出すると共に、影Ｋの位置がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの領域内（その近傍を含む）の場合に、影Ｋを含む領域を除外してテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの光学濃度を算出する。このため、精度よくテストラインやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができる。
【０１０８】
なお、付着物Ｇが付着する付着面Ｆとしては、本実施形態ではガラス面１４５及び観察窓１２４の２つが考えられるため、ガラス面１４５及び観察窓１２４の両者について図６に示す処理を実行することが好ましい。これにより、何れの面にほこり等が付着していても、精度よくテストラインやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができる。
【０１０９】
また、溶液注入口１２３に投入された検体溶液（試料）は、図３において左側から右側へ向かって毛細管現象により試薬紙Ｓ上を流れていく。このため、流れてくる試料の先端がテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣ上に存在するタイミングで第２の画像を撮影すると、これを影と誤判定してしまい、精度よくテストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの呈色状態を判定することができなくなる虞がある。そこで、試料が試薬紙Ｓに供給された後、テストラインＡ，ＢやコントロールラインＣの反応が終了するまでの間に、第１の画像を複数回取得し、取得した複数の第１の画像の全てにおいて、同じ位置に存在する同一濃度の領域を影として特定し、その位置を算出するようにしてもよい。これにより、流れてくる試料の先端を影と誤認識してしまうのを防ぐことができる。
【０１１０】
また、制御部１３０は、図８に示すようなコンピュータ１３０で構成できる。コンピュータ１３０は、ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）１３０Ａ、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）１３０Ｂ、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）１３０Ｃ、不揮発性メモリ１３０Ｄ、及び入出力インターフェース（Ｉ／Ｏ）１３０Ｅがバス１３０Ｆを介して各々接続された構成となっている。この場合、図６に示した処理のプログラムを記憶部１３６又は不揮発性メモリ１３０Ｄに書き込んでおき、これをＣＰＵ１３０Ａが読み込んで実行することにより、コンピュータ１３０が制御部１３０として機能する。
【０１１１】
上記実施形態においては、アッセイ法としてイムノクロマトグラフ法について説明したが、本発明のアッセイ法はこれに限定されない。いわゆる免疫反応を用いない系でもよく、例えば、抗体を用いずにＤＮＡやＲＮＡなどの核酸で被検物質を捕捉する系でもよいし、さらには被検物質に対する親和性を持つ別の小分子やペプチド、たんぱく質、錯体形成物質等、によって被検物質を捕捉する系であってもよい。
【符号の説明】
【０１１２】
１１ クロマトグラフ測定装置
１１４ デバイス装填部
１２０ イムノクロマト用デバイス
１２１ 不溶性担体
１２２ デバイス用筐体
１２４ 観察窓
１３０ 制御部
１３２ 判定部
１３４ 動作モード選択部
１３６ 記憶部
１４０ 測定部
１４２ イメージセンサ
１４３ 光学レンズ
１４４ 光源
１４５ ガラス面
【特許請求の範囲】
【請求項１】
撮像素子と、
試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、
前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、
前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御する制御手段と、
前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出する付着物位置算出手段と、
前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出する影位置算出手段と、
前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する光学濃度算出手段と、
を備えた測定装置。
【請求項２】
前記制御手段は、前記試料が前記試薬紙に供給された後、前記試薬の反応が終了するまでの間に、前記第１の画像を複数回取得し、前記影位置算出手段は、取得した複数の前記第１の画像に基づいて、前記影の位置を算出する
請求項１記載の測定装置。
【請求項３】
コンピュータを、請求項１又は請求項２記載の測定装置を構成する各手段として機能させるための測定プログラム。
【請求項４】
撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、を備えた測定装置により実行される測定方法であって、
前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御し、
前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出し、
前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出し、
前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する
測定方法。
【請求項１】
撮像素子と、
試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、
前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、
前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御する制御手段と、
前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出する付着物位置算出手段と、
前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出する影位置算出手段と、
前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する光学濃度算出手段と、
を備えた測定装置。
【請求項２】
前記制御手段は、前記試料が前記試薬紙に供給された後、前記試薬の反応が終了するまでの間に、前記第１の画像を複数回取得し、前記影位置算出手段は、取得した複数の前記第１の画像に基づいて、前記影の位置を算出する
請求項１記載の測定装置。
【請求項３】
コンピュータを、請求項１又は請求項２記載の測定装置を構成する各手段として機能させるための測定プログラム。
【請求項４】
撮像素子と、試料に被検物質が含まれるか否かをイムノクロマトグラフ法により判定するための試薬が形成され、かつ、前記試料に前記被検物質が含まれる場合に呈色する特異的結合物質が予め定めたテストライン領域に形成された試薬紙と、前記試薬紙が収容された試薬ケースと前記撮像素子との間の付着物が付着し得る付着面と、の何れかに焦点を合わせる合焦手段と、前記試薬紙に向けて照射光を照射する光源と、を備えた測定装置により実行される測定方法であって、
前記試料が前記試薬紙に供給された後に、前記付着面に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第１の画像、及び、前記試薬紙に焦点を合わせて前記撮像素子により撮像させた第２の画像、を取得するように前記合焦手段及び前記撮像素子を制御し、
前記第１の画像に基づいて、前記付着物の位置を算出し、
前記付着物の位置、前記光源の位置、前記付着面の位置、及び前記試薬紙の位置に基づいて、前記付着物の前記試薬紙上の影の位置を算出し、
前記第２の画像に基づいて前記テストライン領域の光学濃度を算出すると共に、前記影の位置が前記テストライン領域内の場合に、前記テストライン領域のうち前記影を含む領域を除外して前記テストライン領域の光学濃度を算出する
測定方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図８】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図８】
【図７】
【公開番号】特開２０１２−２１５４１９（Ｐ２０１２−２１５４１９Ａ）
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−７９５８０（Ｐ２０１１−７９５８０）
【出願日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
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