球状化されたポリマー粒子
液体媒体で非球状の粒子を加熱することによって、非球状の粒子から球状のポリマー粒子を生成するための方法を開示する。また本明細書には、任意選択で界面活性剤および／または他の添加剤を含む、加熱した液体媒体において非球状のポリマー粒子を攪拌することによって、非球状のポリマー粒子を球状にする方法を開示する。これらの方法を用いて、ポリマー材料および最終生成物における残留モノマーレベルを低減することもできる。さらに、これらの方法を、ポリマー、およびポリマーに埋め込まれた１つまたは複数の第２の成分を含むポリマー粒子とともに用いることもできる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００６年１０月３１日に出願された、米国仮特許出願第６０／８５５，５５１号の優先権の利益を主張し、この出願をその全体を参考として本明細書中で援用する。
【背景技術】
【０００２】
背景
ポリマー粒子には多数の使用がある。ポリマー粒子は、薬物の送達および作用のタイミング、部位、および放出のプロファイルに影響を及ぼすために、薬物およびワクチンの担体として医薬の設定で用いることができる。ポリマー粒子は、診断の補助として用いて撮像剤および造影剤を運搬することもできる。ポリマー粒子には、塗料、コーティング、および密封剤などにおいて、多くの産業上の使用もある。
【０００３】
ポリマー粒子の形状は、特定の使用に対する適合性にとって最も重要であり得る。このようなものとして、所望の形状を得るために、特定の形態のポリマー粒子を調製し、また粒子を処理加工（例えば、磨砕、切断、粉砕）するための多くの方法が存在する。しばしば、特定のポリマー粒子を調製し、またはその粒子を処理加工する結果、粒子の表面は粗く、かつ／またはギザギザする。このように不規則な形状の粒子には、放出のプロファイルに変動が大きいこと、および粒子内への薬物の投薬など、いくつかの不都合があることがある。他の問題点は送達に関するものであり得る（例えば、凝固および凝集）。このようなものとして、ポリマー粒子を取り、その形態を変更してより均一な形状をもたらすのが望ましいことがある。本明細書に開示する方法はこれらおよび他の必要を満たすものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
本明細書に具体化し、広範に記載する通り、開示する材料、組成物、物品、装置、および方法の目的に従い、一態様では、開示する主題はこのような化合物および組成物を調製し、用いるための化合物および組成物および方法に関する。ポリマー粒子、およびこのような粒子を作成し、用いる方法も開示する。
【０００５】
さらなる利点は、一部は以下の明細書において述べられ、一部は明細書より明らかであり、または以下に記載する態様を実践することによって習得することができる。以下に記載する利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘する要素および組合せによって理解され、達成されよう。前述の概要の記載および以下の発明を実施するための形態は例示的および説明的なものにすぎず、限定的なものではないことを理解されたい。
【０００６】
添付の図面は本明細書に組み入れられ、その一部分を構成するものであり、以下に記載するいくつかの態様を例示する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】球状化処理前の、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの７５：２５ＰＬＧ（７５２５ＤＬＧ６Ａ）の篩い分けしたポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールバーは０．２５ｍｍを表す）。
【図２】実施例４に記載する球状化処理後の、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの７５：２５ＰＬＧ（７５２５ＤＬＧ６Ａ）の篩い分けしたポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図３】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーからの７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図４】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーからの７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図５】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの押出し加工したポリマーであるポリカプロラクトン（ＰＣＬ）１００ＣＬ１２ＥのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図６】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの押出し加工したポリマーであるポリカプロラクトン（ＰＣＬ）１００ＣＬ１２ＥのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図７】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーＥＶＡのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図８】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーであるＥＶＡのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図９】酢酸エチルに曝露せず、実施例４に記載するように４０℃の球状化プロセスに対して処理したＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からのポリ（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬ−ＰＬ）ポリマーのポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である。４０℃の処理後、ポリマー粒子は不規則であり、非球状であることに注目されたい（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１０】最初に酢酸エチルを用いて可塑化し（実施例５に記載する通り）、次いで実施例４に記載するように４０℃の球状化プロセスに対して処理したポリ（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬ−ＰＬ）ポリマーのポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である。図９に示した粒子とは対照的に、４０℃の処理後では可塑化したポリマー粒子の形状はより規則的になったことに注目されたい（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１１】非処理のＣｏｕｍａｒｉｎ−６／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは１ｍｍを表す）。
【図１２】処理したＣｏｕｍａｒｉｎ−６／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図１３】粉砕した酸化第一鉄／ポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１４】処理した酸化第一鉄／ポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
詳細な説明
本明細書に記載する材料、化合物、組成物、物品、および方法は、本明細書に含まれる、開示する主題、図、実施例の特定の態様の以下の発明を実施するための形態を参照することによってより容易に理解することができる。
【０００９】
本材料、化合物、組成物、物品、および方法を開示し、記載する前に、以下に記載する態様は、特定の合成方法または特定の試薬に制限されず、それ自体がもちろん変化することがあることを理解されたい。本明細書で用いられる専門用語は特定の態様だけを記載する目的であり、限定的なものを意図しないことも理解されたい。
【００１０】
また、本明細書を通して様々な出版物が参照とされる。これら出版物の全文の開示は、開示された事項が関連する最新技術をより完全に記載するために、本出願中に参照によって本明細書に組み入れられるものである。開示する参考文献は、やはり、個々に、かつ特に、参照が依拠する文章において論じられるそれに含まれる題材に関して、本明細書に参照によって組み入れられる。
【００１１】
定義
本明細書において、および以下の特許請求の範囲において、数々の用語に言及するが、これらは以下の意味を有すると定義される。
【００１２】
本明細書および本明細書の特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」ならびに「含んでいる」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」など他の形の言葉は、例えば、他の添加剤、成分、整数、またはステップを含むが、それらに限定されないことを意味し、また除外しようとするものではない。
【００１３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が他のものを明らかに指示しなければ、複数の指示物を含んでいる。このように、例えば「１つの（ａ）化合物」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのような化合物の混合物が含まれ、「１つの（ａｎ）薬剤」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのような薬剤の混合物が含まれ、「その（ｔｈｅ）ポリマー」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのようなポリマーの混合物が含まれる、などである。
【００１４】
「場合による」、または「場合により」は、引き続き記載される事象または状況が起こることがあり、または起こることがないことを意味し、また記載には、事象または状況が起こる場合および起こらない場合が含まれる。
【００１５】
範囲は、本明細書において「約」１つの特定の値から、および／または「約」１つの別の特定の値までとして表すことができる。このような範囲を表す場合、別の態様には、１つの特定の値から、および／または他の特定な値までが含まれる。同様に、先行詞「約」の使用によって値を近似として表す場合は、特定の値が他の態様を形成することが理解されよう。各々の値のエンドポイントは、他のエンドポイントとの関係および独立に他のエンドポイントとの関係の両方において意義深いことがさらに理解されよう。本明細書には数々の値が開示されており、各々の値は本明細書において値自体に加えて「約」その特定の値としても開示されることも理解される。例えば、「１０」という値が開示される場合は、「約１０」も開示される。その値「に等しいまたはそれ未満」、「その値に等しいまたはそれを超える」値が開示される場合、および値の間の可能な範囲も開示される場合は、当業者によって好適に理解される通りであることも理解される。例えば、「１０」の値が開示される場合は、「１０に等しいまたはそれ未満」および「１０に等しいまたはそれを超える」も開示される。本出願を通して、データは数々の異なる形式で提供され、このデータはエンドポイントおよび開始点、ならびにデータポイントのあらゆる組合せに対する範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータポイントである「１０」および特定のデータポイントである「１５」が開示される場合、１０および１５を超え、それらに等しいまたはそれらを超える、それら未満、それらに等しいまたはそれら未満、およびそれらに等しいも、１０と１５の間同様に開示されるとみなされることも理解される。２つの特定の単位の間の各単位も開示されることも理解される。例えば、１０および１５が開示される場合、１１、１２、１３、および１４も開示される。
【００１６】
本明細書および最後の特許請求の範囲における組成物における特定の要素または成分の重量による部分に対する参照は、重量による部分がそれに対して表される組成物または物品における、要素または成分と他の要素または成分との間の重量の関係を意味する。したがって、重量で２部の成分Ｘ、および重量で５部の成分Ｙを含む化合物では、ＸおよびＹは２：５の重量比で存在し、さらなる化合物が化合物に含まれるか否かにかかわらずこのような比で存在する。
【００１７】
成分の重量パーセントは、反対のものを特に記載しなければ、成分が含まれる製剤または組成物の全重量をベースにするものである。
【００１８】
「ポリマー粒子」という用語は、ポリマーのあらゆる断片または切片を意味する。ポリマー粒子は、顕微鏡上の断片、粉末から肉眼的なグレインなどのあらゆるサイズであってよいので、これはいかなる特定のサイズの粒子を含意することを意味するものではない。さらに、ポリマー粒子はあらゆる形状を有することができるので、いかなる特定の形状も含意することを意味するものではない。
【００１９】
本明細書において「球状」という用語は、開示する球状化のプロセスによって処理した後のポリマー粒子の形状を記載するために用いられる。特に、粗面、ギザギザの縁、および／または鋭い角を有するポリマー粒子を、開示する球状化のプロセスによって修飾して、滑らかな表面、丸い縁および角、ならびに全体に輪状の形状を有する「球状」のポリマー粒子をもたらすことができる。このようなものとして「球状」という用語は、そのような粒子が完全に球状の形状だけを有することを含意する意味ではない。実際に、ほとんどの場合ではそうではない。同様に、「球状化する」および「球状化」という用語は、完全に球状の形状だけに関することを意味するのではない。「球状」、「球状化した」、および「球状化」という用語は、そうではなく、小球、卵、またはビーズの形状など、全体に球状の形状を意味する。これらの用語は、カプセルまたはロッドの形状などの長円形の形状にも関連する。さらに、これらの用語は、円盤、丸剤、またはペレットの形状を有する平板化した球にも関連する。多くの例において、本明細書に開示する「球状」および「球状化した」ポリマー粒子は、開示する球状化プロセスに従って処理する前のポリマー粒子よりも、粗表面の割合が小さい。
【００２０】
本明細書において「非球状」という用語は、上記で定義した「球状」以外であるポリマー粒子の形状を記載するために用いられる。特に、「非球状」の粒子は、開示する球状化プロセスによって処理していないものである。このようなものとして、「非球状」の粒子は、粗面、ギザギザの縁、および／または鋭い角を有する。多くの例において、本明細書に開示する「非球状」のポリマー粒子は、開示する球状化プロセスに従って処理した後のポリマー粒子よりも粗面の割合が大きい。
【００２１】
本明細書において「生理活性物質」という用語は、それが適用される生物系において、局所または全身性の、生物学的、生理学的、または治療的な効果を提供することができる化合物または組成物を意味するために用いられる。例えば、生理活性物質は、他の機能の中でも、感染または炎症をコントロールし、細胞の増殖および組織の再生を増強し、腫瘍の増殖をコントロールし、または腫瘍細胞を死滅させるように作用し、鎮痛薬として作用し、抗細胞接着を促進し、骨の増殖を増強するように作用することができる。生理活性物質のいくつかの特異的ではあるが非限定的な例には、抗癌薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、ビタミン、ホルモン、抗体、ステロイド、炭水化物、核酸、アプタマー、ペプチド、タンパク質、抗体、ワクチン、または治療用化合物（例えば、薬物／薬剤）が含まれる。さらに他の生理活性物質には、投与するときは生物学的に活性ではない物質であるが、対象に投与すると、代謝またはいくつかの他の機序によって生理活性物質に変換されるプロドラッグが含まれる。生理活性物質は、獣医学的な治療薬および農学上の物質（例えば、殺虫剤、除草剤、成長促進物質、肥料）であってもよい。さらに、本明細書に開示するあらゆる組成物は、２つまたはそれを超える生理活性物質の組合せを含むことができる。
【００２２】
本明細書において用いられる「残留物」という用語は、部分が実際に特定の化学種から得られるか否かにかかわらず、特定の反応スキームまたはその後の製剤もしくは化学製品における特定の化学種の結果として得られた生成物である部分を意味する。例えば、「ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレートから選ばれるモノマーの残留物」は、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、またはヒドロキシブチレートが特定の反応（例えば、重合反応）に関与した場合にもたらされる部分を意味する。この場合、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、またはヒドロキシブチレート残留物は、これらの化合物から「誘導」される。
【００２３】
本明細書において、「第２の成分」という用語は、ポリマー粒子に付随し、または付着し、または粒子内に含まれており、１つまたは複数の生理活性物質、医薬品、生体分子、造影剤、撮像剤、色素、栄養、標的部分、ワクチン、抗原、蛍光物質、磁性粒子、Ｘ線不透過剤、天然高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリペプチド、酵素、抗体、核酸など）、合成高分子（例えば、ＰＥＧ、ＰＶＰ、合成ポリペプチド、修飾した多糖、アプタマーなど）、バッファー、界面活性剤、脂質、浸透圧剤、アジュバントなどを含むことができるあらゆる化合物、組成物、添加剤などを意味するために用いられる。
【００２４】
開示する材料、化合物、組成物、物品、および方法の特定の態様に対して詳しく次に言及し、これらの例を添付の実施例および図面において説明する。
【００２５】
材料および組成物
本明細書において、開示する方法、装置、および組成物に用いることができ、これらと組み合わせて用いることができ、これらを調製するのに用いることができ、またはこれらの生成物である、材料、化合物、組成物、および成分が開示される。これらおよび他の材料が本明細書に開示され、また、これらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、グループなどが開示される場合、各々の様々な個体および集合的な組合せならびにこれらの化合物の順列の特定な言及が明確に開示され得ない限りは、各々が本明細書において具体的に企図され、記載されることが理解される。例えば、組成物が開示され、組成物の数々の成分または残留物に対して行うことができる数々の修飾が論じられる場合、反対のものが具体的に指摘されなければ、可能であるすべての組合せおよび順列が具体的に企図される。したがって、Ａ、Ｂ、およびＣの成分または残留物のクラスが、Ｄ、Ｅ、およびＦの成分または残留物のクラス同様に開示され、Ａ−Ｄの組合せの化合物の例が開示される場合は、各々が個々に列挙されなくても、各々が個々におよび集合的に企図される。したがって、この例では、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−Ｅ、およびＣ−Ｆの各々の組合せが具体的に企図され、Ａ、Ｂ、およびＣ；Ｄ、Ｅ、およびＦ；ならびにＡ−Ｄの組合せの例の開示から開示されると考えなければならない。同様に、これらのあらゆるサブセットまたは組合せも具体的に企図され、開示される。したがって、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、およびＣ−Ｅのサブグループが、Ａ、Ｂ、およびＣ；Ｄ、Ｅ、およびＦ；ならびにＡ−Ｄの組合せの例の開示から具体的に企図され、開示されると考えなければならない。この概念は、それだけには限定されないが、開示される組成物を作成し、使用する方法におけるステップを含む本開示の全態様に適用される。したがって、行うことができる様々なさらなるステップが存在する場合、これらさらなるステップの各々は、開示される方法のあらゆる特定の態様または態様の組合せで行うことができ、各々のこのような組合せが具体的に企図され、開示されると考えるべきであると理解される。
【００２６】
本明細書に開示するある種の材料、化合物、組成物、および成分は市場で入手することができ、または当業者には一般に知られている技術を用いて容易に合成することができる。例えば、開示する化合物および組成物を調製するのに用いられる出発材料および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ）、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ Ｐｌａｉｎｓ、Ｎ．Ｊ．）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ）、またはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）などの市場の供給元から入手可能であり、あるいは、Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１７巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、Ｒｏｄｄ’ｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１〜５巻および補完（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９年）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１〜４０巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、第４版）、ならびにＬａｒｏｃｋ’ｓ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．、１９８９年）などの参考文献に述べられている手順に従って当業者には知られている方法によって調製される。
【００２７】
球状化プロセス
本明細書には、任意選択で界面活性剤および／または他の添加剤を含む、加熱した液体媒体において非球状のポリマー粒子を攪拌することによって、非球状のポリマー粒子を球状にする方法を開示する。これらの方法を用いて、ポリマー材料および最終生成物における残留モノマーレベルを低減することもできる。さらに、これらの方法を、ポリマー、およびポリマーに埋め込まれた１つまたは複数の第２の成分を含むポリマー粒子とともに用いることもできる。このようなポリマー粒子のブレンドは、ポリマーおよび１つまたは複数の第２の成分、例えば、生理活性物質、医薬品、生体分子、造影剤、撮像剤、色素、栄養、標的部分、合成高分子（例えば、ＰＥＧ、ＰＶＰ、ポリペプチド、修飾した多糖、多糖など）、磁性粒子、放射線不透過剤などを含むことができる。本明細書に開示するプロセスによって調製される球状粒子を、粒子表面を修飾するために操作することもできる。本明細書に開示するいくつかの特定の例では、共有性の連結の化学を用いてポリマー粒子の表面に第２の成分を付加することができる。このような第２の成分のポリマー粒子への共有性の連結は、開示する球状化プロセスの前に、間に、または後に行うことができる。
【００２８】
開示するプロセスでは、非球状のポリマー粒子を、本明細書で定義する球状に作成する。開示する方法は、非球状のポリマー粒子および液体媒体を含む混合物を提供するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度（すなわち、非球状の粒子が球状になる点）を超えて加熱するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップとを含み、それにより、球状のポリマー粒子を生成する。開示する方法は、球状のポリマー粒子を回収し、洗浄し、乾燥するステップをさらに含む。
【００２９】
高残留モノマー含量を有するポリマー粒子から低残留のモノマー含量を有するポリマー粒子を調製する方法も開示する。開示する方法は、最初の残留モノマー含量および液体媒体を有する、高残留モノマーポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップとを含み、それにより、最初の残留モノマー含量未満である低残留モノマー含量を有する、低残留モノマーポリマー粒子を生成する。低残留モノマー粒子を、これらのプロセスによって球状化することもできる。ある例では、最初の残留モノマー含量は、開示する方法によってポリマー粒子の重量ベースで２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８５％、または９０％低減することができる。このようのものとして、非球状のポリマー粒子の最初の残留モノマー含量の１０から約７５％でまである低残留モノマー含量を有する球状のポリマー粒子を、本明細書に開示する。
【００３０】
開示するプロセスによって作成されるポリマーも開示する。例えば、本明細書には、それから作成される非球状のポリマー粒子よりも少ない残留モノマーを含む球状のポリマー粒子を開示する。
【００３１】
ポリマー
開示する方法で用いられる非球状のポリマーまたは高残留モノマーポリマーは、一般には小粒子として提供される。小粒子のポリマーは複数の方法で得ることができ、これらの粒子を得る方法は、開示する方法にとって決定的ではない。例えば、ポリマー粒子は、ポリマーのロッドまたは繊維を小片に切断することによって生成することができ、この場合得られる粒子は円柱形の形状であってよい。小型のポリマー粒子は、ポリマーを磨砕することによって生成することができ（磨砕ビーズ、ペレット、シートなど）、この場合、得られる粒子の形状は不規則である。さらに、ポリマー粒子を市場で入手することができる。
【００３２】
球状化し、かつ／または残留モノマー含量を減少させたいと思うあらゆるポリマーおよびポリマーのブレンドを、開示する方法で用いることができる。特に適切な例には、それだけには限定されないが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、カプロラクトン、およびこれらの混合物が含まれる。他の適切なポリマーは、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）としても知られるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、およびこれらの混合物を含む。ポリマーのさらなる例は、ポリ（メタ）アクリレート、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル、ポリアクリルアミド、ポリ（アルキルシアノアクリレート）のホモポリマーまたはコポリマーなど、アクリル酸をベースにしたものであってよい。さらに他の例には、それだけには限定されないが、ポリグルクロン酸、ポリアスパラギン酸、ポリ酒石酸、ポリグルタミン酸、ポリフマル酸、などの有機酸ベースのポリマー（これらのコポリマーを含む）が含まれる。エステルをベースにした適切なポリマーには、それだけには限定されないが、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ブロック−エーテルエステル）、ポリ（エステルアミド）、ポリ（エステルウレタン）、ポリホスホン酸エステル、ポリホスホエステル、ポリ無水物、およびポリホスファゼン（これらのコポリマーを含む）が含まれる。
【００３３】
さらなる例では、ポリマーは多糖であってよい。ポリマーのなおさらなる例には、それだけには限定されないが、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリ（プロピレンフマレート）、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドン、ポリビニル−Ｎ−メチルピロリドン、ポリビニルアルコール、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、デンプン、セルロース、メチルセルロース、アミノデキストラン、デキストラン、ＤＥＡＥデキストラン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパラン硫酸、ヘパリン、キトサン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルアミロース、ヒアルロン酸、ヒアルロナン、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム、アガロース、カラゲナン、ゼラチン、酸加水分解で分解されたゼラチン、グリコーゲン、ポリエチレンイミン、ポリリジン、またはこれらのあらゆる組合せが含まれる。
【００３４】
先に示したように、非球状の、および／または高残留モノマーのポリマー粒子は、ポリマー粒子に埋め込まれ、または共有性に連結している１つまたは複数の第２の成分を有することができる。「埋め込まれた」は、第２の成分が全体的または部分的に粒子中に封入されていることを意味する。開示する球状化プロセス後、第２の成分の大半（例えば、もとの量の５０％を超えて）が、得られる球状のポリマー粒子に依然として存在していてよい。開示するポリマー粒子は、活性がなくてもよい（例えば、プラセボ）。
【００３５】
球状のポリマー粒子を形成する前に、このようなポリマーを押出し加工してロッドまたは繊維にしてもよく、あるいはポリマーは、ペレット、ビーズ、または磨砕したバルクのポリマー、または１シートの形態であってよい。
【００３６】
第２の成分
本明細書における多くの例では、開示するポリマー粒子は、直接またはリンカーによって粒子に埋め込まれ、または共有性に連結している１つまたは複数の第２の成分を有することができる。第２の成分の適切な例には、生理活性物質、（例えば、医薬品（薬物またはワクチン）、栄養、生体分子）、造影剤、撮像剤、色素、標的部分、合成ポリマー、磁性粒子、Ｘ線不透過剤などが含まれる。
【００３７】
第２の成分が生理活性物質である場合は、疾患または疾病を処置するための薬物または他の薬学的に活性な物質であってよい。開示する球状化プロセスが医薬品に有害な影響（例えば、分解）を及ぼさない限り、あらゆるそのような医薬品を第２の成分として用いることができる。医薬品の適切な例は、メルクインデックス（１３版、Ｗｉｌｅｙ、２００１年）、米国薬局方−国民医薬品集（ＵＳＰ−ＮＦ）、およびＦＤＡのオレンジブックに見ることができ、これらは各々、少なくとも医薬品の教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる。適切な医薬品は市場で入手できる。潜在的な治療薬は、開示されるポリマー粒子における適切な第２の成分であり得ることも企図される。
【００３８】
他の例では、第２の成分は生体分子などの生理活性物質であってよい。生体分子の例には、それだけには限定されないが、小分子、ペプチド、タンパク質、酵素（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、メチル化剤、プロテアーゼ、転写酵素、エンドヌクレアーゼ、リガーゼなど）、抗体、および／またはそれらのフラグメント、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド、プライム（ｐｒｉｍｅ）、プローブ、アプタマー、リボザイムなど）、脂質、炭水化物、ステロイド、ホルモン、ビタミンが含まれる。本明細書で用いられる「小分子」は、分子量が約５ｋＤ未満である、例えば約４ｋＤ未満である組成物を言及することを意味する。小分子は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドミメティック、炭水化物、脂質、因子、補助因子、ホルモン、ビタミン、ステロイド、微量元素、または他の有機（含炭素）もしくは無機の分子であってよい。これらの生体分子は市場で入手することができ、または合成され、もしくは当技術分野では知られている方法によって天然の供給源から単離され得る。
【００３９】
