炎症性疾患の予防または治療剤
【課題】 本発明は、炎症状態または炎症性疾患の治療または予防のための優れた医薬を提供すること。
【解決手段】 ４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患、重症感染症などの炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【解決手段】 ４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患、重症感染症などの炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤に関するものである。具体的には、４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミドまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は生体がウイルスや細菌に感染したときに、その病原体から生体を防御するために起こる一連の免疫反応であり、侵入した病原体を最初に認識するのは、外来異物の貪食作用をもつ単球やマクロファージ、Ｂ細胞などをはじめとする樹状細胞などである。これらの単球やマクロファージ、樹状細胞が病原体を認識すると、炎症性サイトカインなどの炎症反応に必要な種々のたんぱく質を産生することにより、炎症反応が惹起される。炎症性サイトカインにはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−８などがあり、一方、炎症症状を抑制する機能を持つとされる抗炎症性サイトカインには、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＴＧＦβなどがある。この炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとのバランスが崩れるとアレルギー疾患や自己免疫疾患が起こると考えられている。
【０００３】
ＩＬ−６は１９８６年にヒト遺伝子がクローニングされ（非特許文献１）、活性化Ｂ細胞を抗体産生細胞に分化させる因子として同定された。ＩＬ−６は２１２個のアミノ酸からなる分泌型糖タンパク質であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球などの血球系細胞のみならず、線維芽細胞、血管内皮細胞などさまざまな細胞から産生される。ＩＬ−６は免疫反応において、Ｂ細胞から抗体産生細胞への分化を誘導し、Ｔ細胞のＩＬ−２レセプターの発現誘導と活性化Ｔ細胞からのＩＬ−２産生を促進してＴ細胞の増殖と細胞障害性Ｔ細胞への分化誘導を誘導する。さらに、ＩＬ−６は、ＩＬ−３との協調作用により造血幹細胞を分化誘導するほか、巨核球の分化誘導による血小板増加作用、肝細胞からのＣ−ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）、フィブリノーゲンをはじめとする急性期タンパク質の産生誘導作用をもつ。このように、ＩＬ−６は免疫系だけでなく、造血系、炎症、急性期応答などのさまざまな生体反応に関わる多機能サイトカインであることが明らかになっている（非特許文献２）。
【０００４】
外科手術においては、手術自体が強いストレスとなって生体に過剰な炎症反応を引き起こし、重篤な転帰をたどる危険性がある。過度の侵襲は、上記ＩＬ−６などの炎症性サイトカイン産生を増強させ、全身性炎症反応症候群（Sytemic Inflammatory Response Syndrome、ＳＩＲＳ）を引き起こす。炎症反応を抑制する薬剤としては、ステロイドなどが挙げられるが、副作用が強くまた免疫抑制状態を惹起するなどの側面が問題となる。また、感染により全身性に強い炎症反応が惹起されて重症化する敗血症に対しては未だに十分な治療法が確立されていない。敗血症の状態になると、細菌の菌体成分であるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）が生体に作用し、強烈な炎症反応が引き起こされ、臓器障害に発展し致命傷となる。
【０００５】
また、開腹手術後は腸管の徒手操作（manipulation）によるダメージなどによって炎症反応が惹起され、イレウスの原因となる。さらに、閉塞により腸内容の停滞が細菌の繁殖および全身への転移（translocation）を引き起こし、炎症を助長する。
【０００６】
消化管潰瘍は腸粘膜の損傷であり、炎症を伴う。また、腸管防御の破綻となって、全身性の炎症への波及するおそれがある。
【０００７】
一方、キャッスルマン（Ｃａｔｓｌｅｍａｎ）病（非特許文献３）、慢性関節リウマチ（非特許文献４）、全身性エリテマトーデス（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ（ＳＬＥ））、炎症性腸疾患、特にクローン病（非特許文献５−７）などの自己免疫疾患においても、ＩＬ−６の関与が多数報告されている。
【０００８】
クローン病においては、何らかの外来抗原に対して、単球、マクロファージが活性化され局所免疫反応が生じ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦαなどの炎症性サイトカインが産生されると考えられている。粘膜組織におけるＩＬ−６発現量と内視的な病変のグレードや組織学的な炎症所見が一致することが報告されており、クローン病の活動指標であるＣｒｏｈｎ‘ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ（ＣＤＡＩ）が血清ＩＬ−６とよく相関することも示されている。
【０００９】
キャッスルマン病は、良性のリンパ増殖性疾患でリンパ濾胞の過形成を伴うリンパ節腫大を特徴とするが、形質細胞の浸潤が多数認められる。この疾患患者ではＩＬ−６の過剰産生により説明できる多彩な全身症状や検査異常がしばしば認められる。例えば、ＩＬ−６により高γグロブリン血症や自己抗体の出現、ＣＲＰの亢進、血清アルブミンの低下などがみられる。限局型のＣａｔｓｌｅｍａｎ病患者では、腫大リンパ節の切除により術前高値であった血中ＩＬ−６が低下し、それに伴い倦怠感や食欲低下、体重減少などの全身症状や検査値異常が改善されたという報告がある。
【００１０】
慢性関節リウマチでは、キャッスルマン病と同様に、ＩＬ−６により高γグロブリン血症や自己抗体であるリウマトイド因子の出現、ＣＲＰの亢進、血清アルブミンの低下がみられる。さらにＩＬ−６により破骨細胞が活性化されることがわかっており、破骨細胞活性化により骨吸収が生じ、関節破壊が引き起こされると考えられている。実際、患者の関節液中のＩＬ−６濃度は高値を示し、滑膜組織からのＩＬ−６産生も亢進している。
【００１１】
一方、（±）−４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「モサプリド」ということがある。）は、選択的セロトニン４受容体アゴニストであり、消化管運動促進作用を示す（特許文献１参照）。そして、そのクエン酸塩・２水和物は、慢性胃炎に伴う消化器症状の改善を目的として既に実用化され、日本では「ガスモチン」なる商標名のもとに市販されている。
【００１２】
また、特許文献２においては、モサプリドがインスリン抵抗性改善剤として、有用であることが開示されており、更に、特許文献３では、モサプリドが歯ぎしりの予防剤または治療剤として有用であることが開示されている。
【００１３】
しかしながら、モサプリドにサイトカインの産生を抑制するまたは炎症抑制作用があるとの報告はなされていない。
【非特許文献１】Hirano T. et al:Complementary DNA for novel human interkeukin(BSF-2) that induses B lymphcytes to produce immunoglobulin. Nature 1986年 324 p73-76
【非特許文献２】Hirano T.:Interkeukin 6 and its receptor:ten years later.Int.Rev.Immunol. 1998年 16(3-4) p249-284
【非特許文献３】Yoshizaki K. et al:Pathogenic significance of interkeukin 6 in Castleman’s disease. Blood 1989年 74 p1360-1367
【非特許文献４】Madhok R. et al:Serum interkeukin 6 levels in rheumatoid arthritis:correlations with clinical and laboratory indices of disease activity. Ann Rheum.Dis. 1993年 52:p232-234
【非特許文献５】Reimond JM. et al:Increased production of tumor necrosis factor-α,interkeukin-1β,and interkeukin 6 by morphologically normal intestinal biopsies from patients with Crohn’s disease. Gut 1996年 39:ｐ684-689
【非特許文献６】Kosugammi K、et al:Elevation of interkeukin 6 in inflammatory bowel disdease is macrophage- and epithelial cell-dependent. Dig.Dis.Sci. 1995年 40:ｐ949-959、.
