本発明は、炎症によって誘導された、血液脳関門機能における初期の動的変化を起こしている脳微小血管内皮細胞で、その発現が変調されている新規の核酸、及びそれによってコードされているポリペプチドに関する。本明細書では、そのようなポリペプチドを、リポ多糖感応性（ＬＰＳＳ）のポリペプチドと呼ぶ。これらの核酸及びポリペプチドは、そのような生物作用を必要とする哺乳動物における血液脳関門特性を制御する方法において有用となりうる。これには、血液−脳／網膜関門における障害、（眼を含めた）脳の障害、及び末梢血管症害の診断及び治療が含まれる。加えて、本発明は、抗ＬＰＳＳポリペプチド性の抗体又はリガンドの診断プローブ、脳血液関門標的指向剤、又は治療薬としての使用、及び、ＬＰＳＳポリペプチドのリガンド、又は発現、活性化、若しくは生理活性の変調因子の診断プローブ、治療薬、又は薬物送達促進物質としての使用にも関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを、内皮細胞中で改変するステップを含む、内皮細胞の透過性を変調する方法。
【請求項２】
前記ＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常レベルが、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現レベルを調節することによって改変される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
配列番号２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１９、２０、２３、２４、及び２５に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常レベルを増加させることによって、内皮細胞の透過性を低下させる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列が、前記ヌクレオチド配列の内皮細胞中での発現を推進できるプロモーターによる制御下にある、発現ベクターを内皮細胞に導入することによって増加させる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び２１に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを低下させることによって、内皮細胞の透過性を低下させる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制できるアンチセンスヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンスヌクレオチド配列が、前記アンチセンスヌクレオチド配列の内皮細胞中での発現を推進できるプロモーターによる制御下にある、発現ベクターを前記内皮細胞に導入することによって低下させる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び２１に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを増加させることによって、内皮細胞の透過性を増加させる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
前記ＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列が、前記ヌクレオチド配列の内皮細胞中での発現を推進できるプロモーターによる制御下にある、発現ベクターを内皮細胞に導入することによって増加させる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
配列番号２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１９、２０、２３、２４、及び２５に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを低下させることによって、内皮細胞の透過性を増加させる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＬＰＳＳポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制できるアンチセンスヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンスヌクレオチド配列が、前記アンチセンスヌクレオチド配列の内皮細胞中での発現を推進できるプロモーターによる制御下にある、発現ベクターを前記内皮細胞に導入することによって低下させる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記内皮細胞が微小血管系細胞、好ましくは脳微小血管系細胞である、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
対象の微小血管内皮細胞において、配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチドの活性、又は定常状態レベルを薬理学的に改変することを含み、前記改変が、前記微小血管透過性変性障害の症候を軽減するのに十分である、対象の微小血管透過性変性障害を治療又は予防する方法。
【請求項１３】