本明細書では、第２の成分（例えば、生体分子）が、例えば、酵素および抗体を含めた、アミノ酸ベースの分子を含むことができる様々な組成物を開示する。したがって、本明細書で用いられる「アミノ酸」は、ポリペプチドをなす、典型的に遭遇する２０個のアミノ酸を意味する。さらに、これには天然に存在するもの（例えば、それだけには限定されないが、アミノ酸に典型的に見出される類似体であるホルミルメチオニンおよびセレノシステイン）、ならびにアミノ酸またはアミノ酸官能性の模倣物の両方であるあまり典型的ではない構成成分もさらに含まれる。これらおよび他の分子の非制限的な例は、本明細書で論じられる。
【００４０】
本明細書で用いられる「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、化学的に一緒に結合しているアミノ酸からなる化合物のクラスを意味する。これらおよび他の分子の非制限的な例は、本明細書で論じられる。一般に、アミノ酸はアミド連結（ＣＯＮＨ）によって一緒に化学的に結合しているが、アミノ酸は、当技術分野では知られている他の化学結合によって一緒に結合することができる。例えば、アミノ酸はアミン連結によって結合することができる。本明細書で用いられる「ペプチド」は、天然に存在し、または操作されるポリペプチドおよびタンパク質を含めた、アミノ酸のオリゴマー、ならびに小型および大型のペプチドを含む。「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書では交換可能に用いることができることが理解される。
【００４１】
このようなペプチドおよびタンパク質を生成するための方法はよく知られている。開示するタンパク質を生成する一方法は、タンパク質化学の技術によって２つまたはそれを超えるペプチドまたはポリペプチドを一緒に連結することである。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）またはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）の化学作用のいずれかを用いて、現在入手可能な実験装置を用いて化学的に合成することができる。（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）。当業者であれば、開示するタンパク質に対応するペプチドまたはポリペプチドを、例えば、標準の化学反応によって合成することができることが容易に理解できる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドを合成し、その合成樹脂から切断せず、他方ではペプチドまたはタンパク質の他のフラグメントを合成し、引き続き樹脂から切断し、それにより、他のフラグメント上で機能的にブロックされている末端基を曝露することができる。ペプチド縮合反応によって、これら２つのフラグメントは、それぞれのカルボキシル末端およびアミノ末端でペプチド結合により共有性に接合して抗体、またはそのフラグメントを形成することができる（Ｇｒａｎｔ、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ： Ａ Ｕｓｅｒ Ｇｕｉｄｅ．、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．、１９９２年；ＢｏｄａｎｓｋｙおよびＴｒｏｓｔ編集、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．、１９９３年、これらは少なくともペプチド合成のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる）。
【００４２】
別の一例では、第２の成分は抗体またはそのフラグメントを含むことができる。抗体またはそのフラグメントは、本明細書で用語が用いられるように、生体分子、撮像剤、および／または標的部分と考えることができる。「抗体」という用語は、それだけには限定されないが、あらゆるクラスの免疫グロブリン全体（すなわち、完全な抗体）を包含する。天然の抗体は、通常、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ４量体の糖タンパク質である。典型的には、軽鎖は各々、１つの共有性のジスルフィド結合によって重鎖に連結しており、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンのイソ型の重鎖間で変化する。各々の重鎖および軽鎖も、規則的な間隔の鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一終端に可変ドメイン（Ｖ（Ｈ））を有し、後に数々の定常ドメインが続く。各軽鎖は、一終端に可変ドメイン（Ｖ（Ｌ））を、もう一方の終端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと一直線上にあり、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと一直線上にある。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成していると考えられている。あらゆる脊椎動物種からの抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κおよびλと呼ばれる２つの明らかに異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、様々なクラスの割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのいくつかは、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、およびＩｇＧ−４；ＩｇＡ−１、およびＩｇＡ−２など、サブクラス（イソ型）にさらに分けることができる。当業者であれば、マウスに対して比較できるクラスを認識する。免疫グロブリンの様々なクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【００４３】
本明細書用いられる「抗体」という用語は、完全な分子、およびそれらのフラグメント（例えば、エピトープの決定基に結合することができるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２など）を含むことを意味する。「抗体」という用語は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体、抗イデオパシー（ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ）抗体、およびヒト化抗体も含む。
【００４４】
本明細書で用いられる「抗体またはそのフラグメント」という用語は、二重もしくは多重の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗体、ならびにハイブリッドのフラグメントを含めた、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどのフラグメントを包含する。このような抗体およびフラグメントは、当技術分野では知られている技術によって作成することができる（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８８年を参照されたい）。このような抗体およびそのフラグメントは、本明細書に開示する方法に従って、特異性および活性に対してスクリーニングすることができる。
【００４５】
「抗体またはそのフラグメント」の意味内には、例えば、その内容が少なくとも抗体結合体のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる米国特許第４７０４６９２号に記載される抗体フラグメントと抗原結合性タンパク質（単鎖抗体）の結合体も含まれる。フラグメントは、他の配列に付着していても、またはいなくても、特定の領域または特定のアミノ酸残基の、挿入、欠失、置換、または他の選択される修飾を含む。本明細書に開示する抗体を生成および／または単離する方法はよく知られている。
【００４６】
本明細書には、第２の成分が核酸ベースの分子を含むことができる様々な組成物も開示する。このように、本明細書で用いられる「核酸」は、例えば、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、またはヌクレオチド代替物からできている分子を意味する。これらおよび他の分子の非限定的な例を、本明細書で論じる。核酸は、２本鎖でも、または１本鎖でもよい。核酸は、オリゴヌクレオチドを含むことも意味する。
【００４７】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド」は、塩基部分、糖部分、およびリン酸部分を含む分子である。ヌクレオチドは、そのリン酸部分および糖部分によって一緒に連結し、インターヌクレオシド（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）連結を生成することができる。ヌクレオチドの塩基部分は、アデニン−９−イル（Ａ）、シトシン−１−イル（Ｃ）、グアニン−９−イル（Ｇ）、ウラシル−１−イル（Ｕ）、およびチミン−１−イル（Ｔ）であってよい。ヌクレオチドの糖部分はリボースまたはデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸部分は、五価のリン酸塩である。ヌクレオチドの非限定的な例は、３’−ＡＭＰ（３’−アデノシン一リン酸）または５’−ＧＭＰ（５’−グアノシン一リン酸）である。
【００４８】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド類似体」は、塩基、糖、またはリン酸部分のいずれかに対するいくつかのタイプの修飾を含むヌクレオチドである。ヌクレオチドに対する修飾は、当技術分野ではよく知られており、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、および２−アミノアデニン、ならびに糖またはリン酸部分での修飾が含まれる。
【００４９】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド代替物」は、ヌクレオチドに類似の機能的性質を有する分子であるが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などのリン酸部分を含まない。ヌクレオチド代替物は、ワトソン−クリック、またはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの様式で核酸を認識するが、リン酸部分以外の部分によって一緒に連結している分子である。ヌクレオチド代替物は、好適な標的の核酸と相互作用する場合に２本鎖型の構造に合致することができる。
【００５０】
他のタイプの分子をヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に連結して、例えば、細胞の取り込みを増強することができる結合体を作成することも可能である。結合体は、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に化学的に連結することができる。このような結合体には、それだけには限定されないが、コレステロール部分などの脂質部分が含まれる（少なくとも核酸結合体のその教示に関して本明細書に参照として組み入れられる、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１９８９年、８６巻、６５５３〜６頁）。本明細書で用いられる、核酸という用語は、このような核酸の結合体、類似体、および変異体を含む。
【００５１】
本明細書に記載するものなどの核酸は、標準の化学合成方法を用いて作成することができ、または酵素的な方法もしくはあらゆる他の知られている方法を用いて生成することができる。このような方法は、標準の酵素的な消化とその後のヌクレオチドフラグメント単離（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、２００１年、チャプター５、６を参照されたい）から、例えば、ＭｉｌｌｉｇｅｎまたはＢｅｃｋｍａｎ Ｓｙｓｔｅｍ １Ｐｌｕｓ ＤＮＡ合成機（例えば、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ−Ｂｉｏｓｅａｒｃｈの自動化合成機Ｍｏｄｅｌ ８７００ 、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡまたはＡＢＩ Ｍｏｄｅｌ ３８０Ｂ）を用いたシアノエチルホスホラミダイト法による、純粋な合成法までの範囲であってよい。オリゴヌクレオチドを作成するのに有用な合成法は、Ｉｋｕｔａら、Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９８４年、５３巻、３２３〜５６頁（リン酸トリエステルおよび亜リン酸トリエステル法）、およびＮａｒａｎｇら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９８０年、６５巻、６１０〜２０頁（リン酸トリエステル法）によってやはり記載されている。タンパク質核酸分子は、Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ、１９９４年、５巻、３〜７頁に記載されているものなど（これらの参照は各々、少なくとも核酸合成のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる）知られている方法を用いて作成することができる。
【００５２】
また、第２の成分は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成することができる化学物質である撮像剤を含むことができる。このような撮像剤の多くは、当業者には知られている。開示する組成物および方法において使用するのに適する撮像剤の例は、放射性同位元素、蛍光分子、リン光分子、酵素、抗体、およびリガンドである。本明細書に開示する２つまたはそれを超える部分を組み合わせて撮像剤も、撮像部分とみなされる。
【００５３】
撮像剤が球状化プロセスによって有害な影響を受けない限り、あらゆる知られている撮像剤を、開示する粒子および球状化プロセスと一緒に用いることができる。撮像剤によって産生されるシグナルを検出および測定するための方法は、当業者にはやはり知られている。例えば放射性同位元素はシンチレーションカウンティングまたは直接可視化によって検出することができ、蛍光分子は蛍光分光光度計で検出することができ、リン光分子は分光光度計で、またはカメラで直接可視化して検出することができ、酵素は、その酵素が触媒する反応の生成物を検出または可視化することによって検出することができ、抗体は、抗体にカップリングしている２次検出標識を検出することによって検出することができる。
【００５４】
一例では、開示する撮像剤は蛍光の撮像剤を含むことができる。蛍光の撮像剤は、検出可能な蛍光シグナルを有するあらゆる化学部分である。この撮像剤を、単独で、または他の撮像剤と組み合わせて用いることができる。本明細書に開示する組成物および方法において用いることができる適切な蛍光物質の例には、それだけには限定されないが、フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、５−カルボキシフルオレセイン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、５，６−カルボキシメチルフルオレセイン、ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イル（ＮＢＤ）、フルオレスカミン、ＯＰＡ、ＮＤＡ、インドシアニングリーン色素、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、およびＣｙ７）、４−アセトアミド−４’−イソチオシアネートスチルベン−２，２’−二スルホン酸、アクリジン、アクリジンイソチオシアネート、５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）、４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５−二スルホン酸塩、Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド、アントラニルアミド、ＢＯＤＩＰＹ、ブリリアントイエロー、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１）、シアノシン、４’、６−ジアミニジノ（ｄｉａｍｉｎｉｄｉｎｏ）−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）、５’、５”−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）、７−ジエチルアミノー３−（４’−イソチオシアネートフェニル）−４−メチルクマリンジエチレントリアミン五酢酸、４，４’−ジイソチオシアネートジヒドロ−スチルベン−２，２’−二スルホン酸、４，４’−ジイソチオシアネートスチルベン−２，２’−二スルホン酸、５−［ジメチルアミノ］ナフタレン−１−スルホニルクロライド（ＤＮＳ、ダンシルクロライド）、４−（４’−ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）、エオシン、エオシンイソチオシアネート、エリスロシンＢ、エリスロシン、イソチオシアネート、エチジウムブロマイド、エチジウム、５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４，５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、フルオレセインイソチオシアネート、ＩＲ１４４、ＩＲ１４４６、マラカイトグリーンイソチオシアネート、４−メチルウンベリフェロン、オルトクレゾールフタレイン、ニトロチロシン、パラローザニリン、フェノールレッド、Ｂ−フィコエリトリン、ｏ−フタルジアルデヒド、ピレン、ピレンブチレート、スクシンイミジル１−ピレンブチレート、リアクティブレッド４（Ｃｉｂａｃｒｏｎ［Ｒ］Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｒｅｄ ３Ｂ−Ａ）、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢスルホニルクロライドローダミン（Ｒｈｏｄ）、５，６−テトラメチルローダミン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１のスルホニルクロライド誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、リボフラビン、ロゾール酸、クマリン−６など（これらの組合せを含む）が含まれる。これらの蛍光撮像部分は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、およびＲｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、Ｏｈｉｏを含む様々な市場供給源から入手することができ、または当業者であれば合成することができる。
【００５５】
別の一例では、開示する撮像剤は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）薬剤を含むことができる。ＭＲＩ薬剤は、検出可能な磁気共鳴シグナルを有し、または別の薬剤の磁気共鳴シグナルに影響を及ぼす（例えば、増大する、もしくはシフトする）ことができるあらゆる化学部分である。このタイプの撮像剤は、単独、または他の撮像剤と組み合わせて用いることができる。さらに別の一例では、ガドリニウムベースのＭＲＩ薬剤が撮像剤として役立つことができる。開示する撮像剤中に組み入れることができる適切なＭＲＩ薬剤の一例は、ガドリニウムに強力に結合することが知られており、磁気共鳴の造影剤として臨床の使用に認可されている、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の結合形態であるパラ−アミノ−ベンジル−ジエチレントリアミン五酢酸（ｐ−ＮＨ２−Ｂｚ−ＤＴＰＡ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ７）である。他のものも、同様のＭＲＩ造影剤をｉｎ ｖｉｖｏの小動物の撮像用のデンドリマーであるＰＡＭＡＭ（商標）に上首尾に結合させている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ、２００１年、１２巻、１００〜１０７頁；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｍａｇ Ｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００１年、４６巻、５７９〜８５頁）；これらの参考文献は、少なくともＭＲＩ薬剤のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる。ＭＲＩ薬剤を本明細書に開示するデンドリマーの物質などの大型の巨大分子上に組み入れることにより、単一の分子上への大型のＴ１緩和（ハイコントラスト）および複数の薬剤のコピーを可能にすることができ、これはシグナルを増大することができる。ＭＲＩ撮像剤と、例えば蛍光の撮像剤とを組み合わせることによって、得られる薬剤を検出し、撮像化し、その後ＭＲＩによってリアルタイムで追跡することができる。
【００５６】
他の撮像剤には、１８Ｆ、または６４Ｃｕもしくは６８Ｇａに対するキレート剤を組み入れることによって調製することができるＰＥＴ薬剤が含まれる。また、放射性核種の添加を用いて、ＳＰＥＣＴ撮像を促進し、または放射線量を送達することができる。
【００５７】
粒子に埋め込むことができ、または粒子表面に共有性に付着することのいずれかができる他の適切な第２の成分にはポリマーが含まれ、このポリマーは合成ポリマー、天然ポリマー、またはさらに化学的に修飾した天然ポリマーであってよい。合成ポリマーの非限定的な例には、それだけには限定されないが、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ＰＥＧおよびＰＥＯのコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓなど）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が含まれる。天然ポリマーおよび化学的に修飾した天然ポリマーには、それだけには限定されないが、生体高分子、ペプチド、タンパク質、核酸、および多糖が含まれる。タンパク質の非限定的な例には、それだけには限定されないが、アルブミン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アポリポタンパク質Ｅ、ケラチン、エラスチン、アクチン、ミオシン、ゼラチン、コラーゲン、酵素、抗体などが含まれる。多糖の非限定的な例には、それだけには限定されないが、デキストラン、キチン、キトサン、デンプン、グリコーゲン、セルロース、デキストリン、マルトデキストリン、ヒアルロン酸などが含まれる。
【００５８】
開示する粒子は、粒子中に、または粒子表面に共有性に付着した、またはその両方の、１つの第２の成分、または２つもしくはそれを超える第２の成分を有することができる。開示する粒子の第２の成分は、粒子表面に直接、共有性に付着していてもよく、またはリンカーもしくは連結の化学作用によって粒子表面に付着していてもよい。リンカーは非重合性であってもよく、または鎖長がオリゴマー性もしくはポリマー性であってもよい。
【００５９】
いくつかの例では、開示する第２の成分は、酵素が切断することができるペプチドである生物感受性なリンカーによってポリマー粒子に連結していてよい。得られるポリマーは、標的とした送達に、または特定の酵素活性が増大する部位の撮像に用いることができる。
【００６０】
さらなる例では、第２の成分は標的部分も含むことができる。例えば、標的部分（例えば、本明細書に記載する抗体、またはそのフラグメント）を、ポリマーに直接、またはリンカーによって、または生物感受性なリンカーによって付着することができる。標的部分は、ポリマー粒子を、対象の特定の領域に送達または局在化させるように働くことができる。標的薬剤または部分の非限定的な例には、葉酸結合性薬剤、ビオチン、アルブミン、ペプチド、タンパク質、多糖、ＲＧＤペプチド、グリコシル化されたターゲティングリガンド、リポタンパク質、抗体、抗体フラグメント、酵素、核酸、アプタマー、腫瘍特異的リガンドまたはペプチド、受容体特異的リガンドまたはペプチドなどが含まれ得る。
【００６１】
代替の例では、第２の成分は、指示薬（例えば、ｐＨ）、炭素ベースのナノ構造（例えば、バッキーボールおよびナノチューブ）、デンドリマー、ナノスケール装置、微小電気機械（ＭＥＭ）、有機または無機の化合物（例えば、酸化鉄）、非水溶液、気体（例えば、水素）、およびこれらの混合物であってよい。
【００６２】
液体媒体
開示する方法では、非球状および／または高残留モノマーポリマー粒子を、液体媒体に配置して混合物を形成する。次いで、得られた混合物（粒子のサイズおよび媒体に応じて、懸濁液とも呼ぶことができる）を、ポリマーのガラス転移温度（Ｔｇ）（非結晶性ポリマーの場合）または融解点（結晶性ポリマーの場合）を超えて加熱すると、粒子が部分的または完全に溶け、媒体中に「液滴」を形成する。ポリマーのＴｇまたは融解点未満に冷却すると、「液滴」は硬化して「球状」の微粒子になる。今や球状のポリマー粒子を、次いで回収し、洗浄し、乾燥することができる。
【００６３】
開示する方法は、ポリマーを溶解するのに溶剤を用いる、乳剤／溶剤抽出法を用いない。すなわち、用いる液体媒体は、好ましくはポリマーを溶解せず、または少なくともポリマー粒子が部分的に不溶解であるあらゆる媒体であってよい。このように、用いる特定の液体媒体は用いるポリマー、第２の成分のタイプ（もしあれば）、好み、可塑剤を用いるか否か、などに依存する。
【００６４】
適切な液体媒体の例には、それだけには限定されないが、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ヘキサメチルホスホラミド、エタノール、メタノール、１−または２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、エチレングリコール、プロピレングリコール、Ｃ１〜４アルキルおよびアルコキシエチレングリコールおよびプロピレングリコール（例えば、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、２−ブトキシエタノール、ジエチレングリコール）、アルカン（例えば、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、およびデカン）、塩化メチレン、クロロホルム、ならびにこれらの混合物が含まれる。特に、液体媒体の適切な例には、それだけには限定されないが、水および少量の界面活性剤を含む水系が含まれる（例えば、ポリビニルアルコール約１％）。
【００６５】
ある例では、可塑剤なしで必要とされるよりも、低温度で、かつ／または短時間でプロセスを行うために、開示する球状化プロセスの前に、または間に可塑剤をポリマーに加えることができる。すなわち、可塑剤の使用により、ポリマーのＴｇまたは融解点を低減することができ、したがって粒子の球状化に必要とされる温度または時間を低減することができる。ポリマー粒子の可塑化は、粒子を液体媒体に配置する前に、または粒子が液体媒体中にある間に、可塑剤をポリマー粒子の外側部分に接触させることによって行ってもよい。あるいは、可塑剤をポリマー粒子全体にわたって接触させてもよい。詳しい一例では、溶剤の蒸気で処理することによって、または粒子を可塑剤の溶剤の液体中に、もしくは可塑剤を含む溶液中に直接配置することによって、粒子を可塑剤の溶剤と接触させる。可塑剤の溶剤の適切な例は、酢酸エチル、アセトン、ブタノン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、メチルアルコール、ブチルアルコール、ベンジルアルコール、Ｎ−メチルピロリドン、塩化メチレン、ＤＭＦなどである。可塑剤の適切な例には、それだけには限定されないが、フタル酸ジエチル、三酢酸グリセロール、アセチル化モノグリセリド、アセチルクエン酸トリブチル、アセチルクエン酸トリエチル、ヒマシ油、クエン酸エステル、フタル酸ジブチル、セバシン酸ジブチル、シュウ酸ジエチル、マレイン酸ジエチル、フマル酸ジエチル、フタル酸ジエチル、コハク酸ジエチル、マロン酸ジエチル、酒石酸ジエチル、フタル酸ジメチル、グリセリン、グリセロール、三酢酸グリセロール、グリセリルトリブチレート、鉱油およびラノリンアルコール、ワセリンおよびラノリンアルコール、フタル酸エステル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ナタネ油、ゴマ油、トリアセチン、クエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、ならびにクエン酸トリエチルアセチル、または前者のあらゆる２つまたはそれを超える混合物が含まれる。水性のコーティングに用いることができる可塑剤には、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）、トリアセチン、ポリソルベート８０、クエン酸トリエチル、ｄ−酒石酸ジエチルが含まれる。
【００６６】
界面活性剤
多くの例において、水性の液体媒体は界面活性剤を含むことができる。本明細書で用いられる「界面活性剤」は、親水性基および疎水性基からなる分子（すなわち、両親媒性物質）である。界面活性剤は、イオン性界面活性剤でも、または非イオン性界面活性剤でもよい。例えば、液体媒体は陰イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる陰イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な陰イオン性界面活性剤は、洗剤、シャンプー、石鹸などで一般に用いられており、市場で入手することができ、または当技術分野で知られている方法によって調製することができる。これらには、それだけには限定されないが、アルキルベンゼンスルホン酸塩（洗剤）、脂肪酸ベースの界面活性剤、ラウリル硫酸（例えば、起泡剤）、ジアルキルスルホコハク酸エステル塩（例えば、湿潤剤）、リグノスルホン酸塩（例えば、分散剤）など（これらの混合物を含む）が含まれる。他の例では、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、αオレフィンスルホン酸塩、リン酸エステル、スルホコハク酸ナトリウム、ヒドロトロープ（これらの混合物を含む）を用いることができる。
【００６７】
他の例では、水性の液体媒体は、陽イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる陽イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な陽イオン性界面活性剤には、それだけには限定されないが、４級アンモニウム化合物、イミダゾリン、ベタインなどが含まれる。このような陽イオン性界面活性剤は市場で入手することができ、または当技術分野では知られている方法によって調製することができる。
【００６８】
さらに他の例では、水性の液体媒体は非イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる非イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な非イオン性界面活性剤は、その親水性基が、アルコール、フェノール、エーテル、エステル、またはアミドなど、非解離型であるので、水溶液でイオン化しない。これらはエーテル（例えば、グリセリン、ソルビトール、ショ糖などの多価アルコール）、脂肪酸エステル（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなど）、エステル（例えば、エチレンオキシドを、高級アルコール、アルキルフェノールなどのヒドロキシルラジカルを有する材料に適用することによって作成される化合物）、エーテル／エステル（例えば、エチレンオキシドを、分子内にエステル結合およびエーテル結合の両方を有する脂肪酸または多価アルコール脂肪酸エステルに適用することによって作成される化合物）、ならびに他のタイプ（例えば、脂肪酸アルカノール−アミドタイプ、またはアルキルポリグリセリドタイプ）に分類することができる。特に適切な非イオン性界面活性剤は、ポリ（ビニルアルコール）である。非イオン性界面活性剤の他の適切な例には、それだけには限定されないが、アルコールエトキシレートおよびアルキルフェノールエトキシレート、脂肪族アミンオキシド、アルカノールアミド、エチレンオキシド／プロピレンオキシドブロックコポリマー、アルキルアミンエトキシレート、タイガーコール（ｔｉｇｅｒｃｏｌ）の滑沢剤などが含まれ得る。