【非特許文献７】Reinisch W．et al:Clinical relevance of serum interkeukin 6 in Crohn‘s disease:single point measurements、therapy monitoring、and prediction of clinical relapse. Am.J.Gastroenterol. 1999年 94(8):2156-2164
【特許文献１】米国特許第４，８７０，０７４号公報
【特許文献２】国際公開第０２／７６４６２号パンフレット
【特許文献３】特開２００５−９７２７７公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、炎症状態または炎症性疾患の治療または予防のための優れた医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、種々検討の結果、全く意外にもクエン酸モサプリドが炎症性サイトカイン、具体的には、インターロイキン１β（ＩＬ-１β）やインローロイキン６（ＩＬ-６）等の炎症性サイトカイン、特にＩＬ−６の産生を抑制することを見いだした。即ち、クエン酸モサプリドを有効成分とする医薬を投与することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制することができ、炎症状態または炎症性疾患の予防または治療に優れた作用を示すことが判明した。更に、この作用は、セロトニン４受容体を介していないものであることが判明し、クエン酸モサプリドの新規な作用であることを見出して、本発明を完成した。
【００１６】
即ち、本発明によれば、モサプリドまたはその塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤、または、モサプリドまたはその塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬を提供するものである。本発明においてはこれらを総称して「本発明の医薬」ということがある。
【００１７】
具体的には、
項１： ４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【００１８】
項２： 炎症状態または炎症性疾患が、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症である項１記載の予防または治療剤。
【００１９】
項３： 炎症状態または炎症性疾患が、炎症性サイトカインに起因するものである項１または２記載の予防または治療剤。
【００２０】
項４： 炎症性サイトカインがＩＬ−１またはＩＬ−６である項３記載の予防または治療剤。
【００２１】
項５： 炎症性サイトカインがＩＬ−６である項４記載の予防または治療剤。
【００２２】
項６： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする術後イレウスの予防または治療剤。
【００２３】
項７： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする胃若しくは腸の潰瘍の予防または治療剤。
【００２４】
項８： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の医薬は、炎症性サイトカイン、特にＩＬ−６の産生を抑制する作用を有することから、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症、深在性真菌症等の広範囲の炎症に対して優れた効果を有することが期待できる。
【００２６】
更に、化合物Ａは、消化管運動促進作用を有することから、本発明の抗炎症作用とあいまって、特に、術後イレウスや胃もしくは腸の潰瘍の予防ないし治療に有効であると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩
本発明にかかわる化合物Ａ、即ち、４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミドは、下記式：
【００２８】
【化１】
【００２９】
で表される化合物である。本発明にかかわる化合物Ａはラセミ体であっても、又は一方の光学活性体であってもよいが、ラセミ体が好適である。
【００３０】
また、化合物Ａはフリー体であってもよいし、その生理学的に許容される塩であってもよい。塩としては好ましくは酸付加塩がよい。たとえば有機酸の付加塩としては、ギ酸塩、酢酸塩、乳酸塩、アジピン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、マレイン酸塩等が挙げられ、無機酸の付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等が例示できる。この中でも特にクエン酸塩が好ましい。さらに、化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、溶媒和物であってもよく、水和物および非水和物であってもよい。好ましくはクエン酸塩の水和物がよく、とりわけクエン酸塩・２水和物が好ましい。
【００３１】
上記化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、例えば、特許文献１に記載の方法またはこれに準じる方法によって製造することができる。
【００３２】
炎症性サイトカインとは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与するサイトカインであり、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−８などが挙げられる。化合物Ａは、以下の試験例に示すように、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、特にＩＬ−６の産生を抑制する。従って、以下に示すように炎症状態または炎症性疾患の予防または治療に有用である。
【００３３】
また、本発明に関わる炎症状態または炎症性疾患とは、炎症を伴う状態または疾患であり、特に上記サイトカインの濃度が血中で高くなる状態または疾患である。例えば、炎症状態の例示としては、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、敗血症を含む全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍が挙げられ、炎症性疾患としては、感染性胃腸炎、クローン病,潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症、深在性真菌症等が挙げられるが、上記サイトカインが関与している疾患であれば、これらに限定されず、広範囲の炎症状態または疾患を意味する。また、炎症状態と炎症性疾患とは明確に区別されるものではない。本発明においては、治療には改善も含まれる。
【００３４】
本発明の医薬は、特に、炎症状態の予防または治療に有用である。
【００３５】
本発明の医薬を投与する対象物は、ヒトまたは動物である。本発明の医薬は特にヒトにおける予防又は治療に有用である。
【００３６】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、通常、医薬用担体と混合して調製した医薬組成物の形で医薬として適用される。本発明の医薬の投与経路は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。その剤形は、投与経路に応じて適宜選択される。投与量（有効成分量）は、特に限定されず病態やその進行状況、その他の条件（投与する対象の種類、症状、年齢、体重、性別、合併症、投与時間、投与方法、剤型、感受性差等）によって異なるが、例えば、注射液、輸液、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、腸溶剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、外用液剤、湿布剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤、坐剤、経腸栄養剤などが挙げられる。
【００３７】
注射剤の形で投与する場合には、静脈内（点滴を含む）、腹腔内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、滑液嚢内、胞膜内、骨膜内等に投与することができる。
