炭水化物オキシダーゼ
本発明は、変異体炭水化物オキシダーゼに関する。本発明はまた当該変異体炭水化物オキシダーゼをコードするポリヌクレオチド、並びに核酸構成物、ベクター、及び当該ポリヌクレオチドを含んで成る宿主細胞、並びに当該変異体酵素の、例えばドウの調製及びドウ製品組成物における使用方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：２の下記の位置 ４、15、19、21、22、27、29、30、31、43、48、52、54、57、58、59、60、62、69、70、71、72、77、80、81、85、91、93、98、105、112、114、118、122、129、130、131、132、133、134、135、138、140、146、147、148、152、153、157、169、170、174、184、188、201、213、221、222、223、224、227、228、231、235、248、249、250、251、252、253、256、258、260、268、278、287、288、300、301、302、303、304、305、307、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、327、330、332、342、347、349、352、353、354、355、356、357、358、363、366、368、374、382、383、385、386、387、388、389、390、391、392、393、400、403、411、415、419、420、424、425、427、428、429、433、437、440、445、456、460、472、及び／又は473 に対応する１又は複数の位置に置換を含む単離された変異体炭水化物オキシダーゼにおいて、当該変異体炭水化物オキシダーゼが、配列番号：２のアミノ酸配列又は配列番号：１によりコードされる成熟ポリペプチドに対して少なくとも60％の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成り、そして炭水化物オキシダーゼ活性を有することを特徴とする単離された変異体炭水化物オキシダーゼ。
【請求項２】
前記変異体が、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列又は配列番号：１によりコードされる成熟ポリペプチドに対して少なくとも65％の同一性、好ましくは少なくとも70％の同一性、 少なくとも75％の同一性、少なくとも80％の同一性、少なくとも85％の同一性、少なくとも90％の同一性、少なくとも95％の同一性、少なくとも96％の同一性、少なくとも97％の同一性、少なくとも98％の同一性又は少なくとも99％の同一性を有する、アミノ酸配列を含むポリペプチドであり；或いは
（ｂ）配列番号：１の成熟ポリペプチドコード配列またはその相補鎖と、中ストリンゼント条件、好ましくは中−高ストリンゼント条件又は高ストリンゼント条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；或いは
（ｃ）配列番号：１の成熟ポリペプチドコード配列に対して少なくとも60％の同一性、好ましくは少なくとも70％の同一性、 少なくとも75％の同一性、少なくとも80％の同一性、少なくとも85％の同一性、少なくとも90％の同一性、少なくとも95％の同一性、少なくとも96％の同一性、少なくとも97％の同一性、少なくとも98％の同一性又は少なくとも99％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで成るポリヌクレオチドによりコードされてポリペプチド、
である、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記変異体が親炭水化物オキシダーゼの変異体であり、当該親炭水化物オキシダーゼが配列番号：２のアミノ酸配列を有するポリペプチドから成るか又は当該ポリペプチドを含んで成る、請求項１又は２に記載の変異体。
【請求項４】
番号付けのために配列番号：２を用いて、位置：15、22、27、54、98、188、201、222及び460の１又は複数の位置に置換を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項５】
置換：D15N、Y22W、E27R、Q54D、N98D、K188R、K201R、N222D、及び／又はT460Eの１又は複数を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項６】
変異体酵素が、親炭水化物オキシダーゼに比べて１又は複数の改良された性質を有し、当該改良された性質が、熱的活性、熱安定性、pH活性、pH安定性、基質特異性、生産物特異性及び化学的安定性から成る群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項７】
高いpH又は高温において改良された安定性を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体をコードする単離されたヌクレオチド配列。
【請求項９】
請求項８に記載のヌクレオチド配列を含んで成る組換え宿主細胞。
【請求項１０】
変異体炭水化物オキシダーゼの製造方法において、
（ａ）当該変異体炭水化物オキシダーゼの発現に適切な条件下で、請求項９に記載の宿主細胞を培養し；そして
（ｂ）培養物から当該炭水化物オキシダーゼを回収する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体をドウに添加することを含んで成る、ドウの調製方法。
【請求項１２】
前記ドウを焼くことを更に含んで成る請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の炭水化物オキシダーゼ及び食用粉を含んで成るドウ組成物。
【請求項１】