【００６９】
さらに他の例では、水性の液体媒体は二極性の界面活性剤を含むことができる。あらゆる二極性の界面活性剤を用いることができる。適切な二極性の界面活性剤（両性または双性イオン性と呼ばれる）は、陰イオン性および陽イオン性両方の解離を示す。二極性界面活性剤の適切な例には、それだけには限定されないが、ベタインまたはスルホベタインなどの製品、ならびにアミノ酸およびリン脂質などの天然物質が含まれる。一態様では、その全文が参照によって組み入れられる米国特許第６８５２８１６号、第６８４６７９５号、第６８４６３５２号、および第６８４９４２６号に開示されているベタインを本明細書で用いることができる。
【００７０】
適切な界面活性剤の他の例には、その起源を植物または動物の器官に有することができる天然の界面活性剤が含まれる。別の一例では、ボロフォーム（ｂｏｌｏｆｏｒｍ）の界面活性剤を用いることができる。ボロフォームの界面活性剤は、疎水性の尾の反対側の終端に２つの親水性の頭の基を有する界面活性剤である。
【００７１】
これらの界面活性剤の混合物を、本明細書に開示する組成物および方法でやはり用いることができる。
【００７２】
添加剤
液体媒体は、他の添加剤または賦形剤も含むことができる。例えば、液体媒体はｐＨバッファー、有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、シュウ酸など）、鉱酸（例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４など）、塩基（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３など）、保存剤、色素、抗酸化剤（例えば、トコフェロール）、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、凝集剤、および分散剤を含むことができる。液体媒体は、生理活性物質も含むことができる。例えば、処理加工中にポリマーブレンドから抽出される薬物の量を低減するために、ポリマーブレンド中の生理活性物質（液体媒体における飽和レベルまで、およびそれを含む濃度レベルの）を液体媒体に加えることができる。他の例では、液体媒体は、微生物の作用を防止するための他の添加剤を含むことができる。これは、様々な抗菌剤および／または抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、４級アンモニウム化合物などによって行うことができる。界面活性剤、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、およびアラビアゴム）、保湿剤（例えば、グリセロール）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール、およびモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト）、ならびに滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物）を含むのも望ましいことがある。用いることができる適切な凝集剤には、それだけには限定されないが、アルミニウム塩（例えば、硫酸アルミニウム）、２価鉄塩、および３価鉄塩（例えば、硫酸第二鉄、および塩化第二鉄）が含まれる。適切な懸濁化剤には、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、またはこれらの物質の混合物などが含まれ得る。液体媒体は、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物なども含むことができる。添加剤は、第２の成分の共有性のカップリング、またはポリマー粒子の他の化学にさらに影響を及ぼすことがある。このような物質は一般的に知られており、市場で入手できる。
【００７３】
温度および攪拌
非球状のポリマー粒子と液体媒体の混合物の加熱は、当技術分野では知られているあらゆる加熱技術によって行うことができる。混合物をそこまで加熱する温度は、ポリマーのタイプおよび液体媒体のタイプに依存する。一般には、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱する。
【００７４】
非球状のポリマー粒子と液体媒体の混合物を混合してもよい。混合は、それだけには限定されないが、様々な攪拌の機序（例えば、機械的、およびマグネチックスターラー）、かき混ぜの機序（例えば、シェーカー、タンブラー、媒体を通したガスバブル）、超音波、ならびにボルテックスを含めた、当技術分野におけるあらゆる従来の手順によって行うことができる。
【００７５】
サイズ
開示する方法により、より大型のポリマー粒子、特に、１ｍｍを超える粒子など、乳化／抽出プロセスでは安定でないものを作成するのが可能になり得る。１ｍｍ未満の粒子、例えば、直径１００μｍのものも作成することができる。この方法によって生成される粒子のサイズは、用いられる非球状のポリマー粒子のサイズに関連する。典型的には、約４０μｍから１ｍｍの寸法（ｌ×ｗ×ｈ）に切断した片を用い、大まかに同じサイズの球状のポリマー粒子を生成する。いくつかの詳しい例では、本明細書に開示する方法によって調製した球状のポリマーは、約１μｍから約１ｍｍ、約５０μｍから約５００μｍ、約１００μｍから約３００μｍ、約５００μｍから約１０００μｍ、約１μｍから約１００μｍ、約９０μｍから約３００μｍまたは約９０μｍから約１８０μｍの直径を有する。いくつかの詳しい例では、球状のポリマーは、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００μｍの直径を有することができ、この場合、記載したあらゆる値は範囲の上または下のエンドポイントを形成することができる。開示する球状粒子は完全な球状ではないことがしばしばあるので、本明細書で用いられる「直径」という用語は、粒子の一端から他の一端までの最長の直線距離を意味する。
【００７６】
連結
球状のポリマーの表面が、本明細書に記載するように、１つまたは複数の第２の成分で官能基化されていることが望ましいことがある。表面の官能基化は、第２の成分を球状粒子に共有性に連結することによって行うことができる。共有性の連結は、球状のポリマー上の反応性部分と第２の成分上の反応性部分との間の３＋２環化反応によって実現することができる。例えば、球状のポリマーはジエン部分を含むことができ、第２の成分はジエネオフィルを含むことができる。あるいは、球状のポリマーはジエネオフィルを含むことができ、第２の成分はジエンを含むことができる。共有性の連結は、球状のポリマー上の反応性部分と第２の成分上の反応性部分との間の２＋２環化反応によって実現することができる。
【００７７】
共有性の連結は、エーテル、イミデート、チオイミデート、エステル、アミド、チオエーテル、チオエステル、チオアミド、カルバメート、ジスルフィド、ヒドラジド、ヒドラゾン、オキシムエーテル、オキシムエステル、および／またはアミンの連結によって第２の成分を球状のポリマー粒子に連結することも伴ってもよい。このような連結は、アミン反応性の化学作用、チオール反応性の化学作用、カルボキシレート反応性の化学作用、ヒドロキシル反応性の化学作用、アルデヒドおよびケトン反応性の化学作用、活性水素反応性の化学作用、光反応性の化学作用、酸化還元ベースの化学作用などとして、知られている共有性のカップリングの化学作用から形成することができる。一例では、第２の成分またはポリマー粒子がアミノ基を有し、他のものがカルボキシル基を有する場合、これらはペプチド結合によって共有性に連結することができる。これは、典型的には、カップリングを媒介するための活性化剤を用いることによって行うことができる。カップリング反応に用いることができる様々な活性化剤には、それだけには限定されないが、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサ−フルオロリン酸（ＢＯＰ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（これらの混合物を含む）が含まれる。カップリング反応は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはＤＭＦ中で行うことができる。別の一例では、カップリング反応は、ＤＭＦ中ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、およびＮＭＭの存在下で、保護されているヒドロキシルアミンとのスルホンアミド処理を伴うことがある。アミン−酸カップリング反応のその教示に関して本明細書に参照として組み入れられる、Ｔａｍｕｒａら、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、１９９８年、４１巻、６４０〜６４９頁を参照されたい。
【００７８】
他の結合の技術は、結合技術の教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる、Ｇｒｅｇ Ｔ． Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、１９９６年に開示されている。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例は、本明細書に記載され、請求される化合物、組成物、物品、装置、および／または方法を作成し、評価する方法の完全な開示および記載を当業者に提供するために記載するものであり、純粋に例示しようとするものであり、本発明者らが本発明としてみなすものの範囲を制限しようとするものではない。数（例えば、量、温度など）に関して確実に正確にするために努力したが、いくらかの誤差および偏差を考慮に入れなければならない。別段の指摘がなければ、部とは重量による部であり、温度とは℃におけるものであり、または周囲温度におけるものであり、圧力は大気圧、または大気圧付近におけるものである。成分濃度、望ましい溶剤、溶剤混合物、温度、圧力および他の反応範囲、ならびに本明細書に記載する方法を最適化するために用いることができる条件など、条件の多くの変形および組合せが存在する。理にかなっており、慣例である実験法だけが、このようなプロセス条件を最適化するのに必要とされる。
【００８０】
（実施例１）
磨砕（粉砕）手順
ポリマー粒子の磨砕を、Ｒｅｔｓｃｈミル ＺＭ（Ｒｅｔｓｃｈ、Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ、ドイツ）を用いて行った。ポリマー粒子を磨砕するのに、０．５ｍｍのスクリーンおよび歯数２４のローターを用いた。
【００８１】
用いたポリマーは、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からのＬａｋｅｓｈｏｒｅポリマー、７５〜２５酸性であった。最初に、ポリマーを、液体窒素中で１０分間冷却してから磨砕した。Ｒｅｔｓｃｈミルも液体窒素を用いて予め冷却した。次いで、凍結したポリマーをＲｅｔｓｃｈミルに連続的に加え、粉砕速度１８０００ｒｐｍを用いて磨砕した。
【００８２】
（実施例２）
篩い分け手順
実施例１の粉砕操作からのポリマー生成物を、次いで、そのまま、手操作によって篩い分けした。ポリマー生成物を、３００μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーンの上部に配置した。９０μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーンを、３００μｍスクリーンの下に固定した。３００μｍスクリーンの上部に覆いを配置した。次いで、組み立て物を手で揺すって、粒子をサイズによって分離した。９０μｍスクリーンの上部に回収された材料は、約９０μｍから３００μｍまでの範囲のサイズを有する粉砕されたポリマーの粒子サイズ分画を表していた。
【００８３】
次に、この粉砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、真空乾燥機中で乾燥させた。これを、室温の真空乾燥機の内部に配置した。一夜（約１６時間）、材料上を真空に引いた（約２５μｍＨｇ）。次いで、粒子サイズが約９０〜３００μｍの範囲である篩い分けしたポリマーを、さらなる調査に用いた（図１）。
【００８４】
（実施例３）
Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し
押出し加工したポリマーバルク押出物を、直径１．５ｍｍの押出しダイに適合させ、温度１００℃に設定したＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した。出発ポリマー（Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ７５：２５ ＤＬ−ＰＬＧ、Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍから）を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【００８５】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。ポリマー約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレルに挿入し、プランジャーに１０ｋｇの重量をかけてポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマーの粉末をプラストメーターのバレルの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、ポリマーをプラストメーターから、固体の円柱状チューブの形態に押出し加工した（押出物）。押出物を、カミソリの刃を用いて約１〜２ｍｍの長さの短い円筒形片に切断した。図３を参照されたい。次いで、これらの切断した円筒状押出物を、以下に記載する球状化プロセスで用いた。
【００８６】
さらなるポリマーおよびポリマーブレンドを、プラストメーターを用いて押出し加工した。例えば、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）（図５）およびＵｌｔｒａｔｈｅｎｅエチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）（図７）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、他所に記載するように他のサンプルと一緒にプラストメーターを用いて押出し加工した。
【００８７】
（実施例４）
球状化プロセス
ポリマーサンプル約１から１．５グラム（実施例３からの切断ポリマー押出物、または実施例２からの篩い分けしたポリマー粉末のいずれかなど）を２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。これに、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）２重量％からなる水溶液約１００グラムを加えた。ビーカーおよびその内容物を、加熱攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液またはスラリーを、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。５分後、攪拌プレートを用いてビーカーを加熱した。内容物の温度をモニターし、内容物の温度が９０℃に達するまで加熱を続けた。この温度に到達したら、内容物を規定された時間（例えば、１時間、２時間、または３時間）攪拌した。設計された攪拌時間（処理時間）の後、ホットプレートのスイッチを切り、次いで脱イオン（ＤＩ）水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、１５０μｍのふるいおよび９０μｍのふるい（お互いの上部に積み重ねて）に注いだ。次いで、９０μｍスクリーンの上部に回収された材料を、室温のＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、ポリマー全体が乾燥するように約１６時間、層流フードに配置した。切断した押出物材料に対して処理を行った場合は、１５０μｍふるい（９０μｍふるいではなく）の上部で生成物を回収した。図２、４、６、および８を参照されたい。
【００８８】
（実施例５）
添加剤または可塑剤
実施例１に従ってポリマーを粉砕した。ＤＬ−ＰＬポリマー（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｉｎｃ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬ）を用いた。粉砕後、ポリマーを実施例２に従って篩い分けした。次いで、篩い分けしたポリマー約２グラムを、９０μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーン上に配置した。酢酸エチル５０グラムを含む２５０ｍＬビーカー上にふるいをセットした。ポリマーを含むふるいを、酢酸エチルを含むビーカーの上に１時間維持した。１時間後、ふるいを除去した。ふるいの内容物を、２重量％ＰＶＡ１００グラムを含む２５０ｍＬビーカーに移した。懸濁したポリマーを実施例４に記載した通りに処理したが、９０℃の代わりに４０℃の処理温度を用いた。処理時間は１時間であった。図１０を参照されたい。
【００８９】
ポリマーの別のサンプルを、実施例２に従って篩い分けし、次いで、上記と同じ方法で処理したが、酢酸エチルでの処理は行わなかった。処理温度は４０℃であった。図９を参照されたい。
【００９０】
示差走査熱量計分析（ＤＳＣ）を利用して、ポリマー粒子サンプルのガラス転移温度（Ｔｇ）を測定した。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ２９２０（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）を用い、５〜１０ｍｇのサンプルに対して、加熱速度１０℃／分を用いてＤＳＣを行った。酢酸エチルを用いて可塑化しなかったポリマーサンプルのガラス転移温度は４６℃であることが見出された。酢酸エチルで可塑化したポリマーサンプルのガラス転移温度は２６℃であることが見出された。
【００９１】
（実施例６）
結合手順
ＥＤＣ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｐｉｅｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬからの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド）の溶液１００ｍＭを、０．１Ｍ ＭＥＳバッファー（モルホリンエタンスルホン酸バッファー）で調製した。次に、実施例４からの球状化した粒子２５０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、次いでそれにＥＤＣ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）またはＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）のいずれか（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから）１０ｍｇを加え、さらに２時間内容物を振盪した。
【００９２】
バイアルを、約１６時間（一夜）冷蔵庫に配置した。翌朝、バイアルおよび内容物を２５μｍ試験ふるい上に注いだ。回収した粒子を大量の水およびリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。次いで、回収した粒子を層流フードで乾燥させた。コントロールのサンプル（タンパク質またはＥＤＣあり、およびなし）を、列挙したように調製した。
【００９３】
（実施例７）
結合した粒子に対するタンパク質アッセイ
Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬから）を用いて、実施例６からのコントロールサンプルおよび試験サンプルの両方をタンパク質含量に対して分析した。サンプルを、５９０ｎｍのＵＶ−Ｖｉｓによって分析した。材料約２０〜３０ミリグラムを、試験管中に正確に重量を量り入れ、１Ｎ ＮａＯＨ ２ｍＬを加えた。試験管の内容物を約１８時間にわたって溶解させた。
【００９４】
この時点で、ＰＢＳ ２ｍＬ、ｐＨ７．４を加え、リン酸を用いてｐＨ７にｐＨ調整した。次いで、内容物を１０ｍＬメスフラスコに分析用に移し、次いでＰＢＳでその体積に希釈した。次いで、Ｐｉｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキットの指示に従って、タンパク質分析を行った。スタンダードは、ＢＳＡまたはＨＲＰのいずれかからそれぞれ調製した。アッセイコントロールを、好適な化学のステップで用いたのと等しい量の材料を用いて調製した。次いで、分析用の調製では、これらのコントロールサンプルを、試験サンプルを処理するのに用いたのと同じサンプル調製ステップに対して処理した。データを表１に示す。
【００９５】
【表１】
。
【００９６】
（実施例８）
粒子の予備的な塩基処理を伴う結合手順
実施例４からの球状化した粒子のサンプル２５０ｍｇを、２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れた。次に、バイアルに１Ｎ ＮａＯＨ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を３０分間振盪した。３０分粒子を落ち着かせた後、ピペットを用いて、粒子を残して溶液を除去した。次いで、水１０ｍＬを加え、バイアルの内容物をボルテックスミキサーを用いて混合した。粒子を落ち着かせた後、ピペットを用いて、粒子を残して溶液を除去した。上記のプロセスをもう一度繰り返した。
【００９７】
次に、ＥＤＣ溶液１０ｍＬをバイアルに加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）１０ｍｇを加え、内容物をさらに２時間振盪した。実施例６に記載したサンプルを含むＢＳＡも、コントロールとして繰り返した。サンプルに対するタンパク質アッセイは、実施例に列挙したのと同じであった。比較の目的で、水酸化ナトリウム溶液で前処理しなかったポリマー粒子を用いて、ＢＳＡ結合をやはり行った（コントロールサンプル）。結合したコントロールおよびこの実施例からの試験サンプルの分析からの結果を表２に提供する。
【００９８】
【表２】
。
【００９９】
（実施例９）
球状化したポリマー粒子の表面へのポリエチレングリコール−ＮＨ２（ＰＥＧ−ＮＨ２）ポリマーの関与する表面結合
球状化したポリマー粒子の表面へのＰＥＧ−ＮＨ２の結合
ＥＤＣ溶液（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ）１００ｍＭをＭＥＳバッファーで調製した。次に、実施例４からの球状化した粒子２５０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、次いで、これにＥＤＣ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、アミンを終端としたポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＮＨ２、分子量５０００ダルトン）（ＬａｙｓａｎＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ａｒａｂ、ＡＬ）１０ｍｇを加え、内容物をさらに２時間振盪した。
【０１００】
バイアルを冷蔵庫に約１６時間（一夜）配置した。翌朝、バイアルおよび内容物を２５μｍ試験ふるい上に注いだ。回収した粒子を大量の水およびＰＢＳで洗浄した。次いで、回収した粒子を、層流フードで、室温で蒸発させて乾燥させた。コントロールのサンプル（ＰＥＧ−ＮＨ２またはＥＤＣあり、およびなし）を、列挙した通りに調製した。
【０１０１】
結合した微小球状のサンプルにおけるＰＥＧ−ＮＨ２の測定
結合した微小球状のサンプルのＰＥＧ−ＮＨ２含量を、ＮＭＲ分析によって測定した。ＰＥＧ−ＮＨ２を、重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって測定した。３．６ｐｐｍの化合物に対して一重線のピークが確認された。７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ６Ａ（Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬ）のサンプルを重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって分析した。ＰＥＧ−ＮＨ２を含まないコントロールのポリマーサンプルでは、３．６ｐｐｍではピークは確認されなかった。一点スタンダードとして、ＰＥＧ−ＮＨ２濃度０．４重量％の、ＰＥＧ−ＮＨ２および７５：２５ＤＬ−ＰＬＧのサンプル１００ｍｇを調製した。このスタンダードのサンプルを重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって分析した。スタンダードのサンプルの３．６ｐｐｍシフトに対するピーク高さを測定し、試験およびコントロールのサンプルのＰＥＧ含量を推定するための一点スタンダードとして用いた。ＰＥＧ結合した微小球状の試験サンプル１００ｍｇを、（記載する通り、様々な他のコントロールサンプルと一緒に）重水素化したクロロホルム中に溶解することによってコントロールサンプルと同様の様式で調製した。ＮＭＲ分析により、試験サンプルに含まれていたＰＥＧでは３．６ｐｐｍのピーク高さが得られた。試験サンプルのＰＥＧ含量を、スタンダードのサンプルのピーク高さに対して決定した。試験サンプルおよびコントロールサンプルのＰＥＧ含量を、表３に示す。
【０１０２】
【表３−１】
【０１０３】
【表３−２】
。
【０１０４】
（実施例１０）
低残留モノマーレベルを有する市販のポリマーの分析
低レベルのラクチドを有すると報告されている市販のポリマー（Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ（ＢＩ）、Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ、ドイツ）のポリマーサンプルを分析した。ＢＩによる分析証明書に報告されている最低値は＜０．０１重量％である。残留モノマーをガスクロマトグラフィーによって分析した。分析方法はガスクロマトグラフ法であった。方法の詳細は以下の通りである：Ｒｅｓｔｅｋ Ｒｔｘ−１、３０ｍ×０．５３ｍｍＩＤ、５μｍガスクロマトグラフカラム（Ｒｅｓｔｅｋ Ｉｎｋ．、Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ、ＰＡ）を用い、ヘリウム流速２４．５ｍＬ／分、スプリット比４：１でポリマーサンプルを分析した。ガスクロマトグラフへのサンプル導入を、注入口温度１４５℃を用いて行った。開始温度１２５℃で７．５分間、次いで２５℃／分で２００℃まで上昇させ４．５分間保持する、ＧＣオーブンの温度勾配プログラムを用いた。モノマーの検出は、ＦＩＤによって２５０℃で行った。ポリマーサンプルを、１．５重量％ポリマー（２５ｍＬ中０．３７５ｇ）の濃度で塩化メチレンに溶解した。ラクチドおよびグリコリドのスタンダードは、ラクチドでは８から１６０μｇ／ｍＬ、グリコリドでは４から８０μ／ｍＬの範囲であった。
【０１０５】
記載がある場合は、０．００２重量％のラクチドの定量下限（ＬＯＱ）レベルで計測を何回か行った。これらの場合、４ｐｐｍ（ラクチド）の、一点キャリブレーションスタンダードを調製した。このスタンダードの６回反復注入を行い、ＬＯＱはスタンダード４ｐｐｍの約１０倍のシグナル対ノイズ比のレベルであると推定した。これらのアッセイでは、６重量％ポリマー（５ｍＬ中０．３ｇ）の濃度の試験サンプルを調製して、検出レベルをさらに改善した。ＢＩサンプルの試験の結果を表４にまとめる。
【０１０６】
【表４−１】
【０１０７】
【表４−２】
。
【０１０８】
（実施例１１）
開示するプロセスによって処理したポリマーの調製および分析
高残留モノマーレベルを有する、７５：２５ＰＬＧポリマー（７５２５ＤＬＧ ６Ａ）を、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。このポリマーを、実施例１に記載したように粉末に粉砕した。この粉末を、実施例２に記載した通り篩い分けしたが、３００μｍフィルターの代わりに１５０μｍフィルターを用いた。これにより、粒子サイズ分画が９０から１５０μｍまでのサイズの粉末が得られた。この磨砕し、篩い分けした材料を、次いで、実施例４に記載した通りに処理した。非処理のポリマーおよび試験サンプルの残留モノマー試験の結果を表５に示す。
【０１０９】
【表５】
球状化プロセスは、材料が開始時に非常に高い残留ラクチドレベルを有する場合でも、ラクチドレベルを低減するのに有効であった。開始時に低いラクチドレベルを有する出発材料が、より短い処理時間でその残留ラクチド含量を低下させることができるというのは実に可能である。このサンプルに対して達成される残留ラクチドレベルは、見かけのＬＯＱまたはそれ未満の残留ラクチドレベルを有すると業者が報告した市販のポリマーサンプルに対して測定した残留モノマーレベルより約３倍低かった（報告されたラクチドレベルは＜０．０１重量％であった）。これは、このプロセスを用いることで、他の市販の業者から現在入手可能であるものを上回る、大幅な改善があることを示している。
【０１１０】
（実施例１２）
処理温度を変化させた、開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
１つは酸の終端基を有し（５０５０ＤＬＧ４Ａ）、１つはエステルの（キャップ付けされた）終端基を有する（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）、２つの５０：５０ＰＬＧポリマーをＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。受け取ったポリマー各々の残留モノマーレベルは類似していた（業者から受け取ったもののラクチド含量は１〜１．２重量％）。ポリマーを、実施例１に記載したのと類似の様式で粉砕して粉末にした。得られた粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。
【０１１１】
この磨砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、次いで、実施例４に記載したように処理したが、９０℃の代わりに５０℃および８０℃の処理温度を用い、処理時間を下記に特定するように変化させた（２分から６時間までの範囲）。出発ポリマー（受け取ったもの）および試験サンプルの残留モノマー試験の結果を表６に示すが、これはポリマーの残留モノマーレベルを低下させるために様々な処理温度および時間を用いることができることを示している。
【０１１２】
ＧＰＣによって、これらのサンプルに対するＧＰＣ分子量測定も行った。クロロホルム中のサンプルを、ＪｏｒｄｉゲルＤＶＢ１００００オングストローム、１０×５００ｍｍカラム（ＣｈｒｏｍＴｅｃｈ Ｉｎｃ）を用いて１ｍＬ／分の流速で分析した。検出を蒸発光散乱検出によって行い、ＤＩＮ認定されたポリスチレンスタンダード（ＣｈｒｏｍＴｅｃｈ Ｉｎｃ．）と比較することによって分子量を決定した。重量平均分子量を表７に報告する。
【０１１３】
【表６】
【０１１４】
【表７】
。
【０１１５】
（実施例１３）
添加剤を用いて開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
１つは酸の終端基を有し（５０５０ＤＬＧ４Ａ）、１つはエステルの（キャップ付けされた）終端基を有する（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）、２つの５０：５０ＰＬＧポリマーをＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。受け取ったポリマー各々の残留モノマーレベルは類似していた（業者から受け取ったもののラクチド含量は１〜１．２重量％）。ポリマーを、実施例１に記載したのと類似の様式で粉末に粉砕した。得られた粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。