【００３８】
本発明においては、特に経口投与又は静脈内投与が好ましい。
【００３９】
本発明の医薬の投与量は、投与の目的や投与対象者の状況（性別、年齢、体重など）に応じて異なる。通常、成人に対して、化合物Ａ（フリー体）換算で、経口投与の場合、１日あたり５ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇ、一方、非経口投与の場合、１日あたり０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜３０ｍｇで投与され得る。
【００４０】
医薬用担体としては、医薬分野において常用され、かつ化合物Ａと反応しない物質が用いられ、例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤などの医薬の製剤技術分野において通常用いられる補助剤が用いられる。
【００４１】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤の製造に用いられる医薬用担体の具体例としては、乳糖、トウモロコシデンプン、白糖、マンニトール、硫酸カルシウム、結晶セルロースのような賦形剤、カルメロースナトリウム、変性デンプン、カルメロースカルシウムのような崩壊剤、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンのような結合剤、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油のような滑沢剤が挙げられる。錠剤は、カルナウバロウ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、ヒドロキシプロピルメチルフタレート、セルロースアセテートフタレート、白糖、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、リン酸カルシウムのようなコーティング剤を用い、周知の方法でコーティングしてもよい。消化管運動促進薬として販売されている錠剤、散剤等を本発明の医薬として適用することもできる。
【００４２】
坐剤の基剤の具体例としては、カカオ脂、飽和脂肪酸グリセリンエステル、グリセロゼラチン、マクロゴールが挙げられる。坐剤製造にあたっては、必要に応じて界面活性剤、保存剤等を添加することができる。
【００４３】
注射剤は、通常、化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を注射用蒸留水に溶解して調製してもよいが、必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤等を添加することができる。または、ＷＯ２００４／０９６２２９に記載の方法に従って調製することも可能である。
【００４４】
これらの医薬組成物は、通常、活性成分として化合物Ａを０．０１％以上、例えば０．５〜７０％の割合で含有することができる。これらの医薬組成物はまた、以下に述べる治療上有効な他の物質を含有していてもよい。
【００４５】
以下に、試験例を挙げて本発明の医薬が炎症状態または炎症性疾患に有用であることについて説明する。なお、試験中使用した化合物Ａ’は化合物Ａのクエン酸二水和物であって、大日本住友製薬株式会社製のものを使用した。
【００４６】
試験例１ マウス マクロファージ系細胞株におけるサイトカイン産生抑制作用
被験物質として、化合物Ａ’５．１ｍｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）０．１０２ｍｌに溶解させ、１０％ＦＢＳを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ‘ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＳＩＧＭＡ社、ＤＭＥＭ）を使用して、所望の濃度に希釈した。ただし、化合物Ａ’を溶解しているＤＭＳＯの最終濃度が０．１％以下になるように希釈した。コントロールとしてＤＭＳＯを用いた（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈して最終濃度が０．１％となるように調製）。
【００４７】
プラスティック製９６ウエルプレート（ＩＷＡＫＩ社）に、マウス マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７細胞（大日本住友製薬株式会社ラボラトリープロダクツ部）を２×１０４個／１００μｌ（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）（ＳＩＧＭＡ社））／ウエルになるように播種し、一晩培養した（３７℃および５％ＣＯ２／９５％空気下）。
【００４８】
一晩培養後、細胞が付着した状態で培養上清を除き、各ウエルに化合物Ａ’をその最終濃度が０．０３μｇ／ｍｌ〜３０μｇ／ｍｌになるように添加し（１００μｌ）、約１５分後に最終濃度が３μｇ／ｍｌになるようにＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈）を添加した（１００μｌ）。その後、約２４時間上記と同条件で培養後、各ウエルから培養上清１００μｌを採取し、上清中のＩＬ−６およびＩＬ−１βの産生量をＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（各々、ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社およびＲ＆Ｄ社）により定量した。
【００４９】
結果を図１及び図２に示す。ＬＰＳを添加したウエル（ＬＰＳ）のサイトカイン産生量を１００％、ＬＰＳを添加しなかったウエル（コントロール）のサイトカイン産生量を０％として化合物Ａの阻害活性を評価した。化合物添加群については、各濃度２ウエルの平均値を示した。
【００５０】
図１（ＩＬ−６）及び図２（ＩＬ−1β）に示す結果より、化合物Ａは、ＩＬ−６およびＩＬ−１βの産生を濃度依存的に抑制した。
【００５１】
試験例２ 化合物ＡのＩＬ−６産生抑制効果に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの影響
試験例１と同様にして、プラスティック製９６ウエルプレート（ＩＷＡＫＩ社）に、細胞株ＲＡＷ２６４．７細胞を２×１０４個／１００μｌ／ウエルになるように播種し、一晩培養後（３７℃および５％ＣＯ２／９５％空気下）、培養上清を除き、各ウエルに化合物Ａ’を最終濃度が１０μｇ／ｍｌになるように（５０μｌ）、及び、５−ＨＴ４アンタゴニストとして知られている（ＷＯ９３／１８０３６）Ｎ−［（１−ブチルー４−ピペリジニル）メチル］−３，４−ジヒドロー２Ｈ-［１，３］オキサジノ［３，２−ａ］インドール−１０−カルボキサイミドの塩酸塩（N- [(1- butyl- 4- piperidinyl)methyl]- 3,4- dihydro- 2H- [1,3]oxazino[3,2- a]indole- 10- carboxamide hydrochloride）をその最終濃度が０．０１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌになるように添加し（５０μｌ）、３０分後に最終濃度３μｇ／ｍｌになるようにＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社）を添加した（１００μｌ）。なお、化合物Ａ’および５−ＨＴ４アンタゴニストはＤＭＳＯで溶解された後、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて希釈し、化合物Ａ’および５−ＨＴ４アンタゴニストを溶解しているＤＭＳＯの最終濃度が０．１％以下になるように調製した。コントロールとしてＤＭＳＯを添加した（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈して最終濃度が０．１％となるように調製）。
【００５２】
その後、約２４時間後、上記と同条件で培養後、各ウエルから培養上清を採取し（１００μｌ）、上清中のＩＬ−６の産生量をＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）により定量した。
【００５３】