配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む医薬組成物を、対象に治療有効量投与するステップを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが、配列番号２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１９、２０、２３、２４、及び２５に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記核酸分子が遺伝子療法ベクターであり、遺伝子療法ベクター中で、前記ヌクレオチド配列が、前記ヌクレオチド配列の発現を内皮細胞中、好ましくは微小血管内皮細胞中で推進できるプロモーターによって制御されている、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び２１に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドのアンタゴニストを含む医薬組成物を、対象に治療有効量投与するステップを含み、好ましくは、前記アンタゴニストが前記ポリペプチドに対する抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び２１に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制できるアンチセンスヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンスヌクレオチド配列が、前記アンチセンスヌクレオチド配列の発現を、内皮細胞中、好ましくは微小血管内皮細胞中で推進できるプロモーターによって、制御されている、遺伝子療法ベクターを含む医薬組成物を対象に治療有効量投与するステップを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記微小血管透過性障害が、脳血管症害（ＣＶＡ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管関連痴呆、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ウシスポンジ様脳症（ＢＳＥ）、パーキンソン病（ＰＤ）、脳損傷、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病などの神経変性障害；敗血性ショック、肝性脳症、（糖尿病性）高血圧、糖尿病性微小血管症、睡眠病、ホイップル疾患、デュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、アスパルチルグリコサミン尿症、コレステロールエステル貯蔵病、ウォルマン病、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー脂肪肉芽腫症、ファーバー病、フコース蓄積症、ガラクトシアリドーシスＩ／ＩＩ型、ゴーシェ病Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ型、ゴーシェ病、球型細胞性白質ジストロフィー、クラッベ病、糖原病ＩＩ型、ポンペ病、ＧＭ１ガングリオシドーシスＩ／ＩＩ／ＩＩＩ型、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型、テイ・サックス病、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型、サンドホフ病、ＧＭ２ガングリオシドーシス、α−マンノシドーシスＩ／ＩＩ型、マンノシドーシス、異染性白質ジストロフィー、ムコリピド症Ｉ型、シアリドーシスＩ／ＩＩ型、ムコリピド症ＩＩ／ＩＩＩ型、Ｉ細胞病、ムコリピド症タイプＩＩＩＣ、偽ハーラー多発性ジストロフィー、ムコ多糖症Ｉ型、ムコ多糖症ＩＩ型、ハンター症候群、ムコ多糖症ＩＩＩＡ型、サンフィリポ症候群、ムコ多糖症ＩＩＩＢ型、ムコ多糖症ＩＩＩＣ型、ムコ多糖症ＩＩＩＤ型、ムコ多糖症ＩＶＡ型、モルキオ症候群、ムコ多糖症ＩＶＢ型、モルキオ症候群、ムコ多糖症ＶＩ型、ムコ多糖症ＶＩＩ型、スライ症候群、ムコ多糖症ＩＸ型、多種スルファターゼ欠損症、ニューロンセロイド脂褐素症、ＣＬＮ１バッテン病、ニーマン・ピック病Ａ／Ｂ型、ニーマン・ピック病、ニーマン・ピック病Ｃ１型、ニーマン・ピック病Ｃ２型、ピクノディソストーシス、シンドラー疾患タイプＶＩＩ、シンドラー病、シアル酸貯蔵病、子癇、及び子癇前症などのＣＮＳ要素を有する末梢障害；うつ病、自閉症、不安、注意欠如多動性障害（ＡＤＨＤ）、神経精神性全身性紅斑性狼瘡、双極性障害、統合失調症、及び他の精神病などの神経精神障害；脳腫瘍、癲癇、偏頭痛、ナルコレプシー、不眠、慢性疲労症候群、高山病、脳炎、髄膜炎、及びエイズ関連痴呆などの他のＣＮＳ障害；並びに、血管腫瘍、増殖性硝子体網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、アテローム硬化症、卵巣過刺激、乾癬、新生血管形成に関連した子宮内膜症、バルーン血管形成後の再狭窄、瘢痕組織過剰生産、末梢血管疾患、高血圧、炎症性血管炎、レイノー病、レイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、静脈血栓症、リンパ管炎、リンパ水腫、創傷治癒、組織修復、虚血性再潅流損傷、狭心症、心筋梗塞、心臓慢性症状、鬱血性心不全などの心不全、加齢性黄斑変性、及び骨粗鬆症などの血管形成関連障害から成る群より選択される、請求項１２から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は、前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む医薬組成物を、微小血管透過性を増加させるのに有効な量、対象に投与するステップを含む、対象における微小血管透過性を可逆的に増加させる方法。
【請求項２０】