【０１１６】
磨砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、次いで、実施例４に記載した通りに処理したが、磨砕したポリマー約１〜１．５グラムを、ＰＶＡ２重量％および炭酸水素ナトリウム１重量％からなる溶液１００グラムで処理し、処理を５０℃で６時間行った。両方の残留モノマー試験の結果を表８に示す。
【０１１７】
【表８】
。
【０１１８】
（実施例１４）
前処理および処理の条件を変化させた、開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
５０：５０ＰＬＧポリマー（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）をＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から得た。このラクチドモノマー含量の報告値は１．２重量％であった。このポリマーを、実施例１に記載したように微粉末に磨砕した。この粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。この磨砕および篩い分けした材料を、次いで、以下の修飾を行って実施例４に記載したように処理した。
【０１１９】
サンプル１から５を、最初に、可塑剤であるエタノールでポリマーを前処理し、その後、引き続き実施例４に記載する一般的な方法によって処理することによって調製した。簡潔に述べると、サンプル１〜５は、粉砕し篩い分けしたポリマー約１．５グラムを２５０ｍＬのビーカーに加え、次いでビーカーにエタノール１０グラムを加えることによって調製した。スラリーを３０分間攪拌した。
【０１２０】
サンプル１および２を、次いで、室温（ｒｔ）の２重量％ＰＶＡ溶液１００グラム中に移した。サンプル１は室温で３時間攪拌し、サンプル２は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２１】
エタノールで３０分処理した後、次いで、サンプル３および４をさらなる１００グラムのエタノールで希釈した。サンプル３は室温で３時間攪拌し、サンプル４は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２２】
最後に、エタノールで３０分処理した後、サンプル５をヘプタン１００グラム中に移し、次いでこのスラリーを３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２３】
サンプル６および７は、実施例３に記載したように作成した、長さ約１０〜１２ｃｍの、押出し加工したポリマーの円柱を用いて調製した。これらの特定のサンプルでは、ポリマー約１〜１．５グラムを、先に記載したようにエタノール１０グラムで３０分間処理した。次いで、サンプル６および７を、２重量％のＰＶＡ溶液１００グラムに移した。次いで、サンプル６は室温で３時間攪拌し、サンプル７は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２４】
サンプル８は、エタノールではなく酢酸エチルの可塑剤に対してポリマー粒子を前処理することによって調製した。前処理は、実施例５に先に記載したように、ポリマー粒子を蒸気状態の酢酸エチルに曝露することによって行った。次いで、前処理したポリマー約１〜１．５グラムを２重量％のＰＶＡ溶液１００グラムに加え、攪拌しながら５０℃に３時間加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２５】
サンプル９および１０は、各々、ポリマー２グラムを酢酸エチル２グラム中に溶解することによって調製した。濃縮したポリマー溶液を１０ｍＬシリンジに移し、これに１８ゲージの針を取り付けた。サンプル９はシリンジの内容物を１８ゲージ針を通して、攪拌しながら２重量％のＰＶＡ溶液１００グラム中に注入することによって調製した。サンプルを室温で３時間攪拌した。サンプル１０は同様の様式で調製したが、シリンジの内容物を５０℃に加熱した２重量％のＰＶＡ溶液１００グラム中に注入した。サンプルを５０℃で３時間攪拌し、その後回収した。残留モノマー（ラクチド）試験およびポリマーの分子量分析の結果を表９および１０に示す。
【０１２６】
【表９−１】
【０１２７】
【表９−２】
【０１２８】
【表１０】
。
【０１２９】
（実施例１５）
押出物−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（ビタミンＢ１２およびナルメフェン塩基の両方）
押出し加工した薬物−ポリマーのバルクの押出物を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター、および実施例３に記載した通り１．５ｍｍの押出しダイと１００℃の設定温度を用いて調製した。
【０１３０】
出発ポリマー（Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ７５：２５ＰＬＧ６Ａ、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬから）を、最初に磨砕し、実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。唯一の例外はサンプル４および５であり、これらは９０〜１８０μｍのスクリーンを通して回収したポリマー粉末を用いて調製した。
【０１３１】
ビタミンＢ１２をＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｎｏｒｔｈｈａｍｐｔｏｎｓｈｉｒｅ、英国）から入手した。ナルメフェン塩基は、塩酸ナルメフェン（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、Ｈａｚｅｌｗｏｏｄ、ＭＯより購入）を水酸化ナトリウムを用いて遊離塩基に変換することによって得た。十分な薬物を加えることによって薬物とポリマーのブレンドを個々に調製し、最終の薬物−ポリマーブレンドにおいてブレンドは薬物５重量％を含んでいた。これらのブレンドを完全に混和し、次いで、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１３２】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。薬物−ポリマー粉末ブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて、粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、押し出した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１３３】
（実施例１６）
押出し−Ｒａｎｄｃａｓｔｌｅ ＲＣ−０５００ １／２インチ押出し機
記載がある場合は、加熱ゾーンを４つ有するＲａｎｄｃａｓｔｌｅシングルスクリュー押出し機を用いて押出しを行った。操作温度１７０°Ｆ（７７℃）に設定したゾーン１（押出しバレルのフィードまたは入り口終端に位置する）以外は、すべてのゾーンを２２０°Ｆ（１０４℃）の温度で操作した。直径１．８ｍｍの押出しダイとともにスクリュー速度２０ｒｐｍを用いた。最終混合物に薬物５重量％を含む、粉末化した薬物およびポリマーのブレンド２０グラムを調製した。この操作で用いたポリマー粉末を、実施例２に記載したように篩い分けしたが、サイズ範囲約９０から１８０μｍを有するポリマー粉末を提供するために３００μｍのスクリーンの代わりに１８０μｍのスクリーンを用いた。これら２つの材料を合わせて完全に混和した後、このブレンドを押出し機にゆっくりと加えた。生成物を長さ６〜１０インチ（１５．２〜２５．４ｃｍ）に切断した。薬物とポリマーのブレンド２０グラムを押出し機に加え、押出物が押出し機を完全に離れるまで、押出しを行った。
【０１３４】
（実施例１７）
押出し加工した薬物−ポリマー押出物の磨砕
実施例１５および１６両方からのバルクの薬物−ポリマー押出物を、実施例１に記載したように磨砕して粉末にした。最初に押出物を、磨砕プロセスに備えて１〜２ｃｍの長さの断片に切断した。次いで、この材料を１０分間、液体窒素で凍結させた後、粉砕した。次いで、凍結した材料をＲｅｔｓｃｈミルに配置し、１．０ｍｍスクリーンおよび歯数１２のローターを用いて磨砕した。次いで、生成物を回収し、再凍結し、０．５ｍｍスクリーンおよび歯数２４のローターを用いて２回目の磨砕をした。操作はすべて１８０００ｒｐｍで行った。
【０１３５】
押出しプロセスの後、材料を１５０μｍの試験ふるいを通して篩い分けした。１５０μｍのふるいを通過した、粉末化した薬物−ポリマー押出物を維持し、次いで約１６時間（一夜）真空下（室温）で乾燥させた。
【０１３６】
（実施例１８）
磨砕した薬物−ポリマー押出物の処理（水性およびヘキサン処理）
実施例１７からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。記載がある場合は、ＰＶＡ水溶液を過剰の薬物で処理して、加熱処理プロセスの間、確実に飽和するようにした。しかし特に指摘されなければ、処理プロセスの間ＰＶＡ溶液にはさらなる薬物は加えなかった。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍのふるい上の１５０μｍのふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーンの上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置してポリマーを乾燥させた。
【０１３７】
あるいは非水性系で処理を行った。上記の方法と同様に、ヘキサンにおける処理を行った。粉末化した薬物−ポリマー押出物約１．２グラムを、ヘキサン２００グラムおよびＳｐａｎ８５ ２０グラムを含む２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。ホットプレートの加熱および攪拌を、上記に記載した通りに行った。攪拌した懸濁液を８０℃に加熱し、３０分間、この温度に保った。熱源を取り除き、懸濁液を（攪拌しながら）温度が５０℃未満に下がるまで冷却した。この時点で、内容物を、９０μｍふるい上の１５０μｍふるい上に注いだ。９０μｍスクリーン上に回収された材料を、次いで、ヘキサン１Ｌで完全にすすいだ。次いで、生成物を、約１６時間（一夜）、層流フードに配置してポリマーを乾燥させた。
【０１３８】
（実施例１９）
ビタミンＢ１２粒子の薬物測定
実施例１８からの粒子２０から３０ｍｇを、１０ｍＬのネジぶた付き試験管中に量り入れ、塩化メチレン２ｍＬを加えた。粒子を溶解させ、水２ｍＬを加え、内容物を混和した。次いで、試験管を遠心器に配置して２層を分離した。上層を除去し、２５ｍＬメスフラスコに加えた。試験管に水２ｍＬを加え、上記のプロセスをさらに２回繰り返した。抽出物を１本のフラスコに併せ、マークまで希釈した。アリコートを、０．４５μｍシリンジフィルターを通してろ過して除き、ＨＰＬＣバイアルに移した。ビタミンＢ１２含量をＨＰＬＣ法（２７０ｎｍのＵＶ）によって測定した。薬物およびポリマーの重量を量り、上記と同じステップを行うことによってコントロールを調製した。
【０１３９】
（実施例２０）
ビタミンＢ１２粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例１８からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、ＰＢＳ１０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２７０ｎｍのＵＶ）を用いてビタミンＢ２に対してアッセイした。累積の放出されたビタミンＢ１２を報告した。
【０１４０】
（実施例２１）
ナルメフェン粒子の薬物測定
実施例１８からの粒子２０から３０ｍｇを、２５ｍＬメスフラスコ中に量り入れ、氷酢酸２ｍＬを加えた。粒子を溶解させた。粒子がすべて溶解した後、ＰＢＳでフラスコをその体積に希釈した。混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを用いてろ過した。ろ過した溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、サンプルをＨＰＬＣ（２６８ｎｍのＵＶ）によって分析した。薬物およびポリマーを量り、上記と同じステップを行うことによって、コントロールを調製した。
【０１４１】
（実施例２２）
ナルメフェン粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例１８からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、０．５重量％のＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を含むＰＢＳ２０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２６８ｎｍのＵＶ）を用いてナルメフェンに対してアッセイした。累積の放出されたビタミンおよびナルメフェンを報告する。
【０１４２】
実施例１９〜２２の結果を、下の表１１〜１２に示す。
【０１４３】
【表１１】
【０１４４】
【表１２−１】
【０１４５】
【表１２−２】
抽出を最小にするために、ＰＶＡ溶液を薬物で飽和させる試みを行った。これは、最終の負荷レベルが高かったので（投入レベル５％まで／を超える）助けとなった。５％を超える値は、この溶液が実際に十分に飽和していたことを確実にするために、飽和ＰＶＡ溶液が実際に余分な遊離の薬物を系に攪拌して含んでいた事実を反映している。この残留の遊離の薬物は、最終の粒子生成物と一緒に最終的に回収され、出発の（理論上の）レベルよりも高い見かけの薬物レベルをもたらした。しかし、これらの高ロードのサンプルをｉｎ ｖｉｔｒｏの試験にかけた場合、１日の間隔で急速な最初の薬物放出（バースト）が観察された。
【０１４６】
１〜２％の薬物負荷を有する他のサンプル（すなわち、サンプル１、４、および６）は、最終の生成物をｉｎ ｖｉｔｒｏ系における薬物の徐放に用いることができることを、さらに実証している。
【０１４７】
（実施例２３）
薬物負荷の分析
残留の薬物を、試験の終わりに残留しているサンプルからの微粒子サンプル自体から抽出した（表１２に概略した通り）。次いで、放出された薬物の、サンプルで用いられた薬物の全量に対する質量収支を実証するために、この薬物を定量した。結果は、質量収支が達成されたことを、すなわち、実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出の実験で放出されなかった残留の薬物が、見出され、残留の粒子サンプル内に捕捉されていたことの説明となることを実証している。結果を表１３に示す。
【０１４８】
【表１３】
。
【０１４９】
（実施例２４）
押出し−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（ポリカプロラクトン中リスペリドン）
押出し加工した薬物−ポリマーのバルクの押出物を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターおよび１．２ｍｍの押出しダイ、および８０℃の設定温度を用いて調製した。この実施例では、ポリカプロラクトンのポリマー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を最初に磨砕し、実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍのサイズ範囲に篩い分けした後、用いた。
【０１５０】
最終ブレンドの１０重量％の薬物を含むブレンドを調製するために、薬物粉末（Ｊｕｂｉｌａｎｔ Ｏｒｇａｎｏｓｙｓ Ｌｔｄ、Ｍｙｓｏｒｅ、インドからのリスペリドン）を十分量、ポリマー粉末に加えた。次いで、薬物およびポリマー粉末を併せて完全にブレンドした。このブレンドした薬物およびポリマーの粉末を、次いで、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１５１】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。薬物−ポリマー粉末のブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、プランジャーに１０ｋｇの押出し重量をかけて粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、押し出した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍの小切片に切断した。
【０１５２】
（実施例２５）
磨砕した薬物−ポリマー押出物の処理
実施例２４からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、実施例１７に示したように、カミソリの刃で１〜２ｍｍの小切片に切断し、磨砕し、篩い分けした。
【０１５３】
２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムを、ビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１５４】
５分後、加熱した攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、３０分間温度を９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍのふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。
【０１５５】
（実施例２６）
リスペリドン粒子の薬物測定
実施例２５からの粒子２０から３０ｍｇを、２５ｍＬメスフラスコ中に量り入れ、氷酢酸２ｍＬを加えた。粒子を溶解させた。粒子がすべて溶解した後、ＰＢＳでフラスコをその体積に希釈した。混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを用いてろ過した。ろ過した溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、サンプルをＨＰＬＣ（２６８ｎｍのＵＶ）によって分析した。薬物およびポリマーの重量を量り、上記と同じステップを行うことによって、コントロールを調製した。結果を表１４に示す。
【０１５６】
（実施例２７）
リスペリドン粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例２５からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、ＰＢＳ ５０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１０ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１０ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２６８ｎｍのＵＶ）を用いてリスペリドンに対してアッセイした。累積の放出されたリスペリドンを表１５に報告する。実施例２３で先に記載したように、粒子が持続放出用の薬物を依然として含んでいることを実証するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏの放出実験の終結時の粒子に対して質量収支を行った。結果を表１６に示す。実施例２４〜２７の結果を下の表１４〜１６に示す。
【０１５７】
【表１４】
【０１５８】
【表１５】
【０１５９】
【表１６】
。
【０１６０】
（実施例２８）
押出し−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（５０：５０ＰＬＧ中のクマリン６）
押出し加工した薬物−ポリマーバルクの押出物を、１．２ｍｍの押出しダイおよび８０℃の設定温度を用いて、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した。出発ポリマーである、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓからの５０：５０ＰＬＧ（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）を、最初に磨砕し、実施例１および２それぞれに記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。
【０１６１】
磨砕し、篩い分けしたポリマー４グラムを、ポリマー濃度１０重量％の塩化メチレンに溶解した。クマリン６（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＰＡ）を、ポリマーおよびクマリンを併せた全重量をベースに０．５重量％の負荷でポリマー溶液に加えた。この溶液をフルオロポリマーフィルム上に蒸発させることによって、ポリマー−クマリンフィルムを得た。次いで、Ｔｉｎｉｕｓ Ｏｌｓｅｎプラストメーター用に供給原料を調製するために、得られたキャストフィルムを小片に切断した。
【０１６２】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。調製したフィルム片約３グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて、粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間後、押出しダイ上のプラグを除去し、押出し加工した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１６３】
（実施例２９）
クマリン−ポリマー切片の処理
実施例２８からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、カミソリの刃で１〜２ｍｍの小切片に切断した。２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１６４】
５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を３０分間９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を９０μｍふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料をＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。
【０１６５】
図１１および１２は、それぞれ、非処理の、および処理したクマリン−６ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。
【０１６６】
（実施例３０）
酸化鉄および５０：５０ＰＬＧの押出し
Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて、５０：５０ＰＬＧおよび酸化鉄磁性ナノ粒子で押出しを行った。１．２ｍｍ押出しダイを用いて、設定温度１００℃で押出しを行った。Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓからの、５０５０ ＤＬＧ ３Ｅポリマーを最初に磨砕し、それぞれ実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。
【０１６７】
最終のブレンドの１０重量％のナノ粒子を含むブレンドを調製するために、磁性ナノ粒子（Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｎａｎｏ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、ＦｅｒｒｏＴｅｃ Ｃｏｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を十分量ポリマー粉末に加えた。次いで、ナノ粒子およびポリマー粉末を併せて完全にブレンドした。次いで、このナノ粒子とポリマーのブレンドした粉末を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１６８】
押出しダイを、プラグを用いて最初に閉じた。ナノ粒子／ポリマー粉末のブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間後、押出しダイ上のプラグを除去し、押出し加工した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１６９】
（実施例３１）
磨砕したナノ粒子−ポリマー押出物の処理
実施例３０からの粉末化したナノ粒子−ポリマー押出物１から１．５グラムを、カミソリの刃で長さ１〜２ｍｍの小切片に切断し、次いでこれを実施例１７に示したように磨砕し、篩い分けした（図１３）。
【０１７０】
２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート上に配置した（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１７１】
５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を３０分間９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。図１３および１４は、それぞれ、非処理の、および処理した酸化鉄／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。
【０１７２】
当業者であれば、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、本発明における様々な修飾および変形を行うことができるのは明らかである。当業者であれば、本明細書に開示する本発明の明細書および実践を考慮すれば、本発明の他の実施形態は明らかである。明細書および実施例は例示にすぎないとみなされ、本発明の真の範囲および精神は添付の特許請求の範囲によって示されることが企図される。
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００６年１０月３１日に出願された、米国仮特許出願第６０／８５５，５５１号の優先権の利益を主張し、この出願をその全体を参考として本明細書中で援用する。
【背景技術】
【０００２】
背景
ポリマー粒子には多数の使用がある。ポリマー粒子は、薬物の送達および作用のタイミング、部位、および放出のプロファイルに影響を及ぼすために、薬物およびワクチンの担体として医薬の設定で用いることができる。ポリマー粒子は、診断の補助として用いて撮像剤および造影剤を運搬することもできる。ポリマー粒子には、塗料、コーティング、および密封剤などにおいて、多くの産業上の使用もある。
【０００３】
ポリマー粒子の形状は、特定の使用に対する適合性にとって最も重要であり得る。このようなものとして、所望の形状を得るために、特定の形態のポリマー粒子を調製し、また粒子を処理加工（例えば、磨砕、切断、粉砕）するための多くの方法が存在する。しばしば、特定のポリマー粒子を調製し、またはその粒子を処理加工する結果、粒子の表面は粗く、かつ／またはギザギザする。このように不規則な形状の粒子には、放出のプロファイルに変動が大きいこと、および粒子内への薬物の投薬など、いくつかの不都合があることがある。他の問題点は送達に関するものであり得る（例えば、凝固および凝集）。このようなものとして、ポリマー粒子を取り、その形態を変更してより均一な形状をもたらすのが望ましいことがある。本明細書に開示する方法はこれらおよび他の必要を満たすものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
本明細書に具体化し、広範に記載する通り、開示する材料、組成物、物品、装置、および方法の目的に従い、一態様では、開示する主題はこのような化合物および組成物を調製し、用いるための化合物および組成物および方法に関する。ポリマー粒子、およびこのような粒子を作成し、用いる方法も開示する。
【０００５】
さらなる利点は、一部は以下の明細書において述べられ、一部は明細書より明らかであり、または以下に記載する態様を実践することによって習得することができる。以下に記載する利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘する要素および組合せによって理解され、達成されよう。前述の概要の記載および以下の発明を実施するための形態は例示的および説明的なものにすぎず、限定的なものではないことを理解されたい。
【０００６】
添付の図面は本明細書に組み入れられ、その一部分を構成するものであり、以下に記載するいくつかの態様を例示する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】球状化処理前の、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの７５：２５ＰＬＧ（７５２５ＤＬＧ６Ａ）の篩い分けしたポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールバーは０．２５ｍｍを表す）。
【図２】実施例４に記載する球状化処理後の、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの７５：２５ＰＬＧ（７５２５ＤＬＧ６Ａ）の篩い分けしたポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図３】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーからの７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図４】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーからの７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図５】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの押出し加工したポリマーであるポリカプロラクトン（ＰＣＬ）１００ＣＬ１２ＥのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図６】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からの押出し加工したポリマーであるポリカプロラクトン（ＰＣＬ）１００ＣＬ１２ＥのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図７】球状化処理前の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーＥＶＡのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図８】実施例４に記載する球状化処理後の、実施例３に記載するＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した、押出し加工したポリマーであるＥＶＡのＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図９】酢酸エチルに曝露せず、実施例４に記載するように４０℃の球状化プロセスに対して処理したＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からのポリ（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬ−ＰＬ）ポリマーのポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である。４０℃の処理後、ポリマー粒子は不規則であり、非球状であることに注目されたい（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１０】最初に酢酸エチルを用いて可塑化し（実施例５に記載する通り）、次いで実施例４に記載するように４０℃の球状化プロセスに対して処理したポリ（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬ−ＰＬ）ポリマーのポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である。図９に示した粒子とは対照的に、４０℃の処理後では可塑化したポリマー粒子の形状はより規則的になったことに注目されたい（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１１】非処理のＣｏｕｍａｒｉｎ−６／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは１ｍｍを表す）。