結果を図３に示す。ＬＰＳを添加したウエル（ＬＰＳ）のサイトカイン産生量を１００％、ＬＰＳを添加しなかったウエル（コントロール）のサイトカイン産生量を０％として化合物Ａ’の阻害活性に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの作用を評価した。
【００５４】
図３の結果が示すように、５−ＨＴ４アンタゴニストは化合物Ａ’のＩＬ−６産生抑制効果に対して影響を及ぼさなかった。このことから、化合物ＡのＩＬ−６産生抑制効果は５−ＨＴ４を介した作用ではないことが示唆された。
【００５５】
試験例３ ｉｎ ｖｉｖｏ ＬＰＳ投与モデルにおける化合物ＡのＩＬ−６産生に対する抑制効果
Ｉｎ ｖｉｖｏ におけるＩＬ−６産生に対する化合物Ａ’の作用を調べるため、マウスにＬＰＳを投与し、血中に炎症性サイトカインが産生させ、化合物Ａ’の作用を評価した。
【００５６】
被験物質である化合物Ａ’は、０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ-Ｎａ）水溶液に懸濁させて０．４ｍｇ／ｍｌの濃度の懸濁液を調製した。また、ＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社）は滅菌蒸留水に溶解させて２ｍｇ／ｍｌの濃度の溶液を調製した。使用するマウスは、４〜８週齢の雄性のＣ５７ＢＬ／６マウスのものを日本チャールス・リバー株式会社から購入し、これらを個別で飼育した。食餌と水は自由に与え、実験に供した。なお、マウスは各実験で１回だけ用いた。
【００５７】
まず、一群各８例の上記マウス（２０ｇ〜２５ｇ）に、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇ（０．２ｍｌ／匹）またはコントロールとして０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液０．２ｍｌを、ＬＰＳ投与の４８時間前、２４時間前に経口投与し、ＬＰＳを一匹あたり０．２ｍｌ腹腔投与した（約１００μｇ）。その直後、再度、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇまたはコントロールとしての０．５重量％ＣＭＣ水溶液０．２ｍｌを経口投与し、ＬＰＳ投与の６時間後に開腹して下大静脈から採血し、得られた血清中のＩＬ−６量をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）にて定量した。
【００５８】
結果を図４に示す。図４に示すように、化合物Ａは血清中のＩＬ−６を有意に抑制することが判明した。
【００５９】
試験例４ 術前投与の手術侵襲後のＩＬ−６産生に対する抑制効果
手術侵襲後の炎症反応に対する化合物Ａの作用を調べるため、マウスにおける胃切開縫合による侵襲モデルを用いた。
【００６０】
被験物質である化合物Ａ’は、０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液に懸濁させて０．４ｍｇ／ｍｌの濃度の懸濁液を調製した。使用するマウスは、４〜８週齢の雄性のＣ５７ＢＬ／６マウスのものを日本チャールス・リバー株式会社から購入し、これらを個別で飼育した。食餌と水は自由に与え、実験に供した。なお、マウスは各実験で１回だけ用いた。
【００６１】
まず、一群各６例の上記マウス（２０ｇ〜２５ｇ）に、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇ（０．２ｍｌ／匹）またはコントロールとして０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液０．２ｍｌを手術の４８時間前、２４時間前に経口投与し、開腹手術を行った。具体的には、各マウスをネンブタール１ｍｇ/匹を腹腔内投与することによって麻酔し、開腹し、胃を切開した。切開された胃に、再度、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇまたはコントロールとしての０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液を０．２ｍｌを胃内に投与し、胃を縫合した後、閉腹した。
【００６２】
上記手術の６時間後に開腹して下大静脈から採血し、得られた血清中のＩＬ−６量をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）にて定量した。
【００６３】
結果を図５に示す。図５に示すように、化合物Ａは侵襲後の血清中のＩＬ−６を有意に抑制し、炎症反応を軽減することが示唆された。
【実施例１】
【００６４】
錠剤の調製：
化合物Ａ’ １０ｇ
乳糖 ３２ｇ
トウモロコシデンプン ７１ｇ
結晶セルロース ３０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ５ｇ
軽質無水ケイ酸 １ｇ
ステアリン酸マグネシウム １ｇ
合計 １５０ｇ
常法に従って、上記各成分を混和し、顆粒状とし、圧縮成型して、１錠１５０ｍｇの錠芯を調製する。次いで、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、酸化チタン、タルク及び軽質無水ケイ酸を用い、常法に従って剤皮を施しフィルムコーティング錠とする。
【実施例２】
【００６５】
２％散剤の調製：
化合物Ａ’ ２０ｇ
Ｄ−マンニトール ９３５ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム １０ｇ
軽質無水ケイ酸 ５ｇ
合計 １０００ｇ
常法に従って、上記各成分を混和し、造粒して２％散剤を調製する。
【実施例３】
【００６６】
注射剤の調製：
ステンレス製容器に注射用水２リットルを入れ、プロピレングリコール２．５ｋｇを加え攪拌機で攪拌し、均一に混合した後、化合物Ａ’ ２６．４５ｇを加え攪拌する。この白濁液に塩酸を徐々に加えて溶解し、最終的にｐＨを３．０に調節し、適量の注射用水を加え全量を５リットルとする。この液をろ過後、このろ液をアンプル充填熔閉機で２ｍｌ無色アンプルに２ｍｌずつ充填、熔閉後、高圧蒸気滅菌機で滅菌（１２１℃、２０分間）し、注射剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明の医薬は、種々の炎症状態や炎症性疾患、例えば、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症等の広範囲の炎症に対して優れた効果を有することが期待できる。
【００６８】
更に、化合物Ａは、消化管運動促進作用を有することから、本発明の抗炎症作用とあいまって、特に、術後イレウスや胃もしくは腸の潰瘍の予防ないし治療に有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１は、ＬＰＳ刺激によるマウス マクロファージ系細胞株におけるＩＬ−６産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図２】図２は、ＬＰＳ刺激によるマウス マクロファージ系細胞株におけるＩＬ−１β産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図３】図３は、化合物Ａ’のＩＬ−６産生抑制効果に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの影響を示す結果である。
【図４】図４は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＬＰＳ刺激によるマウスのＩＬ−６産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図５】図５は、マウスの胃開腹手術後の炎症反応に対する化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤に関するものである。具体的には、４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミドまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は生体がウイルスや細菌に感染したときに、その病原体から生体を防御するために起こる一連の免疫反応であり、侵入した病原体を最初に認識するのは、外来異物の貪食作用をもつ単球やマクロファージ、Ｂ細胞などをはじめとする樹状細胞などである。これらの単球やマクロファージ、樹状細胞が病原体を認識すると、炎症性サイトカインなどの炎症反応に必要な種々のたんぱく質を産生することにより、炎症反応が惹起される。炎症性サイトカインにはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−８などがあり、一方、炎症症状を抑制する機能を持つとされる抗炎症性サイトカインには、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＴＧＦβなどがある。この炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとのバランスが崩れるとアレルギー疾患や自己免疫疾患が起こると考えられている。