前記ＬＰＳＳポリペプチドが、配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び２１に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記核酸分子が遺伝子療法ベクターであり、前記遺伝子療法ベクター中で、前記ヌクレオチド配列が、前記ヌクレオチド配列の内皮細胞中での発現を推進できるプロモーターによって制御されている、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
配列番号２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１９、２０、２３、２４、及び２５に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドのアンタゴニストを含む医薬組成物を、対象に治療有効量投与するステップを含み、好ましくは、前記アンタゴニストが前記ポリペプチドに対する抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
配列番号２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１９、２０、２３、２４、及び２５に示すアミノ酸配列から成る群より選択される１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制できるアンチセンスヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンスヌクレオチド配列が、前記アンチセンスヌクレオチド配列の発現を内皮細胞中、好ましくは微小血管内皮細胞中で推進できるプロモーターによって制御されている、遺伝子療法ベクターを含む医薬組成物を、対象に治療有効量投与するステップを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＮＳ又は微小血管系の障害を患っているか、又は発症する危険のある患者に治療薬又は診断薬を投与することによって、ＣＮＳ又は微小血管系の障害を治療又は診断する方法であって、治療薬又は診断薬、或いはその薬学的に許容される担体が標的指向剤に結合され、前記標的指向剤が、配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドに特異的に結合する薬剤である方法。
【請求項２５】
前記ＬＰＳＳポリペプチドが、配列番号２２、１、５、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つ、より好ましくは配列番号２２又は２１に示すアミノ酸配列の１つに対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
対象における微小血管透過性の状態を診断する方法であって、
（ａ）配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに対して、少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドをコードする核酸配列の、対象における微小血管内皮での発現レベルを測定するステップと、
（ｂ）前記核酸配列の発現レベルを、前記核酸配列の発現レベルに関する基準値と比較するステップと
を含み、好ましくは、前記基準値が健康な個体の微小血管内皮での発現レベルの平均値である方法。
【請求項２７】
前記核酸配列の発現レベルが、前記核酸配列によってコードされるＬＰＳＳポリペプチドの量を定量化することによって間接的に測定される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
複数の核酸配列の発現レベルが比較される、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
発現レベルが、対象から得られた試料中でｅｘ ｖｉｖｏに測定される、請求項２６から２８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
微小血管透過性障害を診断する方法、又は微小血管透過性障害に対する罹病性を診断する方法である、請求項２６から２９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記微小血管透過性障害が、脳血管症害（ＣＶＡ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管関連痴呆、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ウシスポンジ様脳症（ＢＳＥ）、パーキンソン病（ＰＤ）、脳損傷、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病などの神経変性障害；敗血性ショック、肝性脳症、（糖尿病性）高血圧、糖尿病性微小血管症、睡眠病、ホイップル疾患、デュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、アスパルチルグリコサミン尿症、コレステロールエステル貯蔵病、ウォルマン病、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー脂肪肉芽腫症、ファーバー病、フコース蓄積症、ガラクトシアリドーシスＩ／ＩＩ型、ゴーシェ病Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ型、ゴーシェ病、球型細胞性白質ジストロフィー、クラッベ病、糖原病ＩＩ型、ポンペ病、ＧＭ１ガングリオシドーシスＩ／ＩＩ／ＩＩＩ型、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型、テイ・サックス病、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型、サンドホフ病、ＧＭ２ガングリオシドーシス、α−マンノシドーシスＩ／ＩＩ型、マンノシドーシス、異染性白質ジストロフィー、ムコリピド症Ｉ型、シアリドーシスＩ／ＩＩ型、ムコリピド症ＩＩ／ＩＩＩ型、Ｉ細胞病、ムコリピド症タイプＩＩＩＣ、偽ハーラー多発性ジストロフィー、ムコ多糖症Ｉ型、ムコ多糖症ＩＩ型、ハンター症候群、ムコ多糖症ＩＩＩＡ型、サンフィリポ症候群、ムコ多糖症ＩＩＩＢ型、ムコ多糖症ＩＩＩＣ型、ムコ多糖症ＩＩＩＤ型、ムコ多糖症ＩＶＡ型、モルキオ症候群、ムコ多糖症ＩＶＢ型、モルキオ症候群、ムコ多糖症ＶＩ型、ムコ多糖症ＶＩＩ型、スライ症候群、ムコ多糖症ＩＸ型、多種スルファターゼ欠損症、ニューロンセロイド脂褐素症、ＣＬＮ１バッテン病、ニーマン・ピック病Ａ／Ｂ型、ニーマン・ピック病、ニーマン・ピック病Ｃ１型、ニーマン・ピック病Ｃ２型、ピクノディソストーシス、シンドラー疾患タイプＶＩＩ、シンドラー病、シアル酸貯蔵病、子癇、及び子癇前症などの、ＣＮＳ要素を有する末梢障害；うつ病、自閉症、不安、注意欠如多動性障害（ＡＤＨＤ）、神経精神性全身性紅斑性狼瘡、双極性障害、統合失調症、及び他の精神病などの神経精神障害；脳腫瘍、癲癇、偏頭痛、ナルコレプシー、不眠、慢性疲労症候群、高山病、脳炎、髄膜炎、及びエイズ関連痴呆などの他のＣＮＳ障害；並びに、血管腫瘍、増殖性硝子体網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、アテローム硬化症、卵巣過刺激、乾癬、新生血管形成に関連した子宮内膜症、バルーン血管形成後の再狭窄、瘢痕組織過剰生産、末梢血管疾患、高血圧、炎症性血管炎、レイノー病、レイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、静脈血栓症、リンパ管炎、リンパ水腫、創傷治癒、組織修復、虚血性再潅流損傷、狭心症、心筋梗塞、心臓慢性症状、鬱血性心不全などの心不全、加齢性黄斑変性、及び骨粗鬆症などの血管形成関連障害から成る群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
微小血管透過性を回復させる治療の有効性を評価する方法である、請求項２６から２９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
微小血管内皮細胞の透過性を変調できる物質を同定する方法であって、
（ａ）配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するＬＰＳＳポリペプチドをコードする、１つ又は複数の核酸を発現できる試験細胞集団を用意するステップと；
（ｂ）試験細胞集団を前記物質に接触させるステップと；
（ｃ）配列番号２２、１〜２１、及び２３〜２５に示すアミノ酸配列の１つに少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列の発現レベルを、前記物質と接触した試験細胞集団で測定するステップと；
（ｄ）前記核酸配列の前記発現を、前記物質に接触していない試験細胞集団における、前記核酸配列の発現レベルと比較するステップと；
（ｅ）前記物質に接触した試験細胞集団と、前記物質に接触していない試験細胞集団との間で、前記核酸配列の発現レベルに相違が生じる物質を同定するステップ
とを含む方法。
【請求項３４】
前記核酸配列の発現レベルが、前記核酸配列によってコードされるＬＰＳＳポリペプチドの量を定量することによって間接的に測定される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
複数の核酸配列の発現レベルが比較される、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項３６】
試験細胞集団が内皮細胞、好ましくは血管内皮細胞、より好ましくは微小血管内皮細胞、最も好ましくは脳微小血管内皮細胞を含む、請求項３３から３５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
試験細胞集団が哺乳類細胞、好ましくはヒト細胞を含む、請求項３３から３６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記物質に接触した試験細胞集団、及び前記物質に接触していない試験細胞集団が、一細胞集団、好ましくは一細胞系、より好ましくは一細胞に由来する、請求項３３から３７までのいずれか一項に記載の方法
【請求項３９】
試験細胞集団がヘルパー細胞集団と共培養され、試験細胞集団がフィルターの片側の面で培養され、ヘルパー細胞集団が前記フィルターの反対側の面で培養され、好ましくは、ヘルパー細胞集団が星状細胞を含む、請求項３３から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
請求項３３から３９までのいずれか一項に記載の方法で同定された物質。

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【公表番号】特表２００７−５２８６９８（Ｐ２００７−５２８６９８Ａ）
【公表日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０２７４０（Ｐ２００６−５０２７４０）
【出願日】平成１６年２月１０日（２００４．２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００４／００００９２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９８７０
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０５３００５９７）ティオー　−　ビービービー　ホールディング　ベスローテン　フェンノートシャップ (1)
【Ｆターム（参考）】