【図１２】処理したＣｏｕｍａｒｉｎ−６／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．５ｍｍを表す）。
【図１３】粉砕した酸化第一鉄／ポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【図１４】処理した酸化第一鉄／ポリマー粒子のＳＥＭ顕微鏡写真を示す図である（スケールは０．２５ｍｍを表す）。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
詳細な説明
本明細書に記載する材料、化合物、組成物、物品、および方法は、本明細書に含まれる、開示する主題、図、実施例の特定の態様の以下の発明を実施するための形態を参照することによってより容易に理解することができる。
【０００９】
本材料、化合物、組成物、物品、および方法を開示し、記載する前に、以下に記載する態様は、特定の合成方法または特定の試薬に制限されず、それ自体がもちろん変化することがあることを理解されたい。本明細書で用いられる専門用語は特定の態様だけを記載する目的であり、限定的なものを意図しないことも理解されたい。
【００１０】
また、本明細書を通して様々な出版物が参照とされる。これら出版物の全文の開示は、開示された事項が関連する最新技術をより完全に記載するために、本出願中に参照によって本明細書に組み入れられるものである。開示する参考文献は、やはり、個々に、かつ特に、参照が依拠する文章において論じられるそれに含まれる題材に関して、本明細書に参照によって組み入れられる。
【００１１】
定義
本明細書において、および以下の特許請求の範囲において、数々の用語に言及するが、これらは以下の意味を有すると定義される。
【００１２】
本明細書および本明細書の特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」ならびに「含んでいる」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」など他の形の言葉は、例えば、他の添加剤、成分、整数、またはステップを含むが、それらに限定されないことを意味し、また除外しようとするものではない。
【００１３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が他のものを明らかに指示しなければ、複数の指示物を含んでいる。このように、例えば「１つの（ａ）化合物」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのような化合物の混合物が含まれ、「１つの（ａｎ）薬剤」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのような薬剤の混合物が含まれ、「その（ｔｈｅ）ポリマー」と言及すれば、２つまたはそれを超えるそのようなポリマーの混合物が含まれる、などである。
【００１４】
「場合による」、または「場合により」は、引き続き記載される事象または状況が起こることがあり、または起こることがないことを意味し、また記載には、事象または状況が起こる場合および起こらない場合が含まれる。
【００１５】
範囲は、本明細書において「約」１つの特定の値から、および／または「約」１つの別の特定の値までとして表すことができる。このような範囲を表す場合、別の態様には、１つの特定の値から、および／または他の特定な値までが含まれる。同様に、先行詞「約」の使用によって値を近似として表す場合は、特定の値が他の態様を形成することが理解されよう。各々の値のエンドポイントは、他のエンドポイントとの関係および独立に他のエンドポイントとの関係の両方において意義深いことがさらに理解されよう。本明細書には数々の値が開示されており、各々の値は本明細書において値自体に加えて「約」その特定の値としても開示されることも理解される。例えば、「１０」という値が開示される場合は、「約１０」も開示される。その値「に等しいまたはそれ未満」、「その値に等しいまたはそれを超える」値が開示される場合、および値の間の可能な範囲も開示される場合は、当業者によって好適に理解される通りであることも理解される。例えば、「１０」の値が開示される場合は、「１０に等しいまたはそれ未満」および「１０に等しいまたはそれを超える」も開示される。本出願を通して、データは数々の異なる形式で提供され、このデータはエンドポイントおよび開始点、ならびにデータポイントのあらゆる組合せに対する範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータポイントである「１０」および特定のデータポイントである「１５」が開示される場合、１０および１５を超え、それらに等しいまたはそれらを超える、それら未満、それらに等しいまたはそれら未満、およびそれらに等しいも、１０と１５の間同様に開示されるとみなされることも理解される。２つの特定の単位の間の各単位も開示されることも理解される。例えば、１０および１５が開示される場合、１１、１２、１３、および１４も開示される。
【００１６】
本明細書および最後の特許請求の範囲における組成物における特定の要素または成分の重量による部分に対する参照は、重量による部分がそれに対して表される組成物または物品における、要素または成分と他の要素または成分との間の重量の関係を意味する。したがって、重量で２部の成分Ｘ、および重量で５部の成分Ｙを含む化合物では、ＸおよびＹは２：５の重量比で存在し、さらなる化合物が化合物に含まれるか否かにかかわらずこのような比で存在する。
【００１７】
成分の重量パーセントは、反対のものを特に記載しなければ、成分が含まれる製剤または組成物の全重量をベースにするものである。
【００１８】
「ポリマー粒子」という用語は、ポリマーのあらゆる断片または切片を意味する。ポリマー粒子は、顕微鏡上の断片、粉末から肉眼的なグレインなどのあらゆるサイズであってよいので、これはいかなる特定のサイズの粒子を含意することを意味するものではない。さらに、ポリマー粒子はあらゆる形状を有することができるので、いかなる特定の形状も含意することを意味するものではない。
【００１９】
本明細書において「球状」という用語は、開示する球状化のプロセスによって処理した後のポリマー粒子の形状を記載するために用いられる。特に、粗面、ギザギザの縁、および／または鋭い角を有するポリマー粒子を、開示する球状化のプロセスによって修飾して、滑らかな表面、丸い縁および角、ならびに全体に輪状の形状を有する「球状」のポリマー粒子をもたらすことができる。このようなものとして「球状」という用語は、そのような粒子が完全に球状の形状だけを有することを含意する意味ではない。実際に、ほとんどの場合ではそうではない。同様に、「球状化する」および「球状化」という用語は、完全に球状の形状だけに関することを意味するのではない。「球状」、「球状化した」、および「球状化」という用語は、そうではなく、小球、卵、またはビーズの形状など、全体に球状の形状を意味する。これらの用語は、カプセルまたはロッドの形状などの長円形の形状にも関連する。さらに、これらの用語は、円盤、丸剤、またはペレットの形状を有する平板化した球にも関連する。多くの例において、本明細書に開示する「球状」および「球状化した」ポリマー粒子は、開示する球状化プロセスに従って処理する前のポリマー粒子よりも、粗表面の割合が小さい。
【００２０】
本明細書において「非球状」という用語は、上記で定義した「球状」以外であるポリマー粒子の形状を記載するために用いられる。特に、「非球状」の粒子は、開示する球状化プロセスによって処理していないものである。このようなものとして、「非球状」の粒子は、粗面、ギザギザの縁、および／または鋭い角を有する。多くの例において、本明細書に開示する「非球状」のポリマー粒子は、開示する球状化プロセスに従って処理した後のポリマー粒子よりも粗面の割合が大きい。
【００２１】
本明細書において「生理活性物質」という用語は、それが適用される生物系において、局所または全身性の、生物学的、生理学的、または治療的な効果を提供することができる化合物または組成物を意味するために用いられる。例えば、生理活性物質は、他の機能の中でも、感染または炎症をコントロールし、細胞の増殖および組織の再生を増強し、腫瘍の増殖をコントロールし、または腫瘍細胞を死滅させるように作用し、鎮痛薬として作用し、抗細胞接着を促進し、骨の増殖を増強するように作用することができる。生理活性物質のいくつかの特異的ではあるが非限定的な例には、抗癌薬、抗感染薬、抗ウイルス薬、ビタミン、ホルモン、抗体、ステロイド、炭水化物、核酸、アプタマー、ペプチド、タンパク質、抗体、ワクチン、または治療用化合物（例えば、薬物／薬剤）が含まれる。さらに他の生理活性物質には、投与するときは生物学的に活性ではない物質であるが、対象に投与すると、代謝またはいくつかの他の機序によって生理活性物質に変換されるプロドラッグが含まれる。生理活性物質は、獣医学的な治療薬および農学上の物質（例えば、殺虫剤、除草剤、成長促進物質、肥料）であってもよい。さらに、本明細書に開示するあらゆる組成物は、２つまたはそれを超える生理活性物質の組合せを含むことができる。
【００２２】
本明細書において用いられる「残留物」という用語は、部分が実際に特定の化学種から得られるか否かにかかわらず、特定の反応スキームまたはその後の製剤もしくは化学製品における特定の化学種の結果として得られた生成物である部分を意味する。例えば、「ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレートから選ばれるモノマーの残留物」は、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、またはヒドロキシブチレートが特定の反応（例えば、重合反応）に関与した場合にもたらされる部分を意味する。この場合、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、またはヒドロキシブチレート残留物は、これらの化合物から「誘導」される。
【００２３】
本明細書において、「第２の成分」という用語は、ポリマー粒子に付随し、または付着し、または粒子内に含まれており、１つまたは複数の生理活性物質、医薬品、生体分子、造影剤、撮像剤、色素、栄養、標的部分、ワクチン、抗原、蛍光物質、磁性粒子、Ｘ線不透過剤、天然高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリペプチド、酵素、抗体、核酸など）、合成高分子（例えば、ＰＥＧ、ＰＶＰ、合成ポリペプチド、修飾した多糖、アプタマーなど）、バッファー、界面活性剤、脂質、浸透圧剤、アジュバントなどを含むことができるあらゆる化合物、組成物、添加剤などを意味するために用いられる。
【００２４】
開示する材料、化合物、組成物、物品、および方法の特定の態様に対して詳しく次に言及し、これらの例を添付の実施例および図面において説明する。
【００２５】
材料および組成物
本明細書において、開示する方法、装置、および組成物に用いることができ、これらと組み合わせて用いることができ、これらを調製するのに用いることができ、またはこれらの生成物である、材料、化合物、組成物、および成分が開示される。これらおよび他の材料が本明細書に開示され、また、これらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、グループなどが開示される場合、各々の様々な個体および集合的な組合せならびにこれらの化合物の順列の特定な言及が明確に開示され得ない限りは、各々が本明細書において具体的に企図され、記載されることが理解される。例えば、組成物が開示され、組成物の数々の成分または残留物に対して行うことができる数々の修飾が論じられる場合、反対のものが具体的に指摘されなければ、可能であるすべての組合せおよび順列が具体的に企図される。したがって、Ａ、Ｂ、およびＣの成分または残留物のクラスが、Ｄ、Ｅ、およびＦの成分または残留物のクラス同様に開示され、Ａ−Ｄの組合せの化合物の例が開示される場合は、各々が個々に列挙されなくても、各々が個々におよび集合的に企図される。したがって、この例では、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−Ｅ、およびＣ−Ｆの各々の組合せが具体的に企図され、Ａ、Ｂ、およびＣ；Ｄ、Ｅ、およびＦ；ならびにＡ−Ｄの組合せの例の開示から開示されると考えなければならない。同様に、これらのあらゆるサブセットまたは組合せも具体的に企図され、開示される。したがって、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、およびＣ−Ｅのサブグループが、Ａ、Ｂ、およびＣ；Ｄ、Ｅ、およびＦ；ならびにＡ−Ｄの組合せの例の開示から具体的に企図され、開示されると考えなければならない。この概念は、それだけには限定されないが、開示される組成物を作成し、使用する方法におけるステップを含む本開示の全態様に適用される。したがって、行うことができる様々なさらなるステップが存在する場合、これらさらなるステップの各々は、開示される方法のあらゆる特定の態様または態様の組合せで行うことができ、各々のこのような組合せが具体的に企図され、開示されると考えるべきであると理解される。
【００２６】
本明細書に開示するある種の材料、化合物、組成物、および成分は市場で入手することができ、または当業者には一般に知られている技術を用いて容易に合成することができる。例えば、開示する化合物および組成物を調製するのに用いられる出発材料および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ）、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓ Ｐｌａｉｎｓ、Ｎ．Ｊ．）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ）、またはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）などの市場の供給元から入手可能であり、あるいは、Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１７巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、Ｒｏｄｄ’ｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１〜５巻および補完（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９年）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１〜４０巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９１年）、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、第４版）、ならびにＬａｒｏｃｋ’ｓ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．、１９８９年）などの参考文献に述べられている手順に従って当業者には知られている方法によって調製される。
【００２７】
球状化プロセス
本明細書には、任意選択で界面活性剤および／または他の添加剤を含む、加熱した液体媒体において非球状のポリマー粒子を攪拌することによって、非球状のポリマー粒子を球状にする方法を開示する。これらの方法を用いて、ポリマー材料および最終生成物における残留モノマーレベルを低減することもできる。さらに、これらの方法を、ポリマー、およびポリマーに埋め込まれた１つまたは複数の第２の成分を含むポリマー粒子とともに用いることもできる。このようなポリマー粒子のブレンドは、ポリマーおよび１つまたは複数の第２の成分、例えば、生理活性物質、医薬品、生体分子、造影剤、撮像剤、色素、栄養、標的部分、合成高分子（例えば、ＰＥＧ、ＰＶＰ、ポリペプチド、修飾した多糖、多糖など）、磁性粒子、放射線不透過剤などを含むことができる。本明細書に開示するプロセスによって調製される球状粒子を、粒子表面を修飾するために操作することもできる。本明細書に開示するいくつかの特定の例では、共有性の連結の化学を用いてポリマー粒子の表面に第２の成分を付加することができる。このような第２の成分のポリマー粒子への共有性の連結は、開示する球状化プロセスの前に、間に、または後に行うことができる。
【００２８】
開示するプロセスでは、非球状のポリマー粒子を、本明細書で定義する球状に作成する。開示する方法は、非球状のポリマー粒子および液体媒体を含む混合物を提供するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度（すなわち、非球状の粒子が球状になる点）を超えて加熱するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップとを含み、それにより、球状のポリマー粒子を生成する。開示する方法は、球状のポリマー粒子を回収し、洗浄し、乾燥するステップをさらに含む。
【００２９】
高残留モノマー含量を有するポリマー粒子から低残留のモノマー含量を有するポリマー粒子を調製する方法も開示する。開示する方法は、最初の残留モノマー含量および液体媒体を有する、高残留モノマーポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップとを含み、それにより、最初の残留モノマー含量未満である低残留モノマー含量を有する、低残留モノマーポリマー粒子を生成する。低残留モノマー粒子を、これらのプロセスによって球状化することもできる。ある例では、最初の残留モノマー含量は、開示する方法によってポリマー粒子の重量ベースで２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８５％、または９０％低減することができる。このようのものとして、非球状のポリマー粒子の最初の残留モノマー含量の１０から約７５％でまである低残留モノマー含量を有する球状のポリマー粒子を、本明細書に開示する。
【００３０】
開示するプロセスによって作成されるポリマーも開示する。例えば、本明細書には、それから作成される非球状のポリマー粒子よりも少ない残留モノマーを含む球状のポリマー粒子を開示する。
【００３１】
ポリマー
開示する方法で用いられる非球状のポリマーまたは高残留モノマーポリマーは、一般には小粒子として提供される。小粒子のポリマーは複数の方法で得ることができ、これらの粒子を得る方法は、開示する方法にとって決定的ではない。例えば、ポリマー粒子は、ポリマーのロッドまたは繊維を小片に切断することによって生成することができ、この場合得られる粒子は円柱形の形状であってよい。小型のポリマー粒子は、ポリマーを磨砕することによって生成することができ（磨砕ビーズ、ペレット、シートなど）、この場合、得られる粒子の形状は不規則である。さらに、ポリマー粒子を市場で入手することができる。
【００３２】
球状化し、かつ／または残留モノマー含量を減少させたいと思うあらゆるポリマーおよびポリマーのブレンドを、開示する方法で用いることができる。特に適切な例には、それだけには限定されないが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、カプロラクトン、およびこれらの混合物が含まれる。他の適切なポリマーは、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）としても知られるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、およびこれらの混合物を含む。ポリマーのさらなる例は、ポリ（メタ）アクリレート、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル、ポリアクリルアミド、ポリ（アルキルシアノアクリレート）のホモポリマーまたはコポリマーなど、アクリル酸をベースにしたものであってよい。さらに他の例には、それだけには限定されないが、ポリグルクロン酸、ポリアスパラギン酸、ポリ酒石酸、ポリグルタミン酸、ポリフマル酸、などの有機酸ベースのポリマー（これらのコポリマーを含む）が含まれる。エステルをベースにした適切なポリマーには、それだけには限定されないが、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ブロック−エーテルエステル）、ポリ（エステルアミド）、ポリ（エステルウレタン）、ポリホスホン酸エステル、ポリホスホエステル、ポリ無水物、およびポリホスファゼン（これらのコポリマーを含む）が含まれる。
【００３３】
さらなる例では、ポリマーは多糖であってよい。ポリマーのなおさらなる例には、それだけには限定されないが、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリ（プロピレンフマレート）、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドン、ポリビニル−Ｎ−メチルピロリドン、ポリビニルアルコール、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、デンプン、セルロース、メチルセルロース、アミノデキストラン、デキストラン、ＤＥＡＥデキストラン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパラン硫酸、ヘパリン、キトサン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルアミロース、ヒアルロン酸、ヒアルロナン、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム、アガロース、カラゲナン、ゼラチン、酸加水分解で分解されたゼラチン、グリコーゲン、ポリエチレンイミン、ポリリジン、またはこれらのあらゆる組合せが含まれる。
【００３４】
先に示したように、非球状の、および／または高残留モノマーのポリマー粒子は、ポリマー粒子に埋め込まれ、または共有性に連結している１つまたは複数の第２の成分を有することができる。「埋め込まれた」は、第２の成分が全体的または部分的に粒子中に封入されていることを意味する。開示する球状化プロセス後、第２の成分の大半（例えば、もとの量の５０％を超えて）が、得られる球状のポリマー粒子に依然として存在していてよい。開示するポリマー粒子は、活性がなくてもよい（例えば、プラセボ）。
【００３５】
球状のポリマー粒子を形成する前に、このようなポリマーを押出し加工してロッドまたは繊維にしてもよく、あるいはポリマーは、ペレット、ビーズ、または磨砕したバルクのポリマー、または１シートの形態であってよい。
【００３６】
第２の成分
本明細書における多くの例では、開示するポリマー粒子は、直接またはリンカーによって粒子に埋め込まれ、または共有性に連結している１つまたは複数の第２の成分を有することができる。第２の成分の適切な例には、生理活性物質、（例えば、医薬品（薬物またはワクチン）、栄養、生体分子）、造影剤、撮像剤、色素、標的部分、合成ポリマー、磁性粒子、Ｘ線不透過剤などが含まれる。
【００３７】
第２の成分が生理活性物質である場合は、疾患または疾病を処置するための薬物または他の薬学的に活性な物質であってよい。開示する球状化プロセスが医薬品に有害な影響（例えば、分解）を及ぼさない限り、あらゆるそのような医薬品を第２の成分として用いることができる。医薬品の適切な例は、メルクインデックス（１３版、Ｗｉｌｅｙ、２００１年）、米国薬局方−国民医薬品集（ＵＳＰ−ＮＦ）、およびＦＤＡのオレンジブックに見ることができ、これらは各々、少なくとも医薬品の教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる。適切な医薬品は市場で入手できる。潜在的な治療薬は、開示されるポリマー粒子における適切な第２の成分であり得ることも企図される。
【００３８】
他の例では、第２の成分は生体分子などの生理活性物質であってよい。生体分子の例には、それだけには限定されないが、小分子、ペプチド、タンパク質、酵素（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、メチル化剤、プロテアーゼ、転写酵素、エンドヌクレアーゼ、リガーゼなど）、抗体、および／またはそれらのフラグメント、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド、プライム（ｐｒｉｍｅ）、プローブ、アプタマー、リボザイムなど）、脂質、炭水化物、ステロイド、ホルモン、ビタミンが含まれる。本明細書で用いられる「小分子」は、分子量が約５ｋＤ未満である、例えば約４ｋＤ未満である組成物を言及することを意味する。小分子は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドミメティック、炭水化物、脂質、因子、補助因子、ホルモン、ビタミン、ステロイド、微量元素、または他の有機（含炭素）もしくは無機の分子であってよい。これらの生体分子は市場で入手することができ、または合成され、もしくは当技術分野では知られている方法によって天然の供給源から単離され得る。
【００３９】
本明細書では、第２の成分（例えば、生体分子）が、例えば、酵素および抗体を含めた、アミノ酸ベースの分子を含むことができる様々な組成物を開示する。したがって、本明細書で用いられる「アミノ酸」は、ポリペプチドをなす、典型的に遭遇する２０個のアミノ酸を意味する。さらに、これには天然に存在するもの（例えば、それだけには限定されないが、アミノ酸に典型的に見出される類似体であるホルミルメチオニンおよびセレノシステイン）、ならびにアミノ酸またはアミノ酸官能性の模倣物の両方であるあまり典型的ではない構成成分もさらに含まれる。これらおよび他の分子の非制限的な例は、本明細書で論じられる。
【００４０】
本明細書で用いられる「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、化学的に一緒に結合しているアミノ酸からなる化合物のクラスを意味する。これらおよび他の分子の非制限的な例は、本明細書で論じられる。一般に、アミノ酸はアミド連結（ＣＯＮＨ）によって一緒に化学的に結合しているが、アミノ酸は、当技術分野では知られている他の化学結合によって一緒に結合することができる。例えば、アミノ酸はアミン連結によって結合することができる。本明細書で用いられる「ペプチド」は、天然に存在し、または操作されるポリペプチドおよびタンパク質を含めた、アミノ酸のオリゴマー、ならびに小型および大型のペプチドを含む。「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書では交換可能に用いることができることが理解される。
【００４１】
このようなペプチドおよびタンパク質を生成するための方法はよく知られている。開示するタンパク質を生成する一方法は、タンパク質化学の技術によって２つまたはそれを超えるペプチドまたはポリペプチドを一緒に連結することである。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）またはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）の化学作用のいずれかを用いて、現在入手可能な実験装置を用いて化学的に合成することができる。（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）。当業者であれば、開示するタンパク質に対応するペプチドまたはポリペプチドを、例えば、標準の化学反応によって合成することができることが容易に理解できる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドを合成し、その合成樹脂から切断せず、他方ではペプチドまたはタンパク質の他のフラグメントを合成し、引き続き樹脂から切断し、それにより、他のフラグメント上で機能的にブロックされている末端基を曝露することができる。ペプチド縮合反応によって、これら２つのフラグメントは、それぞれのカルボキシル末端およびアミノ末端でペプチド結合により共有性に接合して抗体、またはそのフラグメントを形成することができる（Ｇｒａｎｔ、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ： Ａ Ｕｓｅｒ Ｇｕｉｄｅ．、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．、１９９２年；ＢｏｄａｎｓｋｙおよびＴｒｏｓｔ編集、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．、１９９３年、これらは少なくともペプチド合成のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる）。
【００４２】
別の一例では、第２の成分は抗体またはそのフラグメントを含むことができる。抗体またはそのフラグメントは、本明細書で用語が用いられるように、生体分子、撮像剤、および／または標的部分と考えることができる。「抗体」という用語は、それだけには限定されないが、あらゆるクラスの免疫グロブリン全体（すなわち、完全な抗体）を包含する。天然の抗体は、通常、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ４量体の糖タンパク質である。典型的には、軽鎖は各々、１つの共有性のジスルフィド結合によって重鎖に連結しており、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンのイソ型の重鎖間で変化する。各々の重鎖および軽鎖も、規則的な間隔の鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一終端に可変ドメイン（Ｖ（Ｈ））を有し、後に数々の定常ドメインが続く。各軽鎖は、一終端に可変ドメイン（Ｖ（Ｌ））を、もう一方の終端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと一直線上にあり、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと一直線上にある。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成していると考えられている。あらゆる脊椎動物種からの抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κおよびλと呼ばれる２つの明らかに異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、様々なクラスの割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのいくつかは、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、およびＩｇＧ−４；ＩｇＡ−１、およびＩｇＡ−２など、サブクラス（イソ型）にさらに分けることができる。当業者であれば、マウスに対して比較できるクラスを認識する。免疫グロブリンの様々なクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【００４３】
本明細書用いられる「抗体」という用語は、完全な分子、およびそれらのフラグメント（例えば、エピトープの決定基に結合することができるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２など）を含むことを意味する。「抗体」という用語は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体、抗イデオパシー（ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ）抗体、およびヒト化抗体も含む。
【００４４】
本明細書で用いられる「抗体またはそのフラグメント」という用語は、二重もしくは多重の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗体、ならびにハイブリッドのフラグメントを含めた、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどのフラグメントを包含する。このような抗体およびフラグメントは、当技術分野では知られている技術によって作成することができる（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８８年を参照されたい）。このような抗体およびそのフラグメントは、本明細書に開示する方法に従って、特異性および活性に対してスクリーニングすることができる。
【００４５】
「抗体またはそのフラグメント」の意味内には、例えば、その内容が少なくとも抗体結合体のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる米国特許第４７０４６９２号に記載される抗体フラグメントと抗原結合性タンパク質（単鎖抗体）の結合体も含まれる。フラグメントは、他の配列に付着していても、またはいなくても、特定の領域または特定のアミノ酸残基の、挿入、欠失、置換、または他の選択される修飾を含む。本明細書に開示する抗体を生成および／または単離する方法はよく知られている。
【００４６】
本明細書には、第２の成分が核酸ベースの分子を含むことができる様々な組成物も開示する。このように、本明細書で用いられる「核酸」は、例えば、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、またはヌクレオチド代替物からできている分子を意味する。これらおよび他の分子の非限定的な例を、本明細書で論じる。核酸は、２本鎖でも、または１本鎖でもよい。核酸は、オリゴヌクレオチドを含むことも意味する。
【００４７】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド」は、塩基部分、糖部分、およびリン酸部分を含む分子である。ヌクレオチドは、そのリン酸部分および糖部分によって一緒に連結し、インターヌクレオシド（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）連結を生成することができる。ヌクレオチドの塩基部分は、アデニン−９−イル（Ａ）、シトシン−１−イル（Ｃ）、グアニン−９−イル（Ｇ）、ウラシル−１−イル（Ｕ）、およびチミン−１−イル（Ｔ）であってよい。ヌクレオチドの糖部分はリボースまたはデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸部分は、五価のリン酸塩である。ヌクレオチドの非限定的な例は、３’−ＡＭＰ（３’−アデノシン一リン酸）または５’−ＧＭＰ（５’−グアノシン一リン酸）である。
【００４８】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド類似体」は、塩基、糖、またはリン酸部分のいずれかに対するいくつかのタイプの修飾を含むヌクレオチドである。ヌクレオチドに対する修飾は、当技術分野ではよく知られており、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、および２−アミノアデニン、ならびに糖またはリン酸部分での修飾が含まれる。
【００４９】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド代替物」は、ヌクレオチドに類似の機能的性質を有する分子であるが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などのリン酸部分を含まない。ヌクレオチド代替物は、ワトソン−クリック、またはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの様式で核酸を認識するが、リン酸部分以外の部分によって一緒に連結している分子である。ヌクレオチド代替物は、好適な標的の核酸と相互作用する場合に２本鎖型の構造に合致することができる。
【００５０】
他のタイプの分子をヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に連結して、例えば、細胞の取り込みを増強することができる結合体を作成することも可能である。結合体は、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に化学的に連結することができる。このような結合体には、それだけには限定されないが、コレステロール部分などの脂質部分が含まれる（少なくとも核酸結合体のその教示に関して本明細書に参照として組み入れられる、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１９８９年、８６巻、６５５３〜６頁）。本明細書で用いられる、核酸という用語は、このような核酸の結合体、類似体、および変異体を含む。
【００５１】
本明細書に記載するものなどの核酸は、標準の化学合成方法を用いて作成することができ、または酵素的な方法もしくはあらゆる他の知られている方法を用いて生成することができる。このような方法は、標準の酵素的な消化とその後のヌクレオチドフラグメント単離（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、２００１年、チャプター５、６を参照されたい）から、例えば、ＭｉｌｌｉｇｅｎまたはＢｅｃｋｍａｎ Ｓｙｓｔｅｍ １Ｐｌｕｓ ＤＮＡ合成機（例えば、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ−Ｂｉｏｓｅａｒｃｈの自動化合成機Ｍｏｄｅｌ ８７００ 、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡまたはＡＢＩ Ｍｏｄｅｌ ３８０Ｂ）を用いたシアノエチルホスホラミダイト法による、純粋な合成法までの範囲であってよい。オリゴヌクレオチドを作成するのに有用な合成法は、Ｉｋｕｔａら、Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９８４年、５３巻、３２３〜５６頁（リン酸トリエステルおよび亜リン酸トリエステル法）、およびＮａｒａｎｇら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９８０年、６５巻、６１０〜２０頁（リン酸トリエステル法）によってやはり記載されている。タンパク質核酸分子は、Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ、１９９４年、５巻、３〜７頁に記載されているものなど（これらの参照は各々、少なくとも核酸合成のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる）知られている方法を用いて作成することができる。
【００５２】
また、第２の成分は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成することができる化学物質である撮像剤を含むことができる。このような撮像剤の多くは、当業者には知られている。開示する組成物および方法において使用するのに適する撮像剤の例は、放射性同位元素、蛍光分子、リン光分子、酵素、抗体、およびリガンドである。本明細書に開示する２つまたはそれを超える部分を組み合わせて撮像剤も、撮像部分とみなされる。
【００５３】
撮像剤が球状化プロセスによって有害な影響を受けない限り、あらゆる知られている撮像剤を、開示する粒子および球状化プロセスと一緒に用いることができる。撮像剤によって産生されるシグナルを検出および測定するための方法は、当業者にはやはり知られている。例えば放射性同位元素はシンチレーションカウンティングまたは直接可視化によって検出することができ、蛍光分子は蛍光分光光度計で検出することができ、リン光分子は分光光度計で、またはカメラで直接可視化して検出することができ、酵素は、その酵素が触媒する反応の生成物を検出または可視化することによって検出することができ、抗体は、抗体にカップリングしている２次検出標識を検出することによって検出することができる。
【００５４】
一例では、開示する撮像剤は蛍光の撮像剤を含むことができる。蛍光の撮像剤は、検出可能な蛍光シグナルを有するあらゆる化学部分である。この撮像剤を、単独で、または他の撮像剤と組み合わせて用いることができる。本明細書に開示する組成物および方法において用いることができる適切な蛍光物質の例には、それだけには限定されないが、フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、５−カルボキシフルオレセイン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、５，６−カルボキシメチルフルオレセイン、ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イル（ＮＢＤ）、フルオレスカミン、ＯＰＡ、ＮＤＡ、インドシアニングリーン色素、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、およびＣｙ７）、４−アセトアミド−４’−イソチオシアネートスチルベン−２，２’−二スルホン酸、アクリジン、アクリジンイソチオシアネート、５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）、４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５−二スルホン酸塩、Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド、アントラニルアミド、ＢＯＤＩＰＹ、ブリリアントイエロー、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１）、シアノシン、４’、６−ジアミニジノ（ｄｉａｍｉｎｉｄｉｎｏ）−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）、５’、５”−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）、７−ジエチルアミノー３−（４’−イソチオシアネートフェニル）−４−メチルクマリンジエチレントリアミン五酢酸、４，４’−ジイソチオシアネートジヒドロ−スチルベン−２，２’−二スルホン酸、４，４’−ジイソチオシアネートスチルベン−２，２’−二スルホン酸、５−［ジメチルアミノ］ナフタレン−１−スルホニルクロライド（ＤＮＳ、ダンシルクロライド）、４−（４’−ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）、エオシン、エオシンイソチオシアネート、エリスロシンＢ、エリスロシン、イソチオシアネート、エチジウムブロマイド、エチジウム、５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４，５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、フルオレセインイソチオシアネート、ＩＲ１４４、ＩＲ１４４６、マラカイトグリーンイソチオシアネート、４−メチルウンベリフェロン、オルトクレゾールフタレイン、ニトロチロシン、パラローザニリン、フェノールレッド、Ｂ−フィコエリトリン、ｏ−フタルジアルデヒド、ピレン、ピレンブチレート、スクシンイミジル１−ピレンブチレート、リアクティブレッド４（Ｃｉｂａｃｒｏｎ［Ｒ］Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｒｅｄ ３Ｂ−Ａ）、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢスルホニルクロライドローダミン（Ｒｈｏｄ）、５，６−テトラメチルローダミン、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１のスルホニルクロライド誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、リボフラビン、ロゾール酸、クマリン−６など（これらの組合せを含む）が含まれる。これらの蛍光撮像部分は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、およびＲｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、Ｏｈｉｏを含む様々な市場供給源から入手することができ、または当業者であれば合成することができる。
【００５５】
別の一例では、開示する撮像剤は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）薬剤を含むことができる。ＭＲＩ薬剤は、検出可能な磁気共鳴シグナルを有し、または別の薬剤の磁気共鳴シグナルに影響を及ぼす（例えば、増大する、もしくはシフトする）ことができるあらゆる化学部分である。このタイプの撮像剤は、単独、または他の撮像剤と組み合わせて用いることができる。さらに別の一例では、ガドリニウムベースのＭＲＩ薬剤が撮像剤として役立つことができる。開示する撮像剤中に組み入れることができる適切なＭＲＩ薬剤の一例は、ガドリニウムに強力に結合することが知られており、磁気共鳴の造影剤として臨床の使用に認可されている、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の結合形態であるパラ−アミノ−ベンジル−ジエチレントリアミン五酢酸（ｐ−ＮＨ２−Ｂｚ−ＤＴＰＡ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ７）である。他のものも、同様のＭＲＩ造影剤をｉｎ ｖｉｖｏの小動物の撮像用のデンドリマーであるＰＡＭＡＭ（商標）に上首尾に結合させている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ、２００１年、１２巻、１００〜１０７頁；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｍａｇ Ｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００１年、４６巻、５７９〜８５頁）；これらの参考文献は、少なくともＭＲＩ薬剤のその教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる。ＭＲＩ薬剤を本明細書に開示するデンドリマーの物質などの大型の巨大分子上に組み入れることにより、単一の分子上への大型のＴ１緩和（ハイコントラスト）および複数の薬剤のコピーを可能にすることができ、これはシグナルを増大することができる。ＭＲＩ撮像剤と、例えば蛍光の撮像剤とを組み合わせることによって、得られる薬剤を検出し、撮像化し、その後ＭＲＩによってリアルタイムで追跡することができる。
【００５６】
他の撮像剤には、１８Ｆ、または６４Ｃｕもしくは６８Ｇａに対するキレート剤を組み入れることによって調製することができるＰＥＴ薬剤が含まれる。また、放射性核種の添加を用いて、ＳＰＥＣＴ撮像を促進し、または放射線量を送達することができる。
【００５７】
粒子に埋め込むことができ、または粒子表面に共有性に付着することのいずれかができる他の適切な第２の成分にはポリマーが含まれ、このポリマーは合成ポリマー、天然ポリマー、またはさらに化学的に修飾した天然ポリマーであってよい。合成ポリマーの非限定的な例には、それだけには限定されないが、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ＰＥＧおよびＰＥＯのコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓなど）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が含まれる。天然ポリマーおよび化学的に修飾した天然ポリマーには、それだけには限定されないが、生体高分子、ペプチド、タンパク質、核酸、および多糖が含まれる。タンパク質の非限定的な例には、それだけには限定されないが、アルブミン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アポリポタンパク質Ｅ、ケラチン、エラスチン、アクチン、ミオシン、ゼラチン、コラーゲン、酵素、抗体などが含まれる。多糖の非限定的な例には、それだけには限定されないが、デキストラン、キチン、キトサン、デンプン、グリコーゲン、セルロース、デキストリン、マルトデキストリン、ヒアルロン酸などが含まれる。
【００５８】
開示する粒子は、粒子中に、または粒子表面に共有性に付着した、またはその両方の、１つの第２の成分、または２つもしくはそれを超える第２の成分を有することができる。開示する粒子の第２の成分は、粒子表面に直接、共有性に付着していてもよく、またはリンカーもしくは連結の化学作用によって粒子表面に付着していてもよい。リンカーは非重合性であってもよく、または鎖長がオリゴマー性もしくはポリマー性であってもよい。
【００５９】
いくつかの例では、開示する第２の成分は、酵素が切断することができるペプチドである生物感受性なリンカーによってポリマー粒子に連結していてよい。得られるポリマーは、標的とした送達に、または特定の酵素活性が増大する部位の撮像に用いることができる。
【００６０】
さらなる例では、第２の成分は標的部分も含むことができる。例えば、標的部分（例えば、本明細書に記載する抗体、またはそのフラグメント）を、ポリマーに直接、またはリンカーによって、または生物感受性なリンカーによって付着することができる。標的部分は、ポリマー粒子を、対象の特定の領域に送達または局在化させるように働くことができる。標的薬剤または部分の非限定的な例には、葉酸結合性薬剤、ビオチン、アルブミン、ペプチド、タンパク質、多糖、ＲＧＤペプチド、グリコシル化されたターゲティングリガンド、リポタンパク質、抗体、抗体フラグメント、酵素、核酸、アプタマー、腫瘍特異的リガンドまたはペプチド、受容体特異的リガンドまたはペプチドなどが含まれ得る。
【００６１】
代替の例では、第２の成分は、指示薬（例えば、ｐＨ）、炭素ベースのナノ構造（例えば、バッキーボールおよびナノチューブ）、デンドリマー、ナノスケール装置、微小電気機械（ＭＥＭ）、有機または無機の化合物（例えば、酸化鉄）、非水溶液、気体（例えば、水素）、およびこれらの混合物であってよい。
【００６２】
液体媒体
開示する方法では、非球状および／または高残留モノマーポリマー粒子を、液体媒体に配置して混合物を形成する。次いで、得られた混合物（粒子のサイズおよび媒体に応じて、懸濁液とも呼ぶことができる）を、ポリマーのガラス転移温度（Ｔｇ）（非結晶性ポリマーの場合）または融解点（結晶性ポリマーの場合）を超えて加熱すると、粒子が部分的または完全に溶け、媒体中に「液滴」を形成する。ポリマーのＴｇまたは融解点未満に冷却すると、「液滴」は硬化して「球状」の微粒子になる。今や球状のポリマー粒子を、次いで回収し、洗浄し、乾燥することができる。
【００６３】
開示する方法は、ポリマーを溶解するのに溶剤を用いる、乳剤／溶剤抽出法を用いない。すなわち、用いる液体媒体は、好ましくはポリマーを溶解せず、または少なくともポリマー粒子が部分的に不溶解であるあらゆる媒体であってよい。このように、用いる特定の液体媒体は用いるポリマー、第２の成分のタイプ（もしあれば）、好み、可塑剤を用いるか否か、などに依存する。
【００６４】
適切な液体媒体の例には、それだけには限定されないが、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ヘキサメチルホスホラミド、エタノール、メタノール、１−または２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、エチレングリコール、プロピレングリコール、Ｃ１〜４アルキルおよびアルコキシエチレングリコールおよびプロピレングリコール（例えば、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、２−ブトキシエタノール、ジエチレングリコール）、アルカン（例えば、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、およびデカン）、塩化メチレン、クロロホルム、ならびにこれらの混合物が含まれる。特に、液体媒体の適切な例には、それだけには限定されないが、水および少量の界面活性剤を含む水系が含まれる（例えば、ポリビニルアルコール約１％）。
【００６５】
ある例では、可塑剤なしで必要とされるよりも、低温度で、かつ／または短時間でプロセスを行うために、開示する球状化プロセスの前に、または間に可塑剤をポリマーに加えることができる。すなわち、可塑剤の使用により、ポリマーのＴｇまたは融解点を低減することができ、したがって粒子の球状化に必要とされる温度または時間を低減することができる。ポリマー粒子の可塑化は、粒子を液体媒体に配置する前に、または粒子が液体媒体中にある間に、可塑剤をポリマー粒子の外側部分に接触させることによって行ってもよい。あるいは、可塑剤をポリマー粒子全体にわたって接触させてもよい。詳しい一例では、溶剤の蒸気で処理することによって、または粒子を可塑剤の溶剤の液体中に、もしくは可塑剤を含む溶液中に直接配置することによって、粒子を可塑剤の溶剤と接触させる。可塑剤の溶剤の適切な例は、酢酸エチル、アセトン、ブタノン、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、メチルアルコール、ブチルアルコール、ベンジルアルコール、Ｎ−メチルピロリドン、塩化メチレン、ＤＭＦなどである。可塑剤の適切な例には、それだけには限定されないが、フタル酸ジエチル、三酢酸グリセロール、アセチル化モノグリセリド、アセチルクエン酸トリブチル、アセチルクエン酸トリエチル、ヒマシ油、クエン酸エステル、フタル酸ジブチル、セバシン酸ジブチル、シュウ酸ジエチル、マレイン酸ジエチル、フマル酸ジエチル、フタル酸ジエチル、コハク酸ジエチル、マロン酸ジエチル、酒石酸ジエチル、フタル酸ジメチル、グリセリン、グリセロール、三酢酸グリセロール、グリセリルトリブチレート、鉱油およびラノリンアルコール、ワセリンおよびラノリンアルコール、フタル酸エステル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ナタネ油、ゴマ油、トリアセチン、クエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、ならびにクエン酸トリエチルアセチル、または前者のあらゆる２つまたはそれを超える混合物が含まれる。水性のコーティングに用いることができる可塑剤には、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）、トリアセチン、ポリソルベート８０、クエン酸トリエチル、ｄ−酒石酸ジエチルが含まれる。
【００６６】
界面活性剤
多くの例において、水性の液体媒体は界面活性剤を含むことができる。本明細書で用いられる「界面活性剤」は、親水性基および疎水性基からなる分子（すなわち、両親媒性物質）である。界面活性剤は、イオン性界面活性剤でも、または非イオン性界面活性剤でもよい。例えば、液体媒体は陰イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる陰イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な陰イオン性界面活性剤は、洗剤、シャンプー、石鹸などで一般に用いられており、市場で入手することができ、または当技術分野で知られている方法によって調製することができる。これらには、それだけには限定されないが、アルキルベンゼンスルホン酸塩（洗剤）、脂肪酸ベースの界面活性剤、ラウリル硫酸（例えば、起泡剤）、ジアルキルスルホコハク酸エステル塩（例えば、湿潤剤）、リグノスルホン酸塩（例えば、分散剤）など（これらの混合物を含む）が含まれる。他の例では、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、αオレフィンスルホン酸塩、リン酸エステル、スルホコハク酸ナトリウム、ヒドロトロープ（これらの混合物を含む）を用いることができる。
【００６７】
他の例では、水性の液体媒体は、陽イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる陽イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な陽イオン性界面活性剤には、それだけには限定されないが、４級アンモニウム化合物、イミダゾリン、ベタインなどが含まれる。このような陽イオン性界面活性剤は市場で入手することができ、または当技術分野では知られている方法によって調製することができる。
【００６８】
さらに他の例では、水性の液体媒体は非イオン性界面活性剤を含むことができる。あらゆる非イオン性界面活性剤を用いることができる。適切な非イオン性界面活性剤は、その親水性基が、アルコール、フェノール、エーテル、エステル、またはアミドなど、非解離型であるので、水溶液でイオン化しない。これらはエーテル（例えば、グリセリン、ソルビトール、ショ糖などの多価アルコール）、脂肪酸エステル（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなど）、エステル（例えば、エチレンオキシドを、高級アルコール、アルキルフェノールなどのヒドロキシルラジカルを有する材料に適用することによって作成される化合物）、エーテル／エステル（例えば、エチレンオキシドを、分子内にエステル結合およびエーテル結合の両方を有する脂肪酸または多価アルコール脂肪酸エステルに適用することによって作成される化合物）、ならびに他のタイプ（例えば、脂肪酸アルカノール−アミドタイプ、またはアルキルポリグリセリドタイプ）に分類することができる。特に適切な非イオン性界面活性剤は、ポリ（ビニルアルコール）である。非イオン性界面活性剤の他の適切な例には、それだけには限定されないが、アルコールエトキシレートおよびアルキルフェノールエトキシレート、脂肪族アミンオキシド、アルカノールアミド、エチレンオキシド／プロピレンオキシドブロックコポリマー、アルキルアミンエトキシレート、タイガーコール（ｔｉｇｅｒｃｏｌ）の滑沢剤などが含まれ得る。
【００６９】
さらに他の例では、水性の液体媒体は二極性の界面活性剤を含むことができる。あらゆる二極性の界面活性剤を用いることができる。適切な二極性の界面活性剤（両性または双性イオン性と呼ばれる）は、陰イオン性および陽イオン性両方の解離を示す。二極性界面活性剤の適切な例には、それだけには限定されないが、ベタインまたはスルホベタインなどの製品、ならびにアミノ酸およびリン脂質などの天然物質が含まれる。一態様では、その全文が参照によって組み入れられる米国特許第６８５２８１６号、第６８４６７９５号、第６８４６３５２号、および第６８４９４２６号に開示されているベタインを本明細書で用いることができる。
【００７０】
適切な界面活性剤の他の例には、その起源を植物または動物の器官に有することができる天然の界面活性剤が含まれる。別の一例では、ボロフォーム（ｂｏｌｏｆｏｒｍ）の界面活性剤を用いることができる。ボロフォームの界面活性剤は、疎水性の尾の反対側の終端に２つの親水性の頭の基を有する界面活性剤である。
【００７１】
これらの界面活性剤の混合物を、本明細書に開示する組成物および方法でやはり用いることができる。
【００７２】
添加剤
液体媒体は、他の添加剤または賦形剤も含むことができる。例えば、液体媒体はｐＨバッファー、有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、シュウ酸など）、鉱酸（例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４など）、塩基（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３など）、保存剤、色素、抗酸化剤（例えば、トコフェロール）、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、凝集剤、および分散剤を含むことができる。液体媒体は、生理活性物質も含むことができる。例えば、処理加工中にポリマーブレンドから抽出される薬物の量を低減するために、ポリマーブレンド中の生理活性物質（液体媒体における飽和レベルまで、およびそれを含む濃度レベルの）を液体媒体に加えることができる。他の例では、液体媒体は、微生物の作用を防止するための他の添加剤を含むことができる。これは、様々な抗菌剤および／または抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、４級アンモニウム化合物などによって行うことができる。界面活性剤、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、およびアラビアゴム）、保湿剤（例えば、グリセロール）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール、およびモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト）、ならびに滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物）を含むのも望ましいことがある。用いることができる適切な凝集剤には、それだけには限定されないが、アルミニウム塩（例えば、硫酸アルミニウム）、２価鉄塩、および３価鉄塩（例えば、硫酸第二鉄、および塩化第二鉄）が含まれる。適切な懸濁化剤には、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、またはこれらの物質の混合物などが含まれ得る。液体媒体は、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物なども含むことができる。添加剤は、第２の成分の共有性のカップリング、またはポリマー粒子の他の化学にさらに影響を及ぼすことがある。このような物質は一般的に知られており、市場で入手できる。
【００７３】
温度および攪拌
非球状のポリマー粒子と液体媒体の混合物の加熱は、当技術分野では知られているあらゆる加熱技術によって行うことができる。混合物をそこまで加熱する温度は、ポリマーのタイプおよび液体媒体のタイプに依存する。一般には、混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱する。
【００７４】
非球状のポリマー粒子と液体媒体の混合物を混合してもよい。混合は、それだけには限定されないが、様々な攪拌の機序（例えば、機械的、およびマグネチックスターラー）、かき混ぜの機序（例えば、シェーカー、タンブラー、媒体を通したガスバブル）、超音波、ならびにボルテックスを含めた、当技術分野におけるあらゆる従来の手順によって行うことができる。
【００７５】
サイズ
開示する方法により、より大型のポリマー粒子、特に、１ｍｍを超える粒子など、乳化／抽出プロセスでは安定でないものを作成するのが可能になり得る。１ｍｍ未満の粒子、例えば、直径１００μｍのものも作成することができる。この方法によって生成される粒子のサイズは、用いられる非球状のポリマー粒子のサイズに関連する。典型的には、約４０μｍから１ｍｍの寸法（ｌ×ｗ×ｈ）に切断した片を用い、大まかに同じサイズの球状のポリマー粒子を生成する。いくつかの詳しい例では、本明細書に開示する方法によって調製した球状のポリマーは、約１μｍから約１ｍｍ、約５０μｍから約５００μｍ、約１００μｍから約３００μｍ、約５００μｍから約１０００μｍ、約１μｍから約１００μｍ、約９０μｍから約３００μｍまたは約９０μｍから約１８０μｍの直径を有する。いくつかの詳しい例では、球状のポリマーは、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００μｍの直径を有することができ、この場合、記載したあらゆる値は範囲の上または下のエンドポイントを形成することができる。開示する球状粒子は完全な球状ではないことがしばしばあるので、本明細書で用いられる「直径」という用語は、粒子の一端から他の一端までの最長の直線距離を意味する。
【００７６】
連結
球状のポリマーの表面が、本明細書に記載するように、１つまたは複数の第２の成分で官能基化されていることが望ましいことがある。表面の官能基化は、第２の成分を球状粒子に共有性に連結することによって行うことができる。共有性の連結は、球状のポリマー上の反応性部分と第２の成分上の反応性部分との間の３＋２環化反応によって実現することができる。例えば、球状のポリマーはジエン部分を含むことができ、第２の成分はジエネオフィルを含むことができる。あるいは、球状のポリマーはジエネオフィルを含むことができ、第２の成分はジエンを含むことができる。共有性の連結は、球状のポリマー上の反応性部分と第２の成分上の反応性部分との間の２＋２環化反応によって実現することができる。
【００７７】