【０００３】
ＩＬ−６は１９８６年にヒト遺伝子がクローニングされ（非特許文献１）、活性化Ｂ細胞を抗体産生細胞に分化させる因子として同定された。ＩＬ−６は２１２個のアミノ酸からなる分泌型糖タンパク質であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球などの血球系細胞のみならず、線維芽細胞、血管内皮細胞などさまざまな細胞から産生される。ＩＬ−６は免疫反応において、Ｂ細胞から抗体産生細胞への分化を誘導し、Ｔ細胞のＩＬ−２レセプターの発現誘導と活性化Ｔ細胞からのＩＬ−２産生を促進してＴ細胞の増殖と細胞障害性Ｔ細胞への分化誘導を誘導する。さらに、ＩＬ−６は、ＩＬ−３との協調作用により造血幹細胞を分化誘導するほか、巨核球の分化誘導による血小板増加作用、肝細胞からのＣ−ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）、フィブリノーゲンをはじめとする急性期タンパク質の産生誘導作用をもつ。このように、ＩＬ−６は免疫系だけでなく、造血系、炎症、急性期応答などのさまざまな生体反応に関わる多機能サイトカインであることが明らかになっている（非特許文献２）。
【０００４】
外科手術においては、手術自体が強いストレスとなって生体に過剰な炎症反応を引き起こし、重篤な転帰をたどる危険性がある。過度の侵襲は、上記ＩＬ−６などの炎症性サイトカイン産生を増強させ、全身性炎症反応症候群（Sytemic Inflammatory Response Syndrome、ＳＩＲＳ）を引き起こす。炎症反応を抑制する薬剤としては、ステロイドなどが挙げられるが、副作用が強くまた免疫抑制状態を惹起するなどの側面が問題となる。また、感染により全身性に強い炎症反応が惹起されて重症化する敗血症に対しては未だに十分な治療法が確立されていない。敗血症の状態になると、細菌の菌体成分であるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）が生体に作用し、強烈な炎症反応が引き起こされ、臓器障害に発展し致命傷となる。
【０００５】
また、開腹手術後は腸管の徒手操作（manipulation）によるダメージなどによって炎症反応が惹起され、イレウスの原因となる。さらに、閉塞により腸内容の停滞が細菌の繁殖および全身への転移（translocation）を引き起こし、炎症を助長する。
【０００６】
消化管潰瘍は腸粘膜の損傷であり、炎症を伴う。また、腸管防御の破綻となって、全身性の炎症への波及するおそれがある。
【０００７】
一方、キャッスルマン（Ｃａｔｓｌｅｍａｎ）病（非特許文献３）、慢性関節リウマチ（非特許文献４）、全身性エリテマトーデス（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ（ＳＬＥ））、炎症性腸疾患、特にクローン病（非特許文献５−７）などの自己免疫疾患においても、ＩＬ−６の関与が多数報告されている。
【０００８】
クローン病においては、何らかの外来抗原に対して、単球、マクロファージが活性化され局所免疫反応が生じ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦαなどの炎症性サイトカインが産生されると考えられている。粘膜組織におけるＩＬ−６発現量と内視的な病変のグレードや組織学的な炎症所見が一致することが報告されており、クローン病の活動指標であるＣｒｏｈｎ‘ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ（ＣＤＡＩ）が血清ＩＬ−６とよく相関することも示されている。
【０００９】
キャッスルマン病は、良性のリンパ増殖性疾患でリンパ濾胞の過形成を伴うリンパ節腫大を特徴とするが、形質細胞の浸潤が多数認められる。この疾患患者ではＩＬ−６の過剰産生により説明できる多彩な全身症状や検査異常がしばしば認められる。例えば、ＩＬ−６により高γグロブリン血症や自己抗体の出現、ＣＲＰの亢進、血清アルブミンの低下などがみられる。限局型のＣａｔｓｌｅｍａｎ病患者では、腫大リンパ節の切除により術前高値であった血中ＩＬ−６が低下し、それに伴い倦怠感や食欲低下、体重減少などの全身症状や検査値異常が改善されたという報告がある。
【００１０】
慢性関節リウマチでは、キャッスルマン病と同様に、ＩＬ−６により高γグロブリン血症や自己抗体であるリウマトイド因子の出現、ＣＲＰの亢進、血清アルブミンの低下がみられる。さらにＩＬ−６により破骨細胞が活性化されることがわかっており、破骨細胞活性化により骨吸収が生じ、関節破壊が引き起こされると考えられている。実際、患者の関節液中のＩＬ−６濃度は高値を示し、滑膜組織からのＩＬ−６産生も亢進している。
【００１１】
一方、（±）−４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「モサプリド」ということがある。）は、選択的セロトニン４受容体アゴニストであり、消化管運動促進作用を示す（特許文献１参照）。そして、そのクエン酸塩・２水和物は、慢性胃炎に伴う消化器症状の改善を目的として既に実用化され、日本では「ガスモチン」なる商標名のもとに市販されている。
【００１２】
また、特許文献２においては、モサプリドがインスリン抵抗性改善剤として、有用であることが開示されており、更に、特許文献３では、モサプリドが歯ぎしりの予防剤または治療剤として有用であることが開示されている。
【００１３】
しかしながら、モサプリドにサイトカインの産生を抑制するまたは炎症抑制作用があるとの報告はなされていない。
【非特許文献１】Hirano T. et al:Complementary DNA for novel human interkeukin(BSF-2) that induses B lymphcytes to produce immunoglobulin. Nature 1986年 324 p73-76
【非特許文献２】Hirano T.:Interkeukin 6 and its receptor:ten years later.Int.Rev.Immunol. 1998年 16(3-4) p249-284
【非特許文献３】Yoshizaki K. et al:Pathogenic significance of interkeukin 6 in Castleman’s disease. Blood 1989年 74 p1360-1367
【非特許文献４】Madhok R. et al:Serum interkeukin 6 levels in rheumatoid arthritis:correlations with clinical and laboratory indices of disease activity. Ann Rheum.Dis. 1993年 52:p232-234
【非特許文献５】Reimond JM. et al:Increased production of tumor necrosis factor-α,interkeukin-1β,and interkeukin 6 by morphologically normal intestinal biopsies from patients with Crohn’s disease. Gut 1996年 39:ｐ684-689
【非特許文献６】Kosugammi K、et al:Elevation of interkeukin 6 in inflammatory bowel disdease is macrophage- and epithelial cell-dependent. Dig.Dis.Sci. 1995年 40:ｐ949-959、.