配列番号：２の下記の位置 ４、15、19、21、22、27、29、30、31、43、48、52、54、57、58、59、60、62、69、70、71、72、77、80、81、85、91、93、98、105、112、114、118、122、129、130、131、132、133、134、135、138、140、146、147、148、152、153、157、169、170、174、184、188、201、213、221、222、223、224、227、228、231、235、248、249、250、251、252、253、256、258、260、268、278、287、288、300、301、302、303、304、305、307、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、327、330、332、342、347、349、352、353、354、355、356、357、358、363、366、368、374、382、383、385、386、387、388、389、390、391、392、393、400、403、411、415、419、420、424、425、427、428、429、433、437、440、445、456、460、472、及び／又は473 に対応する１又は複数の位置に置換を含む単離された変異体炭水化物オキシダーゼにおいて、当該変異体炭水化物オキシダーゼが、配列番号：２のアミノ酸配列又は配列番号：１によりコードされる成熟ポリペプチドに対して少なくとも60％の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成り、そして炭水化物オキシダーゼ活性を有することを特徴とする単離された変異体炭水化物オキシダーゼ。
【請求項２】
前記変異体が、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列又は配列番号：１によりコードされる成熟ポリペプチドに対して少なくとも65％の同一性、好ましくは少なくとも70％の同一性、 少なくとも75％の同一性、少なくとも80％の同一性、少なくとも85％の同一性、少なくとも90％の同一性、少なくとも95％の同一性、少なくとも96％の同一性、少なくとも97％の同一性、少なくとも98％の同一性又は少なくとも99％の同一性を有する、アミノ酸配列を含むポリペプチドであり；或いは
（ｂ）配列番号：１の成熟ポリペプチドコード配列またはその相補鎖と、中ストリンゼント条件、好ましくは中−高ストリンゼント条件又は高ストリンゼント条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；或いは
（ｃ）配列番号：１の成熟ポリペプチドコード配列に対して少なくとも60％の同一性、好ましくは少なくとも70％の同一性、 少なくとも75％の同一性、少なくとも80％の同一性、少なくとも85％の同一性、少なくとも90％の同一性、少なくとも95％の同一性、少なくとも96％の同一性、少なくとも97％の同一性、少なくとも98％の同一性又は少なくとも99％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで成るポリヌクレオチドによりコードされてポリペプチド、
である、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記変異体が親炭水化物オキシダーゼの変異体であり、当該親炭水化物オキシダーゼが配列番号：２のアミノ酸配列を有するポリペプチドから成るか又は当該ポリペプチドを含んで成る、請求項１又は２に記載の変異体。
【請求項４】
番号付けのために配列番号：２を用いて、位置：15、22、27、54、98、188、201、222及び460の１又は複数の位置に置換を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項５】
置換：D15N、Y22W、E27R、Q54D、N98D、K188R、K201R、N222D、及び／又はT460Eの１又は複数を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項６】
変異体酵素が、親炭水化物オキシダーゼに比べて１又は複数の改良された性質を有し、当該改良された性質が、熱的活性、熱安定性、pH活性、pH安定性、基質特異性、生産物特異性及び化学的安定性から成る群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項７】
高いpH又は高温において改良された安定性を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体をコードする単離されたヌクレオチド配列。
【請求項９】
請求項８に記載のヌクレオチド配列を含んで成る組換え宿主細胞。
【請求項１０】
変異体炭水化物オキシダーゼの製造方法において、
（ａ）当該変異体炭水化物オキシダーゼの発現に適切な条件下で、請求項９に記載の宿主細胞を培養し；そして
（ｂ）培養物から当該炭水化物オキシダーゼを回収する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体をドウに添加することを含んで成る、ドウの調製方法。
【請求項１２】
前記ドウを焼くことを更に含んで成る請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の炭水化物オキシダーゼ及び食用粉を含んで成るドウ組成物。
【公表番号】特表２０１３−５００００４（Ｐ２０１３−５００００４Ａ）
【公表日】平成２５年１月７日（２０１３．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２０９９５（Ｐ２０１２−５２０９９５）
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９９３９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００９７４７
【国際公開日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年１月７日（２０１３．１．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５９９３９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００９７４７
【国際公開日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
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