共有性の連結は、エーテル、イミデート、チオイミデート、エステル、アミド、チオエーテル、チオエステル、チオアミド、カルバメート、ジスルフィド、ヒドラジド、ヒドラゾン、オキシムエーテル、オキシムエステル、および／またはアミンの連結によって第２の成分を球状のポリマー粒子に連結することも伴ってもよい。このような連結は、アミン反応性の化学作用、チオール反応性の化学作用、カルボキシレート反応性の化学作用、ヒドロキシル反応性の化学作用、アルデヒドおよびケトン反応性の化学作用、活性水素反応性の化学作用、光反応性の化学作用、酸化還元ベースの化学作用などとして、知られている共有性のカップリングの化学作用から形成することができる。一例では、第２の成分またはポリマー粒子がアミノ基を有し、他のものがカルボキシル基を有する場合、これらはペプチド結合によって共有性に連結することができる。これは、典型的には、カップリングを媒介するための活性化剤を用いることによって行うことができる。カップリング反応に用いることができる様々な活性化剤には、それだけには限定されないが、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサ−フルオロリン酸（ＢＯＰ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（これらの混合物を含む）が含まれる。カップリング反応は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはＤＭＦ中で行うことができる。別の一例では、カップリング反応は、ＤＭＦ中ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、およびＮＭＭの存在下で、保護されているヒドロキシルアミンとのスルホンアミド処理を伴うことがある。アミン−酸カップリング反応のその教示に関して本明細書に参照として組み入れられる、Ｔａｍｕｒａら、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、１９９８年、４１巻、６４０〜６４９頁を参照されたい。
【００７８】
他の結合の技術は、結合技術の教示に関して本明細書に参照によって組み入れられる、Ｇｒｅｇ Ｔ． Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、１９９６年に開示されている。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例は、本明細書に記載され、請求される化合物、組成物、物品、装置、および／または方法を作成し、評価する方法の完全な開示および記載を当業者に提供するために記載するものであり、純粋に例示しようとするものであり、本発明者らが本発明としてみなすものの範囲を制限しようとするものではない。数（例えば、量、温度など）に関して確実に正確にするために努力したが、いくらかの誤差および偏差を考慮に入れなければならない。別段の指摘がなければ、部とは重量による部であり、温度とは℃におけるものであり、または周囲温度におけるものであり、圧力は大気圧、または大気圧付近におけるものである。成分濃度、望ましい溶剤、溶剤混合物、温度、圧力および他の反応範囲、ならびに本明細書に記載する方法を最適化するために用いることができる条件など、条件の多くの変形および組合せが存在する。理にかなっており、慣例である実験法だけが、このようなプロセス条件を最適化するのに必要とされる。
【００８０】
（実施例１）
磨砕（粉砕）手順
ポリマー粒子の磨砕を、Ｒｅｔｓｃｈミル ＺＭ（Ｒｅｔｓｃｈ、Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ、ドイツ）を用いて行った。ポリマー粒子を磨砕するのに、０．５ｍｍのスクリーンおよび歯数２４のローターを用いた。
【００８１】
用いたポリマーは、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）からのＬａｋｅｓｈｏｒｅポリマー、７５〜２５酸性であった。最初に、ポリマーを、液体窒素中で１０分間冷却してから磨砕した。Ｒｅｔｓｃｈミルも液体窒素を用いて予め冷却した。次いで、凍結したポリマーをＲｅｔｓｃｈミルに連続的に加え、粉砕速度１８０００ｒｐｍを用いて磨砕した。
【００８２】
（実施例２）
篩い分け手順
実施例１の粉砕操作からのポリマー生成物を、次いで、そのまま、手操作によって篩い分けした。ポリマー生成物を、３００μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーンの上部に配置した。９０μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーンを、３００μｍスクリーンの下に固定した。３００μｍスクリーンの上部に覆いを配置した。次いで、組み立て物を手で揺すって、粒子をサイズによって分離した。９０μｍスクリーンの上部に回収された材料は、約９０μｍから３００μｍまでの範囲のサイズを有する粉砕されたポリマーの粒子サイズ分画を表していた。
【００８３】
次に、この粉砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、真空乾燥機中で乾燥させた。これを、室温の真空乾燥機の内部に配置した。一夜（約１６時間）、材料上を真空に引いた（約２５μｍＨｇ）。次いで、粒子サイズが約９０〜３００μｍの範囲である篩い分けしたポリマーを、さらなる調査に用いた（図１）。
【００８４】
（実施例３）
Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し
押出し加工したポリマーバルク押出物を、直径１．５ｍｍの押出しダイに適合させ、温度１００℃に設定したＴｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した。出発ポリマー（Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ７５：２５ ＤＬ−ＰＬＧ、Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍから）を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【００８５】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。ポリマー約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレルに挿入し、プランジャーに１０ｋｇの重量をかけてポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマーの粉末をプラストメーターのバレルの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、ポリマーをプラストメーターから、固体の円柱状チューブの形態に押出し加工した（押出物）。押出物を、カミソリの刃を用いて約１〜２ｍｍの長さの短い円筒形片に切断した。図３を参照されたい。次いで、これらの切断した円筒状押出物を、以下に記載する球状化プロセスで用いた。
【００８６】
さらなるポリマーおよびポリマーブレンドを、プラストメーターを用いて押出し加工した。例えば、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）（図５）およびＵｌｔｒａｔｈｅｎｅエチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）（図７）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、他所に記載するように他のサンプルと一緒にプラストメーターを用いて押出し加工した。
【００８７】
（実施例４）
球状化プロセス
ポリマーサンプル約１から１．５グラム（実施例３からの切断ポリマー押出物、または実施例２からの篩い分けしたポリマー粉末のいずれかなど）を２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。これに、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）２重量％からなる水溶液約１００グラムを加えた。ビーカーおよびその内容物を、加熱攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液またはスラリーを、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。５分後、攪拌プレートを用いてビーカーを加熱した。内容物の温度をモニターし、内容物の温度が９０℃に達するまで加熱を続けた。この温度に到達したら、内容物を規定された時間（例えば、１時間、２時間、または３時間）攪拌した。設計された攪拌時間（処理時間）の後、ホットプレートのスイッチを切り、次いで脱イオン（ＤＩ）水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、１５０μｍのふるいおよび９０μｍのふるい（お互いの上部に積み重ねて）に注いだ。次いで、９０μｍスクリーンの上部に回収された材料を、室温のＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、ポリマー全体が乾燥するように約１６時間、層流フードに配置した。切断した押出物材料に対して処理を行った場合は、１５０μｍふるい（９０μｍふるいではなく）の上部で生成物を回収した。図２、４、６、および８を参照されたい。
【００８８】
（実施例５）
添加剤または可塑剤
実施例１に従ってポリマーを粉砕した。ＤＬ−ＰＬポリマー（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｉｎｃ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬ）を用いた。粉砕後、ポリマーを実施例２に従って篩い分けした。次いで、篩い分けしたポリマー約２グラムを、９０μｍ、直径４インチ（１０．２ｃｍ）のスクリーン上に配置した。酢酸エチル５０グラムを含む２５０ｍＬビーカー上にふるいをセットした。ポリマーを含むふるいを、酢酸エチルを含むビーカーの上に１時間維持した。１時間後、ふるいを除去した。ふるいの内容物を、２重量％ＰＶＡ１００グラムを含む２５０ｍＬビーカーに移した。懸濁したポリマーを実施例４に記載した通りに処理したが、９０℃の代わりに４０℃の処理温度を用いた。処理時間は１時間であった。図１０を参照されたい。
【００８９】
ポリマーの別のサンプルを、実施例２に従って篩い分けし、次いで、上記と同じ方法で処理したが、酢酸エチルでの処理は行わなかった。処理温度は４０℃であった。図９を参照されたい。
【００９０】
示差走査熱量計分析（ＤＳＣ）を利用して、ポリマー粒子サンプルのガラス転移温度（Ｔｇ）を測定した。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ２９２０（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）を用い、５〜１０ｍｇのサンプルに対して、加熱速度１０℃／分を用いてＤＳＣを行った。酢酸エチルを用いて可塑化しなかったポリマーサンプルのガラス転移温度は４６℃であることが見出された。酢酸エチルで可塑化したポリマーサンプルのガラス転移温度は２６℃であることが見出された。
【００９１】
（実施例６）
結合手順
ＥＤＣ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｐｉｅｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬからの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド）の溶液１００ｍＭを、０．１Ｍ ＭＥＳバッファー（モルホリンエタンスルホン酸バッファー）で調製した。次に、実施例４からの球状化した粒子２５０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、次いでそれにＥＤＣ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）またはＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）のいずれか（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから）１０ｍｇを加え、さらに２時間内容物を振盪した。
【００９２】
バイアルを、約１６時間（一夜）冷蔵庫に配置した。翌朝、バイアルおよび内容物を２５μｍ試験ふるい上に注いだ。回収した粒子を大量の水およびリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。次いで、回収した粒子を層流フードで乾燥させた。コントロールのサンプル（タンパク質またはＥＤＣあり、およびなし）を、列挙したように調製した。
【００９３】
（実施例７）
結合した粒子に対するタンパク質アッセイ
Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬから）を用いて、実施例６からのコントロールサンプルおよび試験サンプルの両方をタンパク質含量に対して分析した。サンプルを、５９０ｎｍのＵＶ−Ｖｉｓによって分析した。材料約２０〜３０ミリグラムを、試験管中に正確に重量を量り入れ、１Ｎ ＮａＯＨ ２ｍＬを加えた。試験管の内容物を約１８時間にわたって溶解させた。
【００９４】
この時点で、ＰＢＳ ２ｍＬ、ｐＨ７．４を加え、リン酸を用いてｐＨ７にｐＨ調整した。次いで、内容物を１０ｍＬメスフラスコに分析用に移し、次いでＰＢＳでその体積に希釈した。次いで、Ｐｉｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキットの指示に従って、タンパク質分析を行った。スタンダードは、ＢＳＡまたはＨＲＰのいずれかからそれぞれ調製した。アッセイコントロールを、好適な化学のステップで用いたのと等しい量の材料を用いて調製した。次いで、分析用の調製では、これらのコントロールサンプルを、試験サンプルを処理するのに用いたのと同じサンプル調製ステップに対して処理した。データを表１に示す。
【００９５】
【表１】
。
【００９６】
（実施例８）
粒子の予備的な塩基処理を伴う結合手順
実施例４からの球状化した粒子のサンプル２５０ｍｇを、２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れた。次に、バイアルに１Ｎ ＮａＯＨ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を３０分間振盪した。３０分粒子を落ち着かせた後、ピペットを用いて、粒子を残して溶液を除去した。次いで、水１０ｍＬを加え、バイアルの内容物をボルテックスミキサーを用いて混合した。粒子を落ち着かせた後、ピペットを用いて、粒子を残して溶液を除去した。上記のプロセスをもう一度繰り返した。
【００９７】
次に、ＥＤＣ溶液１０ｍＬをバイアルに加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）１０ｍｇを加え、内容物をさらに２時間振盪した。実施例６に記載したサンプルを含むＢＳＡも、コントロールとして繰り返した。サンプルに対するタンパク質アッセイは、実施例に列挙したのと同じであった。比較の目的で、水酸化ナトリウム溶液で前処理しなかったポリマー粒子を用いて、ＢＳＡ結合をやはり行った（コントロールサンプル）。結合したコントロールおよびこの実施例からの試験サンプルの分析からの結果を表２に提供する。
【００９８】
【表２】
。
【００９９】
（実施例９）
球状化したポリマー粒子の表面へのポリエチレングリコール−ＮＨ２（ＰＥＧ−ＮＨ２）ポリマーの関与する表面結合
球状化したポリマー粒子の表面へのＰＥＧ−ＮＨ２の結合
ＥＤＣ溶液（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ）１００ｍＭをＭＥＳバッファーで調製した。次に、実施例４からの球状化した粒子２５０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、次いで、これにＥＤＣ溶液１０ｍＬを加えた。バイアルをプラットホームシェーカー上に配置し、内容物を２時間振盪した。２時間後、アミンを終端としたポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＮＨ２、分子量５０００ダルトン）（ＬａｙｓａｎＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ａｒａｂ、ＡＬ）１０ｍｇを加え、内容物をさらに２時間振盪した。
【０１００】
バイアルを冷蔵庫に約１６時間（一夜）配置した。翌朝、バイアルおよび内容物を２５μｍ試験ふるい上に注いだ。回収した粒子を大量の水およびＰＢＳで洗浄した。次いで、回収した粒子を、層流フードで、室温で蒸発させて乾燥させた。コントロールのサンプル（ＰＥＧ−ＮＨ２またはＥＤＣあり、およびなし）を、列挙した通りに調製した。
【０１０１】
結合した微小球状のサンプルにおけるＰＥＧ−ＮＨ２の測定
結合した微小球状のサンプルのＰＥＧ−ＮＨ２含量を、ＮＭＲ分析によって測定した。ＰＥＧ−ＮＨ２を、重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって測定した。３．６ｐｐｍの化合物に対して一重線のピークが確認された。７５：２５ＤＬ−ＰＬＧ６Ａ（Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬ）のサンプルを重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって分析した。ＰＥＧ−ＮＨ２を含まないコントロールのポリマーサンプルでは、３．６ｐｐｍではピークは確認されなかった。一点スタンダードとして、ＰＥＧ−ＮＨ２濃度０．４重量％の、ＰＥＧ−ＮＨ２および７５：２５ＤＬ−ＰＬＧのサンプル１００ｍｇを調製した。このスタンダードのサンプルを重水素化したクロロホルムに溶解し、ＮＭＲによって分析した。スタンダードのサンプルの３．６ｐｐｍシフトに対するピーク高さを測定し、試験およびコントロールのサンプルのＰＥＧ含量を推定するための一点スタンダードとして用いた。ＰＥＧ結合した微小球状の試験サンプル１００ｍｇを、（記載する通り、様々な他のコントロールサンプルと一緒に）重水素化したクロロホルム中に溶解することによってコントロールサンプルと同様の様式で調製した。ＮＭＲ分析により、試験サンプルに含まれていたＰＥＧでは３．６ｐｐｍのピーク高さが得られた。試験サンプルのＰＥＧ含量を、スタンダードのサンプルのピーク高さに対して決定した。試験サンプルおよびコントロールサンプルのＰＥＧ含量を、表３に示す。
【０１０２】
【表３−１】
【０１０３】
【表３−２】
。
【０１０４】
（実施例１０）
低残留モノマーレベルを有する市販のポリマーの分析
低レベルのラクチドを有すると報告されている市販のポリマー（Ｂｏｅｈｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ（ＢＩ）、Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ、ドイツ）のポリマーサンプルを分析した。ＢＩによる分析証明書に報告されている最低値は＜０．０１重量％である。残留モノマーをガスクロマトグラフィーによって分析した。分析方法はガスクロマトグラフ法であった。方法の詳細は以下の通りである：Ｒｅｓｔｅｋ Ｒｔｘ−１、３０ｍ×０．５３ｍｍＩＤ、５μｍガスクロマトグラフカラム（Ｒｅｓｔｅｋ Ｉｎｋ．、Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ、ＰＡ）を用い、ヘリウム流速２４．５ｍＬ／分、スプリット比４：１でポリマーサンプルを分析した。ガスクロマトグラフへのサンプル導入を、注入口温度１４５℃を用いて行った。開始温度１２５℃で７．５分間、次いで２５℃／分で２００℃まで上昇させ４．５分間保持する、ＧＣオーブンの温度勾配プログラムを用いた。モノマーの検出は、ＦＩＤによって２５０℃で行った。ポリマーサンプルを、１．５重量％ポリマー（２５ｍＬ中０．３７５ｇ）の濃度で塩化メチレンに溶解した。ラクチドおよびグリコリドのスタンダードは、ラクチドでは８から１６０μｇ／ｍＬ、グリコリドでは４から８０μ／ｍＬの範囲であった。
【０１０５】
記載がある場合は、０．００２重量％のラクチドの定量下限（ＬＯＱ）レベルで計測を何回か行った。これらの場合、４ｐｐｍ（ラクチド）の、一点キャリブレーションスタンダードを調製した。このスタンダードの６回反復注入を行い、ＬＯＱはスタンダード４ｐｐｍの約１０倍のシグナル対ノイズ比のレベルであると推定した。これらのアッセイでは、６重量％ポリマー（５ｍＬ中０．３ｇ）の濃度の試験サンプルを調製して、検出レベルをさらに改善した。ＢＩサンプルの試験の結果を表４にまとめる。
【０１０６】
【表４−１】
【０１０７】
【表４−２】
。
【０１０８】
（実施例１１）
開示するプロセスによって処理したポリマーの調製および分析
高残留モノマーレベルを有する、７５：２５ＰＬＧポリマー（７５２５ＤＬＧ ６Ａ）を、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。このポリマーを、実施例１に記載したように粉末に粉砕した。この粉末を、実施例２に記載した通り篩い分けしたが、３００μｍフィルターの代わりに１５０μｍフィルターを用いた。これにより、粒子サイズ分画が９０から１５０μｍまでのサイズの粉末が得られた。この磨砕し、篩い分けした材料を、次いで、実施例４に記載した通りに処理した。非処理のポリマーおよび試験サンプルの残留モノマー試験の結果を表５に示す。
【０１０９】
【表５】
球状化プロセスは、材料が開始時に非常に高い残留ラクチドレベルを有する場合でも、ラクチドレベルを低減するのに有効であった。開始時に低いラクチドレベルを有する出発材料が、より短い処理時間でその残留ラクチド含量を低下させることができるというのは実に可能である。このサンプルに対して達成される残留ラクチドレベルは、見かけのＬＯＱまたはそれ未満の残留ラクチドレベルを有すると業者が報告した市販のポリマーサンプルに対して測定した残留モノマーレベルより約３倍低かった（報告されたラクチドレベルは＜０．０１重量％であった）。これは、このプロセスを用いることで、他の市販の業者から現在入手可能であるものを上回る、大幅な改善があることを示している。
【０１１０】
（実施例１２）
処理温度を変化させた、開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
１つは酸の終端基を有し（５０５０ＤＬＧ４Ａ）、１つはエステルの（キャップ付けされた）終端基を有する（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）、２つの５０：５０ＰＬＧポリマーをＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。受け取ったポリマー各々の残留モノマーレベルは類似していた（業者から受け取ったもののラクチド含量は１〜１．２重量％）。ポリマーを、実施例１に記載したのと類似の様式で粉砕して粉末にした。得られた粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。
【０１１１】
この磨砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、次いで、実施例４に記載したように処理したが、９０℃の代わりに５０℃および８０℃の処理温度を用い、処理時間を下記に特定するように変化させた（２分から６時間までの範囲）。出発ポリマー（受け取ったもの）および試験サンプルの残留モノマー試験の結果を表６に示すが、これはポリマーの残留モノマーレベルを低下させるために様々な処理温度および時間を用いることができることを示している。
【０１１２】
ＧＰＣによって、これらのサンプルに対するＧＰＣ分子量測定も行った。クロロホルム中のサンプルを、ＪｏｒｄｉゲルＤＶＢ１００００オングストローム、１０×５００ｍｍカラム（ＣｈｒｏｍＴｅｃｈ Ｉｎｃ）を用いて１ｍＬ／分の流速で分析した。検出を蒸発光散乱検出によって行い、ＤＩＮ認定されたポリスチレンスタンダード（ＣｈｒｏｍＴｅｃｈ Ｉｎｃ．）と比較することによって分子量を決定した。重量平均分子量を表７に報告する。
【０１１３】
【表６】
【０１１４】
【表７】
。
【０１１５】
（実施例１３）
添加剤を用いて開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
１つは酸の終端基を有し（５０５０ＤＬＧ４Ａ）、１つはエステルの（キャップ付けされた）終端基を有する（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）、２つの５０：５０ＰＬＧポリマーをＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手した。受け取ったポリマー各々の残留モノマーレベルは類似していた（業者から受け取ったもののラクチド含量は１〜１．２重量％）。ポリマーを、実施例１に記載したのと類似の様式で粉末に粉砕した。得られた粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。
【０１１６】
磨砕し、篩い分けしたポリマー粉末を、次いで、実施例４に記載した通りに処理したが、磨砕したポリマー約１〜１．５グラムを、ＰＶＡ２重量％および炭酸水素ナトリウム１重量％からなる溶液１００グラムで処理し、処理を５０℃で６時間行った。両方の残留モノマー試験の結果を表８に示す。
【０１１７】
【表８】
。
【０１１８】
（実施例１４）
前処理および処理の条件を変化させた、開示するプロセスによって処理したポリマーの処理および分析
５０：５０ＰＬＧポリマー（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）をＬａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から得た。このラクチドモノマー含量の報告値は１．２重量％であった。このポリマーを、実施例１に記載したように微粉末に磨砕した。この粉末を、実施例２に記載したように篩い分けした。これによって、サイズ９０から３００μｍまでの粒子サイズ分画の粉末がもたらされた。この磨砕および篩い分けした材料を、次いで、以下の修飾を行って実施例４に記載したように処理した。
【０１１９】
サンプル１から５を、最初に、可塑剤であるエタノールでポリマーを前処理し、その後、引き続き実施例４に記載する一般的な方法によって処理することによって調製した。簡潔に述べると、サンプル１〜５は、粉砕し篩い分けしたポリマー約１．５グラムを２５０ｍＬのビーカーに加え、次いでビーカーにエタノール１０グラムを加えることによって調製した。スラリーを３０分間攪拌した。
【０１２０】
サンプル１および２を、次いで、室温（ｒｔ）の２重量％ＰＶＡ溶液１００グラム中に移した。サンプル１は室温で３時間攪拌し、サンプル２は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２１】
エタノールで３０分処理した後、次いで、サンプル３および４をさらなる１００グラムのエタノールで希釈した。サンプル３は室温で３時間攪拌し、サンプル４は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２２】
最後に、エタノールで３０分処理した後、サンプル５をヘプタン１００グラム中に移し、次いでこのスラリーを３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２３】
サンプル６および７は、実施例３に記載したように作成した、長さ約１０〜１２ｃｍの、押出し加工したポリマーの円柱を用いて調製した。これらの特定のサンプルでは、ポリマー約１〜１．５グラムを、先に記載したようにエタノール１０グラムで３０分間処理した。次いで、サンプル６および７を、２重量％のＰＶＡ溶液１００グラムに移した。次いで、サンプル６は室温で３時間攪拌し、サンプル７は３時間５０℃に加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２４】
サンプル８は、エタノールではなく酢酸エチルの可塑剤に対してポリマー粒子を前処理することによって調製した。前処理は、実施例５に先に記載したように、ポリマー粒子を蒸気状態の酢酸エチルに曝露することによって行った。次いで、前処理したポリマー約１〜１．５グラムを２重量％のＰＶＡ溶液１００グラムに加え、攪拌しながら５０℃に３時間加熱し、その後実施例４に記載したように回収した。
【０１２５】
サンプル９および１０は、各々、ポリマー２グラムを酢酸エチル２グラム中に溶解することによって調製した。濃縮したポリマー溶液を１０ｍＬシリンジに移し、これに１８ゲージの針を取り付けた。サンプル９はシリンジの内容物を１８ゲージ針を通して、攪拌しながら２重量％のＰＶＡ溶液１００グラム中に注入することによって調製した。サンプルを室温で３時間攪拌した。サンプル１０は同様の様式で調製したが、シリンジの内容物を５０℃に加熱した２重量％のＰＶＡ溶液１００グラム中に注入した。サンプルを５０℃で３時間攪拌し、その後回収した。残留モノマー（ラクチド）試験およびポリマーの分子量分析の結果を表９および１０に示す。
【０１２６】
【表９−１】
【０１２７】
【表９−２】
【０１２８】
【表１０】
。
【０１２９】
（実施例１５）
押出物−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（ビタミンＢ１２およびナルメフェン塩基の両方）
押出し加工した薬物−ポリマーのバルクの押出物を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター、および実施例３に記載した通り１．５ｍｍの押出しダイと１００℃の設定温度を用いて調製した。
【０１３０】
出発ポリマー（Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ７５：２５ＰＬＧ６Ａ、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ ＡＬから）を、最初に磨砕し、実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。唯一の例外はサンプル４および５であり、これらは９０〜１８０μｍのスクリーンを通して回収したポリマー粉末を用いて調製した。
【０１３１】
ビタミンＢ１２をＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｎｏｒｔｈｈａｍｐｔｏｎｓｈｉｒｅ、英国）から入手した。ナルメフェン塩基は、塩酸ナルメフェン（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、Ｈａｚｅｌｗｏｏｄ、ＭＯより購入）を水酸化ナトリウムを用いて遊離塩基に変換することによって得た。十分な薬物を加えることによって薬物とポリマーのブレンドを個々に調製し、最終の薬物−ポリマーブレンドにおいてブレンドは薬物５重量％を含んでいた。これらのブレンドを完全に混和し、次いで、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１３２】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。薬物−ポリマー粉末ブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて、粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、押し出した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１３３】
（実施例１６）
押出し−Ｒａｎｄｃａｓｔｌｅ ＲＣ−０５００ １／２インチ押出し機
記載がある場合は、加熱ゾーンを４つ有するＲａｎｄｃａｓｔｌｅシングルスクリュー押出し機を用いて押出しを行った。操作温度１７０°Ｆ（７７℃）に設定したゾーン１（押出しバレルのフィードまたは入り口終端に位置する）以外は、すべてのゾーンを２２０°Ｆ（１０４℃）の温度で操作した。直径１．８ｍｍの押出しダイとともにスクリュー速度２０ｒｐｍを用いた。最終混合物に薬物５重量％を含む、粉末化した薬物およびポリマーのブレンド２０グラムを調製した。この操作で用いたポリマー粉末を、実施例２に記載したように篩い分けしたが、サイズ範囲約９０から１８０μｍを有するポリマー粉末を提供するために３００μｍのスクリーンの代わりに１８０μｍのスクリーンを用いた。これら２つの材料を合わせて完全に混和した後、このブレンドを押出し機にゆっくりと加えた。生成物を長さ６〜１０インチ（１５．２〜２５．４ｃｍ）に切断した。薬物とポリマーのブレンド２０グラムを押出し機に加え、押出物が押出し機を完全に離れるまで、押出しを行った。