【非特許文献７】Reinisch W．et al:Clinical relevance of serum interkeukin 6 in Crohn‘s disease:single point measurements、therapy monitoring、and prediction of clinical relapse. Am.J.Gastroenterol. 1999年 94(8):2156-2164
【特許文献１】米国特許第４，８７０，０７４号公報
【特許文献２】国際公開第０２／７６４６２号パンフレット
【特許文献３】特開２００５−９７２７７公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、炎症状態または炎症性疾患の治療または予防のための優れた医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、種々検討の結果、全く意外にもクエン酸モサプリドが炎症性サイトカイン、具体的には、インターロイキン１β（ＩＬ-１β）やインローロイキン６（ＩＬ-６）等の炎症性サイトカイン、特にＩＬ−６の産生を抑制することを見いだした。即ち、クエン酸モサプリドを有効成分とする医薬を投与することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制することができ、炎症状態または炎症性疾患の予防または治療に優れた作用を示すことが判明した。更に、この作用は、セロトニン４受容体を介していないものであることが判明し、クエン酸モサプリドの新規な作用であることを見出して、本発明を完成した。
【００１６】
即ち、本発明によれば、モサプリドまたはその塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤、または、モサプリドまたはその塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬を提供するものである。本発明においてはこれらを総称して「本発明の医薬」ということがある。
【００１７】
具体的には、
項１： ４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【００１８】
項２： 炎症状態または炎症性疾患が、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症である項１記載の予防または治療剤。
【００１９】
項３： 炎症状態または炎症性疾患が、炎症性サイトカインに起因するものである項１または２記載の予防または治療剤。
【００２０】
項４： 炎症性サイトカインがＩＬ−１またはＩＬ−６である項３記載の予防または治療剤。
【００２１】
項５： 炎症性サイトカインがＩＬ−６である項４記載の予防または治療剤。
【００２２】
項６： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする術後イレウスの予防または治療剤。
【００２３】
項７： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする胃若しくは腸の潰瘍の予防または治療剤。
【００２４】
項８： 化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の医薬は、炎症性サイトカイン、特にＩＬ−６の産生を抑制する作用を有することから、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症、深在性真菌症等の広範囲の炎症に対して優れた効果を有することが期待できる。
【００２６】
更に、化合物Ａは、消化管運動促進作用を有することから、本発明の抗炎症作用とあいまって、特に、術後イレウスや胃もしくは腸の潰瘍の予防ないし治療に有効であると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩
本発明にかかわる化合物Ａ、即ち、４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミドは、下記式：
【００２８】
【化１】
【００２９】
で表される化合物である。本発明にかかわる化合物Ａはラセミ体であっても、又は一方の光学活性体であってもよいが、ラセミ体が好適である。
【００３０】
また、化合物Ａはフリー体であってもよいし、その生理学的に許容される塩であってもよい。塩としては好ましくは酸付加塩がよい。たとえば有機酸の付加塩としては、ギ酸塩、酢酸塩、乳酸塩、アジピン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、マレイン酸塩等が挙げられ、無機酸の付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等が例示できる。この中でも特にクエン酸塩が好ましい。さらに、化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、溶媒和物であってもよく、水和物および非水和物であってもよい。好ましくはクエン酸塩の水和物がよく、とりわけクエン酸塩・２水和物が好ましい。
【００３１】
上記化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、例えば、特許文献１に記載の方法またはこれに準じる方法によって製造することができる。
【００３２】
炎症性サイトカインとは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子として関与するサイトカインであり、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−８などが挙げられる。化合物Ａは、以下の試験例に示すように、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、特にＩＬ−６の産生を抑制する。従って、以下に示すように炎症状態または炎症性疾患の予防または治療に有用である。
【００３３】
また、本発明に関わる炎症状態または炎症性疾患とは、炎症を伴う状態または疾患であり、特に上記サイトカインの濃度が血中で高くなる状態または疾患である。例えば、炎症状態の例示としては、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、敗血症を含む全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍が挙げられ、炎症性疾患としては、感染性胃腸炎、クローン病,潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症、深在性真菌症等が挙げられるが、上記サイトカインが関与している疾患であれば、これらに限定されず、広範囲の炎症状態または疾患を意味する。また、炎症状態と炎症性疾患とは明確に区別されるものではない。本発明においては、治療には改善も含まれる。
【００３４】
本発明の医薬は、特に、炎症状態の予防または治療に有用である。
【００３５】
本発明の医薬を投与する対象物は、ヒトまたは動物である。本発明の医薬は特にヒトにおける予防又は治療に有用である。
【００３６】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩は、通常、医薬用担体と混合して調製した医薬組成物の形で医薬として適用される。本発明の医薬の投与経路は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。その剤形は、投与経路に応じて適宜選択される。投与量（有効成分量）は、特に限定されず病態やその進行状況、その他の条件（投与する対象の種類、症状、年齢、体重、性別、合併症、投与時間、投与方法、剤型、感受性差等）によって異なるが、例えば、注射液、輸液、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、腸溶剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、外用液剤、湿布剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤、坐剤、経腸栄養剤などが挙げられる。
【００３７】
注射剤の形で投与する場合には、静脈内（点滴を含む）、腹腔内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、滑液嚢内、胞膜内、骨膜内等に投与することができる。
【００３８】
本発明においては、特に経口投与又は静脈内投与が好ましい。
【００３９】
本発明の医薬の投与量は、投与の目的や投与対象者の状況（性別、年齢、体重など）に応じて異なる。通常、成人に対して、化合物Ａ（フリー体）換算で、経口投与の場合、１日あたり５ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇ、一方、非経口投与の場合、１日あたり０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜３０ｍｇで投与され得る。
【００４０】
医薬用担体としては、医薬分野において常用され、かつ化合物Ａと反応しない物質が用いられ、例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤などの医薬の製剤技術分野において通常用いられる補助剤が用いられる。
【００４１】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤の製造に用いられる医薬用担体の具体例としては、乳糖、トウモロコシデンプン、白糖、マンニトール、硫酸カルシウム、結晶セルロースのような賦形剤、カルメロースナトリウム、変性デンプン、カルメロースカルシウムのような崩壊剤、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンのような結合剤、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油のような滑沢剤が挙げられる。錠剤は、カルナウバロウ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、ヒドロキシプロピルメチルフタレート、セルロースアセテートフタレート、白糖、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、リン酸カルシウムのようなコーティング剤を用い、周知の方法でコーティングしてもよい。消化管運動促進薬として販売されている錠剤、散剤等を本発明の医薬として適用することもできる。
【００４２】
坐剤の基剤の具体例としては、カカオ脂、飽和脂肪酸グリセリンエステル、グリセロゼラチン、マクロゴールが挙げられる。坐剤製造にあたっては、必要に応じて界面活性剤、保存剤等を添加することができる。
【００４３】
注射剤は、通常、化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を注射用蒸留水に溶解して調製してもよいが、必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤等を添加することができる。または、ＷＯ２００４／０９６２２９に記載の方法に従って調製することも可能である。
【００４４】
これらの医薬組成物は、通常、活性成分として化合物Ａを０．０１％以上、例えば０．５〜７０％の割合で含有することができる。これらの医薬組成物はまた、以下に述べる治療上有効な他の物質を含有していてもよい。
【００４５】
以下に、試験例を挙げて本発明の医薬が炎症状態または炎症性疾患に有用であることについて説明する。なお、試験中使用した化合物Ａ’は化合物Ａのクエン酸二水和物であって、大日本住友製薬株式会社製のものを使用した。
【００４６】
試験例１ マウス マクロファージ系細胞株におけるサイトカイン産生抑制作用
被験物質として、化合物Ａ’５．１ｍｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）０．１０２ｍｌに溶解させ、１０％ＦＢＳを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ‘ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＳＩＧＭＡ社、ＤＭＥＭ）を使用して、所望の濃度に希釈した。ただし、化合物Ａ’を溶解しているＤＭＳＯの最終濃度が０．１％以下になるように希釈した。コントロールとしてＤＭＳＯを用いた（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈して最終濃度が０．１％となるように調製）。
【００４７】
プラスティック製９６ウエルプレート（ＩＷＡＫＩ社）に、マウス マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７細胞（大日本住友製薬株式会社ラボラトリープロダクツ部）を２×１０４個／１００μｌ（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）（ＳＩＧＭＡ社））／ウエルになるように播種し、一晩培養した（３７℃および５％ＣＯ２／９５％空気下）。
【００４８】
一晩培養後、細胞が付着した状態で培養上清を除き、各ウエルに化合物Ａ’をその最終濃度が０．０３μｇ／ｍｌ〜３０μｇ／ｍｌになるように添加し（１００μｌ）、約１５分後に最終濃度が３μｇ／ｍｌになるようにＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈）を添加した（１００μｌ）。その後、約２４時間上記と同条件で培養後、各ウエルから培養上清１００μｌを採取し、上清中のＩＬ−６およびＩＬ−１βの産生量をＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（各々、ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社およびＲ＆Ｄ社）により定量した。
【００４９】
結果を図１及び図２に示す。ＬＰＳを添加したウエル（ＬＰＳ）のサイトカイン産生量を１００％、ＬＰＳを添加しなかったウエル（コントロール）のサイトカイン産生量を０％として化合物Ａの阻害活性を評価した。化合物添加群については、各濃度２ウエルの平均値を示した。
【００５０】
図１（ＩＬ−６）及び図２（ＩＬ−1β）に示す結果より、化合物Ａは、ＩＬ−６およびＩＬ−１βの産生を濃度依存的に抑制した。
【００５１】
試験例２ 化合物ＡのＩＬ−６産生抑制効果に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの影響
試験例１と同様にして、プラスティック製９６ウエルプレート（ＩＷＡＫＩ社）に、細胞株ＲＡＷ２６４．７細胞を２×１０４個／１００μｌ／ウエルになるように播種し、一晩培養後（３７℃および５％ＣＯ２／９５％空気下）、培養上清を除き、各ウエルに化合物Ａ’を最終濃度が１０μｇ／ｍｌになるように（５０μｌ）、及び、５−ＨＴ４アンタゴニストとして知られている（ＷＯ９３／１８０３６）Ｎ−［（１−ブチルー４−ピペリジニル）メチル］−３，４−ジヒドロー２Ｈ-［１，３］オキサジノ［３，２−ａ］インドール−１０−カルボキサイミドの塩酸塩（N- [(1- butyl- 4- piperidinyl)methyl]- 3,4- dihydro- 2H- [1,3]oxazino[3,2- a]indole- 10- carboxamide hydrochloride）をその最終濃度が０．０１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌになるように添加し（５０μｌ）、３０分後に最終濃度３μｇ／ｍｌになるようにＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社）を添加した（１００μｌ）。なお、化合物Ａ’および５−ＨＴ４アンタゴニストはＤＭＳＯで溶解された後、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて希釈し、化合物Ａ’および５−ＨＴ４アンタゴニストを溶解しているＤＭＳＯの最終濃度が０．１％以下になるように調製した。コントロールとしてＤＭＳＯを添加した（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで希釈して最終濃度が０．１％となるように調製）。
【００５２】
その後、約２４時間後、上記と同条件で培養後、各ウエルから培養上清を採取し（１００μｌ）、上清中のＩＬ−６の産生量をＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）により定量した。
【００５３】
結果を図３に示す。ＬＰＳを添加したウエル（ＬＰＳ）のサイトカイン産生量を１００％、ＬＰＳを添加しなかったウエル（コントロール）のサイトカイン産生量を０％として化合物Ａ’の阻害活性に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの作用を評価した。
【００５４】
図３の結果が示すように、５−ＨＴ４アンタゴニストは化合物Ａ’のＩＬ−６産生抑制効果に対して影響を及ぼさなかった。このことから、化合物ＡのＩＬ−６産生抑制効果は５−ＨＴ４を介した作用ではないことが示唆された。
【００５５】
試験例３ ｉｎ ｖｉｖｏ ＬＰＳ投与モデルにおける化合物ＡのＩＬ−６産生に対する抑制効果
Ｉｎ ｖｉｖｏ におけるＩＬ−６産生に対する化合物Ａ’の作用を調べるため、マウスにＬＰＳを投与し、血中に炎症性サイトカインが産生させ、化合物Ａ’の作用を評価した。
【００５６】
被験物質である化合物Ａ’は、０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ-Ｎａ）水溶液に懸濁させて０．４ｍｇ／ｍｌの濃度の懸濁液を調製した。また、ＬＰＳ（E.Coli O55:B5 、ＳＩＧＭＡ社）は滅菌蒸留水に溶解させて２ｍｇ／ｍｌの濃度の溶液を調製した。使用するマウスは、４〜８週齢の雄性のＣ５７ＢＬ／６マウスのものを日本チャールス・リバー株式会社から購入し、これらを個別で飼育した。食餌と水は自由に与え、実験に供した。なお、マウスは各実験で１回だけ用いた。
【００５７】