【０１３４】
（実施例１７）
押出し加工した薬物−ポリマー押出物の磨砕
実施例１５および１６両方からのバルクの薬物−ポリマー押出物を、実施例１に記載したように磨砕して粉末にした。最初に押出物を、磨砕プロセスに備えて１〜２ｃｍの長さの断片に切断した。次いで、この材料を１０分間、液体窒素で凍結させた後、粉砕した。次いで、凍結した材料をＲｅｔｓｃｈミルに配置し、１．０ｍｍスクリーンおよび歯数１２のローターを用いて磨砕した。次いで、生成物を回収し、再凍結し、０．５ｍｍスクリーンおよび歯数２４のローターを用いて２回目の磨砕をした。操作はすべて１８０００ｒｐｍで行った。
【０１３５】
押出しプロセスの後、材料を１５０μｍの試験ふるいを通して篩い分けした。１５０μｍのふるいを通過した、粉末化した薬物−ポリマー押出物を維持し、次いで約１６時間（一夜）真空下（室温）で乾燥させた。
【０１３６】
（実施例１８）
磨砕した薬物−ポリマー押出物の処理（水性およびヘキサン処理）
実施例１７からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。記載がある場合は、ＰＶＡ水溶液を過剰の薬物で処理して、加熱処理プロセスの間、確実に飽和するようにした。しかし特に指摘されなければ、処理プロセスの間ＰＶＡ溶液にはさらなる薬物は加えなかった。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍのふるい上の１５０μｍのふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーンの上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置してポリマーを乾燥させた。
【０１３７】
あるいは非水性系で処理を行った。上記の方法と同様に、ヘキサンにおける処理を行った。粉末化した薬物−ポリマー押出物約１．２グラムを、ヘキサン２００グラムおよびＳｐａｎ８５ ２０グラムを含む２５０ｍＬビーカー中に量り入れた。ホットプレートの加熱および攪拌を、上記に記載した通りに行った。攪拌した懸濁液を８０℃に加熱し、３０分間、この温度に保った。熱源を取り除き、懸濁液を（攪拌しながら）温度が５０℃未満に下がるまで冷却した。この時点で、内容物を、９０μｍふるい上の１５０μｍふるい上に注いだ。９０μｍスクリーン上に回収された材料を、次いで、ヘキサン１Ｌで完全にすすいだ。次いで、生成物を、約１６時間（一夜）、層流フードに配置してポリマーを乾燥させた。
【０１３８】
（実施例１９）
ビタミンＢ１２粒子の薬物測定
実施例１８からの粒子２０から３０ｍｇを、１０ｍＬのネジぶた付き試験管中に量り入れ、塩化メチレン２ｍＬを加えた。粒子を溶解させ、水２ｍＬを加え、内容物を混和した。次いで、試験管を遠心器に配置して２層を分離した。上層を除去し、２５ｍＬメスフラスコに加えた。試験管に水２ｍＬを加え、上記のプロセスをさらに２回繰り返した。抽出物を１本のフラスコに併せ、マークまで希釈した。アリコートを、０．４５μｍシリンジフィルターを通してろ過して除き、ＨＰＬＣバイアルに移した。ビタミンＢ１２含量をＨＰＬＣ法（２７０ｎｍのＵＶ）によって測定した。薬物およびポリマーの重量を量り、上記と同じステップを行うことによってコントロールを調製した。
【０１３９】
（実施例２０）
ビタミンＢ１２粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例１８からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、ＰＢＳ１０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２７０ｎｍのＵＶ）を用いてビタミンＢ２に対してアッセイした。累積の放出されたビタミンＢ１２を報告した。
【０１４０】
（実施例２１）
ナルメフェン粒子の薬物測定
実施例１８からの粒子２０から３０ｍｇを、２５ｍＬメスフラスコ中に量り入れ、氷酢酸２ｍＬを加えた。粒子を溶解させた。粒子がすべて溶解した後、ＰＢＳでフラスコをその体積に希釈した。混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを用いてろ過した。ろ過した溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、サンプルをＨＰＬＣ（２６８ｎｍのＵＶ）によって分析した。薬物およびポリマーを量り、上記と同じステップを行うことによって、コントロールを調製した。
【０１４１】
（実施例２２）
ナルメフェン粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例１８からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、０．５重量％のＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を含むＰＢＳ２０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２６８ｎｍのＵＶ）を用いてナルメフェンに対してアッセイした。累積の放出されたビタミンおよびナルメフェンを報告する。
【０１４２】
実施例１９〜２２の結果を、下の表１１〜１２に示す。
【０１４３】
【表１１】
【０１４４】
【表１２−１】
【０１４５】
【表１２−２】
抽出を最小にするために、ＰＶＡ溶液を薬物で飽和させる試みを行った。これは、最終の負荷レベルが高かったので（投入レベル５％まで／を超える）助けとなった。５％を超える値は、この溶液が実際に十分に飽和していたことを確実にするために、飽和ＰＶＡ溶液が実際に余分な遊離の薬物を系に攪拌して含んでいた事実を反映している。この残留の遊離の薬物は、最終の粒子生成物と一緒に最終的に回収され、出発の（理論上の）レベルよりも高い見かけの薬物レベルをもたらした。しかし、これらの高ロードのサンプルをｉｎ ｖｉｔｒｏの試験にかけた場合、１日の間隔で急速な最初の薬物放出（バースト）が観察された。
【０１４６】
１〜２％の薬物負荷を有する他のサンプル（すなわち、サンプル１、４、および６）は、最終の生成物をｉｎ ｖｉｔｒｏ系における薬物の徐放に用いることができることを、さらに実証している。
【０１４７】
（実施例２３）
薬物負荷の分析
残留の薬物を、試験の終わりに残留しているサンプルからの微粒子サンプル自体から抽出した（表１２に概略した通り）。次いで、放出された薬物の、サンプルで用いられた薬物の全量に対する質量収支を実証するために、この薬物を定量した。結果は、質量収支が達成されたことを、すなわち、実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出の実験で放出されなかった残留の薬物が、見出され、残留の粒子サンプル内に捕捉されていたことの説明となることを実証している。結果を表１３に示す。
【０１４８】
【表１３】
。
【０１４９】
（実施例２４）
押出し−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（ポリカプロラクトン中リスペリドン）
押出し加工した薬物−ポリマーのバルクの押出物を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターおよび１．２ｍｍの押出しダイ、および８０℃の設定温度を用いて調製した。この実施例では、ポリカプロラクトンのポリマー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を最初に磨砕し、実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍのサイズ範囲に篩い分けした後、用いた。
【０１５０】
最終ブレンドの１０重量％の薬物を含むブレンドを調製するために、薬物粉末（Ｊｕｂｉｌａｎｔ Ｏｒｇａｎｏｓｙｓ Ｌｔｄ、Ｍｙｓｏｒｅ、インドからのリスペリドン）を十分量、ポリマー粉末に加えた。次いで、薬物およびポリマー粉末を併せて完全にブレンドした。このブレンドした薬物およびポリマーの粉末を、次いで、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１５１】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。薬物−ポリマー粉末のブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、プランジャーに１０ｋｇの押出し重量をかけて粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間の後、押出しダイ上のプラグを除去し、押し出した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍの小切片に切断した。
【０１５２】
（実施例２５）
磨砕した薬物−ポリマー押出物の処理
実施例２４からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、実施例１７に示したように、カミソリの刃で１〜２ｍｍの小切片に切断し、磨砕し、篩い分けした。
【０１５３】
２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムを、ビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１５４】
５分後、加熱した攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、３０分間温度を９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍのふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。
【０１５５】
（実施例２６）
リスペリドン粒子の薬物測定
実施例２５からの粒子２０から３０ｍｇを、２５ｍＬメスフラスコ中に量り入れ、氷酢酸２ｍＬを加えた。粒子を溶解させた。粒子がすべて溶解した後、ＰＢＳでフラスコをその体積に希釈した。混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを用いてろ過した。ろ過した溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、サンプルをＨＰＬＣ（２６８ｎｍのＵＶ）によって分析した。薬物およびポリマーの重量を量り、上記と同じステップを行うことによって、コントロールを調製した。結果を表１４に示す。
【０１５６】
（実施例２７）
リスペリドン粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏの放出
実施例２５からの粒子５０から６０ｍｇを２０ｍＬシンチレーションバイアル中に量り入れ、ＰＢＳ ５０ｍＬを加えた。バイアルを、温度を３７℃に維持し、振盪速度５０ｒｐｍのシェーカーバスに配置した。好適な時間点で、あらゆる粒子を避けながらバッファー１０ｍＬをバイアルから除去した。新たなバッファー１０ｍＬを置換え、バイアルをシェーカーバス中に戻し次の時間点まで配置した。放出された薬物を含むバッファーを、ＨＰＬＣ法（２６８ｎｍのＵＶ）を用いてリスペリドンに対してアッセイした。累積の放出されたリスペリドンを表１５に報告する。実施例２３で先に記載したように、粒子が持続放出用の薬物を依然として含んでいることを実証するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏの放出実験の終結時の粒子に対して質量収支を行った。結果を表１６に示す。実施例２４〜２７の結果を下の表１４〜１６に示す。
【０１５７】
【表１４】
【０１５８】
【表１５】
【０１５９】
【表１６】
。
【０１６０】
（実施例２８）
押出し−Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーター（５０：５０ＰＬＧ中のクマリン６）
押出し加工した薬物−ポリマーバルクの押出物を、１．２ｍｍの押出しダイおよび８０℃の設定温度を用いて、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて調製した。出発ポリマーである、Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓからの５０：５０ＰＬＧ（５０５０ ＤＬＧ ３Ｅ）を、最初に磨砕し、実施例１および２それぞれに記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。
【０１６１】
磨砕し、篩い分けしたポリマー４グラムを、ポリマー濃度１０重量％の塩化メチレンに溶解した。クマリン６（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＰＡ）を、ポリマーおよびクマリンを併せた全重量をベースに０．５重量％の負荷でポリマー溶液に加えた。この溶液をフルオロポリマーフィルム上に蒸発させることによって、ポリマー−クマリンフィルムを得た。次いで、Ｔｉｎｉｕｓ Ｏｌｓｅｎプラストメーター用に供給原料を調製するために、得られたキャストフィルムを小片に切断した。
【０１６２】
最初に、押出しダイを、プラグを用いて閉じた。調製したフィルム片約３グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて、粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間後、押出しダイ上のプラグを除去し、押出し加工した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１６３】
（実施例２９）
クマリン−ポリマー切片の処理
実施例２８からの粉末化した薬物−ポリマー押出物１から１．５グラムを、カミソリの刃で１〜２ｍｍの小切片に切断した。２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）上に配置した。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１６４】
５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を３０分間９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を９０μｍふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料をＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。
【０１６５】
図１１および１２は、それぞれ、非処理の、および処理したクマリン−６ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。
【０１６６】
（実施例３０）
酸化鉄および５０：５０ＰＬＧの押出し
Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いて、５０：５０ＰＬＧおよび酸化鉄磁性ナノ粒子で押出しを行った。１．２ｍｍ押出しダイを用いて、設定温度１００℃で押出しを行った。Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓからの、５０５０ ＤＬＧ ３Ｅポリマーを最初に磨砕し、それぞれ実施例１および２に記載したように９０〜３００μｍの規定された粒子サイズ範囲に篩い分けした。
【０１６７】
最終のブレンドの１０重量％のナノ粒子を含むブレンドを調製するために、磁性ナノ粒子（Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｎａｎｏ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、ＦｅｒｒｏＴｅｃ Ｃｏｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を十分量ポリマー粉末に加えた。次いで、ナノ粒子およびポリマー粉末を併せて完全にブレンドした。次いで、このナノ粒子とポリマーのブレンドした粉末を、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターを用いた押出し用の供給原料として用いた。
【０１６８】
押出しダイを、プラグを用いて最初に閉じた。ナノ粒子／ポリマー粉末のブレンド約５グラムを、Ｔｉｎｉｕｓ−Ｏｌｓｅｎプラストメーターの予め加熱したバレルに加えた。プラストメーターのプランジャーをバレル中に挿入し、１０ｋｇの押出し重量をプランジャーにかけて粉末をプラストメーターの底部に圧縮した。熱的に平衡にし、薬物−ポリマー粉末をプラストメーターの底部に圧縮するために、これを約５分間維持した。５分の平衡時間後、押出しダイ上のプラグを除去し、押出し加工した材料をプラストメーターから回収した。押出物を、長さ約１０〜１５ｃｍのより小さな切片に切断した。
【０１６９】
（実施例３１）
磨砕したナノ粒子−ポリマー押出物の処理
実施例３０からの粉末化したナノ粒子−ポリマー押出物１から１．５グラムを、カミソリの刃で長さ１〜２ｍｍの小切片に切断し、次いでこれを実施例１７に示したように磨砕し、篩い分けした（図１３）。
【０１７０】
２重量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）１００グラムをビーカー中に量り入れた。ビーカーおよびその内容物を、加熱／攪拌プレート上に配置した（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍｏｄｅｌ ＰＣ−３２０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）。オーバーヘッド攪拌モーターを、小型のテフロン（登録商標）製攪拌インペラーとともにセットした。懸濁液を、加熱せずに約１０００ｒｐｍの攪拌速度で攪拌した。
【０１７１】
５分後、加熱攪拌プレートを「オン」にし、設定を「高」にした。電子式温度計を内容物中に浸し、温度をモニターした。ビーカー内容物の温度が９０℃に到達したら、タイマーをスタートさせ、温度を３０分間９０℃に維持した。この時間の間、温度を±２℃以内に維持した。３０分の処理時間の後、加熱プレートを切り、ＤＩ水（室温の）約１００ｍＬをビーカーに加え、温度が５０℃未満に下がるまで懸濁液を攪拌した。次いで、内容物を、９０μｍふるい上に注いだ。次いで、９０μｍスクリーン上に回収された材料を、ＤＩ水で完全にすすぎ、次いで、約１６時間、層流フードに配置して乾燥させた。図１３および１４は、それぞれ、非処理の、および処理した酸化鉄／ポリマー押出物のＳＥＭ顕微鏡写真を示している。
【０１７２】
当業者であれば、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、本発明における様々な修飾および変形を行うことができるのは明らかである。当業者であれば、本明細書に開示する本発明の明細書および実践を考慮すれば、本発明の他の実施形態は明らかである。明細書および実施例は例示にすぎないとみなされ、本発明の真の範囲および精神は添付の特許請求の範囲によって示されることが企図される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．液体媒体、および１つまたは複数の第２の成分を含む非球状のポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップと
を含み、それにより、球状のポリマー粒子を生成する、
球状のポリマー粒子を生成する方法。
【請求項２】
非球状のポリマー粒子が、磨砕したポリマー、またはポリマーのロッドもしくは繊維の押出物からのカッティングである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非球状のポリマー粒子を、ステップａの前、ステップｂの前、またはステップｂの間に可塑剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
第２の成分が、１つまたは複数の生理活性物質、撮像剤、標的部分、または磁性粒子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
生理活性物質が、１つまたは複数の医薬品または生体分子を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
非球状のポリマーが、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレート、およびこれらの混合物から選択されるモノマーの残留物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
非球状のポリマーが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレンビニルアセテート、またはこれらの混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
液体媒体が水である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
液体媒体が界面活性剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
液体媒体が添加剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
球状の粒子の直径が約１μｍから約１０００μｍまでである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ａ．液体媒体および非球状のポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却し、それにより、球状のポリマー粒子を生成するステップと、
ｄ．第２の成分を球状のポリマー粒子の表面に付着させるステップと
を含む、球状のポリマー粒子を生成する方法。
【請求項１３】
第２の成分がコラーゲンを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ａ．最初の残留モノマー含量および液体媒体を有する、高残留モノマーポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップと
を含み、それにより、最初の残留モノマー含量未満である低残留モノマー含量の、低残留モノマーポリマー粒子を生成する、
低残留モノマーポリマー粒子を生成する方法。
【請求項１５】
高残留モノマーポリマー粒子が、磨砕したポリマー、またはポリマーのロッドもしくは繊維の押出物からのカッティングである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
高残留モノマーポリマー粒子を、ステップａの前、ステップｂの前、またはステップｂの間に可塑剤と接触させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
高残留モノマーポリマー粒子が、１つまたは複数の第２の成分をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第２の成分が医薬品を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
第２の成分が、１つまたは複数の生体分子、撮像剤、標的部分、または磁性粒子を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ポリマーが、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレート、およびこれらの混合物から選択されるモノマーの残留物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
ポリマーが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレンビニルアセテート、またはこれらの混合物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
液体媒体が水である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
液体媒体が水および界面活性剤を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
低残留モノマーポリマー粒子の直径が約１μｍから約１０００μｍである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
第２の成分を粒子の表面に付着させることをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１】
ａ．液体媒体、および１つまたは複数の第２の成分を含む非球状のポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップと
を含み、それにより、球状のポリマー粒子を生成する、
球状のポリマー粒子を生成する方法。
【請求項２】
非球状のポリマー粒子が、磨砕したポリマー、またはポリマーのロッドもしくは繊維の押出物からのカッティングである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非球状のポリマー粒子を、ステップａの前、ステップｂの前、またはステップｂの間に可塑剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
第２の成分が、１つまたは複数の生理活性物質、撮像剤、標的部分、または磁性粒子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
生理活性物質が、１つまたは複数の医薬品または生体分子を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
非球状のポリマーが、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレート、およびこれらの混合物から選択されるモノマーの残留物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
非球状のポリマーが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレンビニルアセテート、またはこれらの混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
液体媒体が水である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
液体媒体が界面活性剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
液体媒体が添加剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
球状の粒子の直径が約１μｍから約１０００μｍまでである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ａ．液体媒体および非球状のポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却し、それにより、球状のポリマー粒子を生成するステップと、
ｄ．第２の成分を球状のポリマー粒子の表面に付着させるステップと
を含む、球状のポリマー粒子を生成する方法。
【請求項１３】
第２の成分がコラーゲンを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ａ．最初の残留モノマー含量および液体媒体を有する、高残留モノマーポリマー粒子を含む混合物を提供するステップと、
ｂ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度を超えて加熱するステップと、
ｃ．混合物を、ポリマーのガラス転移温度または融解温度未満に冷却するステップと
を含み、それにより、最初の残留モノマー含量未満である低残留モノマー含量の、低残留モノマーポリマー粒子を生成する、
低残留モノマーポリマー粒子を生成する方法。
【請求項１５】
高残留モノマーポリマー粒子が、磨砕したポリマー、またはポリマーのロッドもしくは繊維の押出物からのカッティングである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
高残留モノマーポリマー粒子を、ステップａの前、ステップｂの前、またはステップｂの間に可塑剤と接触させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
高残留モノマーポリマー粒子が、１つまたは複数の第２の成分をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第２の成分が医薬品を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
第２の成分が、１つまたは複数の生体分子、撮像剤、標的部分、または磁性粒子を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ポリマーが、ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ヒドロキシブチレート、およびこれらの混合物から選択されるモノマーの残留物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
ポリマーが、ポリ（ラクチド−グリコリド）コポリマー、ラクチドホモポリマー、グリコリドホモポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレンビニルアセテート、またはこれらの混合物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
液体媒体が水である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
液体媒体が水および界面活性剤を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
低残留モノマーポリマー粒子の直径が約１μｍから約１０００μｍである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
第２の成分を粒子の表面に付着させることをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２０１０−５０８３９２（Ｐ２０１０−５０８３９２Ａ）
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３４６９７（Ｐ２００９−５３４６９７）
【出願日】平成１９年１０月３０日（２００７．１０．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２８８５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５４７２５
【国際公開日】平成２０年５月８日（２００８．５．８）
【出願人】（５０９１２１５５８）サーモディクス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (12)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３０日（２００７．１０．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２８８５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５４７２５
【国際公開日】平成２０年５月８日（２００８．５．８）
【出願人】（５０９１２１５５８）サーモディクス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (12)
【Ｆターム（参考）】
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