まず、一群各８例の上記マウス（２０ｇ〜２５ｇ）に、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇ（０．２ｍｌ／匹）またはコントロールとして０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液０．２ｍｌを、ＬＰＳ投与の４８時間前、２４時間前に経口投与し、ＬＰＳを一匹あたり０．２ｍｌ腹腔投与した（約１００μｇ）。その直後、再度、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇまたはコントロールとしての０．５重量％ＣＭＣ水溶液０．２ｍｌを経口投与し、ＬＰＳ投与の６時間後に開腹して下大静脈から採血し、得られた血清中のＩＬ−６量をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）にて定量した。
【００５８】
結果を図４に示す。図４に示すように、化合物Ａは血清中のＩＬ−６を有意に抑制することが判明した。
【００５９】
試験例４ 術前投与の手術侵襲後のＩＬ−６産生に対する抑制効果
手術侵襲後の炎症反応に対する化合物Ａの作用を調べるため、マウスにおける胃切開縫合による侵襲モデルを用いた。
【００６０】
被験物質である化合物Ａ’は、０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液に懸濁させて０．４ｍｇ／ｍｌの濃度の懸濁液を調製した。使用するマウスは、４〜８週齢の雄性のＣ５７ＢＬ／６マウスのものを日本チャールス・リバー株式会社から購入し、これらを個別で飼育した。食餌と水は自由に与え、実験に供した。なお、マウスは各実験で１回だけ用いた。
【００６１】
まず、一群各６例の上記マウス（２０ｇ〜２５ｇ）に、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇ（０．２ｍｌ／匹）またはコントロールとして０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液０．２ｍｌを手術の４８時間前、２４時間前に経口投与し、開腹手術を行った。具体的には、各マウスをネンブタール１ｍｇ/匹を腹腔内投与することによって麻酔し、開腹し、胃を切開した。切開された胃に、再度、一匹あたり化合物Ａ’を０．０８ｍｇまたはコントロールとしての０．５重量％ＣＭＣ-Ｎａ水溶液を０．２ｍｌを胃内に投与し、胃を縫合した後、閉腹した。
【００６２】
上記手術の６時間後に開腹して下大静脈から採血し、得られた血清中のＩＬ−６量をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）にて定量した。
【００６３】
結果を図５に示す。図５に示すように、化合物Ａは侵襲後の血清中のＩＬ−６を有意に抑制し、炎症反応を軽減することが示唆された。
【実施例１】
【００６４】
錠剤の調製：
化合物Ａ’ １０ｇ
乳糖 ３２ｇ
トウモロコシデンプン ７１ｇ
結晶セルロース ３０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ５ｇ
軽質無水ケイ酸 １ｇ
ステアリン酸マグネシウム １ｇ
合計 １５０ｇ
常法に従って、上記各成分を混和し、顆粒状とし、圧縮成型して、１錠１５０ｍｇの錠芯を調製する。次いで、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、酸化チタン、タルク及び軽質無水ケイ酸を用い、常法に従って剤皮を施しフィルムコーティング錠とする。
【実施例２】
【００６５】
２％散剤の調製：
化合物Ａ’ ２０ｇ
Ｄ−マンニトール ９３５ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム １０ｇ
軽質無水ケイ酸 ５ｇ
合計 １０００ｇ
常法に従って、上記各成分を混和し、造粒して２％散剤を調製する。
【実施例３】
【００６６】
注射剤の調製：
ステンレス製容器に注射用水２リットルを入れ、プロピレングリコール２．５ｋｇを加え攪拌機で攪拌し、均一に混合した後、化合物Ａ’ ２６．４５ｇを加え攪拌する。この白濁液に塩酸を徐々に加えて溶解し、最終的にｐＨを３．０に調節し、適量の注射用水を加え全量を５リットルとする。この液をろ過後、このろ液をアンプル充填熔閉機で２ｍｌ無色アンプルに２ｍｌずつ充填、熔閉後、高圧蒸気滅菌機で滅菌（１２１℃、２０分間）し、注射剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明の医薬は、種々の炎症状態や炎症性疾患、例えば、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群（敗血症を含む）、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症等の広範囲の炎症に対して優れた効果を有することが期待できる。
【００６８】
更に、化合物Ａは、消化管運動促進作用を有することから、本発明の抗炎症作用とあいまって、特に、術後イレウスや胃もしくは腸の潰瘍の予防ないし治療に有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１は、ＬＰＳ刺激によるマウス マクロファージ系細胞株におけるＩＬ−６産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図２】図２は、ＬＰＳ刺激によるマウス マクロファージ系細胞株におけるＩＬ−１β産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図３】図３は、化合物Ａ’のＩＬ−６産生抑制効果に対する５−ＨＴ４アンタゴニストの影響を示す結果である。
【図４】図４は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＬＰＳ刺激によるマウスのＩＬ−６産生の化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【図５】図５は、マウスの胃開腹手術後の炎症反応に対する化合物Ａ’の抑制作用を示す結果である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【請求項２】
炎症状態または炎症性疾患が、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症である請求項１記載の予防または治療剤。
【請求項３】
炎症状態または炎症性疾患が、炎症性サイトカインに起因するものである請求項１または２記載の予防または治療剤。
【請求項４】
炎症性サイトカインがインターロイキン１（ＩＬ−１）またはインターロイキン６（ＩＬ−６）である請求項３記載の予防または治療剤。
【請求項５】
炎症性サイトカインがＩＬ−６である請求項４記載の予防または治療剤。
【請求項６】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする術後イレウスの予防または治療剤。
【請求項７】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする胃若しくは腸の潰瘍の予防または治療剤。
【請求項８】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬。
【請求項１】
４−アミノ−５−クロロ−２−エトキシ−Ｎ−［［４−（４−フルオロベンジル）−２−モルホリニル］メチル］ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」という）またはその生理学的に許容される塩を有効成分とする炎症状態または炎症性疾患の予防または治療剤。
【請求項２】
炎症状態または炎症性疾患が、炎症を伴う術後イレウス、汎発性腹膜炎、高度侵襲手術後の炎症、全身性炎症反応症候群、胃若しくは腸の潰瘍、感染性胃腸炎、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、全身性エリテマトーデス、重症感染症または深在性真菌症である請求項１記載の予防または治療剤。
【請求項３】
炎症状態または炎症性疾患が、炎症性サイトカインに起因するものである請求項１または２記載の予防または治療剤。
【請求項４】
炎症性サイトカインがインターロイキン１（ＩＬ−１）またはインターロイキン６（ＩＬ−６）である請求項３記載の予防または治療剤。
【請求項５】
炎症性サイトカインがＩＬ−６である請求項４記載の予防または治療剤。
【請求項６】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする術後イレウスの予防または治療剤。
【請求項７】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とする胃若しくは腸の潰瘍の予防または治療剤。
【請求項８】
化合物Ａまたはその生理学的に許容される塩を有効成分とするＩＬ−６産生抑制薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００８−３０３１７１（Ｐ２００８−３０３１７１Ａ）
【公開日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１５１７０８（Ｐ２００７−１５１７０８）
【出願日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月７日（２００７．６．７）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
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